Cromatografia

UNIVERSIDAD TECNOLGICA NACIONAL
FACULTAD REGIONAL CRDOBA
CTEDRA DE QUMICA ORGNICA

- CROMATOGRAFA -
6. Cromatografa
6.1. Principios de la cromatografa
Esta palabra proviene del griego croma (color) y grafo (escritura), entonces escritura
de color, y es as ya que primeramente se la utiliz para separar compuestos que tenan color.
Es una tcnica de separacin basada en las diferentes velocidades con que se mueven
los solutos a travs de un medio estacionario mediante el flujo en un disolvente llamado
eluente. F. F. Runge qumico alemn, describi el proceso de separacin que actualmente se
conoce como cromatografa en papel.
Al ruso Mijail Tswett le corresponde el haber establecido las ventajas de la
cromatografa y la adopcin parcial de la terminologa, tambin fue quien sent las bases de
los principales procedimientos experimentales relativos a sta tcnica. A pesar de que el
mtodo cromatogrfico prometa simplificar la separacin de sustancias de mezclas complejas,
no fue sino hasta finales de la dcada de los 30 y principios de los 40 cuando se empez a
desarrollar la tcnica teniendo este mtodo diversas aplicaciones. Las nicas sustancias que no
pueden ser examinadas por cromatografa son las insolubles y aquellas que reaccionan o se
descomponen con el solvente o con la fase estacionaria.
6.1.1. Trminos que se utilizan
6.1.1.1. Fase Mvil
Es la sustancia (lquido o gas, depende del sistema que se utilice) que se encarga de
arrastrar la muestra a travs de la fase estacionaria.
6.1.1.2. Fase Estacionaria
Es la sustancia (slido o lquido) sobre la que se adsorber o disolver la muestra a
analizar. En otras palabras, es aquella sustancia que se encarga de separar a la mezcla que
estamos cromatografiando de acuerdo a su solubilidad en ella o a su capacidad de ser
adsorbida (retenida).
6.1.1.3. Soporte
Es un compuesto slido sobre el que se dispersa la fase estacionaria. La principal
caracterstica es tener una gran superficie (cientos de m2 por gramo). Los ms comunes son
tierras de diatomeas y carbn activado. Evidentemente solamente se utiliza en las columnas
empacadas.
S. Caglieri, M. Pagnan, C. Poncio


- CROMATOGRAFA -
6.1.1.4. Flujo
Se denomina de esta forma al caudal de la fase mvil. En la cromatografa gaseosa se
utilizan principalmente: hidrgeno, helio y nitrgeno.
6.1.1.5. Carga
Es el porcentaje de fase estacionaria de las columnas de relleno.
6.1.1.6. Pico
Trmino aplicado en un cromatograma que exhibe un mximo de concentracin, como
una banda o zona.
6.1.1.7. Tiempo de retencin y tiempo muerto
El tiempo de Retencin es el tiempo que toma un soluto en recorrer toda la columna.
El tiempo de retencin se asigna al correspondiente pico del soluto. El tiempo de retencin es
una medida de la cantidad de tiempo que el soluto gasta dentro de la columna: es la suma del
tiempo que gasta en fase mvil y en la fase estacionaria.
Figura 1: Esquema de un Cromatograma
En la Figura 1 se presenta el esquema de una cromatografa en la que se puede

apreciar los diferentes tiempos de retencin (tR1 y tR2, siendo tR1=tM + tR1) y adems otro
valor que resulta importante como lo es el tiempo muerto o tiempo de retencin de un pico
no retenido (tM o to) es el tiempo requerido por un compuesto no retenido para viajar a
travs de toda la columna. Las molculas de un soluto no retenido no penetran a la fase
estacionaria, ellas viajan a la misma velocidad del gas portador, todo el tiempo estn en la fase
mvil. Este es equivalente al tiempo que el soluto gasta en la fase mvil y que es el mismo para


- CROMATOGRAFA -
todos los solutos de la muestra en el mismo corrido cromatogrfico. Este tiempo se obtiene al
inyectar un compuesto no retenido y determinando su tiempo de retencin.
Los equipos no diferencian entre el tiempo muerto y el tiempo de retencin,
simplemente nos darn lo que se denomina tiempo de elucin, siendo para un compuesto x la
suma del tiempo muerto ms su tiempo de retencin.
6.1.2. Clasificacin segn estado fsico
La cromatografa es una de las tcnicas de anlisis que se encuentra en permanente
actualizacin, pero sin modificar los fundamentos en los que se basa. Tal como se puede
apreciar en la Figura 2 , esta tcnica de separacin y de anlisis se clasifica de acuerdo al
estado fsico que se encuentra la fase mvil (lquida o gaseosa).
Figura 2: Clasificacin de los mtodos cromatogrficos
La Figura 3 nos muestra la diferencia de cmo se presentan los resultados entre una
cromatografa de placa y otra en la que nos da el cromatograma.
Figura 3: Comparacin entre cromatografa de placas y un cromatograma


- CROMATOGRAFA -
6.1.3. Cromatografa de papel TLC o Cromatografa de placa

Esta es una cromatografa que se utiliza mucho en los laboratorio, ya que la misma es
rpida muy fiable y adems econmica.
Como en las dems cromatografas, esta se basa en la solubilidad de los compuestos
en el solvente utilizado como fase mvil y la capacidad de adsorcin de la fase estacionaria.
En la Figura 4 se muestra como se efecta el sembrado de la muestra a cromatografiar.
Atento a que muchas veces se intuye qu tipo de producto es, se siembran junto a la muestra
problema los compuestos puros de los que se sospecha.
Figura 4: Esquema de una cubeta de TLC (inicio de la cromatografa)
Figura 5: Desarrollo de la cromatografa (final)
Lo que se debe tener en cuenta cuando se habla de TLC o cromatografa de papel, es

que los compuestos tienen siempre o es constante, lo que se denomina relacin de frentes
(Rf). Esto no es otra cosa que la distancia, por ejemplo, d (ver Figura 5) sobre la distancia a,
que sera hasta donde se hizo llegar el solvente, esta relacin de frentes es para el compuesto
que lleg hasta d. Entonces, el compuesto simbolizado por d tiene una nica relacin de
frentes (Rf = d/a) para la TLC siempre que se utilice el mismo solvente y la misma placa.
Cuando se efecta la cromatografa en placa (TLC) o alguna de aquellas que se
basan en el mismo principio, tales como papel o tiza; se debe tener en cuenta que el solvente


- CROMATOGRAFA -
no debe llegar al extremo superior de la placa, tiza o papel, ya que de esta forma vamos a
calcular un Rf diferente al real.
Otra consideracin a tener en cuenta es que se debe dejar unos minutos para
que el solvente a utilizar como fase mvil, se volatilice y sature la cmara de desarrollo.
6.1.3.1. Factores que influyen en una separacin por cromatografa de capa fina.
a) Temperatura: a menor temperatura las sustancias se adsorben ms en la fase
estacionaria (tiza, papel o TLC).
b) La cromatografa debe llevarse a cabo en un rea sin corrientes de aire, o la cmara
debe encontrarse debidamente tapada.
c) Limpieza de las placas. Muchas placas estn contaminadas con grasa o agentes
plastificantes o adhesivos. Para el trabajo a pequea escala, stas deben limpiarse corriendo
primero una mezcla de cloroformo y metanol y despus dejar secar completamente antes de
aplicar la muestra.
d) Pureza de los disolventes.
6.2.
Clasificacin de las cromatografas

Los fundamentos en los que se basa la Cromatografa son principalmente dos:
adsorcin del analito a la fase estacionaria y la particin del analito entre la fase estacionaria y
la fase mvil. Tambin existen dos fundamentos ms, intercambio inico y exclusin, pero
estos son muy especficos y por ende solamente se remitir a mencionar sus caractersticas
principales.
La cromatografa se clasifica de acuerdo al Mecanismo de separacin, donde se
encuentra la cromatografa de reparto, cromatografa de adsorcin y cromatografa de
exclusin.
Figura 6: Distintas tcnicas cromatogrficas

- CROMATOGRAFA -
6.2.1. Cromatografa de reparto o particin

La separacin de una mezcla de solutos es funcin de la distribucin de las molculas
de stos entre una fase estacionaria lquida, soportada sobre un slido, y la fase mvil o
eluente del sistema. La fase mvil puede ser un lquido o un gas segn sea el caso de la
cromatografa; en caso de que la cromatografa sea lquido - lquido la fase mvil ser un
liquido, o de un gas en cuyo caso es cromatografa gas-lquido.
Si un soluto A se disuelve en B y C, la distribucin entre ellos est dada por la ecuacin:
Coeficiente de reparto:
Conc. de A en B
Conc. de A en C
La temperatura a la que el coeficiente de reparto se determina es constante.

6.2.1.1. Cromatografa lquido-lquido
Se lleva a cabo principalmente en celulosa y gel de slice hmeda, el agua se comporta
como soporte por lo que se emplea para separar sustancias solubles en agua, se puede realizar
en papel, columna o capa fina, la fase estacionaria est constituida por la parte individual de
cada fibra.
La separacin se basa en los diferentes coeficientes de reparto de un soluto entre dos
fases lquidas inmiscibles, uno de los lquidos realiza el papel de fase mvil y el otro el de la
estacionaria. Esta fase se encuentra cubriendo un slido finamente definido con gran
superficie. La fase lquida estacionaria se encuentra cubriendo un slido finamente dividido
con gran superficie, este proceso es similar al llamado de extraccin. Para favorecer la
inmiscibilidad de ambos lquidos se procura que sean de polaridades diferentes. Generalmente
se usan la fase estacionaria polar y la mvil no polar, esto no puede impide invertir las
polaridades; en este caso la cromatografa lquido-lquido se conoce como cromatografa de la
fase invertida. La fase mvil es soluble en la fase estacionaria.
6.2.1.2. Cromatografa gas-lquido
En este caso se elige la fase estacionaria que presente una estructura anloga a una de
las sustancias que presente la mezcla. Se crea una pelcula muy fina para facilitar el reparto,
esta capa debe poseer baja volatilidad sobre el soporte slido, y de esta forma aumentar la
superficie interfacial entre el gas y el lquido tanto como sea posible.
En la Figura 7 se puede observar un esquema del proceso del coeficiente de reparto,
en el cual observamos el equilibrio que en forma permanente se est dando entre la fase
estacionaria y la mvil.


- CROMATOGRAFA -
Figura 7: Esquema de interaccin fase mvil fase estacionaria
La Figura 8 muestra un esquema de que sucede dentro de la columna cromatogrfica.
Figura 8: Pasos dentro de la columna cromatogrfica
En la Figura 9 se puede apreciar el inyector de un cromatgrafo de gases, que es el

sector por donde ingresa la muestra para analizar.
Figura 9: Esquema de un inyector para cromatografa gaseosa


- CROMATOGRAFA -
Para las muestras lquidas en un sistema de cromatografa gaseosa, se debe tener en

cuenta que el inyector debe estar a una temperatura tal que la muestra al inyectarse pase al
estado gaseoso y pueda ser arrastrada por la fase mvil. Siempre antes de comenzar con un
anlisis cromatogrfico, hay que tener la precaucin de tener presente los puntos de ebullicin
de los componentes de la mezcla a analizar y programar al inyector a una temperatura
superior, y de esta forma evitar la condensacin de algn compuesto dentro del inyector.
6.2.2. Cromatografa de adsorcin
La adsorcin se manifiesta por un aumento de la concentracin del soluto en la
interface que rodea el medio estacionario. La separacin est basada en las diferencias de
comportamiento, adsorcin, desercin de sustancias contenidas en las fases mvil sobre un
slido estacionario y pueden ser sistemas lquido-slido y gas-slido. En cualquier fenmeno
de adsorcin influyen tres variables: adsorbente, eluente y solutos. El trmino adsorcin en
trminos cromatogrficos se refiere a interacciones dbiles.
6.2.2.1. Cromatografa lquido-slido
La fase estacionaria suele ser gel de slice, almina, carbn activado y poliamida.
Algunas veces al aplicar almina pueden ocurrir cambios qumicos, es decir, quimisorcin
durante el paso del soluto por la fase estacionaria, esta fase es muy activa y tiene un gran
poder de retencin de los compuestos.
La separacin se lleva a cabo debido a la interaccin de las molculas de un soluto y la
superficie de la fase estacionaria. Est interaccin es un fenmeno competitivo en el que
intervienen las molculas de las fases del soluto y la fase mvil. Criterios que pueden influir en
la eleccin de la cromatografa, como mtodo de separacin son:
- Estabilidad de las columnas. Los absorbentes empleados son qumicamente inertes,
eso permite su uso intensivo y continuo sin deterioro. El contenido de agua en la fase mvil,
es una de las variables experimentales que pueden ser controladas.
- Ventajas: las separaciones pueden realizarse a temperatura ambiente; el llenado de
las columnas se hace en seco y con facilidad, pues no se necesita un control especial de la
temperatura. Los adsorbentes resultan de fcil adquisicin por su bajo costo econmico.
- Desventajas: Adsorcin irreversible, los adsorbentes comunes son cidos o bases
dbiles, las muestras sensibles al pH pueden descomponerse o adsorberse en forma
irreversible, para evitar y disminuir este fenmeno se recomienda un lavado cido o bsico
esto con el fin de bloquear los centros activos del absorbente.
- Baja reproductividad de absorbente: debido a la dificultad de reproduccin de las
condiciones en un anlisis.


- CROMATOGRAFA -
6.2.2.2. Cromatografa gas-slido

Los adsorbentes ms usados son almina, gel de slice, carbn activado y mallas
moleculares. Se realizan en columna. El material que sea utilizado como adsorbente debe
presentar una estructura rgida, tamao uniforme y ser qumicamente inerte.
En cromatografa gaseosa, la fase mvil debe estar en equilibrio con la fase
estacionaria, por lo cual, es necesario evitar velocidades de flujo extremadamente altas, ya
que la fase mvil arrastrara a la estacionaria separndola del soporte. Debe mantenerse
constante la temperatura de entrada a la columna, de otra forma la fase lquida se distribuye
de forma deficiente.
La inyeccin de grandes cantidades de muestra puede desplazar parte de la fase
estacionaria, a causa de lo cual quedara activo el soporte, dando lugar a fenmenos de
adsorcin.
6.2.3. Cromatografa de exclusin
La separacin est basada en los diferentes volmenes moleculares de los solutos. El
tiempo de elusin es proporcional al peso molecular de los mismos, lo que provoca ser no muy
usada con compuestos de alto peso molecular. Principalmente en este proceso se emplean
geles no inicos de partculas uniformes y porosas, como fase estacionaria.
6.2.3.1.
Cromatografa de filtracin:
Se emplean geles de filtracin como el sephadex, que es un polmero de dextrano. El

eluente empleado es agua o soluciones amortiguadoras, los geles aumentan su volumen
cuando se ponen en contacto con el eluente e impiden el paso de molculas de gran tamao a
travs de sus poros, y por eso se separan primero.
6.2.3.2.
Cromatografa de permeacin
Se emplean polmeros que se disuelven en solventes orgnicos como fase estacionaria.

6.2.4. Cromatografa de intercambio inico
La cromatografa de intercambio inico consiste en intercambiar iones de la fase
estacionaria, la cual debe ser un polmero con iones lbiles (cationes o aniones) de estructura
porosa, insoluble, capaz de aumentar su volumen al ser humedecido por la fase mvil. La fase
estacionaria se escoge segn el anlisis que se vaya a realizar, que debe cumplir con las
siguientes caractersticas:
- Estructura y poro uniforme- Resistencia qumica, mecnica y trmica-Gran capacidad,
la capacidad se define como el nmero de grupos funcionales disponibles para el intercambio
inico.


- CROMATOGRAFA -
-Entrecruzamiento. Los polmeros con poco entrecruzamiento aumentan el volumen

de manera excesiva al estar en contacto con la fase mvil, y se contraen al secarse. Durante
mucho tiempo se utilizaron polmeros inorgnicos naturales, de baja capacidad, los que son
relativamente inestables e insolubles. Entre los aluminosilicatos est la zeolita (Ca, Na),
(Si4Al2O12), 6H2O; en esta poca se preparaba sintticamente para evitar el tamao de poro
irregular, malla natural es la forma en la que se conoce la estructura heterognea que
presenta el producto natural.
- Gran resistencia a las radiaciones y temperaturas extremas.
- Alta selectividad hacia iones inorgnicos simples. Actualmente se han desarrollado
diversos tipos de polmeros orgnicos como:
- Geles de intercambio inico: son redes de dextrano en forma de partculas esfricas
uniformes tridimensionales. tiles en la separacin de electrolitos.
-Celulosa de intercambio inico: son similares a los geles.
Poseen los mismos grupos cambiadores, pero la celulosa presenta la parte
irregularidad del producto natural. -Resinas de intercambio inico: En qumica analtica
generalmente se emplean resinas sintetizadas, dndose un mayor entrecruzamiento al
aumentar la proporcin de divinilbenceno. El producto se trato con distintos reactivos para la
introduccin de grupos funcionales. Se pueden introducir grupos funcionales especiales para
diversas aplicaciones, la - resina quelante- se obtiene por introduccin del grupo
iminodiactico. Esta resina retiene iones metlicos pesados, pero con uso limitado por lo difcil
que resulta desplazarlos; adems sufre grandes cambios en volumen y grado de ionizacin al
variar el pH.
Otras resinas se obtienen por reacciones de condensacin de formaldehdo y alcoholes
o aminas aromticas. Las resinas que se conocen con el nombre de resinas de intercambio
electrnico son aquellas que se copolimerizan con hidroquinonas las cuales se pueden oxidar a
quinonas reducidas en forma reversible.
El intercambio inico es una reaccin de equilibrio reversible:
Catinico
RH+K=RK+H
Aninico
R OH + Cl = R Cl + OH
Donde: R = polmero inico.

Debido a que los materiales ms usados son las resinas, se emplean indistintamente
fase estacionaria y/o resina KA/B es el coeficiente de selectividad, que no es igual a la
constante de equilibrio termodinmico ya que no intervienen actividades. A mayor valor del
coeficiente de selectividad, mayor interaccin del intercambiador y el soluto, misma que
10


- CROMATOGRAFA -
cambia cuando las condiciones experimentales se modifican (pH, temperatura, solventes,

concentracin, porosidad).
En general la resina presenta selectividad por el in de mayor carga. A mayor dilucin
del soluto en la fase mvil, mayor es la atraccin de las cargas electrostticas.
Menor volumen de solvatacin: A menor volumen de in solvatado, el aumento de la
resina es menor y el in es ms atrado.
Mayor polarizabilidad: Debido a la formacin de un enlace entre las resinas y el in, o
bien una simple atraccin entre especies similares.
A continuacin se muestran algunas estructuras de las resinas de intercambio.
El tamao de poro de este tipo de resinas limitan su uso a molculas con peso
molecular menor de 500, ya que a partir de ah no pueden penetrar en la resina.
Adems, la densidad de carga de estos intercambiadores es tan alta que las molculas
grandes con muchos grupos cargados pueden quedar unidas a la resina de manera irreversible.
Los geles de derivados de polisacridos de celulosa, dextrn (Sephadex), agarosa y
poliacrilamida poseen mayores tamaos de poro y menor densidad de grupos cargados, y por
ello son adecuados para el intercambio inico de macromolculas como las protenas y los
cidos nucleicos. Los grupos cargados se unen qumicamente a algunos de los grupos hidroxilo
de estos polisacridos.
11

- CROMATOGRAFA -
Tanto los geles como las resinas son inestables en condiciones qumicas extremas (alta
temperatura, radiacin intensa, solucin muy bsica, oxidantes fuertes...), por lo que en estas
condiciones se usan algunas sustancias inorgnicas, como los xidos hidratados de Zr, Th, TI,
Sn y W.
6.3.
Fase mvil
Podemos decir que es la encargada de transportar la muestra a travs de la fase
estacionaria.
Cromatografa de papel o TLC
En este caso la fase mvil va a ser el solvente o la mezcla de solventes. Dentro de los
ms comunes se puede encontrar los siguientes:
- ter de petrleo
- cloruro de metileno
- n-hexano
- acetato de etilo
- ciclohexano
- acetona
- tolueno
- iso-propanol
- dietil-ter
- etanol
- n-butil-ter
- metanol
- cloroformo
- cido actico
Cromatografa de gases
La fase mvil es un gas y pueden ser dos sistemas:
Cromatografa gas-lquido
Cromatografa gas-slido
Los gases ms utilizados para la cromatografa gaseosa son: helio (He), nitrgeno (N2) e
Hidrgeno (H2). La caracterstica que deben tener es que sean de alta pureza sobre todo si la
idea es determinar trazas de compuestos.
Cromatografa lquida
El eluente es un lquido y puede ser:
Cromatografa lquido-liquido
Cromatografa liquido-slido
Cromatografa de exclusin
Cromatografa de intercambio inico
Se puede decir que los solventes que se utilizan en estos tipos de cromatografas son
los mismos que en la TLC con la diferencia que estos equipos permiten la mezcla de solvente
12


- CROMATOGRAFA -
con lo cual el desarrollo cromatogrfico resulta ser ms preciso, llegando a separar

enantimeros.
6.4.
Equipos tpicos
Dentro de los equipos ms comunes tenemos: el de cromatografa en fase
gaseosa, en fase lquida (HPLC) y placa (TLC), los cuales se muestran en las Figuras
Figura 10Figura 11 yFigura 12, respectivamente.
Figura 10: Esquema de un equipo de cromatografa en fase gaseosa
Figura 11: Esquema de un equipo de cromatografa lquida (HPLC)
13


- CROMATOGRAFA -
Figura 12: Equipo para cromatografa en placa (TLC)
6.4.1. Detectores
Los detectores son la parte del equipo de cromatografa que est encargado de dar
una seal caracterstica cuando pasa a travs de l algn compuesto o sustancia.
6.4.1.1.
Clasificacin de los detectores
Estos pueden ser clasificados:

Detectores segn su Grado de Selectividad:
Universales. Responde a la mayora de los solutos que pasan por l.
Especficos Selectivos. Exhibe una gran respuesta a un grupo particular de
substancias con un mnimo de respuesta a otras.
Detectores Destructivos y No destructivos. Esta clasificacin, obviamente, es
en referencia a si la muestra es destruida o no.
Detectores segn su Modo de Respuesta:
Dependientes del Flujo Msico. Producen una seal que es proporcional a la
cantidad de soluto que pasa a travs de l en la unidad de tiempo pero es
independiente del volumen de gas portador requerido para la elucin.
Dependiente de la Concentracin. Dan una seal proporcional a la cantidad de
soluto por unidad de volumen de gas portador que pasa a travs de l.
Detectores segn el proceso de deteccin
Ionizacin, ptico-espectroscpico, Electroqumico, etc.
6.4.1.2.
Caractersticas de los Detectores
Sensibilidad. Medida de la efectividad de un detector para convertir la muestra en una

seal elctrica medible.
Linealidad. Rango de masa concentracin de muestra sobre el cual el detector
mantiene una sensibilidad constante sin una desviacin arbitraria. El significado prctico de la
14


- CROMATOGRAFA -
linealidad del detector es el que le indica al analista la concentracin para la cual el detector es
confiable. Hay dos lmites en la curva de linealidad:
El lmite de concentracin inferior, que es dado por el lmite de deteccin y,
El lmite Superior, definido por un porcentaje de desviacin arbitrario de la curva de
linealidad, normalmente se toma un 5% de desviacin.
Rango Dinmico Lineal. Rango sobre el cual la sensibilidad del detector es constante.
Ruido. Es cuantificado por el promedio de la amplitud pico-pico de la seal. El
significado de conocer el nivel de ruido de un detector es un factor determinante en la
determinacin de la cantidad mnima detectable y el lmite inferior del rango lineal.
Lmite de Deteccin. Est definido como la mnima cantidad de substancia que puede
producir una seal que sea el doble del nivel de ruido.
Corriente de Fondo. Seal constante de salida generada por el proceso en el que un
detector est operativo sin que alguna substancia pase a travs de l. Esta seal es muy
importante, ya que permite diagnosticar el buen o mal funcionamiento del detector.
6.4.1.3.
Detectores ms usados en Cromatografa de Gases
Detector de Conductividad Trmica (CT). Mide la conductividad trmica del gas

portador, ocasionada por la presencia de substancias eludas.
Detector de Ionizacin a la Llama (FID). Basado en la medida de las variaciones de la
corriente de ionizacin en una llama oxgeno-hidrgeno debido a la presencia de substancias
eludas.
Detector de Captura Electrnica (CE). Basado en la electronegatividad de las
substancias eludas, y su habilidad para formar iones negativos por captura de electrones.
Detector de Fotometra a la Llama (FPD- S N). Basada en la medida de la intensidad
de la emisin molecular de la fluorescencia de heterotomos en las molculas orgnicas.
Detector de Espectrometra de Masas (MS). Su principio est basado en el bombardeo
por electrones de las sustancias a ser analizadas, estas se fragmentan de acuerdo a leyes bien
definidas de la naturaleza que es conocida como patrones de fragmentacin.
En la Tabla 1 se pueden observar diferentes tipos de detectores y sus aplicaciones ms
frecuentes.
15

- CROMATOGRAFA -
Tabla 1: Detectores ms utilizados

TIPO
USO
Detector de Conductividad
Trmica
Detector de Captura
Electrnica
TCD
ECD
NPD
Detector de llama alcalina
FPD (393 nm)

FPD (526 nm)
PID
Detector Fotomtrico de
llama
Detector Fotomtrico de
llama
Detector de
Fotoionizacin
General
Compuestos halogenados
(solventes, pesticidas)
Compuestos nitrados y/o
fosforados
Compuestos azufrados
Compuestos fosforados
RANGO
SENSIBILIDAD
5 100 ng
10 ppm 100 %
0.05 1 pg
50 ppt 1 ppm
0,1 10 pg
100 ppt 0,1 %
10 100 pg
10 ppb 100ppm
1-10 pg
1 ppb 0,1%
Compuestos ionizados por

UV
2 pg C/seg
ELCD
Detector de Conductividad
Electroltica
Halgenos, Nitrogenados,
Azufrados
0,5 pg Cl/seg
2 pg S/seg
4 pg N/seg
AED
Detector de Emisin
Atmica
Sintonizable al elemento
0,1 20 pg/seg
En la Figura 13 se muestra un esquema de un detector tipo FID.
Figura 13: Esquema de un detector tipo FID
6.5.
Aplicaciones de la cromatografa
Esta es la tcnica ms difundida para el anlisis rpido de las muestras gaseosas.
Resulta un mtodo especfico para compuestos combustibles voltiles, usando para
ello el detector FID y para aquellos compuestos que son voltiles y no combustibles se utiliza la
misma pero con un detector del tipo de conductividad trmica o de captura electrnica. Para
compuestos no voltiles existe la cromatografa lquida, pudiendo ser la comn o la de alta
presin (HPLC).
Por ltimo, esta tcnica sirve tanto para efectuar anlisis cuantitativos como
cualitativos.
16

6.6.

- CROMATOGRAFA -
Cuestionario Terico
1. Investigar qu tipo de cromatografa utilizara para analizar:

a)
mezcla de combustibles
b)
pesticidas (agroqumicos)
c)
colorantes de una tinta
2.
Es cierto que para usar las tcnicas de cromatografa lo que deseo analizar debe ser
coloreado?
3.
Qu significa que una sustancia tenga:
a)
Rf < 0,5
b)
Rf = 0,5
c)
Rf > 0,5
4.
Qu se dice que la cromatografa de capa fina es un criterio parcial y no total de
identificacin? Por?
5.
Cul ser el resultado de los siguientes errores en cromatografa en capa fina?
a)
Aplicacin de solucin muy concentrada.
b)
Utilizar eluyente de alta polaridad.
c)
Emplear gran cantidad de eluyente en la cmara de cromatografa.
6.
Una serie de colorantes es separada por cromatografa en capa fina. Calcular los valores
de Rf de cada colorante de acuerdo a la siguiente tabla.

Colorantes
Distancia Recorrida (mm)
Eluyente
66.0
Rojo de metilo
56.0
Rodamina B
38.0
Rojo Congo
0.5
7.
Analice y explique por qu se debe tener la temperatura controlada en la cromatografa
en fase gaseosa.
8.
Explique en forma sinttica como puedo hacer para analizar un solvente que se encuentra
absorbido en una matriz slida.

9.
Qu consideraciones se debe tener presente si se desea analizar una mezcla por medio
de la cromatografa gaseosa?
17

6.7.

- CROMATOGRAFA -
Prctico de Laboratorio
Material y Drogas necesarias por grupo:
Tabla 2: Materiales por grupo
Material
Pipeta de 5 ml
Frasco
Placa p/cromatografa
Vidrio de reloj
Papel de filtro
Capilares
Agitador de vidrio
Tizas blancas
Material Adicional
Lmpara de luz UV. onda larga y onda corta
Cmara oscura para lmpara de luz UV
Cmara de revelado c/ iodo
Cantidad
1
1
1
1
1
1
1
1
Tabla 3: Drogas y soluciones por grupo

Drogas y Soluciones
Silicagel G para cromatografa en placa
Acetona
acetato de etilo
n-hexano
etanol
tolueno
Iodo
Tintas varias
Cantidad
Se pueden utilizar placas cromatofolios ya preparados (comerciales), o bien, preparar

las placas en el laboratorio.
Para preparar las cromatoplacas, se introducen dos portaobjetos juntos, limpios y
secos, en una suspensin de gel de slice al 35% en acetato de etilo, se dejan secar al aire y se
separan con cuidado.
Para aplicar las soluciones a las placas cromatogrficas utilice capilares, que
previamente deber ser estirados en la flama del mechero (flama pequea), con el fin de que
tengan el dimetro adecuado.
18


- CROMATOGRAFA -
6.7.1. EFECTO DE LA CONCENTRACION EN LA TLC

Con la micro pipeta, tome una pequea cantidad de la solucin-problema y aplique
una gota sobre la capa de Silicagel, a 1 cm. aprox. del borde inferior de la placa y trace una
marca, con un lpiz fino, en el borde derecho, para no perder el punto de aplicacin.
Para saber cul es el efecto de la concentracin (o el tamao) de las gotas, se harn 3
aplicaciones de la solucin en orden creciente de concentracin, en una sola placa, como se
indica en el siguiente ejemplo:
Para desarrollar el cromatograma, introduzca la placa en una cmara de elucin, (que
puede prepararse con un frasco de tamao apropiado), a la que previamente se le coloca por
dentro un cuadro de papel filtro para aumentar la saturacin de los vapores del eluyente,
coloque unos 4 ml de acetato de etilo y tpela.
Una vez que la placa est dentro de la cmara, no debe moverla. Cuando el frente del
eluyente est casi en el borde superior de la capa de Silicagel, abra el frasco, retire la placa y
marque el frente del eluyente con un lpiz fino. Coloque la placa en su hoja de papel, donde
anotar sus datos, y djela secar al aire.
Para visualizar las manchas, revele primero con la lmpara de luz UV, marcando el
contorno de cada una con un lpiz fino y luego introduciendo la placa en una cmara con
cristales de yodo.
6.7.2. EFECTO DEL SOLVENTE EN LA TLC

El objetivo de esta experiencia es determinar la incidencia que tiene el solvente que se
utiliza en el desarrollo de la cromatografa de placa, papel o tiza.
Se prepara dos o ms muestras con la misma tinta y se utilice diferentes solventes, con
distintos grados de polaridad. Tenga presente que la siembra debe realizarse unos mm por
encima del nivel del solvente.
Tener en cuenta que los tamaos de las placas o papeles deben ser iguales para una
mejor comparacin.
Para esta parte se deber utilizar una tinta de color rojo, verde, azul oscuro o
cualquiera.
6.7.3. APLICACIN DE LA TLC PARA DETERMINAR LA CALIDAD DEL BIODIESEL

En una placa de TLC ya acondicionada, sembrar una muestra en un sector, una muestra
de aceite y en el otro la muestra de biodiesel. Hay que tener en cuenta que uno de los
19


- CROMATOGRAFA -
procesos para la fabricacin de biodiesel ms utilizados utiliza al aceite vegetal como materia
prima.
El eluente o fase mvil que se utiliza es una mezcla de hexano y acetato de etilo (7030).
Se debe recordar que el solvente no debe llegar nunca al extremo de la placa, por lo
cual siempre conviene retirar la placa de la cmara de desarrollo cuando el solvente haya
recorrido alrededor del 90% de la longitud de esta.
Se deja evaporar el solvente debajo de campana de extraccin, alrededor de unos 10 a
15min. Luego se procede a colocar la placa dentro de la cmara de revelado. Esta cmara
contiene yodo, el cual deber ser colocado previo al inicio de la experimentacin para tener el
tiempo necesario de saturar la cmara. La cmara deber tener un buen cierre, para minimizar
la prdida de yodo.
Se coloca la placa y se deja revelar durante unos 10 a 15 min. Observar y explicar lo
que ha sucedido. Calcular los Rf de ambas muestras.
20

Cromatografia

Enviado por

Dados do documento

Direitos autorais

Formatos disponíveis

Compartilhar este documento

Compartilhar ou incorporar documento

Opções de compartilhamento

Você considera este documento útil?

Este conteúdo é inapropriado?

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

Cromatografia

Enviado por

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

UNIVERSIDAD TECNOLGICA NACIONAL

FACULTAD REGIONAL CRDOBA

CTEDRA DE QUMICA ORGNICA

S. Caglieri, M. Pagnan, C. Poncio

UNIVERSIDAD TECNOLGICA NACIONAL

CTEDRA DE QUMICA ORGNICA

Figura 1: Esquema de un Cromatograma

En la Figura 1 se presenta el esquema de una cromatografa en la que se puede

S. Caglieri, M. Pagnan, C. Poncio

UNIVERSIDAD TECNOLGICA NACIONAL

CTEDRA DE QUMICA ORGNICA

Figura 2: Clasificacin de los mtodos cromatogrficos

Figura 3: Comparacin entre cromatografa de placas y un cromatograma

S. Caglieri, M. Pagnan, C. Poncio

UNIVERSIDAD TECNOLGICA NACIONAL

CTEDRA DE QUMICA ORGNICA

6.1.3. Cromatografa de papel TLC o Cromatografa de placa

Figura 4: Esquema de una cubeta de TLC (inicio de la cromatografa)

Figura 5: Desarrollo de la cromatografa (final)

Lo que se debe tener en cuenta cuando se habla de TLC o cromatografa de papel, es

UNIVERSIDAD TECNOLGICA NACIONAL

CTEDRA DE QUMICA ORGNICA

Clasificacin de las cromatografas

Figura 6: Distintas tcnicas cromatogrficas

S. Caglieri, M. Pagnan, C. Poncio

CTEDRA DE QUMICA ORGNICA

UNIVERSIDAD TECNOLGICA NACIONAL

6.2.1. Cromatografa de reparto o particin

La temperatura a la que el coeficiente de reparto se determina es constante.

UNIVERSIDAD TECNOLGICA NACIONAL

CTEDRA DE QUMICA ORGNICA

Figura 7: Esquema de interaccin fase mvil fase estacionaria

La Figura 8 muestra un esquema de que sucede dentro de la columna cromatogrfica.

Figura 8: Pasos dentro de la columna cromatogrfica

En la Figura 9 se puede apreciar el inyector de un cromatgrafo de gases, que es el

Figura 9: Esquema de un inyector para cromatografa gaseosa

S. Caglieri, M. Pagnan, C. Poncio

UNIVERSIDAD TECNOLGICA NACIONAL

CTEDRA DE QUMICA ORGNICA

Para las muestras lquidas en un sistema de cromatografa gaseosa, se debe tener en

UNIVERSIDAD TECNOLGICA NACIONAL

CTEDRA DE QUMICA ORGNICA

6.2.2.2. Cromatografa gas-slido

Se emplean geles de filtracin como el sephadex, que es un polmero de dextrano. El

Se emplean polmeros que se disuelven en solventes orgnicos como fase estacionaria.

UNIVERSIDAD TECNOLGICA NACIONAL

CTEDRA DE QUMICA ORGNICA

-Entrecruzamiento. Los polmeros con poco entrecruzamiento aumentan el volumen

Donde: R = polmero inico.

S. Caglieri, M. Pagnan, C. Poncio

UNIVERSIDAD TECNOLGICA NACIONAL

CTEDRA DE QUMICA ORGNICA

cambia cuando las condiciones experimentales se modifican (pH, temperatura, solventes,

CTEDRA DE QUMICA ORGNICA

UNIVERSIDAD TECNOLGICA NACIONAL

S. Caglieri, M. Pagnan, C. Poncio

UNIVERSIDAD TECNOLGICA NACIONAL

CTEDRA DE QUMICA ORGNICA

con lo cual el desarrollo cromatogrfico resulta ser ms preciso, llegando a separar

Figura 10: Esquema de un equipo de cromatografa en fase gaseosa

Figura 11: Esquema de un equipo de cromatografa lquida (HPLC)

S. Caglieri, M. Pagnan, C. Poncio

UNIVERSIDAD TECNOLGICA NACIONAL

CTEDRA DE QUMICA ORGNICA