ANVISA-Controle Interno Da Qualidade - Antimicrobianos

Tecnologia em servios de sade
Controle Interno da Qualidade

para Testes de Sensibilidade
a Antimicrobianos
Maro - 2006
OPAS/ANVISA/SVS
Projeto de Monitoramento e Preveno da Resistncia

Microbiana em Servios de Sade
Coordenao do Projeto
Flvia Freitas de Paula Lopes GGTES/ANVISA/MS
Adlia Aparecida Maral dos Santos GIPEA/GGTES/ANVISA/MS
Maria Cndida de Souza Dantas CGLAB/SVS/MS
Valeska de Andrade Stempliuk OPAS/OMS
Elaborao
Colaboradores
Adlia Aparecida Maral dos Santos GIPEA/GGTES/ANVISA/MS
Antonia Maria Machado - Laboratrio Central do Hospital So Paulo - UNIFESP
Eliete Frigatto - Laboratrio Central do Hospital So Paulo - UNIFESP
Heiko Thereza Santana - GIPEA/GGTES/ANVISA/MS
Janana Sallas Coordenao Geral Laboratrios de Sade Pblica DEVEP/CGLAB/SVS/MS
Mrcia de Souza Carvalho Melhem Instituto Adolfo Lutz / So Paulo SP
Maria Rita Elmor Laboratrio de Microbiologia do Hospital Srio Libans / So Paulo SP
Marins Dalla Valle Martino Hospital Israelita Albert Einstein / So Paulo SP
Sociedade Brasileira de Anlises Clnicas
Reviso tcnica
Heiko Thereza Santana GIPEA/GGTES/ANVISA/MS
Janana Sallas DEVEP/CGLAB/SVS/MS
Slvia Figueiredo Costa Hospital das Clnicas FM/USP
Suzie Marie Gomes GIPEA/GGTES/ANVISA/MS
Reviso de texto
Ana Beatriz de Noronha
Esta publicao est sendo realizada no marco do Termo de Cooperao 37 (TC 37) entre a Agncia
Nacional de Vigilncia Sanitria / Ministrio de Sade e a Organizao Pan-Americana da Sade/Organizao Mundial da Sade - Representao do Brasil.
Organizao Pan-Americana da Sade/Organizao Mundial da Sade
Setor de Embaixadas Norte, Lote 19, 70800-400 Braslia-DF
Postmaster@bra.ops-oms.org
www.opas.org.br
Impresso no Brasil
Lista de Figuras
Figura 1
M2 - I - 4
Propagao da cultura de Bactrias

Figura 2
M2 - C1 - 2
Fluxograma para manuseio e estocagem da Cepa de Referncia

Figura 3
Fluxograma para manuseio da Cepa de Referncia no controle da qualidade
M2 - C1 - 3
Tecnologia em Servios de Sade
m2 -
Lista de Siglas e Abreviaturas
M2 -
Anvisa
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria
ATCC
American Type Culture Collection
BaSO4
Sulfato de Brio
CCIH
Comisso de Controle de Infeco Hospitalar
CGLAB
Coordenao Geral de Laboratrios de Sade Pblica
CIM
Concentrao Inibitria Mnima
CIQ
Controle Interno da Qualidade
CLSI
Clinical Laboratory Standard Institute
CO2
Dixido de Carbono
CQ
Controle da Qualidade
CQIL
Controle da Qualidade dos Insumos Laboratoriais
DEVEP
Departamento de Vigilncia Epidemiolgica
EPC
Equipamentos de Proteo Coletiva
EPI
Equipamentos de Proteo Individual
ESBL
Beta-lactamase de Espectro Estendido
FM/USP
Faculdade de Medicina da Universidade de So Paulo
GGTES
Gerncia-Geral de Tecnologia em Servios de Sade
GIPEA
Gerncia de Investigao e Preveno das Infeces e dos Eventos Adversos
IEC
International Electrotechnical Commission
ISO
Internacional Standards Organization
MH
Mueller-Hinton
MS
Ministrio da Sade
OMS
Organizao Mundial da Sade
OPAS
Organizao Pan-Americana da Sade
PCIQ
Programa de Controle Interno da Qualidade
pH
Potencial Hidrogeninico
POP
Procedimento Operacional Padro
SNVS
Sistema Nacional de Vigilncia Sanitria
SPVA
Sucrose Fosfato Glutamato
SVS
Secretria de Vigilncia em Sade
TSB
Caldo de Soja Trptica
UNIFESP
Universidade Federal Escola Paulista
Implantao da Rede Nacional de Monitoramento da Resistncia Microbiana em Servios de Sade
Sumrio
Introduo
M2 - I - 1
1. Parmetros para um Programa de Controle da Qualidade

I - Fase pr-analtica
II - Fase analtica
III - Fase ps-analtica
M2
M2
M2
M2
I
I
I
I
1
1
2
4
2. Cepas de referncia
2.1. Definies
2.2. Tabela 1. Indicao de uso das cepas de referncia
M2 - I - 4
M2 - I - 4
M2 - I - 5
Captulo 1
M2 - C1 - 1
Controle da qualidade em testes de sensibilidade para Bacteriologia

1. Cepas de referncia
1.1. Manuseio e estocagem
M2 - C1 - 1
M2 - C1 - 1
2. Controle de Turbidez para a Preparo do Inculo
M2 - C1 - 4
3. Mtodo de Disco-Difuso
3.1. Freqncia dos testes de controle da qualidade
3.2. Teste de controle da qualidade dos meios de cultura
3.3. Testes de controle da qualidade da prova e do perfil de sensibilidade
M2
M2
M2
M2
4. Mtodo de Diluio em Caldo ou gar (CIM)

4.2. Freqncia dos testes de controle da qualidade para testes de triagem
4.3. Testes de controle da qualidade do meio de cultura
4.4. Mtodo de diluio em gar
4.5. Mtodo de diluio em caldo (microdiluio e macrodiluio)
M2
M2
M2
M2
M2
M2
M2
- C1 - 8
- C1 - 9
- C1 - 9
- C1 - 9
- C1 - 9
- C1 - 10
- C1 - 10
C1
C1
C1
C1
4
4
5
6
Captulo 2
Controle da qualidade em testes de sensibilidade para Leveduras
M2 - C2 - 1
1. Cepas de Referncia
1.1. Cepas recomendadas para testes de CIM de 48 horas por diluio
em caldo
1.2. Cepas recomendadas para testes de CIM de 24 e 48 horas por
microdiluio em caldo
1.3. Cepas recomendadas para disco-difuso
M2 - C2 - 1
2. Manuseio e estocagem das cepas de referncia

2.1. Preparo das cepas de referncia para armazenamento
2.2. Armazenamento das cepas de referncia
2.3. Manuseio das cepas de referncia nos testes de rotina
M2 - C2 - 1
M2 - C2 - 1
M2 - C2 - 1
M2
M2
M2
M2
C2
C2
C2
C2
1
1
2
2
m2 -
3. Freqncia dos Testes de Controle da Qualidade

3.1. Intervalos de CIM
3.2. Testes de sensibilidade a antifngicos
M2 - C2 - 3
M2 - C2 - 3
M2 - C2 - 3
4. Testes de controle da qualidade do Meio de Cultura e Artigos de Plstico
M2 - C2 - 4
5.

M2
M2
M2
M2
Outros Testes de Controle utilizados na macrodiluio e microdiluio

5.1. Controle do crescimento
5.2. Controle de pureza
5.3. Controle da leitura dos pontos finais da reao
6. Teste de qualidade da prova e do perfil de sensibilidade
C2
C2
C2
C2
5
5
5
5
M2 - C2 - 5
Captulo 3
Controle da qualidade em testes de sensibilidade realizado por

Mtodos Automatizados
1. Elementos essenciais do sistema de gesto da qualidade
1.1 Fase pr-analtica
1.2. Controle interno do laboratrio
1.3. Controle da qualidade dos processos automatizados
1.4. Validao
M2
M2
M2
M2
M2
C3
C3
C3
C3
C3
1
1
1
1
2
Referncias Bibliogrficas
M2 - RB - 1
Anexos
M2 - A - 1
Anexo I:
M2 -
M2 - C3 - 1
Procedimentos utilizados para manuteno e estocagem de

microrganismos
M2 - A - 1
Anexo II: Planilhas para controle interno da qualidade
M2 - A - 3
Anexo III: Relatrios de Registro da Realizao do Controle Interno da

Qualidade - Hospital
M2 - A - 15
Anexo IV: Relatrios de Registro da Realizao do Controle Interno da

Qualidade - LACEN
M2 - A - 19
Introduo
O programa de controle interno da qualidade um conjunto de aes que visam garantir a

qualidade e reprodutibilidade dos processos e dos resultados produzidos por meio da verificao
continua dos fatores que interferem nessa. Deve ser visto como uma oportunidade de aprimoramento
das atividades desenvolvidas no laboratrio. Segundo a Organizao Mundial de Sade (OMS)1 a
implantao de um programa da qualidade necessria para:
melhorar a qualidade dos servios de sade;
gerar resultados confiveis e reproduzveis;
propiciar que resultados interlaboratoriais sejam comparveis;
aumentar a credibilidade do laboratrio entre os mdicos e seus clientes;
motivar os funcionrios a melhorar o desempenho; e
prevenir de complicaes legais que podem seguir a liberao de exames de baixa qualidade.
Muitos fatores interferem na qualidade dos resultados liberados pelo laboratrio de microbiologia, como por exemplo: (a) a seleo, coleta, transporte e acondicionamento apropriados do espcime
biolgico; (b) o treinamento, comprometimento e motivao do pessoal de laboratrio; (c) fatores
ambientais, como luminosidade deficiente ou excessiva, ventilao e condies do local de trabalho;
(d) fatores analticos, como baixa qualidade dos reagentes, vidraria, corantes, meios de cultura e falta
de equipamentos precisos; e (e) erros de transcrio de resultados, resultados liberados incompletos
e interpretao errada das provas bioqumicas ou antibiograma1.
Este guia um instrumento que tem como objetivo oferecer subsdios aos laboratrios de microbiologia na elaborao do manual de procedimentos operacionais padro (POP) que deve ser construdo
pelo laboratrio. Ele faz parte do Manual de Microbiologia Clnica para o controle de infeco em servios
de sade elaborado e disponvel na pgina eletrnica da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (Anvisa)2. Este deve ser utilizado em consonncia com a Clinical and Laboratory Standard Institute (CLSI),
Boas Prticas de Laboratrios, Norma Brasileira Reguladora - NBR ISO/ IEC 17025 por microbiolgicos
e biolgicos e Resoluo Diretoria Colegiada - RDC 302, de 13 de outubro de 2005.
Os documentos aqui apresentados contm informaes bsicas acerca da realizao, da freqncia e das indicaes dos testes de controle interno da qualidade (CIQ) dos laboratrios de microbiologia
clnica, na fase analtica.
1.
Parmetros para um Programa de Controle da Qualidade2,3

I - Fase Pr-analtica
A) Garantia da qualidade das amostras clnicas
O laboratrio de Microbiologia deve elaborar um manual de instrues, contemplando os
seguintes itens:
coleta, identificao e conservao da amostra;
transporte da amostra, estabelecendo meio recomendado, prazo, condies de temperatura
e padro tcnico para garantir a sua integridade e estabilidade;
M2 - I -
critrios para o preparo do cliente com instrues claras e escritas em linguagem acessvel, sendo
que somente as instrues simples e de fcil compreenso podem ser dadas verbalmente;
critrios para a aceitao ou rejeio das amostras; e
documentao das informaes relacionadas s amostras coletadas, como data, horrio e
responsvel pela coleta e eventuais intercorrncias, garantindo sua rastreabilidade durante
todo o processo.
II - Fase Analtica
A) Manual de Procedimentos Operacionais Padro (POP)
O laboratrio de Microbiologia deve elaborar os documentos internos de procedimentos,
seguindo as indicaes de GP2-A4 do CLSI (Clinical Laboratory Technical Procedure Manuals; Approved Guideline - Fourth Edition (2002) e deste documento.
Os POPs devero conter, no mnimo: tcnica, limites de tolerncia, aceitao e rejeio da amostra,
preparo de reagentes, controle de qualidade (CQ), clculos, critrios de liberao de resultados.
Revisar os documentos, anualmente, ou sempre que ocorrer mudanas nos processos descritos.
Disponibilizar as informaes escritas no ambiente de trabalho.
B) Garantia da qualidade tcnica dos colaboradores
Oferecer e documentar capacitao tcnica para as atividades desempenhadas na rotina do
laboratrio de microbiologia.
Manter programa de capacitao para o uso apropriado de equipamentos.
Utilizar equipamentos de proteo individual (EPI) e equipamentos de proteo coletiva
(EPC) e cumprir as normas de biossegurana.
Participar ativamente junto Comisso de Controle de Infeco Hospitalar (CCIH), fornecendo dados epidemiolgicos de diferentes agentes etiolgicos de infeco hospitalar e seus
perfis de sensibilidade.
Armazenar cepas de interesse para estudos.
Os resultados dos procedimentos e testes devem ser conferidos quanto exatido, reprodutibilidade e concordncia com os padres de CQ pelo responsvel designado.
C) Desempenho dos equipamentos e instrumentos
Elaborar e manter um programa de manuteno preventiva e corretiva dos equipamentos.
Manter registro dirio de temperaturas dos equipamentos de banho-maria, estufa, freezer,
geladeira e meio ambiente.
Fazer controle da eficcia do processo de esterilizao das autoclaves (Bacillus stearothermophilus).
Dispor de manual de funcionamento do equipamento em portugus.
Estabelecer cronograma de manuteno preventiva.
Registrar a manuteno preventiva e corretiva dos equipamentos em uso.
Documentar o estado de calibrao dos equipamentos e instrumentos usados nos processos
analticos, como pipetas automticas e pipetadores, termmetros, centrfugas, microscpios,
espectrofotmetros, turbidmetro, balanas analticas, pHmetro, equipamentos analticos, etc.
Documentar a verificao do funcionamento do equipamento.
Documentar a realizao da limpeza dos equipamentos.
Manter e documentar a higienizao peridica de fluxos, cabines de segurana, capelas,
geladeiras, freezer, banho-maria, centrfugas, estufas, etc.
M2 - I -
Documentar a utilizao de cepas de referncia para o CIQ de acordo com as especificaes

do equipamento.
Documentar alertas emitidos pelo equipamento.
Atualizar software a cada mudana, documentando as modificaes.
Definir os limites de aceitabilidade para as inexatides encontradas nas calibraes, verificaes e comparaes entre equipamentos, e garantir a implementao de aes corretivas
para os eventuais desvios.
D) Controle da Qualidade dos Insumos Laboratoriais (CQIL)
D1. Corantes e reagentes
Respeitar as orientaes escritas dos fabricantes para o uso dos reagentes.
Solicitar cpia dos laudos qualitativos junto ao fabricante para cada lote recebido.
Rotular cada produto com: nome, nmero do lote, concentrao, condies de estocagem,
data do preparo, recebimento, quando foi colocado em uso e prazo de validade.
Testar com controles positivos e negativos antes do uso, conforme o tipo de teste.
Se os resultados no forem satisfatrios notificar o fornecedor e o SNVS.
Descartar o produto se o controle no estiver apropriado.
Definir e documentar o grau de pureza da gua reagente utilizada nas anlises, assim como
a forma de obteno e controle dessa gua.
D2. Meios de cultura
Documentar a quantidade de meio preparado no laboratrio, nmero do lote, mtodo de
esterilizao, data do preparo, pH, validade e tcnico responsvel pela preparao.
Realizar e documentar teste de esterilidade e desempenho dos meios preparados no laboratrio, utilizando cepas de referncia, tipo ATCC.
Observar o meio quanto a cor, consistncia, profundidade e/ou superfcie, hemlise, presena
de bolhas e contaminao.
Documentar o nmero do lote e a data de recebimento dos meios comerciais. Solicitar ao fornecedor o certificado de controle de qualidade, conforme recomendaes do CLSI.
Documentar os meios que no estejam de acordo com os padres, as aes corretivas tomadas
e informar ao fornecedor e ao SNVS.
D3. Discos e fitas E-test
Testar os discos ou fitas E-test de antimicrobianos, cartes ou painis com antibiticos,
diariamente, por 20 dias consecutivos, a fim de validar a metodologia. Utilizar cepas de
referncia, tipo ATCC.
Seguir, rigorosamente, as recomendaes do fabricante quanto ao armazenamento dos
discos antimicrobianos.
Documentar os discos de antimicrobianos que no estejam de acordo com os padres CLSI,
as aes corretivas tomadas e informar ao fornecedor e SNVS.
D4. Kits comerciais e anti-soros
Verificar se h registro do kit junto ao ministrio da sade www.anvisa.gov.br
Testar os kits e anti-soros de um novo lote em paralelo com o lote anterior ou com cepas de
referncia, antes de coloc-los em uso. Utilizar controles positivos e negativos, juntamente
com cepas de referncia recomendadas. Documentar os resultados desses testes.
M2 - I -
Seguir as recomendaes do fabricante para o teste do controle da qualidade.

Registrar as informaes contidas no rtulo do Kit para rastreabilidade do processo.
Notificar ao fornecedor e SNVS os desvios de qualidade encontrados.
III - Fase Ps-analtica
Documentar a liberao de resultados, emisso e entrega de laudos.
Garantir a confidencialidade dos resultados dos laudos.
Fornecer aos colaboradores uma avaliao peridica de desempenho do laboratrio no
controle interno, verificando a abrangncia e adequao desses controles.
2.
Cepas de referncia6,7
2.1. Definies6
As cepas de referncia destinam-se verificao dos resultados obtidos, pois suas caractersticas
fenotpicas j so conhecidas, ou seja, sua identificao e seu perfil de sensibilidade j foram determinados.
As cepas de referncia devem possuir uma origem confivel, vindo de um laboratrio de referncia
que realiza testes fenotpicos e moleculares para confirmar sua identificao e perfil de sensibilidade.
Define-se como cultura de estoque o subcultivo das cepas de referncia. Essa cultura armazenada no laboratrio de microbiologia (a -20oC ou menos) e descongelada anualmente.
A cultura de trabalho o subcultivo semanal ou mensal da cultura de estoque e ser mantida
no laboratrio (4oC a 8oC) para realizao dos testes dirios ou semanais de CIQ.
Uma passagem a transferncia do organismo de uma cultura vivel para um novo meio
de cultura com crescimento de microrganismos. A hidratao (ou decongelamento) de uma cepa de
referncia no considerada uma passagem ou repique. A primeira passagem ser o subcultivo da
cepa de referncia para a cultura de estoque. A transferncia do microrganismo da cultura de estoque
para a cultura de trabalho ser a segunda passagem (Figura 1).
Figura 1. Propagao da cultura de Bactrias4
Cepa de referncia
M2 - I -
Cultura de estoque
Cultura de trabalho
1 passagem
2 passagem
2.2. Tabela 1: Indicao de uso das Cepas de Referncia4,5

Microrganismos
Teste indicado
Gram-negativos
E. coli ATCC 25922
- Cepa no produtora de -lactamase.
Qualidade da prova de DD e CIM de

enterobactrias
Qualidade da prova de DD e CIM de
Pseudomonas, Acinetobacter, S. maltophilia e
Burkholderia
Qualidade da prova de DD e CIM de Vibrio colerae
Testes de triagem e confirmatrio de ESBL
Qualidade da prova em testes automatizados de
susceptibilidade em painis de gram negativos
E. coli ATCC 35218

- Cepa produtora de -lactamase
Qualidade da prova de DD e CIM para de

-lactmicos e inibidores de -lactamase
Qualidade da prova de DD e CIM para Amoxacilina
- Ac. clavulnico de Haemophilus spp
VITEK GNS MIC painel QC set
Deve ser mantida a -60 C para prevenir perda

do plasmdeo
Testes automatizados para inibidores de

-lactamase em painis de gram-negativos
E. coli ATCC 51446
Testes automatizados de para ESBL
K. pneumoniae ATCC 13883

identificao de bacilos gram-negativos
K. pneumoniae ATCC 700603

- Cepa produtora de -lactamase de
espectro ampliado
Testes de triagem e teste confirmatrio de ESBL
Deve ser mantida a -60oC para prevenir perda

do plasmdeo
P. aeruginosa ATCC 27853

Sensvel aos agentes anti-pseudomas
Qualidade da prova em testes de diluio em

caldo e diluio em gar de P. aeruginosa e
outros no-enterobacteriaceas
Testes automatizados para verificao da
concentrao de ction e pH com aminoglicosdeos
em painis de gram-negativos
P. mirabilis ATCC 7002

identificao de bacilos gram-negativos
M2 - I -
2.2. Tabela 1: Indicao de uso das Cepas de Referncia4,5

Microrganismos
Teste indicado
Gram-positivos
E. faecalis ATCC 29212
- Sensvel a vancomicina,
ampicilina e altos nveis de
aminoglicosdeos
Adequao do meio para testes de sulfonamidas e

trimetropim, DD e CIM
Qualidade da prova de CIM para Enterococcus spp
Teste de triagem de alto nvel de resistncia aos
aminoglicosdeos e vancomicina
identificao e susceptibilidade de gram-positivos
E. faecalis ATCC 51299

- Resistente a vancomicina e altos
nveis de aminoglicosdeos
Teste de triagem de alto nvel de resistncia aos

aminoglicosdeos e vancomicina
Testes automatizados de susceptibilidade a
vancomicina para gram-positivos
S. aureus ATCC 25923

- Cepa no produtora de -lactamase
Qualidade da prova em testes de DD para

Staphylococcus spp, Enterococcus spp

- Cepa produtora de -lactamase
Qualidade da prova em testes de CIM para

Staphylococcus spp
Teste confirmatrio de susceptibilidade a Oxacilina
identificao e susceptibilidade de gram-positivos

- Resistente a oxacilina
Teste confirmatrio de susceptibilidade a Oxacilina
S. pneumoniae ATCC 49619

- Intermedirio para penicilina
Qualidade da prova de DD da susceptibilidade de S.

pneumoniae ou Streptococcus spp
Leveduras
M2 - I -
C. albicans ATCC 14053

identificao de leveduras
C. parapsilosis ATCC 22019
Qualidade da prova em testes de susceptibilidade por

CIM e DD de fluconazol
C. kruzei ATCC 6258

CIM de leveduras
C. albicans ATCC 90028

DD de fluconazol
C. tropicalis ATCC 750

DD de fluconazol
Captulo 1
Controle da qualidade em testes

de sensibilidade para Bacteriologia
1.
Cepas de referncia
1.1. Manuseio e estocagem
As cepas de referncia tm um nmero mximo de geraes a qual podem ser submetida, so
cinco passagens a partir da cepa de referncia original6. O nmero indefinido de passagens pode comprometer principalmente a pureza da cultura e as caractersticas fenotpicas de algumas bactrias.
Seguindo os procedimentos descritos neste documento e em condies ideais de armazenagem,
a passagem para a produo das culturas de estoque pode ser anual e a passagem das culturas de
trabalho pode ser realizada a cada trs semanas.
Algumas cepas devem ser mantidas em condies especiais devido a suas caractersticas intrnsecas (ex. cepas exigentes).
As cepas de controle da qualidade devem ser testadas usando os mesmos materiais e mtodos
empregados para testes de isolados clnicos.
No caso de armazenamento prolongado, as culturas de referncia devem ser mantidas a temperatura de -20oC, ou menos, (de preferncia a -60oC ou menos, ou em nitrognio lquido)
em meio estabilizador recomendado.
Meios utilizados para a manuteno das cepas de referncia (Figura 2):
Skin milk a 20% (p/v) de leite desnatado em p dissolvido em gua destilada, autoclavar
a 121oC por 20 minutos.
Caldo de soja trptica a 10 - 20% de glicerol (v/v), autoclavar 121oC por 20 minutos.
Sangue de coelho desfibrinado.
OBS: Os criotubos com selo de proteo interna so os mais utilizados para o processo de armazenamento dessas amostras. Os criotubos so preparados com antecedncia, em volumes que
em geral esto em torno de 0,5mL por tubo, e previamente testados quanto esterilidade.
A) Partindo da cepa original liofilizada:

Ressuspender a cepa liofilizada, conforme as recomendaes do fabricante.

Homogenizar o frasco.
Semear em meio de cultura especfico (gar Sangue, MacConkey ou gar Chocolate).
Fazer dois repiques.
Identificar atravs de provas bioqumicas manuais ou automatizadas e colorao de Gram.
Realizar testes de sensibilidade antimicrobianos.
Depois de certificar a identificao e os testes de sensibilidade, armazenar a cepa.
Transferir as colnias recentes de 18 a 24 horas, em 15 frascos estreis (criotubos), para cada

cepa de referncia a ser utilizada no controle.
Etiquetar os frascos com o nome do microrganismo, nmero da cepa de referncia, a data
do armazenamento e o ms a ser utilizado (janeiro a dezembro). Nos outros trs frascos,
colocar a data dos trs anos seguintes para realizar o mesmo procedimento.
Armazenar em freezer 20oC ou 60oC (Figura 2).
M2 - C1 -
Figura 2. Fluxograma para manuseio e estocagem da cepa de referncia
ATCC liofilozada
Hidratar
gar de acordo com

o microrganismo
especfico
1 Repique
Verificar a viabilidade,
pureza das colnias
2 placas de gar
especfico + 1
gar Seletivo
2 Repique
Validao
Identificao e confirmao
Provas Bioqumicas e
Colorao de Gram
Jan.
Fev.
Mar. Abr.
Teste de perfil de
sensibilidade
(Antibiograma)
Mai. Jun. Jul.
Ago. Set.
Armazenar todas
Freezer - 20C ou - 60C
M2 - C1 -
Fazer o banco
2006
2007
2008
Out. Nov. Dez.
B) Partindo da cepa congelada:

Retirar o criotubo com a cepa (ex.: janeiro) do freezer e com o auxlio de uma ala bacteriolgica, semear a amostra ainda congelada em meio especfico.
Incubar a placa por 18 a 24 horas em temperatura e atmosfera recomendadas.
Fazer um segundo repique utilizando duas placas.
Numa das placas, fazer os testes de sensibilidade a antimicrobianos (para a 1 semana).
Na outra placa, semear a cepa em trs tubos de gar Meller Hinton inclinado.
Incubar por 18 a 20 horas em temperatura e atmosfera recomendadas.
Colocar esses tubos na geladeira ( 2 a 8oC) para serem utilizados nos testes de sensibilidade
aos antimicrobianos para a 2a, 3a e 4a semanas do ms, repicar apenas uma vez.
Esse procedimento deve ser realizado para todas as cepas envolvidas no CIQ (Figura 3).
OBS: As culturas congeladas ou liofilizadas devem ser cultivadas duas vezes antes de se
realizar os testes de sensibilidade.
Ateno especial manuteno do organismo (subcultivo mnimo) e seu armazenamento
(ex.- 60oC ou menos) so particularmente importantes para as cepas CIQ E. coli ATCC 35218
e K. pneumoniae ATCC 700603, visto que tem sido documentada a perda espontnea do
plasmdeo que codifica a -lactamase.
Deve-se preparar um novo lote de cultivos se forem obtidos resultados aberrantes.
Figura 3. Fluxograma para manuseio da cepa de referncia no controle da qualidade
Janeiro
1 Repique
2 Repique
gar MH inclinado
O 2 repique para
o uso na 1 semana
2 semana
3 semana
4 semana
Geladeira
M2 - C1 -
2.
Controle de Turbidez para a Preparo do Inculo 7

Para padronizar a densidade do inculo para um teste de sensibilidade, deve-se usar um con-
trole de turbidez de BaSO4, equivalente a uma soluo padro 0,5 de McFarland ou seu equivalente
ptico (ex., suspenso de partculas de ltex). A soluo padro 0,5 de McFarland de BaSO4 pode ser
preparada da seguinte maneira.
Acrescenta-se uma alquota de 0,5mL de BaCl2 0.048 mol/L (1,175% v/v BaCl2 2H2O)
a 99,5mL de H2SO4 0,18mol/L (1% v/v), homogeneizando constantemente para manter
a suspenso.
A densidade correta do controle de turbidez deve ser verificada usando um espectrofotmetro
com fonte de luz de 1-cm e cubeta apropriada para determinar a absorbncia. A absorbncia
da soluo padro 0,5 de McFarland dever variar de 0,08 a 0,10 utilizando um comprimento
de onda de 625 nm.
A suspenso de sulfato de brio deve ser transferida, em alquotas de 4 a 6 mL, para tubos
com tampas de rosca do mesmo tamanho usados para cultivar e diluir o inculo bacteriano.
Esses tubos devem ser selados hermeticamente e armazenados em local escuro, temperatura ambiente.
O controle de turbidez de sulfato de brio deve ser agitado vigorosamente num misturador
mecnico tipo vrtex antes de cada uso, verificando se est uniformemente trbido. No caso
de precipitao visvel, o controle deve ser substitudo. As suspenses de partculas de ltex
devem ser misturadas invertendo-as suavemente, e no num misturador tipo vrtex.
Os controles de sulfato de brio devem ser substitudos, ou suas densidades verificadas,
todo ms.
3.
Mtodo de Disco-Difuso
O mtodo de Kirby-Bauer ou disco-difuso recomendado para algumas combinaes micror-
ganismo/ antimicrobiano e muito utilizado em nosso meio. Sua praticidade, baixo custo e facilidade
operacional facilitam a implantao deste mtodo nos laboratrios de microbiologia clnica.
Alguns fatores relacionados ao preparo do meio de cultura e sua composio podem interferir
no resultado final liberado pelo laboratrio. A confirmao da qualidade, esterilidade e composio
do meio de cultura devem ser avaliadas atravs dos testes de CIQ.
A freqncia dos testes de CIQ deve ser no mnimo mensal. Entretanto, as recomendaes
nacionais e internacionais2,6 preconizam testes semanais. Essas recomendaes devem ser seguidas
se a estrutura ou a capacidade do laboratrio permitir.
A introduo do programa de CIQ inicia-se com a realizao de testes dirios, passando, em
fase posterior, para a realizao mensal dos testes.
Teste dirio - Testar todas as cepas de controle pertinentes durante cinco dias consecutivos
e documentar os resultados.
Para passar a realizao dos testes de diria para mensal nenhuma das cinco leituras de halos,
para cada combinao de agente/antimicrobiano, pode estar fora dos limites aceitveis.
M2 - C1 -
Teste mensal - Testar todas as cepas de CIQ no mnimo mensalmente e sempre que qualquer novo reagente do teste for utilizado (ex.: um novo lote de gar ou meio, um novo lote
de discos ou outro fabricante de insumos).
Documentar a realizao dos testes de controle da qualidade, anotando os nmeros dos lotes,
meios de cultura, reagentes, discos de antibiticos testados nas respectivas datas e ms.
Sempre que algum resultado dos testes mensal de controle da qualidade estiver fora da faixa
aceitvel, faz-se necessrio implantar ao corretiva6.
Sempre que um novo agente antimicrobiano for acrescentado ou houver mudanas importantes no mtodo de leitura dos resultados dos testes, estes devem ser realizados por cinco
dias consecutivos e documentados, antes de se passar para uma freqncia mensal.
3.2. Teste de controle da qualidade dos meios de cultura6
A) Meio de cultura
O meio indicado para os testes de disco-difuso em organismos no fastidiosos o gar MellerHinton (MH).
B) Espessura
A espessura do meio deve ser de 4 mm uniformemente distribuda. Volumes mdios utilizados:
60 a 70 mL / placa de 150 mm e 25 mL / placa de 90 mm.
C) Esterilidade
Aps preparo das placas, examinar uma amostra significativa (10%) e aleatria de cada lote
das placas para confirmar sua esterilidade, mediante sua incubao a 30C - 35C por, pelo
menos, 24 horas.
As placas devem ser usadas at sete dias aps o preparo, a no ser que sejam tomadas precaues
adequadas, como embrulh-las em saco plstico, para minimizar o ressecamento do gar.
D) pH
O pH de cada lote de gar Meller-Hinton deve ser verificado quando o gar preparado.
O meio gar dever ter pH entre 7,2 e 7,4 a temperatura ambiente aps solidificao.
A medida do pH deve ser feita preferencialmente atravs de pHmetro apropriado, submerso
em poro de meio solidificado temperatura ambiente. Caso esteja fora das especificaes,
deve-se checar a procedncia do meio, a qualidade da gua e, eventualmente, preparar novo
lote seguindo estritamente as recomendaes do fabricante6.
Mtodos de verificao de pH (ver CLSI Norma M2-A96 ou norma substituta):
Macerar uma quantidade suficiente de gar para submergir a ponta de um eletrodo do

pHmetro calibrado.
Ou permitir que uma pequena quantidade de gar solidifique-se em torno da ponta de

um eletrodo do pHmetro calibrado.
Ou em um bquer contendo o gar usar um eletrodo de superfcie devidamente calibrado.
E) Efeitos da timidina ou timina

Excesso dessas substncias pode levar a falsas resistncias para sulfa-trimetoprim. Portanto,
deve-se usar meio gar Meller-Hinton com o menor teor possvel de timina ou timidina
M2 - C1 -
O teor de timidina ou timina deve ser testado com Enterococcus faecalis ATCC 29212
com discos de sulfametaxol/trimetoprim. Um meio satisfatrio produzir halos de inibio
ntidos com dimetro 20 mm.
F) Efeitos de Variao nos Ctions Divalentes
As variaes nos ctions divalentes, principalmente magnsio e clcio, afetaro os resultados
dos testes dos aminoglicosdeos e da tetraciclina e variao nos nveis de clcio tambm
afeta os resultados dos testes de daptomicina. Realizar teste de qualidade da prova para
estes agentes antimicrobianos.
G) Armazenamento de Discos Antimicrobianos
Os discos devem ser armazenados conforme indicado a seguir.
Refrigerar os recipientes a temperatura de 8C ou menos, ou congelar a -15C ou mais frio,
num congelador comum (no do tipo frost-free) at o momento de usar.
Os pacotes fechados de discos contendo drogas da classe de -lactmicos devem ser armazenados congelados, com exceo de um pequeno nmero de discos reservados para o trabalho
cotidiano, que pode ser refrigerado (entre +4oC e +8oC) durante, no mximo, uma semana.
Alguns agentes lbeis (ex., combinaes de cido clavulnico, carbapenmicos e cefaclor)
devem ser armazenados congelados at o uso.
Os recipientes fechados de discos devem ser retirados da geladeira ou congelador uma ou
duas horas antes de serem usados, para que se equilibrem em temperatura ambiente antes
de serem abertos.
Aps retirar o cartucho de discos do pacote selado, coloc-lo num dissecador.
Quando se usa um dissecador, este deve ser tampado hermeticamente, acrescentando-se
um dissecante recomendado. Deve-se deixar que a temperatura do dispensador chegue
temperatura ambiente antes de abri-lo. Evitar umidade excessiva, substituindo o dissecante
sempre que o indicador mudar de cor.
Quando no estiver em uso, o dispensador de discos deve ser mantido refrigerado.
Apenas os discos dentro do prazo de validade do fabricante podem ser usados. Os discos
devem ser descartados no vencimento.
Falhas na deteco do padro de resistncia podem estar relacionadas a diversos fatores como:
m qualidade do meio de cultura, disco com baixa concentrao de antimicrobiano, falhas no procedimento, inculo com concentrao de microrganismos fora do preconizado, tempo e temperatura
de incubao inapropriados.
O controle da acurcia dos testes realizados deve ser feito utilizando-se as cepas referncia para
o gnero ou espcie do microrganismo ou classe de antimicrobiano que est sendo testado.
Sero testados os antimicrobianos que fazem parte do antibiograma utilizado na rotina do
laboratrio. Ex. Se o laboratrio testa para Enterococcus spp ampicilina, ciprofloxacina, clorafenicol,
teicoplanina, vancomicina, quinupristin/dalfopristin, estes mesmos antimicrobianos sero testados
com a cepa referncia S. aureus ATCC 25923 (ver abaixo) para avaliar a qualidade da prova realizada,
e os halos encontrados sero comparados com os valores de referncia7.
M2 - C1 -
Os limites aceitveis para os halos encontrados para as cepas de referncias e os diversos antimicrobianos so descritos em CLSI norma M100-S167 ou norma substituta.
A) Condies dos testes de controle da qualidade e cepas de referncia
usadas para monitorar a acurcia dos testes de disco difuso
Enterobactrias
Meio: gar Meller-Hinton
Inculo: Mtodo de crescimento ou suspenso direta das colnias, equivalente a uma soluo
padro 0,5 de McFarland
Incubao: 35oC 2 graus, ar ambiente, de 16 a 18 horas
Cepas referncia: E. coli ATCC 25922 e E. coli ATCC 35218 (para combinaes -lactmicos/inibidor de -lactamase)
Deteco de ESBL em K. pneumoniae, K. oxytoca, E. coli e P. mirabilis
Testes de triagem e confirmatrio de ESBL
padro 0.5 de McFarland.
Cepas de referncia: E. coli ATCC 25922 e K. pneumoniae ATCC 700603
P. aeruginosa
Cepas de referncia: P. aeruginosa ATCC 27853 e E. coli ATCC 25922 e/ou E. coli ATCC
35218 (para combinaes -lactmicos/inibidor de -lactamase)
Acinetobacter spp, S. maltophilia e B. cepacia
Cepas de referncia: P.aeruginosa ATCC 27853 e E. coli ATCC 25922 e/ou E. coli ATCC
35218 (para combinaes -lactmicos/inibidor de -lactamase)
Staphylococcus spp
Inculo: Suspenso direta das colnias, equivalente a uma soluo padro de 0,5 de McFarland.
Incubao: 33 a 35oC, ar ambiente, de 16 a 18 horas; 24 horas para oxacilina, cefoxitina,
meticilina, nafcilina e vancomicina.
M2 - C1 -
Cepas de referncia: S. aureus ATCC 25923, E. coli ATCC 35218 (para combinaes -lactmicos/inibidor de -lactamase), S. aureus ATCC BAA-977 e/ou BAA-976 (teste de induo
clindamicina)
Enterococcus spp
Inculo: Mtodo de crescimento ou suspenso direta das colnias, equivalente a uma
soluo padro 0.5 de McFarland.
Incubao: 35oC 2 graus, ar ambiente, de 16 a 18 horas; 24 horas para vancomicina.
Cepas de referncia: S. aureus ATCC 25923; E. faecalis ATCC 29212 para os testes de deteco de resistncia a altos nveis de aminoglicosdeos.
S. pneumoniae ou Streptococcus spp
Meio: gar Meller-Hinton com 5% de sangue de carneiro
Inculo: Mtodo de suspenso direta das colnias, equivalente a uma soluo padro 0,5
de McFarland.
Incubao: 35oC 2 graus, CO2 a 5%, de 20 a 24 horas.
Cepas de referncia: S. pneumoniae ATCC 49619
Haemophilus influenzae e H. parainfluenzae
Meio: Haemophilus Test Medium ( HTM ) ver CLSI Norma M2-A9
Inculo: Mtodo de suspenso direta das colnias, equivalente a uma soluo padro 0,5
de McFarland
Incubao: 35oC 2 graus, CO2 a 5%, de 16 a 18 horas.
Cepa de Referncia: H. influenzae ATCC 49247, H. influenzae ATCC 49766, E. coli ATCC
35218 (quando testar amoxacilina - cido clavulnico).
4.
Mtodo de Diluio em Caldo ou gar (CIM)

Os testes de diluio em caldo ou em gar so utilizados para a determinao da sensibilidade in
vitro de um microrganismo a um agente antimicrobiano. Por este mtodo se determina a concentrao

inibitria mnima (CIM) de um antimicrobiano, ou seja, a menor concentrao de antimicrobiano que
inibe o crescimento de um microrganismo. Esse mtodo tambm utilizado na confirmao de alguns
perfis de resistncia detectados inicialmente por disco-difuso.
Falhas na deteco do padro de resistncia pelos mtodos dilucionais podem estar relacionadas
a diversos fatores, como: m qualidade do meio de cultura, concentrao de ctions ou pH fora da faixa
recomendada, baixa concentrao de antimicrobiano, soluo estoque de antibitico com concentrao
fora do preconizado, falhas no procedimento tcnico, inculo com concentrao de microrganismos
fora do preconizado, tempo e temperatura de incubao no recomendadas.
Os testes de CIQ avaliam os parmetros crticos para a deteco da resistncia. E devem ser
realizados nas mesmas condies e pelo mesmo pessoal tcnico que realiza os testes de rotina.
M2 - C1 -
4.1. Freqncia dos testes de controle da qualidade 3,6

A freqncia dos testes de CIQ deve ser no mnimo mensal. Entretanto, as recomendaes
nacionais e internacionais2,6 preconizam testes semanais. Essas recomendaes devem ser seguidas
se a estrutura ou a capacidade do laboratrio permitirem.
A introduo do programa de CIQ inicia-se com a realizao de testes dirios, passando, em
fase posterior, para a realizao mensal dos testes.
Teste dirio Testar todas as cepas de controle pertinentes durante cinco dias consecutivos
e documentar os resultados.
Para passar os testes de dirios para mensais nenhuma das cinco leituras de CIM para cada
combinao de microrganismo/antimicrobiano pode estar fora dos limites aceitveis.
Teste mensal Testar todas as cepas de controle no mnimo mensalmente e sempre que
qualquer reagente do teste for utilizado (ex. um novo lote de gar ou meio, um novo lote de
antimicrobianos ou outro fabricante de insumos).
Sempre que algum resultado dos testes mensais de controle de qualidade estiver fora da
faixa aceitvel, faz-se necessrio implantar ao corretiva3
Sempre que um novo agente antimicrobiano for acrescentado ou houver mudanas importantes no mtodo de leitura dos resultados dos testes (ex.converso de leitura visual da CIM
para leitura instrumental ou mudana no tipo de painel usado), estes devem ser realizados por
cinco dias consecutivos e documentados, antes de se passar para uma freqncia mensal.
4.2. Freqncia dos testes de controle de qualidade para testes de triagem
Testes em placas para triagem de resistncia a vancomicina e de resistncia de alto-nvel de
aminoglicosdeos podem ser realizados no mnimo mensalmente, desde que o laboratrio
realize os testes rotineiramente e os critrios de mudana do sistema de teste de dirio para
mensal tenham sido atingidos.
Se o teste de triagem no for realizado rotineiramente (< que uma vez/semana) ou se o agente
antimicrobiano for lbil (ex. ampicilinas, meticilinas, imipenem, cido clavulnico, ceflacor
e cefamandole), ser necessria a realizao de testes de controle de qualidade sempre que
o teste de triagem for realizado em amostras clnicas.
4.3. Testes de controle da qualidade do meio de cultura
4.4. Mtodo de diluio em gar8
Os meios indicados para os testes de diluio em gar so: gar Meller-Hinton ou gar
Meller-Hinton com sangue lisado de cavalo ou sangue desfibrinado de carneiro a 5%.
A) Esterilidade
Aps preparo das placas, examinar uma amostra significativa de cada lote (10%) para confirmar sua esterilidade, mediante sua incubao a 30C-35C, por pelo menos 24 horas.

As placas devem ser usadas at sete dias aps o preparo, a no ser que sejam tomadas
precaues adequadas, como embrulh-las em saco plstico e proteg-las da luz quando
o antimicrobiano fotossensvel.
M2 - C1 -
B) pH
O pH de cada lote de placas de gar Meller-Hinton ou gar Meller-Hinton com sangue
lisado de cavalo ou sangue desfibrinado de carneiro a 5% deve ser verificado quando o
gar for preparado. O meio gar dever ter pH entre 7,2 e 7,4 temperatura ambiente
aps solidificao.
A medida do pH deve ser feita preferencialmente atravs de pHmetro apropriado, submerso
em poro de meio solidificado temperatura ambiente. Caso esteja fora das especificaes,
deve-se checar a procedncia do meio, a qualidade da gua e, eventualmente, preparar novo
lote, seguindo-se estritamente as recomendaes do fabricante.
Mtodos de verificao de pH ver CLSI Norma M7-A7 ou norma substituta.
4.5. Mtodo de diluio em caldo (Microdiluio e Macrodiluio) 8
O meio indicado para os testes de diluio em caldo Meller-Hinton.
A) Esterilidade
Aps preparo do meio, examinar uma amostra significativa e aleatria (10%) de cada lote para
confirmar sua esterilidade, mediante sua incubao a 30C-35C por, pelo menos, 24 horas.
B) pH
O pH de cada lote de caldo Meller-Hinton deve ser verificado quando o meio for preparado.
O meio dever ter pH entre 7,2 e 7,4 temperatura ambiente.
C) Efeitos da timidina ou timina
Para determinar a adequao do meio para testes de sulfonamida e trimetropim, os testes
de CIM podem ser realizados com E. faecalis ATCC 29212. Os pontos finais devem ser de
fcil leitura (com uma reduo de 80% ou mais no crescimento, quando comparado com o
controle). Se a CIM para trimetoprim-sulfametoxadol for 0,5/0,95g/mL, o meio poder
ser considerado apropriado para uso.
Os testes dilucionais para monitorar a acurcia dos resultados devem ser realizados com os
antimicrobianos que fazem parte do antibiograma liberado pelo laboratrio. Para cada gnero ou
espcie de bactrias ou classe de antimicrobiano so recomendadas cepas de referncia especficas.
Os limites aceitveis para as concentraes CIM (g/mL) definidos para as cepas de referncias
e os diversos antimicrobianos so descritos em CLSI norma M100-S16 ou norma substituta.
4.6. Testes de qualidade da prova e do perfil de sensibilidade
A) Condies dos testes e cepas de controle de qualidade usadas para monitorar a acurcia dos testes de
CIM (g/mL).
Enterobactrias
Meio
M2 - C1 - 10
Diluio em caldo: Caldo Meller-Hinton ajustado com ctions
Diluio em gar: gar Meller-Hinton
Cepas de referncia: E. coli ATCC 25922, E. coli ATCC 35218 (para combinaes -lactmicos/inibidor de -lactamase)
Deteco de ESBL em K. pneumoniae, K. oxytoca, E. coli e P. mirabilis
Testes de triagem de ESBL K. pneumoniae, K. oxytoca, E. coli
Meio: Diluio em caldo: Caldo Meller-Hinton ajustado com ctions
Concentrao de Antimicrobianos:
Cefpodoxima 4g/mL ou
Ceftazidima 1g/mL ou
Aztreonam 1g/mL ou
Cefotaxima 1g/mL ou
Ceftriazona 1g/mL
Cepas de referncia: E. coli ATCC 25922, K. pneumoniae ATCC 700603
Testes de triagem de ESBL P. mirabilis
Cefpodoxima 1g/mL ou
Ceftazidima 1g/mL ou
Cefotaxima 1g/mL ou
Teste confirmatrio de ESBL
Ceftazidima 0,25 - 128g/mL
Ceftazidima/cido clavulanico 0,25/4 - 128/4g/mL
Cefotaxima 0,25 - 64g/mL
Cefotaxima/cido clavulanico 0,25/4 - 64/4g/mL
M2 - C1 - 11
P. aeruginosa e outros no-enterobacteriaceas (inclue Pseudomonas spp., e outros bacilos grannegativos no fastidiosos e no fermentadores exceto B. cepacia, B. mallei, B. pseudomallei, S.
maltophilia e Acinetobacter spp.)
Meio

Cepas de referncia: P. aeruginosa ATCC 27853; E. coli ATCC 25922, E. coli ATCC 35218
(para combinaes -lactmicos/inibidor de -lactamase)
Acinetobacter spp., Burkodelia cepacia, S. maltophilia
Meio
Cepas de referncia: P. aeruginosa ATCC 27853; E. coli ATCC 25922, E. coli ATCC 35218
(para combinaes -lactmicos/inibidor de -lactamase)
Staphylococcus spp.
Meio
Diluio em caldo: Caldo Meller-Hinton ajustado com ctions + NaCl a 2% para oxacilina, meticilina e nafcilina; Caldo Meller-Hinton ajustado com ctions suplementado
com 50g/mL de clcio para daptomicina.
Diluio em gar: gar Meller-Hinton, gar Meller-Hinton +NaCl a 2% para

oxacilina, meticilina e nafcilina. Diluio em gar no recomendada atualmente
para daptomicina.
Inculo: Mtodo de suspenso direta das colnias, equivalente a uma soluo padro 0.5
de McFarland.
Incubao: 33 - 35oC, ar ambiente, de 16 a 20 horas, 24 horas para oxacilina, meticilina,
nafcilina e vancomicina
Cepas de referncia: S. aureus ATCC 29213; E. coli ATCC 35218 (para combinaes -lactmicos/inibidor de -lactamase); S. aureus ATCC BAA-977 e/ou BAA-976 (teste de induo
clindamicina)
Teste de triagem com gar Oxacilina NaCl para S. aureus
Meio: Diluio em gar: gar Meller-Hinton + NaCl a 4% m/v e 6g/mL de oxacilina.
de McFarland.
Incubao: 35oC, ar ambiente, 24 horas.
Cepas de referncia: E. faecalis ATCC 29212 sensvel, E. faecalis ATCC 51299 - resistente.
M2 - C1 - 12
Teste de triagem com gar Vancomicina para S. aureus

Meio: Diluio em gar: gar BHI e 6g/mL de vancomicina.
de McFarland.
Cepas de referncia: S. aureus ATCC 29213 sensvel, S. aureus ATCC 43300 - resistente
Enterococcus spp.
Meio
Diluio em caldo: Caldo Meller-Hinton ajustado com ctions ou Caldo MellerHinton ajustado com ctions suplementado com 50g/mL de clcio para daptomicina.
Diluio em gar: gar Meller-Hinton. Diluio em gar no recomendada atualmente para daptomicina.
Inculo: Mtodo de crescimento e suspenso direta das colnias, equivalente a uma soluo
Incubao: 35oC 2 graus ar ambiente, de 16 a 20 horas, 24 horas para vancomicina.
Cepas de referncia: E. faecalis ATCC 29212
Teste de triagem para alto nvel de resistncia a aminoglicosdeos e resistncia a vancomicina para
Enterococcus spp. Tabela 2D M100-S16
Meio
Diluio em gar: gar BHI

Antimicrobianos:
6g/mL de vancomicina ou
2000g/mL de estreptomicina ou
500g/mL de gentamicina.
Diluio em caldo: meio BHI

Antimicrobianos:

1000g/mL de estreptomicina ou
500g/mL de gentamicina.
gar: colocar 10 L da suspenso 0,5 de McFarland na superfcie da placa

Cepas de referncia: E. faecalis ATCC 29212 - sensvel, E. faecalis ATCC 51299 - resistente.
M2 - C1 - 13
Captulo 2
Controle da qualidade em testes

de sensibilidade para Leveduras
O CIQ tem como objetivo monitorar os seguintes aspectos:
preciso (repetitividade) e acurcia (exatido) dos resultados obtidos nos testes de sensibilidade;
desempenho dos reagentes utilizados nos testes; e
desempenho dos tcnicos que executam os testes e realizam a leitura dos resultados.
Esse objetivo mais facilmente atingido, com uso de cepas de referncia que tm sua sensibilidade aos antifngicos pr-determinada. No entanto, isso no dispensa a adoo de outras medidas
que melhoram a qualidade dos resultados.
1.
Cepas de Referncia9,10
1.1. Cepas recomendadas para testes de CIM de 48 horas por diluio em caldo
Faixa de leitura CIM: Ver tabela 4- M27-A2 ou norma substituta.
Candida parapsilosis ATCC 22019.
Candida krusei ATCC 6258.
1.2. Cepas recomendadas para testes de CIM de 24 e 48 horas por microdiluio em caldo
Faixa de leitura CIM: Ver tabela 5- M27-A2 ou norma substituta.
Candida parapsilosis ATCC 22019.
Candida krusei ATCC 6258.
1.3. Cepas Recomendadas para Disco-Difuso
Candida parapsilosis ATCC 22019 Intervalo de valores do halo de inibio (dimetro em
mm), esperado em testes com discos de fluconazol (25 mg) - 22-33mm.

Candida albicans ATCC 90028 Intervalo de valores do halo de inibio (dimetro em mm),
esperado em testes com discos de fluconazol (25 mg) - 28-39 mm.
Candida tropicalis ATCC 750 Intervalo de valores do halo de inibio (dimetro em mm),
esperado em testes com discos de fluconazol (25 mg)- 26-37mm.
2.
Manuseio e estocagem das cepas de referncia

2.1. Preparo das cepas de referncia para armazenamento
As suspenses-padro, preparadas de acordo com o procedimento delineado a seguir, podem
ser mantidas indefinidamente, sem risco significativo de alterao nos perfis de sensibilidade
ao agente antifngico.
Para preparar as cepas para armazenamento, deve-se obedecer ao procedimento abaixo:
M2 - C2 -
Cultivar os organismos em placas de Petri, durante uma noite, em gar Sabouraud-dextrose, ou em gar batata-dextrose, ou gar enriquecido com digerido de
soja-casena.
Selecionar vrias colnias e realizar testes de sensibilidade apropriados, para demonstrar resultados esperados de sensibilidade, halo de inibio no mtodo de
disco-difuso ou CIM na macrodiluio ou microdiluio (ver item anterior para
halos de referncia ou Tabelas 4 e 5 do doc. M27A2 ou norma substituta para valores
esperados de CIM).
Realizar uma subcultura das cepas, que produziram os resultados esperados, no mesmo
meio usado para a cultura primria e incubar para que ocorra crescimento suficiente
(em geral, de um a trs dias).
Examinar, com cuidado, a morfologia e cor das colnias para se certificar da pureza da
cultura.
Suspender as colnias na soluo estabilizante de glicerol a 50%, at fazer suspenso

densa ou, se estiver liofilizado, suspender no meio apropriado.
Distribuir pequenos volumes (uma ou duas gotas) da suspenso turva em recipientes

estreis recomendados para congelamento.
Colocar esses recipientes em freezer (preferencialmente 60oC ou -20oC ) ou em nitrognio lquido.
Quando o estoque de recipientes estiver praticamente exaurido, repete-se o processo

para produzir um novo estoque.
2.2. Armazenamento das cepas de referncia

Para o armazenamento prolongado das cepas de referncia. As leveduras devem ser cultivadas em gar batata-dextrose e depois congeladas a -70oC. Alternativamente, as cepas
de referncia (no Criptococcus) podem ser cultivadas suspendendo as clulas fngicas em
soluo de glicerol a 50% em pequenos frascos e armazenados a -70oC.
Para armazenamento de curto prazo, as culturas-padro de trabalho, ou seja, de uso rotineiro
nos testes, devem ser cultivadas a 35C (+ 2C) em tubos de gar-Sabouraud ou gar sangue,
em tubos inclinados, at se observar crescimento suficiente, sendo depois armazenadas
temperatura de 2 a 8oC, enquanto no so utilizadas nos testes.
2.3. Manuseio das cepas de referncia nos Testes de Rotina

Todas as culturas usadas em testes de sensibilidade a antifngicos devem ser semeadas em
meio isentos de antibiticos, antes de serem submetidas s anlises.
As cepas de controle de qualidade devem ser testadas usando os mesmos materiais e mtodos
empregados para testes de isolados clnicos.
Para o uso das cepas de referncia nos testes de rotina, necessrio realizar os seguintes
procedimentos:
Retirar o recipiente da cultura do freezer ou frasco liofilizado.
Deixar descongelar a suspenso congelada ou reidratar a cultura liofilizada.
M2 - C2 -
Realizar uma subcultura, bem distribuda, em placa de Petri, contendo gar batata-dextrose
e incub-la a 35 C (+ 2C) durante 24 horas.
Retirar quatro ou cinco colnias, realizar subcultura em gar Sabouraud-dextrose ou gar
batata-dextrose e, aps 24h, realizar testes de sensibilidade.
As cepas-padro, aps seu crescimento a 35C (+ 2C) por 24 horas em gar-batata-dextrose,
devem ser mantidas em geladeira, sob temperatura entre 2 a 8C, como cultura-padro
de trabalho para uso na rotina. Essas culturas devem ser substitudas de duas em duas
semanas, pelo menos, por outras do estoque congelado.
Realizar sempre os testes de sensibilidade das colnias cultivadas durante uma noite.
Os repiques das culturas de trabalho so preparados a cada duas semanas pelo mtodo de
transferncia seriada.
A cada trs repiques da cultura de trabalho, deve-se descongelar uma nova amostra para
uso em testes de rotina, para diminuir o risco de contaminao.
Deve-se obter uma cultura de trabalho nova sempre que ocorrerem resultados aberrantes.
3.
Freqncia dos Testes de Controle da Qualidade

3.1. Intervalos de CIM
As Tabelas 4 e 5 (CLSI M27-A2 ou norma substituta) apresentam os intervalos de preciso dos
valores de CIM para um nico teste de controle.

Em geral, um dentre 20 valores de CIM, em srie de 20 testes consecutivos, pode estar fora
do controle (i.e., fora da faixa definida), devido s variaes aleatrias do teste. Dois resultados consecutivos, com valores fora do esperado ou mais de dois resultados fora do esperado em 20 testes
de controle consecutivos, exigem medidas corretivas. Toda vez que se tomar medidas corretivas, a
contagem de 20 testes consecutivos recomea.
OBS.: No confundir esse procedimento com o procedimento para estabelecer o desempenho
satisfatrio dos testes de CIM visando realizao de testes de controle da qualidade mensais, ao
invs de dirios.
3.2. Testes de sensibilidade a antifngicos
Para monitorar o desempenho geral dos procedimentos para testes, recomenda-se incluir cepas
de referncia apropriadas, todo dia que o teste for realizado.
Esse procedimento apenas para estabelecer o desempenho satisfatrio dos testes de CIM e
disco-difuso, com a finalidade de realizar testes de controle da qualidade mensais, ao invs de dirios. Esse procedimento no deve ser confundido com os passos que devem ser seguidos para tomar
as medidas de correo.
A freqncia do monitoramento dos testes pode ser diminuda se o laboratrio puder documentar desempenho satisfatrio com testes de controle dirios. Para esse fim, define-se desempenho
satisfatrio da seguinte maneira:
documentao que comprove que todas as cepas de referncia foram testadas durante cinco
dias consecutivos de testes; e
M2 - C2 -
para cada combinao droga-microrganismo, nenhum dos cinco valores de CIM (i.e., valores
de CIM obtidos para uma combinao droga-microrganismo durante cinco dias consecutivos de testes) ou dimetros dos halos de inibio podem estar fora do intervalo de acurcia
definidos nas Tabelas 4 e 5 em CLSI M27-A2 ou norma substituta e item cepas de referncia
para leveduras.
Quando essas condies forem cumpridas, ser preciso testar cada cepa de referncia pelo menos
uma vez por ms2,6 e sempre que qualquer reagente ou artigo plstico for mudado.
Sempre que for constatado um valor de CIM ou dimetro de halo fora do intervalo de acurcia,
usando o sistema de monitoramento mensal, ser necessrio recomear e manter os testes de controle dirios enquanto no se definir qual a fonte de erro para o resultado aberrante e a resoluo
do problema no tiver sido documentada da seguinte maneira:
realizar os testes com cepas de referncia apropriadas durante cinco dias consecutivos;
para cada combinao droga-microrganismo, os cinco valores de CIM (ex., valores de
CIM obtidos para uma combinao droga-microrganismo durante cinco dias consecutivos
de testes) devem se manter dentro do intervalo de acurcia definidos nas Tabelas 4 e 5
(CLSI M27-A2);
se a soluo do problema no puder ser documentada (ex., pelo menos um dos cinco valores
de CIM ou dimetro do halo de inibio estiver fora do intervalo de acurcia) ser necessrio
continuar os testes dirios de controle da qualidade;
o retorno adoo de testes mensais exige documentao do desempenho satisfatrio durante cinco dias consecutivos, conforme j descrito;
no caso de algumas drogas, os testes de controle de qualidade devem ser efetuados com
freqncia maior do que uma vez por ms, devido degradao relativamente rpida
da droga.
4. Testes de controle da qualidade do

meio de cultura e Artigos de Plstico9
Para controle de lotes de meio de cultura e de artigos plsticos, o procedimento pode ser dividido nos passos abaixo.
Testar cada novo lote de meio usado em tubos de macrodiluio, ou lote de placas de microdiluio, usando uma das cepas-controle da qualidade relacionadas na Tabela 4 CLSI
M27-A2 ou norma substituta para determinar se os valores de CIM esto dentro do intervalo
esperado; caso contrrio, rejeitar o lote.
Pelo menos um tubo de cada lote deve ser incubado, sem inocular, durante o mesmo perodo
necessrio para realizar o teste, de maneira a se verificar a esterilidade do meio.
Os lotes novos do meio RPMI-1640 devem ser testados para verificar se seu desempenho
ser aceitvel, antes de us-los em testes de isolados clnicos, visto que estudos recentes
demonstram que alguns lotes no tm desempenho apropriado. O pH do meio RPMI-1640
pode variar de 6,9 a 7,1 e o pH do meio Meller-Hinton deve ficar entre 7,2 e 7,4.
Registrar os nmeros de lote de todos os materiais e reagentes usados nesses testes.
M2 - C2 -
5. Outros Testes de Controle utilizados

na macrodiluio e microdiluio
5.1. Controle do Crescimento
Cada srie de tubos na macrodiluio deve incluir um controle de crescimento do meio RPMI
1640, sem agente antifngico, para avaliar a viabilidade das leveduras em teste. Na microdiluio
uma coluna da placa de micro titulao destinada a esse controle. Em testes de caldo, o controle do
crescimento tambm serve como controle da turbidez para a leitura dos pontos finais de reao.
5.2. Controle de Pureza
Uma alquota de cada inculo deve ser colocada numa placa de gar Sabouraud-dextrose e incubada temperatura de 35C + 2C at haver crescimento suficiente para detectar possveis culturas
mistas e prover novas colnias isoladas para o caso de se tornar necessrio repetio do teste.
5.3. Controle da Leitura dos Pontos Finais da Reao
A leitura dos pontos finais da reao deve ser monitorada, periodicamente, para minimizar possveis variaes nos resultados de testes de CIM, realizados por diferentes observadores. Todo pessoal
de laboratrio que realiza esses testes dever ler, separadamente, um conjunto selecionado de testes de
diluio. Os resultados devem ser registrados e comparados com os resultados obtidos por um tcnico
experiente. As cepas de referncia, com valores de CIM pr-determinados, so particularmente teis para
essa finalidade, especialmente, em testes com fluconazol, em que pode ocorrer o fenmeno de trailing.
6.
Teste da qualidade da prova e do perfil de sensibilidade

A) Condies dos testes e cepas de controle da qualidade usadas para monitorar a acurcia dos testes de CIM (g/mL)
Meio: Diluio em caldo: Meio RPMI -1640 (com glutamina, sem bicarbonato e com indicador vermelho fenol) pH 7,0 0,1.
Inculo: As diferentes operaes de preparo do inculo so as abaixo.
Deve-se realizar a subcultura (repique) dos organismos, em tubos estreis com gar
Sabouraud dextrose ou gar batata-dextrose, executando passagens para assegurar sua
pureza e viabilidade.
O inculo deve ser preparado escolhendo-se cinco colnias com dimetro de ~1mm de
cultura de 24 horas para espcies de As colnias devem ser suspensas em 5mL de soluo
salina estril 0,145 mol/L (8,5g/L NaCl; salina a 0,85%).
A suspenso resultante deve ser colocada em agitador de vrtex durante 15 segundos e a densidade celular, ajustada com espectrofotmetro, acrescentando-se soluo salina suficiente
para obter a transmitncia equivalente de uma soluo-padro da escala 0,5 de McFarland
em comprimento de onda de 530nm. Esse procedimento fornece uma suspenso-padro de
levedura contendo 1 x 106 a 5 x 106 clulas por mL A suspenso de trabalho produzida fazendo-se uma diluio 1:100 seguida de uma diluio de 1:20 da suspenso-padro com meio
lquido RPMI 1640, resultando em concentrao de 5,0 x 102 a 2,5 x 103 clulas por mL.
Incubao: A temperatura de incubao deve permanecer em 35 C.
M2 - C2 -
Captulo 3
Controle da qualidade em testes de sensibilidade

realizado por Mtodos Automatizados8
1. Elementos essenciais do sistema de gesto da qualidade
1.1. Fase pr-analtica
A) Representante/empresa responsvel pelo equipamento
Manual de funcionamento do equipamento no idioma do pas.
Registro nacional e certificado de funcionamento in situ do equipamento e de qualidade dos
lotes dos reagentes.
Plano de manuteno preventiva e corretiva do equipamento.
Programa de capacitao para o uso apropriado do equipamento.
Fornecimento de cepas ATCC para o controle interno de qualidade de acordo com as especificaes do equipamento.
Atualizao do software a cada mudana.
Comunicao escrita dos problemas registrados que impliquem em mudana da qualidade
dos resultados.
B) Usurio
Manual de procedimento do laboratrio para o uso do sistema automatizado.
Capacitao de pessoal no uso do equipamento.
Programa de manuteno preventiva e corretiva do equipamento.
Notificao, autoridade competente, de forma escrita, dos problemas registrados que
impliquem em mudanas na qualidade dos resultados obtidos.
1.2. Controle Interno do laboratrio

A) Controle de temperatura
Registro dirio da temperatura ambiental.
Registro dirio da temperatura interna do equipamento.
Registro de alertas do equipamento.
Registro das medidas corretivas tomadas.
B) Preparo e padronizao do inculo
Se for utilizado turbidimetro, deve-se calibrar e registrar diariamente transmitncia.
Definir e registrar a forma e a freqncia do controle de esterilidade da soluo de trabalho.
1.3. Controle da qualidade dos processos automatizados
A) Lista de cepas de referncia recomendadas para testes de identificao
Recomenda-se testar no mnimo uma cepa de referncia por painel.
M2 - C3 -
Para painis de Gram negativos:

E. coli 25922 (qualidade da prova).
P. mirabilis 7002 (qualidade da prova de identificao de bacilos Gram-).
K. pneumoniae 13883 (qualidade da prova de identificao de bacilos Gram-).
Para painis de Gram positivos:
S. aureus 29213 (qualidade da prova de identificao de bacilos Gram+).
E. faecalis 29212 (qualidade da prova de identificao de bacilos Gram+).
Para painis de Levaduras:
C. albicans 14053 (qualidade da prova de identificao de levaduras).
B) Lista de cepas de referncia recomendadas para testes de sensibilidade
Para painis de Gram negativos:
E. coli 25922 (qualidade da prova).
E. coli 35218 (para inibidores de lactamase).
E. coli 51446 (ESBL).
P. aeruginosa 27853 (concentrao de ctions e pH com aminoglicosdeos).
E. faecalis 29212 (quantidade de timina-timidina com SXT).
Para painis de Gram positivos:
S. aureus 29213 (qualidade da prova).
E. faecalis 29212 (quantidade de timina-timidina com SXT).
E. faecalis 51299 (resistncia a vancomicina).
E. coli 35218 (para inibidores de lactamase).
1.4. Validao
A) Protocolo de controle da qualidade dirio
Prova diria por 5 dias
Sem erro, seguir com o controle peridico.
1 de cada 5 ensaios apresentarem erro, tomar aes corretivas:
erro bvio6: testar novamente no mesmo dia e, se o resultado for o esperado, continuar
com as provas diria.
erro no bvio6: testar novamente no mesmo dia e controlar por cinco dias consecutivos.
Se todos os resultados estiverem dentro do esperado, passar ao controle mensal.
B) Protocolo de controle da qualidade peridico

Recomenda-se realizar os controles a cada ms, utilizando as listas de cepas de referncia acima mencionadas. Tambm deve ser realizado um controle a cada troca de
lote do painel.
Se os testes mensais apresentarem erros, tomar aes corretivas e retornar aos testes
de CIQ dirios.
M2 - C3 -
Referncias Bibliogrficas
1.
WHO. Blood Safety and Clinical Technology Guidelines on Standard Operating Procedures for
MICROBIOLOGY. http://w3.whosea.org/EN/Section10/Section17/Section53/Section482_
1790.htm
2.
Manual de Microbiologia Clnica para o Controle de Infeco em Servios de Sade. http://www.

anvisa.gov.br/servicosaude/manuais/index.htm
3.
Oplustil, CP et al. Procedimentos Bsicos em Microbiologia Clnica. So Paulo: SARVIER, 2004.
4.
Reference Strains: How many passages are too many? Technical bulletin ATCC n 6. ATCC
Connection 23(2):6-7,2003
5.
Ivonne D. Rankin. Aseguramiento de Calidad/Control de Calidad (AC/CC) 65. In: Manual de

Pruebas de Susceptibilidad Antimicrobiana. Editora Coordinadora Marie B. Coyle American
Society for Microbiology - Organizacion Panamericana de la Salude. 2005
6.
NCCLS/CLSI - Padronizao dos Testes de Sensibilidade a Antimicrobianos por Discodifuso: Norma Aprovada Nona Edio. Documento M2-A9 Vol.26 N 1. Substitui a Norma
M2-A8. Vol. 23 N 1
7.
NCCLS/CLSI - Normas de Desempenho para Testes de Sensibilidade Antimicrobiana: 16o

Suplemento Informativo. Documento M100S16. Vol. 26 N 3 - Substitui a Norma M100-S15
Vol. 25 N 1.
8.
NCCLS/CLSI - Metodologia dos Testes de Sensibilidade a Agentes Antimicrobianos por Diluio

para Bactria de Crescimento Aerbico: Norma Aprovada Sexta Edio. Documento M7A7.
Vol. 26 N 2. Substitui a Norma M7-A6 Vol. 23 N 2.
9.
NCCLS/CLSI - Mtodo de Referncia para Testes de Diluio em Caldo para Determinao da

Sensibilidade de Leveduras Terapia Antifngica: Norma Aprovada Segunda Edio. Documento M27-A2 Vol. 22 N 15 Substitui a Norma M27-A. Vol. 17 N 9
10.
NCCLS/CLSI - Method for Antifungal Disk Diffusion Susceptibility Testing of Yeasts; Approved
Guideline. NCCLS document M44-A Volume 24 Number 15.
11.
Programa de Acreditao de Laboratrios Clnicos PALC. Lista de requisitos PALC. Sociedade

Brasileira de Patologia Clnica/ Medicina Laboratorial (SBPC/ML), 2004. http://www.sbpc.
org.br/files/pdf/Requisitos_PALC_versao2004.pdf
12.
Relatrio final de Comit de Expertos en la evaluacin del desempeo para la identificacin bacteriana
y antibiograma con mtodos automatizados Brasilia, Brasil. 26 -28 octubre 2004. Vol. 23 N 1
13.
Reimer, LG and Carrol, K.C. Procedures for Storage of Microorganisms. In: Manual of Clinical
Microbiology, cap.7, 67-73, 8 edio, 2003.
M2 - RB -
ANEXOS
Anexo I: Procedimentos utilizados para manuteno
e estocagem de microrganismos
Microrganismos
Mtodos de
estocagem
Crio
conservante
Temperatura
de Estocagem
Viabilidade
Fungo filamentoso
Subcultivo
------
4 a 25C
2 a 10 anos
leo mineral
------
ambiente
1 a 40 anos
Seco
Terra ou silica gel
ambiente
1 a 4 anos
Freezer
Glicerol e DMSO1
- 70C -196C
2 a 30 anos
gua
destilada
------
ambiente
1 a 10 anos
Liofilizado
Skim milk,
glicerol, sacarose
e DMSO1
4C
2 a 30 anos
gua
destilada
-----
ambiente
1 a 2 anos
Seco
Meio nutriente
ambiente
1 a 2 anos
Agar batata
dextrose
------
- 70C
Freezer
Glicerol ou
DMSO1 ou sangue
+ nutriente
- 70C -196C
Congelador
Sangue, caldo
nutriente +
DMSO1
- 20C 40C
Subcultivo
nutriente
4C
6 meses
Freezer
SPGA2
- 70C -196C
1 a 30 anos
Liofilizado
SPGA2
4C
6 a 10 anos
Subcultivo
--------
ambiente
2 a 3 meses
leo mineral
-------
4C
6 meses
a 2 anos
Congelador
Sucrose, TSB3 +
glicerol
- 20C
1 a 3 anos
Freezer
Skim milk,
sucrose,TSB3 +
glicerol
- 70C a -196C
1 a 30 anos
Liofilizado
Skim milk,
sucrose
4C
30 anos
Leveduras
Protozorios
Vrus
Bactrias Gram
Positivas
M2 - A -
Microrganismos
Mtodos de
estocagem
Crio
conservante
Temperatura
de Estocagem
Viabilidade
Estreptococos
Congelador
Skim milk, sangue

de coelho
- 20C
90 dias
Freezer
Skim milk, sangue

de coelho
- 70C a -196C
90 dias a 1 ano
Liofilizado
Skim milk, sangue

de coelho
4C
6meses
a 30 anos
Subcultivo
-------
ambiente
1 a 3 meses
leo mineral
-------
4C
1 a 2 anos
Congelador
Sucrose,lactose
- 20C
1a 2 anos
Freezer
Lactose, sucrose,
TSB3 + glicerol ou
Skim milk
- 70C a -196C
2 a 30 anos
Liofilizado
Skim milk +
sucrose + lactose
4C
30 anos
Subcultivo
-------
ambiente
2 meses
a 1 ano
leo mineral
------
4C
1 ano
Seco
-------
ambiente
1 a 2 anos
Congelador
glicose
- 20C
1 a 2 anos
Freezer
Skim milk, glicose
- 70C a -196C
2 a 30 anos
Liofilizado
Skim milk +
lactose
4C
30 anos
Congelador
Skim milk
- 20C
3 a 5 anos
Freezer
Skim milk
- 70C a -196C
3 a 5 anos
Liofilizado
Skim milk
4C
16 a 30 anos
Bactrias Gram
Negativas
Bactrias
formadoras de
esporos
Micobactrias
Adaptada de: Reimer, LG and Carrol, K.C. Procedures

for Storage of Microorganisms. In: Manual of Clinical
Microbiology, cap.7, 67-73, 8edio.,2003
1
2
M2 - A -
MSDS - dimetil-sulfxido
SPGA - sucrose fosfato glutamato contendo 1% de
albumina bovina.
TSB - caldo de soja trptica
Anexo II: Planilhas para controle interno da qualidade
(Nome do Laboratrio e Logomarca)

REGISTRO DA CALIBRAO DE PIPETAS E MICROPIPETAS
Marca:.......................................................................
Volume:......................................................
Agente calibrador:
Prprio Laboratrio
Terceirizado
Fabricante
Metodologia:
Espectrofotometria
Gravimetria
Verificao por comparao
REGISTRO
DATA
DADOS
VALOR OBTIDO
CERTIFICADO N.
CONFORMIDADE
SIM
NO
Informao: Especificao da exatido, de acordo com a ASTM.

Capacidade nominal (L)
Variabilidade (+/- L)
0,5 a 2,0
0,006
3,0 a 5,0
0,01
10
0,02
20
0,03
50
0,05
100
0,08
Obs.: Para verificao de pipetas no prprio Laboratrio, h necessidade de equipamento prprio ou

outra calibrada, para comparao espectrofotomtrica.
Data:........./........../............
________________________________________
Assinatura/ Visto do Diretor do Laboratrio
M2 - A -

REGISTRO DA CALIBRAO DE REFRATMETRO OU DENSMETRO
Refratmetro:
Densmetro:
Marca:........................................................................................
Freqncia da verificao: Semanal

Fase preliminar: Acertar a D=1,000 com gua reagente tipo I ou II.

Amostra-controle: Soluo de NaCl a 3 % = 1,015
Amostra-controle: Soluo de NaCl a 5 % = 1,022
Amostra-controle: Soluo de Sacarose a 9 % = 1,034
Critrio de aceitabilidade: +/- 0,010
REGISTRO
Parmetros
DATA
VALOR OBTIDO
Conformidade
ASSINATURA
SIM
Data:........./........../............
________________________________________
M2 - A -
NO

REGISTRO DA ESTERILIDADE DOS MEIOS DE CULTURA
Meio de cultura: .........................................
Fabricante: ......................................
Lote:..................
Critrio de Aceitabilidade: Estril
REGISTRO
DATA DA
PREPARAO
Crescimento bacteriano
SIM
NO
DATA DA
LIBERAO
ASSINATURA
Data:........./........../............
________________________________________
M2 - A -

REGISTRO DO CONTROLE INTERNO DA GUA REAGENTE
gua obtida por:
Destilao
Deionizao
Outro processo (citar): .........................................................................................
Periodicidade:
Diria
Semanal
Osmose reversa
Mensal
Marca do condutivmetro: .......................................................................................................................

Critrio de aceitabilidade: Dentro das especificaes da gua reagente
Temperatura da medio: ............ C
REGISTRO
Data
Valor obtido*
Conformidade
Sim No
Tipo de gua
Reagente
I;
II;
III
I;
II;
III
I;
II;
III
I;
II;
III
I;
II;
III
I;
II;
III
I;
II;
III
I;
II;
III
I;
II;
III
I;
II;
III
I;
II;
III
I;
II;
III
I;
II;
III
I;
II;
III
I;
II;
III
I;
II;
III
Assinatura
Obs:
1. Quando o Condutivmetro permitir, assinalar o valor obtido em mmho, na coluna*.
2. Quando o Condutivmetro possuir apenas indicador luminoso, indicar nas colunas de
conformidade, se a gua Reagente est conforme ou no-conforme.
Data:........./........../............
________________________________________
M2 - A -

REGISTRO DO CONTROLE DA QUALIDADE DOS CORANTES
Corante:
GRAM
ZIEHL OU SIMILAR
OUTRO (Citar): ...............................................
Lote: ..............................................
Critrio de aceitabilidade: Colorao das bactrias de acordo com sua classificao
REGISTRO
Data
Conforme
No-conforme
Assinatura
Data:........./........../............
________________________________________
M2 - A -

REGISTRO DO CONTROLE DA TEMPERATURA
Banho Maria a .........C
Estufa a .........C
Equipamento automatizado a ...........C
Nmero: ....................................................................
Ms: ...........................................................
Localizao: ...............................................................
Ano: ...........................................................
REGISTRO
(descrever faixa aceitvel de temperatura ex.: 33 35C)
Data
Hora
Tcnico
35C
36C
37C
38C
Manuteno especial:
1.
Limpeza/Troca de gua
2.
Comprovao da temperatura com termmetro externo
3.
Outros procedimentos compatveis:..............................................
Data:........./........../............
________________________________________
M2 - A -
39C
Outra

Refrigerador (Geladeira)
Cmara Fria
Nmero:.........................................
Ms:.................................................
Localizao:...................................
Ano:.................................................
REGISTRO
(descrever faixa aceitvel de temperatura ex.: 2 8C)

Temperatura em C
Dia Hora Tcnico
1C
2C
3C
4C
5C
6C
7C
8C
Outra
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
Manuteno especial:
1.
Descongelamento/Limpeza
2.
Comprovao da temperatura com termmetro externo de mxima e mnima
3.
Outros procedimentos compatveis:...............................................................
Data:........./........../............
________________________________________
M2 - A -

REGISTRO DA MANUTENO DA
AUTOCLAVE E DO CONTROLE DA ESTERILIZAO
Nmero do aparelho:............................................. Fabricante:................... Modelo:.......................
Localizao:............................................................ Ms:.............................. Ano:.............................
REGISTRO
Data Hora Tcnico
Temperatura Verificao do Controle da Limpeza

usada emC nvel da gua esterilidade mensal
Manuteno especial:
1.
Limpeza
2.
Comprovao da esterilizao, por processos qumicos, fsicos ou biolgicos.
3.
Outros procedimentos compatveis:...........................................................................
Data:........./........../............
________________________________________
M2 - A - 10
Obs.:

Banho Maria a 56C
Nmero: .........................................
Ms:................... Ano .................
Localizao:.....................................
REGISTRO
(descrever faixa aceitvel de temperatura ex.: 54-56C)
Data
Hora
Tcnico
54C
55C
56C
57C
58C
Outra
Manuteno especial:
1.
Limpeza/Troca de gua
2.
Comprovao da temperatura com termmetro externo
3.
Outros procedimentos compatveis:..............................................
Data:........./........../............
________________________________________
M2 - A - 11

REGISTRO DA CALIBRAO E MANUTENO DE CENTRFUGAS
Centrfuga:

Centrfuga Clnica
Micro-centrfuga
Marca:......................
Modelo:..................
Nmero: .........................................
Freqncia da verificao e aceitabilidade: De acordo com o POP especfico.
REGISTRO
Parmetros
DATA
R.P.M.
Conformidade
ASSINATURA
SIM
NO
Obs.:
1. Para a centrfuga clnica, de dessorao, anotar somente a conformidade com o uso dirio.
2. Para outras centrfugas, anotar na coluna R.P.M. o valor das rotaes encontradas com o Tacmetro.
3. Checar ainda, limpeza, vibraes, calibrao do relgio (se houver), vedao da tampa, carves, etc.
4. Copiar este formulrio e preencher um para cada aparelho existente.
Data:........./........../............
________________________________________
M2 - A - 12

Congelador (Freezer)

Nmero: ..........................................
Localizao: .....................................
Ms: .................................................
Ano: ................................................
REGISTRO
(descrever faixa aceitvel de temperatura ex.: -18 - -22C)
Temperatura em C
Dia Hora Tcnico -15C -16C -17C -18C
-19C -20C -21C -22C -23C
Outra
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
Manuteno especial:
1.
Descongelamento/Limpeza
2.
Comprovao da temperatura com termmetro externo de mxima e mnima
3.
Outros procedimentos compatveis: ...................................................................
Data:........./........../............
________________________________________
M2 - A - 13

REGISTRO DAS AES CORRETIVAS
(COLOCAR O NOME DO APARELHO)
Nmero:..........................................
Ms:......................................
Localizao:....................................
Ano:......................................
REGISTRO
Se for encontrada alguma no conformidade, anotar a causa do problema e as aes corretivas executadas.
Data
Causa da no
conformidade
Aes corretivas
Assinatura
Obs.: ........................................................................................................................................................
...................................................................................................................................................................
...................................................................................................................................................................
...................................................................................................................................................................
...................................................................................................................................................................

Data: ...... / ...... / .........
Data: ...... / ...... / .........
________________
Supervisor do Setor
________________
Gestor de qualidade
________________________________________
M2 - A - 14
Anexo III: Relatrios de Registro da Realizao

do Controle Interno da Qualidade - Hospital
REGISTRO DA REALIZAO DO CIQ
Ms:............................
Ano:............................
Gram-positivos
Data
Microrganismos
Teste realizado
Halo (cm)/
CIM (g/mL)
Obs:
E. faecalis
ATCC 29212
E. faecalis
ATCC 51299
S. aureus
ATCC 25923
S. aureus
ATCC 29213
S. aureus
ATCC 43300
S. pneumoniae
ATCC 49619
Aes corretivas:
1.
Realizao de novo teste
2.
Data:........./........../............
________________________________________
M2 - A - 15

Ms:............................
Ano:............................
Gram-negativos
Data
Microrganismos
Teste realizado
Halo (cm)/
CIM (g/mL)
E. coli
ATCC 25922
E. coli
ATCC 35218
E. coli
ATCC 51446
K. pneumoniae
ATCC 13883
K. pneumoniae
ATCC 700603
P. aeruginosa
ATCC 27853
P. mirabilis
ATCC 7002
Aes corretivas:
1.
2.
Data:........./........../............
________________________________________
M2 - A - 16
Obs:

Ms:............................
Ano:............................
Leveduras
Data
Leveduras
Teste realizado
Halo (cm)/
CIM (g/mL)
Obs:
C. albicans
ATCC 14053
C. parapsilosis
ATCC 22019
C. kruzei
ATCC 6258
C. albicans
ATCC 90028
C. tropicalis
ATCC 750
Aes corretivas:
1.
2.
Data:........./........../............
________________________________________
M2 - A - 17

Ms:............................
Ano:............................
Mtodos automatizados
Data
Microrganismos
Teste realizado
Leitura
E. coli
ATCC 25922
E. coli
ATCC 35218
E. coli
ATCC 51446
K. pneumoniae
ATCC 13883
P. aeruginosa
ATCC 27853
P. mirabilis
ATCC 7002
E. faecalis
ATCC 29212
E. faecalis
ATCC 51299
S. aureus
ATCC 29213
C. albicans
ATCC 14053
Aes corretivas:
1.
2.
Data:........./........../............
________________________________________
M2 - A - 18
Obs:
Anexo IV: Relatrios de Registro da Realizao

do Controle Interno da Qualidade - LACEN
REGISTRO DA REALIZAO/AVALIAO DO CIQ
Ms:............................
Ano:............................
Cepa de referncia ...........................................

Colocar o Nome da Cepa (ex. E. coli ATCC 25922)
Data
realizao
do teste
Hospital
Teste
realizado
Halo (cm)/
CIM (g/mL)
Adequao
dos
Resultados
Ao
Hospital
Ao
LACEN
Aes corretivas:
1.
2.
Data:........./........../............
________________________________________
M2 - A - 19

ANVISA-Controle Interno Da Qualidade - Antimicrobianos

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