Monitorizao de Bioprocessos

Monitorizao de Processos Biolgicos:

I. Monitorizao in-situ e on-line da Concentrao Celular
em Bioprocessos Industriais
Andr A. Neves1 , Lisete S. Pinto1 , Luis M. Vieira1 ,
J. Cardoso de Menezes2,* .
1

CIPAN SA, Vala do Carregado, P-2601-906,

Alenquer, Portugal
2
Centro de Engenharia Biolgica e Qumica, IST,
Av. Rovisco Pais, P-1049-001 Lisboa, Portugal
* E-mail: cardoso.menezes@ist.utl.pt
Internet: http://bsel.ist.utl.pt

Resumo
Descreve-se a quantificao in-situ e em-linha (on-line)
da concentrao de biomassa vivel em bioreactores
industriais, por espectroscopia dielctrica. O princpio do
mtodo baseia-se na medio da capacitncia do meio de
cultura, atravs de uma sonda colocada in-situ no
bioreactor, a qual se correlaciona com a concentrao de
clulas no-lisadas (viveis). Neste artigo, descreve-se a
utilizao da tcnica em bioprocessos e apresentam-se
resultados da sua implementao industrial na
monitorizao de processos de produo de antibiticos
numa empresa farmacutica em Portugal.

1. Introduo
A concentrao de biomassa uma das variveis
fundamentais num processo de fermentao e
simultaneamente uma das mais difceis de medir,
conforme atestam as mais de 20 revises bibliogrficas
publicadas nos ltimos 25 anos sobre este assunto (vide
Harris e Kell, 1985; Reardon e Scheper 1991). De facto,
qualquer estratgia racional de investigao ou de
desenvolvimento de bioprocessos (e.g., formulao de
meios cultura, optimizao das condies operatrias,
estudos de aumento de escala), exige o conhecimento da
concentrao de clulas viveis presentes no meio de
cultura (Gaden,1959). O clculo de taxas especficas
i.e., referidas quantidade de biomassa presente como a
taxa especfica de crescimento, de respirao, ou de
consumo ou produo de determinado metabolito, permite
comparar entre si diferentes ensaios laboratoriais e batchs
industriais de determinado bioprocesso, mesmo que
conduzidos em condies diferentes. Por exemplo,
possvel modificar um bioprocesso para obter diferentes
produes de determinado metabolito, quer atravs de

20 Boletim de Biotecnologia

diferentes concentraes celulares, quer atravs de

diferentes taxas especficas de produo, ou ainda da
combinao de ambas. Se no fr conhecida a
concentrao de clulas presentes no possvel
determinar se os resultados obtidos so consequncia de
maiores actividades metablicas para o produto
pretendido ou simplemente de maiores concentraes
celulares. A necessidade de dispr de tcnicas de
monitorizao da concentrao de biomassa vivel
assim evidente (Reardon e Scheper, 1991, Krairak et
al.1999).
Na Tab. 1 resumem-se alguns dos mtodos mais
conhecidos e utilizados em condies controladas i.e., culturas escala laboratorial ou baixas
concentraes
celulares
ou
meios
definidos
quimicamente. No entanto, a generalidade destes
mtodos fornece apenas uma indicao pouco exacta da
verdadeira concentrao celular, em condies reais i.e., na presena de substratos parcialmente insolveis,
culturas de microorganismos filamentosos, ou em caso
de lise celular intensa. Todos estes factores so
caractersticos de bioprocessos industriais, e constituem
alis as principais razes da viabilidade tcnica e
econmica de processos como a produo de
antibiticos por fermentao. Estes processos utilizam
substratos complexos parcialmente insolveis (e.g.,
produtos ou sub-produtos da indstria agro-alimentar),
microorganismos com uma morfologia filamentosa ou
em agregados densos em cultura submersa (e.g.,
Streptomycetes ou Penicillyum), e concentraes
elevadas de biomassa a qual no fim dos processos se
encontra significativamente lisada e inactiva. Todos
estes factores interferem com medidas comuns como a
fraco compactada de clulas ou de miclio (PCV ou
PMV) e as determinaes da biomassa total em base
seca (peso seco DW ou peso seco de clulas, DCW); ou
mesmo com medidas mais sofisticadas como as obtidas
com tcnicas espectroscpicas baseadas na medio da
fluorescncia de compostos intracelulares, uma vez que
a maioria dos substratos complexos so tambm
fluorforos fortes.
Assim, em processos de fermentao industriais so
utilizados quase sempre em simultneo mais do que um
dos mtodos referidos na Tab. 1, de modo a que
conjugando os resultados de vrias medidas se possam
monitorizar a biomassa de forma semi-quantitativa nas
vrias fases de cada processo. Contudo, nenhum destes
mtodos utilizado in-situ, e s em processos aerbios,

Monitorizao de Bioprocessos

Tabela 1. Mtodos mais comuns de monitorizao da concentrao

celular.
Tipo

Mtodo

mtodos
qumicos

doseamento espectrofotomtrico ou qumico de constituintes da

clula, viz., DNA, RNA, ATP ou fosfolpidos
gravimtrico, biomassa em base seca (DCW)
centrifugao, fraco volumtrica de miclio compactado (PMV)
pticos em-diferido, viz., densidade ptica (D.O.)

mtodos
fsicos

espectroscpicos em-linha e in situ (fluorescncia) atravs da

concentrao intracelular de NADH e NADPH
anlise de imagens digitais, utilizando luz visvel e marcadores
moleculares (epifluorescncia)
espectroscopia dielctrica em-linha e in situ

O principal objectivo deste artigo ,

pelas razes anteriores, o de divulgar
uma tcnica que pode ser aplicada
num grande nmero de problemas
biotecnolgicos e.g., em digestores
anaerbios
em
estaes
de
tratamento
como
ETARs

apresentando para isso dados de

implementaes industriais na rea
farmacutica da produo de
antibiticos por fermentao.
Iniciamos com este trabalho uma
srie de quatro artigos dedicados
monitorizao da concentrao
celular em processos industriais de
produo
de antibiticos, com
tcnicas pouco divulgadas ou que
para as quais so desconhecidas
aplicaes industriais em Portugal.

contagem de clulas (viz., contador de Coulter)

medio da viscosidade aparente do meio de cultura
mtodos
inferenciais

mtodos de inferncia com modelos matemticos ou

estequiomtricos, viz., a partir da taxa de consumo de O2 ou de
produo de CO2, em processos aerbios

* Harris e Kell (1985) e Reardon e Scheper (1991)

atravs da tcnica de anlise das concentraes e O2 e

CO2 no ar exausto, se consegue obter indirectamente a
quantidade total de biomassa vivel num bioprocesso em
condies industriais, em tempo real e em-linha com o
processo (i.e., on-line, de modo automtico e sem a
interveno de um analista). A anlise computacional de
imagens digitais obtidas em-diferido (off-line) mesmo
sendo possvel junto do processo (i.e., at-line, permitindo
obter resultados em tempo til, ou seja, escala dos
tempos de resposta do prprio processo) requer a
interveno de um analista especializado.
H cerca de 10 anos surgiu uma nova tcnica, baseada na
espectroscopia dielctrica, que capaz de operar em
condies industriais de modo automtico por longos
perodos de tempo, in-situ e em-linha, apresentando a
especificidade necessria para a biomassa vivel, mesmo
na presena de meios de cultura complexos e de clulas
lisadas (Fehrenbach et al., 1992; Sarra et al., 1996).
Dado o preo relativamente elevado (ca. 50.000 para
um sistema simples de uma sonda) e o facto de ser uma
tcnica dedicada monitorizao de um nico parmetro
em condies que s quase exclusivamente ocorrem em
bioprocessos industriais, a sua adopo tem sido quase
exclusiva de grandes empresas farmacuticas. Em
Portugal, em particular, desconhece-se a existncia deste
tipo de tcnica de monitorizao em qualquer centro de
investigao pblico, ou mesmo em qualquer outra
empresa da rea biotecnolgica.

2. Monitorizao de
Bioprocessos com
Espectroscopia
Dielctrica

Harris et al. (1987) verificaram que

na gama das frequncias rdio (0.1-10 MHz) a
membrana celular comporta-se com um capacitor
elctrico, polarizando-se pelo chamado efeito de
disperso- e que a intensidade da polarizao
proporcional ao volume da clula. Assim, a
monitorizao em-linha da capacitncia de um meio de
cultura, utilizando uma sonda adequada, pode ser
directamente relacionada com a concentrao celular
(Kell et al., 1990). Nos estudos realizados por
laboratrios de investigao em diversas universidades
com o Biomass Monitor , um dos aparelhos no
mercado, verificou-se que as medidas no so afectadas
pelo teor de insolveis ou por variaes no hold-up
gasoso do meio de cultura, e que desde que a biomassa
morta esteja lisada, as medidas com este tipo de tcnica
correspondem quantitativamente concentrao de
clulas viveis (Fehrenbach et al., 1992; Sarra et al.,
1996; Krairak et al.,1999).
Neste trabalho comparam-se os resultados da
monitorizao in-situ e em-linha com uma sonda de
capacitncia com os resultados obtidos com mtodos
usuais (biomassa seca, fraco volumtrica compactada
de clulas, viscosidade, concentrao de DNA e a
quantidade total de CO2 respirada) em condies de
cultura industriais de produo do cido clavulnico
com o Streptomyces clavuligerus.

Boletim de Biotecnologia

21

Monitorizao de Bioprocessos
10

Biomass Monitor . As frequncias baixa e alta

utilizadas foram 0.4 e 10 MHz, respectivamente.

15

10

6
4
TOT CO
2
Cap
Cond

2
0

Cap (pF);

14
(b)
12
Conductance (mS)

TOTCO (g/L)

4. Resultados e Discusso

10
10

8
6
4
TOT CO
2
Cap
Cond

2
0
-2

20

Para efeitos de calibrao do Biomass Monitor em

unidades de concentrao, realizaram-se fermentaes
com um meio de cultura solvel (Neves et al., 2000),
tendo-se obtido a relao linear cap (pF) =
(0.460.05) DCW (gL-1) vlida at ca. 20 gL-1 de
DCW, o valor mximo de DCW obtido naquelas
experincias ( 95% confidence intervals, r = 0.998).

15

TOTCO2 (g/L)

Cap (pF);

Conductance (mS)

(a)

40

60

80 100 120 140

Time (h)

Figura 1. Perfis da capacitncia (cap), condutncia e quantidade

total de CO2 produzida, medidas em linha em culturas de S.
clavuligerus. (a) com meio solvel. (b) com meio industrial
insolvel.

3. Materiais e Mtodos
Em Neves et al. (2000) encontra-se uma descrio de
todos os mtodos e condies experimentais utilizadas.
Em seguida, apresenta-se apenas uma descrio sumria
das condies em que foi utilizada a tcnica baseada em
espectroscopia dielctrica.

A seguir apresentam-se os resultados da monitorizao

da concentrao celular de S. clavuligerus, em
bioreactores piloto-industriais de 500 litros, com dois
meios de cultura complexos: o primeiro solvel,
contendo peptona, e o segundo, o meio utilizado
industrialmente, parcialmente insolvel.
A partir da actividade respiratria da cultura medida
em-linha com analisadores de O2 e CO2 dedicados, foi
possvel observar e definir as diferentes fases pelas
quais passa a cultura: adaptao, crescimento
exponencial, transio, crescimento linear (fase de
produo) e lise (Neves et al., 2000). Foi possvel
definir tambm a quantidade cumulativa (i.e., integral)
de CO2 produzido pela cultura desde o instante de
inoculao (TOTCO2). A Fig. 1 mostra os perfis de
TOTCO2 e das medidas obtidas com a sonda de
capacitncia viz., cap e condutncia em ensaios
com os dois meios de cultura referidos. Observa-se uma
correlao razovel entre cap e TOTCO2 na fase
exponencial (i.e., at ca. 20 h para o meio solvel e ca.
25 h para o meio industrial), descrita pela equao na
Tab. 2. A variao observada na condutncia do meio

Utilizou-se o instrumento Biomass Monitor , modelo

214 (Aber Instruments, Aberystwyth, UK), na verso
dual-frequency
(0.2-1.0
MHz e 10MHz). As
Tabela 2.
Relaes lineares entre as medidas de capacitncia dos
medidas foram realizadas
meios de cultura e as de outras medidas da concentrao de biomassa .
com
uma
sonda
de
capacitncia
inserida
directamente no bioreactor
Meio de Cultura
Equao*
Validade
atravs de uma porta
standard tipo Ingold de 25
cap = (0.83 0.02) x TOTCO2 + (0.00 0.04)
fase exponencial
r=0.997
mm de dimetro localizada
cota aproximada do 1
cap = (0.510.02) x DCW (1.10.4)
solvel
fases exponencial,
r=0.980
andar de agitao. A
(peptona)
de transio e linear
esterilizao da sonda foi
cap = (11.6 0.7) x DNA (0.8 0.3)
realizada in-situ. Todas as
fase exponencial
r=0.996
medidas foram realizadas
em modo low-range com o
cap = (1.13 0.02) x TOTCO2 (2.65 0.09)
fase exponencial
filtro low-pass ligado. A
r=0.999
parcialmente
capacitncia (cap) e a
insolvel (industrial)
conductncia foram medidas
cap = (9.8 0.5) x DNA (1.5 0.1)
fase exponencial
r=0.996
em-linha
com
uma
frequncia de 0.2 min -1
atravs de um sistema de
* ( desvio padro, intervalos de confiana a 95%)
aquisio de dados ligado ao

22 Boletim de Biotecnologia

Monitorizao de Bioprocessos
de cultura nas duas experincias, inferior ao valor limite
de 20 mS, tornando desprezvel o seu efeito sobre a
capacitncia medida.

Uma outra varivel que habitualmente medida

industrialmente, por se ter constatado empiricamente que
est relacionada com a concentrao de biomassa, a
viscosidade aparente do meio de cultura. Diversos autores
mostraram que a viscosidade aparente constitui um meio
aceitvel para estimar a concentrao de biomassa em
culturas de miclio, na ausncia de outras medidas (Perley
et al., 1979; Sarra et al., 1996). A Fig. 4 mostra que de
facto esta medida pode ser utilizada semiquantitativamente para descrever a concentrao de
biomassa vivel presente durante todo o processo e nos
dois tipos de meios de cultura (Tab. 2). A divergncia
observada na fase final do ensaio com o meio industrial

15

6
10

4
2

D.C.W. (g/L)

Cap (pF)

20

14
12

(b)
(b)

30
25
20

8
6

15

4
2

10
5

D.C.W. (G/L)

Cap (pF)

10

0
0

20

40

60

80 100 120 140

Time (h)

Figura 2. Perfis da capacitncia (cap) e da concentrao em

base seca (DCW) em culturas de S. clavuligerus. (a) com meio
solvel. (b) com meio industrial insolvel. (barras de erro
para 95% de confiana)

10

35

(a)
30

20
15

10

p.m.v (%v/v)

25

20
18
16
14
12
10
8
6
4
2
0

60

(b)
50
40
30
20

p.m.v (%v/v)

Na Fig. 3 representam-se os perfis da fraco volumtrica

de miclio compactado (PMV) e da capacitncia para os
dois meios de cultura. Embora se observem tendncias
globais semelhantes entre as medidas nos dois casos,
verificam-se desvios significativos mesmo entre os
resultados obtidos com o meio solvel. As alteraes de
morfologia observadas no microorganismo durante o
processo e a presena de insolveis permitem explicar
estes desvios. Assim, ao contrrio da medidas de TOTCO2
e de DCW, a monitorizao baseada em medidas de PMV
no chega a ser semi-quantitativa, podendo apenas
considerar-se uma medida qualitativa aproximada do
crescimento da cultura.

25

Capacitance (pF)

Para a cultura com o meio industrial observa-se que as

duas medidas anteriores diferem significativamente (Fig.
2b). As medidas de DCW so insensveis ao crescimento
de biomassa at ao fim da fase exponencial, devido
presena de substncias insolveis em quantidades
elevadas (cf. Fig. 2a e 2b), enquanto que nas fases de
crescimento seguintes, verificam-se tendncias de
variao semelhantes nos perfis das duas medidas. Este
ltimo resultado novamente consistente com a
observao, por anlise digital de imagem (Pinto, 1999),
de que neste processo com o meio industrial a
percentagem de clulas viveis normalmente muito
elevada (> 90%).

(a)

10

Capacitance (pF)

Na Fig. 2a) comparam-se as medidas de capacitncia

feitas em-linha com os valores da concentrao de
biomassa em base seca (DCW) realizadas em-diferido,
verificando-se uma correlao elevada entre os dois tipos
de medidas at s 80 h de fermentao (Tab. 2). Este
resultado explica-se com o reduzido teor de matria em
suspenso no ensaio com o meio solvel e com o facto da
concentrao de biomassa morta ser baixa. Na verdade,
observa-se que a viabilidade da cultura (% clulas
viveis) a esta idade do processo , em geral, superior a
90% (Pinto,1999). A concordncia entre cap e DCW
verificada consistente com a observada por Sarra et al.
(1996) e por Fehrenbach et al. (1992) que estudaram a
cultura de Streptomycetes em meios definidos solveis.

30

14
12

10
0

20 40 60 80 100 120 140

Time (h)

Figura 3. Perfis da capacitncia (cap) e da fraco

volumtrica de miclio compactado (PMV) em culturas de S.
clavuligerus. (a) com meio solvel. (b) com meio industrial
insolvel. (barras de erro para 95% de confiana)

(Fig. 4b) provavelmente o resultado das alteraes

morfolgicas (viz., fragmentao) que so observadas
neste perodo (Pinto, 1999).

Boletim de Biotecnologia

23

Monitorizao de Bioprocessos
Por ltimo compararam-se as medidas da concentrao
intracelular de DNA com as medidas da sonda de
capacitncia inserida no meio de cultura. Observa-se a
12

500
400
300

6
200

4
100

Cap (pF)

16
14
12
10
8
6
4
2
0

800
(b)

600
500
400
300
200
100
0

20 40

60 80 100 120 140

Time (h)

Figura 4. Perfis da capacitncia (cap) e da viscosidade

aparente, em culturas de S. clavuligerus. (a) com meio solvel.
(b) com meio industrial insolvel. (barras de erro para 95% de
confiana)
1.0

(a)

0.8
0.7

0.6
0.5

0.4

0.3
0.2

0.1

Cap (pF)

0.0

14 (b)
12
10
8
6
4
2
0
-2
0 20 40 60 80 100 120 140

DNA concentration

Cap (pF)

(A
)
600nm

0.9

10

Demonstrou-se a utilizao em condies industriais de

uma nova tcnica de monitorizao da concentrao
celular, baseada em princpios da chamada
espectroscopia dielctrica.

Apesar de se terem obtido em determinadas fases do

processo, para a maioria destas medidas, boas relaes
lineares com a capacitncia do meio de cultura,
nenhuma das tcnicas habitualmente utilizadas
industrialmente permite monitorizar a concentrao de
clulas viveis ao longo de todo o processo.
Embora apenas se tenham apresentado resultados
escala de 0.5 m3 , nos ltimos 2 anos a tcnica tem sido
aplicada na CIPAN S.A. na monitorizao da
concentrao celular em bioreatores industriais com 25
m3 e 40 m3 com sucesso assinalvel (Pinto et al., 2000).
No futuro, nestes processos podero substituir-se as
tcnicas de monitorizao em-diferido pela tcnica emlinha descrita, permitindo a implementao de
estratgias de investigao, desenvolvimento e
operao dos bioprocessos mais exactas, reprodutveis e
rpidas.
Agradecimentos

1.4
1.2
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0.0

Time (h)

Figura 5. Perfis da capacitncia (cap) e da concentrao

intracelular de DNA em culturas de S. clavuligerus. (a) com meio
solvel. (b) com meio industrial insolvel. A sonda de
capacitncia testada permite monitorizar in-situ e em-linha a
concentrao celular, fornecendo com exactido, de modo
automtico e em condies industriais a concentrao de
biomassa no-lisada (vivel).

24 Boletim de Biotecnologia

Compararam-se as medidas obtidas com uma sonda de

capacitncia a operar segundo aquele princpio, com as
medidas que tipicamente so possveis realizar em
ambiente industrial (DCW, PMV, viscosidade,
concentrao de DNA e a produo cumulativa de CO2
pela cultura).

1.6

DNA concentration ( A600 nm )

12

Concluso

700

Apparent viscosity (cp)

Cap (pF)

Apparent viscosity (cp)

(a)

10

existncia de correlao entre os dois tipos de medidas

nas fases de adaptao e exponencial (Fig. 5 e Tab. 2).
Durante a fase exponencial as generalidade das clulas
so viveis e possuem como seria de esperar uma
concentrao intracelular aproximadamente contante
em DNA. Por isso os dois tipos de medidas so
directamente proporcionais e observada a relao
linear da Tab. 2.

Este trabalho foi parcialmente financiado pelo

Programa PRAXIS XXI atravs da Agncia de
Inovao (projecto FASTERPROD, L009-P31B-09/96).
AAN agradece Fundao para a Cincia e a
Tecnologia o financiamento da bolsa que teve tambm
pelo programa PRAXIS XXI (FCT-BMCT/96/
12352). Os autores agradecem CIPAN S.A. o apoio
dado ao projecto e a autorizao para publicar os
resultados anteriores. Os autores agradecem ainda a
colaborao da ABER Instruments (http://www.aberinstruments.com/) tanto no incio do trabalho,
permitindo atravs do aluguer de um aparelho realizar
os pr-testes necessrios, como posteriormente sua
aquisio o apoio dado na utilizao eficaz do Biomass
Monitor

Monitorizao de Bioprocessos
Smbolos e Abreviaturas
cap

Capacitncia do
meio de cultura

PF (pico Faradays)

DCW

Biomassa em base
seca

g-peso seco .L-meio

de cultura-1

PMV

Fraco volumtrica
de miclio

% v/v

TOT CO2

Quantidade total ou
cumulativa de CO 2
produzida at ao
instante t

mmoles CO2. L-meio

de cultura-1. h -1

Bibliografia
Fehrenbach, R., Comberbach, M. and Ptre, J.O. (1992) On-line
biomass monitoring by capacitance measurement, J. Biotechnol.
23, 303-314.
Gaden, E.L.,Jr. (1959) Fermentation kinetics and productivity. J.
Biochem. Microbiol. Technol. 1(4),413-429 (reprinted in
Biotechnol. Bioeng. 2000, 67(6),629-635).
Harris, C.M., Kell, D.B., 1985, "The Estimation of Microbial
Biomass.", Biosensors 1,17-84.
Harris, C.M., Todd, R.W., Bungard, S.J., Lovitt, R.W., Morris,
J.G. and Kell, D.B. (1987) Dielectric permitivitty of microbial
suspensions at radio frequencies. a novel method for the realtime estimation of microbial biomass. Enzyme Microb. Technol.
9, 181-186.
Kell, D.B., Markx, G.H., Davey, C.L. and Todd, R.W. (1990)
Real-time monitoring of cellular biomass: methods and
applications. Trends Anal. Chem. 9, 190-194.
Krairak, S., Yamamura, K., Nakajima, M., Shimizu, H. and
Shioya, S. (1999) On-line monitoring of fungal cell
concentration by dielectric spectroscopy. J. Biotechnol. 69(2-3),
115-123.
Neves, A.A., Pereira, D.A., Vieira, L.M., Menezes, J.C., Realtime Monitoring Biomass Concentration in Streptomyces
clavuligerus Cultivations with Industrial Media Using a
Capacitance Probe, J. Biotechnol. 2000,84(1),45-52.
(http://bsel.ist.utl.pt/publications/).
Perley, C.R., Swartz, J.R. and Cooney, C.L. (1979)
Measurement of Cell Mass Concentration with a ContinuousFlow Viscometer. Biotechnol. Bioeng. 21,519-523.

Reardon, K.F. and Scheper, T.H. (1991) Determination of

Cell Concentration and Characterization of Cells. in
Measuring, Modeling and Control., vol. 4, pg. 179-223, Ed.
K. Schgerl, 2nd ed., in Biotechnology, Eds. H.J. Rehm, G.
Reed, VCH, Germany.
Sarra, M., Ison, A.P. and Lilly, M.D. (1996) The relationships
between biomass concentration, determined by a capacitancebased probe, rheology and morphology of Saccharopolyspora
erythraea cultures. J. Biotechnol. 51,157-165.

Bionotcias (continuao da pgina 19)

Congresso sobre Genmica e Protemica
(as tecnologias que esto a revolucionar as Cincias da
Vida)
Oeiras (Edifcio ITQB/IBET), 4 de Maio 2001
Data limite de inscries: 27 de Abril de 2001
Informaes:
Gonalo Carneiro, STAB, Lda
e-mail: carneiro@stabvida.com
Tel. 214469765
Fax: 214469740
Jornadas Tcnicas FIOVDE2001
Tomar, 24 e 25 de Maio de 2001
Informaes:
FIOVDE Federao das Indstrias de
leos Vegetais, Derivados e Equiparados
Av. Antnio Jos de Almeida, n 7 2
1000-042 Lisboa
Tel. 217991550
Fax. 217991551
e-mail: fiovde@fiovde.pt
Conferncia Internacional sobre Biotecnologia
Informar para Decidir
Auditrio 1 AIP, Parque das Naes
Lisboa, 24 e 25 de Maio de 2001
Informaes:
e-mail: iaca@mail.telepac.pt
Tel. 213525091
Fax. 213530387
(continua na pgina 27)

Pinto, L.S. (1999) Morphological and viability characterization

of Streptomyces clavuligerus by digital image analysis in
industrial culture media. Tese de Mestrado (107 pp, ingls),
Universidade
Tcnica
de
Lisboa
(http://bsel.ist.utl.pt/publications/).
Pinto, L.P., Vieira, L.M., Menezes, J.C., An Overall
Stoichiometric Model for the Industrial Production of
Demeclocycline. 3rd European Symposium on Biochemical
Engineering Science, (J. Nielsen et al., Eds.), Copenhagen
(Denmark),
pg.
318,
September
10-13,
2000
(http://bsel.ist.utl.pt/publications/).

Boletim de Biotecnologia

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