QUANTIFICAO DE PROTENA - MTODO BRADFORD

1. PREPARAO DA CURVA PADRO

Preparar 200 L de uma soluo de BSA a 1 mg/mL e, a partir dessa soluo,
proceder as diluies seriadas em H2O (Milli-Q) para a obteno das demais
concentraes (0,5 mg/mL; 0,25 mg/mL e 0,125 mg/mL)

procedendo como

demonstrado no esquema abaixo. Obs.: Utilizar ponteira limpa para cada diluio.

100L

100L

100L
1mg/mL
10L

100L
0,5mg/mL
10L

100L

100L
0,25mg/mL

100L
0,125mg/mL

10L

10L

+
790L gua Milli-Q
200L reagente de Bradford.

2. PREPARAO DO BRANCO
Adicionar em um tubo de microcentrfuga 800L gua Milli-Q e 200L reagente de
Bradford.

3. PREPARAO DA AMOSTRA
Adicionar em um tubo de microcentrfuga 10L de amostra diluda (1:10 ou mais)
790L gua Milli-Q e 200L reagente de Bradford.
Obs.: Incubar as reaes dos procedimentos 1, 2 e 3 a temperatura ambiente por 5
minutos e medir a Abs595nm.

Protocolos Sandro R. Valentini

4. QUANTIFICAO
Utilizando o espectrofotmetro DU 800 Beckman

Selecionar Protein Assay Analysis

Method: Bradford Lab

Posicionar as cubetas da curva padro no espectrofotmetro em ordem

crescente de concentrao e proceder a leitura.

Aps determinao da curva padro, clicar em Mode e selecionar

Samples.

Posicionar as cubetas contendo as amostras e proceder a leitura, lembrando

de alterar o fator de diluio de acordo com a diluio da amostra.

Protocolos Sandro R. Valentini