SISTEMA DE CULTIVO BATCH

Cuando se siembran microorganismos en un medio de cultivo apropiado,

estos comienzan a multiplicarse a expensas de los nutrientes hasta que, finalmente,
el crecimiento se detiene por agotamiento de alguno de los componentes del medio
de cultivo (sustrato limitante) o bien por acumlacin de inhibidores. Un cultivo de
esta naturaleza, en el cual una cierta cantidad de microorganismos es sembrada en
un volumen dado de medio de cultivo, se conoce como Cultivo en batch, su empleo
es muy frecuente peso no es el nico, ya que existen otros mtodos para cultivar
microorganismos, por ej. el Batch alimentado y el Cultivo continuo.
Cultivo en Batch
La evolucin del cultivo en el tiempo, sigue una curva tpica la cual recibe el
nombre de curva de crecimiento en batch. Los sucesos que tienen lugar durante la
misma pueden separarse en cuatro fases perfectamente diferenciables. En primer
lugar existe una fase donde prcticamente no hay divisin celular pero s aumento
de la masa individual de los microorganismos (fase lag o fase de retardo). Le sigue
una etapa donde el crecimiento ocurre a velocidad especfica () mxima y
constante = m (fase exponencial). Al final de esta fase se alcanza la mxima
concentracin microbiana. Posteriormente hay un rpido perodo de desaceleracin
donde 0 y se entra en la fase estacionaria la cual es causada por agotamiento
de algn nutriente (el sustrato limitante) o bien por acumulacin de inhibidores.
Durante esta fase la concentracin microbiana (o de biomasa) permanece
constante. Finalmente se llega a una ltima etapa donde la concentracin de
biomasa disminuye por autolisis o como consecuencia del metabolismo endgeno
(fase de decaimiento).
La duracin de cada una de estas fases es funcin del microorganismo en
estudio y de la composicin del medio de cultivo. En particular la fase lag depende
adems de la fase de crecimiento en que se encuentran las clulas en el momento
de ser sembradas y de la composicin del medio de cultivo en que fueron crecidas.
Si ste es igual a la composicin del medio en que se van a sembrar y las clulas
estn en fase exponencial, la duracin de la fase lag, en general se acorta y puede
llegar a desaparecer, lo cual es deseable ya que constituye tiempo perdido.
La descripcin matemtica (modelado) de las cuatro fases descriptas es
sumamente compleja y escapa a los fines de esta gua, por lo que slo veremos una
ms simple que slo contempla la fase exponencial y la estacionaria.
De la definicin de obtenemos
rx = . x

(12)

donde x = concentracin de biomasa. Hemos visto que vara durante el cultivo,

siendo un valor constante y mximo en la fase exponencial (m) y nulo en la
estacionaria. Monod ha propuesto una relacin muy simple entre el valor de y la
concentracin de sustrato limitante, S, entendindose por ste al componente del
medio de cultivo que est en menor proporcin respecto de las necesidades del
microorganismo. Por tanto S puede ser la fuente de N, de C, algn aminocido, etc.
La ecuacin es:

S
KS S

= m

(13)

A KS se la conoce como Constante de Saturacin, y da una idea de la afinidad

que tiene el microorganismo por el sustrato en cuestin. A menor K S mayor afinidad.
Normalmente KS tiene valores muy pequeos (10 -2 - 10-3 g/l) por lo que
concentraciones relativamente pequeas de S son suficientes para hacer que:
= m

(14)

Reemplazando la ec. (13) en (12) queda:

S

rx = m K S . x
S

(15)

Al principio del cultivo todos los nutrientes estarn en exceso, y en particular el

sustrato limitante tambin, por lo que la ex. (15) se reduce a (fase exponencial)
rx = m x ; o bien:

dx
= m . x
dt

(16)

La ec. (16) es fcilmente integrable y si hacemos a t = 0; x = x o (concentracin inicial

de microorganismos) queda:
ln x = ln xo + m t

(17)

x = xo em t

(18)

o bien

Por tanto en esta fase la concentracin de biomasa aumenta

exponencialmente, y tambin lo hace r x ya que reemplazando: rx = m xo e m t
A partir de la ec. (17) se puede calcular el tiempo de generacin del
microorganimos (perodo de tiempo en que la biomasa se duplica) haciendo x = 2 x o
y nos queda tg =

ln 2

A medida que transcurre el tiempo de cultivo, S va disminuyendo (y por tanto

rx) hasta que finalmente S = 0 (fase estacionaria), y
rx = 0

(19)

lo que implica:
x = cte = xf

(20)

xf = concentracin final de biomasa.

2

 max

Ln X0

tL

tiempo

Si graficamos ln x vs. t se obtiene un grfico como el de la fig.

De la fase exponencial se calcula m mediante la ecuacin (17). La duracin

de la fase lag, t L, se puede calcular del grfico, o bien haciendo una correccin en la
ec. (17).
ln x = ln xo + m (t - tL)
Si tomamos un valor cualquiera de x que corresponda a la fase exponencial,
xe, podemos calcular tL.
l
x
ln e
tL = te m
xo
Consumo de Sustrato
Hemos visto que el rendimiento se defina como y x = por tanto
rs =

rx
yx

(22)

reemplazando en la ec. (22) la ec. (15) queda:

dx
dx / dt rx

ds
ds / dt rs q s

rs =

m
S
.
. x
yx kS S

(23)

A medida que S tiende a cero, r s tambin.

En fase exponencial ser S ks y adems x estar dado por la ec. (18), por tanto:
ds x e
m o
dt
yx

mt

(24)

Si a t = 0 es S = So implica:
S = So -

xo mt
e 1
yx

(25)

La ec. (25) da la variacin de S en funcin de t durante la fase exponencial.

Si se conoce de antemano el rendimiento yx (o Yx) y las concentraciones
iniciales de sustrato y biomasa, es fcil estimar el valor de xf ya que:
x = -Yx . S

(26)

x - xo = Yx (S - So)

(27)

Si S es el sustrato limitante, se tendr que para x = xf ser Sf = 0, por tanto:

xf = xo + Yx. So

(28)

La ec. (27) permite calcular S para un x dado (o viceversa) en cualquier parte

de la curva de crecimiento, siempre y cuando Y x (o yx) se mantenga constante.
Alternativamente la ec. (27) puede emplearse para verificar si tal supuesto se
cumple ya que la grfica de (x - x o) en funcin de (So - S) deber ajustarse a una
recta. De todos modos siempre es posible calcular un rendimiento global,
independientemente de las variaciones que pueda tener durante el cultivo,
empleando slo valores iniciales y finales:
Yx = -

xf xo
Sf S o

(29)

Consumo de O2
Hemos visto que realizando un balance entre la composicin de los gases
que ingresan y salen del biorreactor se puede calcular r O 2 . Con este valor y el de la
concentracin de biomasa, x, se puede calcular a distintos tiempos el valor de
rO
q O 2 2 , con lo cual tendremos una idea de lo que ocurre con la capacidad
x

respiratoria de los microorganismos durante el cultivo. Al respecto es til estudiar

cules son las posibles causas de variacin de q O 2 .

1) Sea yx/o =
consumido

x
t

rO 2 dt

(30)

yx/o

rendimiento

de

biomasa

base

O2

Al igual que en la ec. (21) podemos hacer:

yx/o =

rx

rO 2 q O 2

(31)

de donde reemplazando por la ec. (13)

q O2

m S
y x/ o k s S

(32)

En fase exponencial es S ks y

q O2

m
q O2m
y x/ o

(33)

es decir que en esta fase q O 2 se mantiene constante y con un valor mximo. A

medida que S disminuye, q O 2 tambin hasta que virtualmente se hace nulo en la
fase estacionaria. Esto es particularmente vlido cuando el sustrato limitante es la
fuente de carbono y energa, ya que al agotarse sta, los microorganismos se
quedan sin combustible y por tanto el consumo de O 2 cesa. No ocurre lo mismo
cuando el sustrato limitante es por ej. la fuente de nitrgeno, pues si bien cuando
sta se agote se detendr el crecimiento, nada impide que los microorganismos
sigan respirando ya que cuentan con combustible en exceso.
2) Otra causa que afecta el valor de q O 2 es la concentracin de O 2 disuelto. Por
analoga con la ecuacin de Monod, se ha propuesto la ecuacin:
q O2 q O2 m

C
ko C

(34)

donde C = concentracin de Os disuelto.

Al igual que ks, se encuentra que k o es pequeo, y en general valores de C
del orden de 0,8 mg/l (10% de saturacin) son normalmente suficientes para que
q O 2 = q O 2 m. A la concentracin de O 2 disuelto por encima de la cual el valor de
q O 2 se mantiene constante, se la conoce como concentracin crtica (Cc).