SEMENTES: PRODUGAO, QUALIDADE E INOVACOES TECNOLOGICAS Organizadores Luis Osmar Braga Schuch Jucilayne Femandes Vieira Cassyo de Aragjo Rufino José de Souza Abreu Junior Pelotas - RS - BRASIL 2013. ‘Semertes: producto, quaade @ novacées toccligicas Capitulo 10 Analise de imagens na avaliagao da qualidade fisiolégica de sementes \Vanessa Neumann Siva, Slvio Moure Cicero @ Francisea ‘Guilion Gomes Junior InTRoDUGAO Na definigdo da qualidede de um lote de sementes sempre deve ser considerados, de manelra earjunia, os autos ‘genético, sic, fisclgco e sanitiri. A avaliagdo do componente fsiolégico nocmaimente ¢ realizada por meio do testo de jgerminagse, porém. este apreserta limitagses por ser realizado S00 condigdes coriroiadas, podendo formecer resultados que Superestimam 9 potencial das. somentes @ medida que as Condigdes ambientais desviam das mais adequadas para o estabelecimento das pldntulas ou para o armazenamento das ‘sementes: em razdo sto surgiram os testes de vier, (O uigor de sementes reflete um conjunio de earecteristicas {que si, em parte, responsaveis pelo desempenho das somentos ho campo aps @ semeadura ou durante 0 armazenamento, Devido vigor nao refletr uma nica caracteristica, ¢ diel que um 80 teste seja capaz de estimar 0 potencial dos lotes, o que implica no esludo de varios testes para essa fnaidade. Para obtengaa de resultados consistentes,reproduaivels © ‘comparavels @ fundamental a pacronizacio das melodologias uiizadas durante a conducio dos teses, porém, ito anda 6 um ‘desafio 20s lecnologistas’ de sementes, pols dependendo ca ‘experiéncia do analsta 0s resultados fornecidos por laboratérios ‘sti podem variaralém do erro experimental aceto e, somado isso, existe a subjetividade das avalacdes,inerente aos tests, ‘que podem prejucicar a andlise dos loles de sementes. 249‘Somentes:produgdo,qualtade oinovagdestecnaigicas (© uso de sistemas aulomatizados para avaliagio da qualidade de sementes pode contibuir para a redugas cas Subjelividades das andlises, pois minimiza.o erro humano, aim de ‘omar oprocesso mais rapido e, com ss0, mais eficiente. A andlise de imagens de sementes e plantuas vem se destacando neste sentido, Resultados promissores 18m sido divulgedos na literature ara diversas especies, essa forma, 0 objetvo deste capltuio é dlscorrer sobre as, téenicas de andlse de imagens dispanivels para a avaliagéo ¢3 qualidade de sementes. Histérico {Ao longo do tempo, vitos sistemas de andlse de imagens de sementes de piantulas foram propostes para avalagao da ‘qualidade de sementes. © primero regisra na literatura sobre uso de andise de imagens com esta finalidade folfeto en 1953 na Suécia por Sak Gustafsson, que utlizaram a técnica de raios X para avaliagso {ba morologia interna de sementes de espdcies florestais.Alguns lanos apés, em 1963, Slark e Adams verficaram com 0 teste de faios X, em espécies loresais, sementes vaziag, mal formadas © Infestadas por inseios. PPosterormenta, em 1976, foram realizadas pesquicas no Departamento de Reflorestamento da Faculdade de Agrculura oa Suécia, com sementes de 165 espécies foresiais de nove paises, ras quais se veriicou que a téenica de rios X pode ser ullizada para detectar sementes cheia, vazias, lacadas por inseles, com fans mecinieos ov danas causados por dooncas (KAMRA, 1976), 'No Brasil 0s rabalhos nessa linha de pesquisa comezaram por vata do anc 2000, na Escola Superior de Agricultura “Luz de (Queic2” 3a Universidade de $40 Paulo ena Universidade Federal de Lavras. Varios resultados de pesquisa ja forem publicados nessa area, os quais serdo abordados no presente capitulo. ‘Além da andlise Ge semenies, existe @ possibiidade de analisar imagens de pntulas. Um dos primeros. sistemas Felatados na iteratura para esta finaliade foi desenvolvido por ‘Jones e Cobb nos Esiados Unicas da América em 1863, 0 qual fo: 280 _Sementes produgso,quallade e inovapsos tecratiese construido de manera que um dspositvo mével permisse que tima camera oativesse imagens om que fosse possivel avalar 0 ‘ompnmento de um grupo de cinco planulas de ceroura e de Save ao mesmo tempo (KEEFE e ORAPER, 1988, KEEFE, 1900; MeCORMAC eta, 1990). ‘aigam tempo apés, em 1982, fol desenvovide por Keys. (1982) ¢ meloraco por Keys et al. (1984), um sstema que Uiiizava um microcomputador conectade a um paqulmeto, o qual {ania as mensuragbes do comprimento das plantulas, e um botéo acionada manualmente que realizave a transterdncia dos cados para o computador. O8 autores conclulram que o uso deste Estema, comparado & andise manual, cesultou em economia de 50% de tempo. Nesta. tha de pesquisa, McCormac et al. (1990) ‘demonstraram a vablidade do uso de um sistema auiomtico para 2 determinagdo 60 vigor de somentes de cowve-for, mediante 2 {2valiagdo inividval do comprimento da riz rimaria de planus. ara auxilar na analise de sementes armazenadas. no ‘Sistema Nacional de. Germoplasma dos Estados Unidos éa ‘América (NPGS) em 1093, Howat ¢ Stanwood desenvolveram bute sistema de andlise de imagens, 0 qual mensuravac tamanto Gas raizes durante a germinageo de sementes de aliace e sorgo, teste era composto por uma e&mara de germinagao e uma camera fotogratica aeoplada, 2 qual ftografava © material durante 30 segundos, de hora em hora, e 3s imagens eram armazenadas no {iso rigid do computador para posterior ands. Para calrar a. sistema foram utlizados do's pinos colocades. sobre @ papel de geminacéo a uma distancia Conherida @, com base nesta, era calculado o tamanho das raizes flag plantulas, resutadas esses que foram comparados com favalingoes manuals, Sendo abservadas baixas medias de erro {O,t3em. para alface e 0,07em para sorgo) (HOWART © STANWOOD, 1983) Posteriomente, Soko etal. (2001) desenvolveram na Ohio State University/EUA, um sistema automatizado para avaiagso do vigor de sementes de alface, denominado Seed Vigor Imaging ‘System (SVIS*). Varias pesquisas tém sido realizades pare acapiar esse sistema para andlise de autres espécies, com resultados saisatérios. 251“Sementesprodueso, qualtade eovacées tcnalgicas ‘Atuelmente, outros sistemas de andlse de imagens esto deserts na Iteratura para varias finalidades, como po: exemplo para o monitoramento da embebicae curante © processo de ‘perminagao de sementes, identficago da_pureza fisica de Sementes, identieagso de ciferengas no estaclo de deterioragao de sementes ideniiieagao de sementes de plantas daninhas, 0 ‘que mostra a impartdncla do tema ne Busca por técnicas mais tlicientes na area de anilise do sementes, Os sistemas de maior staque na area serdo abordados na sequéncia, Teste de raios X © teste de raios X consiste na andlise radiogrica da estrutura intena das sementes, por melo de sua exposi¢ao a uma fonte de baixa energia de raios X © um fme fotossensive. Ao) atravessarem as somentes e atingirem 0 fime, os raios permitem {formaeao de uma Imagem earactenizada por diferentes riveis de ‘cinza, coma poce ser visualizado na Figure 1. ‘Observa-se que nas sementes Cas Figuras 1A e 1B a area interna escurecida é maior comparada a semente da Figura 1C, 0 ‘que eet iretamente relacionado ao menor volume de tecidos de feserva, podendo afetar negatvamente 0 potenca fsiolégico. Figce 1, Nofologia interns de semontes do tomato visualzada por meio ‘se imagene radiogieas. Feo: Siva (2012). © principio da técnica & defnido pela absorea0 de rais X em diferentes quantidades pelos ecidos das sementes, em fungéo fe sua estutura, eomposigao © censidade, além do periodo de ‘exposigao & radiagao(ISTA, 2004), 252 ‘Sementes:prosugo,qvaioade einovazées tecnoligicas um teste relatvamente rapida ¢ esta recomendado nas Regras Iniemacionais para Andise de Semenies (ISTA, 2004) e nas Regras Brasileiras para Andlse de Sementes (BRASIL, 2009), Embora 8. faios X sejam potencialmente nocives &s sementes, hd muitos anos sabe-se que a baixe dose absorvida turante esea analise n2o causa mutagées genéticas endo afeta 8 fgerminagaa (SIMAK e GUSTAFSSON, 1953), conforme foi ‘etficado para sementes de abbbora, as quals nao foram afetadas regativamente pela raciagda, mesmo apés seu armazenamento pelo periodo de um ano (CARVALHO st al, 2009) Trala-se, Borlante, de um métod no destutvo, possibitando a resizagao te testes fisolégieas com as sementes e, dese modo, pode permitire estabelacimento de relagées de causa e efeto (CICERO e BANZATTO-JUNIOR, 2003) Receniemente, este teste tom sido utlizado com sucesso para vars finalidades, Serao aboréadas 2 seguir as prinopais SplicagBes de andlse de imagens de raios X no controle de qualidade de sementes. Morfotogia interna Grande parte das pesquisas com ros X em sementes realizadas no Brasil envalveram estudos de morfologia interna & bua relagdo com 0 potencal iiologica de sementes ce diversas espacies (CICERO, 2010) 'No estuco da morologia interna de sementes & possivel avaliar 0 nivel de desenvolvimento de samentes, idertiieando maiformagées,dlferengas no estacio de maturacao, presenga de ddanos ou até mesmo tecidos escurecidos que podem representar Indico da deterioracdo de sementes. 'A prasenga 60 tocldos deterorades cu malformagso do fembrido teoresenta. fator limtante para a viablldade ¢, ‘ependendo do local afelad, pode reduzr 0 vigor, ongnando plantulas fracas e, consequentemente, mais susceplvels 2s fondigdes adversas (CARVALHO e NAKAGAWA, 2012), Eniretanto, muitos desses problemas ni so possive's de serem ‘observadas extemamente,diicutando 0 descarte das sementes ‘les da semeadura e comprometenco a qualidade dolote,o que fenfatiza a importancia da técnica de raios X 250Sementes:produgso, qualidade © novagtostecnapcas Pra sementes de bernjela, Siva etal (2012a) veritcaram or meio de andlise de imagens de raios X estretarelagao entre a presenca de manchas escurecidas, causadas pela deterioragao de fecidose a reduce da gorminago, coma pade ser observaco nos ‘exempls da Figura 2 Figura 2. Semanics de berinjla com dano mesinice (A) teclos Gaterierados (Be 6) ¢ suas respecivas semente mora (4) e pnts formats (6) (C) Foto: Siva et (2012) Para ouras espécies, como &0 caso das forestaisnativas, as quals sio caracterizadas, em sua maiora, pela grande ‘2corréncia de precagao, semenies vazias e malformagao do lembrido, 0 teste de rios X pode ser uma alternatva interessante para avaliar a qualidage de sementes (MASETTO et al, 2008) Para sementes de canafistula (Peffoohorum duibium (Sprengel) Tauber), por exemple, veficou-se que os danos no ‘ombriae des semenies visvalzados em radiogeatias afelam crasticamerie a germinagao (OLIVEIRA eta, 2003). Para ipé-amarelo e ipéoxo, Oliveira el al (2004) constataram que danas no embriao e deformagées na estrulura es sementes, detecados nas imagens de raios X. afeam a {germinagéo, assim come Nassif © Cicero (2006) verficaram para Sementes de aceroa, Em semenies de cedro (Cedrela fissils) Masseto et a! (2008) observaram, de acordo com a anise radiograica, que ‘Semontes: produ, qualidade e iovaeses ecnatigicas sementes malformadas originaram plantas ancemsis © om sua ‘maior sementes moras, incicando que os defeltos detectados pela radiografiareduziram a qualidade das sementes. ’aralise de imagens de raios X de sementes de emvsuba (Cecropia' pachyslachya Tree) possibiitou 2 detecc20. de ‘iferengas ro nivel de formagao das sementes © seu reflexo na ‘germinagdo (PUPIN et a, 2008), 'Para sementes de Playpocium elegans, Souza etal. (2008) ‘observaram que a elevada porcentagem de sementes vazias e maiformadas reduziv a qualidade dos lotes. Os avlores ainda Ealentaram que 0 rimera Ge sementes vazias determinedo no final do teste de germinagéo, por meio do corte das mesmas, no @ mals necessério, po, com 0 advento da técnica de rai0s X, fessa5 sementes podem ser detectadas @ descariadas antes ‘mesma a instalagao do teste de germinacéo “Trabalhando com sementes de sucupire preta (Bowdichia virgitoides Kunth, Albuquerque e Guimaraes (2008) verficaram, fem imagens radiogréfieas, que sementes com danos severos feraram apenas pianiulas anormais © semertes mortas © que ‘Quando as sementes tinham mais de 50% do embrigo danificado ora sementes de Tabebuia heptephyla, Amaral et al (2011) veriicaram, por meio da andlise de imagens de raios X. 0 frau de desenvolvimento dos embrides, observando anomalias fembriondras, que provavelmente. tveram erigem durante. 2 Imaturagao dos futoe, as quaisafetaram 2 germinagso, redvzindo ‘2 qualidade do ote. ‘Trabalhanda com sementes de algumas espécies forests, 6 Lauraceae, Carvalho et al. (2008) identficaram, com auxilo {e imagens radiograficas, semeniesinfesiadas por inselos ou com malformago ¢o lecido cotledonar préximas ao exo embrionaio. © constataram que esses danos afelam 8 germinacao das Sementes das especies estudadas; por outro lado, infestacto ou malformagéo do tecido cotledorar de menores’dimensdes © stanles do exo embrionario néo causam problemas na ‘germinagao das sementes. studando métodos para a avalagdo da viablidade de sementes de pinhdo-manso, Pinto etal. (20080)identicaram, pelo teste de reios X, manchas escuras no endosperma elou no 258‘Sementes produeso. qualtadee invapées cnatiicas ‘embrio etrincas no embrido que tverem elevada relagdo com as porcentagens de plantuias anarmais e de sementes mortas no feste de germinagao, Potato, 2 partir da andlise de imagens de raios X & possivel estudar a relagéo entre a morologia intema @ {erminago de sementes o, dessa forma, aossibiltar 0 descarte de materiais ce baixa qualidade No estudo da-mocolagia interna, uma caracteristica passivel de avaliagio 6 0 tamanho do embriae, 0 qual pode ser efinido por seu grau de desenvolvimento ¢ 0 esaago lvre na Cavidade interna da semento (MARCOS-FILHO et a1, 20103). Esse espago lve € uma expresszo usada para defini a acorréncia de espagos vazios entre © ambriao 0 endospexma ou entre © conteido da semente e o tegumento, podenda ococrer em diferentes partes da semente, porém narmalmante acontece 20 redor do embrida (LIU et a1, 1993), ‘Quando a cavidade interna ndo ¢ completamente preenchida pelo embriao e pelos tecidas do endasperma ou contém tecidos menos densos, 2 analise de aiosX produz imagens com manchas fescures, pois a resisténcia nao é sufciente pata dlaquear passagem dos raios X (GAGLIARDI e MARCOS-FILHO, 2011) Trabalhando com sementes de aroe'ra-branca, Machado e Cicero (2003) verfcaram que sementes com dferencas naproporeao ‘embridoleavidade embriondra infere a 100% no germinaram © ‘agvelas que possuiam embrides morologicamente anormais resuitaram em plantas anormais ou sementes nao germinadas. “Jé_ para. sementes de berinola, Siva et al. (20122) vetficaram que a presenca de maior drea acupada pelo embrio © lencosperma e mener espago vazia no favoreoeram a germinapo, ‘assim como para sementes de tomate (SILVA, 2012), cantudo, hessas pesquisas, 08 espagas vazies representavam menos de 296 em relagao 8 érea total da semente, ra maiora dos casos, ‘© espago vazio pode ser quantficadovisualmente, como foi telatado para sementes de mamona (CARVALHO etl, 2010; KOBORI et. ai. 2012), canafistula (Peltgohorum dub) (OLIVEIRA et a, 2003) © pimentzo (GAGLIARO! @ MARCOS- FILHO, 2017); porém, esses resuladas podem ser subjetivos, A uilizagao de sistemas automatizados para esta avaliagio pode tomar 0 procedimento mais eiiente 286 ‘Semontes:produrso, quatiade © novaetes tcnatigeas Avaliagio automatizada de alteragdes na morfologia interna de sementes Os procedimentos para deteminaglo de alteraySes na morfologia interna tém sido basaados, principalmente, na utilzapio de imagens radiograticas das sementes. As avalacées ‘tém sido orientadas para a quantifeac’o de espacos varios 9 Interior das sementes e 08 principals softwares utlizacos s80 0 Tomato Analyzer, que & de domino ve © pode ser encontrado em pt card ofio- state. edulvanderknaapitomato_analyzer php @ 0 Image-Pro Plus®. (© Tomato Analyzer fo desenvolvico na Oho State University para andlise de fruios de tomate e adaptado para a ‘analise de sementes, sendo considerado sensivel para avaiar a extenso do crescimento do embriso de sementes de ‘ucutbiticeas © de slgodio © promissor para avaliagdo de sementes de outras espécies (MARCOS-FILHO et al, 2010a). 0 procecimento para andlse de imagens rediogriieas de sementes ‘com 0 software Tomato Analyzer foi descrito por Marcos-Filo et al. (20409) Embora 0 software Tomato Analyzer tenha sido esenvolvido para analisar frutos de tomate, © mesmo nao € eficiente para’ andlse dé sementos desea espécie. devido & dficuldade de mensurar as reas intenas correspondentes 00 fendosperma, assim como de outras espécies cujas sementes ‘apresantem esse tecido de reserva. E lindicado para sementes de espécles que_possuam apenas tegumento © embrigo, como as leguminosas, porque ‘essas, com frequéncia, pssuem espacos vazios que podem ser Feconhecidos ‘entre a petiferia do embrigo © 0 tegumento (MARCOS-ILHO et al, 20103), Para analsar a morfologiaintema de sementes, com 0 ‘objetivo de quantifcar o grau de desenvolvimento da embrio, em ‘elago 20 espago cisponivel no interior das sementes que ossuem endosperna, existe o software Imago-Pro® Plus, © qual Pode ser encontrado em ‘hitp:ww.mediacy comindex page=IPP. Dell’Aquila (2007) utlizou 0 reterido software © constatou sua eficiéncia na andlise de sementes de pimentio, sendo que 257‘Somontos:produeao, quakede e novapdestecnokigcas ‘Siva (2012) 0 ublizou analisar sementes de tomate e de bernjla, ‘ealzando a mensureco da area total da semente, da rea interna live e da proporedo entre essas. De acerdo com o formato ¢ textura das sementes, assim ‘come de suas partes componente, as etapas de andlise podem muder, necessilando estabelecer metodologias para cada fespécle, ou para espécies da mesma Tamia que possuam ‘caracerstioas similares de morfologia. Um exemple de andise de imagens de sementes de tomate ro programa mage-Prc® Plus pode ser abservado na Figura 3.A semente em destaque que esta sendo analisada tem a area marcada em vermelho, carrespendendo ao espago intemo vazi9, 1 qual o programa mensura na unidade que © operador desejar (iillmets, ‘centimetres, pixels etc), calculada a partir da Calibragdo dessa imagem, ublizando outra imagem na qual exist lum objeto de tamanho conhecido, a ser incicado pelo usuéro Figura 3, Imagens raciogicas de sementes de tomate sondo analsadas po Image-Po* Pi. Foto: Siva (2072) 258 ‘Somentes: produto, quatade einovactes tecnobtas anos mecanicos (Os danos mecénicos em sementes im sido relatados como uma das causas mais importantes de perda de potencial fisiclogico, resultando, mutas vezes no descarte de loles de sementes (CARBONELL etal, 1998). ‘A avaliagdo precisa dos referidos danos assume, dessa ‘manoira, grande importancia na tomada de decisao quanto 20 destino do lote em avalacSe. utlizagso como sementes ou como 9180s. As analises rtineamente realizadas para a avalagso de ‘automaticamente 0 valor correspondente 20 comprimento Ja plantula_demarcad, em milimetros. Esses valores 80 ‘presentados em janeiasituada abaixo das imagens das plntulas, (ua direta da tela do computador. Exemplos desea expressto dos resultados encontram-se na Figure 9, para sementes de eoja, Em varias pesquisa tem sido relatado o uso eficente dese sistema para avaliapdo do vigor de sementes de diferentes espécies, deize as quais destacam-se a soja (HOFFMASTER et al, 2003; MARCOS-ILHO et al 2009). 0 meldo (MARCOS- FILHO et al, 2008), 0 miho doce (ALVARENGA et al, 2012), 0 epino (CHIGUITO et al, 2012), 0 tomate (SILVA, 2012), 3 berinjola (SILVA, 2012), o tigo (SILVA eta, 2012b) e a crolalaria (SILVA tal, 20126), 268 ‘Somontes: procure, quavade inovaetes tecnatigcas Anda, esse sistema fo utlizado para avaliago do efelto do ‘condicionamentofsiotégio de semertes de mutamba (Guazuma Uuimifofa) (BRANCALION et al, 2010) e de milho doce (GOMES- JUNIOR et a, 2008) © para avaliagdo do efeito do tratamento de 'sementes de ‘amendoim (MARCH et al, 2011) e de mamona (KOBOR' et al, 2010), Figura 9. Exemy ise computadorzada de imagens de pntulas {ge ofa pelo safharo SVIS™ apna marcada em azul apa car com ‘mouse sobre a mesma, haver a incapio do corespondete valor do ‘comprimonte individual, er muimets (ndbidul moasuremonis) neste fexamplo, o Indice de vigor da amosta (vigor indor) de OBZ. Foto arene Fino ot 2008) ‘Além do SVIS®, outros sistemas semethantes tém sido relatados na iteratura com a mesma fnaidede. Tohicoo e Kruse (2008) desenvolveram um sistema para ~andlise de sementes de canola, O procedimento para a obtenco {escaneamento das plantuias 6 mesmo utlizado por Sako et a (2001), porém a anaise de imagens @ rellzada por um software espociice descrito am Mati (Mathworks, Natick, USA). Outro sistema 6 relatado por Oskiey et al (2004), esenvolvdo inicamente para anaisar sementes de Impatiens wallrana Hooker F. Aqu, as semenies $30 colocadas para {germinar em placas de petri, as qual s20 escancadas a cada 24 horas no periodo compreendio entre quatro a sete dias apds a 26)‘Somontes:produee, quakdodee inovactes tecnoigicas instalagdo do teste. © comprimento de plantulas (om), a area (mmm?) € 0 crescimento de planulas s80 mensurados utilzando 0 ‘softvare MacRhizo (Regent Instruments, Inc, Quebec, Canada). CONSIDERAGOES FINAIS ‘A andlise de imagens de sementes e plantas no Bresil ainda se encontram resirtas aos trabalhos de pesquisa, nos quals. ‘ém demonsirado grande potencial de utlzardo para diversas finalidades, ja abordadas neste captulo, ‘Aintrodugdo de sistemas automatizados nos laborarios de ~analise de sementes, tanto para pesquisa como para analises de Fatina, pode conriouir para o desenvolvimento de metodologias rpidas e precisas, que podem aurar na padronizacSo de testes, especialmente considerando a integrag0 dessa tecnologia com 0 testes ja existentes, consderadostradicionais na avaiaco da ‘qualidade de sementos. ‘A continuidade da_pesquise certamente permit 0 esenvawvimento de procedimentos confiavels para diversas especies, além das ja estudadas e, também, 0 deservoivimento {de novos sistemas de andlise de imagens, o que sem dtvida tara ‘anhos para 0 setor de tecnologia de sementes, visto que esses rocedimentos permite a rapica obtencSo de resultados com alto hivel de precsao, REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS ALBUQUERQUE, KS. 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