Cromatografia

Complementos de Qumica I - Mdulo de cromatografia
Lus H. Melo de Carvalho
SEPARAO CROMATOGRFICA
CLASSIFICAO DE MTODOS CROMATOGRFICOS

EM COLUNA
Classificao geral
Amostra
Fase mvel
Mtodo
especfico
Fase estacionria
Tipo de equilbrio
Cromatografia lquida
Lquido-lquido
Lquido adsorvido
Partio entre lquidos
(LC)
ou partio
num slido
imiscveis
Lquido-fase
Espcies
Partio
ligada
orgnicas ligadas
lquido/superfcie ligada
(fase mvel: lquido)
A+B
a uma superfcie
slida
B
A
Lquido-slido ou
Slido
Adsoro
Resina de troca
Troca inica
adsoro
Troca inica
inica
B
A
Excluso por
Lquido nos
tamanho
interstcios de um
Partio/peneiragem
slido polimrico
Cromatografia gasosa
Sinal do detector
t1
t2
Detector
A
t0
Gs-lquido
(GC)
(fase mvel: gs)
t4
B
t2
Tempo
t3
Partio gs/superfcie
orgnicas ligadas
ligada
slida
Gs-slido
t1
Espcies
a uma superfcie
t0
Partio gs/lquido
num slido
Gs-fase ligada
t3
Lquido adsorvido
t4
Slido
Adsoro
Cromatografia de
Partio fluido
fluido supercrtico
supercrtico/superfcie
(SFC)
ligada
(fase mvel: fluido

supercrtico)
SEPARAO CROMATOGRFICA
TEORIA DA CROMATOGRAFIA
t1
Fase mvel
Concentrao
Fase estacionria
K=
t2
CS
CM
A
B
Distncia migrada
ALARGAMENTO DE BANDA
MELHORANDO A SEPARAO
Cromatograma original
Sinal do detector
Resposta do detector
Comportamento ideal
Tempo
Aumento da separao
das bandas
Comportamento real
Diminuio do
alargamento das bandas
Tempo
Tempo
ALGUMAS QUANTIDADES IMPORTANTES
QUANTIDADES IMPORTANTES (CROMATOGRAMA)

Tempo de reteno (Tr)
Tr= Testacionria + Tmvel
Sinal do detector
Tr
Tm
Tempo morto (Tm)
Tr
W1/2
Tempo de reteno ajustado (Tr)

Tr= Tr - Tm
Factor de reteno (k)

Tempo
Tm= tempo morto

Tr = tempo de reteno total
Tr = tempo de reteno ajustado (ou lquido)
W1/2 = largura do pico a meia altura
medida de reteno na fase estacionria

k' =
Tempo que o analito passa na f ase estacionria

=
Tempo que o analito passa na f ase mvel
T Tm Tr '
= r
=
Tm
Tm
Coeficiente de separao ou selectividade ()

medida de reteno na fase estacionria
(T ) T
k'
a= 2 = r 2 m
k'1 (Tr )1 Tm
PROCESSOS CINTICOS QUE CONTRIBUEM

PARA O ALARGAMENTO DOS PICOS
ALTURA EQUIVALENTE A UM PRATO TERICO
N de molculas
H=
Processo
Termo na equao
Relao com as propriedades da
L
(L-1)
coluna e do analito
(L+1)
Difuso longitudinal
B 2k D DM
=
u
u
B
u
Transferncia de massa
CS u
CS u =
(fase estacionria lquida*)
Distncia migrada
Enchimento
Introduo
da amostra
B
+ CS u + C M u
u
DETERMINAO DE H E N
CS u
(1 + k' ) 2 DS
CS u =
(fase estacionria slida**)
2t d k' u
( 1 + k' ) 2
Detector
CM u
CM u =
(fase mvel)
Sinal do detector
qk' d f2u
Tr
f ( d p2 , d c2 ,u )
DM
f: funo de; kD, q : constantes; td tempo mdio de dessoro do analito da

superfcie; dc: dimetro da coluna; B: coeficiente de difuso longitudinal; CS e
CM: coeficientes de transferncia de massa nas fases estacionria e mvel,
respectivamente.
* a fase estacionria um lquido imiscvel imobilizado
** a fase estacionria uma superfcie slida onde ocorre adsoro.
Tm
Varivel
Smbolo Unidades
u
Velocidade linear da fase mvel
cm .s-1
Coeficiente de difuso na fase estacionria
DS
cm .s
Coeficiente de capacidade
Dimetro de partcula do enchimento
dp
cm
Espessura do revestimento lquido na fase estacionria
df
cm
(a)
Tempo
-1
cm.s
DM
Coeficiente de difuso na fase mvel
(a)
(a)
2
2
-1
Aumenta quando a temperatura aumenta e a viscosidade diminui
Contribuio para H, cm
EQUAO DE VAN DEEMTER

H=
B
+ CS u + CM u
u
ALARGAMENTO DE BANDAS
Efeito de percursos mltiplos

Largura de banda inicial
CSu
CMu
B/u
Largura de banda final
Velocidade linear de fluxo, cm/s

glc
2
10
0.8
GLC
6
H, mm
Fase mvel estagnada
0.6
Fluxo de fase mvel
0.4
4
LC
0.2
1.0
Grau de alargamento
de banda
2.0
Velocidade linear de fluxo, cm/s
lc
SEPARAO E RESOLUO
LARGURA DE PICO NA BASE (W) E A MEIA

ALTURA (W1/2)
RS=0.75
Sinal do detector
RS=1.0
(Tr)B
Tm
RS=1.5
Z
(Tr)A
A
B
WA/2
WA
WB/2
W1/2= 2.35
h
2
W = 4
Tempo
WB
Tempo
TCNICAS PARA MELHORAR A RESOLUO

Objectivo:
Separaes eficientes em tempos de anlise curtos.
EFEITO DO COMPRIMENTO DA COLUNA

NA RESOLUO E NO TEMPO DE RETENO
1. Aumentar a distncia entre os picos, Tr=T2-T1

(a) Aumentar o comprimento da coluna, L
(b) Aumentar a quantidade de fase estacionria, VS ou VL
(c) Usar um coeficiente de selectividade melhor, =T2/T1
Diminuir a temperatura
Escolher uma fase estacionria diferente
Escolher uma fase mvel diferente (se for lquida)
2. Diminuir a largura da banda, W

(a) Usar um enchimento mais uniforme
Encher mais cuidadosamente
Usar partculas mais pequenas

(b) Aumentar a rea de interface entre as fases
(c) Optimizar a velocidade de fluxo
(d) Reduzir o tamanho da amostra
(e) Reduzir o espao morto no sistema
(f) Reduzir a constante de tempo do detector
(g) Diminuir o dimetro da coluna
EFEITO DO TAMANHO DE PARTCULA E H
EFEITO DA TEMPERATURA NA CG
Isotrmica a 45C
1
0.2
H, cm
0.6 0.8 mm
0.4 0.6 mm
0.3 0.4 mm
0.1
x4
0.25 0.3 mm
Isotrmica a 145C
0.1 0.15 mm
6
5
10
15
20
7
Velocidade linear, cm/s
EFEITOS DO FACTOR DE CAPACIDADE
Programada de 30C a 180C
Resoluo, RS
RS/Q ou (Tr)B/Q
4
Tempo de eluio, (Tr)B
1 2
10
5.0
10.0
Coeficiente de capacidade, kB
15.0
30
60
7
6
Tempo (min)
90
20
120
30
150
180
Temperatura (C)
EFEITO DA COMPOSIO DA FASE MVEL

NA CROMATOGRAFIA LQUIDA
PARMETROS USADOS NAS TCNICAS

DE OPTIMIZAO
Variao de N
70% metanol,
30% gua
Alterao do comprimento da coluna

60% metanol,
40% gua
50% metanol,
50% gua
40% metanol,
60% gua
Variao de H
Alterao da velocidade do fluxo da fase mvel
Alterao do tamanho de partcula do enchimento
Alterao da espessura do filme lquido que serve de fase estacionria (LC)
Alterao do dimetro da coluna
Alterao da viscosidade da fase mvel (e assim DM ou DS)
Alterao da temperatura da coluna (GC)
Variao de k e de
Tempo de reteno, min
1 9,10-antraquinona
2 2-metil-9,10-antraquinona
3 2-etil-9,10-antraquinona
4 1,4-dimetil-9,10-antraquinona
5 2-t-butil-9,10-antraquinona
Alterao da temperatura
Alterao da composio da fase mvel
Alterao do enchimento da coluna
Utilizao de efeitos qumicos especiais
EFEITOS DE E N NA RESOLUO DE PICOS
VARIAO DA RESOLUO
Tm
Inicial
Factor de separao bom

N pequeno
Factor de separao fraco

N elevado
Factor de separao bom

N elevado
aumentar k
Variao de k
Aumento de N
diminuir k
Factor de separao fraco

N pequeno
Aumento de
Tempo
10
O PROBLEMA GERAL DA ELUIO
Razo de altura dos picos = 1:1

RS = 0.4
0.5
0.6
Sinal do detector
0.8
1.0
0.7
1.25
Razo de altura dos picos = 8:1

RS = 0.4
0.5
0.6
0.7
Tempo
0.8
1.0
1.25
11
Complementos de Qumica I
Lus Herculano Melo de Carvalho
SOBREPOSIO DE PICOS
SOBREPOSIO DE PICOS
1) Localizao
Posio aparente
Erro na quantificao por rea de pico

Rs = 1
1:1
4:1
100%
96%
Posio verdadeira
8:1
16:1
2) Medio de reas
93%
88%
% erro na rea do pico menor = (% indicada -100 %)

% erro na rea do pico maior = - (1/x) % erro na rea do pico menor
12
EXPRESSES E QUANTIDADES IMPORTANTES EM CROMATOGRAFIA
QUANTIDADES EXPERIMENTAIS IMPORTANTES EM CROMATOGRAFIA
Nome
Velocidade linear da fase
Nome
Tempo morto
Tempos de reteno (de A e de B)
Tempo de reteno ajustado (de A e de B)
Smbolo
Tm
Determinada a partir de:

Cromatograma
u=
mvel
Volume da fase mvel
(Tr)B
k' =
Coeficiente de capacidade
WA e WB
L
Comprimento do enchimento da coluna

Velocidade mdia das molculas da fase
mvel
Volume da fase estacionria
Concentrao de analito nas fases mvel e

estacionria
K=
Cromatograma
Medio directa
Factor de selectividade
Medio directa
RS =
Resoluo
VS
CM e CS
(Tr
(Tr)A= (Tr)A - Tm
Coeficiente de partio
Largura de picos (de A e de B)
Dados da preparao do
enchimento
Anlise e dados da preparao
L
Tm
Tm )
Tm
k' =
KVS
VM
k' VM
VS
K=
CS
CM
(Tr )B Tm
(Tr )A Tm
2[(Tr )B (Tr ) A ]
W A + WB
T
N = 16 r
W
N de pratos
H=
Altura de prato
Tempo de reteno
quantidades
VM = Tm F
(Tr)A e (Tr)B Cromatograma

(Tr)A e
Relao com outras
Expresso
(Tr )B
RS =
k' B K B
=
k' A K A
N 1 k' B
4 1 + k' B
1 + k' B
N = 16RS2

1 k' B
2
L
N
16RS2 H (1 + k' B )3
u 1 (k' B )2
2
13
COMPONENTES FUNDAMENTAIS DE UM SISTEMA DE GC
COLUNAS PARA CROMATOGRAFIA GASOSA
Detector
Injector
Tipo de coluna
Capilar
Caracterstica
Comprimento (m)
Enchimento
(WCOT)
10 - 100
1-6
Dimetro interno (mm)
0.25 0.75
2-4
Eficincia (pratos/m)
1000 - 4000
500 - 1000
Gs de arraste
Quantidade de amostra (ng)
Forno
Coluna
Gs
de arraste
Presso relativa
Tratamento
de dados
Velocidade relativa
10 - 10
10 - 106
Baixa
Alta
Rpida
Lenta
INJECTOR DIRECTO
COLUNA TUBULAR ABERTA ( ou COLUNA CAPILAR)
Septo
Coluna
Seringa
Agulha da
seringa
Purga do septo
Cmara de
vaporizao
Gs de arraste
14
EFICINCIA DE COLUNAS
CAPILARES E EMPACOTADAS
GASES DE ARRASTE
106
N2
1.2
)
OT
(WC
s
e
ilar
Cap
10
104
1.0
H (mm)
adas
acot
Emp
103
0.8
He
0.6
H2
0.4
102
10
103
104
0.2
Tempo (s)
20
40
60
80
2.0
H (mm)
Velocidade linear mdia (cm/s)

s
da
ota
c
pa
Em
1.5
1.0
(WCOT)
Capilares
0.5
20
40
60
Velocidade linear mdia (cm/s)
15
DETECTOR DE EMISSO ATMICA
DETECTOR DE IONIZAO DE CHAMA
Bateria de
dodos
Colector
Rede de
difraco
170 nm
250 nm
480 nm
ar
Chama ar-H2
656 nm
Bico de queima
690 nm
748 nm
777 nm
Plasma
H2
Parede do forno
Coluna
Gs de complemento
Coluna
Amostra duma gasolina

Monitorao
da linha do C
Fluxo de sada
Sinal do detector
DETECTOR DE CONDUTIVIDADE TRMICA
20
30
Monitorao
da linha do O
Fluxo de entrada
10
Tempo (min)
16
SISTEMA DE INJECO DA AMOSTRA

COMPONENTES PRINCIPAIS DE UM SISTEMA DE HPLC
2) Injeco da amostra
1) Carregamento da amostra
loop
loop
Unidade de
injeco
Para a coluna
Para a coluna
Coluna
Da bomba
Solventes
Da bomba
Detector
Sada
Sada
DETECTOR DE UV PARA HPLC

Da coluna
Bomba + sistema de
gradiente
Janelas
de quartzo
Aquisio e processamento
de dados
Fonte de UV
Detector
Para o esgoto
17
EFEITO DA ELUIO EM GRADIENTE
CROMATOGRAFIA LQUIDA
Mistura de clorobenzenos
Eluio em gradiente
Polaridades dos solutos: A > B > C
Inicio: 40:60 (v/v) MeOH/H2O
Eluio isocrtica
MeOH 8%/min
50:50 (v/v) MeOH/H2O
Fase normal
Fase reversa
Fase mvel de polaridade baixa
Fase mvel de polaridade alta
Tempo
Tempo
10 15 20
Tempo (min)
25
30
10 15 20
Tempo (min)
25
30
BOMBA RECPROCA PARA HPLC

Fase mvel de polaridade mdia
Fase mvel de polaridade mdia

Coluna
Junta selada
C B A
Tempo
A B C
Motor
Amortecedor
de pulsaes
Vlvulas
de esfera
Tempo
Pisto de
vaivm
Solvente
18
APLICAES DA CROMATOGRAFIA INICA
Eluente:
Eluente:
NaHCO3 0.0028M / Na2CO3 0.0023M
Fenilenodiamina.2HCl 0.025M / HCl 0.0025M
Volume de amostra: 50 L
Volume de amostra: 100 L
19

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Partio entre lquidos

(fase mvel: lquido)

(fase mvel: fluido

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ALGUMAS QUANTIDADES IMPORTANTES

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QUANTIDADES IMPORTANTES (CROMATOGRAMA)

Tempo morto (Tm)

Tempo de reteno ajustado (Tr)

Factor de reteno (k)

Tm= tempo morto

medida de reteno na fase estacionria

Tempo que o analito passa na f ase estacionria

Coeficiente de separao ou selectividade ()

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PROCESSOS CINTICOS QUE CONTRIBUEM

ALTURA EQUIVALENTE A UM PRATO TERICO

Relao com as propriedades da

(fase estacionria lquida*)

(fase estacionria slida**)

f: funo de; kD, q : constantes; td tempo mdio de dessoro do analito da

Velocidade linear da fase mvel

Coeficiente de difuso na fase estacionria

Dimetro de partcula do enchimento

Espessura do revestimento lquido na fase estacionria

Coeficiente de difuso na fase mvel

Aumenta quando a temperatura aumenta e a viscosidade diminui

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EQUAO DE VAN DEEMTER

Efeito de percursos mltiplos

Velocidade linear de fluxo, cm/s

Fase mvel estagnada

Fluxo de fase mvel

Velocidade linear de fluxo, cm/s

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LARGURA DE PICO NA BASE (W) E A MEIA

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TCNICAS PARA MELHORAR A RESOLUO

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EFEITO DO COMPRIMENTO DA COLUNA

1. Aumentar a distncia entre os picos, Tr=T2-T1