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BIOQUMICAS
DOCENTE: Q.F. PEDRO JACINTO HERVIAS
PRUEBAS BIOQUMICAS
La identificacin
definitiva de una
especie requiere
de pruebas
bioqumicas.
Permiten conocer
las actividades
metablicas y
enzimticas de
los
microorganismos.
PRUEBAS BIOQUMICAS
Se debe conocer:
1.- Cambios que se producen
2.- Reacciones qumicas que ocurren
3.- Enzimas que intervienen
4.- Productos intermedios
5.- Secuencias de las reacciones bioqumicas
PRUEBAS BIOQUMICAS
SS + SD
PB
PRUEBAS IMVIC
Incluyen
un
diferenciar
grupo
los
de
cuatro
pruebas
microorganismos
Enterobacteriaceae)
INDOL
ROJO DE METILO
VOGES PROSKAUER
CITRATO.
usadas
entricos
para
(Familia
Accin
sobre
los
hidrat
os de
carbo
no
Primer da
Inocula cada tubo de caldo lactosado con E.coli,
S.aureus, P.vulgaris.
Toma un cuarto tubo sin sembrar como control.
Rotula los tubos e incuba todos los tubos a 37C por
24 horas.
Segundo da
Despus del perodo de incubacin, compara cada uno
de los tubos inoculados, con el tubo control.
Cuando la bacteria ha degradado el hidrato de
carbono (lactosa), se detecta por la inclusin del
indicador de Andrade.
Si el microorganismo tiene la capacidad de desdoblar
un subproducto metablico a CO2 e H+ se observar
la presencia de gas, en forma de burbujas.
1.
Accin
sobre
los
hidratos
de
carbono
Primer da
Con ayuda del lpiz de cera, divida por
fuera la base de la placa Petri en 3 partes.
En la seccin 1, siembra B. Subtilis, en la
seccin 2 siembra E. Coli y en la seccin 3
siembra Ps. aeruginosa
Incuba a 37C por 24 horas
Segundo da
Agrega a toda la superficie del medio la
solucin de lugol.
Observa la reaccin alrededor del
crecimiento microbiano
BUTILENGLICOLICA
ACETIL-METILCARBINOL
(ACETONA)
INDICADOR ROJO DE
METILO
REACTIVO DE BARRET
COLOR ROJO MR +
COLOR ROSADO VP +
Accin
sobre
los
hidrat
os de
carbo
no
FUNDAMENTO:
GLUCOSA
FERMENTACIN BUTILENGLICLICA
REACTIVO DE BARRETT
KOH 40%
NEGATIVO
POSITIVO
ACETIL-METIL-CARBINOL
(ACETONA)
Accin
sobre
los
hidrat
os de
carbo
no
Primer da
Rotula los tubos con el nombre del microorganismo.
Por la tcnica de inoculacin, siembra cada cepa (E.
coli y Enterobacter) en su tubo correspondiente.
Incuba a 37C por 48 a 72 horas.
Segundo da
Agrega 4 5 gotas del indicador rojo de metilo a
cada tubo, cuyo rango de viraje esta entre pH 4.4
(rojo) y 6.0 (amarillo).
La prueba es negativa si da una coloracin amarillo
naranja.
La prueba es positiva si se mantiene un color rojo
estable.
FUNDAMENTO:
FERMENTACIN CIDO MIXTA
GLUCOSA
pH CIDO
+
CO2, H2 y ETANOL
COLOR ROJO
NEGATIVO POSITIVO
INTERPRETACIN:
tiempo de incubacin se
aaden 5 gotas del reactivo
de
Rojo
agitar).
de
Metilo
(no
Accin
sobre
los
hidrat
os de
carbo
no
Primer da
Segundo da
1.
Medio S/D
Permite evidenciar:
Capacidad de produccin de cido y gas a partir de
glucosa, sacarosa y lactosa en un nico medio.
2.
PRUEBA TSI
PRUEBA TSI
FUNDAMENTO:
PRUEBA TSI
PROTOCOLO:
1.- Se inocula los tubos de TSI
con punta.
2.-
Se
introduce
la
punta
ESTRIACION EN ZIGZAG
PRUEBA TSI
INTERPRETACIN:
Se debe considerar los
cambios de color en el
pico y el fondo del tubo y
la formacin de burbujas.
Cuando el medio es cido
(A) este se torna de color
amarillo y cuando es
alcalino (ALK)
permanece de color rojo.
PRUEBA TSI
PRUEBA TSI
el
proceso
de
fermentacin, en el fondo
del
medio
se
observan
Si
las
bacteria
son
como
negro
un
en
el
Tubo
4A
Fermentacin de Glucosa
Produccin de gas
Fermentacin de Lactosa y
Sacarosa
Produccin de SH2
Hidrlisis de la gelatina:
Accin
sobre
las
proten
as
Primer da
Rotula cada tubo con el nombre de la
cepa correspondiente: E. Coli y B. Subtilis.
Inocula cada cepa en un tubo con
gelatina, haciendo uso de un asa en
punta, introduciendo de manera vertical
hasta el fondo del tubo.
Incuba a 37C por 24 horas.
Segundo da
Observa los resultados. Observa la
hidrlisis de la gelatina
Produccin de indol:
Accin
sobre
las
proten
as
Primer da
Rotula sus tubos con el nombre del microorganismo: E.
coli y B. subtilis.
Inocula cada cepa en su tubo correspondiente.
Incuba a 37C por 24 horas
Segundo da
Agrega 4 gotas del reactivo de Kovacs, dejando
resbalar por la pared interna de cada tubo que presenta
desarrollo bacteriano, luego agite suavemente.
La reaccin es positiva, si se forma un anillo de color rojo
fucsia brillante en la zona superior del tubo, pocos
segundos despus de haber agregado el reactivo.
Las bacterias que a pesar de desarrollar en el medio no
producen indol, permanecern sin cambio alguno
(reaccin negativa).
PRUEBA DE INDOL
FUNDAMENTO:
TRIPTOFANASA
H2O + TRIPTOFANO
INTERPRETACIN:
NEGATIVO
POSITIVO NEGATIVO
POSITIVO
Accin
sobre
las
proten
as
Primer da
Por la tcnica de puntura y estra,
siembra separadamente en el medio
TSA las cepas de E. coli y P. vulgaris.
Coloca una tira de papel de filtro
impregnada con acetato de plomo.
Incuba a 37C por 24 horas
Segundo da
Observa el ennegrecimiento del papel
de filtro, por la produccin del sulfuro
de hidrgeno (reaccin positiva).
Prueb
as
bioqu
micas
difere
nciale
s
Primer da
Siembra por la tcnica de estra en
cada tubo con las cepas de E.coli y
Enterobacter aerogenes.
Incuba a 37C por 24 horas
Segundo da
La prueba es positiva si observa
crecimiento bacteriano y un color azul
intenso del agar en 24 a 48 horas.
Es negativa si no hay crecimiento ni
cambio de color.
PRUEBA DE CITRATO
CITRATO
PIRUVATO
CO2 + Na + H2O
PRUEBA
Na2CO3
Ph ALCALINO
AZUL DE
BROMOTIMOL
+
COLOR AZUL
PRUEBA DE CITRATO
PROTOCOLO
1.- Se inocula el agar de superficie inclinada con
una sola estra en la superficie.
2.- Se incuba a 35 - 37C durante 24 horas y se
realiza la lectura de la prueba.
PRUEBA DE CITRATO
INTERPRETACIN:
Es
positiva
cuando
se
observa crecimiento a lo
largo de la estra, y este se
acompaa
viraje
del
o no de un
indicador
de
una
reaccin
POSITIVO
NEGATIVO
Hidrlisis de la rea:
Prueba
s
bioqu
micas
diferen
ciales
Primer da
Por la tcnica de estra, siembra los
tubos con medio de urea con E.coli y
P.vulgaris. No inocular el fondo.
Rotula e incuba a 37C por 24 horas.
Segundo da
La prueba es positiva si el medio
presenta un color rosado en la
superficie o en todo el tubo.
La prueba es negativa, si el medio
permanece del color original.
PRUEBA DE LA UREASA
FUNDAMENTO:
UREASA
UREA
2 MOLCULAS DE NH4
pH ALCALINO
RESULTADOS
COLOR FUCSIA
ROJO DE FENOL
PRUEBA DE LA UREASA
PROTOCOLO:
INTERPRETACIN:
NEGATIVOPOSITIVO
NEGATIVO POSITIVO
Agar rea de Cristensen
Prueba de la catalasa:
Prueba
s
bioqu
micas
diferen
ciales
Prueba
s
bioqu
micas
diferen
ciales
La presencia de citocromo C
oxidasa en la cadena de
trasporte de e- puede
detectarse utilizando un
aceptor de e- artificial pfenilendiamina. Este test se
usa para diferenciar
pseudomonas (positivo) de
enterobacterias (negativo)
Se impregnan discos de papel
con parafenilandiamina y se
coloca en un cultivo creciendo
en placas de agar nutritivo.