UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PLATA

Ingeniera Bioqumica II . 2006

Segundo cuatrimestre

CULTIVO CONTINUO
De los tres mtodos usuales para el cultivo de microorganismos, batch, batch
alimentado y continuo, es este ltimo el que ofrece mayores posibilidades de control.
Por sus caractersticas especiales permite controlar el proceso a un valor de velocidad
especfica de crecimiento () prefijado de manera muy simple. Este punto es de suma
importancia ya que el comportamiento de la mayora de los microorganismos se ve
afectado por el valor de al que estn creciendo. Por ejemplo, es comn que a altos
valores (cercanos a m) formen diversos productos, siendo la naturaleza de estos
dependiente del microorganismo, mientras que a bajos valores de no los formen.
Mediante el cultivo continuo es posible estudiar el efecto sobre el proceso de
variables como PH, temperatura, concentracin de nutrientes, etc., manteniendo
constante el valor de , o bien, fijadas las anteriores, analizar el efecto de sobre el
proceso. De este modo es posible separar los distintos efectos y obtener informacin
valiosa para la mejora del proceso.
Para poner en marcha un cultivo continuo, se realiza previamente un cultivo
batch y en un momento dado, normalmente cuando se agota el substrato limitante, se
comienza a alimentar el biorreactor con medio de cultivo fresco a un caudal F (Fig. 1).
F, SR

F,S,X,P
X
P

Fig. 1
Mediante un rebalse se logra que el volumen del cultivo permanezca constante.
El caudal de salida contendr clulas, mientras que la concentracin de nutrientes ser
menor que en el caudal de entrada debido a que en parte fueron consumidos por los
microorganismos. Eventualmente se encontrar tambin algn producto(s) proveniente
de la actividad metablica de los microorganismos.

UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PLATA

Ingeniera Bioqumica II . 2006
Segundo cuatrimestre

Una de las variables de operacin fundamental en este tipo de cultivos es la

velocidad de dilucin, D, la que se define como la relacin entre el caudal de
alimentacin, F, y el volumen de cultivo, V.
D

F
V

(1)

Teniendo en cuenta las unidades usuales de F (L. h -1) y de V (L), las de D sern de h -1.
El valor de D corresponde a las veces que se renueva el volumen del biorreactor por
unidad de tiempo, as un valor de D= 0.25 h -1 indica que en una hora se renov un 25
% del volumen de cultivo, o bien que al cabo de 16 hs. se habr renovado cuatro veces
el volumen de cultivo. Podra pensarse que a estas alturas prcticamente ya no quedan
microorganismos dentro del biorreactor, pero no es as; debe tenerse en cuenta que
estos se estn multiplicando activamente lo cual compensa las perdidas debidas a los
microorganismos que son arrastrados fuera del biorreactor por el caudal de salida. Bajo
ciertas condiciones, que analizaremos mas adelante, ambos procesos se compensan de
modo tal que la concentracin de microorganismos se mantiene constante en el tiempo,
es decir que se habr alcanzado un estado estacionario. En estas condiciones tambin
se mantendrn constantes en el tiempo las concentraciones de nutrientes, en particular
la del substrato limitante del crecimiento, y la de producto(s).
Balances de materia:
De acuerdo al esquema de la Fig. 1 podemos plantear los siguientes balances de
materia para la concentracin de microorganismos ( X ) , de substrato ( S ) y de
producto ( P ).
V.

dX
V .r F . X
x
dt

V.

dS
~ V. r
F .S F .S
R
s
dt

V.

dP
V .r F .P
P
dt

(2)
(3)

(4)

Cuando se alcanza el estado estacionario, X, S y P ya no varan con el tiempo,

lo que equivale a igualar a cero las Ecs. (2), (3) y (4), de donde resulta:
r

~
D. X

(5)

~)
r D . (S S
S
R

~
r D.P
P

(6)

(7)

UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PLATA

Ingeniera Bioqumica II . 2006
Segundo cuatrimestre

~, P
~, S
~ representan las respectivas concentraciones en estado estacionario. La
donde X
Ec. (6) es vlida para cualquier nutriente del medio de cultivo, sea el substrato
limitante o no, ya que la misma surge de un balance de materia en el que no se ha
hecho ninguna consideracin con relacin a la naturaleza del substrato considerado.
Lo primero que debe destacarse en este tipo de cultivo es que permite
determinar experimentalmente y de modo muy simple las velocidades de crecimiento,
consumo de substrato y de formacin de producto, tal como se desprende de las Eqs.
(5), (6) y (7). Del mismo modo permite calcular los rendimientos. Por ej. Si
suponemos que S representa a la fuente de carbono y energa, el rendimiento celular se
calcula fcilmente:
~
X
Y

~)
x / s (S S
R

(8)

De modo similar puede calcularse YP/S , o bien las velocidades especficas. Por ej. Para
qs ser:
qS

rS D.(S R S~)

(9)
x
x~

mientras que para la velocidad especfica de crecimiento ser:

~
rX
D. X
~ D
X
X

( 10 )

La Ec. (10) es de suma importancia pues significa que en estado estacionario es = D,

y como D puede ser variado a voluntad por el operador (variable de operacin) resulta
que el cultivo continuo permite imponerle externamente a los microorganismos el
valor de al que deben crecer.
El estado estacionario:
Hemos visto que en estado estacionario es = D, la pregunta que surge
inmediatamente es: cuanto tiempo demora el sistema en alcanzar este estado?. En
rigor, la respuesta surge de la misma definicin de estado estacionario, es decir cuando
todas las variables del cultivo (X, S, P, concentracin de O 2 disuelto y composicin de
la biomasa) no varan en el tiempo. El criterio prctico que se suele seguir es que, una
vez fijado el valor de D, debe esperarse al menos 4. tR (ver clases tericas) , donde tR se
conoce como tiempo de retencin medio y puede demostrarse que :

tR = 1 / D

UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PLATA

Ingeniera Bioqumica II . 2006
Segundo cuatrimestre

Por tanto si se fija un valor de D= 0.15 h-1, habr que esperar 26,7 hs. para suponer que
se ha alcanzado el estado estacionario, lo que deber ser corroborado
experimentalmente midiendo las concentraciones de X, S, P hasta observar que no
varan con el tiempo. Usualmente con 4.tR es suficiente.