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  • Erro Puro e Erro Padrão

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    A discussao contida neste material é para tentar ajudar o aluno na discussao do célculo pelo erro puro (a partir dos pontos centrais) e do erro padrao (quando séo considerados todos os ensaios nos célculos). Leiam com atengao a questo do fracionado e do planejamento completo nesta discussao! Profa. M. Isabel Rodrigues Fac. de Eng. de Alimentos - UNICAMP ‘bel@fea.unicamp.br Estudo do Caso 5.4 ~ Planojamonte Exporimantal para § varlavels independentes ‘nwmzaton or minase nroducven by Kkyeromyees manionue sing octal dest" apoio lochamsty ang Blteonnolgy. 84, 257-268, 2007 all, S.J Suzan, R Mauger and Rogues, ML Rosumo Este trabalho teve por objetivo aumentar a alividade enzimética da enzima inulinase produzida por Kluyveromyces marxianus ATCC 16045, a qual tem um importante papel na produgao de frulose © na produgdlo de frutooligossacarideos. Na produgdo da onzima foram ‘studadas as varidveis concentrago do sacarose, oxtrato do levedura, peplona, K:HPO, © pH. Para tanto fol realizado primeiramente um planejamento fatorial fracionario (2"') para determinar 08 ateitos das varléveis sobre a atividade enzimética, senda selecionadas trés para serem utlizadas em um planejamento fatorial completo. A atividade enzimatica pessou de 9 para 110 Ulml. apds a realizagsio dos 2 planejamontos fatoriais. Estratégias +8 opeio: Realizar diroto um planejamento completo de 2". ordem para 6 varidvels totalizando 48 tenssios (2° + 10 axiais + 4 po) com o risco de nao chegarmos no objetivo desejado caso estejamos fora das falxas adoquadas, 0 que normalmente acontece. 48 onsaios | 32+ 4 pc+ 10 ax 2 opgio: Realizar primeitamente um planejamento fracionério de 2°" (16 ensaios) + 4 p¢ com 20 ens inckis e analisar os efeitos das 6 varives © planejamento fracionario 2°" , reduz a metade 0 numero do ensaios que se necessitaria rum planejamento completo. Esta op¢80 é muito interessante pols permite avaliar 08 efeltos das variaveis principais com a mesma seguranca em relagdo a um planejamento completo com os 82 censaios. um plangjamente qua nos fomece informacses cuanto a importéncia dos efeitos sabre a resposta © se a faixa escathida de ostudo 6 a mais adequada © om que dirego devemos seguir no préximo planejamento, Para este planejamento, chamado de % tragdo, a8 4 primoiras colunas so formadas como 234) ‘um plangjamento 2* e a 5°, coluna 6 resultante da multipicagao das 4 colunas anteriores ( E um planejamento de resolugdo V, j4 que a coluna identidade 1212345 possui § fatores. Como conseqléncla os efeitos principats so chamados na verdade de contrastes pois se confundem ‘com as inferagdes complementares da 4* ordem. As interagSes de 2°. ordam se confundem com as, de 3°. ordom. No entanto, como ja foi dito, a interapao de 3°. ordem em diente tende a ser muito balxa e nao interfere no valor do efeito principal A tabela 5.24 aprosonta as relagSes ontra os contrastos @ 08 valores dos contrastes. Na pratica ndo € usual usarmos o termo contrasts. A linguagem usual 6 efeitos. Ndo vemos problemas riss0, O mais importante € sabermos que ao usarmos Um fraciondirio esternos pardando algum tipo de informago, nao temos os mesmos graus de liberdade se tivéssemos optado por um completo. Por isso 3 responsabilidade da escoina de um planejamento fracionario que nao seja saturado, ou sseja que nao misture efeitos principais com 2*. orem. Num planejamento saturado podemos acreditar que a variével & importante, mas na realidade matematicamente pode ser o valor da interagdo de 2°, ordem entre oulras variaveis # que estd pesando no célculo do contraste. Veremos. sso com detalhe no astuda de caso 6.6. Assim, cada efeito principal inclul o valor de 4°. ardem que no & possivel de ser determinado. Mas efeitos de 3°. ordem e acima tendem a zero, no afetanco assim o valor e a andlise estatistica doefelto, hye ts 2345 b= 241346 b= 841245 = 491235 n= 541284 Tabe'a 524 -Rolacso ents os conrates da tragdo 2 « suas relaSos ‘com 9 efote do fete comsiao. 12345 Contrastes () | 1 2345 1+ 2345, 2 1345 24 1345 3 1245 34 7245 4 1235 4+ 1235 5 1234 34 1238 2 345 12 +345 3 245 13+ 246 14 235 14+ 235 [48 234 15 +234 23 148 23+ 145 24 135 24+ 135 25 134 25+ 134 34 125 344125 35 724 354 128 45 123 45+ 128 Conforme 0 resultado dos efeitos do planejamento fraciondrio, decidir o planejamento completo com 4 ou 3 varidveis, totalizando 48 onsaios (20 do fracionario + 2° + 8 axiais + 4 pe) ov ‘38 ensaios totais (2° + 6 axieis + 4 pe} respectivamente 2+ Baxieis +4 po= Total = 28 ensaios [> 48 ensaios 2" +4 po= 20 ensaios Anlise dos > | cicitos ou 2+ aniais +4 po Total _ ‘Bensaoe HP a8 eneatos Dentre as opgbes apresentadas, ambas esto corretas. No entanto, a estratégia seqtencial de planejementos da 2°. opgdo possibilta com mais garantia a otimizagao de um processo ou produta. Alam disso, 0 nlimero de ensaias realizados no total é praticamente 0 mosmo no caso de ficarmos com 4 varidveis no 2°. planejamento ¢ 8 ensalos a menos no caso de termos somente 3 variaveis para 0 planejamento completo, Pademos ainda realizar um tercelro planejamanto se for necesséria ou conveniente, Metodologia Utilizada e Resultados A estratégia seqiencial de planejamentos fol escolhida neste trabalho, Primeiramente realizou-se um planejamento 2°! e 3 repetigbes no ponto central. Apés a andlise dos efeitos das § variaveis fo realizado um planejamento completo para 3 varidveis. A tabela 5.25 apresenta os nivels @ 08 correspondentes valores resis utlizades no planejamento 2” senda que a tabele 5.26 presenta 06 resultados das atividades enzimalicas apés 24 e 48 horas de fermentagio para os 19 ensaies. Tabela 5:25 Valores uzados ne slanejamento floral acini | Nivel a v 4 | Sacarose (g/t) 10 20 30 | Bietratolevedura (ft) 4 7 70 (__Peptona (git) a | PH 38 aS HPO. (g/L) | CObserva-se pelos resultados obtidos na tabela 5.26 e na figura 5.13 que conforme = codigo do ensaio temos atividade de cerca de 4 a 60 UlmL aps 48 horas de fermentacao. & relevante citar que o$ valores das variaveis na condigao do ponto central era 2 condigao usada anterionmente 20 estudo do planejamento experimental que resultava em média uma atividade cenzimatica de 10 U/mL. Isto mastra que num primeira planejamento traciondno obleve-se atividade cerca de 6 vezes maior em relacdo 8s condigdes padrao. As labelas 5.27 © 5.28 apresentam os efeitos das variéveis sobre a atividade, os eros, padres, 05 valores de t (efeitoferro padrac), os valores p @ os limites de confianga inferior ‘superior Tebola 5.28 Ploncjamerto excevimeniat ralondn 2 para oecudo ds atetade da onzima (AE) ap6e 24 © 4B eras do termeriago. Sacarose | Extiev. | Poptona | pH | KHPO, | AE n= | Ensaios 24horas | 48 horas | a) 2) 8) 4) (#1234) | UimL Ulm 1 “i z - za7_| 3367 2 " 4 4 4 503 | 885 3 4 “4 1 28,80 42,78 4 " Ht 4 ais | tte | 5 1 4 "i a 1786 | 2626 re 4 a + + 20.74 31,58 7 1 4 4 4 azaa_| 61.08 8 4 4 4 4 a 4oa2_ | sear 9 4 a a s a 53 | 63 10 5 4 4 4 “i 307 | ans 14 4 W 3 +t cal 10,38 15,59 72 H 4 4 4 4 263 | 888 8 4 a i 4 vaa7_ | 1072 14 a | an 4 4 5,08 15 A 4 + +1 vt 12.60 17,62 6 4 4 4 4 4 938 | 16.20 7 ° ° 0 0 ° 682 10.96 8 ° 0 0 0 ° 623 | 84s 8 ° ° 0 ° ° ear | 10a 70 | ‘aio 2 reaio 3 nsaio 6 eneaioB | snioa onesie 10 |-e-ensaio 11 | eneaio 12 onesie 13 [© eres 15 [eres 16 onesie 17 | ersaio 18 © aneao 19 oy Figura 5.19 Aoompanhamento david da ans paca os 19 enasis do planejamento experimental acionvo anda 28 48 horas de fermentagao. Comparando-se as tabelas, observa-se que os valores dos efeitos sobre a resposta atividade enzimatica s8o iguals. © que muda é a forma de calcular 0 erro padréo e conseqilentemente os valores das colunas posteriores. Na primeira tabela (5.27) 0 erro foi ccaloulado a partir dos 3 ensaios no ponto central (pe) denominando-se erro puro. Como as respostas do ponto central foram bem préximas, indicando uma boa reprodutibiidade dos ensaios, © erro puro fol bem balxo, conseqilentemente o t (valor absoluto) foi alto e conseqtientemente o p aio. O valor 2 que se encontra entre parénteses junto ao valor t sao 0s graus de liberdade (Spc ~ 1) Na tabola 6.28 0 valor do erro padrio foi calculado a partir de todos os ensaios do planejamento considerando-se um modelo de 2°. ordem. Como temos um planejamento fracionério 10 6 adequado @ por isso 0 erro & maior. Observe que os graus de (© modelo que & gerado liberdade entre parénteses junto ao t para se daterminar 0 valor de p 6 igual a 13, ou seja 19 enssiog — 6 pardmetras de um modelo de 1. ordem linear (mécia + 5 parametros das variaveis) Pela tabela do erro puro temas que as 5 veriavels so estatisticamente significativas a 05% do confianga o polo erro padrdo da soma quadratica residual somente 0 pH @ a paptona. Os “softwares” nos fornecem ambos caminhos para os calculos, Ficamos num impasse: Qual das tabelas é a mals apropriaca para se escolher os efeitos estatisticamente significativos, consideramos as 5 variaveis ou 2? Devemos analisar sempre as duas tabolas o usar o bom sonso aliado a estatistica e 20 processo. A estatistica é a ferramenta, © melo € néo o fim, Deve ser utilizada para nos ajudar a tomar as decisdes e nao nos deixar confusos. Por isso a necessidade de saber 0 fundamento da metodologia, para ndo tomarmos decisées equivocadas. A tabela que calcula 0 erro pelo erro puro nos fomece uma informagao importantissima: se © proceso esté sob controle 0 erro puro & baixo @ 0 processo se reproduz bem, dentro de uma variagfio acsitavel, que vai dependar avidentemente de cada situaco, Como neste caso 6 valor do ‘ero puro 6 bem baiKo, todos os efsitos mostraram-se estatisticamente signficativos, mesmo da variavel KeHPO, que tem um efeito muito balxe quando comparado com o valor da média e do efoito das outras variaveis. Por outro lado, a tabela do erro pela soma quadralica residual nos lovaria a descartar a sacarose © 0 extrato de levedura. No entanto, os valores dos efeitos destas duas variaveis so praticamente iquais da peptona e nao so estatisticamente significalvos a 95%, mas sim 2 90%. 3s resultados mostraram que a produgdo de enzima foi afetada pela sacarose, extraio de levedura, peptona e pH. Um incremento na concentragao de sacarose e no pH (nivel 1 para +1) conduziu @ um decréscimo na alividade, enquanto que um incremento nas concentragdes do extrato de lovedura, @ da peptona levaram a maiores produgdes de enzima. O pH fol o efeito mais significative estalisticamente, mostrando que sou valor deve ser mantide baixo. No entanto, pHs abalxo de 3,5 provocam perda de estabilidade © desnaturacdo da enzima. Assim, embora o pH tenha sido a variavel estatisticamente mais significativa ela foi fixada em 3,5 nos ensalos posteriores. ‘abel 6.27- Estmatva dos folos para a abidado do nsinase— Eo padréo calclado polo oro puro Ome [emonve | wey |» [mage] nee | Media 20,70 | O13 159,96 | <0,0001 20,14 | - 21,26 Sacarose (g/L 1012 | 0,28 | -35,86 | 00008 | -11,99 881 Ext. lov. (g/L) 14,73 | 0,28 41,59 | 0,0008 10,52 12,94 | Peptona (giL}* 13,62 0,28 48,29 0,0004 12,44 tl 14,83 pH 23,50 0,28 83,31 0,007 2471 22,28 Kaposia | 22 | oz | ago | oor | sor | 00 “p< 005 Tabela 528. Estnata dos efotos para atdade de iulnase— Ere paerSo calcula pela sora quactica Eteito [Ero Pada Lim. conf. - | Lim. conf. | Uimt |Scresiduat) P 95% +95% | Media 20,70 | 256 | 808 | a a mas [tat 3 [a 4 a 48.27 5.24 4 4 7 a |r 355 5 a a)" 5428 So | 6 41 a 4 5502 307 7 | aH a 75:19 685 @ | 4a | +4 e022 3.82 o | 1 | 0 | 0 40,67 4.96 10 se [oo | oo 40,35 9.64 4 QO L168 | o 43,36 5.95 2 o | 6 | 0 140 ° 36,78 oa,94 | 54,86 | 5198 | 53.10 | Tabla 5.30 Valores ilizados no planejamento fata completo Nivel Variavel : “1,68 EI o [| a +1,68 Sacarese (g/L} 10 4 20 26 Ea | Bxtrate tevedura (g/L) 4 52 7 a8 10 Peptona (g/L) 8 10.4 14 ie | 20 ‘As tabelas 5.31 € 5.32 apresentam os coeficientes de regresstio, erro padi, 0 valor t. 0 valor p © 08 limites de confianga para a atividade enzimatica alravés do céicule do erro puro e pela soma quadratica residual respactivamente, como feito anteriormente para o planejamento srocionéio Toile 5.1 « Resulados do planejamento conpea pare abviadeenziatca endo oc doer pel eo a Geet de | eepuro | ta) |p| titedecont. | Lim, de cont regressao 95% 495% Meal 53.52 oer | ea7a [ooo | are 3692 (sac “26 030 | 7.00 | ootee | 444 “1.06 Sac (Q)* 458 04a | 10,56 | ooo | 6.48 art (Ext. fev. 434 ose | 108 | 0008 | 265 6.03 Ext lev. (@) 087 04s | ee | omei2 | -223 149 (Pep. (Ly 11,80 039 | 3002 | ooo | 10,10 13,48 Pep. (Q) 0.02 os | 005 | 0968 | 1.88 184 4x2 519 ost | 10.17 | 0006 | 7.40 ~ 2.88 axa 1a ost | 282 | 0n200| 0.86 3.55 2Lxau" 2.68 ost | 522 | 00s | oar 4.09 p05 sora quaditoavesidual “Tabela 5.82 Resutatos do planejamen atrial compet pare a aviade de iulnase usando alee ao ero pala To Tum. de wegen | Sropmaso | am |p Se cnt Med 5352 2as_ | 2n7a |

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