ABSORCIN DE

GLUCOSA EN EL
INTESTINO DELGADO
DE RATA.

Coloque el saco intestinal en la

cmara de rganos aislados para
hacer los experimentos con las
diferentes soluciones:

Se sacrifica la rata por medio de

administracin de pentobarbital seguida
de traseccin de la mdula espinal. Abrir
el abdomen mediante una incisin en la
lnea media abdominal. Ya localizado el
intestino delgado se extrae luego de
cortar sus uniones ploro-duodenal e leocecal y colocarlo en una caja de Petri que
contenga solucin de Tyrode fra y
aeracin

Cortar tramos de intestino con 2 a 3 cm de longitud,

insertar una cnula en la luz del segmento intestinal
y, por medio de una jeringa que contenga solucin
salina de Tyrode, lavar los segmentos intestinales.
Es importante examinar que el tejido no presente
perforaciones ya que puede haber escape de la
solucin durante el experimento.

Siga los pasos que se mencionan para llevar a

cabo la inversin de los segmentos intestinales.
Se anuda con un hilo uno de los extremos del
segmento de manera que quede ocluido
completamente; con ayuda de una varilla de vidrio
se impulsa el extremo ocluido hacia el extremo
abierto, deslizndolo por la varilla

De esta manera la superficie mucosa del intestino

queda por fuera y los cabos de hilo del extremo
atado quedan por dentro del saco invertido.
Sostener con unas pinzas el saco intestinal e
introducir por su extremo abierto el tubo de vidrio d
la cmara de rganos aislados hasta que
sobrepase unos 5 mm, se amarra cuidadosamente
este extremo a la varilla

Toma de muestra.
Tome una muestra, tiempo cero,
tanto de la solucin exterior como de la
interior del saco intestinal, utilice una cnula
conectada a una jeringa o una pipeta
Pasteur. Utilizando las tiras reactivas
determine la concentracin de glucosa en
las muestras; deje pasar 15 minutos y mida
nuevamente la concentracin de glucosa,
slo de una muestra del interior del saco.
Hacer determinaciones cada 15 minutos
hasta completar 5; en el tiempo de la ltima
determinacin
mida
nuevamente
la
concentracin de glucosa en el exterior del
saco. Es importante verificar que las
condiciones de aeracin y temperatura se
mantengan constantes durante todo el
experimento.

Los resultados que aparecen despus de 3

minutos o slo en los bordes de la zona de
prueba no tienen significado confiable. Este
mtodo es semicuantitativo y est basado en la
reaccin enzimtica de la glucosaoxidasaperoxidasa especfica para glucosa, la que se
manifiesta con una reaccin colorida en la tira
reactiva.

Efecto de la ausencia de oxgeno en la absorcin intestinal de glucosa.

Colocar un saco intestinal que contenga en su interior solucin salina de Tyrode a 37C
dentro de una cmara que contenga solucin salina de Tyrode-glucosa a 37C, la preparacin se
mantiene sin adaptar el sistema de aeracin pero manteniendo la temperatura constante.
Hacer determinaciones de glucosa de la solucin interior y de la exterior del saco y
proseguir con las determinaciones en la misma forma y en los tiempos descritos anteriormente.

Determinacin de glucosa por medio de tiras reactivas.

Obtener una gota de la solucin problema, ya sea la del interior del saco intestinal o de
la solucin exterior, por medio de una cnula limpia conectada a una jeringa. Colocar la gota de la
solucin problema en la zona reactiva de la tira y se deja reaccionar durante el tiempo establecido
por el fabricante de la tira (el tiempo necesario para la reaccin est indicado en el recipiente de
las tiras y puede variar), el cambio de color se efectuar de acuerdo con la concentracin de
glucosa presente en la muestra y ste deber ser comparado con la escala cromtica
proporcionada en el recipiente de las tiras, la lectura debe efectuarse bajo buenas condiciones de
luz.

Experimento control.
Colocar el saco intestinal dentro de la cmara y llenarlo con solucin salina de Tyrode
que se encuentre a 37C utilizando una cnula acoplada a una jeringa o una pipeta Pasteur,
despus de verificar que el saco no presenta fugas ste se sumerge en una solucin de Tyrodeglucosa, tambin a 37C. Se debe tener cuidado que tanto la solucin interior como la exterior no
sobrepasen el borde superior del saco atado a la varilla, inmediatamente acoplar el sistema de
aeracin que consiste en una bomba de aire para pecera; la preparacin debe estar en bao de
mara para mantener constante la temperatura

Efecto del 2-4 dinitrofenol en la absorcin intestinal de glucosa.

Colocar un saco intestinal en una cmara de rganos aislados en la manera descrita
anteriormente, llenar el saco intestinal con una solucin de Tyrode a 37C, en este caso el saco
se colocar en una solucin de Tyrode-glucosa con 2-4 dinitrofenol (solucin exterior). Se mide
la concentracin de glucosa en el tiempo cero dentro y fuera del saco intestinal y, al igual que
en los experimentos anteriores, se realizan 5 determinaciones cada 15 minutos.