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3 Bacilos Gram
3 Bacilos Gram
Antignios:
- LPS: polissacardeo O (aglutinvel por IGM e especifico da espcie) + antignio
comum s Enterobacteriaceae + lipdeo A
- Antignio comum s Enterobacteriaceae aparece tambm como um glicolpido livre na
membrana externa
Classificao Serolgica:
- Polissacardeo O: algutinvel por IgM; reaces cruzadas entre gneros prximos
(p.ex. Salmonella e Citrobacter, Escherichia e Shigella)
- Antignio capsular K: termo-lbeis; inibem a aglutinao dos Atg O e H
- Protenas flagelares H: algutinveis por IgG, termo-lbeis, podem estar ausentes ou
sofrer variao antignica de estarem presentes em duas fases
Patognese e Imunidade:
- Endotoxina (partilhado pelas bactrias Gram- aerbias e algumas anaerbias; a sua
actividade depende do lipdeo A do LPS; responsvel por muitos dos efeitos sistmicos
das infeces por bastrias Gram-: libertao de citoquinas, leucocitose,
trombocitopenia, CID, febre, diminuio da circulao perfrica, choque, morte)
- Cpsula
- Variao fsica de antignios: e expresso dos antignios K e H est sob controlo
gentico do organismo, podendo cada um deles ser alternadamente expresso ou mesmo
no expresso, o que protege a clula da morte mediada por anticorpos)
- Sistemas de secreo tipo III
- O ferro um importante factor de crescimento para a bactria, estando ligado
protena heme (hemoglobina ou mioglibina) ou a protenas quelantes (p. ex. transferrina
ou lactoferrina). Bactrias produzem os seus prprios siderforos ou compostos
quelantes do ferro (enterobactina, aerobactina), ou atravs da produo de hemolisina
que liberta o ferro da clula hospedeira
E. coli:
Gnero: Escherichia
5 espcies: E. coli clinicamente a mais importante - septicemias, gastroenterites,
meningite neonatal, infeces urinrias
Presente no nosso tracto gasto-intestinal
A maioria das infeces por ela provocadas (salvo as gastroenterites e as meningites
neonatais) so endgenas
E. coli responsvel pela gastroenterite e pelas infeces urinrias possuem factores de
virulncia especializados:
Adesinas: permitem que a bactria permanecia nos tractos gastrointestinal e urinrio
uma vez que capaz de aderir s clulas, no sendo eliminada na urina nem com a
motilidade intestinal. Adesinas especializadas: antignios factores de colonizao
(CFAI, CFAII, CFAIII), fmbrias agregativas de aderncia (AAFI, AAF III), pilli
formadores de feixes (Bfp), antignio do plasmdeo de invaso (Ipa), fmbrias Dr, pilli
P, intimina
- Toxina Shiga (Stx1 e Stx2); ligao das subunidades B a GB3 nas vilosidades
intestinais (Stx1) e nas clulas endoteliais renais (Stx2); subunidade A internalizada e
clivada em 2 molculas; A1 liga-se ao rRNA 28S na subunidade ribossomal 60S,
impedindo a ligao da aminoacil transferase e impedindo a sntese proteica. No
endotlio renal a ligao leva activao de plaquetas e deposio de trombina, que
perturba a filtrao glomerular e leva a falncia renal aguda (HUS)
- As toxinas Shiga estimulam ainda a lubertao de Citoquinas inlfamatrias
- Ao contrrio da maioria das E. coli muitas estirpes 0157 no fermentam o sorbitol
(Col sorbitol negativas)
EIEC:
- Diagnstico diferencial de Shigella
- Diarreia por Ulcerao do clon
- Destoem as clulas do clon, invandindo-as, lisando o vacolo fagoctico e replicando
no citoplasma da clula, movendo-se atravs de caudas de actina para invadir clulas
vizinhas
EAEC:
- Diarreia em crianas de pases em desenvolvimento e em viajantes para esses pases
- Fmbrias formadoras de feixes permitem a adeso da bactria, levando a um aumento
da secreo de muco, que encurrala a bactria sobre o epitlio do intestino delgado, com
encurtamento das microvilosidades, infiltado mononuclear e hemorragia
Salmonella:
Gnero Salmonella com duas espcies: Salmonella entrica e Shingella bongori
O seu aparecimento no homem sempre patognico
Transmisso por ingesto de gua ou alimentos contaminados
Os serotipos S. typhi e S. paratyphi esto altamente adaptados a humanos e no
provocam doena em hospedeiros no humanos
Outros serotipos s provocam doena em hospedeiros no humanos
Outros serotipos no so especficos quanto ao hospedeiro
- Possuem 2 sistemas de secreo SPI1 e SPI2. SPI1 insere nas clulas M das placas de
Peyer do intestino delgado as protenas bacterianas Sips ou Ssps, do que resulta um
pregueamento da membrana celular por rearranjo da actina. Esta membrana pregueada
envolve a bactria e captura a Salmonella, que se replica no interior do fagossoma,
levando a morte da clula hospedeira, e espalhando-se para invadir as clulas vizinhas
- Medeiam a produo de prostaglandinas e estimulam a andenilciclase levando a
secreo activa
- Possuem um gene de tolerncia ao cido (ATR), o que lhes permite sobreviver ao pH
cido do estmago e do fagossoma
- So catalase e superoxido dismutase positivas, o que lhes permite resistir morte
intracelular
Geralmente so mveis
Shigella
Gnero Shigella com quatro espcies: S. dysenteria, S. flexneri, S. boydii, S. sonnei
Quando presente sempore patognica
Transmisso: gua contaminada, comida, mosca, pessoa a pessoa (via oral fecal)
S sonney a causa mais comum de shigelose no mundo industrial, ao passo que S.
flexneri a causa mais comum de shigelose nos pases em desenvolvimento
Geralmente limitada ao tracto gasto-intestinal (raramente invade o sangue)
Inicialmente invadem clulas M das Placas de Peyer do Intestino delgado. Sistema de
secreo tipo III que introduz nas clulas epiteliais e nos macrfagos 4 tipos de
Yersinia
O gnero Yersinia contm 11 espcies, sendo que a Y. pestis, Y. enterocolitica e Y.
pseudotuberculosis so as espcies patognicas para humanos mais conhecidas.
Y. pestis altamente virulento causando doena sistmica com elevada taxa de
mortalidade
Y. enterocolitica e Y. pseudotuberculosis so principalmente patognios entricos e que
raramente se isolam do sangue
So intracelulares facultativas
Invadem clulas epiteliais, macrfagos e sistema monoctico-fagocitrio
As espcies patognicas do gnero Yersinia so resistentes morte por fagocitose
atravs do seu sistema de secreo do tipo III: em contacto com as clulas fagocticas as
bactrias secretam protenas para o interior da clula fagoctica que desfosforilam vrias
protenas necessrias fagocitose (gene YopH), induzem citotoxicidade ao
disromperem filamentos de actina (gene YopE) e iniciam a apoptose em macrfagos
(gene YopJ/P). O sistema de secreo tipo III tambm suprime a produo de
citoquinas, diminuindo assim a resposta inflamatria infeco.
Y. pestis contm dois plasmdeos adicionais que codificam genes de virulncia: gene F1
que codifica uma cpsula proteica anti-fagoctica e o gene do activador do
plasminognio (Pla), que degrada os factores do complemento C3b e C5a, impedindo,
deste modo, a opsonizao e a migrao fagoctica, respectivamente. O gene Pla
tambm degrada a fibrina, permitindo que a Y. pestis se espalhe rapidamente. Existem
ainda outros factores de virulncia que conferem Y. pestis resistncia ao soro e a
capacidade de absorver ferro orgnico por um mecanismo independente de sideroforos
Klebsiella
Os membros do gnero Klebsiella tm uma cpsula proeminente, pelo que as colnias
isoladas ttm um aspecto mucide
As espcies mais frequentemente isoladas so K. pneumoniae e K. oxytoca, que podem
originar pneumonia lobar primria (com destruio necrtica dos espaos alveolares,
formao de cavidades e hemopstises). Os alcolicos e pessoas com funo pulmonar
comprometida tm risco acrescido de ter pneumonia devido sua incapacidade de
limpar as secrees orais aspiradas do seu tracto respiratrio baixo. Podem ainda causar
infeces do tracto urinrio.
K. granulomatis o agente do granuloma inguinal, uma doena granulomatosa que
afecta as reas genitais e inguinais. O diagnstico laboratorial de K. granulomatis faz-se
atravs da colorao de Wright ou Giemsa. So sensveis s Tetraciclinas, eritromicina e
trimetoprimsulfamethoxazole
Proteus:
P. mirabilis um organismo comensal
Responsvel por infeces do tracto urinrio pois produz uma grande quantidade de
ureas (urease positivos) e, que transforma a ureia em dixido de carbono e amnia. Este
processo aumenta o pH urinrio e facilita a fornao de pedras renais. O aumento da
alcalinidade da urina tambm txico para o epitlio urinrio.
So lactose negativos
Certas estirpes partilhas atg especficos com algumas rickettsias
Os pilli de P. mirabilis podem diminuir a sua virulncia ao aumentar a fagocitose por
parte das bactrias.
Provocam ainda bacteremias, penumonia, infeces localizadas e infeces nosocomiais
Apresentam crescimento invasor em meios slidos
Diagnstico laboratorial:
Colheita do produto biolgico:
- Urina (no caso de infeces urinrias)
- Fezes (em caso de gastroentrites)
- Hemocultura
- LCR (em caso de meningite)
Tcnica de Gram
Exame cultural:
- Crescem bem na maioria dos meios: agr-sangue, agr chocolate, brain-heart, Cled,
triglicolato
- Meios selectivos (sobretudo nas coproculturas): Mac Conkey, agar salmonella-shigella
(SS), gelose de Hektoen (Salmonella e Shigella), gelose de xilose-lisina-desoxicolato
(Salmonella e Shigella) caldo tetrationato (Salmonella), gelose CIN (selectivo para
Yersinia), agar mc Conkey sorbitol para E. coli 0157:H7
- incubao em atmosfera de aerobiose surante 18h-24h a 35C, Yersinia 25-30C
durante 48H
Provas bioqumicas:
- Com testes geralmente comercializados (qualquer sistema comercial de identificao
pode ser utilizado para a identificao das Enterobacteriaceae e podem-se obter
resultados dentro de 4 a 24 horas, consoante o sistema utilizado)
- Em alternativa utilizao dos testes comercializados, a maioria das
Enterobactericias pode ser identificado presuntivamente utilizando um nmero
reduzido de substractos
Prova da Fermentao da Glicose
Aps incubao, a libertao de compostos cidos, resultantes da fermentao do
hidrato de carbono, faz descer o pH o que conduz mudana da cor original do meio,
pois est presente um indicador de pH (reaco positiva). Em alguns casos, a produo
de cido acompanhada pela produo de gs (CO2) que visvel, pois o meio lquido
que estava dentro do tubo de Durham substitudo por gs em forma de bolhas.
Prova da Urease:
A presena de urease detecta-se quando o microrganismo cresce num meio com ureia
(meio de ureia de Christensen) que contm tambm o indicador de pH, vermelho de
fenol. Quando a ureia desdobrada pela urease, a amnia acumula-se no meio
tornando-o alcalino. Este aumento de pH faz com que o indicador de pH passe de
amarelo a rosa, sendo uma reaco positiva para a presena de urease. A ausncia da
colorao rosa indica uma reaco negativa.
No entanto, basta que ocorra o aparecimento de uma zona do meio rosa para se
considerar a reaco positiva; apenas os microrganismos que produzem precocemente
urease tm capacidade para modificar a cor de todo o meio para rosa forte.
Prova de Kligler Iron Agar ou de Triple Sugar Iron Agar
Esta prova , geralmente, usada para diferenciar os diferentes gneros das
Enterobacteriaceae e para distinguir esta famlia de outros bacilos Gram negativo de
origem intestinal. Esta diferenciao feita atendendo s diferenas na fermentao dos
hidratos de carbono presentes no meio e produo de sulfureto de hidrognio (H2S).
Tanto o meio agar TSI (triple sugar iron) como o agar Kligler Iron contm glicose em
pequena concentrao (0,1%), lactose em concentrao superior (1%), o indicador de
pH, vermelho de fenol, para detectar a produo de cidos resultantes da fermentao
dos hidratos de carbono, tiossulfato de sdio, substrato para a produo de H2S, e
sulfato de ferro para a deteco desse produto final. A diferena entre estes dois meios
diferenciais que o TSI possui mais um acar, a sacarose, em concentrao igual da
lactose (1%).
Ambos os meios so inoculados por picada, no cilindro e por estria, na rampa.
essencial que as culturas sejam observadas aps 18 a 24 h de incubao para evitar que
os hidratos de carbono sejam completamente utilizados e que ocorra degradao das
peptonas, formando produtos finais alcalinos. na rampa que se faz a leitura da lactose
e da sacarose, no fundo do cilindro a da glicose e no meio do cilindro a de H2S.
Aps incubao podem ser determinadas as actividades fermentativas, a produo de
gs e a produo de H2S, podendo ocorrer vrios resultados:
Cilindro cido (amarelo) e rampa alcalina (vermelha):
S a glicose foi fermentada. Os microrganismos degradam, preferencialmente, a glicose
em primeiro lugar, mas como este substrato est presente em concentrao mnima, a
quantidade de cido produzida limitada e rapidamente oxidada na superfcie da
rampa. Por outro lado, as peptonas do meio so tambm usadas na produo de
substncias alcalinas. No cilindro, a reaco cida mantida devido tenso reduzida
do oxignio e ao crescimento mais lento dos microrganismos. O indicador, vermelho de
fenol, muda para amarelo devido persistncia da formao de cido no cilindro.
Cilindro cido (amarelo) e rampa cida (amarela):
Ocorreu a fermentao da lactose e/ou da sacarose, para alm da glicose. Como as duas
primeiras substncias esto presentes em altas concentraes so substratos para a
actividade fermentativa contnua com manuteno da reaco cida (cor amarela) em
todo o meio (rampa e cilindro).
Produo de gs: