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INTRODUO
HEMOSTASIA
o processo pelo qual o sangue permanece lquido vascular, apesar das leses que venham a sofrer.
A fluidez do sangue depende da:
Integridade do endotlio,
Velocidade do fluxo sanguneo,
Presena de heparina, anticoagulante natural, produzido pelos mastcitos.
Os trs mecanismos envolvidos na hemostasia so:
Resposta Vascular;
Atividade plaquetria;
Coagulao do sangue.
Sabe-se que a funo bsica da circulao nutrir os tecidos. Ento, para que os nutrientes, gases,
hormnios, catablitos e anticorpos sejam distribudos ou removidos dos tecidos necessrio que o sangue
possa fluir dentro de um vaso sangneo qualquer. Assim, a fluidez sangnea deve ser mantida e
garantida, de modo que se evite o extravasamento de sangue e tambm a deposio intravascular de
clulas e substncias formando um cogulo chamado trombo. O extravasamento de sangue o que origina
as hemorragias e a formao de trombos pode ocluir um vaso. Com isso, o tecido que se encontra depois
do local ocludo vai sofrer falta de oxignio, ocorrendo necrose que nada mais do que um infarto.
Ento, quando o sangue escapa do interior dos vasos perde a fluidez, torna-se viscoso e em pouco
tempo forma um cogulo que, posteriormente se retrai, organiza ou dissolve. Este o fenmeno normal da
hemostasia, que compreende um conjunto de mecanismos que visam interromper a perda continuada de
sangue.
A hemostasia o resultado da ao conjunta de trs mecanismos principais e independe da causa da
leso do vaso sanguneo, que pode ser conseqncia de trauma, infeco, ruptura espontnea ou da
seco cirrgica planejada.
Os trs mecanismos devem atuar em perfeita harmonia para que a hemostasia seja completa. A
ausncia ou a disfuno de qualquer um dos mecanismos torna a hemostasia deficiente e perpetua a perda
sangunea.
Assim, deve haver um equilbrio que evite o extravasamento ou perda de sangue e a formao de
trombos. A esse equilbrio chamamos Hemostasia. Esse processo envolve quatro sistemas relacionados:
os vasos sangneos, as plaquetas, os fatores da coagulao e a fibrinlise.
FUNO DOS VASOS SANGUNEOS NA HEMOSTASIA
Os vasos sangneos so recobertos internamente por uma camada celular chamada endotlio, e
logo abaixo deste endotlio temos uma camada rica em colgeno. A integridade desse endotlio pode
garantir o perfeito funcionamento do mecanismo de hemostasia. Porm, quando um vaso sangneo
lesado, para que seja contido o extravasamento de sangue, inicia-se uma srie de reaes. Uma dessas
reaes a vaso constrio, ou seja, o estreitamento do dimetro do vaso para reduzir a quantidade de
sangue que chega naquele ponto lesado. Se o vaso pequeno, como os capilares, pode selar-se, se as
pontas cortadas se tocarem. Mas, se o vaso de maior calibre, a leso no contida apenas com a vaso
constrio. Neste caso, o colgeno exposto com a leso vai estimular a ao das plaquetas sobre o local
lesado.
FUNO DAS PLAQUETAS NA HEMOSTASIA
As plaquetas tm o formato de um disco redondo enquanto circulam na corrente sangnea.
Todavia, as plaquetas sofrem uma mudana no formato quando entram em contato com o colgeno exposto
na parede do vaso sangneo lesado. Este contato com o colgeno inicia a adeso plaquetria, o ato em
que as plaquetas individualmente aderem ponta lesada do vaso. Para essa adeso plaquetria ocorrer de
forma efetiva, necessrio uma protena do plasma denominada fator de Von Willebrand.
Assim que as plaquetas aderem superfcie do vaso, tornam-se ativadas. Estas plaquetas ativadas
perdem sua forma normal de disco e intumescem, tornando-se mais esfricas. Ao mesmo tempo, formam
numerosas projees espiculares, tornam-se pegajosas e comeam a se unir uma s outras. Este processo
chamado de agregao plaquetria. Por causa do grande nmero de plaquetas presentes no sangue
circulante, um tampo de plaquetas forma-se em poucos segundos para estancar o sangramento, em casos
de pequenas leses.
O tampo plaquetrio, embora seja um agregado frouxo de plaquetas, pode interromper o
sangramento, se o orifcio do vaso lesado for pequeno. Nas leses maiores, porm, o tampo plaquetrio
que se formou, apesar de aumentar e se organizar, ainda instvel e pode ser arrastado pela corrente
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Nome
Fibrinognio
Protrombina
Tromboplastina / fator tecidual
Clcio
Ativador protrombina
Proconvertina
F.anti-hemofilico
Christmas
Stuart
Antecedente tromboplastnico do plasma
Hageman
Estabilizador de fibrina
A interao dos fatores da coagulao envolve reaes muito complexas. Todavia, a reao inteira pode ser
resumida nas duas equaes seguintes:
Protrombina _Tromboquinase + Clcio Trombina.
Fibrinognio __________ Fibrina.
O resultado final um cogulo de fibrina estvel para estancar a sangria e aps a dissoluo do cogulo
quando no mais necessrio.
VIAS METABLICAS DA COAGULAO
O processo de coagulao que leva formao do cogulo de fibrina envolve trs importantes vias
metablicas: a via intrnseca, a via extrnseca e a via comum.
A Via Extrnseca assim chamada porque um dos fatores da coagulao que a compe no est
presente na circulao sangnea. o fator III ou fator tissular (tromboplastina), que liberado quando o
vaso sangneo lesado. A tromboplastina age ativando o fator VII. O clcio necessrio para que ocorra
esta ativao. O fator VII ativado (fator VIIa) participa da ativao do fator X a fator Xa.
A Via Intrnseca composta por fatores essencialmente circulantes, ou seja, todos os seus fatores
esto presentes na circulao sangnea. Esta via iniciada quando o fator XII, o chamado fator de contato,
entra em contato com certas superfcies que o ativam para formar o fator XIIa. A reao final da via
intrnseca a ativao do fator VIII a fator VIIIa. Este ltimo, por sua vez, ativa, juntamente com o fator VIIa
(da via extrnseca), o fator X a fator Xa. A via intrnseca pode ser ativada pelo contato do fator XII com
vrias superfcies como, por exemplo, a agulha e a seringa ou o tubo de vidro usado durante a coleta de
sangue.
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Neste material, ser enfatizado os testes de TP, TTPA e Fibrinognio que avaliam o segundo tempo
da hemostasia e so comercializados pela Labtest.
TEMPO DE PROTROMBINA
O tempo de protrombina ou tempo de Quick realizado adicionando-se ao plasma descalcificado
pelo citrato, um excesso de fator tecidual (tromboplastina). Considerando que a protrombina convertida
em trombina num tempo uniforme, a adio de clcio com quantidade conhecida de cloreto de clcio produz
a coagulao do plasma. O tempo entre a adio do clcio e a coagulao chamado tempo de
protrombina.
O tempo de protrombina um teste para avaliar a via extrnseca e a via comum, ou seja, os fatores
VII, X, V, II e o fibrinognio. Assim, o tempo de protrombina estar aumentado em casos de deficincia de
fibrinognio e de qualquer um dos fatores mencionados anteriormente, em pacientes que fazem uso de
anticoagulantes, nas doenas hepticas e deficincia de vitamina K, pois os fatores II, VII e X so
dependentes desta vitamina.
O teste pode auxiliar no acompanhamento do uso de anticoagulantes e na avaliao do risco
cirrgico.
O tempo de protrombina ou TP, consiste na determinao do tempo de coagulao de um Plasma
citratado, aps a adio de tromboplastina (fator III) e de clcio, 37C. A adio de um excesso de
tromboplastina promover a ativao de todo o fator VII contido na amostra de plasma. O fator VIIa assim
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O Trombstab Ref. 45 Labtest composto por Citrato de Sdio Dihidratado 18,8 g/dL, ou seja:
1) 18,8 g_________________100 mL
X_____________________1000 mL
X = 188 g
2) 1 ____________________ 294,1 mol/L
X ____________________ 188 mol/L
X = 0,6392 mol/L
3) 0,6392 mol/L = 639,2 mmol/L
utilizado 1 gota (0,05 mL) de Trombstab Ref. 45 para 3 mL de sangue, o equivalente a uma diluio
de 1:60, ou 9 partes de sangue para 1 parte de citrato, o equivalente a uma diluio de 1:10. Corrigindo
as diluies, tm-se a relao 1:6. Assim:
4) 639,2 / 6 = 106,5 mmol/L
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APRESENTAO
Ref.
502.1 - Reagente 1
502.2 - Reagente 2
502-1/4
4 mL
6 mL
Temperatura Armazenamento: 2 - 8 C
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Metodologia:
Aplicao:
Amostra:
Volume de Reagente:
Volume de amostra:
Volume de Reagente:
Coagulomtrica
Manual, semi-automtico e automtico.
Plasma (colhido em citrato trissdico anidro 109 mmol/L 3,2%)
0,1 mL
0,1 mL
0,1 mL
CVa: 1,4%
REAGENTE DE TRABALHO
O uso dos reagentes se faz obrigatoriamente com aplicao bi-reagente.
O produto pode ser empregado para determinao do TTPA utilizando equipamentos automticos e
semi-automticos.
Os reagentes quando no abertos e mantidos nas condies propostas pelo fabricante, so estveis at
a data de expirao. Aps abertos sua estabilidade pode ser reduzida por diversos fatores como: ponteiras
mal lavadas introduzidas ao reagente, exposio prolongada do Reagente 1 ao ar atmosfrico e
temperatura ambiente (expor somente o necessrio para realizao dos testes).
ORIENTAES
Devido ao baixo custo do Reagente 2 (Cloreto de Clcio), foi adicionado um volume maior do que o
Reagente 1. Conforme a apresentao do produto, resultar em sobra do Reagente 2 o que no caracteriza
desvantagens ao cliente.
Consultar sempre as instrues de uso do produto.
INTERFERENTES
O TTPA pode estar aumentado em indivduos em uso de cido acetilsaliclico, aztreonam, ofloxacino,
metronidazol e fenitona.
A reduo do TTPA pode ser observada em indivduos em uso de anti-histamnicos, digitlicos,
contraceptivos orais, tetraciclina e estrgenos conjugados.
importante tambm que a amostra seja coletada, preparada e armazenada conforme orientaes no
item AMOSTRA nas Instrues de Uso.
Amostras ictricas, lipmicas e hemolisadas podem modificar os resultados de modo imprevisvel.
Materiais sujos (tubos e ponteiras), temperatura no controlada, contaminao dos reagentes e
amostras,
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APRESENTAO
Ref.
501.1 - Reagente 1
501-5/2
2 mL
Temperatura Armazenamento: 2 - 8 C
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Coagulomtrica - Quick
Manual, semi-automtico e automtico.
Plasma (colhido em citrato trissdico anidro 109 mmol/L 3,2%)
0,2 mL
0,1 mL
CVa: 2,0%
REAGENTE DE TRABALHO
O reagente apresenta-se liofilizado e deve ser preparado com o uso de gua prpria para laboratrio
(tipo l ou ll). Adicionar 2 mL de gua ao frasco, recolocar a tampa, homogeneizar suavemente e deixar em
repouso (entre 15 25 C) durante 15 minutos. Ante s de utilizar, hemogeneizar suavemente. No agitar por
inverso ou vigorosamente.
O produto pode ser empregado para determinao do TP utilizando equipamentos automticos e semiautomticos.
O reagente quando no aberto e mantido nas condies propostas pelo fabricante, estvel at a data
de expirao no rtulo. Aps aberto e reconstitudo, o reagente deve ser manuseado de acordo com as
boas prticas de laboratrio para evitar contaminaes de natureza qumica e microbiana que podem
provocar reduo da estabilidade.
O reagente reconstitudo estvel 7 dias entre 2 8C, 8 horas a 37C e 24 horas a temperatura
ambiente (entre 15 25C).
ORIENTAES
Preparo do Plasma de Referncia: obter atravs de misturas de plasmas citratados de, no mnimo, 3
indivduos sadios. No usar plasmas de portadores de doenas hepticas ou de mulheres grvidas ou em
uso de contraceptivos orais.
Deve-se obter o tempo do plasma referncia para cada lote de PT Hemostasis.
Manter registro dos lotes de PT Hemostasis e dos tempos do plasma de referncia.
INTERFERENTES
O TP pode estar aumentado em indivduos em uso de corticoesterides, contraceptivos orais (falhas na
excreo de sais biliares), asparaginase, clofibrato, eritromicina, etanol, tetraciclina, heparina e warfarin,
bem como na presena de EDTA.
A reduo do TP pode ser observada em indivduos em uso de anti-histamnicos, butabarbital,
fenobarbital, contraceptivos orais (diminuio da resposta aos anticoagulantes orais), vitamina K e cafena.
importante tambm que a amostra seja coletada, preparada e armazenada conforme orientaes no
item AMOSTRA nas Instrues de Uso.
Amostras ictricas, lipmicas e hemolisadas podem modificar os resultados de modo imprevisvel.
Materiais sujos (tubos e ponteiras), temperatura no controlada, contaminao dos reagentes e
amostras,
CLCULOS
R=
R: Relao
RNI = R
ISI
USO DA TABELA
Vide tabelas respectivas de cada lote.
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APRESENTAO
Ref.
503.1 - Reagente 1 (Tampo)
503.2 - Reagente 1 (Trombina Bovina)
503.3 - Reagente 1 (Plasma Referncia)
503-5/2
2 mL
2 mL
2 mL
Temperatura Armazenamento: 2 - 8 C
ESPECIFICAES
Metodologia:
Aplicao:
Amostra:
Volume de Reagente 2:
Volume de amostra:
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Coagulomtrica
Manual, semi-automtico e automtico.
Plasma (colhido em citrato trissdico anidro 109 mmol/L 3,2%)
0,1 mL
0,2 mL (amostra diluda 1:10 com R1).
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CVa: 5,4%
REAGENTE DE TRABALHO
O reagente 1 (Tampo) pronto para uso e deve ser utilizado na diluio das amostras, calibrador e
controles.
O reagente 2 (Trombina) apresenta-se liofilizado e deve ser preparado com o uso de gua prpria para
laboratrio (tipo l ou ll). Adicionar 2 mL de gua ao frasco, recolocar a tampa, homogeneizar suavemente e
deixar em repouso (entre 15 25 C) durante 15 min utos. Antes de utilizar, homogeneizar suavemente. No
agitar por inverso ou vigorosamente. O reagente reconstitudo estvel por 7 dias entre 2 8C, 24
horas entre 15 30C e 30 dias quando congelado na s primeiras 4 horas aps reconstituio
(congelar e descongelar uma nica vez).
O reagente 3 (Plasma Referncia) apresenta-se liofilizado e deve ser preparado com o uso de gua
prpria para laboratrio (tipo l ou ll). Adicionar 2 mL de gua ao frasco, recolocar a tampa, homogeneizar
suavemente e deixar em repouso (entre 15 25 C) d urante 15 minutos. Antes de utilizar, homogeneizar
suavemente. No agitar por inverso ou vigorosamente. O plasma reconstitudo estvel 8 horas entre 2
8C.
O reagente quando no aberto e mantido nas condies propostas pelo fabricante, estvel at a data
de expirao no rtulo.
O produto pode ser empregado para determinao do fibrinognio utilizando equipamentos automticos
e semi-automticos.
OBSERVAES
O resultado do paciente e do controle somente devem ser lidos dentro da curva de calibrao. Caso
contrrio, no considerar os resultados. Se o tempo de coagulao da amostra menor que o tempo de
coagulao da diluio 1:5 da curva de calibrao, repetir o teste diluindo a amostra 1:30, ler o resultado na
curva de calibrao e multiplicar o resultado por 3. Quando o tempo de coagulao da amostra maior que
o tempo de coagulao da diluio 1:30 da curva de calibrao, repettir o teste diluindo a amostra 1:3, ler o
resultado na curva e multiplic-lo por o,3. No utilizar diluio inferior a 1:3 porque a presena de
interferentes pode produzir resultados inexatos. Se o tempo de coagulao da diluio 1:3 maior que o
maior tempo de coagulao da curva de calibrao, o resultado deve ser reportado como menor que a
menor concentrao da curva de calibrao.
O reagente 1 possui aspecto turvo. Esta caracterstica uma vantagem exclusiva do produto Labtest que
utiliza a tecnologia PCT (Polmero Coloidal Tamponado), proporcionando aumento na caracterizao da
formao da fibrina.
Para realizao da curva, consultar as instrues de uso do produto. Em dosagens manuais, o cliente
deve traar a curva em papel log-log. Entretanto, para otimizar o uso do produto, est disponvel no site da
Labtest uma planilha para insero dos dados da curva e amostra, na qual os resultados so calculados
automaticamente.
INTERFERENTES
O fibrinognio pode estar aumentado em mulheres em uso de contraceptivos orais, em fumantes e em
mulheres grvidas. Como o fibrinognio uma das protenas de fase aguda, pode-se encontrar valores
elevados em processos inflamatrios.
Podem ocorrer redues do fibrinognio com o uso de clofibrato e dextran, no alcoolismo crnico e por
efeito de EDTA.
Nveis elevados de paraprotenas, anticorpos antitrombina e drogas que ativam o sistema fibrinoltico
podem interferir com a dosagem de fibrinognio.
Amostras ictricas, lipmicas e hemolisadas podem modificar os resultados de modo imprevisvel.
Materiais sujos (tubos e ponteiras), temperatura no controlada, contaminao dos reagentes e amostras;
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Troca de amostra;
Armazenamento inadequado.
Troca de laudos;
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REFERNCIAS
1..CLIA Requirements for Analytical Quality. Disponvel em http://www.westgard.com/clia.htm.
2. GUDER WG, et. al. Amostras: do Paciente para o Laboratrio. Git Verlag GMBH, 1996. Darmstad.
3. Labtest: Dados de arquivo.
4. Labtest: Instrues de Uso dos produtos da Linha Hemostasis.
5..NCCLS. Collection, Transport, and Processing of Blood Specimens by Venipuncture; Approved Standard
Fifth Edition. NCCLS document H3-A5, 2003.
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