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Prevención de la salud

Los análisis de sangre

son una herramienta
diagnóstica muy
útil en la Clínica
Veterinaria. La
fiabilidad de un análisis
y su interpretación
dependen en gran
medida de la calidad
de la muestra que
se analiza o que se
envía al laboratorio. El
manejo adecuado de
las muestras desde
que se obtienen hasta
que realizan los análisis
es fundamental para

Procesado
no obtener resultados
erróneos.

de muestras
Repasaremos algunas
normas de manejo
de muestras que son

de sangre
importantes y que nos
pueden servir tanto si
los análisis de sangre
se hacen en la clínica
como si se envían
fuera, a laboratorios
externos.
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Un análisis de sangre fiable empieza con una toma de muestras correc-

ta. Existen muchos factores en la toma de muestras y en su manejo que
hay que “cuidar” y que pueden afectar los resultados de estas pruebas.
Es importante:

• evitar que el animal esté muy estresado

• no usar agujas de bajo calibre con jeringas de alto volumen
• realizar una punción venosa limpia
• no mantener el torniquete más de un minuto
• no contaminar la muestra con antiséptico (alcohol).

En los animales muy estresados se produce un aumento de la glucosa

en sangre que hay que tener en cuenta a la hora de interpretar los re-
sultados. La aguja y la jeringa que emplearemos dependerán de varios
factores. El tamaño de la jeringa que usemos va a depender del volu-
men de sangre que necesitemos y de la vena que hayamos seleccio-
nado. Los volúmenes grandes de sangre no deben ser extraídos con
agujas de calibre pequeño. Al utilizar agujas de bajo calibre acopladas
a jeringas de alto volumen se puede producir hemólisis de la muestra.
La hemólisis es la ruptura de los glóbulos rojos que libera hemoglobina
y otras sustancias en el plasma/ suero que le dan un color entre rosa
y rojo. Este color afecta a varias determinaciones por el aumento en el
suero de la sustancia a medir o también por interferencia óptica o quí-
mica durante la fase de análisis. Además de evitar que se produzca la
hemólisis seleccionando correctamente la jeringa y la aguja, debemos
evitar aplicar un torniquete durante más de un minuto ya que también
puede producir alteraciones en los análisis y también debemos evitar la
contaminación con alcohol.
Una extracción de sangre se realiza usando principalmente la vena yu-
gular, cefálica y safena. Normalmente, a no ser que sea un perro muy
pequeño, un cachorro o en muchas ocasiones un gato, realizaremos la
extracción en la vena cefálica, la que discurre por encima de la extremi-
dad delantera. La vena yugular se usa frecuentemente en cachorros y
gatos pero cualquiera de las opciones es correcta.
Hemograma
El hemograma nos proporciona el recuento de glóbulos rojos, blancos
y plaquetas. Para poder realizarlo la sangre tiene que conservar sus
características físicas y químicas, es decir no puede coagularse, debe
permanecer líquida.
La muestra que necesitamos es sangre entera recogida en tubos con
anticoagulante EDTA ya que es el anticoagulante que mejor conserva la
morfología de las células sanguíneas.
La primera regla para poder realizar correctamente el hemograma es
que la sangre que vamos a echar al tubo con anticoagulante EDTA no
puede tener ningún coágulo. La segunda regla a tener en cuenta es
que es muy importante ajustar la cantidad de sangre que se echa al
anticoagulante que hay en el tubo (los tubos vienen ya preparados con
el anticoagulante).
El EDTA es el anticoagulante de elección para hacer el
hemograma y el frotis sanguíneo.
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Normalmente los tubos vienen con una línea
que indica la cantidad de sangre que hay que
adicionar. Es fundamental respetar la reco-
mendación ya que un defecto o exceso de
sangre según la proporción de anticoagulante
del tubo va a producir alteraciones hemato-
lógicas. El hemograma se puede realizar en
muestras recogidas en tubos con otros an-
ticoagulantes como la heparina, pero este
anticoagulante conserva peor la morfología
celular y favorece que las plaquetas formen
grupos (agregación plaquetaria) lo cual altera
su contaje.
Si no hacemos el hemograma en dos o tres
horas la sangre debe ser refrigerada a 4º C
(debe estar en nevera). El recuento de glóbu-
los rojos, la hemoglobina y el hematocrito no
sufren modificaciones si la sangre se refrigera
durante unas 24 horas.
Además de realizar los recuentos celulares,
para completar un análisis hematológico de-
bemos realizar también un frotis sanguíneo.
Hay que extender una pequeña gota de san-
gre sobre una lámina de vidrio (portaobjetos)
para formar una película delgada (frotis san-
guíneo).
Es fundamental
respetar la
recomendación ya
que un defecto o
exceso de sangre
según la proporción
de anticoagulante
del tubo va a
producir alteraciones
hematológicas.
Lo dejamos secar al aire, y luego lo fijamos
introduciéndolo en un pocillo que contenga
metanol y después se tiñe. Los frotis san-
guíneos también deberían ser preparados
inmediatamente después de haber obtenido
la muestra o como máximo transcurridas dos
horas tras la extrac- ción de la sangre. Así
se evitan los problemas derivados de que la
sangre esté mucho tiempo en el anticoagu-
lante, como el deterioro de las células. Si el
frotis, una vez hecho, no puede teñirse in-
mediatamente, es importante por lo menos
fijarlo, sumergiéndolo en metanol durante
dos minutos. Las células fijadas se conser-
van durante mucho tiempo.
Pruebas bioquímicas
Recordemos que la sangre es un tejido líqui-
do, está formada por dos partes, las células y
el líquido en el que “nadan”, que se denomina
plasma. El plasma se obtiene tras centrifugar
la sangre que se ha introducido en un tubo
con anticoagulante. Contiene factores de la
coagulación (fibrinógeno).
Si ponemos sangre en un tubo de ensayo sin
anticoagulante y dejamos pasar unos minu-
tos se forma un coágulo. Posteriormente, el
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Conservación
suero/plasma
Si las determinaciones no se realizan
inmediatamente después de haber
obtenido el suero o plasma:
• conservar el suero/plasma a 4ºC:
la mayoría de los compuestos se
conservan bien a esta temperatu-
ra al menos durante tres días.
• congelar el suero/plasma a -20 ºC:
hay muy pocos compuestos que
no son estables a esta temperatu-
ra durante largo tiempo.
coágulo se contrae y se separa de un líquido
ambarino y transparente que es el suero san-
guíneo.
El suero se obtiene dejando que se produzca
la coagulación espontáneamente en un tubo,
preferentemente de vidrio, en el que no se ha
puesto anticoagulante y después centrifugan-
do. El plasma se obtiene tras centrifugar la
sangre que se ha introducido en un tubo con
anticoagulante.
La mayoría de las pruebas bioquímicas que
se hacen en el laboratorio de análisis clíni-
cos pueden realizarse en muestras de suero.
Muchas de estas determinaciones pueden
realizase también en muestras de plasma te-
niendo en cuenta que el anticoagulante que
usemos no interfiera en la prueba.
Como hemos dicho para obtener suero para
hacer las pruebas bioquímicas la muestra de
sangre debe introducirse en un tubo seco sin
anticoagulante. Las muestras así obtenidas
se dejan a temperatura ambiente en posición
vertical hasta que se coagulen y se inicie la
retracción del coágulo (30-40 minutos des-
pués de obtener la muestra). Posteriormente
se centrifugan los tubos a 2500-3000 rpm
(5-10 min) para separar el suero del coágulo.
Esta separación conviene realizarla dentro de
las dos horas después de la toma de mues-
tras para evitar el intercambio de compuestos
entre las células y el suero y que la muestra
se deteriore.
Si queremos obtener plasma, las muestras
de sangre han de recogerse en tubos que
contengan heparina, preferentemente de li-
tio, ya que este anticoagulante interfiere en
muy pocas determinaciones bioquímicas.
Igual que para hacer el hemograma, es muy
importante adicionar al tubo el volumen de
sangre indicado en el mismo. El plasma se
obtiene centrifugando la muestra a 2500-
3000 rpm (5-10 min). Al igual que el suero,
conviene separar el plasma de las células
dentro de las dos horas después de la toma
de muestras.
Para que las células se adhieran al portaob-
jetos, y para evitar que se degeneren, hay
que fijar la muestra. El método de fijación
puede variar según la técnica de tinción que
se vaya utilizar. Normalmente en la clínica o
para el envío de muestras a otro laboratorio
la muestra debe de secarse al aire y luego
debe fijarse con metanol. También puede
utilizarse el primer reactivo de las técnicas
rápidas.
Si la muestra se remite a un laboratorio es-
pecializado es mejor no teñirlas en la clínica,
hay que fijarlas y dejarlas sin teñir. Cuando
la preparación se tiñe en la clínica se usa
normalmente la Técnica rápida Diff-Quik®.
Esta técnica de tinción es muy utilizada
debido a su sencillez y rapidez, todos sus
reactivos son comerciales y están ajustados
para realizar la técnica en el menor tiempo
posible.
 prevención de la salud.11

Técnica de Diff-Quik ¿Cómo hacer un frotis sanguíneo?

Fijación:
Secar al aire. Utilizaremos dos portas, uno con la
Fijar en metanol durante 3 minutos o en la solu- gota de muestra en un extremo, y el
ción fijadora comercial. otro para realizar la extensión de la
sangre (Figura 1). El porta de arriba
Soluciones: puede ser sustituido por un cubre.
a) Solución 1: fijador comercial
b) Solución 2: colorante comercial (eosina) 1) Apoyaremos uno de los bor-
c) Solución 3: colorante comercial (mezcla de des cortos del porta de exten-
colorantes azules) sión (o un cubre), sobre el por-
ta con la muestra, formando
Técnica: un ángulo de 30-40º
Según las instrucciones del fabricante 2) Deslizaremos el porta de exten-
1º Solución 1 (fijador): 5 pases de 20 segundos sión hasta contactar con la gota,
cada uno. con lo que el material se exten-
2º Solución 2 (eosina): 5 pases de 20 segundos derá en forma de línea en el bor-
cada uno. de corto del porta de extensión
3º Solución 3 (azules): 5 pases de 20 segundos 3) Con un movimiento rápido y
cada uno. suave deslizamos el porta de ex-
4º Lavar en agua corriente. tensión, alejándonos de la gota,
5º Secar al aire. formándose una capa uniforme

Los tiempos de inmersión en cada solución pue-

den variar según las preferencias de la persona
que va a interpretar la citología y el tiempo que
llevan los colorantes abiertos.

Recomendaciones:
Guardar las soluciones en botes herméticos de
boca ancha.
Una vez usados por primera vez, controlar la an-
tigüedad (precipitados, contaminación, dilución,
concentración) de los colorantes.