Angiogenesis dalam pterigium: studi densitas

mikrovaskular, vascular endothelial growth factor,

dan thrombospondin-1.
M Aspiotis1, E Tsanou2, S Gorezis1, E Ioachim2, A Skyrlas2, M Stefaniotou1 and V Malamou-Mitsi2
1.
2.

Department of Ophthalmology, University of Ioannina, Ioannina, Epirus, Greece

Department of PathologyCytology, University of Ioannina, Ioannina, Epirus, Greece
Correspondence: M Aspiotis, Department of Ophthalmology, University of Ioannina, Ioannina, Epirus
45110, Greece. Tel: +30 26510 77747; Fax: +30 26510 32266. E-mail: gorezis@hotmail.com
2

Received 5 December 2005; Revised 25 May 2006; Accepted 25 May 2006; Published online
23 June 2006.

Penelitian retrospektif ini bertujuan untuk menjelaskan peranan angiogenensis dalam

patogenesis pterigium. Kami mengevaluasi microvessel density (MVD) dan ekspresi
vascular endothelial growth factor (VEGF) dan thrombospondin-1 (TSP-1).
Pterigium merupakan lesi permukaan okular yang tumbuh dari epitel limbus menuju ke
kornea secara sentripetal diikuti oleh epitel konyungtiva. Secara histologis, pada
pterigium yang tumbuh secara aktif terdapat perubahan degeneratif dan hiperplasia.
Patogenesis pterigium masih kontroversial, meskipun studi epidemiologi telah
membuktikan bahwa radiasi ultraviolet adalah agen etiologi pterigium.5 Selain itu,
banyak faktor pertumbuhan fibroangiogenik yang terlibat dalam patogenesis pterigium,
seperti tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha), basic fibroblast growth factor (bFGF),
platelet-derived growth factor (PDGF), dan transforming growth factor- (TGF-beta).
Immunoreaktivitas faktor pertumbuhan ini terletak di dalam sel epitel, sel endotel
pembuluh darah, membran basement pembuluh darah dan epitel, fibroblas, dan infiltrasi
sel-sel inflamasi di pterigium.6 Sel epitel konjungtiva mampu menghasilkan sitokin
proinflamasi, seperti TNF- dan IL-1, yang merangsang proliferasi fibroblastik kapsul
Tenon, dalam kultur jaringan.7 Angiogenesis didefinisikan sebagai pembentukan
pembuluh darah baru dari pembuluh darah yang sudah ada dan mendasari sebagian besar
proses fisiologis,8 seperti pertumbuhan dan diferensiasi, ovulasi, proses penyembuhan
luka, dan kondisi abnormal seperti neoplasia dan penyakit mata, yang menyebabkan
kehilangan penglihatan yang berat.9
Proses angiogenesis diatur oleh keseimbangan kompleks faktor regulasi positif dan
negatif. Salah satu faktor angiogenik yang paling ampuh dan spesifik adalah VEGF, yang
juga dikenal sebagai faktor permeabilitas pembuluh darah dan vasculotropin.10 VEGF
merupakan glikoprotein pengikat heparin yang memiliki beberapa efek penting pada selsel endotel vaskular. Faktor pertumbuhan ini dapat memberikan respon terhadap
rangsangan lingkungan, terutama hipoksia, sitokin tertentu, dan estradiol. 11, 12, 13 Saat ini ,
VEGF dianggap sebagai mitogen yang paling selektif untuk sel endotel, 14 meningkatkan
permeabilitas vaskuler,15 menginduksi perubahan aliran ion, proliferasi sel, 16 dan migrasi
dan pelepasan proteinase.17

Sebagai penyeimbang, thrombospondin - 1 (TSP-1) merupakan trombosit multifungsi dan

protein matriks ekstraselular.18 TSP-1 terlibat dalam beragam proses seperti regulasi
pertumbuhan sel, motilitas sel, peradangan, dan penyembuhan luka. Dalam penelitian ini,
kami menilai keterkaitan densitas mikrovaskular/ microvessel density (MVD), diperiksa
dengan CD31, dengan ekspresi angiogenik faktor VEGF dan inhibitor endogen
angiogenesis TSP-1 pada pasien dengan pterigium dan konjungtiva bulbar, dalam upaya
untuk menjelaskan peran faktor-faktor tertentu yang terkait dengan angiogenesis dalam
patogenesis pterigium.
Metode :
52 pterigium yang telah dieksisi dan tujuh konjungtiva normal diteliti secara
imunohistokimia dengan menggunakan streptavidin-biotin method pada jaringan yang
disimpan dalam paraffin. Antibodi monoklonal ditargetkan terhadap CD31, VEGF, dan
protein TSP-1. Antibodi monoklonal yang ditargetkan terhadap CD31, VEGF, dan protein
TSP - 1.
Hasilnya, pterigium secara signifikan memiliki rata-rata jumlah mikrovaskular yang lebih
tinggi dibandingkan dengan konjungtiva normal. Pada 24 dari 52 kasus pterigium (46,2
%), ditemukan ekspresi VEGF yang tinggi, sedangkan persentase rata-rata sel epitel
VEGF-positif adalah 58,03 %. Selain itu, konjungtiva normal mengekspresikan VEGF
yang tinggi dalam sel epitel. Sebaliknya, kehadiran imunoreaktifitas VEGF dalam sel
endotel dan stroma pembuluh darah secara signifikan lebih tinggi dalam jaringan
pterigium (P < 0,0001). Pewarnaan stroma untuk TSP-1 terdeteksi hanya pada 29 dari 52
kasus (55,8 %) dan tidak ditemukan korelasi dengan konjungtiva yang normal. Akhirnya,
ditemukan korelasi positif yang signifikan secara statistik antara nilai MVD dan ekspresi
VEGF dalam stroma (P = 0.049).
Dalam penelitian ini, overekspresi VEGF di pterigium dan banyaknya mikrovaskular
yang positif terhadap CD31 tampaknya sesuai dengan penelitian sebelumnya 25, 26, 27 yang
membuktikan neoangiogenesis sebagai kontributor potensial yang penting dalam
patogenesis pterigium. Kami menemukan bahwa terdepat ekspresi VEGF yang banyak
dalam sel endotel dan stroma pterigium, namun tidak pada sel epitel. Kami menekankan
bahwa VEGF terbukti ditemukan pada konjungtiva normal dan jaringan okular lainnya
dengan angiogenesis.
Kami menekankan pada hasil penelitian yang berbeda dengan pengamat sebelumnya
yang menemukan bahwa terdapat ekspresi pterygium yang lebih tinggi secara signifikan
pada pterigium dibandingkan dengan jaringan normal. Ekspresi VEGF yang tinggi pada
sel epitel konjungtiva normal mungkin tidak mampu merangsang angiogenesis, sesuai
dengan rendahnya MVD. Fenomena ini mungkin disebabkan oleh tidak adanya VEGF
pada sel endotel dan stroma. Sebaliknya, ekspresi VEGF pada sel endotel maupun stroma
pterigium mungkin mampu merangsang aktivitas angiogenik secara signifikan, terbukti
dengan nilai MVD yang tinggi. Akumulasi VEGF pada sel epitel menggambarkan
produksi, sedangkan akumulasi dalam sel endotel dan stroma menggambarkan aktivitas

angiogenik. Berdasarkan hasil penelitan ini kami berhipotesis bahwa stroma cukup
penting dalam patogenesis pterygium.33
Salah satu temuan penting dari penelitian ini adalah tidak adanya karakteristik TSP-1,
suatu inhibitor angiogenesis, pada hampir setengah (44,2%) kasus ptergium. Peran TSP-1
dalam regulasi angiogenesis tidak jelas. Dampak positif dan negatif dari TSP-1 di
angiogenesis telah dilaporkan. TSP-1 memiliki aktivitas antiangiogenik yang terlibat
dalam interaksi CD36 reseptor sel endotel mikrovaskuler dan in vivo dan in vitro.
Penelitian in vivo dan in vitro 35,36, 37, 38 telah menunjukkan bahwa protein ini mungkin
menghambat angiogenesis. Berdasarkan temuan di atas, dapat disimpulkan bahwa
overekspresi faktor angiogenik dan bersamaan dengan penurunan ekspresi inhibitor
angiogenesis mungkin menyediakan satu jalur untuk mekanisme patogen dari pterigium
serta kemungkinan intervensi terapi untuk menghindari rekurensi pterigium.
References:
3.

Spencer WH. Ophthalmic Pathology: An Atlas and Textbook, 3rd edn. WB Saunders Co: Philadelphia,
1985, pp 304.

4.

Reese AB. Tumors of the Eye, 3rd edn. Harper & Row: New York, 1976, pp 5355.

5.

Cameron ME. Histology of pterygium: an electron microscopic study. Br J Ophthalmol 1983; 67: 604
608. | PubMed | ISI | ChemPort |

6.

Hill JC, Maske R. Pathogenesis of pterygium. Eye 1989; 3: 218226 (review). | PubMed | ISI |

7.

Taylor HR, West SK, Rosenthal FS, Munoz B, Newland HS, Emmett EA. Corneal changes associated with
chronic UV irradiation. Arch Ophthalmol 1989; 107: 14811484. | PubMed | ISI | ChemPort |

8.

Kria L, Ohira A, Amemiya T. Immunohistochemical localization of basic fibroblast growth factor, platelet
derived growth factor, transforming growth factor- and tumor necrosis factor- in the pterygium. Acta
Histochem 1996; 98: 195201. | PubMed | ISI | ChemPort |

9.

Cunliffe IA, Richardson PS, Rees RC, Rennie IG. Effect of TNF, IL-1, and IL-6 on the proliferation of
human Tenon's capsule fibroblasts in tissue culture. Br J Ophthalmol 1995; 79: 590
595. | PubMed | ISI | ChemPort |

10.

Folkman J, Klagsbrun M. Angiogenic factors. Science 1987; 235: 442

447. | Article | PubMed | ISI | ChemPort |

11.

Tsanou E, Ioachim E, Stefaniotou M, Gorezis S, Charalabopoulos K, Bagli H et al. Immunohistochemical

study of angiogenesis and proliferative activity in epiretinal membranes. Int J Clin Pract 2005; 59: 1157
1161. | Article | PubMed | ISI | ChemPort |

12.

Ferrara N. Vascular endothelial growth factor. Eur J Cancer 1996; 32: 24132422. | Article |

13.

Drovak HF, Brown LF, Detmar M, Dvorak AM. Vascular permeability factor/vascular endothelial growth
factor, microvascular hyperpermeability and angiogenesis. Am J Pathol 1995; 146: 1029
1039. | PubMed | ISI | ChemPort |

14.

Ferrara N, Alitalo K. Clinical application of angiogenic growth factors and their inhibitors. Nat Med 1999;
5: 13591364. | Article | PubMed | ISI | ChemPort |

15.

Nicosia RF. What is the role of vascular endothelial growth factor-related molecules in tumor angiogenesis?
Am J Pathol 1998; 153: 1116. | PubMed | ISI | ChemPort |

16.

Leung DW, Cachianes G, Kuang WJ, Goeddel DV, Ferrara N. Vascular endothelial growth factor is a
secreted angiogenic mitogen. Science 1989; 246: 13061309. | Article | PubMed | ISI | ChemPort |

17.

Senger DR, Galli SJ, Dvorak AM, Perruzzi CA, Harvey VS, Dvorak HF. Tumor cells secrete a vascular
permeability factor that promotes accumulation of ascites fluid. Science 1983; 219: 983
985. | Article | PubMed | ISI | ChemPort |

18.

Dvorak HF. Tumours: wounds that do not healsimilarity between tumour stroma generation and wound
healing. N Engl J Med 1983; 315: 16501658.

19.

Unemori EN, Ferrara N, Bauer EA, Amento E. Vascular endothelial growth factor induces interstitial
collagenase expression in human endothelial cells. J Cell Physiol 1992; 153: 557
562. | Article | PubMed | ISI | ChemPort |

20.

Roberts DD. Regulation of tumor growth and metastasis by thrombospondin-1. FASEB J 1996; 10: 1183
1191 (review). | PubMed | ISI | ChemPort |

21.

Taraboletti G, Roberts D, Liotta LA, Giavazzi R. Platelet thrombospondin modulates endothelial cell
adhesion, motility, and growth: a potential angiogenesis regulatory factor. J Cell Biol 1990; 111: 765
772. | Article | PubMed | ISI | ChemPort |

22.

Dushku N, Reid TW. Immunohistochemical evidence that human pterygia originate from an invasion of
vimentin-expressing altered limbal epithelial basal cells. Curr Eye Res 1994; 13: 473
481. | PubMed | ISI | ChemPort |

23.

Karukonda SR, Thompson HW, Beuerman RW, Lam DS, Wilson R, Chew SJ et al. Cell cycle kinetics in
pterygium at three latitudes. Br J Ophthalmol 1995; 79: 313317. | PubMed | ISI | ChemPort |

24.

Ioachim-Velogianni E, Tsironi E, Agnantis N, Datseris G, Psilas K. HLA-DR antigen expression in

pterygium epithelial cells and lymphocyte subpopulations: an immunohistochemistry study. Ger J
Ophthalmol 1995; 4: 123129. | PubMed | ChemPort |

25.

Dushku N, Reid TW. P53 expression in altered limbal basal cells of pingueculae, pterygia and limbal
tumors. Curr Eye Res 1997; 16: 11791192. | Article | PubMed | ISI | ChemPort |

26.

Tan DT, Tang WY, Liu YP, Goh HS, Smith DR. Apoptosis and apoptosis related gene expression in normal
conjunctiva and pterygium. Br J Ophthalmol 2000; 84: 212216. | Article | PubMed | ISI | ChemPort |

27.

Di Girolamo N, McCluskey P, Lloyd A, Coroneo MT, Wakefield D. Expression of MMPs and TIMPs in
human pterygia and cultured pterygium epithelial cells. Invest Ophthalmol Vis Sci 2000; 41: 671
679. | PubMed | ISI | ChemPort |

28.

Seifert P, Sekundo W. Capillaries in the epithelium of pterygium. Br J Ophthalmol 1998; 82: 77

81. | PubMed | ISI | ChemPort |

29.

Lee DH, Cho HJ, Kim JT, Choi JS, Joo CK. Expression of vascular endothelial growth factor and inducible
nitric oxide synthase in pterygia. Cornea 2001; 20: 738742. | Article | PubMed | ISI | ChemPort |

30.

Kim I, Ryan AM, Rohan R, Amano S, Agular S, Miller JW et al. Constitutive expression of VEGF,
VEGFR-1, and VEGFR-2 in normal eyes. Invest Ophthalmol Vis Sci 1999; 40: 2115
2121. | PubMed | ISI | ChemPort |

31.

Marcovich AL, Morad Y, Sandbank J, Huszar M, Rosner M, Pollack A et al. Angiogenesis in pterygium:
morphometric and immunohistochemical study. Curr Eye Res 2002; 25: 1722. | Article | PubMed | ISI |

32.

Gebhardt M, Mentlein R, Schaudig U, Pufe T, Recker K, Nlle B et al. Differential expression of vascular
endothelial growth factor implies the limbal origin of pterygia. Ophthalmology 2005; 112: 1023
1030. | Article | PubMed | ISI |

33.

Jin J, Guan M, Sima J, Gao G, Zhang M, Liu Z et al. Decreased pigment epithelium-derived factor and
increased vascular endothelial growth factor levels in pterygia. Cornea 2003; 22: 473
477. | Article | PubMed | ISI |

34.

Van Setten G, Aspiotis M, Blalock T, Grotemdorst G, Schultz G. Connective tissue growth factor in
pterygium: simultaneous presence of vascular endothelial growth factor-possible contributing factor to
conjunctival scarring. Graefe's Arch Clin Exp Ophthalmol 2003; 241: 135139. | ChemPort |

35.

Solomon A, Li DQ, Lee SB, Tseng SC. Regulation of collagenase, stromelysin, and urokinase-type
plasminogen activator in primary pterygium body fibroblasts by inflammatory cytokines. Invest
Ophthalmol Vis Sci 2000; 41: 21542163. | PubMed | ChemPort |

36.

Roberts AB, Sporn MB. Growth factors and transformation. Cancer Surv 1986; 5: 405
412. | PubMed | ISI | ChemPort |

37.

Jimenez B, Volpert OV, Crawford SE, Febbraio M, Silverstein RL, Bouck N. Signals leading to apoptosisdependent inhibition of neovascularization by thrombospondin-1. Nat Med 2000; 6: 41
48. | Article | PubMed | ISI | ChemPort |

38.

Iruela-Arispe ML, Bornstein P, Sage H. Thrombospondin exerts an antiangiogenic effect on cord formation
by endothelial cells in vitro. Proc Natl Acad Sci USA 1991; 88: 50265030. | Article | PubMed | ChemPort |

39.

Good DJ, Polverini PJ, Rastinejad F, Le Beau MM, Lemons RS, Frazier WA et al. A tumor suppressordependent inhibitor of angiogenesis is immunologically and functionally indistinguishable from a fragment
of thrombospondin. Proc Natl Acad Sci USA 1990; 87: 66246628. | Article | PubMed | ChemPort |

40.

Tolsma SS, Volpert OV, Good DJ, Frazier WA, Polverini PJ, Bouck N. Peptides derived from two separate
domains of the matrix protein thrombospondin-1 have anti-angiogenic activity. J Cell Biol 1993; 122: 497
511. | Article | PubMed | ISI | ChemPort |

41.

Nicosia RF, Tuszynski GP. Matrix-bound thrombospondin promotes angiogenesis in vitro. J Cell Biol 1994;
124: 183193. | Article | PubMed | ISI | ChemPort |