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semen
Hospital 12 de Octubre
¿Que es Liq. Seminal ?
Espermatozoides
Suspendidos en secreciones:
testículo
y el epidídimo.
Hospital 12 de Octubre
Los parámetros analizados en el semen reflejan :
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Granvariabilidad biológica:
2 muestras de semen que difieran
entre 1 y 3 semanas.
Si los resultados discrepan seria
necesario una 3º muestra.
Por ser un fluido biológico (sangre, LCR), debe ser tratado con
precaución en el laboratorio, para evitar posibles
contaminaciones (VIH, Hepatitis..)
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Obtención de la muestra
Por masturbación el mismo día del examen
Frasco de vidrio o de plástico atemperado 20- 40 ºC, de boca
amplia
Sólo una eyaculación
Se recomienda: abstinencia de 3-7 días.
Maximizar la calidad de la muestra.
Y reducir la variabilidad
Lo ideal: recoger la muestra en un cuarto cerca del laboratorio.
Evitar choque térmico (20 - 40 ºC).
Entregarlo lo antes posible (1h).
Hacer hincapié:
Evitar la perdida.
Lavarse bien las manos y genitales antes.
No utilizar preservativo ni el coitus interruptus.
Usar frascos estériles.
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Formulario para el paciente
Nombre.
Periodo de abstinencia.
Si toma medicación:
Deberá hacerse hincapié en que informen de si toman
fármacos, enfermedades concomitantes (fiebre), ejercicio
físico intenso y situaciones de estrés.
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La OMS divide el estudio del
semen
Examen básico
1.Examen macroscópico: licuefacción, aspecto, volumen,
viscosidad, pH.
Concentración de esp. y otras células.
Motilidad
Vitalidad. Estudio microscópico
Morfología espermática.
Presencia de aglutinaciones.
Detección de anticuerpos antiespermatozoide unidos a la
superficie esp.
Opcional
Avanzados
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Opcional
Índice de teratosrpermia.
Test hipoosmótico.
Cultivos seminales.
Análisis bioquímico de Líquido Seminal.
Análisis automático de la movilidad espermática.
Test del Hámster.
Avanzados
Test de función espermática:
Especies reactivas de oxígeno.
Swim-up.
Gradientes de densidad.
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1.Examen macroscópico
Licuefacción:
Se licua a temperatura ambiente (15-60 min).
Al recibirla: incubar a 37ºC durante 20-25 min.(1h)
Y agitar (no vortex)
Determinamos si esta licuado.
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1.Examen macroscópico
Aspecto:
Hospital 12 de Octubre
1.Examen macroscópico
Volumen:
Para medirlo:
Tubo graduado de 15 ml, cónico, tipo Falcon, con tapa
hermética,
testado para tóxicos celulares.
Volumen referencia: > 2ml
V < 2ml: hipospermia u oligospermia.
Cuando existe orgasmo y no eyaculación tras la masturbación
nos encontramos ante una aspermia (ausencia de eyaculado)
Aspermia sospecharemos de una eyaculación retrógrada.
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Protocolo para el estudio de los espermatozoides
de los pacientes con eyaculacion retrógrada
El día de la recogida:
Orina, mide osmolaridad y pH.
Seguidamente se toma 4 gramos o 2 cucharadas soperas de
bicarbonato sódico, y agua ½ litro, 750 ml diabéticos.
Se espera, recoge orina: osmolaridad de 350-400 miliosmol/Kg y
pH 7.2-8.
Entonces se recoge orina postorgasmo en frasco con medio de
cultivo.
Hacemos alícuotas, centrifugo 600g, 8 minutos y procedimiento
habitual.
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1.Examen macroscópico
Viscosidad
Diferenciarlo licuefacción
Cogeremos una pipeta Pasteur con semen y dejaremos
caer su contenido
Valor de referencia: gotas,
o se forme un filamento < 2cm.
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1.Examen macroscópico
pH
pH: ác
infección
pH <7.2 + azoospermia,
sugiere obstrucción de conductos
eyaculadores o agenesia bilateral
de deferentes
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2.Motilidad espermática
Tipos de motilidad:
Tipo a: movilidad rápida y progresiva, > 25 micrometros/seg a
37ºC, 5 veces la cabeza en 1 segundo.
Tipo b: movilidad progresiva lenta o perezosa
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2.Motilidad espermática
10 microlitros
Porta atemperado 37ºC Tipo a: 3%
Se deja estabilizar unos 60 seg. Tipo b: 32%
Tipo c: 5%
Observamos a 100 aumentos Tipo d: 60%
muestra homogénea.
A continuación pasamos a 400 X con contraste de fase.
Contamos, 1º los móviles tipo a y b,
y a continuación los c y d.
Tipo a: 3 y 20%
Tipo b: 32 y 40%
Tipo c: 5 y 5%
Tipo d: 60 y 35%
M: 47.5%
D:25%
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2.Motilidad espermática
En el momento de la valoración, pueden surgir inconvenientes:
Las colas sueltas no se cuentan.
Método alternativo:
ASAC, CASA: incluye el análisis de espermatozoides asistido por
computadora
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3.Vitalidad espermática
Nos permite evaluar los espermatozoides vivos.
Según la OMS se estudiaría cuando la < 50% movilidad
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4.Aglutinaciones y agregaciones
Aglutinación: visualización de espermatozoides móviles unidos por las
cabezas, colas, cabeza-cola.
Agregación: unión de esp. a espermatozoides inmóviles, generalmente
muertos, a otras cél, a restos, fibras mucosas.
La presencia de aglutinaciones:
sugiere presencia de anticuerpos,
causa inmunológica de infertilidad,
infección,
aparece con + frecuencia en eyaculados
hiperconcentrados.
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5.Morfología espermática
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Criterios de la OMS 1999
Cabeza Forma Ovalada
Acrosoma Bien definido, ocupé
40-70% de la cabeza
Longitud 4-5micras
Anchura 2.5-3.5 micras
Pieza intermedia Longitud 1.5 * L cabeza
Anchura < 1 micra
Forma Delgada unida
axialmente a la cabeza
Flagelo Recto, uniforme, + delgada P intermedia.
Desenrollado. 45 micras
Restos citoplasmáticos < 1/2 cabeza
en la pieza intermedia
Valores limitantes Se consideran anormales
% de normalidad > 15% para FIV
Morfología anómala.
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6.Concentración espermática
Valor de referencia: > 20 millones /ml.
Para medir la concentración espermática la OMS recomienda:
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6.Concentración espermática
Hemocitómetro: cámara de NEUBAUER Improved.
Makler, Microcell.
M de contraste de fases (200 a 400x)
Solo espermatozoides completos.
Se debe de realizar por duplicado
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Si contamos:
230 espermatozoides
Dilución 1:20
Hemos contado 10 cuadros
Factores de conversión
Nº de cuadrados grandes contados
Dilución 25 10 5
1:5 20 8 4 230/2= 115 millones/ml.
1:10 10 4 2
1:20 5 2 1
1:50 2 0.8 0.4
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7.Cel redondas
Cél epiteliales, las de la espermatogénesis y leucocitos.
C = (N x S)/100
N = 10 células inmaduras 100 espermatozoides contados
S = 20 millones de espermatozoides/ml
C = (10 x 20) /100 =2 millones de células/ml
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↑ leucos, son indicativos de infección (cultivo), y mala calidad
espermática.
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Resumiendo
Normalidad Anomalía
Volumen > 2ml Aspermia:ausencia de
eyaculado
Hipospermia <2ml
Viscosidad < 2cm
Licuefacción Completa
pH > 7.2
Concentración esp > 20 millones esp/ml
Nº esp eyaculados > 40millones esp
Movilidad > 50% tipo a+b Astenozoosspermia
Morfología < 15% anormales FIV Teratozoospermia
Vitalidad > 75% de formas no
teñidas
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Estudio de post-vasectomías
Solo determinaremos el volumen, pH <7, recuento.
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Técnicas de recuperación
1.SWIM-UP
espermática
Técnica de selección que se basa en la capacidad de los espermatozoides
con movilidad progresiva para desplazarse en un medio de cultivo adecuado
Se recuperan menos pero más móviles
lavamos
Centrifugación Lo dejamos a 37ºC
Elimino
10 min, 500g sobrenadante
Desde 30- 90 min
botón
REM
Recupero el
sobrenadante Se hace recuento
espermático
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Técnicas de recuperación
espermática
2. Gradientes de densidad
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8.Anticuerpos antiespermatozoides
(AAE)
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• Efectos:
• Aglutinación
• Efecto citotóxico
• Dificultad de paso a través del moco cervical y la unión y
penetración de la zona pelúcida
• Tipos:
• Ig G: por trasudación desde la sangre
• Ig A: producidas por las células inmunológicas afincadas en el
tracto genital
• Pruebas para la detección de AAE adheridos a la
membrana espermática:
IBT
• •IBT -Identificar presencia de AAE
-Caracterizar los isotipos
MAR
• •MAR
-Cuantificar la respuesta inmune
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MAR: IBT:
•Partículas
de látex •Matriz de poliacrilamida
•Empleo de semen •Lavado previo del semen
completo
Cálculos y resultados:
• Contar al menos 200 espermatozoides móviles
• Resultado expresado en % de espermatozoides móviles que
llevan partículas unidas
• Cuando > 50% se considera que existe factor inmunológico
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Parámetros bioquímicos:
interpretación práctica
Semen: suspensión de células reproductivas en un
líquido complejo llamado plasma seminal
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Próstata:
Próstata
• ubicación: debajo de la vejiga urinaria
• produce una secreción opaca blanquecina
• pH ácido (pH: 6.2-6.8)
• 30% del volumen total
• Secreciones:
• Ác. cítrico
• fosfatasa ácida
• Espermina
• Albúmina
• Zn…
• Función:
• Liquefacción
• Movilidad espermática
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Vesículas seminales:
• Situación: detrás de la próstata
• Secreción opalescente viscosa ligeramente
amarillenta
• 60% del volumen total
• pH alcalino
• Secreciones:
• Fructosa
• PG
• Lactoferrina
• Bicarbonato
• Fibrinógeno
• Función:
• Producción de ATP
• Motilidad y viabilidad
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Epidídimos:
dimos
• Lleva espermatozoides de los testículos a los vasos
deferentes
• Mide 3.8 cm de longitud
• Dividido en:
• Cabeza
• Cuerpo
• Cola
• Secreción:
• Alfa glucosidasa
• Carnitina
• Función: Maduración de los espermatozoides.
• Tránsito: 10 – 14 días
• Almacenamiento: 1 mes
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Cambios del espermatozoide en el epidídimo:
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Glándula de Littré:
• Localización: mucosa uretral posterior
• Producción de un líquido mucoso
Glándulas de Cowper:
• Localización: debajo de la próstata
• Secreción alcalina
• Secreciones:
• Mucoproteinas
• Galactosa
• Ác. oxálico
• Funciones:
• Limpia la uretra
• Lubrica la mucosa uretral
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Distribución de los marcadores bioquímicos del plasma
seminal en eyaculación fraccionada
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• A pesar de la gran cantidad de sustancias presentes,
ninguna aporta mayor información que el análisis
directo del número y características funcionales del
espermatozoide
• Algunos parámetros bioquímicos representativos de la
función de las principales glándulas son suficientes
para diagnosticar los principales síndromes asociados
a la infertilidad masculina
• OMS: Zn, fructosa, α- glucosidasa
• Medición del pH y del volumen seminal
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•Función de las vesículas seminales:
-Fructosa
-Fructosa corregida
•Función de la próstata:
-Ácido cítrico
-Zinc
-Fosfatasa ácida
•Función del epidídimo:
-Alfa glucosidasa
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Marcadores bioquímicos de la
maduración espermática
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Maduración testicular:
• ROS : producción de radicales libres de oxígeno
• Cociente de isoformas de CK :
CK-MM
CK-BB + CK-MM
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• Hiperactivación espermática :
Cambios en el patrón
de motilidad:
VSL ⇒ VCL y ↑ AHL
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Control de calidad en el estudio
espermático
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CC analítico interno:
- Distribución aleatoria
Imprecisión
de los espermatozoides
- Error de contaje:
Uso de ↓ nº de espermatozoides
representativos
Inexactitud
Cansancio del técnico,
materiales en condiciones no idoneas...
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1-5% de las muestras trabajadas → CC interno:
- Nivel intra-individual: realizar todas las muestras por
duplicado. Si la diferencia es mayor que el error de contaje
establecido, rechazar la medición.
- Nivel del observador: instruir al nuevo personal realizando
mediciones en paralelo hasta que no existan desviaciones
sistemáticas
- Seguimiento continuo de los resultados mediante el
procesamiento de especímenes conocidos:
• material de control
• muestras de pacientes
• vídeos…
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CC externo:
• CC interno y externo complementarios
• Analizar las muestras de CC externo como si
fueran muestras de rutina
• Muestras que abarquen la totalidad del rango
clínico
- concentración: 3-30 mill/mL
- movilidad: 10-40%
- morfología: < 20% de formas normales
• Muestras procedentes de varones seronegativos
para VIH y hepatitis
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CC biológico:
• Asegura la viabilidad de los espermatozoides que se
usarán en FIV…
• CCB interno: aseguran el adecuado funcionamiento
e inocuidad de los aparatos y materiales:
• Tª: estufas, incubadores…
• [CO2]
• Humedad
• Toxicidad de medios de cultivo, pipetas…: test de
supervivencia espermática o test de los embriones de
ratón
• CCB externo: evalúan la capacidad del laboratorio
para detectar materiales y medios tóxicos para el
espermatozoide
Hospital 12 de Octubre
Muchas gracias por
escucharnos.
Hospital 12 de Octubre