Microbiologia Bsica

Aula prtica

2015

Dr. Deivid Batisto

Objetivos:

Observao de bactrias
Preparao de esfregao
Tcnicas de colorao:

Coloraes simples (azul de metileno)

Coloraes diferenciais (Colorao de Gram)

Tcnicas de colorao
o Permitem

revelar a forma, a dimenso e os componentes

das clulas bacterianas, bem como, os aspetos bioqumicos da
sua estrutura.

o Permitem

observar clulas bacterianas em microscopia de

campo claro.

o Como

o ndice de refrao do protoplasma bacteriano

difere muito pouco do meio circundante, difcil o exame
direto de preparaes no coradas, a no ser que se utilizem
tcnicas especiais de iluminao.

Tcnicas de colorao

Preparao do esfregao

Fixao do esfregao

Colorao

Observao ao microscpio

Preparao e fixao do esfregao

o Preparado
sobre
uma
gota
de
abrangendo uma superfcie de 1 cm2

gua

o As lminas usadas podem ser lavadas com uma

mistura de lcool-ter (1:1)
o Fixao pelo calor em movimentos circulares.
o Evitar aquecer demasiado a preparao para
no destruir as clulas

Em caso de incndio.
Manter a calma!! os movimentos rpidos alimentam
a combusto
Tapar o frasco
e a lamparina

NO APAGAR O FOGO
COM GUA

Cobertor

Extintor

Azul de metileno
Mtodo de colorao simples utilizao de um nico
corante.
Corante bsico ou catinico - fixado pelas estruturas
mais negativas da clula como os cidos nucleicos e
a parede celular das bactrias

Colorao com azul de metileno

1. Corar com azul de metileno durante 1 minuto
2. Lavar com gua
3. Secar com cuidado e observar ao microscpio

http://www.bigroom.org/wordpress/?m=200704

Colorao de Gram
Colorao diferencial
Distingue bactrias Gram + de bactrias Gram Indispensvel na identificao bacteriana

Gram +

Gram -

http://www.apsnet.org/education/IntroPlantPath/PathogenGroups/bacteria/text/fig12.htm

Bactrias Gram+ e Gram

Composio diferente da parede celular

Gram+:

Parede

homognea

espessa,

formada

essencialmente por peptidoglicano, baixa quantidade de

lipoprotenas.

Gram-: Parede fina, camada de peptidoglicano fina,

camada externa complexa, formada por lipoprotenas e
polissacardeos

Colorao de Gram

dH2O

dH2O

Violeta de
cristal

Lugol
(iodo)

1 minuto

1 minuto

lcool
Acetona

Safranina
ou Fucsina

30-60 segundos

30-60 segundos

Trabalho a realizar:
oIsolamento de colnias:
Repicagem (riscado em placa)

oPreparao de esfregao a partir de meio lquido e

slido

oTcnicas de colorao:
Colorao de Gram