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Universidade Estadual de Maring

DEPARTAMENTO DE ANLISES CLNICAS


Curso de Farmcia

Ma nua l de

Tcnicas Hematolgicas

Profa Eliana Litsuko Tomimatsu Shimauti


Profa Juliana C. Martinichen Herrero
Profa Eliana Valria Patussi
Profa Fabiana Nabarro Ferraz

2010

BIOSSEGURANA
1. Boas Prticas Individuais
A norma ABNT NBR 14785/2001 trata dos Requisitos de Segurana no Laboratrio Clnico
aplicveis a todo o territrio nacional. Com base nela, recomendam-se as seguintes precaues
universais:
proibir alimentos, bebidas ou fumo na rea tcnica do laboratrio;
armazenar alimentos exclusivamente em reas de alimentao, em locais adequados, sendo
proibido alimentos ou bebidas nos armrios, gavetas, refrigeradores e freezers utilizados para o
armazenamento de reagentes, amostras biolgicas, materiais e insumos para coleta;
no colocar na boca quaisquer materiais ou objetos empregados no ambiente de trabalho, tais
como: canetas, lpis, etiquetas, selos e envelopes;
jamais pipetar com a boca, devendo-se empregar pipetas automticas, sempre que necessrio;
no fazer a aplicao de cosmticos e maquiagens na rea de coleta;
evitar o manuseio de lentes de contato na rea de coleta do laboratrio;
prender/proteger cabelos e barbas durante a jornada de trabalho no laboratrio, a fim de evitar
contato com materiais e superfcies contaminados. Estes devem ser mantidos distantes de
equipamentos como centrfugas e/ou bicos de Bunsen. Pode-se utilizar tocas descartveis com
esta finalidade;
limpar e aparar as unhas e caso sejam utilizados esmaltes, preferir os de cor clara;
evitar o uso de correntes compridas no pescoo, brincos grandes ou braceletes soltos;
lavar as mos aps o manuseio de qualquer material biolgico.

2. Equipamentos de Proteo Individual (EPI)


Utilizar o uniforme recomendado pelo empregador, na rea de coleta, cobrindo adequadamente
as partes do corpo. Na ausncia de um uniforme padro, recomendvel sobrepor vestimenta
um avental de tecido lavvel ou descartvel, longo e de mangas compridas, que alcance o nvel
do joelho. As boas prticas de segurana recomendam que este avental deva sempre ser retirado
ao sair da rea de coleta do laboratrio, no sendo correto seu uso nas reas de alimentao e
descanso.
No se recomenda o uso dos equipamentos de proteo individual fora do permetro onde seu
uso est indicado.
Recomenda-se sempre a utilizao de luvas pelo flebotomista durante o ato da coleta. As trocas
necessitam ser efetuadas quando houver qualquer contaminao com material biolgico.
Sempre que for necessrio, lavar as mos e, em seguida, colocar luvas novas.
No manusear objetos de uso comum (telefone, maanetas, copos, xcaras etc.) enquanto
estiver usando luvas.
No descartar as luvas nas lixeiras de uso administrativo.
Utilizar mscaras quando o ato da coleta do material biolgico sugerir risco de contaminao
pela formao de gotculas ou aerossis.
Utilizar sapatos confortveis com solado antiderrapante e de saltos no muito altos, para que se
minimizem os riscos de acidentes. Na rea de coleta, no se recomenda o uso de sandlias,
chinelos ou outros calados abertos.

3. Cuidados na Sala de Coleta


Desinfetar imediatamente as reas contaminadas.
Comunicar ao superior imediato os acidentes com material infectante.
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A sala deve ser utilizada exclusivamente para coleta e apenas o paciente e o flebotomista
devem permanecer no local. Excees a essa regra so as situaes em que houver
necessidade de um acompanhante para auxiliar na execuo do procedimento.

RECOMENDAES PARA COLETA DE SANGUE VENOSO


1. Procedimentos de Coleta de Sangue Venoso
A venopuno um procedimento complexo, que exige conhecimento e habilidade.
Quando uma amostra de sangue for colhida, um profissional experiente deve seguir algumas
etapas:
- verificar a solicitao do mdico e o cadastro do pedido;
- apresentar-se ao paciente, estabelecendo comunicao e ganhando sua confiana;
- explicar ao paciente ou ao seu responsvel o procedimento ao qual o paciente ser submetido,
para a obteno de consentimento para o procedimento;
- realizar a identificao de pacientes:
- conscientes: confirmar os dados pessoais, comparando-os com aqueles do pedido. Havendo
discrepncias entre as informaes, estas devero ser resolvidas antes da coleta da amostra;
- verificar se as condies de preparo e o jejum do paciente.

1.1 Locais de Escolha para Venopuno


A escolha do local de puno representa uma parte vital do diagnstico. Existem diversos
locais que podem ser escolhidos para a venopuno. O local de preferncia para as venopunes
a fossa antecubital, na rea anterior do brao em frente e abaixo do cotovelo, onde est
localizado um grande nmero de veias (ceflica, ceflica mediana, baslica mediana e baslica),
relativamente prximas superfcie da pele. Embora qualquer veia do membro superior que
apresente condies para coleta possa ser puncionada, as veias cubital mediana e ceflica so
as mais freqentemente utilizadas.

Ateno: punes arteriais no devem ser consideradas como uma alternativa venopuno
pela dificuldade de coleta e riscos de infeco.

1.2 reas a serem evitadas para a venopuno:


Preferencialmente amostras de sangue no devem ser coletadas nos membros onde estiverem
instaladas terapias intravenosas.
Evitar locais que contenham extensas reas cicatriciais de queimadura.
Um mdico deve ser consultado antes da coleta de sangue ao lado da regio onde ocorreu a
mastectomia, em funo das potenciais complicaes decorrentes da linfostase.
reas com hematomas podem gerar resultados errados de exames, qualquer que seja o
tamanho do hematoma. Se outra veia, em outro local, no estiver disponvel, a amostra deve ser
colhida distalmente ao hematoma.
Fstulas arteriovenosas, enxertos vasculares ou cnulas vasculares no devem ser manipulados
por pessoal no autorizado pela equipe mdica, para a coleta de sangue.
Evite puncionar veias trombosadas. Essas veias so pouco elsticas, assemelham-se a um
cordo e tm paredes endurecidas.

1.3 Tcnicas para evidenciao da veia:


Observao de veias calibrosas.
Movimentao: pedir para o paciente abaixar o brao e fazer movimentos de abrir e fechar a
mo. Os movimentos de abertura das mos reduzem a presso venosa, com o relaxamento
muscular.
Massagens: massagear suavemente o brao do paciente (do punho para o cotovelo).
Palpao: realizada com o dedo indicador do flebotomista. No utilizar o dedo polegar devido
baixa sensibilidade da percepo da pulsao. Esse procedimento auxilia na distino entre veias
e artrias pela presena de pulsao, devido maior elasticidade e maior espessura das
paredes dos vasos arteriais.
Fixao das veias com os dedos, nos casos de flacidez.

1.4 Uso Adequado do Torniquete:


O torniquete empregado para aumentar a presso intravascular, o que facilita a palpao
da veia e o preenchimento dos tubos de coleta ou da seringa. No ato da venopuno devem estar
disponveis torniquetes ou produtos utilizados como tal. Eles incluem:
Torniquete de uso nico, descartvel, preferencialmente livre de ltex.
Manguito inflado do esfigmomanmetro a at 40 mmHg para adultos. Deve-se evitar o uso de
torniquetes de tecidos emborrachados, com fechamento em grampo plstico, fivela ou com tipos
similares de fixao. Caso o torniquete tenha ltex em sua composio, deve-se perguntar ao
paciente se ele tem alergia a esse componente. Caso o paciente seja alrgico a ltex, no efetuar
o garroteamento com esse material. Os torniquetes devem ser descartados imediatamente
quando forem contaminados com sangue ou fluidos corporais. possvel que, sem a aplicao
do torniquete, o flebotomista no seja capaz de priorizar a veia antecubital com a segurana
requerida.

1.4.1 Precaues no uso de torniquete:


muito importante fazer uso adequado do torniquete (Figuras 3, 4 e 5).
Quando a sua aplicao excede um minuto, pode ocorrer estase localizada, hemoconcentrao
e infiltrao de sangue para os tecidos, gerando valores falsamente elevados para todos os
analitos baseados em medidas de protenas, alterao do volume celular e de outros elementos
celulares.
O uso inadequado pode levar situao de erro diagnstico (como hemlise, que pode tanto
elevar o nvel de potssio como alterar a dosagem de clcio etc.), bem como gerar complicaes
durante a coleta (hematomas, formigamento , etc.).
Havendo leses de pele no local pretendido, deve-se considerar a possibilidade da utilizao de
um local alternativo ou aplicar o torniquete sobre a roupa do paciente.

1.4.2 Procedimentos Uso do torniquete:


Posicionar o brao do paciente, inclinando-o para baixo, a partir da altura do ombro.
Posicionar o torniquete com o lao para cima, a fim de evitar a contaminao da rea de
puno.
No aplicar, no momento de seleo venosa, o procedimento de bater na veia com dois dedos.
Esse tipo de procedimento provoca hemlise capilar e, portanto, altera o resultado de certos
analitos.
Se o torniquete for usado para seleo preliminar da veia, faz-lo apenas por um breve
momento, pedindo ao paciente para fechar a mo. Localizar a veia e, em seguida, afrouxar o
torniquete. Esperar 2 minutos para us-lo novamente.
O torniquete no dever ser usado em alguns testes como lactato ou clcio, para evitar
alterao no resultado.
Aplicar o torniquete de 7,5 a 10,0 cm acima do local da puno, para evitar a contaminao do
local.
No usar o torniquete continuamente por mais de 1 minuto.
Ao garrotear, pedir ao paciente que feche a mo para evidenciar a veia.
No apertar intensamente o torniquete, pois o fluxo arterial no deve ser interrompido. O pulso
deve permanecer palpvel.
Trocar o torniquete sempre que houver suspeita de contaminao.

1.5 Posies do paciente para coleta de sangue


A posio do paciente tambm pode acarretar erros em resultados.
O desconforto do paciente, agregado ansiedade do mesmo, pode levar liberao indevida de
alguns analitos na corrente sangunea. A seguir, sero apresentadas algumas recomendaes
que facilitam a coleta de sangue e promovem um perfeito atendimento ao paciente neste
momento.

1.5.1 Procedimentos em paciente sentado


Pedir ao paciente que se sente confortavelmente em uma cadeira prpria para coleta de
sangue. Recomenda-se que a cadeira tenha apoio para os braos e previna quedas, caso o
paciente venha a perder a conscincia. Cadeiras sem braos no fornecem o apoio adequado
para o brao, nem
protegem pacientes em casos de desfalecimento. Recomenda-se que, no descanso da cadeira, a
posio do brao do paciente seja inclinada levemente para baixo e estendida, formando uma
linha direta do ombro para o pulso. O brao deve estar apoiado firmemente pelo descanso e o
cotovelo no deve estar dobrado. Uma leve curva pode ser importante para evitar hiperextenso
do brao.

1.5.2 Procedimento em paciente em leito


Pedir ao paciente que se coloque em uma posio confortvel.
Caso esteja em posio supina e um apoio adicional for necessrio, coloque um travesseiro
debaixo do brao em que a amostra ser colhida.
Posicione o brao do paciente inclinado levemente para baixo e estendido, formando uma linha
direta do ombro para o pulso.
Caso esteja em posio semi-sentada, o posicionamento do brao para coleta torna-se
relativamente mais fcil.

2. COLETA DO SANGUE
2.1 Antissepsia do local da puno
O procedimento de venopuno deve ser precedido pela higienizao do local para prevenir a
contaminao microbiana de cada paciente ou amostra.
Antisspticos
Para a preparao da pele, o uso de antisspticos necessrio.
Dentre eles, citamos: lcool isoproplico 70% ou lcool etlico, iodeto de povidona 1 a 10% ou
gluconato de clorexidina para hemoculturas, substncias de limpeza no-alcolicas (como
clorexidina, sabo neutro).
Procedimento
Recomenda-se usar uma gaze ou algodo umedecido com soluo de lcool isoproplico ou
etlico 70%.
Limpar o local com um movimento circular do centro para fora.
Permitir a secagem da rea por 30 segundos para prevenir hemlise da amostra e reduzir a
sensao de ardncia na venopuno.
No assoprar, no abanar e no colocar nada no local.
No tocar novamente na regio aps a antissepsia.
Se a venopuno for difcil de ser obtida e a veia precisar ser palpada novamente para efetuar a
coleta, o local escolhido deve ser limpo novamente.

2.2 Condies Necessrias para a Coleta:


- Sala bem iluminada e ventilada;
- Lavatrio;
- Cadeira reta com braadeira regulvel ou maca;
- Garrote ou torniquete;
- Algodo hidrfilo;
- lcool etlico a 70%;
- Agulha descartvel;
- Seringa descartvel;
- Sistema a vcuo: suporte, tubo e agulha descartvel;
- Tubos com e sem anticoagulante;
- Etiquetas para identificao de amostras;
- Recipiente rgido e prprio para desprezar material perfurocortante;
- Avental e mscara;
- Luvas descartveis;
- Estantes para os tubos.
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2.3 Procedimentos de Coleta de Sangue com Seringa e Agulha


1. Verificar se a cabine de coleta est limpa e guarnecida para incio dos procedimentos.

2. Solicitar ao paciente que diga seu nome completo para confirmao do pedido mdico e
etiquetas.
3. Conferir e ordenar todo o material a ser usado no paciente, de acordo com o pedido mdico
(tubo, gaze, torniquete, etc.). A identificao dos tubos deve ser feita na frente do paciente.
4. Informar ao paciente como ser realizado o procedimento.
5. Abrir a seringa na frente do paciente.
6. Higienizar as mos.
7. Calar as luvas.
8. Posicionar o brao do paciente, inclinando-o para baixo, na altura do ombro.
9. Se o torniquete for usado para seleo preliminar da veia, pedir para que o paciente abra e
feche a mo; em seguida, afrouxar o instrumento e esperar 2 minutos para utiliz-lo novamente.
10. Fazer a antissepsia.
11. Garrotear o brao do paciente.
12. Retirar a proteo da agulha.
13. Fazer a puno numa angulao oblqua de 30graus, com o bisel da agulha voltado para
cima, se necessrio, para melhor visualizar a veia, esticar a pele com a outra mo, longe do local
onde foi feita a antissepsia.
14. Desgarrotear o brao do paciente assim que o sangue comear a fluir dentro da seringa.
15. Aspirar devagar o volume necessrio, de acordo com a quantidade de sangue requerida na
etiqueta dos tubos a serem utilizados (respeitar, ao mximo, a exigncia da proporo
sangue/aditivo). Aspirar o sangue, evitando bolhas e espuma, com agilidade, pois o processo de
coagulao do organismo do paciente j foi ativado no momento da puno.
16. Retirar a agulha da veia do paciente.
17. Exercer presso no local, em geral, de 1 a 2 minutos, evitando, assim, a formao de
hematomas e sangramentos. Se o paciente estiver em condies de faz-lo, oriente-o para que
faa a presso at que o orifcio da puno pare de sangrar.
18. Tenha cuidado com a agulha para evitar acidentes perfurocortantes.
19. Descartar a agulha imediatamente aps sua remoo do brao do paciente, em
recipiente adequado, sem a utilizao das mos (de acordo com a normatizao nacional
no desconectar a agulha no reencapar). Caso esteja usando agulha com dispositivo de
segurana, ativar o dispositivo e descartar a agulha no descartador para objetos perfurocortantes,
de acordo com a NR32.
Ateno: totalmente contraindicado perfurar a rolha do tubo, pois esse procedimento pode
causar a puno acidental, alm da possibilidade de hemlise.
20. De acordo com o CLSI, deve-se utilizar, aps a coleta com seringa e agulha, um dispositivo
de transferncia de amostra.
21. Conectar o dispositivo de transferncia na seringa, introduzir os tubos a vcuo e aguardar o
sangue parar de fluir em direo ao interior do tubo. Realizar a troca dos tubos sucessivamente.
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22. Homogeneizar o contedo imediatamente aps a retirada de cada tubo, invertendo-o


suavemente de 5 a 10 vezes.
23. Descartar o dispositivo de transferncia de amostra (transfer device) e a seringa.
24. Fazer curativo oclusivo no local da puno.
25. Orientar o paciente a no dobrar o brao, no carregar peso ou bolsa a tiracolo no mesmo
lado da puno por, no mnimo, 1 hora, e no manter a manga dobrada, pois pode funcionar
como torniquete.
26.Verificar se h alguma pendncia, dando orientaes adicionais ao paciente, se necessrio.
27. Certificar-se das condies gerais do paciente perguntando se est em condies de se
locomover sozinho. Em caso afirmativo, entregar o comprovante de retirada do resultado ao
paciente para, em seguida, liber-lo.
28. Colocar as amostras em local adequado ou encaminh-las imediatamente para
processamento.

2.4 Cuidados para uma Puno Bem-sucedida


O ideal que a puno seja nica, proporcionando, assim, conforto e segurana ao
paciente. Para se obter uma puno de sucesso, vrios fatores devem ser observados antes de
iniciar o procedimento. Aps avaliar o acesso venoso, escolher os materiais compatveis. Por
exemplo, em caso de paciente com acesso venoso difcil, valer-se do uso de agulhas de menor
calibre, escalpes ou tubos de menor volume.
Sempre puncionar a veia do paciente com o bisel voltado para cima.
Respeitar a proporo sangue/anticoagulante no tubo.
Introduzir a agulha mais ou menos 1 cm no brao.
Respeitar a angulao de 30o (ngulo oblquo), em relao ao brao do paciente.
O ngulo oblquo de 30 da agulha em relao ao b rao do paciente foi respeitado; a
agulha penetrou centralmente na veia e o bisel da agulha foi inserido voltado para cima.

ANTICOAGULANTES
Anticoagulantes so substncias usadas para impedir a coagulao e retardar a
deteriorao do sangue. Devem interferir o mnimo possvel com as caractersticas das clulas e
estar contido em pouco volume para evitar diluio do sangue.
A escolha correta do tipo e quantidade de anticoagulante importante. Uma quantidade
insuficiente pode permitir a coagulao sangunea e o excesso pode interferir nos exames.

1. Anticoagulantes mais usados em Hematologia


- EDTA 10% (cido Etilenodiaminotetractico)
- Citrato de Sdio 3,8%

2. Preparo de Anticoagulantes:
1) Soluo de EDTA 10%
EDTA (K2) --------------------------------10,0 g
gua destilada -----------------------------100,0 ml
necessrio dissolver o EDTA (K2) a quente.
Usar 0,05 ml (1 gota) para cada 5 ml de sangue.
Conservar a temperatura ambiente, esta soluo no altera com o tempo.
2) Citrato de Sdio 3,8% (Na3C6H5O7.2H2O)
Na3C6H5O7.2H2O ---------------------------3,8 g
gua destilada -----------------------------100,0 ml
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Dissolver e completar o volume com gua destilada


Usar na proporo 1 parte de anticoagulante para 9 partes de sangue (0,5 ml de
anticoagulante para 4,5 ml de sangue)
Exames Realizados com Amostras de Sangue Colhido com EDTA 10%
- Hemograma
- VHS (Velocidade de Hemosedimentao)
- Contagem de Reticulcitos
- Teste de Falcizao
- Eletroforese de Hemoglobina
- Teste de fragilidade osmtica
Exames Realizados com Amostras de Sangue Colhido com Citrato de Sdio a 3,8%
Coagulograma
- Tempo de Protrombina (TAP)
- Tempo de Tromboplastina Parcial Ativado (TTPa)
- Tempo de Trombina e outros.

TCNICA PARA CONFECO DO ESFREGAO SANGUNEO

Realizar os esfregaos em lminas de vidro de 24x76 mm, perfeitamente limpas e


desengorduradas. Utilizar para extenso, uma lmina mais estreita, chamada lmina
extensora (apresenta bordas recortadas e polidas).
Colocar uma gota de sangue recm coletada (da ponta da agulha, desprezando as primeiras
gotas, sem anticoagulante) e cerca de 1 cm do incio da lmina.
Colocara a lmina extensora, segurando com dois dedos, com uma inclinao de 45 em
relao primeira, alguns milmetros diante da gota. Recuar a lmina at encostar na gota e
por capilaridade deixar o sangue se distribuir homogeneamente por toda a largura da
extensora.

Fazer o esfregao deslizando com movimento suave e contnuo a outra extremidade, sem
alterar o ngulo inicial.

Secar o esfregao a temperatura ambiente.


A identificao da lmina feita sobre o prprio sangue distendido, na cabea do esfregao
com lpis.
Devem ser feitos trs esfregaos para cada paciente.
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OBS:
O bom esfregao deve ser fino e homogneo e ocupar da lmina
O esfregao pode ser mais curto ou mais longo:
>ngulo  extenso mais curta
< ngulo  extenso mais longa.

* A qualidade do esfregao influi muito na distribuio das clulas. Os resultados s sero


comparveis se obtidos em esfregaos da mesma espessura e colhidos rigorosamente
dentro das mesmas condies.

Finalidade do Esfregao Sanguneo:


* Avaliao morfolgica de eritrcitos, leuccitos e plaquetas (alterao de forma, tamanho,
cor...);
* Avaliao quantitativa de leuccitos (contagem diferencial).
* Avaliao e quantificao de clulas imaturas quando presentes.

COLORAES USUAIS EM HEMATOLOGIA


1. Aplicao Clnica
A colorao realizada sobre o esfregao sanguneo, feito no momento da coleta, para
que se possa proceder anlise morfolgica qualitativa e quantitativa das clulas sanguneas.

2. Princpio do Teste
Romanowsky idealizou um mtodo em que uma soluo de corantes poderia corar
diferentes estruturas. Misturas dos corantes eosina e azul de metileno so preparadas
segundo a proposio de vrios autores: Leishman, May-Grunwald, Giemsa, Wright e outros.
Estes corantes so dissolvidos em lcool, em geral metanol. Na soluo envelhecida, o
azul de metileno se oxida em gradaes diferentes, originando diversos azures de metileno.
Teremos ento uma soluo alcolica de um complexo eosinato de azul e azures de
metileno. Tratada pelos corantes, a clula evidencia estruturas acidfilas, basfilas e
neutrfilas, conforme a reteno do corante cido, bsico ou neutro, respectivamente.
O ncleo celular cido pela presena de cido desoxirribonuclico (DNA), cora-se pelo
azul de metileno, enquanto o citoplasma alcalino cora-se pela eosina.
*Corantes cidos  coram estruturas bsicas  EOSINA  cora eritrcitos e grnulos de
eosinfilos.
*Corantes bsicos  coram estruturas cidas  AZUL DE METILENO  cora os ncleo dos
leuccitos, citoplasma de linfcitos e moncitos, grnulos dos basfilos e fracamente os
grnulos dos neutrfilos.
O mtodo da colorao de May-Grunwald-Giemsa, associa o corante de May-Grunwald,
pouco especfico para o ncleo, com o Giemsa que apresenta afinidade nuclear.

3. AMOSTRAS
- Preparo prvio do paciente: no h necessidade de se colher sangue para o hemograma
em jejum nos casos de dietas leves, contudo, em casos de refeies completas, deve-se
aguardar pelo menos 3 horas.
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- Tipo de amostra: esfregao sanguneo, feito no momento da coleta, sem anticoagulante.


- Estabilidade e armazenamento: quanto antes for realizada a colorao, melhor ser o
resultado.
- Critrio de aceitao e rejeio do material coletado: o esfregao sanguneo dever ser
feito preferencialmente com sangue sem anticoagulante.

4. Materiais, reagentes e equipamentos.


- Esfregaos sanguneos secos
- Suporte para colorao
- Frascos conta-gotas
- Relgio despertador (Timer)
Corante de May-Grunwald
- Eosina azul de metileno segundo May-Grunwald ------- 3,0g
- Metanol -------------------------------------------------------------- 1.000ml
Dissolver o corante no metanol e deixar em banho-Maria 37 oC por algumas horas, mexendo
de vez em quando para uma completa dissoluo. Deixar envelhecer por no mnimo uma
semana, em frasco escuro e filtrar antes do uso. A validade de 6 meses temperatura
ambiente.
Corante de Giemsa
Soluo concentrada de azur-eosina azul de metileno adquirida comercialmente. Deve ser
filtrada para o uso e diluda em gua tamponada na hora de usar, na proporo 1 gota para 1
ml de gua tamponada. Lote e prazo de validade encontram-se impressos na embalagem. A
conservao a temperatura ambiente.
gua Tamponada
-Fosfato Monopotssico (KH2PO4) ---------------------------------1,0g
-Fosfato Dissdico (Na2HPO4.2H2O) ----------------------------- 3,0g
-gua destilada q.s.p --------------------------------------------------1.000 ml
Dissolver completamente os sais na gua destilada, conferir o pH, que deve estar na faixa de
7, guardar em um frasco mbar. A validade de 3 meses a temperatura ambiente.

5. PROCEDIMENTO PARA A COLORAO DE MAY-GRUNWALD-GIEMSA


- Colocar as lminas sobre o suporte com o esfregao voltado para cima
- Cobrir toda a extenso das lminas com soluo do corante May-Grunwald.
- Deixar por 5 minutos e ento escorrer o corante

- Cobrir as lminas com o corante de Giemsa recm diludo (1 gota de corante para 1 ml de
gua tamponada) e deixar por 10 minutos.

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- Lavar a preparao abundantemente com gua corrente e retirar o excesso de corante


aderido ao verso da lmina com algodo ou gaze embebido em lcool.
- Deixar as lminas secar naturalmente em posio vertical, posicionando a cabea do
esfregao para baixo.

6. LIMITAES DO MTODO
- Os esfregaos devero estar perfeitamente secos.
- A colorao dever ser realizada distante dos vapores cidos ou alcalinos para evitar
variaes de pH, as quais iro influenciar na obteno de uma boa colorao.
- Os tempos de colorao podem variar de acordo com as condies ambientais e qualidade
do corante.

7. DETECTANDO ERROS NA COLORAO


O segredo de uma boa colorao est em descobrir o pH ideal e o tempo apropriado de
fixao e colorao para a partida de corante. Dependendo de cada tipo de corante e de cada
fabricante, o pH ideal muda.

O EXAME MICROSCPICO
O exame microscpico das extenses de sangue tem como objetivo:
- Confirmar as contagens de hemcias, leuccitos e plaquetas;
- identificar eventuais clulas anormais presentes no sangue;
- realizar a contagem diferencial de leuccitos.
A inspeo da extenso feita em menor aumento (objetiva 10X). A qualidade da extenso
e da colorao verificada. Devem ser pesquisados os microcogulos, responsveis por erros de
contagens e a aglomerao de leuccitos maiores na ponta da extenso, responsvel por erros
na contagem diferencial. A distribuio das clulas pela extenso deve ser sempre homognea,
sem agrupamentos.
Os agrupamentos mais comuns so:
- aglutinao de hemcias;
- empilhamento ou rouleaux de hemcias;
- agrupamento dos leuccitos;
- agregados plaquetrios;
- satelitismo plaquetrio ao redor dos neutrfilos.
A identificao inicial das clulas feita no aumento maior (objetiva de 40X). Se realizada
aps a contagem diferencial automatizada, deve confirmar a contagem e pesquisar a presena de
clulas anormais. A contagem diferencial manual feita tradicionalmente em 100 leuccitos, deve
ser feita em pelo menos 200 leuccitos para melhorar a preciso. Por exemplo: 50% de linfcitos
contados em 100 leuccitos podem corresponder de 39,8 a 60,2%; em 200 leuccitos, de 42,9
at 57,1%; em 500 leuccitos, de 45,5 at 54,5%; e em 1.000 leuccitos, de 46,9 at 53,1%.
A identificao final e contagem diferencial das clulas feita no aumento de imerso
(objetiva de 100X). So achados importantes:

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- a variao da forma das hemcias (pecilocitose), a presena de hemcias macrocticas


policromticas, eritroblastos e materiais remanescentes nas hemcias (corpsculos de HowellJolly e pontilhados basfilos);
- nos neutrfilos jovens, alteraes txicas degenerativas (granulaes txicas) e os linfcitos
atpicos reacionais;
- as clulas neoplsicas (clulas anormais, blastos);
- anomalias leucocitrias, hemoparasitas etc...
fundamental correlacionar os achados do exame microscpico com os resultados:
- extenses curtas com aproximao das hemcias esto relacionadas com policitemia, e
extenses longas com afastamento das hemcias e anisopecilocitose esto relacionadas com
anemia;
- a variao do tamanho das hemcias, a anisocitose, est relacionada com aumento do RDW; a
presena de microcitose, com diminuio do VCM e a presena de macrcito, com aumento do
VCM;
- as hemcias hipocrmicas esto relacionadas com a diminuio do CHCM e os esfercitos com
o aumento do CHCM;
- a policromasia est relacionada com aumento do VCM e de reticulcitos;
- o nmero de leuccitos presentes em mdia nos campos de 400X quando multiplicado por
2.000 aproximadamente a leucometria;
- o nmero de plaquetas presentes em 10 campos de imerso quando multiplicado por 13.000,
aproximadamente a contagem de plaquetas.

CLULAS SANGUNEAS MORFOLOGIA


1 - Reconhecimento e Identificao Citomorfologia

Plaquetas
Eritrcitos normais
Leuccitos
o Neutrfilos
 Bastonete
 Segmentado
o Eosinfilo
o Basfilo
o Moncito
o Linfcito

 Plaquetas: So clulas pequenas e incompletas (3 a 4 m de tamanho(dimetro maior)


por 1 m de espessura, pois no tem material nuclear).

plaquetas

13

 Eritrcitos normais: Disco bicncavo anucleado (quando visto lateralmente) e forma


circular (visto sobre a lmina de vidro), dimetro 6-9 m, apresentam halo central.

500 X
 Leuccitos
 Neutrfilos
 Bastonete
 Segmentado
 Eosinfilo
 Basfilo
 Moncito
 Linfcito

Citomorfologia dos Leuccitos


Perguntar:
A clula granulcito?

NO

SIM

Mononuclear
eosinfilo

linfcito

basfilo

neutrfilo

moncito

14

1. GRANULCITOS (neutrfilos, eosinfilos e basfilos)


Bastonete
Tamanho:14-20 m
formato:oval/redondo
cor do citoplasma: rseo
granularidade:granulaes
puntiformes (neutras)
forma do ncleo:semi-circular
Tipo de cromatina:condensada
relao n/c:baixa
nuclolo: no visvel
ocorrncia sangue: <5%
ocorrncia medula: 5-20%

Segmentado
Tamanho:14-20 m
formato:oval/redondo
cor do citoplasma: rseo
granularidade:granulaes
puntiformes (neutras)
forma do ncleo:lobulado
(normalmente menos que 5)
Tipo de cromatina:condensada
relao n/c:baixa
nuclolo: no visvel
ocorrncia sangue: 40-75%
ocorrncia medula: 5-20%

Eosinfilo
Tamanho:15-25 m
formato:oval/redondo
cor do citoplasma: rseo plido,
coberto por grnulos.
granularidade: granulaes globosas
(vermelha-alaranjada)
forma do ncleo:lobulado/semicircular
Tipo de cromatina:condensada
relao n/c:baixa
nuclolo: no visvel
ocorrncia sangue: 2-4%
ocorrncia medula: <2%
15

Basfilo
Tamanho:12-18 m
formato:oval/redondo
cor do citoplasma: rseo plido,
coberto por grnulos.
granularidade: granulaes
grosseiras de tamanho varivel
(prpura/negra)sobre citoplasma e
ncleo.
forma do ncleo: lobulado (pouco
visvel)
Tipo de cromatina:condensada
relao n/c:baixa
nuclolo: no visvel
ocorrncia sangue: <1%
ocorrncia medula: <1%

RESUMINDO:
GRANULCITOS (neutrfilos, eosinfilos e basfilos)

Ncleo: mesma forma de ncleo (cromatina condensada)


o Quando neutrfilo (bastonete/segmentado)

Citoplasma: abundante, a diferena est nas granulaes;


o Eosinfilo: granulaes globosas (vermelha alaranjada)
o Basfilo: granulaes grosseiras sobre o citoplasma e ncleo (azul-preta)
o Neutrfilo: granulaes puntiformes (colorao neutra).

2. MONONUCLEARES
Linfcitos: Pequeno, mdio e grande
Tamanho:7-15 m
formato:oval/redondo
cor do citoplasma:azul
granularidade: ausente
forma do ncleo: redondo ou
ligeiramente oval.
Tipo de cromatina:homognea e
condensada
relao n/c:alta
nuclolo: no visvel, algumas vezes
dificilmente visvel
ocorrncia sangue: 25-40%
ocorrncia medula: 5-20%
Linfcito grande

MGG 1000X

16

Linfcito pequeno

MGG 1000X

Moncito
Tamanho:15-25 m
formato:oval/redondo ou irregular
cor do citoplasma:cinza-azul
granularidade: ausentes
forma do ncleo: irregular
Tipo de cromatina: delicada, fina,
com espaos claros e pontos de
condensao
relao n/c:moderada ou baixa
nuclolo: no visvel
ocorrncia sangue: 4-8%
ocorrncia medula: <2%
MGG 1000X

Mos obra: Identificao dos elementos figurados do sangue


*Material: Esfregao Sanguneo
*Colorao: May-Grunwald-Giemsa (MGG)
*Objetivo: Identificar os elementos figurados do sangue hemcias, neutrfilos (segmentados e
bastonetes), linfcitos, moncitos, eosinfilos, basfilos e plaquetas.
- Focalize a lmina
Objetiva 100X leo de imerso
Condensador levantado e diafragma aberto.
- Esquematize os diferentes tipos celulares.
- Observe detalhadamente:
 a colorao das clulas,
 forma do ncleo,
 condensao da cromatina,
 presena de granulaes
 relao ncleo/citoplasma.

17

Movimento em zigue-zague, at totalizar 100 leuccitos.


A microscopia deve ampliar com nitidez a imagem das clulas em campos adequados,
prximos ao final da extenso de sangue, onde as clulas se encontram lado a lado, sem
sobreposio conforme figura acima.

18

CONTAGEM DAS CLULAS SANGUNEAS


Cmara de Neubauer (Hemocitmetro)
A cmara consiste em uma lmina retangular de vidro espesso, contendo dois retculos na
poro central, separados longitudinalmente por um sulco profundo sobre a lmina.
Transversalmente, quatro sulcos limitam trs plataformas. A central onde esto os retculos
encontra-se deprimida 0,1 mm em relao s laterais, dando a profundidade da cmara, limitada
superiormente por uma lamnula especial adaptada firmemente sobre as plataformas laterais. A
lamnula opticamente plana e sem defeitos.

O retculo, na cmara de Neubauer, um quadrado de 3 mm de lado e 9 mm2 de


superfcie dividido em nove reas de 1 mm2. O volume total da cmara de 0,9 mm3. Cada um
dos 9 quadrados subdividido. Os quatro quadrados laterais so divididos em 16 pequenos
quadrados, de 1/16 mm2. O quadro central est dividido em 25 quadros de 1/25, sendo cada um
destes subdivididos em 16 quadrinhos de 1/400 mm2, totalizando 400 quadrinhos e 0,1 mm3 na
rea central do retculo.

Preenchimento da Cmara
Para conter o sangue diludo que ser depositado sobre o retculo a lamnula dever ser
fixada s plataformas da cmara. Isso ser conseguido umedecendo levemente as extremidades
da lamnula que sero comprimidas com os polegares sobre a plataforma. O material diludo ser
agora colocado, atravs da micropipeta entre o retculo e a lamnula. As caractersticas de um
bom enchimento no permitem excessos, falta de lquido ou bolhas de ar na preparao,
conforme ilustrado na figura abaixo.

19

Distribuio das Clulas Sobre o Retculo

Sistematizao da Contagem
Aquelas clulas que tocam as linhas divisrias do quadro esquerda e superiormente so
contadas para este quadro, enquanto os que tocam as linhas direita e inferiormente so
contadas nos quadros respectivos ou desprezadas, se esto no limite extremo da rea a ser
contada.

Uso correto da cmara de Neubauer nas contagens globais


A contagem manual em hemocitmetro ainda til para contagens de leuccitos,
plaquetas (quando solicitadas separadamente, pois torna-se invivel inclu-la no hemograma
automatizado) e eritrcitos (em anmicos) em laboratrios sem automao. Ela indispensvel
para plaquetopenias graves (< 40.000 plaquetas/mm3) como forma de liberar resultados
confiveis em contagens nas quais h discrepncias entre o resultado automatizado e a
estimativa no esfregao. Para obter contagens reprodutveis, no conveniente que o nmero de
clulas contadas no retculo (cmara) seja superior a 1.000 e inferior a 100. Casos em que a
contagem da clula em questo, em seu local apropriado para contagem, seja maior que 1.000
merecem diluies elevadas. Contagens inferiores a 100 clulas merecem diluies menores e/ou
maior rea do retculo analisada.
20

HEMOGRAMA
O hemograma corresponde a um conjunto de testes laboratoriais que estabelece os
aspectos quantitativos e qualitativos dos eritrcitos (eritrograma), dos leuccitos
(leucograma) e das plaquetas (plaquetograma) no sangue.
I - Eritrograma : inclui os testes laboratoriais que determinam o perfil hematolgico da srie
vermelha no sangue perifrico. constitudo por:
- Contagem de eritrcitos;
- Dosagem de Hemoglobina;
- Hematcrito;
- ndices Hematimtricos (VCM, HCM, CHCM, RDW);
- Avaliao da morfologia eritrocitria (esfregao sanguneo corado).
II - Leucograma: engloba os testes laboratoriais que determinam o perfil hematolgico da srie
branca (leuccitos) no sangue perifrico. constitudo por:
- Contagem Global e Diferencial de Leuccitos
- Anlise morfolgica no esfregao sanguneo.
III - Plaquetograma: Envolve a contagem de plaquetas e a avaliao da sua morfologia feita por
microscopia no esfregao sanguneo.
Tanto o eritrograma, o leucograma e o plaquetograma podem ser determinados por
tcnicas manuais e automatizadas.

TCNICAS MANUAIS
A Homogeneizao do Sangue
A sedimentao ocorre espontaneamente nos tubos de coleta mantidos nas estantes.
Inicialmente, a parte superior fica mais diluda e a parte inferior mais concentrada. Se
analisadas, resultaro em uma falsa anemia e uma falsa policitemia, respectivamente.
Posteriormente, com a deposio das hemcias no fundo do tubo de coleta, o plasma fica visvel
na parte superior do tubo. A homogeneizao do sangue necessria antes de qualquer
procedimento e realizada com movimentos que deslocam uma bolha de ar por todo o tubo, do
topo at o fundo, promovendo a mistura entre o plasma e as clulas. Essa pode ser feita manual
ou em homogeneizadores mecnicos de bancada. Independente do modo, a homogeneizao
deve ter a eficincia documentada por testes de reprodutibilidade de resultados. Os tubos de
coleta preenchidos at quase o topo e as amostras com hematcrito elevado demoram mais para
atingir a homogeneizao correta.

Forma correta de homogeneizao


21

ERITROGRAMA
1 - CONTAGEM DE HEMCIAS
AMOSTRA
Sangue total em EDTA 10%
MATERIAL
- Pipeta graduada de 5 ml
- Micropipeta 20l
- Ponteiras
- Tubo de hemlise
- Cmara de Neubauer
- Microscpio ptico
REAGENTES
Lquido de Hayem
Sulfato de Sdio ..................................................................................... 2,5 g
Cloreto de Sdio .....................................................................................0,5 g
Bicloreto de Mercrio ............................................................................. 0,25 g
gua destilada q.s.p. ...............................................................................100,0 ml
Filtrar e conservar a temperatura ambiente
PROCEDIMENTO TCNICO
- Em um tubo de hemlise pipetar 4 ml de lquido diluidor;
- Transferir para o tubo contendo o lquido diluidor 20 l de sangue homogeneizado;
- Agitar suavemente com o auxlio de uma micropipeta e homogeneizar por inverso;
- Preencher o retculo da cmara evitando o excesso de lquido e bolhas de ar;
- Fazer a contagem com objetiva de 10X, no retculo central da cmara, nos cinco quadrados
indicados na figura com a letra H;
- Sistematizar a contagem;
- Calcular o nmero de eritrcitos/ mm3 (L)

Clculo do nmero de hemcias/mm3 de sangue


Hemcias/mm3 de sangue = Y x 5 x 10x 200
Hemcias/mm3 de sangue = Y x 10.000
Onde: Y = nmero de hemcias contadas (80 quadradinhos)
5 = fator de converso para 1 mm2 (rea)
10 = fator de converso para 1 mm (altura) e 200= fator de converso da diluio
22

O erro permitido varia entre 200.000 a 300.000 hemcias/mm3, ou em torno de 12%


quando a contagem feita vrias vezes na mesma preparao.
OBSERVAES
*Apesar de trabalhosa, a contagem manual de eritrcitos em cmara de Neubauer (em
triplicata) ainda utilizada em laboratrios de pequeno porte e sem automao.
*Pelo fato de os leuccitos no serem lisados nos procedimentos de diluio, esto
presentes na contagem dos eritrcitos. Em casos de hiperleucocitoses, a experincia em
diferenciar leuccitos de eritrcitos no hemocitmetro importante.

Valores de Referncia
Homem
Mulher
Recm-nascidos

4,5 a 6,0 milhes /mm3


4,0 a 5,5 milhes /mm3
4,0 a 6,0 milhes /mm3

2 - DETERMINAO DO HEMATCRITO
MTODO
Micromtodo microhematcrito
Corresponde ao volume compacto das hemcias em relao ao volume total de sangue.
AMOSTRA
Sangue total em EDTA 10%
MATERIAL
- Tubos capilares resistentes e de dimetro uniforme
- Grfico de leitura
- Bico de gs
- Centrfuga para microhematcrito
PROCEDIMENTO TCNICO
- Preencher com sangue o tubo capilar de 75 mm de comprimento at cerca de 2/3 do seu
volume, limpar o capilar com papel absorvente.
- Selar a extremidade vazia,(parte oposta que foi utilizada para aspirao do sangue) do tubo na
chama (Bico de Bunsen). Mant-lo horizontalmente e perpendicular chama.
- Colocar o tubo capilar na centrfuga de microhematcrito com a parte selada voltada para fora,
equilibrando-o com outro tubo. Observar a numerao evitando a troca de amostras.
- Centrifugar por 11.000 rpm, por 5 minutos.
- Leitura feita atravs de escala prpria.
- Colocar o tubo sobre a escala, fazendo coincidir o menisco inferior das hemcias com linha zero
e o menisco superior do plasma com a linha 100 e fazer a leitura ao nvel da separao entre
plasma e hemcias sedimentadas, desprezando-se a camada leucocitria.

23

Recomenda-se uma segunda centrifugao para hematcrito acima de 50%.


O microhematcrito at 3% maior que o hematcrito calculado (automatizado), devido ao
plasma retido entre as hemcias compactadas aps a centrifugao.

VALORES DE REFERNCIA
Homem
Mulher
Recm-nascidos
Crianas (at 3 meses)
Crianas (at 1 ano)
Crianas (3 a 6 anos)
Crianas (10 a 12 anos)

40 a 54%
37 a 47%
44 a 64%
32 a 44%
30 a 40%
36 a 44%
37 a 45%
DACIE e LEWIS

24

3 - DOSAGEM DE HEMOGLOBINA
FUNDAMENTO
Tem por princpio bsico a oxidao do on ferroso (divalente), da hemo, da oxi e da
carboxihemoglobina a ferro frrico (trivalente), pelo ferricianeto, com formao de
metahemoglobina, que se combina com o cianeto de potssio para produzir
cianometahemoglobina (cor vermelho - alaranjada), medida fotocolorimetricamente em 540 nm.
MTODO
Cianometahemoglobina
AMOSTRA
Sangue total em EDTA 10%
MATERIAL
- Micropipeta 20l
- Pipeta de 5 ml
- Ponteiras
- Tubo de hemlise
- Espectrofotmetro
- Soluo padro de hemoglobina
REAGENTES
Drabkin Modificado
K3Fe (CN)3 ........................................................................ 200 mg
KCN .....................................................................................50 mg
KH2PO4 ...............................................................................140 mg
STEROX SE ........................................................................ 0,5 mg
gua destilada q.s.p. ............................................................ 1.000 ml
Acondicionar em frasco de vidro escuro e conservar a temperatura ambiente.
PROCEDIMENTO TCNICO
- Em um tubo de hemlise pipetar 5 ml de lquido diluidor;
- Transferir para o tubo contendo o lquido diluidor 20 l de sangue homogeneizado;
- Agitar suavemente com o auxlio de uma micropipeta e homogeneizar por inverso, aguardar 5
minutos para a leitura;
- A leitura feita em espectrofotmetro calibrado em 540 nm;
- Fazer o mesmo com o sangue padro com concentrao conhecida.
O branco ser a prpria soluo de Drabkin; a cor estvel por 72 horas; o
procedimento de diluio do padro o mesmo da amostra.

CLCULO
Concentrao de hemoglobina = D.O x Fator
O fator dever ser obtido a partir da soluo padro, baseado no seguinte procedimento:
- Inicialmente transformar o valor do padro, expresso no rtulo em mg/dl para g/dl, dividindo por
1.000 e multiplicando pelo fator de diluio (250).
Ex: Soluo padro da BIOLAB-HEMATROL
Concentrao do Padro = 60mg/dL
Conc. Padro = 60 x 250/1.000
Conc. Padro = 15 g/dL
Em seguida preparar uma srie de 06 tubos com diferentes pontos de diluio. Exemplo:
25

TUBOS

Soluo
Padro
de
Hb (mL)

Soluo
Drabkin
modificado
(mL)

[ ] Hb
(g/dL)

D.O

FATOR

01

15,0

29,0

0,51

02

12,0

23,0

0,52

03

9,0

18,0

0,50

04

6,0

12,0

0,50

05

3,0

6,0

0,50

06

--------

-------

---------

(FATOR MDIO = 0,50)


F = [ ]/D.O
[ ]HB = F x D.O
Fator de correo  extremamente importante dosar em triplicata, utilizando a mdia das
absorbncias para o clculo do fator de correo.
Comentrios
Determinaes em duplicata no devem ter diferena superior a 0,3g/dl; nas
determinaes manuais, ter sempre o cuidado de usar tubos limpos e apropriados para o
espectrofotmetro.

Valores de Referncia
Homens
Mulheres

14 a 18 g/dl
12 a 16g/dl

26

4 - NDICES HEMATIMTRICOS
Relacionando-se os resultados da contagem de hemcias, da dosagem de hemoglobina e
das determinaes do hematcrito, obtm-se os ndices hematimtricos, que so de grande
importncia na avaliao da srie vermelha. Os principais ndices hematimtricos usados na
rotina so:

VCM (Volume Corpuscular Mdio)


VCM = Ht / No de hemcias (milhes) x 10

HCM (Hemoglobina Corpuscular Mdia)


HCM = Hb / No de hemcias (milhes) x 10

CHCM (Concentrao de Hemoglobina Corpuscular Mdia)


CHCM = Hb/Ht x 100

Valores de Referncia
VCM: 80 a 96 fL
VCM < 80  MICROCITOSE
VCM > 94  MACROCITOSE
HCM: 27 a 32 pg
HCM < 27  HIPOCROMIA E MICROCITOSE
HCM > 32  MACROCITOSE
CHCM: 32 a 36 %
CHCM < 32  HIPOCROMIA
CHCM > 36  ESFEROCITOSE

Definies
*Anisocitose: o aumento da variabilidade do tamanho das hemcias.
*Microcitose: a diminuio do tamanho mdio das hemcias.
*Macrocitose: o aumento do tamanho mdio das hemcias.
*Hipocromia: a diminuio da colorao das hemcias com conseqente aumento da regio de
palidez central das mesmas.
*Policromasia: descreve as hemcias que tem colorao rseo-azulada ou rseo acinzentada.
*Pecilocitose ou poiquilocitose: refere-se presena significativa de hemcias de forma
anormal.

27

LEUCOGRAMA
1 - CONTAGEM GLOBAL DE LEUCCITOS
AMOSTRA
Sangue total em EDTA 10%
MATERIAL
- Pipeta com divises de 0,01ml
- Micropipeta 20l
- Tubo de hemlise
- Cmara de Neubauer
- Microscpio ptico
REAGENTES
Lquido de Turk
cido actico glacial .....................................................................................3,0 ml
Violeta de Genciana ou Azul de metileno (sol. Aquosa 1%).........................1,0 ml
gua destilada q.s.p. ....................................................................................100,0 ml
PROCEDIMENTO TCNICO
- Em um tubo de hemlise pipetar 0,4 ml de lquido diluidor;
- Transferir para o tubo contendo o lquido diluidor 20 l de sangue homogeneizado;
- Agitar suavemente com o auxlio de uma micropipeta;
- Preencher o retculo da cmara evitando o excesso de lquido e bolhas de ar;
- Deixar sedimentar por 3 minutos;
- Fazer a contagem com objetiva de 10X, nos quatro retculos laterais da cmara;
- Sistematizar a contagem;
- Calcular o nmero de leuccitos/ mm3

A contagem dos leuccitos realizada nos quatro retculos laterias da cmara de


Neubauer, indicados na figura com a letra L.

28

CLCULO
Leuccitos/mm3 de sangue = Y x 20 x10/ 4
Leuccitos/mm3 de sangue = Y x 50
Onde: Y = nmero de leuccitos contados
20 = fator de converso da diluio
10 = fator de converso da altura da cmara
4 = fator de converso da rea.

Valores de Referncia
Adultos
Recm-nascidos
Crianas at 1 ano
Crianas de 4 a 7 anos

5.000 a 10.000/mm3
10.000 a 25.000/mm3
6.000 a 18.000/mm3
6.000 a 15.000/mm3
CARVALHO

OBSERVAES

Interferncia dos Eritroblastos na Contagem Global de Leuccitos 


como clulas nucleadas, os eritroblastos no so lisados pelo lquido de Turk e so contados
indistintamente como leuccitos na cmara de Neubauer. Desse modo, sua presena em sangue
perifrico ocasiona um aumento do nmero real de leuccitos.
CORREO
Durante a contagem diferencial, enumerar separadamente o total de eritroblastos (esses
no so includos entre os 100 leuccitos da contagem diferencial).
Leuccitos corrigidos = 100 x No de leuccitos/ 100 + No de eritroblastos em 100 leuccitos

* Colocar no hemograma a observao: presena de X eritroblastos em 100 leuccitos.

2 - CONTAGEM DIFERENCIAL DE LEUCCITOS


realizada em esfregaos de sangue (os valores porcentuais obtidos so inteiros, pois so
determinados com base na contagem de 100 clulas) corados pelos derivados de Romanowsky
por meio de microscopia ptica. Os valores absolutos de cada subtipo leucocitrio so
estabelecidos por regra de trs simples, baseada na contagem global e nos valores relativos
(percentual) de cada subtipo de leuccito observado ao esfregao.
Para amostras normais ela menos precisa que a automatizada, pois os contadores
estabelecem os valores relativos aps contagem de um nmero muito maior de clulas. A
contagem diferencial por microscopia inadequada para determinar eosinopenia, basopenia e/ou
monocitopenia. Para amostras alteradas, entretanto, o mtodo de referncia, pois no h
exatido na contagem automatizada quando clulas imaturas ou clulas anmalas esto
presentes na amostra.
29

So atribuies especficas da microscopia:


- Escalonar os neutrfilos em segmentados, bastonetes, metamielcitos, mielcitos e
promielcitos e mieloblastos.
- Forma correta de avaliar, com segurana se h ou no alteraes diplsicas eritrides e
leucocitrias, hipo ou hipergranulao neutroflica, hipo ou hipersegmentao neutroflica.
- Forma mais til de descrever os tipos de atipias leucocitrias e eritrocitrias
- nica forma de descrever morfologia dos blastos no sangue.

PROCEDIMENTO
Objetiva 100X leo de imerso
Condensador levantado e diafragma aberto.
A microscopia deve ampliar com nitidez a imagem das clulas em campos adequados, prximos
ao final da extenso de sangue, onde as clulas se encontram lado a lado, sem sobreposio.

PLAQUETOGRAMA
CONTAGEM DE PLAQUETAS
MTODO
Mtodo Direto
AMOSTRA
Sangue total em EDTA 10%
MATERIAL
- Tubo de plstico 12X75 mm
- Micropipeta 20l
- Pipeta de vidro de 1 ml
- Cmara de Neubauer
- Placa de Petri
- Microscpio
REAGENTES
Soluo de Oxalato de amnio a 1%
Oxalato de amnio .......................................1,00g
gua destilada qsp ......................................... 100 ml
Azul de metileno a 1% ..................................... 2 gotas
EDTA a 1%....................................................... 2 gotas
Guardar em geladeira
PROCEDIMENTO TCNICO
- Pipetar 0,4 ml de soluo diluidora no tubo de plstico;
- Transferir 20l de sangue para o tubo com a soluo diluidora (1:20)
- Homogeneizar suavemente sem formar espuma e aguardar 5 minutos;
- Homogeneizar novamente e encher a cmara de Neubauer;
- Colocar a cmara numa placa de petri contendo algodo mido, deixando a preparao por 20
minutos, para sedimentao das plaquetas;
- Fazer a contagem microscpica com aumento de 200X ou 400X em 1/5 de mm2 (5 quadrados
do quadro central). Sistematizar contagem!
30

CLCULO
Nmero de plaquetas/mm3= N X 20X 10 X 5
Nmero de plaquetas/mm3= N X 1000
N= nmero de plaquetas contadas
20= ttulo de diluio
10= fator de converso da profundidade da cmara
5= fator de converso da rea da cmara

Valor de Referncia
150.000 a 400.000/mm3

OBSERVAES:
- Um bom critrio de qualidade para obteno de resultados reprodutveis obter a contagem de
pelo menos 150 (200) plaquetas ao final da contagem dos cinco quadrantes do quadrado central.
- Para amostras plaquetopnicas, podero ser utilizados os protocolos que incluam diluies de
1:10 ( 20l sangue para 180l do diluente).
Nmero de plaquetas/mm3= N X 500
- Casos gravemente plaquetopnicos em que, mesmo com a utilizao da diluio 1:10, no seja
possvel contar pelo menos 150 plaquetas, fazer contagem em todo o retculo central.
Nmero de plaquetas/mm3= N X 100
Estimativa grosseira do n de plaquetas no esfregao sanguneo
- Contar 10 campos do esfregao corado
- Multiplicar por 13.000 = n de plaquetas /
l

VELOCIDADE DE HEMOSSEDIMENTAO (VHS)


Mtodo de Westergreen
AMOSTRA
Sangue total em EDTA 10%
MATERIAL
- Pipetas de Westergreen
- Relgio marcador de tempo
- Suporte apropriado para as respectivas pipetas
PROCEDIMENTO TCNICO
- Homogeneizar o sangue e encher a pipeta de Westergreen com o mesmo at a marca zero.
- Colocar a pipeta na posio vertical, fixando-a no suporte apropriado.
- Marcar o tempo.
31

- Aps 1 hora, ler a coluna de plasma formada, desde a marca zero at o nvel de encontro com
as hemcias.
- Expressar o resultado em mm
OBSERVAO:
O teste dever ser realizado at 6 horas aps a colheita do sangue
A conservao do sangue aps o perodo preconizado retarda a hemossedimentao

Valores de Referncia (Segundo MOURA 1977)


Sexo masculino 0-15 mm
Sexo feminino 0-20 mm
Crianas 0-10 mm

Suporte com pipetas de Westergreen para VHS


A verificao da sedimentao das hemcias atravs da velocidade de
hemossedimentao (VHS) pode ser clinicamente til em algumas doenas com atividade
inflamatria. Nos processos inflamatrios, as globulinas aumentadas no plasma, principalmente o
fibrinognio, interferem diminuindo a repulso entre as hemcias e favorecendo a aproximao.

32

TESTE DE FALCIZAO
FUNDAMENTOS
Entre lmina e lamnula lacrada por meio de esmalte e em presena de um agente redutor
(Metabissulfito de sdio), as hemcias que contm Hb S se cristalizam e adquirem a configurao
peculiar de foice, enquanto as hemcias normais no se falcizam. A falcizao se explica pela
polimerizao de desoxiemoglobina S. Um teste positivo necessrio para confirmar se uma
hemoglobina que migra ao nvel de S, por eletroforese alcalina, realmente esta hemoglobina.
MTODO
Daland e Castle
AMOSTRA
Sangue total em EDTA 10%
MATERIAL
- Microscpio
- Lminas e lamnulas
- Pipetas de Pasteur
- Placas de Petri
- Esmalte de unhas
REAGENTES
Soluo de Metabissulfito de Sdio a 2%
Metabisulfito de sdio ............................ 20mg
gua destilada ......................................... 1,0 ml
Esta soluo deve ser preparada no momento de realizar o teste
PROCEDIMENTO TCNICO
- Misturar em uma lmina de microscopia uma gota de sangue colhido em EDTA e uma da
soluo de metabisulfito de sdio a 2%.
- Cobrir a preparao com lamnula, vedando-a com esmalte de unha, para impedir a entrada de
oxignio. Deve-se tambm evitar a formao de bolhas de ar.
- Conservar a preparao em cmara mida (placa de petri com algodo embebido em gua)
- Observar em microscpio com 400X de aumento, aps 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 6 horas, 12
horas e 24 horas de incubao.

EXPRESSO DO RESULTADO
dado como positivo ou negativo

Precaues
A cmara mida deve ser colocada em lugar fresco, temperatura ambiente;
A vedao da lmina e lamnula fundamental
A concentrao do metabisulfito, bem como sua preparao no momento de uso so
pontos crticos.

33

TESTE POSITIVO DE FALCIZAO

RELATRIO DE RESULTADOS
A falcizao se explica pela polimerizao de desoxihemoglobina S. Um teste positivo
necessrio para confirmar se uma hemoglobina que migra ao nvel da S, por eletroforese alcalina,
realmente esta hemoglobina. O fenmeno da falcizao (teste positivo) ocorre em portadores
de Hb S, com variao de tempo entre os diferentes tipos: HbSS (1 a 3 horas); Hb SC e HbSD (6
a 12 horas); Hb S/talassemia beta (12 a 24 horas); Hb AS (12 a 24 horas). Entretanto esta relao
falcizao / gentipo / tempo no constante e tambm no serve para caracterizar gentipo.
Aps 24 horas, na ausncia de eritrcitos falcizados, o resultado ser dado como negativo.
LIMITAES DO MTODO
- A hemoglobina fetal aumentada, em associao com hemoglobina S, prejudica a falcizao.

34

CONTAGEM DE RETICULCITOS
FUNDAMENTOS
Os reticulcitos so hemcias jovens que, quando coradas com corantes supravitais, esses
se agregam aos ribossomos remanescentes da hemcia, formando um precipitado na forma de
uma rede. Os reticulcitos compreendem uma fase intermediria das hemcias entre a perda do
ncleo pelos eritroblastos, ainda na MO (permanecendo ainda ali por trs dias) e um dia no
sangue circulante, onde os ribossomos remanescentes vo diminuindo, at o estgio de
hemcias maduras. Heilmeyer classificou os retculcitos em quatro grupos I a IV, de acordo com
a agregao do corante. Normalmente, cerca de 1% das hemcias no sangue so reticulcitos,
principalmente dos tipos III e IV com menos precipitados. Nos processos de aumento da
eritropoese, a porcentagem de reticulcitos no sangue aumenta e surgem os reticulcitos dos
tipos I e II com mais precipitados, chamados de reticulcitos desviados, associados com a
presena de macrcitos policromticos e eventuais eritroblastos.

MTODO
Colorao Supra Vital
AMOSTRA
Sangue total em EDTA 10%
MATERIAL
- Tubo de hemlise
- Lminas para microscopia
- Pipetas de Pasteur
- Microscpio
- leo de imerso
REAGENTE
* Soluo Corante de Azul de Cresil Brilhante
Azul de cresil brilhante .................................1g
Citrato de sdio ............................................... 0,4g
Cloreto de sdio ............................................... 0,85g
gua destilada q.s.p. ....................................... 100 ml
Filtrar antes do uso. Renovar a soluo a cada 3 a 6 meses.
PROCEDIMENTO TCNICO
- Colocar 3 gotas da soluo corante num tubo de hemlise
- Adicionar 6 a 9 gotas de sangue,dependendo do hematcrito do paciente
- Agitar suavemente e incubar por 1 hora em banho-Maria a 370C
- Homogeneizar suavemente e fazer os esfregaos
- Secar os esfregaos e proceder a contagem com objetiva de imerso. Se preferir, corar os
esfregaos com o corante de Leishman ou Giemsa
- Contar 1.000 hemcias, anotando o nmero de reticulcitos encontrados
- Expressar o resultado em porcentagem.
35

CALCULOS
O nmero de reticulcitos no sangue pode ser relatado de modo relativo:
% de reticulcitos= No de reticulcitos / No de hemcias X 100
VALORES DE REFERNCIA
Adultos - 0,5 a 1,5% (2,0%)
Recm nascido at 10%
Ou preferencialmente de modo absoluto:
Reticulcitos/
l = % de reticulcitos/100 x No de hemcias
VALORES DE REFERNCIA
Adultos 25.000 a 85.000/ mm3
Recm nascido 100.000 a 300.000 mm3
Clinicamente, pode ser de interesse a correo dos reticulcitos:
1) Para a anemia:
Reticulcitos corrigidos (%) = % de reticulcitos x hematcrito do paciente/hematcrito normal
2) Para os reticulcitos desviados:
ndice reticulocitrio (IR) = reticulcitos corrigidos (%)/ dias em circulao
OBS  os dias em circulao so estimados em relao ao hematcrito:
Hematcrito
Dias
45%
1 dia
35%

1 dia e

25%

2 dias

15%

2 dia e

O IR se correlaciona com o nmero de eritroblastos na MO com resposta adequada, isto ,


com a eritropoese eficaz.
IR<1,8 - caracterstico das anemias por diminuio de produo (insuficincia medular na
produo de eritrcitos por carncia de fatores ou medula hipoproliferativa)
IR de 1,8 a 1,9 caracterstico das anemias hemolticas crnicas ou resposta a tratamento,
mesmo que tal resposta seja insuficiente para o grau de anemia.
IR>ou igual 3 indica aumento da produo eritride medular suficiente para o grau de
hemlise ou resposta apropriada das anemias por baixa produo em tratamento.

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COAGULOGRAMA

Consiste em uma srie de exames de triagem utilizados para avaliar a hemostasia.










Tempo de coagulao (TC)


Tempo de sangramento (TS)
Prova do lao (PL)
Retrao do cogulo (RC)
Tempo de protrombina (TAP ou TP)
Tempo de tromboplastina parcial ativado (TTPA)
Avaliao de plaquetas

Cuidados na coleta e realizao dos exames:

Informao sobre medicaes;


Coleta do sangue em tubos adequados;
Coleta do sangue por pessoas experientes;
Coleta do sangue usando o anticoagulante adequado;
As provas devem ser realizadas at 2 horas aps a coleta;

Tempo de coagulao (TC)


o tempo que o sangue leva para coagular em um tubo de ensaio a 37C, o TC mede a
via intrnseca da coagulao sangnea.
Mtodo Lee e White
VR: 4 a 10 minutos

Valor interpretativo do tempo de coagulao:


O TC um teste bastante grosseiro e sujeito a muitas interferncias, como:
dimetro do tubo, comprimento deste tubo, o ngulo de inclinao que dado ao
tubo quando se verifica a formao do cogulo, temperatura do banho-maria e tem
influncia da coleta.
Coletas traumticas ou garroteamento prolongado, interferem no TC.
Hemoflicos leves e moderados no apresentam alterao nos valores do TC.
um erro bastante grave adotar um procedimento cirrgico baseado apenas no TC
e TS.

Tempo de sangramento (TS)


o tempo necessrio para estancar uma hemorragia provocada por um estilete nos vasos
de pequeno calibre. O teste fornece dados relativos funo e nmero de plaquetas e a resposta
da parede capilar leso.
Ao praticar a leso em um capilar, h de imediato o fenmeno de contrao e agregao de
plaquetas no local do vaso lesado, estas iro formar um tampo plaquetrio obstruindo a parede
lesada fazendo com que o sangramento seja estancado.
MTODO
Duke
MATERIAL
- Lancetas para puno digital;
- Papel de filtro com 5 cm de dimetro;
- Cronmetro;
- Algodo embebido com lcool 70%;
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PROCEDIMENTO
- Fazer anti-sepsia do lbulo da orelha com lcool 70%;
- Fazer uma inciso no lbulo da orelha com a lanceta suficientemente funda para que o sangue
flua sem presso;
- Quando aparecer a primeira gota de sangue disparar o cronmetro;
- A cada 30 segundos remover o sangue com auxlio de um papel de filtro sem tocar na leso;
- Quando o sangue deixar de manchar o papel, parar o cronmetro;
- Anotar o tempo.
VALORES DE REFERNCIA
Normal 1 a 3 minutos
OBSERVAES

O TS um teste bastante importante porque mede a hemostasia primria "in vivo" e por
isto deve ser feito com bastante rigor tcnico.
Os profissionais que realizam o TS devem ser treinados e reciclados periodicamente.
O TS particularmente sensvel as alteraes plaquetrias tanto quantitativas como
qualitativas.
O TS especfico para a hemostasia primria, no mede, portanto, nenhuma via da
coagulao.
O TS importante no coagulograma seja com finalidade pr-operatria ou diagnstica,
quando realizado do modo correto.
O tempo de sangria avalia a interao da plaqueta com a parede do vaso sanguneo e a
formao subsequente do cogulo hemosttico de modo independente da cascata da
coagulao.
Existe uma relao quase linear entre a contagem de plaquetas e o tempo de sangria.
Utiliza-se como teste de rastreio para a Doena de vW e para Disfunes Plaquetrias
(congnitas ou adquiridas).
No discrimina defeitos vasculares de trombocitopenia ou de disfuno plaquetria.
No se correlaciona com a perda de sangue durante a cirurgia nem com a necessidade de
transfuses.

Prova do lao (PL)


A Prova do Lao ou Prova de Fragilidade Capilar, um teste que procura avaliar a capacidade
dos vasos de resistirem a uma presso. A prova avalia uma das funes pertinentes parte
vascular da hemostasia.
MTODO
Rumpel e Leed
MATERIAL
- Esfgnomanmetro;
- Caneta;
- Cronmetro.
PROCEDIMENTOS
- Observar o antebrao verificando a presena de possveis petquias, caso existam contorn-las
com caneta.
- Adaptar o esfgnomanmetro ao brao do paciente por 5 minutos a presso entre 9-10 mmHg;
- Aps a retirada do aparelho aguardar 10 a 2 minutos at que a circulao normalize, em
seguida observar as petquias formadas na regio do antebrao, pulso e mos.
RESULTADO
38

dado como positivo ou negativo, considerado normal o aparecimento de no mximo 5


petquias.
OBSERVAES:
-Antes de se iniciar o teste deve-se observar a rea abaixo da dobra do cotovelo, para ver se no
existe alguma mancha, pintas ou pequenas leses que posteriormente possam ser confundidas
com petquias.
-Recomenda-se que seja aguardado um tempo de pelo menos 1-3 minutos, aps a retirada da
presso, para que se faa a leitura do teste.

Retrao do cogulo (RC)


A retrao do cogulo fornece dados relativos atividade plaquetria. Uma retrao
pequena corresponde a um nmero de plaquetas abaixo de 100.000/mm3 de sangue. Nas
deficincias funcionais das plaquetas a prova pode estar alterada em presena de um nmero
normal de plaquetas.
MATERIAL
- Tubo de hemlise;
- Rolha de borracha ou papel parafilme;
- Banho Maria 37 C;
- Relgio.
PROCEDIMENTOS
- Colher 4 ml de sangue venoso e imediatamente aps, distribuir em 2 tubos de hemlise;
- Cobrir os tubos com parafilme ou tampar com rolha de borracha e coloc-los em banho Maria a
37 C. Observar a retrao do cogulo aps 2 horas.
OBSERVAES
Aps a coagulao do sangue, o cogulo formado retrai-se ou mais precisamente, retrai-se
a rede de fibrina, retendo os elementos figurados do sangue e liberando a parte lquida, o
soro.
A retrao do cogulo devida liberao de substncias, pelas plaquetas nos pontos de
interseco das malhas da rede de fibrina.
A retrao de cogulo est relacionada diretamente ao nmero e funcionalidade das
plaquetas e inversamente proporcional ao grau de anemia.
Mede especificamente a hemostasia primria.
RESULTADO
A retrao do cogulo poder ser completa (total), parcial ou nula
No caso da retrao total, o cogulo dever ter se desprendido circularmente das paredes
do tubo, bem como do fundo, ficando preso a superfcie circular, o que se observa pela
transparncia do soro entre o cogulo central e a parede do tubo.
No caso da retrao parcial, o cogulo no se desprende totalmente das paredes e fundo
do tubo e sim somente de parte dele.
No caso de retrao nula, no ocorre nenhuma retrao do cogulo.

CUIDADOS
Quando no ocorre retrao do cogulo nas duas horas, deve-se deixar o tubo em banhomaria at 24 horas, para ento liberar o resultado de cogulo no retrtil (irretrtil).
Deve-se ter a certeza de que os tubos utilizados neste teste esto limpos.
39

Realiza-se o teste em duplicata para evitar erros que podem ocorrer em funo de
resduos de material de limpeza imperceptveis que podem afetar o resultado. Pode
acontecer de a retrao ser total em um tubo e nula em outro, o que demonstra que no
tubo em que no houve retrao havia algum interferente. Mesmo assim se a dvida
persistir, deve-se repetir a coleta e realizar novamente o teste.

Tempo de Protrombina (TAP ou TP)


O teste tempo de protrombina a prova de escolha para a investigao do sistema extrnseco
da coagulao, permitindo revelar deficincias dos fatores que tomam parte deste sistema (I,II,V,
VII e X) e via comum .O teste de TAP mede o tempo necessrio para um cogulo de fibrina se
formar em uma amostra de plasma citratado aps a adio de ons de clcio e tromboplastina de
tecido (fator III).
MTODO
Quick

utilizado principalmente para:


Monitorar a terapia com anticoagulantes orais,
Triagem para distrbios da coagulao,
Prova de funo heptica
Pr-operatrio

AMOSTRA
- A agulha deve penetrar diretamente a veia e na primeira tentativa. No se deve realizar os
testes em amostra cuja puno foi difcil (traumtica);
- Misturar cuidadosamente o sangue por inverso (juntamente com o citrato de sdio), centrifugar
o mais rpido possvel por 10 minutos a 3.000 rpm. Separar o plasma e deixar a temperatura de
20-25 C at a realizao do teste.
MATERIAIS
- Pipeta de Pasteur plstica;
- Tubos de hemlise de plstico;
- Crnometro;
- Pipetas de preciso de 100 e 200l;
- Cubetas plsticas para coagulmetro Quick Timer Drake;
- Coagulmetro Quick Timer- Drake.
REAGENTES
- Tromboplastina clcica liofilizada: deve ser diluda com gua deionizada e incubada segundo as
recomendaes da bula do reagente;
- Plasmas controle normal e anormal ou pool de plasmas coletados no prprio laboratrio e
imediatamente centrifugados e aliquotados em amostras que devem ser congeladas, tendo
validade de 30 dias.
PROCEDIMENTOS
- Uma vez ligado o Quick Timer entra em aquecimento, permanecendo assim at que o bloco
atinja temperatura mnima de trabalho (36,2 C). Com exceo da tecla RES, que permite
consultar resultados anteriores, todas as outras ficaro desabilitadas durante o aquecimento.
Aps o aquecimento pressione a tecla test e aparecer no visor o menu de testes. Selecione o
TP.

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- Coloque 100l de plasma de controle e de cada paciente respectivamente, em uma cubeta


plstica de leitura contendo uma barrinha metlica. Incube por exatamente 1 min cada amostra.
Coloque ento a primeira amostra no poo de leitura e adicione 200 l de tromboplastina clcica
preparada de acordo com as recomendaes do fabricante. Ao final da reao aparecer no visor
o resultado em segundos e porcentagem de atividade. Apertar a tecla INR para obter o
resultado em INR. Repetir o procedimento para as amostras de cada paciente.
- Os resultados alterados devero ser repetidos para confirmao. Se houver alguma dvida em
relao ao resultado ou incoerncia com relao ao uso de medicamentos pelo paciente, deve-se
solicitar uma nova coleta do material.

37C/2

Plasma (100 l)

Tromboplastina
200 l

clcica

Tempo de formao do cogulo


(s)

Como expressar o resultado?


Tempo em segundos (VR 10-14s depende do kit)
% de atividade (VR 70-100%)
INR (relao normatizada internacional):
(Tempo do paciente\tempo do pool 100%) ISI
Quanto mais baixo o ISI (International Sensitivity Index), maior a sensibilidade da
tromboplastina (qto mais perto de 1,0 melhor) (VR at 1,2)

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REFERENCIAIS DE ALVOS TERAPUTICOS


Maioria das situaes com indicao de anticoagulao
2.0-3.0
Preveno e tratamento de trombose venosa
Embolia pulmonar, sistmica
Embolia arterial ps-operatria
Infarto agudo do miocardio
Doena de vlvula cardaca
Fibrilao atrial
.......................................................................
Prtese cardaca
2.5-3.5
.......................................................................
........
Formas recidivantes de trombose venosa profunda
3.0-4.0
Formas recidivantes de embolia pulmonar
.......................................................................

Tempo de tromboplastina parcial ativado (TTPA)


o tempo de coagulao do plasma aps recalcificao na presena de um substituto
plaquetrio (cefalina) e de um ativador (derivado do cido elgico). Pesquisa os fatores da
coagulao do sistema intrnseco e comum (I,II,V, VIII, IX, X, XI, XII)
Utilizado para:
Testes de triagem;
Deteco de deficincia de fatores da coagulao da via intrnseca ou comum;
Deteco de inibidores dos fatores das vias comum e intrnseca;
Monitorar a anticoagulao com heparina (1,5 a 2,5 VR);
Screening do anticoagulante lpico
MTODO
Bell-Alton
AMOSTRA
- A agulha deve penetrar diretamente a veia e na primeira tentativa. No se deve realizar os
testes em amostra cuja puno foi difcil (traumtica);
- Misturar cuidadosamente o sangue por inverso (juntamente com o citrato de sdio), centrifugar
o mais rpido possvel por 15minutos a 3.000 rpm para obter um plasma deficiente de plaquetas.
Separar o plasma e deixar em tubo plstico a temperatura de 20-25 C at a realizao do teste.
- O teste dever ser realizado at 3 horas aps a coleta. No caso de superviso de tratamento
heparina, a centrifugao e o teste devem ser realizados na hora seguinte coleta.
MATERIAIS
- Pipeta de Pasteur de plstico;
- Tubos de hemlise de plstico;
- Cronmetro;
- Pipetas de preciso de 100l;
- Cubetas plsticas para coagulmetro Quick Timer Drake;
- Coagulmetro Quick Timer- Drake.
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REAGENTES
- Soluo tamponada de cefalina e ativador do cido elgico. Conservar a 2-8 C at a data do
vencimento indicada na embalagem;
- Cloreto de clcio 0,025 mol/L;
- Quando o cloreto de clcio no acompanha o Kit de reagentes para a realizao do TTPa, o
cloreto de clcio 0,025 mol/L pode ser praparado no laboratrio;
- Plasmas controle normal e anormal ou pool de plasmas coletados no prprio laboratrio e
imediatamente centrifugados e aliquotados em amostras que devem ser congeladas, tendo
validade de 30 dias.
PROCEDIMENTOS
- Uma vez ligado o Quick Timer entra em aquecimento, permanecendo assim at que o bloco
atinja temperatura mnima de trabalho (36,2 C). Com exceo da tecla RES, que permite
consultar resultados anteriores, todas as outras ficaro desabilitadas durante o aquecimento.
Aps o aquecimento pressione a tecla test e aparecer no visor o menu de testes. Selecione o
TTPa.
- Coloque 100l de plasma, do controle e de cada paciente respectivamente, e 100l de cefalina
ativada em uma cubeta plstica de leitura contendo uma barrinha metlica. Incube por
exatamente 3 min cada amostra nos orifcios existentes no bloco aquecido do Quick timer.
Coloque ento a primeira amostra no poo de leitura e adicione 100l de cloreto de clcio
0,025mol/L previamente aquecido a 37 C. Ao final da reao aparecer no visor o resultado em
segundo.
- Os resultados alterados devero ser repetidos para confirmao. Se houver alguma dvida em
relao ao resultado ou incoerncia com relao ao uso de medicamentos pelo paciente, deve-se
solicitar uma nova coleta do material.

+
Plasma (100 l)

3/37C

Cefalina-slica micronizada
100 l

CaCl2
100 l

Tempo de formao do cogulo


(s)
RESULTADO: 22-35 segundos

Referncias Bibliogrficas
1. OLIVEIRA, R.A.G. Hemograma: Como Fazer e Interpretar. 1a ed. So Paulo: LMP, 2007.
2. ROSENFELD, R. Fundamentos do Hemograma do laboratrio Clnica. 1a ed Rio de Janeiro :
Ganabara Koogar, 2007
3 Recomendaes da Sociedade Brasileira de Patologia Clnica/Medicina Laboratorial para coleta de
sangue venoso - (2 edio) Editora Manole Ltda, 2009.

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