Coloraciones

Introduccion
Todas las muestras o suspensiones de microorganismos se pueden colocar en un portaobjetos de cristal para
ser examinadas al microscopio. Aunque este mtodo permite visualizar microorganismos y material celular de
gran tamao, con frecuencia resulta difcil analizar detalles internos. La microscopia de contraste de fase es
capaz de superar algunas de estas limitaciones. Por otra parte, la muestra o el microorganismo se puede teir
a travs de diversos mtodos.
Objetivo:
El objetivo primordial que busca toda tincin es de poder identificar y/o resaltar las organelas de las clulas
diana, mediante el uso de distintas tcnicas y procedimientos.
Examen directo
Son los sistemas ms sencillos de preparacin de muestras para su examen microscpico. La muestra se
pude suspender en agua o suero fisiolgico, se puede mezclar con lcali para disolver el material de
trasfondo (KOH), o bien se puede mezclar con una combinacin de lcali y una tincin de contraste (azul de
lactofenol, yodo). El mtodo de la tinta china, es un proceso en la cual se oscurece el trasfondo en lugar de la
clula. Este mtodo se utiliza para detectar capsulas alrededor de los microorganismos, como la levadura
Cryptococcus (el pigmento no tie la capsula, de modo que crea un halo claro alrededor de la clula de
levadura), y constituye un mtodo rpido para la deteccin e identificacin preliminar de este importante
hongo.

Examen directo del Rhizopus spp

Tincin diferencial
Se utilizan diversas tinciones diferenciales para teir cada tipo de microorganismos o componente del material
celular. La tincin gram es la ms conocida y utilizada de forma generalizada, y constituye el fundamento de
la clasificacin fenotpica de las bacterias. Las levaduras tambin se pueden teir con este mtodo (siendo

grampositivas). Las tinciones con hematoxilina frrica y tricromica son de gran valor de para la identificacin
de protozoos parasitos, mientras que la tincin Wright- Giemsa se utiliza para identificar parsitos sanguneos
y otros microorganismos seleccionados. Las tinciones como la de plata de metenamina y el azul O de
toluidina se han sustituido en gran medida por tinciones diferenciales o de fluorescencia dotada de mayor
sensibilidad o ms simple desde el punto de vista tcnico.

Proceso de Tincin de una bacteria gram positiva y negativa.

Tinciones acido resistentes
Se utilizan, al menos, tres tinciones acidorresistentes diferentes, cada una de las cuales se basa en la
retencin por algunos microorganismos de una tincin primaria, incluso al ser expuestos a fuertes agentes
decolorantes, como mezclas de cidos y alcoholes. El mtodo Ziehl-Neelsen es el ms antiguo, pero requiere
el calentamiento de la muestra durante el procedimiento de tincin. Actualmente este mtodo ha sido
sustituido por el mtodo de Kinyoun ( Ziehl-Neelsen en frio), o la tincin con fluorocromo. Sin embargo, se
prefiere el mtodo del fluorocromo debido a que permite examinar rpidamente una gran rea de la muestra
simplemente buscando microorganismos fluorescentes sobre un trasfondo negro. Algunos microorganismos
son parcialmente acidoresistentes, y tan solo retienen la tincin primaria cuando se decoloran con una
solucin dbilmente acida. Esta propiedad es caracterstica de unos pocos microorganismos, lo que hace que
tenga una cierta utilidad en su identificacin preliminar.

Tincin Zielh-Neelsen. Micobacterias (Mycobacterium tuberculosis)

PROCEDIMIENTO:
Para la coloracin Gram, se emple los siguientes reactivos:
Cristal violeta
Lugol
Alcohol
Safranina

Para su procedimiento se emple el cristal violeta durante 1 minuto, para luego

ser lavado con agua de cao. Luego aadimos lugol durante 1 minuto, y se lava
con agua de cao. Se adiciona alcohol acetona durante 30 segundos, para
luego ser lavado en el cao, y por ltimo se aade safranina durante 1 min.
Para luego ser lavado en el cao. Secar y observar al microscopio

Bibliografias:
http://www.scielo.cl/fbpe/img/rci/v18n4/fig12.jpg