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CB Virtual 1

Universidade Federal da Paraba


Universidade Aberta do Brasil
UFPB VIRTUAL
COORDENAO DO CURSO DE LICENCIATURA EM CINCIAS BIOLGICAS DISTNCIA
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Fone: 3216-7781 e 8832-6059
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UFPB

Curso de Licenciatura em Cincias


Biolgicas Distncia

Reitor

Coordenador

Rmulo Soares Polari

Rafael Angel Torquemada Guerra


Coordenao de Tutoria

Pr-Reitor de Graduao
Mrcio Bernardino da Silva
Valdir Barbosa Bezerra
Coordenao Pedaggica
UFPB Virtual

Isolda Ayres Viana Ramos

Coordenador

Coordenao de Estgio

Lucdio dos Anjos Formiga Cabral

Paulo Csar Geglio


Apoio de Designer Instrucional

Centro de Cincias Exatas e da Natureza


Luizngela da Fonseca Silva
Diretor
Artes, Design e Diagramao
Antnio Jos Creo Duarte
Romulo Jorge Barbosa da Silva
Departamento de Sistemtica e Ecologia

Apoio udio Visual

Chefe

Edgard Adelino Ruiz Sibro

Juraci Alves de Melo

Ilustraes
Christiane Rose de Castro Gusmo

Fotos da contracapa: Rafael Angel Torquemada Guerra


Arte e Montagem da Contracapa: Romulo Jorge Barbosa da Silva

C 569 Cadernos Cb Virtual 1 / Rafael


Angel Torquemada Guerra ... [et al.].Joo Pessoa: Ed. Universitria, 2011.
516 p. : II.
ISBN: 978-85-7745-678-9
Educao a Distncia. 2. Biologia
I. Guerra, Rafael Angel Torquemada.
UFPB/BC
CDU: 37.018.43

Este material foi produzido pelo curso de Licenciatura em Cincias Biolgicas a


Distncia da Universidade Federal da Paraba. A reproduo do seu contedo
est condicionada autorizao expressa da UFPB.

Biologia e Fisiologia Celular

BIOLOGIA E FISIOLOGIA CELULAR


Prof. Luis Fernando Marques dos Santos
UNIDADE 1
MTODOS DE ESTUDO DA CLULA
As clulas podem ser classificadas em dois tipos distintos: procariticas e eucariticas. As
clulas procariticas so desprovidas de endomembranas, no apresentando, portanto, organelas
intracelulares. Nestas clulas, o material gentico encontra-se disperso no citosol. A rea das
cincias biolgicas que estuda as clulas procariticas a microbiologia. As clulas eucariticas
(eu, verdade + karyon, ncleo), por sua vez, possuem um sistema de endomembranas
responsvel pela compartimentalizao do espao intracelular e conseqente formao das
organelas, entre as quais podemos citar: o ncleo; a mitocndria; os peroxissomos; os
lisossomos; o retculo endoplasmtico; e o complexo golgiense, entre outras (figura 1.1). A
estrutura e a fisiologia das clulas eucariticas so estudadas pela Biologia Celular. At o final da
dcada de 1970, grande parte do conhecimento acerca das clulas eucariticas era restrito aos
aspectos morfolgicos. Naquela poca, a Biologia Celular era mais conhecida como Citologia. A
partir de meados da dcada de 1980, com a incorporao de novas tecnologias, a clula passou a
ser revelada sob um prisma molecular e funcional. baseada nessa viso contempornea que
faremos a nossa viagem pelas clulas eucariticas.

Figura

1.1

Esquema

ilustrativo

de

uma

clula

eucaritica.

http://en.wikipedia.org/wiki/File:Endomembrane_system_diagram_en.svg

Modificado

de

Biologia e Fisiologia Celular

1. UM POUCO DE HISTRIA
1665! Este o ponto de partida da nossa jornada pela clula. Neste ano, o cientista
britnico Robert Hooke publicou o livro intitulado Micrographia. Trata-se do primeiro registro de
um trabalho cientfico utilizando a microscopia como ferramenta de estudo para a observao e a
descrio de um material biolgico. Desde ento, uma srie de conquistas tecnolgicas
permitiram, aos cientistas, uma maior aproximao do mundo microscpico, revelando, aos
poucos, o maravilhoso mundo celular e at mesmo subcelular.
Diversos pesquisadores do sculo XVII contriburam para os primrdios da Biologia
Celular, ramo da cincia que estuda as clulas e que inicialmente era denominado de Citologia.
Alguns destes pesquisadores merecem destaque, como Antonie van Leeuwenhoek, microscopista
holands, que no ano de 1674 reportou a descoberta de protozorios flagelados. Um ano mais
tarde, o pesquisador relata a descoberta dos glbulos vermelhos sanguneos em humanos,
peixes, anfbios e sunos. Em 1677, Leeuwenhoek descreveu, pela primeira vez, o
espermatozide em diversas espcies, tais como: peixes, anfbios, aves, ces e seres humanos.
Leeuwenhoek acreditava que os espermatozides eram parasitas que residiam nos rgos
sexuais masculinos. No ano de 1683, o cientista holands, observou, pela primeira, uma bactria
ao estudar o trtaro dentrio, descrevendo em seguida a presena de bactrias e protozorios
nas fezes. Leeuwenhoek contribuiu, ainda, para o aprimoramento da microscopia, desenvolvendo
uma srie de microscpios e lentes especiais, marcando de vez o seu nome na histria da
biologia celular e da Microbiologia. Seus estudos sobre a morfologia dos espermatozides de
diversas espcies levaram o cientista alemo Nicolaas Hartsoeker, inventor do microscpio
simples parafuso-barril, a postular a hiptese do homnculo (figura 1.2), onde propunha que o
espermatozide continha um indivduo completamente pr-formado em seu interior. O
desenvolvimento de novos indivduos seria, portanto, apenas uma questo de crescimento do
homnculo. O conceito do homnculo ia de encontro hiptese hereditria do preformacionismo.

Figura 1.2 - Ilustrao do Homnculo. Nicolaas Hartsoeker, 1695.


Fonte:http://en.wikipedia.org/wiki/File:Preformation.GIF

Na dcada de 30 do sculo XIX, o botnico alemo Matthias Jakob Schleiden e o


fisiologista alemo Theodor Schwann propuseram a Teoria Celular, declarando que a clula a
unidade bsica estrutural e funcional de todos os seres vivos, e que todas as clulas se originam
de clulas pr-existentes. Alguns autores consideram este fato como marco formal do nascimento
da Biologia Celular. Schwann foi um cientista bastante ativo, combatendo com veemncia a Teoria
da Gerao Espontnea, que preconizava a origem de seres vivos a partir de matria inanimada.
Schwann atuou, tambm, na rea de bioqumica, estudando a fermentao alcolica por fungos e
foi responsvel por cunhar o termo metabolismo. As clulas da glia (do grego, cola) que recebem

Biologia e Fisiologia Celular

o nome de Clulas de Schwann, e esto associadas transmisso do impulso nervoso, uma


justa homenagem a este nobre pesquisador.
O ncleo foi a primeira organela celular a ser descrita. A descrio do ncleo atribuda
ao botnico escocs Robert Brown, que no ano de 1838 observou a organela ao estudar clulas
de orqudeas. Entretanto, alguns autores ressaltam que estudos realizados por Leeuwenhoek, no
sculo XVII, j reportam a observao de ncleo em hemcias de salmo, que, ao contrrio das
hemcias de mamferos, so nucleadas. A segunda organela a entrar para a histria foi a
mitocndria, descrita inicialmente por Albert von Klliker no ano de 1857. Klliker foi um cientista
brilhante. O cientista suo foi o primeiro a isolar uma clula de um tecido muscular liso, dando
incio a uma tcnica fundamental na biologia celular que a obteno de clulas isoladas de
tecidos para o estabelecimento de culturas celulares primrias. Alm desta importante
contribuio, Klliker escreveu os primeiros tratados sobre Histologia e Embriologia humana. Seus
estudos sobre a origem dos gametas masculinos e femininos o levaram a propor, muitas dcadas
antes da descoberta do DNA, que o ncleo era responsvel pela hereditariedade.
No ano de 1879, o bilogo alemo Walther Flemming, ao estudar o processo de diviso
celular em guelras de salamandras, descreve, com uma preciso e clareza impressionantes, o
comportamento dos cromossomos durante a mitose (figura 1.3). Os trabalhos de Flemming o
colocaram no patamar de um dos mais importantes citologistas da histria. Flemming foi
homenageado, posteriormente, ao ter o seu nome associado a uma medalha que concedida
pela Sociedade Alem de Biologia Celular (Deutschen Gesellschaft fr Zellbiologie) para grandes
contribuies nesta rea da cincia.
Nos anos de 1882 e 1883, o mdico e pesquisador alemo Heinrich Hermann Robert
Koch, utilizando a anilina como corante, identificou os microorganismos causadores da
tuberculose (Mycobacterium tuberculosis) e da clera (Vibrio cholerae). A tuberculose era uma
das principais causas de morte no sculo XIX. Por sua descoberta, Robert Koch foi contemplado
com o Prmio Nobel de Fisiologia e Medicina no ano de 1905. Koch considerado, junto com
Louis Pasteur, um dos fundadores da Microbiologia.
O uso de tcnicas para a visualizao de tecidos e clulas comea a despontar no final
do sculo XIX. O cientista alemo Paul Ehrlich foi um dos que contribuiu bastante para o
desenvolvimento das tcnicas de colorao, tendo sido o primeiro pesquisador a utilizar a
fluorescena como corante celular. Sua tese de doutorado, defendida no ano de 1878, foi um
estudo sobre a teoria e a prtica de colorao de tecidos animais. Ehrlich demonstrou que os
corantes poderiam ser classificados como bsicos, cidos ou neutros. Os seus trabalhos sobre a
colorao dos grnulos de clulas sanguneas so um marco na histria da hematologia, alm de
terem contribudo sobremaneira para a biologia celular. Ehrlich foi um cientista fabuloso, tendo
atuado em diversas reas, tais como: a j citada hematologia; a imunologia, atravs da qual ele
recebeu o Prmio Nobel de Fisiologia e Medicina em 1908; e a quimioterapia. Ehrlich foi o
fundador da quimioterapia ao criar o primeiro frmaco sinttico, o salvarsan, que foi utilizado, a
partir da dcada de 1910, no tratamento da sfilis. Ehrlich ainda contribui para a cincia pelos seus
estudos sobre a barreira hematoenceflica e pelo estabelecimento do conceito de receptores
celulares.

Biologia e Fisiologia Celular

Figura 1.3 - Ilustrao original dos estudos


de Walther Flemming sobre a diviso
celular.
Fonte: Zell-substanz, Kern und Zelltheilung,
Flemming, 1882.

No final do sculo XIX, o Complexo Golgiense, conhecido anteriormente por Complexo


de Golgi, terceira organela a entrar para a histria. O fisiologista italiano Camillo Golgi, utilizando
tcnicas de impregnao de tecidos com metais pesados, foi primeiro a descrever a organela, no
ano de 1898. Os trabalhos de Camilo Golgi foram fundamentais para que o mdico e pesquisador
espanhol Santiago Ramn y Cajal, juntamente com outros histologistas, desenvolvessem mtodos
de colorao que permitiriam o estabelecimento das fundaes da anatomia microscpica. Os
estudos de Cajal o levaram concluso de que as unidades bsicas do sistema nervoso eram
representadas por elementos celulares individualizado, posteriormente denominados de neurnios
pelo anatomista alemo Heinrich Wilhelm Gottfried von Waldeyer-Hartz. Cajal considerado, por
muitos, o fundador da neuroanatomia por estabelecer os princpios bsicos da organizao do
sistema nervoso. Camilo Golgi e Santiago Ramn y Cajal foram agraciados, no ano de 1906, com
o Prmio Nobel de Fisiologia e Medicina.
:: SAIBA MAIS... ::
Conhea um pouco mais sobre a vida de Paul Ehrlich, Camilo Golgi e
Santiago Ramn y Cajal nos endereos abaixo.
Nobel Prize Foundation:
http://nobelprize.org/nobel_prizes/medicine/laureates/1908/ehrlich-bio.html
http://nobelprize.org/nobel_prizes/medicine/laureates/1906/golgi.html
http://nobelprize.org/nobel_prizes/medicine/laureates/1906/cajal-bio.html

2. UM POUCO DE TECNOLOGIA AJUDA...


Estudar clulas no sculo XIX no era uma tarefa muito fcil. Os microscpios ainda
apresentavam uma srie de restries. A construo do primeiro microscpio composto foi
sugerida por Kepler no ano de 1611. At ento, grande parte dos microscpios eram simples, ou
seja, constitudos por apenas uma nica lente. Somente no final do sculo XIX comearam a
surgir os primeiros microscpios binoculares e os microscpios com vrias objetivas, o que
permitia uma observao mais apropriada do material biolgico (o revlver, pea que d suporte a
mais de uma objetiva foi inventada por Ernst Leitz no ano de 1873). Entretanto, ainda era

Biologia e Fisiologia Celular

necessrio aprimorar o sistema ptico. Os trabalhos tericos do fsico alemo Ernst Karl Abbe, em
conjunto com o desenvolvimento de um sistema adequado de lentes, pelo, tambm alemo, Carl
Zeiss, permitiram um avano extraordinrio no campo da microscopia. Zeiss construiu uma srie
de lentes que permitiram a obteno de imagens no limite terico da luz visvel. Era o incio de
uma nova era.
Em 1924, os cientistas franceses Antoine Lacassagne e Jeanne Latts, ao injetarem
polnio radioativo em ratos e coelhos, desenvolveram uma nova metodologia para a observao
de rgos e tecidos animais sob microscopia ptica. A nova tcnica foi denominada
autohistorradiografia e abria novas possibilidades de investigao celular e tecidual.
:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
Faa uma pesquisa sobre os istopos radioativos e a sua aplicabilidade
nas cincias biolgicas!

Em 1930, Lebedeff projetou e construiu o primeiro microscpio de interferncia. Dois


anos mais tarde, o fsico holands Frits Zernike inventou o microscpio de contraste de fase,
mudando os paradigmas da microscopia e da biologia celular. At ento, o uso de corantes era
obrigatrio para a visualizao das estruturas internas de uma clula e como veremos adiante, o
uso de corantes implica na morte da clula. Com o advento do microscpio de contraste de fase
passa a ser possvel visualizar algumas estruturas intracelulares sem a necessidade do uso de
corante, portanto, em clulas vivas! Zernike procurou negociar a patente do seu invento com
alguns fabricantes de microscpios, incluindo a j poderosa Zeiss, que subestimaram o potencial
do seu microscpio de contraste de fase. No ano de 1953, Frits Zernike foi agraciado com o
Prmio Nobel de Fsica pelo seu invento.
No incio da dcada de 1930 entramos na era da microscopia eletrnica, o que conferia
uma nova dimenso visualizao das clulas e de suas estruturas, abrindo possibilidades para
novas investigaes e (re)descobertas. Em 1931, o engenheiro eltrico alemo Max Knoll e o
fsico alemo Ernst Ruska constroem o primeiro microscpio eletrnico de transmisso. Dois anos
depois, Ruska constri o primeiro microscpio eletrnico que ultrapassa a resoluo do
microscpio ptico. Logo em seguida, obtida a primeira eletromicrografia de uma amostra
biolgica fixada com smio. No final da dcada de 1930, a Siemens passa, com o auxlio de Ernst
Ruska, a produzir e comercializar o primeiro microscpio eletrnico de transmisso. Pelas suas
contribuies cientficas, Ruska dividiu o Prmio Nobel de Fsica no ano de 1986, com o fsico
alemo Gerd Binnig e o fsico suo Heinrich Roher, inventores, em 1981, do microscpio
eletrnico de tunelamento, que permite a obteno de imagens tridimensionais (de superfcie) dos
objetos ao nvel atmico. Em 1937, o fsico alemo Manfred von Ardenne d incio aos estudos
sobre os princpios fsicos que culminariam na construo do primeiro microscpio eletrnico de
varredura. Apesar da criao dos microscpios eletrnicos de transmisso no final da dcada de
1930, somente no incio da dcada de 1950, com a criao dos primeiros ultra-micrtomos, pelo
biologista celular canadense Keith Roberts Porter e pelo mecnico americano Joseph Blum, foi
possvel dar um salto significativo na visualizao dos materiais biolgicos sob microscopia

Biologia e Fisiologia Celular

eletrnica de transmisso. Os ultra-micrtomos so um aprimoramento dos micrtomos utilizados


na preparao de lminas histolgicas e permitem a obteno de sees extremamente delgadas
(entre 20 e 100 nm) do material a ser examinado sob microscopia eletrnica de transmisso.
:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
Voc j ouviu falar em microscopia de fora atmica? Faa uma pesquisa e
descubra as suas aplicaes, vantagens e limitaes.

3. MUNDANDO O CURSO DA HISTRIA


A dcada de 1940 reservava novos horizontes para a biologia celular. O pesquisador e
mdico americano Albert Hewett Coons, ao estudar a febre reumtica, iniciou uma grande
revoluo na imunologia e na biologia celular. Ao estabelecer a tcnica de imunofluorescncia, a
partir da conjugao de anticorpos especficos com corantes fluorescentes, permitindo, assim, a
identificao e a localizao celular de protenas, Coons mudaria, radicalmente, o curso da
histria da biologia celular. Setenta anos depois, a tcnica de imunofluorescncia rotina em
diversos laboratrios de Biologia Celular, Imunologia, Farmacologia, Parasitologia, Patologia,
Microbiologia e em todos os outros onde se faz necessria a identificao ou a localizao celular
de uma protena.
Durante as dcadas de 1940 e 1950, um grupo de pesquisadores desenvolveu uma srie
de trabalhos que iria revolucionar a biologia celular. O ponto de partida foi o estabelecimento da
tcnica de fracionamento subcelular, tcnica, esta, que permite o isolamento de diversos
compartimentos celulares, como veremos mais adiante. O bilogo belga Albert Claude, o
biologista celular romeno George Emil Palade, e o biologista britnico, radicado na Blgica,
Christian de Duve, a partir da separao e anlise dos componentes celulares, identificarem
diversas estruturas e organelas, tais como os lisossomos, os peroxissomos e o retculo
endoplasmtico. Adicionalmente, eles desvendaram uma srie de processos celulares, com
destaque para a via secretria e a intrnseca relao entre o retculo endoplasmtico e o complexo
golgiense. A biologia celular abria, ainda que de forma tmida, mas decisiva, as portas para uma
viso mais funcional da clula. Os trs pesquisadores tiveram o reconhecimento de suas
contribuies para a biologia celular atravs da nomeao para o Prmio Nobel em Fisiologia e
Medicina no ano de 1974.
Um passo, ainda maior, foi dado, no final dos anos 1960, com a criao da microscopia
confocal. Essa histria tem incio, no final da dcada de 1950, com os trabalhos tericos do
americano Marvin Minsky, que foram fundamentais pela criao do conceito da confocalidade, e
que culminaram com a construo do primeiro microscpio confocal, no final dos anos 1960, por
David Egger e Mojmir Petran. A microscopia confocal, associada ao desenvolvimento da qumica
de corantes fluorescentes, abria um novo leque para os estudos da biologia celular, permitindo a
investigao de inmeros processos celulares em clulas vivas. O desenvolvimento da citometria
de fluxo, que comeo, timidamente, no final da dcada de 1950, iria impulsionar, ainda mais, os
estudos com corantes fluorescentes e clulas vivas. O primeiro modelo de citmetro de fluxo

Biologia e Fisiologia Celular

(Model A Coulter Counter) foi produzido pelo americano Wallace H. Coulter, no ano de 1953,
sendo utilizado na contagem de eritrcitos e leuccitos do sangue. Os modelos subseqentes
comearam a agregar novas possibilidades de anlises de parmetros celulares ao equipamento,
como o tamanho celular, por exemplo, e que culminaria, no final da dcada de 1960, com a
incorporao da fluorescncia, no modelo criado pelo alemo Wolfgang Ghde. O americano
Leonard Arthur Herzenberg, na dcada de 1970, estenderia, ainda mais, as aplicaes da
citometria de fluxo ao criar o Fluorescence Activated Cell Sorter (FACS), um equipamento que
permite a seleo de clulas viveis com base em propriedades especficas a partir do uso de
sondas moleculares fluorescentes (anticorpos conjugados com corantes fluorescentes ou corantes
fluorescentes com especificidade para determinados alvos celulares e moleculares). Nascia o
nosso tempo.
Na primeira dcada do sculo XXI, ampliamos as possibilidades tecnolgicas criadas
pelos cientistas do sculo passado. Tornamos os processos mais geis e o mais importante:
diminumos o custo dos equipamentos e reagentes, permitindo que a cincia se tornasse universal
e fosse feita, com qualidade, em todos os recantos do planeta.
4. MTODOS DE ESTUDO DA CLULA
Vamos conhecer de perto alguns dos principais mtodos de estudo da clula. importante
que, ao final da unidade, voc seja capaz de identificar o mtodo mais adequado para cada
estudo, ou seja, a abordagem experimental que permita que o seu objetivo seja alcanado.
4.1. MICROSCOPIA
A primeira pergunta que devemos nos fazer : por que os microscpios so necessrios
para o estudo das clulas? Precisamos, ento, nos lembrar do tamanho mdio das clulas e do
limite de resoluo do olho humano. A maioria das clulas mede entre 1 e 100 micrmetros (M).
Uma bactria pode medir entre 0,5 e 1 M, enquanto que um vulo de um ourio-do-mar, pode
medir at 200 M (figura 1.4). As estruturas internas de uma clula so ainda menores: as
mitocndrias medem cerca de 200 nM; os ribossomos, cerca de 50 nm; e uma protena globular,
cerca de 5 nm. O limite de resoluo do olho humano de apenas 100 M, ou seja, necessria
a utilizao de um equipamento que permita ampliar as clulas e as suas estruturas internas para
que possamos observ-las e estud-las.
4.1.1 MICROSCOPIA PTICA COMUM
O microscpio ptico comum utiliza a luz do visvel como fonte luminosa. A inveno do
primeiro microscpio composto, no ano de 1590, creditada aos holandeses Hans e Zacharias
Janssen. Nestes 400 anos, o microscpio foi recebendo uma srie de aprimoramentos tcnicos,
tornando-se o brao direito do bilogo celular. A figura 5 mostra um microscpio ptico comum e
seus principais componentes.

Biologia e Fisiologia Celular

Figura 1.4 - vulos de ourios-domar

da

espcie

Echinometra

lucunter

sendo observados sob microscopia ptica


comum. Os vulos so os pontos brancos
sobre as lminas e medem cerca de 100
M. Fonte: Luis Fernando Marques-Santos
(DBM/UFPB)

Figura 1.5 - Microscpio ptico Comum e seus principais componentes. Modificado de


http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/b/b1/Optical_microscope_nikon_alphaphot_%2B.jpg

Os microscpios pticos atuais conseguem aumentar um objeto em at 1000 vezes o seu


tamanho original. Esse aumento depende, basicamente, do conjunto de lentes utilizadas
(objetivas e oculares) e que constituem a parte ptica do microscpio. As lentes objetivas so
assim denominadas por estarem prxima ao objeto, e a lentes oculares, por estarem prxima aos
olhos do observador. Cada lente, tanto a objetiva quanto a ocular, , na realidade, composta por
um conjunto de lentes.
O aumento total observado corresponde ao aumento proporcionado pela lente objetiva
amplificado pela lente ocular. Na medida em que ampliamos o aumento total reduzimos o
dimetro do campo de observao. A tabela 1.1 mostra uma relao entre o aumento total e o
dimetro do campo de viso considerando um microscpio com uma lente ocular SWF (super
campo de viso) que proporciona um aumento 10 vezes (x) sobre o aumento da lente objetiva.

10

Biologia e Fisiologia Celular

Lente Ocular

Lente Objetiva

(aumento em x)

(aumento em x)

10

40

5,3

10

10

100

2,12

10

20

200

1,06

10

40

400

0,53

10

100

1000

0,21

Aumento Final (x)

Dimetro do Campo de
Observao (mm)

Tabela 1.1 - Relao entre aumento total e dimetro do campo de observao.

A resoluo mxima obtida com o microscpio ptico limitada pelo comprimento de onda
da luz no espectro do visvel (entre 400 e 700 nm). Um conceito importante em microscopia o
limite de resoluo, que vem a ser a menor distncia entre dois pontos que permite uma distino
entre os mesmos (individualizao dos pontos). Sob condies timas (comprimento de onda de
0,4 m e abertura numrica de 1,4), o limite terico de resoluo do microscpio ptico 0,2 m.
Outro conceito importante em microscopia o poder de resoluo, que depende tanto do
comprimento de onda da luz quando da abertura numrica do sistema de lentes utilizado e
inversamente proporcional ao limite de resoluo, ou seja, quanto menor o limite de resoluo,
maior o poder de resoluo. O poder de resoluo expressa capacidade do microscpio em
detalhar, qualitativamente, uma imagem. A abertura numrica de uma lente objetiva corresponde
sua capacidade em captar luz. Quanto maior a abertura numrica de uma lente, maior ser o
seu poder de resoluo. Algumas lentes requerem o uso de leos de imerso (entre a lente e o
material a ser observado) para proporcionarem um aumento na abertura numrica e
conseqentemente aumentarem o poder de resoluo.
4.1.2. FIXAO E COLORAO
A fixao o processo pelo qual preservamos um material biolgico para posterior anlise,
sendo fundamental por impedirmos a degradao qumica ou microbiolgica do espcime de
interesse. Durante o processo de fixao importante preservamos as estruturas celulares o mais
prximo possvel das condies naturais, mantendo assim as suas caractersticas morfolgicas
originais.
A fixao pode ser obtida por processos qumicos ou fsicos. A fixao fsica mais comum
a fixao por calor, muito utilizada na preparao de esfregaos sanguneos utilizados nos
hemogramas. Entretanto, os processos de fixao qumica so os mais utilizados. A fixao
qumica pode ocorrer por promover a ligao cruzada entre macromolculas, como no uso do
formaldedo ou glutaraldedo, ou por ao de agentes precipitantes/desnaturantes, como o
metanol, o etanol, a acetona e cido actico.
A colorao uma tcnica que tem como objetivo aumentar o contraste entre os
componentes celulares, proporcionando, assim, uma melhor visualizao destas estruturas. As
estruturas subcelulares apresentam uma densidade ptica muito semelhante, o que dificulta a
identificao e a visualizao das mesmas sob microscopia. O emprego dos corantes na biologia
celular bastante amplo e permite a observao de uma vasta gama de molculas e estruturas.
No entanto, os corantes utilizados em microscopia ptica comum requerem que as clulas sejam

11

Biologia e Fisiologia Celular

previamente permeabilizadas. A permeabilizao obtida, normalmente, durante o processo de


fixao. Uma das desvantagens desta tcnica que, para promovermos a permeabilizao,
induzimos a morte celular e acabamos sendo impedidos de trabalharmos com clulas vivas.
Os corantes so compostos orgnicos aromticos que apresentam um grupamento
cromforo (ou cromofrico), responsvel pela interao com a radiao eletromagntica (luz) e a
conseqente absoro de determinados comprimentos de onda responsvel pela colorao do
objeto. A presena de insaturaes nos grupos cromforos que confere aos corantes as suas
propriedades de colorao.
Os corantes podem ser classificados com relao presena de grupamentos inicos de
carter cido ou bsico. Os corantes bsicos possuem grupos catinicos (carga positiva) e os
corantes cidos possuem grupos aninicos (carga negativa). Molculas carregadas
negativamente, como o DNA ou RNA, por exemplo, interagem com corantes bsicos. Esse tipo de
interao recebe o nome de basofilia. Por outro lado, molculas carregadas positivamente, como
algumas protenas ricas em resduos de aminocidos com cadeias laterais com cargas positivas
(como a lisina, arginina ou histidina), possuem afinidades por corantes cidos. Neste caso, a
interao recebe o nome de acidofilia. Na figura 1.6 podemos observar a estrutura qumica dos
corantes safranina, eosina e azul de metileno.

Figura 1.6 Estrutura qumica da Safranina (A), Eosina (B) e Azul de Metileno (C). Fontes:
http://en.wikipedia.org/wiki/File:Safranin_Cl.svg; http://en.wikipedia.org/wiki/File:Eosin_Y.png;
http://en.wikipedia.org/wiki/File:Methylene_blue-2d-skeletal.svg

:: TA NA WEB!!! ::
No endereo abaixo voc encontrar uma relao de diversos corantes usado em
biologia celular, contendo a estrutura qumica e informaes sobre as suas
aplicabilidades:
Stains File http://stainsfile.info/StainsFile/dyes/dyes.htm

4.2. MICROSCOPIA DE CONTRASTE DE FASE


A inveno do microscpio de contraste de fase abriu novas possibilidades de investigao
na rea de biologia celular ao permitir a visualizao de clulas vivas. Este microscpio ptico
bastante semelhante ao microscpio ptico comum, sendo, no entanto, dotado de um sistema
ptico particular (um anel de fase, localizado na objetiva, e um anel circular, localizado no
condensador) que amplia a diferena de fase dos raios luminosos que atravessam a clula. Essa
diferena de fase gerada pelo sistema ptico amplia o contraste entre os componentes
intracelulares, permitindo uma melhor visualizao do material biolgico. As imagens obtidas em

12

Biologia e Fisiologia Celular

microscopia de contraste de fase apresentam, caracteristicamente, um fundo de tons cinza, com


regies mais claras ou escuras no espcime. comum notarmos uma intensidade maior de luz
associadas orlas escuras em regies de grandes mudanas de densidade tica, como, por
exemplo, no limite entre o meio extracelular e uma clula. Isto, normalmente, se manifesta como
uma leve aurola ao redor de um objeto escuro. A figura 1.7 ilustra uma clula epitelial sendo
observada sob microscopia de contraste de fase, onde podemos notas as feies acima descritas.

Figura 1.7 Fotomicrografia de contraste de fase de uma clula epitelial da cavidade oral.
Modificado de http://en.wikipedia.org/wiki/File:Cheek_cell_phase_contrast.jpg.

4.3. MICROSCOPIA DE CAMPO ESCURO


A microscopia de campo escuro um tipo de microscopia ptica que se utiliza de tcnicas
de iluminao para aumentar o contraste de clulas no coradas, podendo, assim como a
microscopia de contraste de fase, ser utilizada para o estudo de clulas vivas. A microscopia de
campo escuro, como o prprio nome sugere, produz uma imagem de fundo bastante escura,
quase negra, destacando, assim, o material biolgico, que se apresenta de forma muito brilhante
(figura 1.8). Esse efeito obtido atravs de um sistema ptico que elimina parte da luz, ao impedir
a sua coleta pela lente objetiva, gerando assim o campo escuro e o forte contraste luminoso.

Figura 1.8 - Fotomicrografia de campo


escuro de uma larva plteo do ourio-do-mar
Echinometra

lucunter

48

horas

aps

fertilizao. Fonte: Luis Fernando MarquesSantos (DBM/UFPB)

4.4 MICROSCOPIA DE FLUORESCNCIA


A microscopia de fluorescncia foi uma grande conquista da biologia celular, ampliando de
forma espetacular os estudos nessa rea da cincia. A microscopia de fluorescncia, assim como
as outras microscopias pticas, tambm utiliza a luz como fonte de radiao, sendo mais comum

13

Biologia e Fisiologia Celular

a utilizao de lmpadas de mercrio e xennio. No entanto, ao invs da reflexo, ou absoro da


luz, pelo material biolgico, a fluorescncia o fenmeno que d suporte microscopia que leva o
seu nome.
E o que vem a ser o fenmeno de fluorescncia? Inicialmente descrito por George Gabriel
Stokes, no ano de 1852, ao estudar o mineral fluorita, a fluorescncia a propriedade que
algumas molculas apresentam em absorver luz em um determinado comprimento de onda, e
emitir luz em outro comprimento de onda, menor do que o da luz absorvida, portanto, com menor
energia. Os compostos que detm essa propriedade so denominados fluorocromos ou
simplesmente compostos fluorescentes. Tais compostos apresentam um grupamento funcional,
denominado fluorforo, que, de forma anloga aos cromforos, so responsveis pela absoro e
emisso da luz. A fluorescncia produzida quando um eltron absorve energia e salta para um
orbital mais externo. Ao retornar para o orbital original, o eltron libera energia na forma de um
fton luminoso.
O microscpio de fluorescncia utiliza filtros que selecionam o comprimento de onda que
ir excitar o corante (filtro de excitao) e o comprimento de onda que ser visualizado pelo
observador (filtro de barreira). Uma vez que o fundo escuro, a amostra fluorescente facilmente
visualizada.
Existem dezenas de corantes fluorescentes utilizados em biologia celular para a anlise de
diversos parmetros celulares e moleculares, onde podemos citar: pH citoslico; contedo de
DNA; potencial de biomembranas; concentrao intracelular de ons; transporte de molculas;
entre outros. Uma tcnica bastante utilizada na microscopia de fluorescncia a conjugao de
corantes fluorescentes, tais como o isotiocianato de fluorescena (FlTC) ou a ficoeritrina, com
anticorpos direcionados para protenas de superfcie celular ou para protenas intracelulares.
:: PERGUNTAS?? ::
O que um anticorpo? Qual a natureza qumica de um anticorpo? Como
possvel, tecnicamente, fazer com que um anticorpo se ligue a uma protena
intracelular?

14

Biologia e Fisiologia Celular

:: FIQUE POR DENTRO!! ::


No ano de 2008, os cientistas americanos Martin Chalfie e Roger Tsien, e o
cientista japons Osamu Shimomura receberam o Prmio Nobel de Qumica pela
descoberta e desenvolvimento da Protena Verde Fluorescente, mais conhecida
como GFP (do ingls, Green Fluorescent Protein). A GFP foi isolada, pela primeira
vez, da espcie de gua-viva Aequorea Victoria (figura 1.9), no ano de 1962, pelo
bioqumico japons Osamu Shimomura. A GFP constituda de 238 resduos de
aminocidos e quando excitada com luz ultravioleta emite uma intensa fluorescncia
no

comprimento

de

onda

do

verde.

seu

grupamento

cromforo

p-

hidroxibenzilideneimidazolinona formado pelos resduos de aminocidos da


posio 65 a 67 (Ser-Tyr-Gly) presentes na sua estrutura primria e que requer
apenas o oxignio para a sua atividade fluorescente. Martin Chalfie foi o responsvel
pela clonagem do gene da GFP e da sua associao com o gene de diversas outras
protenas,

criando

protenas

fusionadas

com

propriedades

fluorescentes.

Finalmente, Roger Tsien ampliou as possibilidades da aplicao da GFP ao


promover a alterao de certas sequncias de resduos de aminocidos, gerando
protenas fluorescentes que absorvem e emitem luz em diversos comprimentos de
onda do espectro. As tcnicas que utilizam como sondas fluorescentes a GFP e
protenas similares permitem o monitoramento temporal e espacial de uma srie de
processos biolgicos em clulas vivas, tais como: a expresso gnica; as interaes
protena-protena; a diviso celular; o endereamento e trfego de protenas;
biognese de organelas; concentraes intracelulares de ons; entre outros.

Figura 1.9 - Aequorea Victoria


Fonte:
http://nobelprize.org/nobel_prizes/chemistry/laureates/2008/illpres.html

:: TA NA WEB!!! ::
No endereo abaixo voc encontrar uma base de dados de corantes fluorescentes:
Table of Fluorochromes http://pingu.salk.edu/flow/fluo.html

15

Biologia e Fisiologia Celular

4.5. MICROSCOPIA CONFOCAL


A inveno do microscpio confocal foi um avano espetacular no campo da microscopia,
uma vez que possibilitou uma srie de conquistas sobre a microscopia ptica convencional, com
destaque para o controle da profundidade de campo, a eliminao, ou reduo parcial, das
informaes que se encontram fora do plano focal, e a coleta de uma srie imagens seqenciais
de planos seccionais. A partir do processamento destas imagens possvel a construo de uma
imagem tridimensional do espcime sob observao (figura 1.10).

Figura 1.10 Viso frontal de uma larva plteo


de Echinometra lucunter marcada com calcena-AM.
Para a construo da imagem tridimensional foram
realizadas

184

microfotografias

em

srie.

As

fotomicrografias foram obtidas 48 horas aps a


fertilizao. Fonte: Luis Fernando Marques-Santos
(DBM/UFPB) e Regina Clia Bressan Queiroz Figueiredo
(CPqAM/FIOCRUZ).

A microscopia confocal a tcnica de


microscopia ptica que mais tem contribudo para o entendimento dos processos biolgicos ao
nvel celular. Uma vez que a microscopia confocal tambm se baseia no uso de corantes vitais
(que no necessitam de fixadores ou agentes permeabilizantes para atravessarem a membrana
plasmtica), que permitem o estudo de clulas vivas, diversos processos celulares antes pouco
compreendidos, tais como o trfego intracelular de vesculas, podem, hoje, serem melhores
compreendidos, principalmente aps o desenvolvimento das tcnicas baseadas no uso da GFP. O
microscpio confocal utiliza, como fontes luminosas, os lasers de argnio ou hlio/nenio ou, mais
raramente, lmpadas de mercrio e xennio (como os microscpios de fluorescncia).
A figura 1.11 mostra duas imagens de vulos de ourio-do-mar da espcie Echinometra
lucunter marcados com o corante verde calcena-AM. A imagem obtida pela microscopia confocal
revela que a distribuio do corante ocorre apenas no crtex celular, ao contrrio do que sugere a
imagem obtida pela microscopia de fluorescncia. Esta diferena se deve ao fato da imagem em B
exibir apenas a fluorescncia coletada em um nico plano seccional da clula (plano focal), sem
interferncia dos demais planos, o que no ocorre na imagem apresentada em A.
Figura 1.11 Fotomicrografias de
fluorescncia (A) e confocal (B) de vulos de
ourio-do-mar

da

espcie

Echinometra

lucunter marcados com o corante calcenaAM. Fonte: Luis Fernando Marques-Santos


(DBM/UFPB) e Regina Clia Bressan Queiroz
Figueiredo (CPqAM/FIOCRUZ).

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4.6. MICROSCOPIA ELETRNICA


A microscopia eletrnica utiliza o feixe de eltrons como radiao. A fonte de eltrons um
filamento ou catodo que bombeia os eltrons atravs de uma estrutura cilndrica at a amostra. A
grande vantagem no uso do feixe de eltrons ao invs do feixe de luz, utilizado na microscopia
ptica, o reduzido comprimento de onda do feixe de eltrons (0,004 nm). Este valor cerca de
100 mil vezes menor que o comprimento de onda da luz visvel. Devido ao menor comprimento de
onda do feixe de eltrons, o limite terico de resoluo do microscpio eletrnico de 0,002 nm
(0,02 ). No entanto, devido fatores tcnicos, como limitaes das lentes (de natureza
eletromagntica), procedimentos para a preparao das amostras e ao prprio dano provocado
pelo feixe de eltrons no espcime, a resoluo de trabalho para a maioria das preparaes
biolgicas fica em torno de 2 nm (20), apesar de que em alguns casos ser possvel obter uma
resoluo de cerca de 0,1 nm (1 ).
A microscopia eletrnica permite a visualizao de detalhes estruturais de organelas, tais
como a mitocndria, das nucleoporinas do envelope nuclear, dos ribossomos e de diversas outras
estruturas celulares e, at, mesmo, de vrus.
Assim como na microscopia ptica, o material a ser analisado sob microscopia eletrnica
necessita ser impregnado com substncias que promovam uma diferena de contraste entre as
estruturas celulares. As substncias utilizadas com esta finalidade, na microscopia eletrnica, so
sais de metais pesados, cujas caractersticas de eletrodensidade permitem a gerao do contraste
necessrio para a individualizao das estruturas celulares. Os sais de chumbo, urnio, ouro,
tungstnio e, principalmente, o tetrxido de smio so os mais comumente utilizados. As
estruturas celulares impregnadas com estes sais desviam o feixe de eltrons na medida em que
os mesmos se chocam com estas. Os feixes de eltrons que no so desviados so captados
para a formao da imagem.
A preparao das amostras para observao em microscopia eletrnica requer mais
etapas do que as utilizadas em microscopia ptica. O uso especfico de fixadores qumicos, a
criofixao (fixao pelo frio), o processo de congelamento, a desidratao e a necessidade de
cortes ultrafinos, requer um treinamento tcnico altamente especializado.
Existem trs tipos de microscopia eletrnica: a microscopia eletrnica de transmisso, a
microscopia eletrnica de varredura e a microscopia eletrnica de tunelamento. Nas prximas
sees vamos tratar das duas primeiras.
4.6.1. MICROSCOPIA ELETRNICA DE TRANSMISSO
A microscopia eletrnica de transmisso baseia-se na passagem do feixe de eltrons pela
clula. Uma vez que o material est impregnado com sais de metais pesados, ao passar pela
clula, parte do feixe desviada (devido presena dos metais pesados ligados certas
estruturas celulares) gerando uma imagem escura (eletrodensa) na tela de recepo. Por outro
lado, parte do feixe capaz de atravessar o material, gerando mltiplos tons de cinza na tela de
recepo, que, posteriormente, revelada em uma microfotografia. Desta forma, a microscopia
eletrnica de transmisso permite uma anlise das estruturas intracelulares com um grau de
detalhamento impressionante. As figura 1 e 2 da unidade 4 so fotomicrografias obtida em
microscopia eletrnica de transmisso.

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Biologia e Fisiologia Celular

4.6.2. MICROSCOPIA ELETRNICA DE VARREDURA


Na microscopia eletrnica de varredura o feixe de eltrons no atravessa o material
biolgico. A microscopia eletrnica de varredura se baseia na gerao de eltrons secundrios,
que so emitidos por uma amostra aps a mesma ser excitada por um feixe de eltrons, ou por
eltrons retroespalhados, sendo a primeira tcnica a mais utilizada por gerar imagens com melhor
definio (maior profundidade de campo). Os eltrons secundrios so coletados por um detector,
que gera uma imagem virtual do material analisado. O material precisa ser fixado, desidratado e
recoberto com ouro ou carbono para a obteno de imagens topogrficas com alta resoluo. A
figura 1.12 ilustra uma fotomicrografia eletrnica de varredura.
Figura 1.12 - Fotomicrografia eletrnica de varredura de plens
das espcies Helianthus annuus (Girasol), Ipomoea purprea (Corda-deViola ou Glria da Manh), Sidalcea malviflora (Malva-Rosa), Lilium
auratum (Lrio), Oenothera fruticosa (Onagra) e Ricinus communis
(Mamona).
Fonte:
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/a/a4/Misc_pollen.jpg

:: TA NA WEB!!! ::
Nos links abaixo voc ir encontrar uma srie de textos, imagens e
animaes sobre microscopia.
Nobel Prizes Microscopes
http://nobelprize.org/educational/physics/microscopes/1.html

American Society for Cell Biology (Image & Video Library)


http://cellimages.ascb.org/

Molecular Expressions: Images from the Microscope


http://micro.magnet.fsu.edu/index.html
Nikon MicroscopyU
http://www.microscopyu.com/
Olympus Microscopy Resource Center
http://www.olympusmicro.com/
Harvard University (Department of History of Science)
http://dssmhi1.fas.harvard.edu/emuseumdev/code/eMuseum.asp?lang=EN

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Biologia e Fisiologia Celular

4.7 FRACIONAMENTO CELULAR


Uma das formas de ampliarmos os nossos conhecimentos sobre o funcionamento das
organelas e demais estruturas celulares atravs do isolamento dos constituintes celulares em
fraes puras. Para isto, precisamos romper delicadamente a membrana plasmtica preservando
as demais organelas e constituintes citoplasmticos em processo de lise celular controlado que
gere um homogenato celular ntegro.
Existem diversos mtodos para promover a lise celular e a obteno de um homogenato.
Estes mtodos podem ser divididos em qumicos e fsicos. Entre os mtodos qumicos podemos
citar o uso de detergentes ou de solues hipertnicas (choque osmtico). O rompimento da
membrana plasmtica por mtodos fsicos inclui o uso de homogenizadores (rompimento por
esmagamento) ou sonicadores, entre outros. A escolha do mtodo adequado depende,
fundamentalmente, do tipo celular e do tecido de origem.
Aps a obteno do homogenato celular, os constituintes podem ser separados por
centrifugao diferencial. Dois mtodos de fracionamento so muito utilizados: a centrifugao
diferencial ou a separao por gradiente de concentrao. Na centrifugao diferencial o
homogenato submetido a diversas centrifugaes sucessivas, com ordem crescente de
velocidade de centrifugao. Na medida em que aumentamos a velocidade de centrifugao,
promovemos a sedimentao e precipitao dos componentes menos densos (tabela 1.2). Aps o
isolamento do componente de interesse podemos estudar determinado processo biolgico sem a
interferncia dos demais constituintes celulares. Essa compartimentalizao do estudo
importante para identificarmos, por exemplo, qual organela responsvel por determinado
processo. Foi a partir da conquista da tcnica de centrifugao diferencial que os bioqumicos
americanos Eugene Patrick Kennedy e Albert Lester Lehninger, no final da dcada de 1940,
verificaram que o ciclo do cido tricarboxlico (ciclo de Krebs), a oxidao de cidos graxos, e a
fosforilao oxidativa ocorriam na mitocndria.

Velocidade de Centrifugao

Precipitado

Baixa

1.000 x G 10 minutos

Clulas inteiras, ncleo e citoesqueleto

Mdia

20.000 x G 20 minutos

Mitocndrias, lisossomos e peroxissomos

Alta

80.000 x G 60 minutos

Microssomos e pequenas vesculas

Super alta

150.000 x G 180 minutos

Ribossomos e macromolculas maiores

Tabela 1.2 Fracionamento celular por centrifugao diferencial e o contedo do precipitado. G =


gravidade.

:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
Faa uma pesquisa e descubra o que so microssomos!

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4.8. CULTURA CELULAR


O marco inicial, que deu incio ao estabelecimento da cultura celular, foi o trabalho de
Wilhelm Roux no ano de 1885. O zologo alemo conseguiu manter, por alguns dias, clulas
embrionrias de galinha em uma soluo salina. Era a primeira vez que um cientista obtinha
sucesso na tentativa de manter vivas as clulas de um organismo em um meio externo a ele.
O termo cultura celular refere-se manuteno de clulas eucariticas ou procariticas em
laboratrio. No caso de organismos multicelulares, estas clulas so isoladas e mantidas em
condies rgidas de cultivo. Os ensaios experimentais realizados com culturas celulares so
chamados ensaios in vitro - em contraste com os ensaios realizados com organismos intactos,
que denominamos ensaios in vivo.
As culturas celulares obtidas diretamente de organismos vivos, e mantidas em laboratrio
por um curto intervalo de tempo, so chamadas culturas primrias. Uma vez estabelecidas, as
culturas primrias so mantidas pelo tempo necessrio para a realizao dos ensaios in vitro. As
clulas tambm podem ser mantidas em culturas por meses ou anos. Neste caso, chamamos as
culturas de culturas secundrias ou linhagens celulares. Um atributo fundamental e obrigatrio,
neste caso, que tais clulas se dividam in vitro, desde que, claro, sejam cultivadas em um
meio de cultura adequado. O estabelecimento de uma linhagem celular depende de uma srie de
fatores, mas, fundamentalmente, tais clulas precisam estar constantemente entrando em um
processo de diviso celular, o que mantido por meio de estmulos extracelulares, mas que
tambm deve ser uma caracterstica intrnseca do prprio tipo celular.
As condies de manuteno de uma cultura celular dependem do tipo celular. Para cada
tipo celular existe um meio de cultura apropriado, alm de pH, temperatura e grau de oxigenao
especficos. Com relao composio dos meios de cultura, no geral, os meios de cultura para
clulas eucariticas so constitudos de aminocidos, acares, vitaminas, fatores de
crescimento, e antibiticos e antifngicos para prevenir a contaminao com microorganismos.
Os estudos in vitro, realizados tanto nas culturas primrias quanto nas linhagens celulares,
so essenciais para a biologia celular e para as mais diversas reas das cincias biolgicas e da
sade, tais como morfologia, farmacologia, imunologia, bioqumica, biofsica, gentica,
parasitologia, hematologia, oncologia, patologia e biologia de desenvolvimento, entre outras. O
uso das linhagens celulares permite o desenvolvimento de estudos cientficos com uma maior
consistncia e reprodutibilidade dos resultados.
Uma das desvantagens de se trabalhar com culturas celulares que aps um determinado
perodo de manuteno destas clulas em cultura, e aps sucessivas divises celulares, as
caractersticas originais das clulas podem ser alteradas. Para prevenir que tais alteraes
influenciem os estudos, o procedimento ideal descartar a cultura aps cerca de 50 ciclos de
renovao do meio de cultura (repique da cultura). Voc deve estar se perguntando: e comear
tudo de novo? Isolar novas clulas dos organismos e comear tudo novamente? No, no
preciso todo esse trabalho novamente. Existem diversos bancos de clulas que comercializam os
mais variados tipos celulares. Alm disso, possvel criopreservar a cultura original,
descongelando as amostras quando necessrio.

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Biologia e Fisiologia Celular

UNIDADE 2
BIOMEMBRANAS
1. VISO GERAL
As membranas presentes nos seres vivos so denominadas biomembranas. As
biomembranas so fluidos bidimensionais, constitudos por uma bicamada lipdica, com espessura
mdia de 5 nm, e protenas associadas. A unidade e coeso das bicamadas lipdicas so
mantidas graas s interaes hidrofbicas entre os lipdeos que constituem as biomembranas.
Cerca de cinqenta por cento da massa das biomembranas conferida pelos lipdeos. Estima-se,
tambm, que cerca de trinta por cento de todas as protenas celulares estejam associadas s
biomembranas. As biomembranas so responsveis pela compartimentalizao celular. A
membrana plasmtica (figura 2.1) estabelece o limite celular, ao separar o contedo intracelular
do meio externo, e encontrada em todos os tipos celulares. As membranas internas formam o
sistema de endomembranas. Tais membranas so responsveis pela compartimentalizao
intracelular, delimitando as organelas, e conseqentemente os processos celulares que ocorrem
em cada uma delas. O sistema de endomembranas encontrado somente em clulas
eucariticas.
As bicamadas lipdicas so assimtricas, apresentando uma composio diferente entre
as duas monocamadas, ou faces, que a constituem. Na membrana plasmtica, essa assimetria
notvel em relao aos lipdeos presentes na face exoplasmtica (localizada na superfcie celular)
e na face citoslica (voltada para o citosol).

Figura 2.1 Esquema ilustrativo da membrana plasmtica.


Modificado de
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/3/3a/Cell_membrane_detailed_diagram_4.svg/1000pxCell_membrane_detailed_diagram_4.svg.png

21

Biologia e Fisiologia Celular

2. COMO TUDO COMEOU...


A existncia de uma membrana plasmtica foi sugerida, inicialmente, por Nargeli, no ano
de 1855. A natureza lipdica e a permeabilidade seletiva das membranas celulares foi proposta por
Ernest Overton, em 1890. Trinta anos depois, dois cientistas alemes, E. Gortter e F. Grendel,
estudando a composio da membrana de eritrcitos, verificaram que as membranas celulares
eram formadas por uma bicamada lipdica. A observao de que as biomembranas no eram
constitudas somente por lipdeos, mas tambm por protenas associadas, foi feita por Davson e
Danielli no ano de 1935.
Finalmente, no ano de 1972, S. J. Singer e G. Nicolson propuseram o modelo de mosaico
fluido para as biomembranas (figura 2.2). Surge, assim, o conceito de que as membranas
celulares eram dinmicas. Neste modelo, tanto os lipdeos quanto as protenas podem se
movimentar bi-direcionalmente pela bicamada lipdica. Sabemos, hoje, que este dinamismo
fundamental para o papel biolgico desempenhado pelas biomembranas.
Somente a partir dos anos 90 do sculo XX, surge o conceito de domnios de membrana.
Estes domnios so regies com caractersticas estruturais prprias, distintas do restante da
membrana, e que apresentam particularidades funcionais. As balsas lipdicas so um exemplo de
um domnio de membrana.

3. ESTRUTURA DE BIOMEMBRANAS

Para entendermos o papel biolgico das membranas celulares precisamos responder a


uma pergunta crucial: como so constitudas as biomembranas?
As biomembranas so constitudas por lipdeos, protenas e carboidratos ligados covalentemente
s protenas (glicoprotenas ou proteoglicanas) ou lipdeos (glicolipdeos). Vamos aprender um
pouco mais sobre a estrutura molecular e as caractersticas qumicas de cada um destes
componentes das biomembranas.
3.1. LIPDEOS DE MEMBRANA
Os lipdeos que constituem a membranas biolgicas so molculas anfipticas, ou seja,
apresentam tanto um carter hidroflico (afinidade pela gua carter polar) quanto hidrofbico
(averso gua carter apolar). A tabela 2.1 apresenta os principais lipdeos encontrados nas
biomembranas. A composio das biomembranas varia enormemente de acordo com o tipo
celular e com o compartimento intracelular delimitado por elas. Clulas vegetais e organismos
procariotos, por exemplo, no apresentam colesterol na constituio das suas membranas.

22

Biologia e Fisiologia Celular

Figura 2.2 - Modelos de Biomembranas


Classe

Sub-Tipo

Lipdeo (Abreviao)
Fosfatidiletanolamina

Fosfoglicerdeos

(PE)
Fosfatidilcolina (PC)
Fosfatidilserina (PS)

Fosfolipdeos

Fosfatidilinositol (PI)
Esfingolipdeos
Esterides

Esfingomielina (SM)
Glicoesfingolipdeos
Colesterol

Tabela 2.1 - Lipdeos mais freqentes em biomembranas

23

Biologia e Fisiologia Celular

A unidade da membrana mantida graas s interaes hidrofbicas e s interaes de


van der Walls que ocorrem entre as pores hidrofbicas dos fosfolipdeos (caudas dos cidos
graxos) e do colesterol.
Vamos, agora, conhecer, mais de perto, cada um destes lipdeos.
Os fosfoglicerdeos representam a classe mais abundante dos fosfolipdeos de
membrana. Todos os fosfoglicerdeos so constitudos por uma cabea polar (um lcool) ligada,
por esterificao, a um grupamento fosfato, que por sua vez encontra-se ligado a uma molcula
de glicerol esterificada a duas caudas apolares de cido graxo (figura 2.3).

Figura 2.3 - Estrutura bsica de um fosfoglicerdeo.


Fonte: http://en.wikipedia.org/wiki/File:Phospholipid.svg

O esfingolipdeo mais freqentemente encontrado nas biomembranas a esfingomielina


(figura 2.4), que, assim como todos os esfingolipdeos, apresenta uma molcula de ceramida
como seu ncleo hidrofbico. A ceramida, por sua vez, formada por um amino lcool insaturado
de 18 carbonos, denominado esfingosina, ligado, por meio de uma ligao amdica, a outro cido
graxo saturado. Outra caracterstica estrutural tpica deste lipdeo de membrana, que ao invs
do cerne de glicerol, a cabea polar da esfingomielina, fosfocolina ou fosfoetanolamina, ligada
aos cidos graxos atravs de uma serina, e no de uma molcula de glicerol, como observado
nos fosfoglicerdeos.

Figura 2.4 - Estrutura da Esfingomielina.


Modificado de: http://en.wikipedia.org/wiki/File:Sphingomyelin.png

24

Biologia e Fisiologia Celular

Outra classe importante de lipdeos de membranas constituda pelos glicolipdeos, que


so lipdeos ligados, covalentemente, a um ou mais resduos de carboidratos (galactose, Nacetilglicosamina ou cido silico, por exemplo). Dentre os glicolipdeos, podemos destacar os
glicoesfingolipdeos, tais como os cerebrosdeos e os gangliosdeos, que possuem a esfingosina
no seu ncleo hidrofbico, e desempenham papis biolgicos importantes em clulas musculares
e nervosas.
:: FIQUE POR DENTRO!! ::
Os glicolipdeos presentes na superfcie dos glbulos vermelhos
(eritrcitos) so utilizados como marcadores (antgenos) para a tipagem sangunea
baseada no sistema ABO. A diferena na composio dos resduos de carboidratos
dos oligossacardeos presentes nestes glicolipdeos quem determina o grupo (ou
tipo) sanguneo. Nos indivduos com o tipo sanguneo A, o resduo terminal do
oligossacardeo a N-acetilgalactosamina, ao passo que nos indivduos com o tipo
sanguneo B, o resduo terminal de acar a galactose. Indivduos cujos eritrcitos
apresentam

glicolipdeos

com

N-acetilgalactosamina

terminal,

assim

como

glicolipdeos com resduos de galactose terminal so classificados como tipo AB.


Indivduos com o tipo sanguneo O no apresentam tais resduos na regio terminal
do oligossacardeo, sendo, desta forma, tambm conhecidos como tipo 0 (zero). A
tabela 2.2 ilustra a diferena encontrada nos resduos de carboidratos dos
glicolipdeos e os referidos grupos sanguneos.

Tabela 2.2 - Grupos Sanguneos e respectivos antgenos de superfcie. Os anticorpos


representados na tabela so encontrados no plasma dos indivduos dos respectivos
grupos sanguneos. Gal = Galactose; GlcNAc= N-acetilglicosamina; Fuc = Fucose;
GalNAc = N-acetilgalactosamina, Modificado de
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/3/32/ABO_blood_type.svg/1000p
x-ABO_blood_type.svg.png e
http://oregonstate.edu/instruction/bb450/stryer/ch11/Slide56.jpg

25

Biologia e Fisiologia Celular

:: SAIBA MAIS... ::
Aspectos moleculares do Sistema Sangneo ABO (Ana Carla Batissoco &
Mrcia Cristina Zago Novaretti, Revista Brasileira de Hematologia e Hemoterapia,
2003, nmero 25, pg. 47-58) http://www.scielo.br/pdf/rbhh/v25n1/v25n1a08.pdf

Outro lipdeo importante na composio das biomembranas o colesterol, cuja estrutura


est representada na figura 2.5. A quantidade do colesterol bastante variada nas
biomembranas. Por exemplo, na membrana plasmtica de eritrcitos, a concentrao estimada de
colesterol de 23%, enquanto que na membrana do retculo endoplasmtico, o colesterol
responde por apenas 6% dos lipdeos totais e este valor ainda menor nas membranas
mitocondriais interna e externa, onde o colesterol constitui apenas 3% do total de lipdeos.

Figura 2.5 - Estrutura do Colesterol.


Fonte:http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/
thumb/9/9a/Cholesterol.svg/1000px-Cholesterol.svg.png

:: FIQUE DE OLHO!! ::
A membrana plasmtica marcadamente assimtrica com relao
composio dos lipdeos presentes nos dois folhetos. Na monocamada interna da
membrana

plasmtica

fosfatidiletanolamina

encontramos,
fosfatidilinositol,

predominantemente,
enquanto

que

na

fosfatidilserina,
monocamada

exoplasmtica encontramos, majoritariamente, fosfatidilcolina e esfingomielina. Os


glicolipdeos so encontrados somente na monocamada exoplasmtica. J o
colesterol distribudo de forma homognea pelos dois folhetos da membrana. A
assimetria da membrana mantida por protenas especficas, denominadas flipases,
que realizam um movimento conhecido como flip-flop, que responsvel pela
inverso dos fosfolipdeos entre as duas monocamadas. Os lipdeos da membrana
apresentam uma alta mobilidade entre as monocamadas, podendo realizar
movimentos bi-dimensionais, tais como difuso lateral, flexo das caudas de cido
graxo e rotao em torno do prprio eixo molecular. Essa mobilidade dos
fosfolipdeos reflete-se numa caracterstica fundamental para o exerccio do papel
biolgico das biomembranas, que a fluidez da membrana.

:: TA NA WEB!!! ::
No link abaixo voc vai encontrar uma srie de animaes na lngua
portuguesa sobre estrutura de biomembranas, alm de outros assuntos de Biologia
Celular. Bom proveito!
Cell Biology Animation em Portugus http://www.johnkyrk.com/index.pt.html

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Biologia e Fisiologia Celular

3.1.1. FLUIDEZ DE MEMBRANA


A fluidez das biomembranas depende de alguns fatores cruciais, tais como a temperatura
na qual se encontra a membrana e a prpria composio lipdica da membrana.
As
biomembranas podem estar em dois estados fsicos: paracristalino (gel) ou fluido (lquido). A
mudana de um estado fsico para o outro conhecida como transio de fase e determinante
para a fluidez da membrana. Quanto mais elevada for a temperatura mais fluida ser uma
biomembrana. Com relao composio lipdica, a presena de fosfolipdeos ricos em cidos
graxos poliinsaturados, ou de cadeia curta, favorece a fluidez das membranas. O colesterol
tambm importante na manuteno da fluidez da membrana em condies de baixa
temperatura, uma vez que impede uma associao hidrofbica mais forte entre as caudas dos
cidos graxos dos fosfolipdeos, e previne, assim, a transio de fase para o estado gel.
A fluidez da membrana fundamental para diversos processos celulares, tais como
transporte de molculas e sinalizao celular. As balsas lipdicas, domnios da membrana ricos
em esfingolipdeos, colesterol e protenas associadas, dependem da fluidez da membrana para a
sua participao em processos de sinalizao e endocitose.
:: FIQUE POR DENTRO!! ::
A membrana plasmtica de clulas de peixes que habitam guas frias
tende a ser rica em cidos graxos insaturados, evitando, desta forma, que em
baixas temperaturas ocorra uma transio de fase para o estado gel, e
conseqente diminuio da fluidez da membrana. Peixes como o atum, o
bacalhau, o salmo e a sardinha, por exemplo, so ricos em cidos graxos
poliinsaturados, como os cidos graxos Omega-3. Alguns estudos demonstraram
que populaes cujo hbito alimentar rico em peixes de gua fria apresentam
uma menor incidncia de doenas cardiovasculares. leos extrados destes
peixes tm sido utilizados na dieta humana como recomendao para a
preveno de uma srie de patologias, com as citadas doenas cardiovasculares.
No entanto, o benefcio do uso destes leos encapsulados, como complementos
alimentares, ainda carece de maiores estudos.

:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
Alm do papel estrutural dos lipdeos de membrana, essas molculas
tambm esto envolvidas em uma srie de processos celulares vitais. Faa uma
pesquisa e descubra outros papis biolgicos para os lipdeos de membrana. Como
sugesto, procure sobre o envolvimento dos seguintes lipdeos em outros eventos
celulares e fisiolgicos: fosfatidilserina, fosfatidilinositol, ceramida, esfingosina-1fosfato, e glicolipdeos.

3.2 PROTENAS DA MEMBRANA


As protenas presentes nas biomembranas podem ser classificadas em: Integrais
(intrnsecas) ou Perifricas (extrnsecas). Esta classificao se baseia no procedimento

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Biologia e Fisiologia Celular

necessrio para promover a dissociao de uma protena da membrana. Protenas integrais s se


dissociam da membrana atravs do uso de detergentes, tais como o dodecil sulfato de sdio ou o
Triton-X-100, ao passo que protenas perifricas podem ser dissociadas da membrana na
presena de solues hipersalinas ou solues de pH extremos.
As protenas perifricas se associam membrana mediante interaes inicas com
protenas integrais ou com os fosfolipdeos da membrana. Por outro lado, as protenas integrais da
membrana se associam com estas mediante interaes hidrofbicas fortes com os lipdeos da
membrana e podem ser subdivididas em trs tipos:
a) Protenas Transmembrana. So protenas que atravessam completamente a bicamada lipdica,
apresentando, pelo menos, trs regies bem definidas: domnio extracelular, domnio
transmembrana (TM) e domnio citoslico. Tais protenas podem cruzar a bicamada lipdica uma
nica vez (Protena Integral Unipasso) ou diversas vezes (Protena Integral Multipasso). A
estrutura secundria do domnio TM das protenas unipasso sempre -hlice, sendo este
domnio constitudo por 20 a 23 resduos de aminocidos. As protenas integrais multipasso
podem apresentar domnios TM com estrutura secundria organizada em -hlice ou folha-. Nas
protenas multipasso com domnio TM em estrutura -hlice, comum observarmos uma ligao
covalente lipdeos do folheto interno, o que promove uma maior estabilidade e interao da
protena com a membrana. J os domnios TM com estrutura folha- das protenas multipasso so
constitudos por cerca de 10 resduos de aminocidos. Estas protenas apresentam normalmente
de 8 a 22 domnios TM e so encontradas somente em bactrias e nas membranas externas da
mitocndria e de cloroplastos. A interao das protenas transmembrana com as biomembranas
se d por meio de interaes hidrofbicas entre as cadeias laterais dos resduos de aminocidos
dos domnios TM das protenas e a cauda dos cidos graxos dos fosfolipdeos da membrana.
b) Protenas Ancoradas por Lipdeos. So quatro tipos de ncoras de lipdeos que promovem a
interao destas protenas com a membrana plasmtica: ncora de glicosilfosfatidilinositol (GPI),
ncora de miristato, ncora de palmitato e ncora de prenilato. A ancoragem por GPI s ocorre no
domnio extracelular da membrana plasmtica, enquanto que a ancoragem pelos cidos graxos
restrita face citoslica da membrana plasmtica. A interao destas protenas com as
membranas se d pela interao hidrofbica dos lipdeos ligados covalentemente s protenas
com a cauda dos cidos graxos dos fosfolipdeos da membrana.
c) Protenas Ancoradas por -Hlice. Tais protenas so ancoradas na membrana plasmtica a
partir da interao dos fosfolipdeos da membrana com um domnio lateral hidrofbico em -hlice
da protena. Estas protenas so encontradas somente na face citoslica da membrana
plasmtica.
As protenas de membrana esto envolvidas em uma srie de processos biolgicos
fundamentais para a fisiologia celular, tais como: transporte de molculas, atividade enzimtica,
adeso celular, comunicao celular, reconhecimento celular e formao das junes celulares.

4. TRANSPORTE ATRAVS DAS BIOMEMBRANAS


Uma das caractersticas mais marcantes das biomembranas a sua permeabilidade
seletiva. Somente pequenas molculas no carregadas podem se difundir livremente pela

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Biologia e Fisiologia Celular

bicamada lipdica. De forma geral, a bicamada lipdica permevel aos gases, como o dixido de
carbono (CO2), o xido ntrico (NO) e o oxignio (O2), por exemplo; s pequenas molculas de
carter hidrofbico, como os hormnios esterides; ou molculas pequenas polares, mas sem
carga, como o etanol. A bicamada muito pouco permevel gua e praticamente impermevel
aos ons e s molculas maiores, polares ou no, tais como a glicose, lactose, frutose,
aminocidos e nucleotdeos. Como ocorre, ento, o transporte destas molculas atravs das
biomembranas? Conforme discutimos na seo anterior, uma das atividades biolgicas das
protenas da membrana justamente realizar o transporte de ons e molecular atravs das
bicamadas lipdicas, e isto feito pelas protenas multipasso.
O transporte atravs das biomembranas classificado de acordo com a necessidade
energtica para a realizao deste transporte. Assim, temos dois tipos de transporte: passivo e
ativo. No transporte passivo no h gasto de energia, uma vez que as molculas ou ons so
transportados do compartimento de maior concentrao (da molcula ou on) para o
compartimento de menor concentrao (quadro A - figura 2.6). Ou seja, este tipo de transporte
ocorre favor do gradiente de concentrao e pode ou no ser mediado por protenas da
membrana. Quando o transporte no mediado por protenas da membrana denominamos
difuso simples (transporte de - figura 2.6) e quando o mesmo mediado por protenas, ele
denominado difuso facilitada (transporte de z - figura 2.6). Quem facilita? As protenas, sem as
quais esse transporte no poderia ocorrer. A difuso facilitada pode ser mediada por: protenas
carreadoras, como, por exemplo, a protena GLUT-4, que o transportador de glicose encontrado
no tecido adiposo e muscular cardaco e esqueltico; ou por canais inicos, que, como o nome
sugere, so protenas envolvidas no transporte de ons atravs das biomembranas, ons, estes,
que apresentam uma distribuio bastante distinta entre o meio extra e intracelular, como pode
ser observado na tabela 2.3. Os canais inicos podem ser regulados de diversas formas: por
interao com ligantes extracelulares; por interao com ligantes intracelulares, por meio de
alteraes na voltagem da membrana; ou mecanicamente (estiramento da membrana).

ons

Meio Extracelular (mM)

Meio Intracelular (mM)

Sdio

145

15

Potssio

5,0

140

Clcio

1,0 a 2,0

10-4

Magnsio

1,0 a 2,0

0,5

Cloreto

110

5 a 15

Hidrognio

4 x 10

-5

7 x 10-5

Tabela 2.3 Concentrao extracelular e intracelular de alguns ons em clulas de mamferos.

A velocidade do transporte na difuso facilitada depende de uma srie de fatores. O


carter qumico da molcula a ser transportada determinante. Para molculas sem carga, a
velocidade de transporte diretamente proporcional ao gradiente de concentrao da molcula,
ou seja, quanto maior a diferena na concentrao da molcula entre os dois compartimentos
separados pela membrana, maior ser a velocidade do transporte. No entanto, para ons ou
molculas carregadas, dois fatores so decisivos: o gradiente de concentrao e o potencial da
membrana, que juntos constituem o gradiente eletroqumico. Molculas carregadas positivamente,

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Biologia e Fisiologia Celular

por exemplo, so atradas com maior velocidade para um compartimento com predominncia de
cargas negativas.
No transporte ativo, as molculas ou ons so transportadas contra o seu gradiente de
concentrao (quadros B, C e D - figura 2.6). Este tipo de transporte requer um gasto energtico,
uma vez que promove a diminuio da entropia e, conseqentemente, o aumento da energia livre
do sistema. O transporte ativo pode ser dirigido por hidrlise de ATP (trifosfato de adenosina),
sendo classificado como Transporte Ativo Primrio (quadro B - figura 2.6), ou pode ser dirigido por
gradiente eletroqumico, denominado Transporte Ativo Secundrio (quadros C e D - figura 2.6),
uma vez que o gradiente eletroqumico utilizado neste tipo de transporte gerado por um
transporte ativo primrio dependente do ATP. As protenas que realizam o transporte ativo
primrio so conhecidas como ATPases de membrana ou Bombas. Entre estas protenas
podemos destacar: a) a Na+K+-ATPase, que, para cada molcula de ATP hidrolisada, realiza o
transporte de 3 ons Na+ para o meio extracelular e 2 ons K+ para o interior da clula; b) as
protenas da superfamlia ABC (do ingls ATP-binding cassetes), que constituem a maior famlia
de protenas de membrana, sendo encontradas desde bactrias at seres humanos, e esto
envolvidas no transporte de uma srie de molculas, desde hormnios, nucleotdeos, pequenos
peptdeos at xenobiticos; c) a bomba de Ca2 da membrana plasmtica e da membrana do
retculo sarcoplasmtico, responsveis pelos baixos nveis citoslicos deste on; d) a bomba de
prton da membrana lisossomal, que mantm o pH cido desta organela. No caso dos
transportadores secundrios, destacamos os trocadores inicos, o Co-transportador Glicose-Na+,
responsvel pela absoro de glicose no trato digestrio, e os Co-transportadores de aminocidos
e Na+.
Os transportadores da membrana tambm podem ser classificados quanto ao tipo e
direcionamento do transporte efetuado. Protenas que transportam uma nica molcula, sem
gasto energtico, so denominadas Uniporte (quadro A figura 2.6). J os co-transportadores so
denominados Simporte (quadro C figura 2.6), quando transportam uma molcula e um ou mais
ons diferentes na mesma direo, ou Antiporte (quadro D figura 2.6), quando transportam uma
molcula e um ou mais ons diferentes em direes opostas. No co-transporte, a passagem de um
on a favor do gradiente de concentrao fornece a energia necessria para o transporte acoplado
de outro on, ou molcula, contra o gradiente de concentrao.

Figura 2.6 Esquema ilustrativo de transportadores da membrana

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Biologia e Fisiologia Celular

:: FIQUE POR DENTRO!! ::


Os transportadores ABC esto envolvidos em uma srie de patologias humanas,
como a resistncia quimioterapia em cnceres, tambm conhecida como
resistncia a mltiplas drogas e associada superexpresso das protenas ABCB1
(Glicoprotena-P), ABCC1 (Protena MRP) e ABCG2 (Protena BCRP). A
superexpresso destas protenas responsvel pela falncia teraputica no
tratamento de diversos tumores humanos. Outra patologia humana correlacionada
com as protenas ABC a fibrose cstica, uma doena hereditria autossmica
recessiva, onde mutaes no gene que codifica para a protena CFTR, um
transportador de on cloreto, levam a um quadro grave de complicaes
respiratrias, uma vez que o transporte dos ons cloreto essencial para a
fluidificao do muco.

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Biologia e Fisiologia Celular

UNIDADE 3
ENDEREAMENTO DE PROTENAS
1. INTRODUO
A sntese de protenas que so codificadas a partir do genoma nuclear, nos organismos
eucariotos, pode ocorrer tanto nos ribossomos livres no citosol quanto nos ribossomos aderidos
face citoslica da membrana do Retculo Endoplasmtico Granuloso. Nestes organismos, a
sntese protica tambm pode ocorrer nas mitocndrias ou nos cloroplastos, a partir das
informaes contidas no DNA presente nestas organelas. Nesta unidade vamos discutir como as
protenas que so sintetizadas no citosol so endereadas aos seus destinos finais.
A primeira questo que devemos fazer : como a clula sabe para onde uma
determinada protena deve ser endereada? A resposta simples: a clula no sabe. Bem, mas
se a clula no sabe, como a protena chega, ento, ao seu destino correto? Quem respondeu a
essa pergunta pela primeira vez foi o cientista alemo Gnter Blobel no ano de 1970. Blobel
verificou que determinadas protenas apresentavam sequncias especficas de resduos de
aminocidos como parte de sua estrutura primria, e que estas sequncias eram responsveis
pelo endereamento da protena para um determinado compartimento celular. Estas sequncias
funcionam como verdadeiros cdigos postais biolgicos e so conhecidas como sequncia sinal
ou peptdeo sinal. Pelas suas contribuies no campo da biologia celular, Blobel foi contemplado
com o Prmio Nobel de Medicina e Fisiologia no ano de 1999.

2. SEQUNCIAS SINAIS

O endereamento de uma protena ao seu destino final crucial para garantir clula que
todos os processos fisiolgicos ocorram de forma adequada. As protenas de localizao
citoslica so as nicas que no apresentam uma sequncia sinal. Tais protenas so sintetizadas
nos ribossomos livres no citosol. As protenas das mitocndrias, dos cloroplastos, dos
peroxissomos, e do interior do ncleo (nucleoplasma), so sintetizadas nos ribossomos livres no
citosol (figura 3.1A). Por outro lado, as protenas do retculo endoplasmtico, do complexo
golgiense, dos endossomos, dos lisossomos, das vesculas secretoras e da membrana
plasmtica, so sintetizadas nos ribossomos aderidos face citoslica da membrana do retculo
endoplasmtico granuloso (figura 3.1B). O aspecto granuloso do retculo endoplasmtico deve-se
justamente presena dos ribossomos envolvidos na sntese destas protenas. nesta regio do
retculo, conhecida como retculo endoplasmtico granuloso (REG), onde ocorre a sntese da
cadeia polipeptdica de forma simultnea ao transporte da mesma para o interior do retculo
endoplasmtico (lmen do retculo).
Diversas sequncias sinais j foram descritas. A tabela 3.1 apresenta uma relao de
algumas sequncias sinais caractersticas para o endereamento para alguns compartimentos
celulares, incluindo sequncias sinais de reteno de protenas no retculo endoplasmtico e de
exportao de protenas do ncleo para o citosol. Estudos modificando as sequncias sinais
demonstraram que pequenas alteraes nas sequncias podem comprometer o endereamento
correto destas protenas para o seu destino final. Alm do mais, a insero de uma sequncia
sinal em uma protena de localizao citoslica, pode direcionar esta protena para um
determinado compartimento celular.

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Biologia e Fisiologia Celular

Figura 3.1 Sntese e endereamento de protenas.

Destino

Sequncia Sinal

Transporte para o Ncleo

~Pro-Pro-Lys-Lys-Lys-Arg-Lys-Val~

Exportao do Ncleo

~Leu-Ala-Leu-Lys-Leu-Ala-Gly-Leu-Asp-Ile~

Transporte

para

Retculo H3N+-Met-Met-Ser-Phe-Val-Ser-Leu-Leu-Leu-Val-Gly-Ile-Leu-Phe-

Endoplasmtico
Reteno

Trp-Ala-Thr-Glu-Ala-Glu-Gln-Leu-Thr-Lys-Cys-Glu-Val-Phe- Gln~
Retculo ~Lys-Asp-Glu-Leu-COO- (protenas solveis do lmen)

no

~Asp-Asp-X-X-COO- (protenas integrais da membrana)

Endoplasmtico
Transporte

para

Mitocondrial
Transporte
Peroxissomos

Matriz H3N+-Met-Leu-Ser-Leu-Arg-Gln-Ser-Ile-Arg-Phe-Phe-Lys-Pro-AlaThr-Arg-Thr-Leu-Cys-Ser-Ser-Arg-Tyr-Leu-Leu~

para

os ~Ser-Lys-Leu-COOH3N+-----Arg-Leu-X5-His-Leu~

Tabela 3.1 Exemplos de sequncias sinais. X representa qualquer resduo de aminocido


hidrofbico. COO- representa a poro carboxi-terminal e H3N+ representa a poro amino-terminal.

3. ENOVELAMENTO DE PROTENAS

As protenas para exercerem a sua atividade biolgica necessitam adquirir a sua


conformao nativa, ou seja, uma estrutura terciria que permita uma interao com o(s) seu(s)
substrato(s) e conseqentemente permita o pleno exerccio de sua atividade biolgica. O
enovelamento de protenas o processo pelo qual as mesmas adquirem as suas estruturas
tridimensionais funcionais. As protenas sintetizadas nos ribossomos livres no citosol so
enoveladas por protenas especficas denominadas chaperonas. As chaperonas citoslicas so
importantes para prevenirem o dobramento incorreto das protenas antes do trmino da sntese e
por auxiliarem no enovelamento da protena para a aquisio da sua conformao nativa (figura
3.2). Dentro do lmen do retculo endoplasmtico granuloso tambm so encontradas
chaperonas. Estas chaperonas reticulares se ligam em regies hidrofbicas de protenas no

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Biologia e Fisiologia Celular

dobradas, prevenindo o seu transporte precoce para o complexo golgiense. Uma enzima bastante
importante no dobramento de protenas no lmen do retculo endoplasmtico a Dissulfeto
Isomerase, que catalisa a quebra e o estabelecimento de pontes de dissulfeto entre resduos de
cistena, permitindo o rearranjo correto destas pontes de dissulfeto e seu posterior enovelamento.
No enovelamento das protenas globulares, os resduos de aminocidos com cadeia lateral
hidrofbica tendem a ficar no interior da mesma, enquanto que os resduos de aminocidos com
cadeia lateral hidroflica tendem a ficar na superfcie das protenas, permitindo, assim, que a
protena seja solvel.

Figura 3.2 Enovelamento de Protenas. Modificado de


http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/a/a9/Protein_folding.png

:: FIQUE POR DENTRO!! ::


A desnaturao um processo qumico no qual uma protena perde a sua
estrutura tridimensional funcional. Esse processo pode ser mediado por diversos
fatores, tais como: elevadas temperaturas, elevadas concentraes de solutos, pH
extremos, foras mecnicas ou desnaturantes qumicos. Sob certas condies,
algumas protenas podem recuperar o seu estado funcional de dobramento, porm,
na maioria dos casos, a desnaturao irreversvel. Uma protena completamente
desnaturada perde tanto a sua estrutura terciria como secundria. Um processo
clssico de desnaturao de protenas a alterao do estado fsico das protenas
que constituem a clara dos ovos quando o mesmo submetido elevadas
temperaturas.

4. MECANISMOS DE ENDEREAMENTO DE PROTENAS


As protenas que possuem sequncias sinais so endereadas para os demais
compartimentos celulares por meio de trs mecanismos distintos: transporte mediado (ncleo),
transporte vesicular (complexo golgiense, endossomos tardios, lisossomos e vesculas secretoras)
e transporte transmembranar (retculo endoplasmtico, mitocndrias, cloroplastos e
peroxissomos).

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Biologia e Fisiologia Celular

4.1. TRANSPORTE MEDIADO


No transporte mediado, as protenas que apresentam sequncia de localizao nuclear
(SLN) so endereadas ao nucleoplasma atravs do complexo de poros nucleares. Esse
transporte mediado por protenas especializadas, denominadas importinas, que se ligam
especificamente s SLNs, que, ao interagirem com protenas fibrilares do complexo de poros
nucleares, realizam o transporte das protenas para o interior do ncleo. Algumas protenas, como
determinados fatores de transcrio, apresentam tanto SLN como um sinal de exportao nuclear,
circulando, assim, entre o citosol e o nucleoplasma, de acordo com o estado fisiolgico da clula.
4.2. TRANSPORTE TRANSMEMBRANAR
O transporte transmembranar mediado por protenas integrais transmembranares
presentes nas membranas de determinados compartimentos celulares. Estas protenas atuam
como translocadores proticos, formando poros, atravs dos quais as protenas so inseridas nos
compartimentos. Neste caso, as sequncias sinais das protenas interagem diretamente com os
translocadores proticos sem a necessidade de uma protena mediadora (como a importina, por
exemplo). No transporte para as mitocndrias, por exemplo, complexos proticos presentes na
membrana mitocondrial externa (TOM) e na membrana mitocondrial interna (TIM), alm de
protenas solveis do espao intermembrana, so responsveis pela importao das protenas
mitocndrias. Estas protenas so enoveladas aps a importao para a organela, por intermdio
de chaperonas mitocondriais e as suas sequncias sinais, de localizao amino-terminal, so
clivadas por peptidases presentes na organela. De forma diferente, as SLN no so clivadas das
cadeias polipeptdicas aps a importao das protenas nucleares. A nica exceo no transporte
transmembranar de protenas o direcionamento para o retculo endoplasmtico, uma vez que o
transporte ocorre de forma simultnea sntese protica na maioria das clulas eucariontes.
Vamos, agora, analisar, com mais detalhamento, como ocorre o transporte para o retculo
endoplasmtico. Uma vez iniciada a sntese protica no citosol, caso a protena apresente uma
sequncia sinal de localizao reticular, uma protena citoslica solvel, denominada Partcula de
Reconhecimento de Sinal (PRS), se liga sequncia sinal do peptdeo nascente e interrompe a
sntese protica (figura 3.3 passo 1). O complexo ribossomo/RNAm/peptdeo nascente/PRS ,
ento, direcionado face citoslica da membrana do retculo endoplasmtico, onde a PRS
interage com um receptor presente nesta membrana (receptor da PRS), ancorando todo o
complexo traducional na superfcie do retculo endoplasmtico (figura 3.3 passo 2). Em seguida,
a PRS se desliga do complexo traducional e do receptor da PRS, e o complexo traducional passa
a interagir com o translocador da membrana do REG. A sntese protica, ento, se reinicia, com a
cadeia polipeptdica sendo inserida para o lmen do retculo, caracterizando o transporte
simultneo traduo (figura 3.3 passo 3). Aps o trmino da sntese, o complexo traducional
desfeito, sendo liberado no citosol, e o translocador sofre mudanas conformacionais que levam
ao fechamento do poro na membrana reticular.
As protenas que so sintetizadas nos ribossomos aderidos membrana do REG podem
ter destinos diferentes. Algumas destas protenas so protenas solveis, liberadas no lmen do
REG, e podem ser direcionadas para o complexo golgiense (numa rota conhecida como via de
exportao ou via de secreo), sendo, em seguida, endereadas aos endossomos tardios, s
vesculas secretoras ou para a membrana plasmtica, onde sero liberadas no meio extracelular.

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Biologia e Fisiologia Celular

No caso de protenas solveis do lmen do retculo, a sequncia sinal localizada na regio


amino-terminal da protena e clivada por uma peptidase reticular.
:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
Faa uma pesquisa na internet e identifique protenas, ou polipeptdeos, que
so liberados no meio extracelular e cuja via biossinttica est associada ao retculo
endoplasmtico granuloso. Algumas destas molculas desempenham importantes
papis fisiolgicos.

Figura 3.3 Endereamento de protenas para o retculo endoplasmtico.

A grande maioria das protenas sintetizadas no REG so protenas integrais


transmembrana. Como vimos na unidade 2, estas protenas podem ser unipasso ou multipasso.
Nas protenas integrais unipasso a sequncia sinal pode estar localizada tanto na
extremidade amino-terminal quanto no interior da cadeia polipeptdica. No primeiro caso, a
sequncia sinal clivada e uma regio predominantemente lipoflica, rica em resduos de
aminocidos com cadeia lateral hidrofbica e conhecida como sequncia de parada de
transferncia (SPT), constituir o domnio transmembrana da protena. Nestas protenas, a poro
carboxi-terminal ficar exposta no citosol. Quando a protena apresentar uma sequncia sinal
interna (SSI), esta sequncia, alm de direcionar o transporte do complexo traducional para o
REG, atuar, tambm, como uma SPT, sendo que a poro carboxi-terminal da protena pode
ficar voltada para o lmen do retculo ou para o citosol.
A sntese das protenas integrais multipasso segue a mesma lgica das protenas integrais
unipasso. Os domnios transmembrana de tais protenas so formados pela intercalao de SSI
com SPT.
As protenas integrais unipasso ou multipasso podem seguir os mesmos destinos das
protenas solveis sintetizadas no REG. desta forma que so sintetizadas, por exemplo, todas
as protenas integrais transmembrana, que constituem, por exemplo, os receptores de superfcie
celular e os canais inicos.

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Biologia e Fisiologia Celular

:: TA NA WEB!!! ::
Nos endereos abaixo voc encontrar ilustraes mostrando a forma de inseres
destas protenas na membrana do REG.
Protena unipasso com sequncia sinal clivvel
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/br.fcgi?book=mboc4&part=A2202&rendertyp
e=figure&id=A2224
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/picrender.fcgi?book=mboc4&part=A2202&blo
bname=ch12f47.jpg
Protena unipasso com sequncia sinal interna
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/br.fcgi?book=mboc4&part=A2202&rendertyp
e=figure&id=A2225
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/picrender.fcgi?book=mboc4&part=A2202&blo
bname=ch12f48.jpg
Protena multipasso
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/br.fcgi?book=mboc4&part=A2202&rendertyp
e=figure&id=A2227
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/picrender.fcgi?book=mboc4&part=A2202&blo
bname=ch12f49.jpg

4.3. TRANSPORTE VESICULAR


O terceiro mecanismo envolvido no endereamento de protenas o transporte vesicular.
As protenas que so sintetizadas nos ribossomos aderidos membrana do retculo
endoplasmtico, sejam integrais da membrana ou solveis do lmen do retculo, podem ter
diferentes destinos celulares. A figura 3.4 representa um diagrama com as possveis rotas para
estas protenas. Independente da destinao celular (ou mesmo extracelular), tais protenas so
transportadas de um compartimento para o outro atravs de vesculas especializadas. Trs vias
de transporte vesicular so encontradas nos organismos eucariotos: via de exportao, via de
recuperao e via endoctica.
A via de exportao tem incio no retculo endoplasmtico e pode seguir trs destinos: a
formao dos lisossomos, a secreo constitutiva (SC) e a secreo regulada (SR). As enzimas
lisossomais (hidrolases cidas) so endereadas aos endossomos tardios (vesculas que recebem
o material endocitado do meio extracelular) para constiturem os lisossomos. Na secreo
constitutiva, as vesculas, contendo as protenas sintetizadas no REG, so direcionadas
imediatamente para a membrana plasmtica, sendo este processo fundamental para manuteno
das funes primordiais desta membrana (transporte, sinalizao, adeso ou reconhecimento). As
vesculas envolvidas na secreo regulada, no entanto, necessitam de sinais extracelulares para
liberarem os seus contedos no meio extracelular. O aumento dos nveis de clcio intracelular
responsvel pela fuso destas vesculas com a membrana plasmtica e conseqente liberao do
contedo vesicular no meio extracelular. atravs da secreo regulada, por exemplo, que a

37

Biologia e Fisiologia Celular

insulina liberada pelas clulas das Ilhotas de Langerhans em resposta ao aumento da glicose na
corrente sangunea.

Figura 3.4 Diagrama ilustrativo do trfego vesicular. VEx = via de exportao. VR = via de
recuperao. VEn = via endoctica. SC = secreo constitutiva. SR = secreo regulada.

:: FIQUE LIGADO!! ::
Os lisossomos so organelas ricas em enzimas responsveis pela
degradao de uma srie de substratos de origem extracelular. Entre as enzimas
lisossomais podemos destacar as nucleases, proteases, glicosidases, lipases,
fosfatases, fosfolipases e sulfatases. Estas enzimas so conhecidas como hidrolases
cidas, uma vez que as reaes catalisadas por estas enzimas so reaes de
hidrlise que ocorrem em meio cido. A hidrlise enzimtica consiste em uma reao
qumica catalisada por uma enzima que utiliza a molcula de gua para clivar outra
molcula. O pH cido dos lisossomos mantido por uma bomba de prtons que
transporta, ativamente, prtons H+ para o lmen lisossomal. As hidrolases cidas so
sintetizadas no REG e transportadas, por vesculas, at os endossomos tardios, vindo
a constituir os lisossomos.

38

Biologia e Fisiologia Celular

:: FIQUE DE OLHO!! ::
Diversos processos fisiolgicos dependem da fuso das vesculas de
secreo regulada com a membrana plasmtica, entre os quais podemos destacar
a secreo de insulina, a neurotransmisso e a fertilizao. Em todos os casos, o
aumento da concentrao de ons clcio diretamente responsvel pela fuso das
vesculas secretoras com a membrana plasmtica.

:: TA NA WEB!!! ::

No

endereo

http://www.johnkyrk.com/golgiAlone.pt.html

voc

ir

encontrar uma animao sobre endereamento de protenas e trfego vesicular.

:: PERGUNTAS?? ::
Tanto o retculo endoplasmtico quanto o complexo golgiense possuem
protenas que desempenham suas atividades nestas organelas, sendo conhecidas
como protenas residentes do retculo ou do complexo golgiense. Faa uma
pesquisa e descubra quais so os mecanismos responsveis pela reteno destas
protenas nestas organelas.

39

Biologia e Fisiologia Celular

UNIDADE 4
RETCULO ENDOPLASMTICO E COMPLEXO GOLGIENSE
1. INTRODUO
Grande parte das protenas sintetizadas nos ribossomos aderidos face citoslica da
membrana do retculo sofrem alteraes estruturais durante ou aps a sntese. A modificao
mais marcante a adio de resduos de acares, em um processo conhecido como
glicosilao. A adio dos carboidratos pode ocorrer tanto no retculo endoplasmtico quanto no
complexo golgiense. Alm da glicosilao de protenas outros processos biolgicos relevantes
ocorrem nestas duas organelas. Nesta unidade vamos conhecer um pouco mais sobre o papel
biolgico e a organizao estrutural destes compartimentos celulares.

2. RETCULO ENDOPLAMTICO
O retculo endoplasmtico pode ou no apresentar ribossomos aderidos face citoslica
de sua membrana. Quando os ribossomos esto presentes, o retculo nomeado retculo
endoplasmtico granuloso (REG). Na ausncia dos ribossomos, o retculo denominado retculo
endoplasmtico no-granuloso (RENG). Esta feio estrutural facilmente visualizada atravs da
microscopia eletrnica de transmisso e apresenta uma relao direta com o papel biolgico desta
organela. O retculo endoplasmtico, seja granuloso ou no, constitudo por uma extensa rede
de membranas, em formato de sacos achatados, dispostos em forma paralela, como pode ser
visualizado na figura 4.1.

Figura 4.1 - Fotomicrografia eletrnica de uma


clula do tecido pulmonar evidenciando o retculo
endoplasmtico granuloso. Modificado de
http://en.wikipedia.org/wiki/File:Clara_cell_lung__TEM.jpg

3. RETCULO ENDOPLASMTICO GRANULOSO

A membrana do retculo endoplasmtico granuloso contnua membrana externa do


envelope nuclear, sendo caracterizada pela presena de polirribossomos na sua face citoslica.
Os polirribossomos so formados pela associao de vrios ribossomos a uma nica fita de
RNAm. O interior do REG denominado lmen reticular e o local onde ocorre tanto a
glicosilao de protenas, quanto a ancoragem de protenas integrais por meio da ncora de
glicosilfosfatidilinositol (GPI). O REG notavelmente presente em clulas secretoras de peptdeos
e protenas, tais como hepatcitos, linfcitos B, fibroblastos e clulas pancreticas. Nestes tipos
celulares o REG ocupa uma grande rea do citoplasma.

40

Biologia e Fisiologia Celular

:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
Faa uma pesquisa e descubra quais so as molculas secretadas pelos
tipos celulares citados no pargrafo anterior e a sua relevncia biolgica.

3.1. GLICOSILAO NO RETCULO ENDOPLASMTICO


A glicosilao de protenas um processo fundamental para o enovelamento correto das
protenas no lmen reticular. Uma vez glicosiladas, as protenas so denominadas glicoprotenas.
Estas glicoprotenas desempenham papis biolgicos variados na superfcie celular, atuando
como receptores, molculas de adeso e reconhecimento celular, entre outros. Alm disto, a
poro glicdica das glicoprotenas contribui para a formao do glicoclice. O glicoclice o
conjunto de acares expostos na superfcie celular e que esto associados com uma srie de
eventos celulares, tais como adeso e reconhecimento celular e proteo da membrana contra
ao de proteases e fosfolipases.
A glicosilao - adio de resduos de acar a uma protena - no retculo endoplasmtico
granuloso mediada por enzimas presentes no lmen reticular e ocorre de forma co-traducional,
ou seja, durante a sntese da protena pelos ribossomos aderidos membrana reticular. A
glicosilao reticular ocorre em bloco, onde um oligossacardeo precursor, constitudo por 14
resduos de acar, adicionado, covalentemente, pela enzima oligossacaril-transferase,
protena alvo. Este oligossacardeo precursor formado por 2 resduos de N-acetilglicosamina, 3
resduos de glicose e 9 resduos de manose e se encontra ligado, de forma covalente, molcula
de dolicol-fosfato, um lipdio presente na face luminal da membrana reticular, e que atua como
ncora do oligossacardeo precursor. A enzima oligossacaril-transferase, como o prprio nome
sugere, transfere o oligossacardeo precursor da molcula de dolicol-fosfato para a protena alvo,
estabelecendo uma ligao covalente entre um resduo de N-acetilglicosamina e o grupamento
amino da cadeia lateral de um resduo do aminocido asparagina, sendo, por este motivo, a
glicosilao denominada N-ligada (o N refere-se ao nitrognio do grupamento amino da cadeia
lateral da asparagina). Entretanto, no so todos os resduos de asparagina de uma protena que
so glicosilados. Apenas os resduos de asparagina que esto presentes em uma sequncia
especfica, compostas por 3 resduos de aminocidos (Asn-X-Ser ou Asn-X-Thr, onde X pode ser
qualquer resduo de aminocido, exceto prolina ou cido asprtico), e que permitem uma
interao com a enzima oligossacaril-transferase, recebem o oligossacardeo precursor. Uma
glicoprotena pode apresentar mais de um stio de glicosilao.
Aps o trmino da sntese protica, o oligossacardeo precursor processado no lmen do
retculo endoplasmtico, sofrendo a ao das enzimas glicosidase e manosidase reticulares.
Estas enzimas so responsveis pela retirada de trs resduos de glicose e um resduo de
manose. A reduo no nmero de resduos de acar funciona como um controle de qualidade do
processo de enovelamento, permitindo, assim, que a glicoprotena seja exportada para o
complexo golgiense somente aps o seu correto dobramento. O processamento do
oligossacardeo continuar, ento, no complexo golgiense, como veremos em seguida.

41

Biologia e Fisiologia Celular

:: TA NA WEB!!! ::
No endereo abaixo voc encontrar uma animao mostrando, de forma
esquemtica, como ocorre a glicosilao de protenas no retculo endoplasmtico
granuloso e sua subseqente exportao para o complexo golgiense.
Protein Glycosylation Animation http://www.cdgs.com/popupbasic.html

4. RETCULO ENDOPLASMTICO NO-GRANULOSO


O retculo endoplasmtico no-granuloso caracterizado, estruturalmente, pela ausncia
de ribossomos em sua membrana, que, na grande maioria das clulas, contnua membrana do
REG.
O RENG responsvel pela sntese de cidos graxos e dos fosfolipdeos que constituem
as biomembranas. Esta organela bastante evidente em tipos celulares envolvidos na sntese
macia de lipdeos, tais como: as clulas que constituem o crtex da glndula supra-renal e que
so responsveis pela sntese e secreo de corticosterides; as clulas de Leydig (clulas
intersticiais do testculo), responsveis pela sntese e secreo de testosterona; e os hepatcitos.
A sntese dos fosfolipdeos de membrana ocorre na face citoslica da membrana do
RENG, tendo como lipdeo precursor o cido fosfatdico, que formado pela unio de uma
molcula de glicerol com duas molculas de cido graxo. Uma vez que as enzimas responsveis
pela sntese dos fosfolipdeos esto presentes na face citoslica da membrana do RENG, torna-se
necessria a transferncia de parte destes fosfolipdeos, recm sintetizados, para a face luminal
da membrana do RENG, de forma a manter a estabilidade da bicamada lipdica. A translocao
destes fosfolipdeos mediada por protenas denominadas flipases, que catalisam, ativamente, a
transferncia destes fosfolipdeos da monocamada citoslica para a monocamada luminal,
permitindo, deste modo, um crescimento uniforme da membrana. O RENG , tambm, o principal
local de sntese de dois outros importantes lipdeos de membrana: o colesterol e a ceramida.
Como vimos na unidade 2, a ceramida composta pela esfingosina e um cido graxo, sendo a
base estrutural da esfingomielina, o nico fosfolipdeo de membrana que no sintetizado no
RENG, mas no complexo golgiense.
:: TA NA WEB!!! ::
No endereo abaixo voc encontrar uma ilustrao demonstrando a sntese dos
fosfolipdeos no retculo endoplasmtico no-granuloso.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/br.fcgi?book=cooper&part=A1466&rendertyp
e=figure&id=A1488

42

Biologia e Fisiologia Celular

:: SAIBA MAIS... ::
Nos hepatcitos, em especial, o RENG est envolvido em processos de
destoxificao celular, transformando substncias hidrofbicas em compostos com
carter mais hidrossolvel, permitindo, assim, a sua excreo, principalmente por via
renal. O complexo enzimtico responsvel por esse processo conhecido como
citocromo P450 (CYP). Apesar do fgado ser o principal local de destoxificao celular
mediada pelo citocromo P450, outros rgos tambm expressam o complexo
(pulmo, rins, pele, crebro e intestino). O complexo citocromo P450 catalisa a
oxidao de substratos orgnicos, tais como intermedirios metablicos de lipdeos e
esterides, assim como substncias exgenas (xenobiticos) potencialmente txicas.
O CYP est envolvido na biotransformao de uma srie de frmacos. Em alguns
casos, as reaes enzimticas mediadas pelo CYP levam inativao e excreo de
um frmaco, em outros casos, o CYP responsvel pela bioativao do frmaco a
partir da sua converso em um metablito ativo.

:: FIQUE POR DENTRO!! ::


O composto cetoconazol, um derivado do alcalide imidazol, um inibidor
do complexo CYP51 (14-desmetilase) bastante utilizado no tratamento de
infeces provocadas por fungos. O princpio de sua atividade antifngica se
baseia na inibio da converso do lanosterol em ergosterol, um importante lipdeo
que compe a membrana celular dos fungos. O ergosterol desempenha o mesmo
papel biolgico que o colesterol desempenha nas clulas animais.

:: FIQUE DE OLHO!! ::
Em alguns tipos celulares, como as clulas musculares da musculatura
lisa ou estriada, o RENG denominado retculo sarcoplasmtico. Nestas clulas
o RENG responsvel pelo armazenamento e eventual liberao de ons clcio.
A membrana do retculo sarcoplasmtico rica em bombas de clcio (SERCA ou
Ca2+-ATPase do retculo sarco/endoplasmtico) que promovem o transporte dos
ons clcio do citosol para o interior do retculo. Quando as clulas musculares
so estimuladas, canais de clcio so abertos na membrana do retculo
sarcoplasmtico, promovendo o aumento da concentrao de ons clcio no
citosol e a conseqente contrao muscular. importante ressaltar que o
armazenamento de clcio no retculo endoplasmtico no uma exclusividade
das clulas musculares, pois tambm se faz presente nos mais diversos tipos
celulares.

43

Biologia e Fisiologia Celular

5. COMPLEXO GOLGIENSE
5.1 UM POUCO DE HISTRIA...
O complexo golgiense foi identificado, no ano de 1898, pelo mdico e pesquisador italiano
Camilo Golgi. Golgi estava interessado no estudo da morfologia do tecido nervoso e as tcnicas
de colorao, vigentes na poca, eram insatisfatrias para uma adequada visualizao tecidual.
Assim, Camilo desenvolveu uma srie de tcnicas de impregnao destes tecidos com metais.
Uma destas tcnicas, denominada reao negra, onde o tecido era tratado com dicromato de
potssio e posteriormente impregnado com nitrato de prata, formando cromato de prata, permitiu,
ao pesquisador, a identificao de uma rede intracelular que ele denominou aparato reticular
interno. Nascia o complexo de Golgi, conhecido, hoje, como complexo golgiense (CG).
:: TA NA WEB!!! ::
Conhea um pouco mais da vida e da histria de Camilo Golgi e de suas
contribuies

para

as

cincias

biolgicas

http://nobelprize.org/nobel_prizes/medicine/articles/golgi/

5.2. ESTRUTURA DO COMPLEXO GOLGIENSE


O complexo de Golgi composto por um sistema de vesculas achatadas, denominadas
cisterna, que podem variar em nmero e tamanho. Estas cisternas so circundadas por diversas
vesculas esfricas que so responsveis pelo transporte de molculas entre os compartimentos
do CG. Na maioria das clulas animais e vegetais, o CG constitudo por 5 a 8 cisternas, que so
mantidas prximas por meio de iteraes com uma matriz protica presente no citosol. O CG
mantm uma estreita relao funcional e estrutural com o retculo endoplasmtico. A face do CG
voltada para o retculo (e conseqentemente, para o ncleo celular) , geralmente, convexa e
denominada rede cis. J a face voltada para a membrana plasmtica, cncava, e denominada
rede trans. Entre as redes cis e trans, encontram-se as demais cisternas que compem o CG
(figura 4.2).

Figura 4.2 - Fotomicrografia eletrnica de


um

leuccito

complexo

humano

golgiense.

evidenciando
Modificado

http://en.wikipedia.org/wiki/File:Human_
leukocyte,_showing_golgi_-_TEM.jpg

44

o
de

Biologia e Fisiologia Celular

5.3. O COMPLEXO GOLGIENSE E O PROCESSAMENTO DE PROTENAS


As glicoprotenas sintetizadas no REG, e que so direcionadas para o complexo golgiense
por meio de transporte vesicular, sofrem uma srie de modificaes, na sua poro glicdica,
medida que so transportadas pelos compartimentos que constituem o CG. Estas protenas so
transportadas para a rede cis atravs de vesculas que brotam da membrana do retculo
endoplasmtico (figura 4.3). Ao se fusionarem com a membrana das cisternas que compreendem
a rede cis, estas vesculas passam a integrar o CG.
Figura 4.3 - Esquema ilustrativo do trfego de
vesculas e transporte de protenas entre o retculo
endoplasmtico e o complexo golgiense.

Envelope

nuclear (1); Complexo de poros nucleares (2); Retculo


endoplasmtico
endoplasmtico

granuloso
no-granuloso

(3);
(4);

Retculo
Ribossomos

aderidos ao REG (5); Protenas (6); Vesculas de


transporte (7); Complexo Golgiense (8); Face cis do
complexo golgiense (9); Face trans do complexo
golgiense; Cisternas do complexo golgiense (10).
Fonte:
http://en.wikipedia.org/wiki/File:Nucleus_ER_golgi.svg

Os oligossacardeos N-ligados so processados no CG por uma srie de enzimas que


modificam sobremaneira estes grupamentos. Aps o processamento no CG podemos encontrar
duas classes de oligossacardeos N-ligados: oligossacardeos ricos em manose e
oligossacardeos complexos. Os oligossacardeos ricos em manose so constitudos por 2
resduos de N-acetilglicosamina e 5 resduos de manose. Os oligossacardeos complexos
apresentam uma maior diversidade na composio dos resduos de acar, como pode ser
observado na figura 4.4C. Os oligossacardeos presentes nas glicoprotenas chegam rede cis do
CG com 10 resduos de acar (figura 4.4A). Manosidases presentes na cisterna cis do CG
removem 3 resduos de manose do oligossacardeo, formando, assim os oligossacardeos ricos
em manose (figura 4.4B). Entretanto, em alguns casos, os oligossacardeos sofrem uma srie de
adies de novos resduos de acar, dando origem aos oligossacardeos complexos.

45

Biologia e Fisiologia Celular

Figura 4.4 - Processamento de oligossacardeos N-ligados no complexo golgiense. A oligossacardeo com 10 resduos de acar (retculo endoplasmtico). B - oligossacardeo rico em
manose (complexo golgiense). C - oligossacardeo complexo (complexo golgiense). Asn - resduo de
asparagina da glicoprotena alvo. A linha negra contnua representa a cadeia polipeptdica da
glicoprotena.

As glicoprotenas podem apresentar os dois tipos de glicosilao N-ligada em diferentes


pores da cadeia polipeptdica. A definio quanto tipo de oligossacardeo (rico em manose ou
complexo) depende, fundamentalmente, da acessibilidade das enzimas responsveis pela adio
dos resduos de acar ao stio de glicosilao. A diversidade composicional dos oligossacardeos
complexos responsvel pela especificidade nos processos de reconhecimento celular mediados
pela interao entre protenas que se ligam a carboidratos, conhecidas como lectinas, com as
glicoprotenas expressas na superfcie celular.
Alm do processamento dos oligossacardeos N-ligados provenientes do REG, o CG
tambm responsvel pela glicosilao de protenas. A glicosilao que ocorre no CG apresenta
algumas caractersticas que a distinguem da glicosilao que ocorre no REG. No CG, a adio
dos resduos de acares ocorre de forma seriada, ou seja, em contraste com a adio em bloco
que ocorre no REG, a adio dos resduos, no CG, ocorre passo-a-passo por ao de glicosiltransferases golgienses. O primeiro resduo a ser adicionado a uma protena sempre a Nacetilgalactosamina. Dois resduos de aminocidos podem ser glicosilados: a serina ou a treonina;
dando origem, assim, ao que denominamos de oligossacardeos O-ligados (o O refere-se ao
oxignio do grupamento hidroxila da cadeia lateral da serina ou da treonina). A glicosilao Oligada responsvel pela formao das proteoglicanas - glicoprotenas altamente glicosiladas,
ricas em glicosaminoglicanas e de carter aninico. As proteoglicanas podem ser secretadas para
o meio extracelular, onde desempenham um importante papel na composio da matriz
extracelular, ou permanecerem na membrana plasmtica como protenas integrais da membrana.
As proteoglicanas so os principais componentes do muco que reveste diversos epitlios e das
cartilagens. Clulas especializadas na secreo de mucopolissacardeos costumam apresentar
uma extensa rea do citoplasma ocupada pelo complexo golgiense, como, por exemplo, as
clulas de Goblet que constituem o epitlio intestinal. Entre as principais proteoglicanas podemos
citar o condroitim sulfato, o dermatam sulfato, a heparina, o heparam sulfato e o queratam sulfato.

46

Biologia e Fisiologia Celular

Outras reaes bioqumicas importantes tambm ocorrem no CG, como a fosforilao de


protenas destinadas aos lisossomos e a sulfatao e sntese de carboidratos. Nas clulas
vegetais, o complexo golgiense o local da sntese de pectinas (um heteropolissacardeo) e da
hemicelulose, molculas que fazem parte da parede celular.
:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
Faa uma pesquisa na internet e aprenda sobre o uso da heparina na indstria
farmacutica e da pectina na indstria alimentcia.

47

Biologia e Fisiologia Celular

UNIDADE 5
MITOCNDRIA
1. UM POUCO DE HISTRIA
A mitocndria (do grego, mitos, linha + chondros, grnulo) entrou para a histria da cincia
em 1857, quando foi descrita pela primeira vez por Albert von Klliker, que relatou a presena de
grnulos em clulas musculares. A primeira denominao da organela, no entanto, foi cunhada
pelo histologista alemo Richard Altmann em 1894. Ao observar que os grnulos presentes em
alguns tipos celulares; se assemelhavam a bactrias, Altmann denominou-os de bioblastos,
considerando-os como a unidade bsica da atividade celular (figura 5.1). O termo mitochondrion
foi atribudo pelo mdico e pesquisador alemo Carl Benda, em 1898. A organela, contudo, s
recebeu um destaque maior a partir da metade do sculo XX. A Bioqumica foi a grande
responsvel pelo crescente interesse na mitocndria, uma vez que o estudo do metabolismo
aerbico convergia para a organela.

Figura

5.1

Ilustrao

de

clulas

de

fgado

de

anfbio

ricas

em

bioblastos.

Die

elementarorganismen und ihre beziehungen zu den zellen. Altmann, 1890.

No final do sculo XIX, os trabalhos de Louis Pasteur e Eduard Buchner davam incio ao
estudo do metabolismo glicdico, estudando o processo de fermentao em microorganismos e
extratos celulares. Franz Knoop, no incio do sculo XX, apresentava seus estudos sobre a
oxidao de cidos graxos. Estava pavimentada, assim, a estrada que levaria a bioqumica de
encontro mitocndria. Os anos 1930 e 1940 foram fundamentais para o desenvolvimento da
bioqumica. Os trabalhos de Gustav Embdem, Otto Meyerhoff, e Jacob Parnas (via glicoltica,
1930-40); Hans Krebs (ciclo da uria, 1932 - ciclo do cido tricarboxlico, 1937); Nathan Kaplan e
Fritz Lipmann (coenzima-A, 1945); e Severo Ochoa e Feodor Lynen (sntese do citrato, 1951)
conferiram uma nova dimenso ao estudo do metabolismo celular. A histria da mitocndria
caminhava de mos dadas com as vias metablicas: na medida em que se desvendavam etapas
nos processos de oxidao de substratos energticos, a mitocndria ia sendo revelada.

48

Biologia e Fisiologia Celular

A mitocndria foi isolada pela primeira vez em 1934, por Robert Bensley e Normand Hoerr.
Entretanto, somente com o estabelecimento da tcnica de centrifugao diferencial, por Martin
Behrens, a partir de 1938, que foi possvel obter preparaes mais purificadas da organela. Os
trabalhos do bilogo belga Albert Claude, no incio dos anos 40, foram de suma importncia para
o desenvolvimento de tcnicas que permitiriam o isolamento de mitocndrias e demais
componentes intracelulares. George Hogeboom, Walter Schneider e George Emil Palade, no final
da mesma dcada, refinaram as tcnicas desenvolvidas inicialmente por Claude, permitindo,
enfim, os estudos com mitocndrias bioquimicamente ativas. Com a mitocndria em mos,
Eugene Kennedy e Albert Lehninger dariam o passo decisivo. Os trabalhos desenvolvidos por
estes autores, entre os anos de 1948 e 1950, demonstrando que o ciclo do cido tricarboxlico, a
-oxidao e a fosforilao oxidativa ocorrem na mitocndria, foram cruciais para que a organela
fosse abraada, definitivamente, por todos aqueles que estudavam o metabolismo celular,
tornando-se um domnio quase exclusivo da bioqumica. A avalanche de estudos bioqumicos com
a organela culminaria, anos mais tarde, na formulao da Hiptese Quimiosmtica, pelo cientista
britnico Peter Mitchell, que correlacionava a impermeabilidade da membrana mitocondrial interna
com o transporte de prtons (H+), a gerao de um gradiente eletroqumico, e a sntese de ATP.
Mitchell, a bioqumica, e a mitocndria foram contemplados, no ano de 1978, com o Prmio Nobel
em Qumica.
Contudo, a mitocndria no era estudada somente sob o ponto de vista energtico. Em
1957 o grupo do pesquisador belga Chvremont identificou a presena de cidos nuclicos em
mitocndrias de clulas musculares, o que levantou suspeita sobre a existncia de um DNA
mitocondrial (DNAmt). As suspeitas iniciais de Chvremont seriam confirmadas seis anos depois.
Em 1963, dez anos aps a descrio da estrutura molecular do DNA por James Watson e Francis
Crick, Margit Nass e Sylvian Nass, atravs da microscopia eletrnica, observam em mitocndrias
de clulas embrionrias de aves, filamentos que julgavam ser de uma molcula de DNA. A
confirmao veio logo em seguida, a partir do isolamento de DNAmt de diversos tipos celulares,
dando incio a uma nova fase no estudo da organela.

2. VISUALIZANDO A MITOCNDRIA
A microscopia ptica comum apresenta uma srie de limitaes para a observao da
mitocndria. Apesar das restries impostas, foi esta tcnica que revelou ao mundo essa
fantstica organela. O primeiro mtodo empregado na colorao da mitocndria, utilizando o
corante fucsina, foi desenvolvido por Altmann em 1890. Os estudos de Altmann possibilitaram a
identificao da organela em diversos tipos celulares. Hoje sabemos que a mitocndria
encontrada em praticamente todas as clulas eucariotas. Desde os primeiros e elegantes estudos
microscpicos da organela, realizados pelo casal norte-americano Warren Harmon Lewis e
Margaret Reed Lewis em 1914, utilizando o corante bsico verde janus, at os dias de hoje, a
viso da mitocndria sofreu vrias transformaes.
Com o desenvolvimento de mtodos adequados de fixao, e de cortes ultrafinos para a
microscopia eletrnica, George Palade e Fritiof Sjstrand descreveram, de forma independente,
no ano de 1953, o perfil estrutural bsico da organela (figura 5.2). Ambos os modelos descreviam
a existncia de uma membrana mitocondrial externa e de uma membrana mitocondrial interna,
esta, altamente dobrada e convoluta. Os modelos propostos por Palade e Sjstrand divergiam
apenas na interpretao das cristas mitocondriais, que Palade descreveu como baffle-like, e

49

Biologia e Fisiologia Celular

Sjstrand, como septa-like. Porm, foi o modelo proposto por Palade que acabou prevalecendo
e sendo incorporado por toda a literatura cientfica.

Figura 5.2 Fotomicrografia eletrnica de uma clula pulmonar de mamfero revelando a


ultraestrutural mitocondrial. Fonte:
http://en.wikipedia.org/wiki/File:Mitochondria,_mammalian_lung_-_TEM.jpg

O desenvolvimento de novas tecnologias vem modificando o perfil clssico e solitrio da


organela (cigar-shaped) difundido nos livros didticos. Estudos mais recentes apontam novas
configuraes morfolgicas para a organela, sugerindo uma interpretao estrutural onde a
mitocndria vista como uma rede dinmica e no mais como um aglomerado de organelas
isoladas. A elaborao de novas tcnicas de cortes ultrafinos, o desenvolvimento da microscopia
eletrnica de alta voltagem, o surgimento da microscopia de fluorescncia e confocal associadas
ao desenvolvimento de fluorocromos com especificidade mitocondrial e, por fim, a associao da
microscopia eletrnica com a tomografia computadorizada, foram fundamentais para a elaborao
de um novo perfil estrutural e funcional para a organela. A viso que temos acerca da mitocndria
no dias de hoje, apesar de diferir em alguns pontos do modelo proposto por George Palade nos
anos 1950, est muito prxima da clareza descritiva de George Altmann e dos trabalhos pioneiros
do casal Lewis.
A mitocndria, todavia, ainda reservava algumas surpresas para a comunidade cientfica,
algo alm da j clssica formao de ligaes fosfato de alta energia amplamente estudada pelos
bioqumicos. A grande transformao ocorreria com a associao da mitocndria com um tipo de
morte celular programada, denominado apoptose, em meados da dcada de 1990. A organela,
at ento associada exclusivamente converso de energia, passaria tambm a ser relacionada
a um processo de morte celular. A mudana de paradigma, da casa-de-fora cadeira-eltrica,
levou quase 50 anos e alterou, marcadamente, o rumo dos estudos sobre o papel fisiolgico da
organela, colocando, novamente, os holofotes da cincia sobre a organela.

3. ESTRUTURA E FISIOLOGIA MITOCONDRIAL


A mitocndria constituda por uma matriz envolta por duas membranas, denominadas
membrana mitocondrial interna (MMI) e membrana mitocondrial externa (MME). Tanto a

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Biologia e Fisiologia Celular

membrana interna quanto a externa so bicamadas lipdicas, diferindo, entretanto, nas suas
composies lipdicas e proticas. Entre as duas membranas encontramos o espao
intermembrana (figura 5.3).

Figura

5.3

Esquema

ilustrativo

da

estrutura

mitocondrial.

Modificado

de

http://en.wikipedia.org/wiki/File:Animal_mitochondrion_diagram_en_%28edit%29.svg

A organela comumente descrita como cilindros alongados ou elipsides, com dimenses


aproximadas de 0,5 a 1 m de dimetro, constituindo, aproximadamente, 20 % do volume celular
total. Recentemente, a mitocndria vem sendo tratada como uma entidade nica (rede
mitocondrial). Independe de estar representada por centenas de unidades isoladas (fragmentos
mitocondriais) ou por uma nica estrutura contnua (retculo contnuo), a organela est deixando
de ser tratada no plural (mitocndrias; em ingls, mitochondria), passando a ser tratada no
singular (mitocndria celular ou rede mitocondrial). A mitocndria celular capaz de se dividir em
unidades menores ou ser ampliada pela fuso destas unidades, espelhando a atividade celular
em um determinado momento. Alm destas alteraes morfolgicas, a sua distribuio celular
tambm reflete a sua integrao com a fisiologia da clula. A mitocndria h muito deixou de ser
vista como uma organela esttica, assumindo, definitivamente, uma posio dinmica. A
mitocndria pode se deslocar pela clula atravs de mecanismos que envolvem vrias estruturas
do citoesqueleto (filamentos de actina e microtbulos) e diversas protenas motoras, como as
miosinas, as dinenas e as cinesinas.
3.1 MEMBRANA MITOCONDRIAL EXTERNA
A membrana mitocondrial externa caracterizada por uma alta permeabilidade ons e
molculas de at 5.000 daltons, onde podemos incluir, alm dos ons, metablitos e pequenas
protenas. A permeabilidade da MME conferida pela expresso de uma protena de 30 KDa,
denominada VDAC (do ingls, voltage-dependent anion channel), tambm conhecida como
porina, e que vem a ser a protena mais abundante na MME. Cada canal constitudo por apenas
uma nica protena, apresentando uma estrutura assimtrica e associaes com esterides e/ou
fosfolipdios da membrana. Alm da porina, encontramos na MME uma srie de outras protenas,

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Biologia e Fisiologia Celular

muitas das quais ligadas ao metabolismo celular, tais como a colina-fosfotransferase, a


glicerofosfato-acil-transferase, a acil-CoA-graxo-sintase, a monoamino oxidase e a fosfolipase A;
protenas envolvidas na importao de protenas mitocondriais, como as que compem o
complexo TOM; e protenas envolvidas na apoptose, como as protenas BCL-2 e BCL-XL.
3.2 ESPAO INTERMEMBRANA
O espao intermembrana, como o prprio termo sugere, delimitado pelas duas
membranas mitocondriais (MME e MMI). Neste espao so encontradas algumas protenas
associadas apoptose, como as caspases 2, 3, 8 e 9, a Smac/DIABLO, a HtrA2/Omi, a AIF, a
Endo G, e o citocromo c, este ltimo tambm associado cadeia de transporte de eltrons e
sntese de ATP. Alm destas, tambm esto localizadas no espao intermembrana, a adenilato
cinase, a nucleosdeo-difosfocinase, e a creatina-cinase.
3.3 MEMBRANA MITOCONDRIAL INTERNA
A membrana mitocondrial interna, vista pela microscopia eletrnica, se caracteriza por
apresentar uma srie de dobras ou invaginaes sobre a matriz mitocondrial. Essas invaginaes
recebem o nome de cristas mitocondriais e refletem a atividade respiratria da clula, uma vez
que as protenas que participam do transporte de eltrons e da fosforilao oxidativa encontramse localizadas na MMI. A membrana interna encontra-se justaposta MME, criando diversos
pontos de contato com esta. As cristas tm sido vistas no apenas como simples convolues da
membrana interna, mas como um compartimento distinto, de formato lamelar ou tubular, e
conectado membrana interna por estruturas especializadas, denominadas cristae junction.
A MMI impermevel a ons, sendo o transporte destes regulado por diversos canais, tais
como: o antiporte K+/H+, o canal de K+ sensvel ATP (mitoKATP), o antiporte Na+/H+, o uniporte
de Ca2+ sensvel ao vermelho de rutnio, o antiporte 3 Na+/Ca2+, e o uniporte 3 H+/Ca2+. Alm
destes transportadores seletivos de ons, encontramos na MMI o translocador de ADP-ATP,
denominado ANT, que catalisa a troca de ADP3- citoslico por ATP4- matricial, e que constitui a
protena mais abundante da MMI. So encontradas, ainda, protenas especializadas no transporte
de carboxilatos, como o malato, succinato e citrato; e aminocidos, como o aspartato e glutamato.
A reduzida permeabilidade da MMI aos ons ou molculas carregadas presena da
cardiolipina, um difosfatidil-glicerol formado por 4 cadeias de cidos graxos de 18 carbonos
(normalmente, o cido linolico), e que pode corresponder a at 20% dos fosfolipdios da
membrana mitocondrial interna. A ocorrncia da cardiolipina em animais e plantas superiores
restrita MMI, uma vez que a expresso da cardiolipina-sintase, enzima responsvel pela sntese
da cardiolipina, exclusivamente mitocondrial. Estudos mais recentes tm atribudo um papel
importante para a cardiolipina na manuteno estrutural e funcional de protenas envolvidas na
fosforilao oxidativa, tais como o ANT, a ATP-sintase e a citocromo oxidase, entre outras.
A maioria das protenas que constituem a cadeia de transporte de eltrons, e que esto
associadas fosforilao oxidativa e sntese de ATP, tambm est expressa na membrana
mitocondrial interna.

52

Biologia e Fisiologia Celular

:: SAIBA MAIS... ::
Outra classe de protenas presente na MMI representada pelas protenas
desacopladoras (UCP, do ingls uncoupling protein). Essas protenas, ao
promoverem o influxo de prtons atravs da MMI, por uma via alternativa a da ATPsintase, levam ao desacoplamento da cadeia respiratria, dissociando o transporte
de eltrons, na MMI, da fosforilao do ADP. Desta forma, parte da energia gerada
pelo influxo de prtons para a matriz convertida em calor. Ou seja, estas protenas
so termognicas. Cinco protenas desta famlia j foram descritas: UCP1, expressa
no tecido adiposo marrom e relacionada termognese; UCP2, de ampla expresso
fisiolgica; UCP3, expressa na tecido adiposo marrom e na musculatura esqueltica,
e tambm relacionada termognese; e UCP4 e UCP5, expressas no crebro, e
associadas tanto termognese quanto regulao de espcies reativas de
oxignio. A UCP3 tem ganhado algum destaque na literatura pela suspeita de seu
envolvimento no mecanismo de ao do hormnio tireoidiano T3 na elevao da
taxa metablica basal.

3.4. MATRIZ MITOCONDRIAL


A matriz mitocondrial bastante rica em enzimas solveis. Enzimas-chave do metabolismo
oxidativo esto localizadas na matriz mitocondrial, entre as quais podemos destacar: enzimas
envolvidas na oxidao do piruvato (piruvato desidrogenase) e dos cidos graxos; enzimas
constituintes do ciclo do cido ctrico (com exceo da succinato-desidrogenase, que se localiza
na MMI); e algumas enzimas do ciclo da uria (carbamoil-fosfato-sintetase e ornitinatranscarbamoilase). Enzimas envolvidas na depurao de espcies reativas de oxignio, tais
como a catalase, a superxido dismutase, a glutationa peroxidase e a glutationa redutase tambm
so encontradas na matriz mitocondrial. Estas enzimas so fundamentais por prevenirem danos
estruturais e funcionais em lipdeos e protenas mitocondriais.
3.4.1. DNA MITOCONDRIAL
As mitocndrias, juntamente com os cloroplastos, so as nicas organelas que contm um
genoma prprio. Entretanto, a grande maioria das protenas mitocondriais (aproximadamente
1000) codificada pelo genoma nuclear. O DNAmt responsvel pela sntese de apenas 13
cadeias polipeptdicas, alm de conter dois genes codificadores para rRNA (12S e 16S) e 22
genes para tRNA. As protenas codificadas pelo DNA mitocondrial so: sete subunidades da
NADH-ubiquinona-oxiredutase; uma subunidade da ubiquinona-citocromo c-oxiredutase
(complexo III); trs subunidades da citocromo-oxidase (complexo IV) e duas subunidades da ATPsintase (Complexo V). Todas estas protenas so protenas integrais da MMI, que em associao
com outras subunidades, codificadas pelo genoma nuclear, constituem a cadeia de transporte de
eltrons.
O DNAmt humano foi completamente seqenciado em 1981. Exceto para o genoma de
algumas algas e protozorios, o DNAmt circular, e se assemelha, estruturalmente, ao DNA
bacteriano. Cada mitocndria possui mltiplas cpias de DNA em sua matriz. Em clulas de
mamferos, o DNAmt representa menos de 1% do DNA celular total, podendo ser encontradas at

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Biologia e Fisiologia Celular

1000 cpias em uma nica clula. O processo de replicao do DNA, transcrio do DNA, e
sntese protica realizada a partir do DNAmt feito na prpria organela; no entanto, esse
processo controlado por protenas codificadas pelo DNA nuclear.
O genoma mitocondrial apresenta um nmero variado de pares de bases nuclicas de
acordo com a espcie. Em humanos, o DNAmt constitudo por 16.569 pares de base, ao passo
que em algumas plantas superiores, o DNAmt chega a ter at 2.500.000 pares de base. No
somente no nmero de nucleotdeos que o DNAmt varia entre as espcies. O prprio cdigo
gentico mitocondrial apresenta algumas diferenas entre organismos distintos. Por exemplo, a
sequncia de nucleotdeos AUA, que codifica o aminocido isoleucina, no DNA nuclear, codifica o
aminocido metionina em mamferos; o aminocido serina, em Drosophila; e o aminocido
arginina em fungos e vegetais superiores. O cdigo gentico mitocondrial tambm se apresenta
bastante variado entre as espcies com relao sua capacidade de codificar protenas. O DNA
mitocondrial da Reclinomonas americana capaz de codificar 67 protenas, enquanto que o
genoma mitocondrial do Plasmodium falciparum responde por apenas 3 protenas. Entretanto,
independentemente da sua capacidade de codificao, o genoma mitocondrial codifica,
essencialmente, componentes envolvidos na converso de energia pela clula. Durante a
evoluo, algumas espcies, como Saccharomyces cerevisiae perderam parte do contedo do
genoma mitocondrial, uma vez que nem o DNA mitocondrial, nem o DNA nuclear, contm o gene
que codifica o complexo I da cadeia respiratria.

4. TEORIA ENDOSSIMBITICA
As primeiras idias sobre uma origem simbitica para uma organela surgiram no final do
sculo XIX, nos trabalhos do botnico alemo Andreas Franz Wilhelm Schimper, ao estudar a
diviso dos cloroplastos em plantas verdes. No entanto, foi o cientista russo Konstantin
Mereschkowsky o primeiro a conceber a teoria simbitica, ao publicar, em 1905, um artigo onde
discorria sobre a natureza e a origem dos cromatforos (plastdeos) no Reino Plantae.
Mereschkowsky expos com extrema clareza a hiptese de que os plastdeos seriam derivados de
uma cianobactria endossimbitica. Nos ano de 1923 e 1927, o cientista norte-americano Ivan
Emanuel Wallin publica dois trabalhos fundamentais: The Mitochondria Problem e
Symbionticism and the origin of species; onde sugere uma origem simbitica bacteriana para a
mitocndria, em contrapartida para uma origem citoslica proposta por alguns pesquisadores da
poca. Mais ainda, Wallin sugeria que o surgimento de novas espcies poderiam estar associado
infeces repetidas de um protoplasma primitivo por uma bactria e que esta teria se tornado
parte do prprio protoplama com um simbionte. As propostas simbiticas de Mereschkowsky e
Wallin foram fortemente criticadas na poca. Sem bases moleculares para darem suporte teoria
proposta por estes brilhantes cientistas, a simbiose ficar esquecida por algumas dcadas, at que
a pesquisadora norte-americana Lynn Margulis ressuscita a idia da simbiose no ano de 1967, ao
tambm propor que a mitocndria teria se originado de uma bactria ancestral de vida livre. As
idias de Margulis sobre a teoria simbitica foram amadurecendo e culminaram com a publicao
do livro Symbiosis in Cell Evolution, no ano de 1981, onde a cientista expe definitivamente as
bases celulares e moleculares que suportam a teoria endossimbitica.
A teoria endossimbitica postula que a mitocondria teria se originado da endocitose de
procariotos heterotrficos por clulas eucariticas. Tais procariotos seriam organismos aerbicos,
que utilizam o oxignio para a converso energtica a partir de substratos orgnicos. A teoria

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Biologia e Fisiologia Celular

postula que os procariotos teriam passado a viver no citoplasma dos eucariotos, tornado-se, ao
poucos, dependentes, metabolicamente, da clula hospedeira. Por outro lado, a simbiose teria
proporcionado clula eucaritica hospedeira um incremento na disponibilidade de ATP para a
realizao das suas atividades fisiolgicas, refletindo, posteriormente, em um aumento do grau de
complexidade estrutural e funcional da mesma, e que culminaria com a formao dos primeiros
organismos eucariotos multicelulares. Acredita-se que grande parte do genoma do organismo
procarioto foi transferida para o genoma nuclear da clula eucaritica, o que notvel pela
dependncia da transcrio e traduo efetivadas a partir do DNA nuclear para a constituio da
organela, e consequente perda da redundncia gentica. Tal fato justificaria a perda de autonomia
das mitocndrias nos dias de hoje.
Diversas evidncias estruturais e funcionais suportam a teoria endossimbitica. Entre
estas, podemos destacar:
a)
b)
c)
d)
e)

f)

g)

h)

i)

A presena de duas membranas com composies lipdicas e proticas distintas na


mitocndria.
A presena de um DNA circular, como o encontrado nas bactrias.
A semelhana estrutural entre os ribossomos presentes nas organelas e nas bactrias
(ambos possuem o mesmo coeficiente de sedimentao: 70S).
O fosfolipdeo cardiolipina encontrado somente na membrana mitocondrial interna dos
organismos eucariotos e na membrana plasmtica de organismos procariotos.
A N-formilmetionina o aminocido iniciador da sntese protica tanto no processo
traducional que ocorre nas mitocndrias, quanto no que ocorre nas bactrias. Na sntese
protica que ocorre nos ribossomos presentes no citosol das clulas eucariticas, a
metionina, ao invs da N-formilmetionina, o aminocido iniciador do processo traducional.
A homologia entre algumas protenas mitocondriais e bacterianas. A estrutura primria da
catalase mitocondrial de alguns organismos eucariticos apresenta uma maior semelhana
(homologia) com catalases bacterianas do que com a catalase citoslica da prpria clula
eucaritica.
Os antibiticos eritromicina, tetraciclina e cloranfenicol inibem tanto a sntese protica
bacteriana quanto a sntese protica mitocondrial, sem, no entanto, afetarem a sntese
protica que ocorre no citosol das clulas eucariticas. O mecanismo de ao destes
antibiticos evidencia a conservao do processo traducional que ocorre entre as
mitocndrias e certos organismos procariotos.
Anlises filogenticas demonstram uma forte correlao entre o genoma da bactria
Rickettsia prowazekii, um parasita intracelular obrigatrio, e o genoma mitocondrial do
protozorio Reclinomonas americana. Ambos os genomas no contm os genes necessrios
para a realizao da gliclise anaerbica. Por outro lado, a R. prowazekii possui os genes
necessrios para a sntese das protenas envolvidas no ciclo do cido tri-carboxlico e da
cadeia respiratria, de forma que a produo de ATP neste organismo ocorre de forma
semelhante mitocondrial.
Alguns protozorios, como as Giardias ou as Amebas, so organismos eucariticos
anaerbicos que no possuem mitocndria, o que leva alguns pesquisadores a proporem que
tais organismos sejam semelhantes ao primeiros eucariotos anaerbicos, anteriores ao
evento endossimbitico.

55

Biologia e Fisiologia Celular

5. MITOCONDRIA E O METABOLISMO ENERGTICO


A mitocndria o local de convergncia do metabolismo energtico nas clulas
eucariticas, se destacando por ser o stio da sntese do trifosfato de adenosina (ATP). Os
produtos do metabolismo de glicdeos, protdeos ou lipdeos so transportados para a matriz
mitocndria onde so completamente oxidados em uma srie de reaes enzimticas. As enzimas
do ciclo do cido tricarboxlico e da cadeia de transporte de eltrons so as responsveis pela
converso da energia qumica, presente nas ligaes covalentes entre os tomos de carbono dos
substratos energticos, e conseqente sntese do ATP. As etapas reacionais envolvidas na
sntese de ATP objeto de estudo da bioqumica metablica e sero abordadas em outro
captulo.
:: SAIBA MAIS... ::
Uma srie de patologias associadas s alteraes funcionais na mitocndria j foram
descritas na literatura. Mutaes deletrias, que afetam genes que codificam para
protenas mitocondriais, so encontradas tanto no genoma nuclear quanto no genoma
mitocondrial. Mais de 60% destas mutaes, no entanto, esto relacionadas a genes
que codificam RNAs transportadores mitocondriais, comprometendo, assim, a sntese
das subunidades proticas que constituem a cadeia de transporte de eltrons e,
consequentemente, a sntese de ATP. Os tecidos mais afetados por estas mutaes
so aqueles que demandam um maior aporte energtico, como os que constituem o
sistema nervoso central, a retina, o aparelho auditivo e a musculatura lisa e
esqueltica. Uma srie de sndromes que afetam estes tecidos e rgos so
conhecidas como doenas mitocondriais. Alm destas patologias, a mitocndria
tambm tem sido correlacionada com uma srie de outras patologias, incluindo
doenas neurodegenerativas, como a Doena de Alzheimer e a Doena de Parkinson,
cnceres e at mesmo com o processo natural de envelhecimento humano.

6. O OUTRO LADO DA MITOCONDRIA


Alm da consagrada sntese de ATP, a mitocndria participa de uma srie de processos
fisiolgicos essenciais. Dependendo do tipo celular, a mitocondria pode estar envolvida desde a
manuteno da homeostasia celular at na resposta a estmulos extracelulares ou no
desenvolvimento dos organismos multicelulares. Sabemos, hoje, que a mitocndria fundamental
no processo de morte celular por apoptose, na sinalizao mediada pelos ons clcio, por regular
o metabolismo e a proliferao celular, na sntese de alguns hormnios esterides, na
termognese, na destoxificao de amnia e na sntese parcial de grupamentos heme.
:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
Voc j ouviu falar no termo Eva Mitocondrial? Quais so as bases
cientficas que levaram proposio deste termo? Faa uma pesquisa e elabore um
resumo, com uma viso crtica sobre o assunto.

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Biologia e Fisiologia Celular

UNIDADE 6
NCLEO
1. VISO GERAL
O ncleo foi a primeira organela a ser descrita. Antonie van Leeuwenhoek ao descrever a
presena de lumens, em hemcias de salmo, no sculo XVII, foi o primeiro cientista a notar a
presena do ncleo (figura 6.1A). Entretanto, foi o botnico escocs Robert Brown, na primeira
metade do sculo XIX, quem nomeou a organela ao estudar os rgos e a forma de fecundao
em orqudeas. Outro cientista que foi fundamental para a descrio da estrutura nuclear foi o
bilogo alemo Walther Flemming com os seus estudos sobre a diviso celular em diversas
espcies, onde apresentava belssimas ilustraes revelando os cromossomos e o nuclolo
(figura 6.1B).

Figura 6.1 Ilustraes originais dos trabalhos de Antonie van Leeuwenhoek (1719) e
Walther Flemming (1882). A Eritrcitos de Salmo; B Clula da Glndula Salivar de Larvas de
Chironomidae.

O ncleo uma organela delimitada por um sistema de dupla membrana, disposta,


geralmente, de forma concntrica, e cujo dimetro varia entre 5 e 10 m (figura 6.2). No seu
interior, denominado nucleoplasma, encontram-se, alm do material gentico, protenas
envolvidas na expresso gnica (sntese e processamento de RNAs) e no transporte de protenas,
RNAs e subunidades ribossomais entre o nucleoplasma e o citoplasma. A compartimentalizao
nuclear do material gentico, caracterstica exclusiva das clulas eucariticas, confere uma srie
de vantagens em relao ao material gentico disperso no citoplasma das clulas procariticas,
permitindo, por exemplo, um controle mais rigoroso da expresso gnica.
O ncleo no est presente em todas as clulas eucariticas. Os eritrcitos humanos, por
exemplo, no possuem ncleo, que eliminado durante o processe de diferenciao celular
(hematopoiese) que gera tais clulas a partir de clulas hematopoiticas pluripotentes da medula
ssea. Por outro lado, algumas clulas, como os osteoclastos, so polinucleadas. Os osteoclastos
so clulas importantes no processo de reabsoro e remodelagem ssea.

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Biologia e Fisiologia Celular

Figura

6.2

Esquema

ilustrativo

da

estrutura

nuclear.

Modificado

de

http://en.wikipedia.org/wiki/File:Diagram_human_cell_nucleus.svg

2. ENVELOPE NUCLEAR
O ncleo limitado por um sistema de duas membranas denominado envelope nuclear,
que formado pela membrana nuclear interna e pela membrana nuclear externa, sendo esta
ltima contnua membrana no retculo endoplasmtico granuloso. A face nucleoplasmtica da
membrana nuclear interna recoberta por protenas filamentosas denominadas laminas
nucleares. No envelope nuclear esto presentes os poros nucleares, estruturas proticas
responsveis pelo transporte de protenas e RNAs entre o nucleoplasma e o citoplasma (figura
6.3).

Figura 6.3 Esquema ilustrativo do envelope


nuclear (viso lateral). 1 Envelope nuclear; 2 Anel
citoplasmtico; 3 Anis do raio; 4 Cesta nuclear; 5
Fibrilas citoplasmticas; 6 Lmina nuclear. Modificado
de
http://en.wikipedia.org/wiki/File:NuclearPore_crop.svg

2.1. LMINA NUCLEAR


A lmina nuclear uma estrutura protica responsvel pela organizao estrutural do
envelope nuclear (figura 6.3). A lmina constituda por filamentos intermedirios do
citoesqueleto, denominados laminas nucleares. So conhecidas trs tipos distintos de laminas

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Biologia e Fisiologia Celular

nucleares: lamina do tipo A, lamina do tipo B e lamina do tipo C. A lamina nuclear do tipo B uma
protena integral da membrana nuclear interna, ancorada por lipdeo. As laminas do tipo A e C so
protenas perifricas que se associam, por meio de ligaes no-covalentes, s laminas do tipo B.
A lmina nuclear formada pela polimerizao das laminas nucleares. A interao entre as
laminas que constituem a lmina nuclear fundamental para a estruturao do envelope nuclear.
Durante o processo de mitose, as laminas nucleares so fosforiladas em resduos especficos de
aminocidos. Essa fosforilao reduz a interao entre as laminas nucleares, desfazendo a lmina
nuclear e, por sua vez, o envelope nuclear. Este processo permite que o material gentico, com o
auxlio das protenas que constituem o microtbulo, migre para os plos da clula.
2.2. COMPLEXO DE POROS NUCLEARES
Os complexos de poros nucleares, ou simplesmente poros nucleares, so estruturas
proticas responsveis pelo transporte bidirecional de ons e molculas entre o nucleoplasma e o
citoplasma. Cada poro constitudo por cerca de 100 protenas, possuindo uma massa molecular
estimada de aproximadamente 125 milhes de daltons. As protenas que constituem os poros so
denominadas nucleoporinas. De forma geral, uma clula de mamfero contm entre 3.000 e 4.000
poros nucleares. No entanto, o nmero de poros presentes no envelope nuclear pode variar
conforme o tipo celular ou o estado fisiolgico do mesmo. Quanto mais ativo for o processo de
transcrio gnica em uma determinada clula, maior o nmero de poros presentes no envelope
nuclear.
Os poros nucleares medem cerca de 120 nm. No entanto, o dimetro do canal formado
pelo poro pode variar entre 9 e 50 nm. Pequenas molculas, com at 5.000 daltons, so
transportadas livremente pelos poros nucleares. Por outro lado, o transporte de protenas ou
subunidades ribossomais, requer mudanas conformacionais no poro, de forma a aumentar o
dimetro da luz do canal, permitindo o transporte de molculas de at 26 nm. Como vimos na
unidade 3, o transporte de protenas atravs do poro nuclear mediado por protenas
denominadas importinas ou exportinas. A interao das importinas com as fibrilas citoplasmticas
dos poros nucleares que vai promover as mudanas conformacionais no poro de forma a
permitir a abertura da luz do canal e o transporte das macromolculas para o nucleoplasma.
:: PERGUNTAS?? ::
Quais so as protenas que so importadas para o ncleo? Qual o papel
biolgico de cada uma destas protenas?

3. NUCLEOPLASMA
O nucleoplasma a regio delimitada pelo envelope nuclear que contm o material
gentico e as macromolculas associadas ao controle da expresso gnica. Vamos, agora,
conhecer um pouco sobre as principais estruturas presentes no nucleoplasma.

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Biologia e Fisiologia Celular

3.1. CROMATINA E CROMOSSOMOS


A cromatina uma estrutura formada pela associao no covalente entre o DNA e as
protenas histonas. Essa associao responsvel pela condensao (compactao) do material
gentico. A formao da cromatina permite que uma molcula de DNA, cuja extenso linear de
quase 2 metros, possa ser armazenada em uma organela cujo dimetro de aproximadamente
10 m. Este incrvel grau de compactao possui um papel extremamente importante para as
clulas eucariticas, uma vez que um volume muito maior de informao gentica pode ser
armazenado, refletindo, assim, em um grau de complexidade biolgica extremamente prolfico. A
condensao da cromatina, alm de reduzir o volume da molcula de DNA e permitir que a
mesma seja armazenada no interior do ncleo, tambm importante por controlar a expresso
gnica. importante ressaltar que o DNA nuclear das clulas eucariticas linear, em oposio
ao DNA dos procariotos ou do DNA presente nas mitocndrias das clulas eucariticas, que
possui uma estrutura circular.
A cromatina formada por unidades repetidas de 146 pares de bases de nucleotdeos que
envolvem um octmero de histonas. Essas unidades so denominadas nucleossomos e a unio
entre elas forma a fibra de cromatina, uma estrutura que se assemelha a um colar de prolas,
onde as contas so os nucleossomos (figura 6.4). O DNA localizado entre dois nucleossomos
denominado DNA de ligao.

Figura 6.4 Esquema representando uma fibra de cromatina.

As histonas so protenas ricas em resduos de aminocidos bsicos na sua regio aminoterminal. As histonas que constituem o nucleossomos so denominadas histonas nucleossomais e
incluem as histonas H2, H3A, H3B e H4. A compactao da molcula de DNA deve-se interao
entre as cadeias laterais carregadas positivamente das histonas e os grupamentos fosfatos da
molcula de DNA. Apesar de no constituir os nucleossomos, a histona H1 tambm importante
para a configurao estrutural da cromatina, ao se associar fibra de cromatina e aos prprios
nucleossomos.
O grau de condensao da cromatina pode ser regulado de diversas formas. A regulao
da condensao da cromatina uma das formas que as clulas eucariticas possuem para
controlar a expresso gnica. A condensao da cromatina inversamente proporcional
capacidade de transcrio gnica, ou seja, os genes s podem ser transcritos quando localizados
em regies menos condensadas da cromatina. Duas enzimas so fundamentais no controle do
grau de condensao da cromatina. A histona acetiltransferase (HAT) a enzima responsvel
pela adio de grupamentos acetila cadeia lateral de resduos de lisinas nas histonas,
diminuindo a interao destas protenas com a molcula de DNA, e promovendo, assim, a
descondensao da cromatina. A enzima histona desacetilase (HDAC), por sua vez,

60

Biologia e Fisiologia Celular

responsvel pela remoo dos grupamentos acetila, portanto, pelo aumento da interao das
histonas com a molcula de DNA e pela condensao da cromatina.
Sob o ponto de vista estrutural e funcional, a cromatina pode ser classificada em
eucromatina e heterocromatina. A eucromatina caracterizada, morfologicamente, sob
microscopia eletrnica de transmisso, como a regio mais clara e menos densa da cromatina.
Por outro lado, a heterocromatina a regio mais eletrodensa sob microscopia eletrnica,
refletindo um maior grau de condensao da cromatina.
Os cromossomos so formados pela compactao da cromatina, e so encontrados
somente na fase de mitose do ciclo celular. O grau de compactao observado entre a fibra de
DNA e os cromossomos de cerca de 10.000 vezes. Essa compactao fundamental para que
o material gentico seja distribudo de forma homognea e ntegra, aps a devida duplicao,
para as clulas filhas durante a diviso celular. A anlise do padro cromossomial de uma dada
espcie gera um perfil especfico que denominamos caritipo, que inclui o nmero de
cromossomos, o tamanho dos cromossomos, bem como a localizao dos centrmeros (regio de
unio das cromtides irms e onde ocorre a ligao das protenas que compem o fuso mittico)
(figura 6.5).

Figura 6.5 Caritipo de um linfcito humano (fmea). Modificado de


http://en.wikipedia.org/wiki/File:PLoSBiol3.5.Fig7ChromosomesAluFish.jpg

:: TA NA WEB!!! ::
No endereo abaixo voc encontrar uma tabela com o nmero de
cromossomos em diferentes espcies
http://en.wikipedia.org/wiki/List_of_organisms_by_chromosome_count

3.2 NUCLOLO
O nuclolo a regio do nucleoplasma onde se localizam os genes que codificam para o
RNA ribossomal (RNAr), sendo, ainda, o local da biognese dos ribossomos. Aps transcrio
destes genes, pela enzima RNA Polimerase I, o RNAr processado e as subunidades
ribossomais montadas no prprio nuclolo. O nuclolo aparece, sob microscopia eletrnica de
transmisso, como uma regio bastante eletrodensa (figura 6.6). Apesar de parecer homogneo,
uma anlise mais detalhada do nuclolo revela que este apresenta regies bem definidas sob o
ponto de vista estrutural e funcional. A estrutura nucleolar pode ser dividida em: centros fibrilares
(local de concentrao de genes e RNA Polimerase I); componente fibrilar denso (local de sntese

61

Biologia e Fisiologia Celular

do RNAr); e componente granular ou nucleolema (local de montagem das subunidades


ribossmica).

Figura 6.6 Fotomicrografia de um ncleo evidenciando o nuclolo, a eucromatina e a


heterocromatina. Modificado de http://en.wikipedia.org/wiki/File:Micrograph_of_a_cell_nucleus.png

:: PERGUNTAS?? ::
9

O que o Corpsculo de Barr, ou cromatina sexual, e qual a sua

relevncia biolgica?
9

Quantas RNA Polimerases so conhecidas? Em quais processos biolgicos

estas enzimas esto envolvidas?

62

Biologia e Fisiologia Celular

UNIDADE 7
SINALIZAO CELULAR
1. VISO GERAL
A sinalizao celular um mecanismo de comunicao entre as clulas que se encontra
presente nas mais diversas formas de vida, desde organismos unicelulares, como bactrias,
fungos e protozorios, at seres multicelulares. Em organismos procariotos, a sinalizao extra e
intracelular crucial para o controle de diversos processos, tais como a formao do biofilme e a
virulncia. J em organismos eucariotos unicelulares, a sinalizao celular pode ser responsvel
pelo controle da reproduo sexual ou dos mecanismos de diferenciao celular, sendo
geralmente controlada por fatores ambientais. A complexidade dos organismos multicelulares
exibe um elevado grau de sofisticao extremamente dos sistemas de sinalizao celular, que
esto presentes na fertilizao, desenvolvimento embrionrio, morfognese e organognese,
crescimento, regulao do perodo reprodutivo, resposta aos estmulos ambientais, manuteno
da homeostasia e outros processos vitais.
O mecanismo de sinalizao celular envolve a participao de uma clula sinalizadora,
responsvel pela produo e, na maioria dos casos, liberao de uma molcula sinalizadora,
denominada ligante, e uma clula-alvo, que apresenta receptores (protenas que reconhecem
especificamente o ligante) que sero responsveis pela propagao do sinal e conseqente
resposta celular. A natureza qumica dos ligantes bastante diversa, incluindo desde gases, como
o xido ntrico, at pequenas molculas hidrofbicas, como lipdeos e esterides, ou mesmo
peptdeos e protenas. Por outro lado, os receptores celulares so protenas especficas que
podem estar localizadas nas membranas celulares ou solveis no citosol ou ncleo celular.
Vamos, a partir da prxima seo, conhecer melhor estes mecanismos de sinalizao
celular.

2. FORMAS DE SINALIZAO CELULAR


Existem diferentes formas de comunicao celular (figura 7.1). Cada forma de sinalizao
est presente em um diferente sistema biolgico ou microambiente, sendo o tipo de sinalizao
determinante para o sucesso da resposta ao estmulo. As formas de sinalizao celular so:
a) Sinalizao Dependente de Contato. Neste tipo de sinalizao tanto os ligantes quanto os
receptor so protenas integrais da membrana plasmtica. No ocorre liberao do ligante para
o meio extracelular. Em alguns casos, um segundo mensageiro transmitido de uma clula
para outra, atravs de canais proticos (junes comunicantes) presentes nas membranas das
duas clulas.
b) Sinalizao Parcrina. A molcula sinalizadora liberada no meio extracelular, ativando
somente clulas vizinhas e que expressam o receptor para o ligante, presentes no mesmo
microambiente. Este tipo de sinalizao muito comum nos processos alrgicos e
inflamatrios. Como exemplos de ligantes envolvidos na sinalizao parcrina podem citar a
histamina e as citocinas.

63

Biologia e Fisiologia Celular

c) Sinalizao Autcrina. Neste tipo de sinalizao, a molcula sinalizadora liberada no meio


extracelular, atravs de exocitose, ativando a prpria clula que liberou o ligante. Esta forma
de sinalizao celular comumente encontrada em clulas do sistema imunolgico, onde
podemos destacar a citocina IL-2,que controla, entre outros fatores, a proliferao celular em
resposta a um estmulo antignico.
d) Sinalizao Sinptica. A molcula sinalizadora liberada no meio extracelular, ativando
somente uma nica clula, que se encontra presente na juno sinptica. Neste caso, a
molcula sinalizadora denominada neurotransmissor. A clula sinalizadora sempre uma
clula nervosa, e a clula-alvo pode ser outra clula nervosa, uma clula muscular ou uma
clula de uma glndula endcrina, por exemplo. So diversos os neurotransmissores
envolvidos na sinalizao sinptica, entre os quais podemos destacar: a acetilcolina, a
dopamina, a serotonina, a histamina, o glutamato, o cido -aminobutrico (GABA), a
adrenalina e a melatonina.
e) Sinalizao Endcrina. Nesta forma de sinalizao, a molcula sinalizadora liberada no meio
extracelular, atingindo a corrente sangunea. As clulas-alvo encontram-se em tecidos ou
mesmo rgo e sistemas distantes da clula sinalizadora, que recebe o nome de clula
endcrina. Neste caso, a molcula sinalizadora conhecida como hormnio.

64

Biologia e Fisiologia Celular

Figura 7.1 Esquema ilustrativo das formas de sinalizao celular . (A) De contato; (B) Parcrina;
(C) Autcrina; (D) Endcrina.

65

Biologia e Fisiologia Celular

:: FIQUE LIGADO!! ::
A diapedese (figura 7.2) um processo fisiolgico onde os glbulos brancos deixam
a circulao sangunea em direo a um tecido danificado ou infectado. O processo
comea com a expresso de protenas na superfcie da clula endotelial que
revestem internamente os vasos sanguneos. Estas protenas, denominadas
Selectinas, so reconhecidas por protenas integrais da membrana plasmtica de
certos leuccitos, conhecidas como Integrinas, que, em uma sinalizao do tipo
dependente de contato, promove a adeso do leuccito parede vascular do vaso e
uma profunda alterao morfolgica no glbulo branco, permitindo assim, que o
mesmo atravesse o endotlio capilar e chegue ao local da infeco ou do dano
tecidual.

Figura 7.2 Esquema ilustrativo da diapedese.


Modificado de
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/4/41/NeutrophilerAktion.png

66

Biologia e Fisiologia Celular

3. ESPECIFICIDADE E MULTIPLICIDADE DE SINAIS

A molcula sinalizadora (ligante) s capaz de induzir uma resposta nas clulas que
expressam o receptor especfico para aquela molcula sinalizadora. Assim, clulas que no
expressam o receptor no respondem ao sinal mediado pela molcula sinalizadora. Isso permite
com que os organismos multicelulares controlem qual(ou quais) tipo(s) celular(es) ir(o)
responder a um determinado estmulo, permitindo uma coordenao adequada do status
fisiolgico do organismo.
Uma mesma molcula sinalizadora capaz de induzir a resposta em diferentes tipos
celulares, desde que eles apresentem receptores especficos para a molcula sinalizadora, que
podem ou no ser do mesmo tipo (ou famlia). O tipo de resposta, em cada clula-alvo, neste
caso, ir depender da especificidade da clula-alvo. Um dos exemplos mais marcantes a
resposta acetilcolina pelas clulas musculares cardacas, clulas musculares esquelticas e
clulas das glndulas salivares. As clulas musculares cardacas e as clulas musculares
esquelticas possuem um tipo distinto de receptor da acetilcolina. Assim, enquanto que nas
clulas musculares cardacas, a acetilcolina promove o relaxamento muscular, nas clulas
musculares esquelticas, o estmulo pelo mesmo ligante promove a contrao da musculatura.
Por outro lado, as clulas das glndulas salivares possuem o mesmo tipo de receptor das clulas
musculares cardacas, e quando estimuladas pela acetilcolina respondem com a secreo salivar.
Sob o ponto de vista fisiolgico, geralmente, a resposta celular depende de um conjunto
de sinais mltiplos e no de apenas um nico sinal mediado por uma nica molcula. Ou seja, a
resposta final o somatrio de estmulos ao qual uma determinada clula est submetida. Em
alguns casos, a ausncia de um estmulo modifica completamente a fisiologia celular, podendo,
inclusive, levar a clula morte.
:: FIQUE DE OLHO!! ::
A velocidade de resposta de uma clula a um determinado estmulo
depende da presena (expresso), ou no, da(s) protena(s) envolvida(s) na
efetivao da resposta. A reposta pode ser imediata quando requerer apenas a
alterao da funo de uma determinada protena (protena envolvida na
resposta celular e que j se encontra expressa na clula). Por outro lado, a
resposta pode ser lenta quando o estmulo extracelular requerer a alterao da
expresso gnica, e conseqente sntese da(s) protena(s) envolvida(s) na
resposta celular. Na resposta imediata, a clula responde ao estmulo em
questo de segundos ou minutos, j na resposta lenta, o estmulo s se tornar
efetivo aps minutos ou horas aps a ativao do receptor e disparo da
sinalizao.

4. RECEPTORES CELULARES
Os receptores celulares so classificados com relao sua localizao celular, podendo
ser receptores de superfcie celular ou receptores intracelulares.

67

Biologia e Fisiologia Celular

4.1. RECEPTORES DE SUPERFCIE CELULAR


Os receptores de superfcie celular so protenas integrais transmembrana, presentes na
membrana citoplasmtica. O domnio exoplasmtico responsvel pela interao com o ligante
extracelular, que normalmente uma molcula de carter hidroflico. A interao do ligante com
este domnio promove alteraes conformacionais na protena que se refletem no domnio
citoslico. So tais mudanas conformacionais que sero responsveis pela propagao do sinal
para o meio intracelular, permitindo, assim, que a clula responda ao estmulo externo. Existem
trs grandes classes de receptores de superfcie celular:
a) Receptores acoplados canais inicos. Neste caso, os prprios receptores atuam como
canais inicos e a sua interao com os ligantes extracelulares que regula o fluxo inico
atravs do canal. Dois exemplos deste tipo de receptores so os receptores de acetilcolina da
clula muscular esqueltica, que atuam como um canal de sdio, e os receptores gabargicos
expressos nos neurnios, que ao se ligarem ao neurotransmissor inibitrio GABA, promovem
o influxo de ons cloreto e a conseqente hiperpolarizao da membrana plasmtica da clula
neuronal.
b) Receptores acoplados Protena G. Estes receptores constituem a maior famlia de receptores
de superfcie celular, sendo agrupados em seis classes distintas. So protenas integrais
multipasso, com sete domnios transmembranares. A ligao do ligante com estes receptores
promove uma mudana conformacional no receptor e conseqente ativao de uma protena
intracelular trimrica, denominada Protena G. Esta protena responsvel pela propagao do
sinal dentro da clula, que pode ser feito pela ativao de enzimas especficas, tais como a
Fosfolipase-C ou a Ciclase de Adenilil, ou pela induo da abertura de canais inicos na
membrana plasmtica.
c) Receptores com Atividade Enzimtica. Esta classe de receptores inclui receptores com
atividades enzimticas intrnsecas, ou seja, cuja cadeia polipeptdica do receptor possui um
domnio de localizao citoslica com atividade enzimtica, e receptores com atividade
enzimtica extrnseca, onde a atividade enzimtica encontra-se em uma protena perifrica
associada ao receptor pelo lado citoslico da membrana. Os receptores com atividade
enzimtica intrnseca so divididos em: receptores tirosina-cinase; receptores serina-treoninacinase; receptores histidina-cinase; receptores tirosina-fosfatase; e receptores guanilil-ciclase.
Essa diviso baseia-se na atividade cataltica presente no receptor. Os receptores que
apresentam atividade cinase (ou quinase) promovem a fosforilao da protena alvo (adio de
um grupamento fosfato a um resduo de aminocido de uma protena). Os receptores com
atividade fosfatase removem um grupamento fosfato da protena-alvo e os receptores guanililciclase convertem GTP (trifosfato de guanosina) em GTPc (trifosfato cclico de guanosina). J
os receptores com atividade extrnseca esto associados enzimas com atividade tirosinacinase.

68

Biologia e Fisiologia Celular

:: SAIBA MAIS... ::
A propagao do sinal no interior da clula tem por objetivo final a alterao
da atividade de protenas responsveis pela resposta ao estmulo externo, ativandoas ou inibindo-as. Na sinalizao mediada por receptores com atividade enzimtica
do tipo cinase ou fosfatase, a alterao conformacional das protenas finais da
cascata de sinalizao (protenas da resposta) ocorre por ao direta das enzimas da
via de sinalizao (fosforilao ou desfosforilao), levando modificao do estado
fisiolgico da clula.
Em alguns casos, entretanto, a ativao de protenas da cascata de
sinalizao ou mesmo da protena envolvida na resposta celular mediada por
molculas que so geradas pela ativao do receptor pelo estmulo extracelular ou
por ons que tem a sua concentrao citoslica aumentada em resposta ao estmulo
do receptor e das protenas da cascata de sinalizao. Essas molculas ou ons so
denominados segundo mensageiros e incluem: carboidratos (trifosfato de inositol ou
IP3), lipdeos (ceramida, eicosanides, diacilglicerol ou DAG), nucleotdeos cclicos
(monofosfato de adenosina ou AMPc e monofosfato de guanosina ou GPMc) e ons
(clcio). O clcio se destaca entre os segundo mensageiros, sendo seu papel
relevante em diversas atividades celulares, tais como: contrao muscular,
proliferao celular e fertilizao, entre dezenas de outras. O aumento da
concentrao citoslica do on clcio ativa diversas enzimas, diretamente, ou
mediante a interao destas enzimas com uma protena intracelular denominada
Calmodulina. A ligao do on clcio com a Calmodulina, forma o complexo Ca2+Calmodulina, que responsvel pela ativao uma srie de protenas com atividade
cinase ou fosfatases.

:: FIQUE POR DENTRO!! ::


O bioqumico americano Earl Wilbur Sutherland Jr., ao estudar o
mecanismo de ao da adrenalina (epinefrina), foi o primeiro pesquisador a
identificar um segundo mensageiro celular, o AMPc. Em 1971, Earl Sutherland Jr.
foi contemplado com o Prmio Nobel em Fisiologia e Medicina pelas suas
contribuies para a cincia.

4.2 RECEPTORES INTRACELULARES


Os receptores intracelulares podem estar localizados tanto no citoplasma quanto no
nucleoplasma. Estes receptores so ativados pela interao com ligantes de carter hidrofbico,
entre os quais podemos destacar: o cortisol, o estrognio, a testosterona, o hormnio tireoidiano,
a vitamina D, e o cido retinico, entre outros. Os receptores intracelulares so fatores de
transcrio, ou seja, so protenas que controlam a expresso gnica, estando, portanto,
obrigatoriamente envolvidos na resposta lenta ao estmulo extracelular.
Os receptores intracelulares possuem quatro domnios funcionais muito importantes: o
domnio de ligao ao ligante, o domnio de ligao protena inibitria; o domnio de ligao ao
DNA; e o domnio de ativao da transcrio. Tais receptores formam heterodmeros com

69

Biologia e Fisiologia Celular

protenas inibidoras, que impedem a interao do receptor com o DNA ou impedem o


deslocamento do receptor, do citosol para o interior do ncleo, e a sua subsequente interao
com o DNA. A interao entre o ligante e o receptor ocorre atravs do domnio de ligao ao
ligante, que promove uma mudana conformacional no receptor, liberando a protena inibidora.
Uma vez no ncleo, o receptor passa a interagir diretamente com o DNA atravs do seu domnio
de ligao ao DNA e uma vez ligado ao DNA passa a recrutar diversas protenas, conhecidas
como Fatores Gerais da Transcrio, que sero responsveis pela expresso do gene alvo. Estas
protenas so recrutadas para o gene alvo pelo domnio de ativao da transcrio. A resposta
segue, ento, com a sntese do RNAm e a consequente traduo deste RNAm no citosol, gerando
a protena responsvel pela resposta celular ao estmulo extracelular.
:: FIQUE LIGADO!! ::
Existe uma srie de protenas integrais de membrana, presentes no
sistema de endomembranas, que tambm atuam como receptores. O receptor de
IP3 expresso na membrana do retculo endoplasmtico, e que responsvel pela
mobilizao do clcio reticular e conseqente elevao dos nveis citoslicos deste
on, um exemplo destes receptores. O IP3 gerado em respostas celulares
mediadas por receptores de superfcie celular que envolvem a ativao da enzima
fosfolipase-C. Esta enzima promove a clivagem do fosfolipdeo fosfatidilinositol 4,5bifosfato (PIP2), gerando dois subprodutos, o DAG e o IP3. O DAG um lipdeo que
permanece na membrana e ativa a enzima PKC (Protena Cinase-C), enquanto que
o IP3 um carboidrato que se difunde no citosol e se liga m receptores presentes na
face citoslica da membrana reticular. Tais receptores so receptores atuam como
canais de clcio e permitem o efluxo do clcio reticular e conseqente aumento da
concentrao deste on no citosol.

Apesar da localizao intracelular, tais

receptores no so includos na categoria de receptores intracelulares, uma vez que


somente os receptores que se ligam a ligantes extracelulares so classificados como
tal.

70

Biologia e Fisiologia Celular

:: TA NA WEB!!! ::
Nos endereos abaixo voc vai encontrar timas animaes sobre
sinalizao celular. Aproveite e exercite um pouco sobre o seu conhecimento sobre a
lngua inglesa.
Receptores Acoplados Protena G:
http://highered.mcgrawhill.com/sites/0072507470/student_view0/chapter17/animation__membranebound_receptors_that_activate_g_proteins.html
Receptores Acoplados Protena G e Canais de Clcio
http://highered.mcgrawhill.com/sites/0072507470/student_view0/chapter17/animation__membranebound_receptors__g_proteins__and_ca2__channels.html
O Segundo Mensageiro AMPc
http://highered.mcgrawhill.com/sites/0072507470/student_view0/chapter17/animation__second_messenger_
_camp.html
Receptores Intracelulares e Controle da Expresso Gnica
http://glencoe.mcgrawhill.com/sites/9834092339/student_view0/chapter9/how_intracellular_receptors_regula
te_gene_transcription.html
Comunicao Hormonal
http://highered.mcgrawhill.com/sites/0072507470/student_view0/chapter17/animation__hormonal_communic
ation.html

71

Biologia e Fisiologia Celular

UNIDADE 8
CICLO CELULAR
1. VISO GERAL
Os eventos celulares e bioqumicos responsveis pela gerao de duas clulas filhas, a
partir de uma clula-me, so conhecidos como ciclo celular. A diviso celular e a gerao de
novas clulas so fundamentais para diversos processos celulares, tais como: o desenvolvimento
embrionrio; o crescimento do organismo; a regenerao ou a renovao tecidual; a reproduo
assexuada, e a formao de gametas.
O ciclo celular da maioria das clulas eucariticas passa por uma sequncia comum de
eventos: crescimento celular; replicao do material gentico (DNA); distribuio do material
gentico para as clulas filhas (cromossomos); e diviso celular (citocinese). O ciclo celular
dividido em duas fases distintas: intrfase e mitose. Cada uma destas fases apresenta
caractersticas morfolgicas e bioqumicas tpicas. Tanto a interfase quanto a mitose so divididas
em subfases. A intrfase dividida em trs subfases: G1, S e G2. A mitose dividida em prfase,
pr-metfase, metfase, anfase e telfase (figura 8.1). O estado quiescente, no qual uma clula
no est em processo de diviso celular, denominado G0.
A durao do ciclo celular depende, essencialmente, do tipo celular. Clulas embrionrias
possuem um ciclo celular extremamente curto, que em alguns casos pode levar apenas 30
minutos. Por outro lado, uma clula de mamfero em cultura pode levar at 24 horas para
completar o ciclo celular. A fase mais demorada do ciclo celular a fase S (Sntese), onde ocorre
a duplicao do material gentico. As fases G1 e G2 recebem este nome por representarem um
intervalo (em ingls, gap) entre a fase S e a fase M (Mitose).

Figura 8.1 Fases e subfases do ciclo celular. I - Intrfase; M - Mitose; P - Prfase; PM - Prmetfase; MT - Metfase; A - Anfase; T Telfase. Modificado de
http://en.wikipedia.org/wiki/File:Cell_Cycle_2.svg

72

Biologia e Fisiologia Celular

A diviso celular de organismos procariotos segue outro padro, tendo em vista que tais
organismos no possuem um sistema de endomembranas, e, portanto, no apresentam ncleo.
Nestes organismos, a diviso celular conhecida como fisso binria (uma forma de reproduo
assexuada), sendo caracterizada pela duplicao do material gentico, crescimento celular, e
diviso celular.

2. DIVIDIR OU NO DIVIDIR? EIS A QUESTO!


Em condies fisiolgicas, a entrada no ciclo celular depende, fundamentalmente, de
sinais extracelulares. Em organismos multicelulares, a diviso celular requer sinais extracelulares
que promovam alteraes bioqumicas e fisiolgicas na clula alvo. Estes sinais, conhecidos como
fatores de crescimento, atravs da sua interao com receptores de superfcie celular, disparam
uma cascata de sinalizao intracelular, que responder pelas mudanas morfofisiolgicas
responsveis pela diviso celular. Entre os mais diversos fatores de crescimento, podemos citar:
fator de crescimento epidermal (EGF); fator de crescimento de fibroblasto (FGF); fator de
crescimento semelhante insulina (IGF); fator de crescimento derivado de plaqueta (PDGF); fator
de crescimento do endotlio vascular (VEGF); e fator de crescimento neuronal (NGF), entre
outros.
Em organismos unicelulares, alm de sinais extracelulares, as condies do meio tambm
so determinantes para a entrada de uma clula no processo de diviso celular, principalmente a
disponibilidade de nutrientes, como no caso da levedura Saccharomyces cerevisiae, onde at
mesmo o tamanho da clula determina a sua entrada no ciclo celular.
Ao receber o sinal extracelular a clula alvo altera o seu perfil de expresso gnica, dando
incio ao que chamamos de ciclo celular. Os sinais extracelulares, normalmente so responsveis
pela entrada da clula na fase G1 da intrfase, fazendo com que a mesma prossiga para a fase S.
O prosseguimento da fase G1 para a fase S requer que uma srie de requisitos seja satisfeita, tais
como integridade do DNA, tamanho celular e contedo protico, por exemplo. O conjunto destes
requisitos conhecido como ponto de restrio. Assim, o sinal extracelular deve propiciar, clula
alvo, condies necessrias para que a mesma preencha todos os requisitos exigidos no ponto de
restrio de G1 para S.
A necessidade de sinais extracelulares no restrita somente entrada na fase G1.
Ocitos de vertebrados podem permanecer em repouso na fase G2 por longos perodos de
tempo, at que a progresso para a fase M seja disparada por estmulos hormonais, como no
caso de ocitos humanos.

3. O CONTROLE BIOQUIMICO: CICLINAS E CINASES DEPENDENTES DE CICLINAS


As mudanas fisiolgicas que determinam a entrada na fase G1 dependem da expresso
da protena ciclina D, que ativada pela cascata de sinalizao mediada pelos fatores de
crescimento (via de sinalizao da protena ras). As ciclinas so protenas fundamentais na
regulao do ciclo celular das clulas eucariticas, tendo sido descritas, pela primeira vez, no ano
de 1982 em clulas embrionrias de ourios-do-mar. Essa descoberta valeu o Prmio Nobel em
Medicina e Fisiologia para o pesquisador Tim Hunt, no ano de 1991.
As ciclinas sofrem um ciclo de sntese e degradao durante as diferentes fases do ciclo
celular. Assim, temos ciclinas presentes em diferentes fases do ciclo celular. Estas ciclinas so

73

Biologia e Fisiologia Celular

divididas em duas classes: ciclinas G1/S, que inclui as ciclinas D, A e E; e a ciclina G2/M, que
inclui a ciclina B.
As ciclinas formam dmeros funcionais com protenas cinases especficas, conhecidas
como cinases dependentes de ciclina (cdks). A formao do dmero ativa as protenas cdks que
passam a adicionar grupamentos fosfato em seus substratos (fosforilao). A adio destes
grupamentos, em protenas-alvo especficas, responsvel pela progresso do ciclo celular,
regulando desde a replicao do DNA, na fase S, at a condensao da cromatina, o desarranjo
do envelope nuclear e a formao do fuso mittico na fase M.
J foram descritas mais de 10 ciclinas diferentes em clulas animais. A figura 8.2 ilustra a
expresso e formao dos dmeros ciclina-cdk nas diferentes fases do ciclo celular de mamferos.

Figura 8.2 Esquema representando a expresso das ciclinas e a dimerizao dos complexos
ciclina-Cdk durante as fases do ciclo celular de mamferos. Em G1, a ciclina D pode se associar tanto
com a cdk 4 ou a cdk 6.

4. INTRFASE
A intrfase comea com a fase G1, que caracterizada, morfologicamente, por um
crescimento celular. Nesta fase ocorre uma intensa atividade biossinttica, com gerao de novas
organelas e a sntese de protenas que sero fundamentais para a replicao do DNA que
ocorrer na fase subseqente do ciclo. A progresso para a fase S s ocorre aps a verificao
da integridade do DNA (primeiro ponto de restrio ou verificao). Esta verificao de suma
importncia para o sucesso do ciclo celular, pois a clula filha precisa apresentar as mesmas
caractersticas genotpicas e fenotpicas da clula me, garantindo o exerccio de todas as
atividades fisiolgicas inerentes ao tipo celular original.
Em casos de danos no DNA, protenas responsveis pelo sistema de reparo do DNA iro
promover a ativao de uma protena denominada p53. A p53 atua como um fator de transcrio
(protena responsvel por induzir a expresso de um determinado gene), levando expresso da
protena p21. Esta protena forma um trmero com o complexo ciclina D/cdk 4 ou 6, inibindo a
atividade cinase da cdk. Desta forma, o ciclo celular interrompido at que o dano possa ser
reparado. Caso o dano no seja passvel de reparo, a protena p53 ir induzir a expresso de
protenas pr-apoptticas, como a protena bax ou NOXA, que sero responsveis pela induo
da morte celular daquela clula.

74

Biologia e Fisiologia Celular

:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
Faa uma pesquisa e descubra a relao entre mutaes nas
protenas p53, Rb e ras e o desenvolvimento de tumores humanos!

Aps a verificao da integridade do DNA, a clula progride para a fase S, onde o DNA
ser, finalmente, replicado. Diversas enzimas so importantes nesta etapa, com destaque para a
DNA polimerase, enzima responsvel pela catlise da polimerizao dos dexorribonucleotdeos
em uma fita de DNA. Durante a fase S, a taxa de transcrio e traduo drasticamente reduzida,
mantendo-se apenas a sntese de protenas (histonas) que sero importantes para a montagem
da cromatina a partir do DNA recm sintetizado.
Ao entrar na fase G2, a clula verifica, atravs de um sistema enzimtico extremamente
qualificado, a integridade do DNA recm-sintetizado (segundo ponto de restrio ou verificao).
Nesta fase inicia-se a sntese de protenas que sero fundamentais para a mitose, como as
tubulinas, que constituem o microtbulo, estrutura responsvel pela formao do fuso mittico.

5. MITOSE
Apesar de ser a fase mais curta do ciclo celular, a mitose um das fases mais fascinantes
do processo de diviso celular, tendo em vista as evidentes alteraes morfolgicas que
representam esta fase. As diversas fases da mitose podem ser visualizadas, com o auxlio de
corantes, sob microscopia ptica comum. Uma das preparaes mais usuais feita a partir do
esmagamento da raiz de Allium cepa (cebola) e posterior colorao com azul de metileno. Como
vimos anteriormente, a mitose sub-dividada em diversas fases, que passaremos a estudar
agora.
5.1 PRFASE
A entrada na mitose marcada pelo incio da condensao da cromatina, dando origem
aos cromossomos, e pela duplicao dos centrossomos, que sero responsveis pela
organizao do fuso mittico. Os cromossomos duplicados so unidos por estruturas proticas
(complexo de coeso) em uma regio denominada centrmero. As protenas envolvidas na unio
das cromtides irms (como so chamados os cromossomos aps a formao dos pares) so as
coesinas. J a condensao da cromatina regulada pelas protenas chamadas condensinas.
importante ressaltarmos, aqui, que todas as feies morfolgicas da mitose dependem
diretamente, ou indiretamente, da atividade do complexo ciclina B/cdk1, que tambm conhecido
como fator promotor da maturao (MPF) por ter sido descoberto na maturao de ocitos de
anfbios durante a meiose.

75

Biologia e Fisiologia Celular

5.2 PR-METFASE
A entrada na pr-metfase caracterizada pelo desarranjo do envelope nuclear, fruto da
fosforilao das laminas nucleares pelo complexo ciclina B/cdk1. Assim, o material gentico tem
acesso ao citoplasma, onde os cromossomos podero se unir aos polmeros do microtbulo, em
uma regio localizada no centrmero e denominada cinetcoro, para dar incio formao do fuso
mittico. Em alguns eucariotos unicelulares, como as leveduras, por exemplo, o envelope nuclear
permanece integro durante a mitose. Neste caso, os cromossomos migram para os plos opostos
do ncleo, onde se ligam poro interna do envelope nuclear. Este tipo de mitose denominado
mitose fechada em contraposio mitose aberta, onde o envelope nuclear desfeito.
5.3 METFASE
A metfase marcada pela localizao dos centrossomos nos plos da clula e pelo
alinhamento das cromtides irms no plano equatorial da mesma. O alinhamento das cromtides
na placa metafsica, atravs do fuso mittico, garante, ao processo de diviso celular, que o
contedo gentico, duplicado na intrfase, seja distribudo de forma homognea para ambas as
clulas filhas. O alinhamento das cromtides irms no plano equatorial uma condio essencial
para o prosseguimento do ciclo celular. Este requisito considerado o terceiro ponto de restrio
(ou verificao) do ciclo.
5.4 ANFASE
Caso as cromtides irms estejam devidamente alinhadas no plano equatorial da clula,
um complexo protico, denominado Complexo Promotor da Anfase, ser ativado. Este complexo
responsvel pela degradao das coesinas, e conseqente separao das cromtides irms,
alm de induzir a degradao proteoltica da ciclina B, dando incio ao processo de inativao do
complexo ciclina B/cdk1.
A separao das cromtides irms marca o incio da anfase. Logo em seguida, tem-se
incio o processo de encurtamento dos microtbulos ligados aos cinetcoros. Este encurtamento,
alvo da instabilidade dos microtbulos e que parece estar associado inativao parcial dos
complexos ciclina B/cdk1, responsvel pela movimentao dos cromossomos em direo aos
plos da clula, o que reforado, ainda mais, pelo movimento dos centrossomos em direo s
extremidades celulares por meio dos microtbulos astrais, que o conectam membrana
plasmtica. Assim, no final da anfase, os cromossomos duplicados na fase S esto dispostos
nos plos opostos da clula. Cada extremidade celular, contm, assim, uma cpia idntica do
material gentico da clula me.
5.5 TELFASE
Podemos conceber a telfase como um processo reverso quele iniciado na mitose: o
envelope nuclear reorganizado, o fuso mittico desfeito e os cromossomos so
descondensados. O envelope nuclear reorganizado a partir da fuso das vesculas originadas
do seu desarranjo durante a pr-metfase. Acredita-se que estas vesculas se liguem aos
cromossomos atravs das laminas nucleares, dando incio a um processo de fuso vesicular que

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Biologia e Fisiologia Celular

culmina com a regenerao do envelope nuclear e o confinamento do material gentico no interior


do ncleo recm formado. A inativao das condensinas promove a descondensao dos
cromossomos e o retorno da cromatina como a configurao estrutural do material gentico. Por
fim, o nuclolo reorganizado, restabelecendo as feies originais do ncleo interfsico.
A diviso celular termina, no entanto, com a diviso do citoplasma em um processo
conhecido como citocinese. A citocinese tem incio na anfase, terminando na telfase. Em
clulas animais, um anel contrctil formado por filamentos de actina e miosina responsvel pela
compresso da membrana plasmtica de forma a gerar as duas clulas filhas. Em plantas
superiores, a citocinese resultado da formao de uma nova membrana e parede celular por
uma estrutura denominada fragmoplasto, um complexo formado pelo microtbulo, microfilamentos
e elementos do retculo endoplasmtico. Inicialmente, vesculas oriundas do complexo golgiense
se alinham no meio da clula formando uma estrutura denominada placa celular, que com o
auxlio do fragmoplasto se projeta em direo superfcie celular, levando diviso da clula e
formao das duas clulas filhas. A figura 8.3 ilustra as fases da mitose.

Figura 8.3 Fases da Mitose. Modificado de http://en.wikipedia.org/wiki/Mitosis.

:: SAIBA MAIS... ::
Uma das formas mais comuns de anormalidade cromossomial a aneuploidia, onde o
nmero de cromossomos de um indivduo no corresponde ao encontrado na sua
espcie. Na aneuploidia pode ocorrer tanto uma subtrao quando uma adio no
nmero de cromossomos originais. A aneuploidia gerada durante o processo de
diviso celular meitico do zigoto, quando as cromtides irms no so corretamente
segregadas para os plos da clula. Dois motivos principais parecem estar
correlacionados com a gerao da aneuploidia: a preservao do centrmero no incio
da anfase ou ausncia de ligao de algum cromossomo ao fuso mittico. A
aneuploidia mais comum em humanos a trissomia do cromossomo 21, que
encontrada na Sndrome de Down. A aneuploidia tambm encontrada em algumas
patologias humanas, como em determinados tipos de cnceres, onde os tumores so
aneuplides.
Se voc quer conhecer mais sobre a Sndrome de Down visite o endereo
http://www.fsdown.org.br

6. MEIOSE
A meiose um tipo especial de diviso celular, essencial para a reproduo sexuada, e
que ocorre apenas nas clulas germinativas. A meiose responsvel pela formao de gametas
haplides, ou seja, com a metade do contedo cromossomial das clulas somticas. Ao final da

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Biologia e Fisiologia Celular

meiose, quatro clulas filhas haplides so geradas a partir de uma nica clula me, em duas
divises celulares seqenciais (figura 8.4).
A meiose dividida em duas fases distintas: meiose I e meiose II. A meiose I tem incio
logo aps a duplicao do material gentico na fase S da intrfase, e dividida em quatro fases:
prfase I, metfase I, anfase I e telfase I. Durante a prfase I, os cromossomos homlogos so
pareados, ocorrendo a permuta de material gentico (recombinao ou crossing-over) entre
estes cromossomos. Essa permuta responsvel pela diversidade gentica proporcionada pela
reproduo sexuada. Ao fim da meiose I, cada uma das duas clulas filhas contm um membro
de cada par de cromossomos homlogos, consistindo, estes, de duas cromtides irms.
A entrada na meiose II ocorre sem que as clulas geradas pela meiose I entrem na
intrfase, ou seja, no ocorre uma nova duplicao do material gentico. Ao trmino da telfase I,
as clulas entram diretamente na prfase II, seguindo ento para a metfase II, anfase II, e,
finalmente, para a telfase II.
Na anfase II, as cromtides irms so segregadas para os plos da clula. Assim, cada
clula dever conter apenas uma cpia de cada cromossomo homlogo, ou seja, ao trmino da
meiose teremos 4 clulas haplides. A exceo fica por conta da formao dos ocitos, durante a
oognese, onde apenas 3 clulas so geradas. A diploidia restaurada por ocasio da fertilizao
e formao de um novo indivduo.

Figura 8.4 Meiose. Modificado de


http://pt.wikipedia.org/wiki/Ficheiro:MajorEventsInMeiosis_variant_pt.svg

:: TA NA WEB!!! ::
Nos endereos abaixo voc ir encontrar uma srie de animaes sobre o
ciclo celular:
http://www.johnkyrk.com/mitosis.pt.html (em portugus)
http://www.cellsalive.com/cell_cycle.htm
http://nobelprize.org/educational/medicine/2001/

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Biologia e Fisiologia Celular

UNIDADE 9
CITOESQUELETO
1. VISO GERAL
O citoesqueleto um sistema de protenas filamentosas presente tanto em organismos
eucariotos quanto em organismos procariotos. O termo citoesqueleto (originalmente,
cytosquelette) foi cunhado pelo embriologista e zoologista francs Paul Wintrebert, no ano de
1931, ao acreditar na existncia de uma rede intracelular resistente e elstica.
O citoesqueleto constitudo por trs sistemas filamentosos: microfilamentos (filamentos
de actina), microtbulos e filamentos intermedirios. O citoesqueleto participa de uma srie de
eventos celulares dinmicos, tais como: a diviso celular; o transporte intracelular de vesculas; o
movimento flagelar ou ciliar; mobilidade celular, e a fagocitose. Sendo importante, ainda, para a
determinao do formato celular e por conferir proteo contra estresses mecnicos. Veremos,
agora, as principais caractersticas estruturais e funcionais de cada tipo de filamento que compe
o citoesqueleto.

2. MICROFILAMENTOS OU FILAMENTOS DE ACTINA


Os filamentos de actina tambm so conhecidos por microfilamentos por apresentarem o
menor dimetro (entre 6 e 8 nm) entre os componentes do citoesqueleto. Os microfilamentos so
formados pela polimerizao da protena globular actina G. A associao dos monmeros de
actina G formam dois protofilamentos polarizados dispostos de maneira paralela em uma dupla
hlice e unidos por interaes laterais no-covalentes (figura 9.1). O filamento formado pela unio
de dois protofilamentos tambm conhecido como actina F. A adio das subunidades
monomricas de actina G ocorre na extremidade mais (+), e a despolimerizao, na extremidade
menos (-). A polimerizao da actina G nos filamentos depende de sua ligao com a molcula de
ATP, ao passo que o desligamento das subunidades de actina G depende da hidrlise do ATP,
formando ADP e fosfato inorgnico.

Figura 9.1 Representao superficial da estrutura atmica de um filamento de actina com 14


subunidades.

(+)

extremidade

mais;

(-)

extremidade

http://en.wikipedia.org/wiki/File:Actin_filament_atomic_model.png

79

menos.

Modificado

de

Biologia e Fisiologia Celular

Os filamentos de actina podem estar associados a diversas protenas, que promovem, por
exemplo, a sua interao com a membrana plasmtica, a formao de malhas ou feixes de
filamentos, o deslocamento de um filamento sobre outro, ou o aumento ou diminuio da
estabilidade do polmero.
Os filamentos de actina so responsveis pela formao de projees da membrana
plasmtica em processos de migrao celular e fagocitose, alm da estruturao das
microvilosidades presentes em clulas epiteliais. A actina F tambm importante na determinao
do formato celular e no processo de clivagem celular que ocorre durante a citocinese.

3. FILAMENTOS INTERMEDIRIOS
Os filamentos intermedirios possuem um dimetro de cerca de 8 a 10 nm, situando-se
entre os filamentos de actina e os microtbulos. Estes filamentos so importantes na sustentao
e estruturao do envelope nuclear, na coeso entre clulas epiteliais (junes clula-clula) e na
resistncia mecnica contra estresses fsicos. Os filamentos intermedirios so formados por uma
grande e diversa famlia de protenas fibrosas, que so classificadas em 6 tipos diferentes de
acordo com as homologias das sequncias de DNA e resduos de aminocidos (tabela 9.1).
Existem pelo menos 65 genes codificantes para protenas que constituem os filamentos
intermedirios em humanos. As protenas que formam os filamentos intermedirios no
apresentam stios de ligao a nucleotdeos, como as protenas relacionadas aos microfilamentos
ou aos microtbulos. A formao do polmero ocorre a partir de uma associao antiparalela
retorcida do tipo cabea-cauda, onde o domnio amino-terminal de uma cadeia polipeptdica
encontra-se justaposto ao domnio caboxi-terminal da outra cadeia.

TIPO

Protenas

Expresso

Queratinas cidas

Clulas epiteliais

II

Queratinas neutras e bsicas

Clulas epiteliais

Vimentina

Fibroblastos e glbulos brancos

Desmina

Clulas musculares

Periferina

Neurnios perifricos

Protena glial fibrilar cida (GFAP)

Clulas da glia

-Internexina

Neurnios

NF-H, NF-L & NF-M

Neurnios

III

IV

V
VI

Nestina

Clulas-tronco

de

diversos

tecidos

muscular, polpa dentria e epitlio olfatrio)

Sincoilina

Neurnios

Sinemina & Sinemina /Desmulina

Clulas musculares

Laminas nucleares

Expresso ubqua

Filesina

Clulas fibrosas do cristalino

Faquinina

Clulas fibrosas do cristalino

Tabela 9.1: Classificao das protenas formadoras de filamentos intermedirios.

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(nervoso,

Biologia e Fisiologia Celular

:: FIQUE POR DENTRO!! ::


Voc j deve ter ouvido falar em queratina, no? Calma, no perca seus fios
de cabelo por causa disto. Vamos saber um pouco mais sobre essa intrigante
protena!
A queratina uma protena formadora dos filamentos intermedirios nas
clulas epiteliais, podendo ser dividida, quanto sua caracterstica qumica, em
queratinas cidas ou queratinas bsicas. A interao entre estas duas formas de
queratinas produz o heterodmero responsvel pela formao do filamento de
queratina, que vem a ser um dos filamentos intermedirios mais rgidos. Anlises
recentes do genoma humano revelaram um total de 54 genes funcionais para a
queratina, sendo 28 genes correlacionados ao tipo I e 26 genes correlacionados ao
tipo II, o que faz desta protena a mais diversificada entre todas as que compem os
filamentos intermedirios.
Os queratincitos da epiderme so as clulas responsveis pela sntese da
queratina e a conseqente formao da camada de queratina que protege a pele
contra os danos ambientais, tais como: o calor; a perda de gua; ou a incidncia de
radiaes ultravioleta. A formao da camada de queratina denominada
queratinizao, sendo bastante evidente em rpteis, aves e mamferos, onde, neste
ltimo, encontrada, tambm, na formao dos pelos e das unhas.

:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
Existem mais de 30 patologias associadas a mutaes em genes que codificam para
protenas que constituem os filamentos intermedirios. Faa uma pesquisa e
descubra quais so as consequncias do comprometimento funcional destas
protenas.

:: TA NA WEB!!! ::
No endereo abaixo voc encontrar ilustraes sobre o modelo
organizacional dos filamentos intermedirios:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/br.fcgi?book=cooper&part=A1808&rendert
ype=figure&id=A1813
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/br.fcgi?book=mboc4&part=A2957&rendert
ype=figure&id=A2984

4. MICROTBULOS
Os microtbulos so a terceira classe de protenas que constituem o citoesqueleto. O
dimetro mdio de um filamento de microtbulo de aproximadamente 25 nm, sendo o mais
espesso de todos os filamentos que compem o citoesqueleto. Os microtbulos esto envolvidos
em diversos processos celulares, incluindo a formao do fuso mittico durante a diviso celular, o

81

Biologia e Fisiologia Celular

trfego intracelular de vesculas e organelas, e a formao dos clios e flagelos das clulas
eucariticas.
Assim como nos filamentos de actina, o microtbulo tambm formado pela polimerizao
de protenas globulares. Estas protenas, denominadas tubulinas e , formam os heterodmero
responsveis pelo elongamento do filamento. Os microtbulos, da mesma forma que a actina F,
tambm apresentam uma estrutura polarizada, onde a adio das subunidades de tubulina ocorre
na extremidade mais (+), e a dissociao destas subunidades, na extremidade menos (-). A
adio do heterotrmero ao polmero mediada pela ligao das subunidades de tubulina com o
trifosfato de guanosina (GTP). Aps a incorporao do heterotrmero no filamento, o GTP
hidrolisado em difosfato de guanosina (GDP), o que afeta a estabilidade do heterodmero no
filamento e permite uma eventual separao do mesmo. Este processo conhecido como
instabilidade dinmica e fundamental para todos os processos biolgicos regulados pelos
microtbulos.
A nucleao e organizao dos microtbulos ocorrem em regies especializadas no
citoplasma, denominadas centros organizadores dos microtbulos, e inclui os centrossomos,
estrutura supramolecular composta por um par de centrolos e os corpsculos basais. A protena
responsvel pela na nucleao dos microtbulos, nos centrossomos, a tubulina .
:: SAIBA MAIS... ::
Os microtbulos so o alvo farmacolgico de uma srie de frmacos
utilizados no tratamento de tumores humanos, entre os quais podemos citar a
vimblastina, a vincristina e o taxol. Faa uma pesquisa e descubra as bases
moleculares da utilizao destes compostos no tratamento do cncer.

5. CITOESQUELETO EM PROCARIOTOS
Os elementos do citoesqueleto presentes nos procariotos so importantes para a diviso
celular, e para a determinao do formato e da polaridade celular. Os componentes do
citoesqueleto dos organismos procariotos so semelhantes aos encontrados nas clulas
eucariticas. A protena FtsZ, por exemplo, responsvel pela formao do anel contrctil durante
a diviso celular, de forma semelhante ao anel de actina e miosina presente nas clulas
eucariticas. Duas outras protenas, denominadas MreB e crescentina, so responsveis pelo
formato celular no-esferoidal de algumas bactrias. A MreB se assemelham, estruturalmente,
actina, enquanto que a crescentina assemelha-se aos filamentos intermedirios, sendo
encontrada nas espcies Caulobacter crescentus e Helicobacter pylori.
5.1 PROTENAS MOTORAS
As protenas motoras so protenas associadas aos microtbulos ou aos filamentos de
actina, e que ao interagirem com outras protenas, organelas ou vesculas, permitem a
movimentao estas estruturas pela clula.
A protena miosina a protena motora associada aos filamentos de actina. Inicialmente
descrita em clulas musculares, sabemos, hoje, que a miosina encontrada nos mais variados

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Biologia e Fisiologia Celular

tipos celulares, participando de fenmenos to diversos como a contrao muscular e o transporte


vesicular.
Duas protenas motoras encontram-se associadas aos microtbulos: a dinena, envolvida
no movimento dos clios e flagelos; e a cinesna, relacionada ao movimento dos cromossomos e
de vesculas e organelas. Ambas as protenas utilizam a hidrlise da molcula de ATP para
proporcionarem mobilidade aos componentes celulares. A cinesina se movimenta em direo
extremidade mais (+) (figura 9.2) e a dinena em direo extremidade menos (-).

Figura 9.2 Esquema ilustrativo demonstrando a associao da cinesina com o microtbulo.


Modificado de http://pt.wikipedia.org/wiki/Ficheiro:Kinesin_cartoon.png

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