E-BOOK ENTENDENDO OS ANTICOAGULANTES > EDTA Pale > FLUORETO DE SODIO > CITRATO DE SODIO & PTAO EDTA € 0 anticoagulante mais utilizado na hematologia desde os anos 50. Alias, vocé sabe 0 que significa a sigla EDTA? Acido etilenodiaminotetracético. Esse ¢ 0 nome completo do nosso amigo. Como vocé percebe, é bem mais ficil chamélo pelo seu apelido, EDTA. O EDTA reage através de seus dois radicais acidos com o célcio plasmatico, formando um quelato, tomando-se um sal insolivel, ou seja, cle yu ird se ligar aos fons célcio da amostra e a cascata da AGENTE QUELANTE= EDTA ION METALICO= CALCIO coagulacéo sera interrompida Existem trés tipos de EDTA: dissédico, (Na2EDTA), dipotassico (K2EDTA) e 0 Assico (K3EDTA). Este tiltimo é 0 mais utilizado (forma liquida) por ser mais soltivel e menos téxico QUELATO= EDTA + CALCIO tripotd Exames realizados Ele 0 anticoagulante de escolha para a hematologia, principalmente para a realizagio do hemograma, por preservar a morfologia das células hematolégicas por mais tempo. Mas para que essa morfologia seja preservada, devese usar a quantidade correta do reagente, Imente na proporgéo de 0,1 mL de EDTA para 5 mL de sangue.Efeitos do EDTA nos eritrécitos Esfregagos de boa qualidade podem ser feitos dos tubos com EDTA desde que sejam feitos dentro de no maximo duas horas apés a coleta. Mas 0 ideal é que o esfregaco seja feito assim que a coleta ¢ finalizada, com o sangue sem anticoagulante. Se um tubo for preenchido com quantidade inferior, a proporgao sangue-anticoagulante é alterada, resultando em maior concentragao de EDTA. Em altas concentragées, o EDTA faz. com que os eritrécitos encolham por causa da hipertonicidade do plasma com aumento da concentragao iénica. Podem também criar artefatos, dificultando a interpretacéo da morfologia eritrocitaria. Efeitos do EDTA nas plaquetas O EDTA reduz a ativacio plaquetéria por proveg durante 0 contato com o tubo, que pode iniciar a coagulagio. Essa ativacao faz com que as plaquetas se agreguem na presenga do cileio e também causa a adesio das plaquetas na superficie do tubo rapidamente, Com a quelagio do calcio pelo EDTA a ati cao ¢ interrompida. Em quantidades inferiores, ha formag » de micro-codgulos e codgulos maiores, Como consequéncia, a contagem no aparelho hematoldgico seré errada ¢ esses micro-coagulos podem entupir a agulha do aparelho. Efeitos do EDTA nos leucécitos Estudos demonstraram que a contagem de leucdcitos permaneceu estavel por pelo menos trés dias A temperatura ambiente (T.A.), quando utilizado sangue com EDTA. Neutréfilos e monécitos parecem ser as células mais sensiveis ao armazenamento em EDTA, enquanto que linfécitos s40 mais estavei A respeito da morfologia & T-A., uma leve vacuolizagio de monécitos foi encontrada apés uma hora, pasando a moderada apés quatro horas; uma leve vacuolizacdo nos granulécitos neutréfilos foi encontrada apés trés a quatro horas, passando a moderada apés seis horas.A Heparinaé um glicosaminoglicano (ou mucopolissacarideo), que sio longas cadcias de carboidratos complexos, formadas por unidades de dissacarideos. Por causa dessa conformacao é possivel a formagao de varias moléculas com tamanhos e sequéncias diferentes. Uma caracteristica que distingue a heparina dos demais glicosaminoglicanos é que ela possui uma alta proporcao incomum de unidades de dissacarideos sulfatados. O efeito anticoagulante vem de um pentassacarideo sulfatado presente em 30% das moléculas de heparina. E esse pentassacarideo sulfatado que liga-se & antitrombina III, responsével por inibir a atividade de diversos farores da coagulagio, incluindo os fatores Xla, Xa, [Xa ¢ trombina. Heparina utilizada in vitro Aheparina é usada na forma de sais de s6dio, potéssio, litio e aménia, No laboratério, a forma recomendada, ¢ mais comumente utilizada, é a heparina de litio. Em muitos exames nao hé diferenca significance no resultado, se compatado 0 uso do anticoagulante com 0 uso do soro. Nesses casos a anticoagulagio néo é essencial mas fornece uma mancira mais répida ¢ conveniente de se separar a parte liquida da parte sélida do sangue. Em contraste, existem alguns parimetros que s6 podem ser dosados numa amostra de sangue total, Para esses testes, que incluem pH, pCO2, pO2 ¢ alguns eletrélitos, uma amostra de sangue anticoagulada & essencial (a no ser que o teste seja realizado nos dois primeiros minutos depois da coleta). A heparina é 0 anticoagulante de escolha da gasometria.O uso do sangue heparinizado nao ¢ indicado para realizagéo de hemograma, pois altera a morfologia ¢ coloracéo dos leucécitos com os corantes de rotina e ainda permite a formacao de agregados plaquetirios Heparina utilizada in vivo Desde 1930, a heparina ¢ utiliza terapeuticamente para diminuir a coagulagao do sangue de forma artificial. Ela nao é absorvida pelo trato gastrointestinal, entao deve ser administrada via injegdes subcutaneas ou intravenosas. Apesar de suas limitagées, a heparina continua sendo uma das drogas antitrombéticas mais prescritas, usada principalmente para o tratamento e prevengio de trombose venosa ¢ embolismo pulmonar.O Fluoreto de Sédio é 0 anticoagulante de escolha para os exames de dosagem da glicemia. Ele é capaz. de prevenir que hemécias ¢ leucdcitos metabolizem a glicose. Mas como isso acontece? A enzima enolase (fosfopiruvato hidratase), da via glicolitica, ¢ inibida, Ela é responsavel pela conversio de 2-fosfoglicerato em fosfoenolpiruvato, o nono ¢ pentiltimo passo da glicélise. O fluoreto de sddio é considerado um anticoagulante fraco, ¢ muitas vezes esta associado ao oxalato ou ao EDTA, por isso tem a capacidade de quelar 0 célcio e interromper as vias da coagulagio. As amostras com o anticoagulante permanecem estéveis por 8 horas a 25°C, ¢ por 28 horas entre 228°C. Sem 0 fluoreto de sédio a concentragio da glicose decresce em torno de 10 mg/dL por hora a 25°C. Exames realizados O fluoreto de sédio é utilizado em exames de dosagem da glicemia, como por exemplo, glicemia de jejum, glicemia pés-prandial, curva glicémica e alguns testes de intolerdncia & acticares, como a lactose.O Citrato de Sédio é anticoagulante utilizado nos exames que avaliam a coagulagdo ¢ que necessitam do uso do plasma do paciente. Mas vocé jé parou para pensar por que cle € 0 anticoagulante de escolha nesses testes? Bem, o papel principal do citrato de sédio ¢ formar um quelato com 0 calcio, ot seja, ele ird se ligar aos fons célcio da amostra e a cascata da coagulagao seré interrompida Um quelato é a associagéo de um fon metélico (no nosso caso 0 céleio), com cadeias orginicas (no nosso caso o citrato de sédio) através de ligagées covalentes na forma de uma estrutura heterociclica, que neutralize 2 reatividade quimica do fon AGENTE QUELANTE= CITRATO DE SODIO metilico ION METALICO= CALCIO Vale ressaltar que essa QUELATO= CITRATO DE SODIO + CALCIO associacao é facilmente reversivel, através da adigao de ions célcio na amostra. Justamente por causa dessa propriedade ¢ que ele & 0 anticoagulante usado nos testes de coagulacéo Papel do Cillcio na cascata da coagulacéo Na via intrinseca, a presenga de calcio e fosfolipideos faz-se necesséria para que o fator XI ativado transforme o fator IX em uma enzima ativa (fator IX ativado) e a cascata prossigaNa via extrinseca, 0 cdlcio é responsdvel por transformar o fator VII em fator VII ativado. Apés, cilcio, fosfolipideos e fator V ativado, juntamente com o fator X ativado formam 0 Complexo Ativador de Protrombina, que transformam a protrombina em trombina, Exames realizados Os testes laboratoriais para 0 diagndstico de desordens de coagulagéo podem ser divididos em dois grupos. O primeiro grupo engloba os testes que avaliam 0 primeiro momento da hemostasia, nos quais entram as plaquetas e vasos sanguineos. No segundo, entram os testes que avaliam 0 segundo momento, em que atuam os fatores da coagulacéo. Os exames de coagulacéo que utilizam o citrato de sédio sao os do segundo momento da hemostasia. Sao ele ‘Tempo de Protrombina (TP ou TAP), Tempo de Tromboplastina Parcialmente Ativada (TTPA), Teste de Coagulacao e Dosagem de Fibrinogenio. Nesses testes, 0 cilcio (do kit de diagnéstico) é adicionado & amostra, para a formagio do codgulo. O tempo entre a adicéo do cilcio ea formagio do codgulo é que seré o resultado do teste,Referéncias Biomedicina Padrao —www.biomedicinapadrao.com Guia Técnico: Coagulacao, 2009. Higgins, C. The use of Heparin in preparing samples for blood-gas analysis. Medical Laboratory Observer, 2007. Nayana, P. Why is EDTA the anticoagulant of choice for hematology use? BD Diagnostics, 2009. NPA —Nuicleo de Pesquisas Aplicadas Ltda.