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Antecedentes
Cromatografa en columna y capa fina. Caractersticas y aplicaciones.
Cromatografa de adsorcin y de particin o reparto.
Selecciona de Eluyentes para separar mezclas de compuestos por
cromatografa en columna.
Tcnicas de separacin cromatogrfica por elucin, adsorcin y desplazamiento.
Eluyentes y adsorbentes para cromatografa en columna y capa fina. Factores
que influyen en la separacin por cromatografa.
La cromatografa de columna es una tcnica basada en la adsorcin y solubilidad. Es una tcnica
de particin slido-liquido, puesto que existe un equilibrio dinmico entre la adsorcin y desercin
(elucin).
Existen diferentes clases de interacciones intermoleculares que originan que los compuestos
orgnicos se unan a la superficie del adsorbente con mayor o menor fuerza dependiendo de la
naturaleza polar o no polar de los compuestos.
La columna consiste en un tubo de vidrio en posicin vertical en el cual, por la parte baja, se
colectaran las diferentes fracciones. En el fondo del tubo se introduce un pequeo trozo de
algodn que cumple la funcin de filtro que impide que el gel del slice salga. Una vez colocado
el algodn, se coloca una delgada capa de arena, la cual no permite que l algodn se mueva de
su posicin. Posteriormente, por la parte superior, se introduce el adsorbente, el cual ha sido
previamente suspendido en el disolvente seleccionado (va hmeda) para la separacin con el
objeto de eliminar las burbujas que se encuentran en las partculas de adsorbente. Existen otros
tipos de empacados, el empacado por va seca consiste en introducir el adsorbente y
posteriormente el eluyente seleccionado.
Se emplea para la separacin de mezclas o purificacin de sustancias a escala preparativa. Como
fase estacionaria se usa, generalmente, gel de slice o almina dentro de una columna como las
que se pueden ver en la figuras. La eleccin del disolvente es crucial para una buena separacin.
Dicho disolvente pasa a travs de la columna por efecto de la gravedad o bien por aplicacin de
presin (cromatografa flash). La columna se prepara mezclando el soporte con disolvente y se
rellena la columna poniendo en el fondo de sta un poco de algodn o lana de vidrio, para evitar
que la slica o la almina queden retenidas en la columna y d el disolvente se enrasada hasta el
nivel del soporte. A continuacin se introduce la muestra por la parte superior de la columna y se
eluye con el disolvente elegido, recogindose por lo general en tubos de ensayo
I. OBJETIVOS
a) Conocer la cromatografa en columna como tcnica de separacin
de mezclas de sustancias, sus caractersticas y los factores
que en ella intervienen.
b) Utilizar la cromatografa en columna para la purificacin de
una sustancia contaminada con un colorante.
c) Controlar con cromatografa en capa fina el proceso de
separacin de mezclas por cromatografa en columna.
Se le proporcionar 0.5 g de una mezcla slida, de la cual separar
el producto principal, por Cromatografa en Columna.
Para empacar la columna sujtela en el soporte con las pinzas.
Engrase la llave y mantngala en posicin de cerrado. Introduzca
hasta el fondo un pequeo pedazo de algodn ayudndose con la
varilla de vidrio, agregue 10 ml de acetato de etilo y presione
suavemente el algodn para que quede bien colocado y sin burbujas
Resultados
Despus de este procedimiento se recolectan en 10 frascos viales muestras de
10ml para verificar don de tenemos el compuesto de inters se hace una
cromatografa en capa fina, obteniendo los siguientes resultados
3
2
testig
Cuestionario
1.-si una mezcla de antraceno y naftaleno se separa por cromatografa sobre
almina, Cul de las dos sustancias eluir primero cul ala ultimo?cul es
ms polar?
2.-un colorante desconocido, se piensa que es azul de metileno, Cmo se
podra comprobar esta suposicin usando un procedimiento basado en una
tcnica cromatogrfica?