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Cdigo: PROMIC-0006-1
Verso: 01
Pg: 1/4
TTULO: Coprocultura
ELABORADO POR
DE ACORDO
NOME
Dr. Renato de
Lacerda Barra
Filho
Dr. Ivo Fernandes
FUNO
ASSINATURA
Biomdico
01/10/2009
Gerente da Qualidade
Biomdico
20/10/2009
APROVADO POR
Verso
Verso
1
Responsvel
Ivo
DATA
REVALIDAO ANUAL
Data
Verso
01/10/2013
30/10/2009
Data
Responsvel
Assinatura
Data
2. PRINCPIO DO TESTE
O crescimento bacteriano em meios de cultura seletivos e diferenciais propicia o enriquecimento e o
desenvolvimento de patgenos de interesse nas gastroenterites (inflamao simultnea do estmago e
dos intestinos). A partir disto possvel a tipagem de bactrias enteropatognica (Salmonella spp,
Shigella spp, Escherichia coli invasora EIEC e Escherichia coli enteropatognica EPEC) presentes
na amostra.
Meios Utilizados:
Meios diferenciais utilizados para diferenciar bactrias fermentadoras e no fermentadoras da
lactose MacConkey (MC).
Meios seletivos utilizados para permitir crescimento apenas de Shigella spp. e Salmonella
spp., inibindo as outras bactrias. SS (Salmonella Shiguella).
Caldo de enriquecimento: Selenito.
3. SIGNIFICADO CLNICO
Diversos so os agentes que podem causar gastroenterites. Habitualmente, em cultura de fezes
pesquisada a presena de agentes mais comuns em nosso meio: Salmonella spp, Shigella spp,
alguns sorotipos de Escherichia coli e Campylobacter. Outros agentes podem ser pesquisados,
mais importante que sejam mencionados na solicitao mdica.
Procedimentos Tcnicos
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4.2.2. Fezes com conservante podem ser mantidas temperatura ambiente por at 24 horas (Cary
Blair).
4.3. Volume mnimo para anlise: vide manual de coleta.
4.4. Rejeio de amostras: Amostras para cultura refrigeradas (exceo para pesquisa de antgenos).
4.5. Condies de acondicionamento: vide manual de coleta.
4.6. Tratamento e pr-tratamento da amostra: N/A
5.
MATERIAL REQUERIDO
6.
7.
Estufa bacteriologica;
Microscpio tico;
Bico de Bunsen.
Placa estril.
Ala calibrada.
Lminas.
Mscara de proteo.
culos de segurana.
Luvas de procedimento.
REAGENTES
Placa de SS preparado
PROCEDIMENTO DETALHADO
7.1 Bacterioscopia:
Este tipo de exame pouco solicitado e utilizado para indicar a presena de Staphylococcus spp. e
leveduras nas amostras, j que estas no so recuperadas nos meios empregados na rotina
habitual de coprocultura.
7.2 Semeadura e Isolamento:
7.2.1
Semeadura:
7.2.1.1 Semear uma alada de fezes em um meio diferencial, em um meio seletivo e 3 a 4 aladas
em um caldo de enriquecimento.
7.2.1.2 Incubar as placas de MC e SS 35 + 1C por 18 a 24 horas e o caldo de enriquecimento a
35 + 1C por 12 a 18 horas.
7.2.1.3 Aps 12 a 18 horas de incubao, semear uma amostra da superfcie do caldo de
enriquecimento em uma placa de meio seletivo (SS).
7.2.1.4 As colnias suspeitas do primeiro plaqueamento so repicadas no meio de Rugai,
segundo identificao abaixo:
Mac Conkey colnias lactose negativa (transparente ou sem cor) suspeita de Salmonella
spp, Shigella spp. e algumas E.coli invasoras.
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Lactose positiva (cor-de-rosa) suspeita de E. coli.
SS Incolor (com ou sem o centro negro) suspeita de Salmonella spp.
Incolor suspeita de Shigella spp.
Colnias amarela suspeita de Escherichia coli.
Repicar no mnimo 1 a 3 colnias com morfologia diferente, de cada placa, no meio de
Rugai.
7.2.1.5. Incubar a placa semeada do caldo de enriquecimento e os meios de Rugai a 35 + 1C por
18 a 24 horas.
7.2.1.6. Quando na leitura do Rugai houver suspeita de algum patgeno significativo, realizar provas
bioqumicas complementares (se necessrio) e soroaglutinao (quadro 7.1).
Salmonella spp. deve ser feita aglutinao (antgeno somtico e flagelar) para
confirmar a identificao. Para identificar a espcie, devem ser realizada provas
bioqumicas. Ver quadro ...
Shigella spp. deve ser feita aglutinao para identificar as diferentes espcies,
Inicialmente de ser feita a soroaglutinao para S fflexneri e S. sonnei, se negativas,
realizar soroaglutinao para S. boydii e S. dysenteriae.
Obs.: Se existir forte suspeita de Salmonella spp ou Shigella spp. pela aparncia no Rugai
e no houve aglutinao com nenhum anti-soro, transferir a suspenso para um outro
tubo e aquecer em gua fervente por 10 minutos, deixar esfriar e repetir novamente a
aglutinao.
Quadro 7.1
PROVAS
Salmonella
choleraesuis
Gs
glicose
H2S
Lisina
Salmonella
typhi
de +
Salmonella
sorotipo
enteritidis
+
+
+
+
+
+
+
Salmonella
paratyphi
Resultado Negativo
No houve crescimento de patgenos; Salmonella spp, Shigella spp, E.coli enteropatognicas
(...sorogrupos pesquisados), E.coli enterohemorrgica (...sorogrupos pesquisados).
Resultado positivo
Salmonella spp ....
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Obs.: A presena de leuccitos na bacterioscopia ou na pesquisa de leuccitos nas fezes sugere
bactria invasivas (p. ex.: Shigella, EIEC); j a ausncia de leuccitos sugere diarrias toxignicas
(p. ex.:Salmonella, Vibrio).
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CONTROLE DE QUALIDADE
Os meios de cultura empregados devem ser controlados quanto a sua esterilidade, capacidade de
permitir o crescimento dos patgenos importantes e capacidade de inibio (meios seletivos).
Os kits ou anti-soros s sero utilizados mediante apresentao do certificado de validao do
fabricante (vide plano de qualidade do setor).
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INTERVALO DE REFERNCIA
Negativo
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INTERVALO CRTICO
N/A
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CONFIABILIDADE ANALTICA
No possvel, muitas vezes, isolar e identificar todos os possveis patgenos presentes nas
fezes.
Na rotina de coprocultura devem ser pesquisados os agentes mais freqentes na sua populao.
No tem sentido pesquisar agentes raros, a no ser que haja suspeita clnica ou um surto. Neste
ltimo caso, deve ser adicionado um meio mais seletivo para o isolamento desse agente em
questo.
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INTERFERENTES
A bacterioscopia no pode ser feita com amostra em meio de transporte, pois este prejudica a
colorao e causa interferncia no mtodo. A semeadura de grandes quantidades de amostra pode
causar a viragem do pH dos meios e no permitir a obteno de colnias isoladas. Algumas cepas
de EPEC podem apresentar aglutinao inespecfica com todos os antisoros (cepas
autoaglutinveis). Nestes casos re-isolar a cepa e repetir a sorologia. Caso a auto-aglutinao se
repita o resultado inconclusivo.
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INTERVENES
N/A
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REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
1.
Oplustil P.; Carmen; Zoccoli M,;Cssia; Tobouti R.;Nina; Sinto I.;Sumiko Procedimentos
Bsicos em Microbiologia Clnica 1Edio Sarvier, 2000.
2. Murray.R. Patrick ; Baron, J. Ellen; Pfaller, A. Michael; Tenover, C. Fred; Yolken, H. Robert.
Manual of Clinical Microbiology 7 Edio American Society for Microbiology, 1999.
3. Koneman, W. Elmer; Allen, D. Stephen; Janda, M. William; Schreckenberger, C. Paul; Winn, C.
Washington Jr. Diagnstico Microbiolgico 5 Edio MEDSI 2001.