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UNIVERSIDADE FEDERAL DE UBERLNDIA

INSTITUTO DE CINCIAS BIOMDICAS


CURSO DE BIOMEDICINA

KAROLINE MARTINS KAMIMURA

RELATRIO DE ESTGIO SUPERVISIONADO

Uberlndia
2015

KAROLINE MARTINS KAMIMURA

RELATRIO DE ESTGIO SUPERVISIONADO

Relatrio apresentado como requisito de


avaliao

na

disciplina

de

Estgio

Supervisionado II, pelo curso de Biomedicina


da Universidade Federal de Uberlndia.
Supervisor: Antnio Alves Duarte

Assinatura do supervisor

Uberlndia
2015
INFORMAES GERAIS

Nome da aluna (estagiria): Karoline Martins Kamimura


-Nmero de matrcula: 11011BMD012

Supervisor de estgio: Antnio Alves Duarte


-Formao: Doutor em Cincias Mdicas

-Cargo: Professor Adjunto do Departamento de Clnica Mdica da Universidade


Federal de Uberlndia (UFU)
Local: Laboratrio de Anlises Clnicas Hospital de Clnicas de Uberlndia
(Universidade Federal de Uberlndia)
-Ramo de atividade principal: Anlises Clnicas

Estgio:
-rea: Anlises Clnicas
-Perodo de realizao: 23/03/2015 a 22/07/2015
-Carga horria semanal: 30 horas
-Carga horria total: 500 horas

1. INTRODUO
O Hospital de Clnicas da Universidade Federal de Uberlndia (HCU-UFU)
possui 520 leitos e mais de 50 mil m2 de rea construda. o maior prestador de
servios pelo Sistema nico de Sade (SUS), em Minas Gerais, e terceiro no ranking
dos maiores hospitais universitrios da rede de ensino do Ministrio da Educao
(MEC), sendo referncia em mdia e alta complexidade para 86 municpios da macro
e microrregies do Tringulo Norte.

O presente estgio acontece no laboratrio de Anlises Clnicas localizado no


Hospital de Clnicas da Universidade Federal de Uberlndia (HCU-UFU), bairro
Umuarama, cidade de Uberlndia.
Os laboratrios de anlises clnicas so fundamentados em um processo
dinmico que se inicia na coleta do espcime diagnstico (amostra biolgica obtida
adequadamente para fins de diagnstico laboratorial) e termina com a emisso de um
laudo. Didaticamente, o processo pode ser dividido em trs fases: pr-analtica, analtica
e ps-analtica.
A fase pr-analtica consiste na preparao do paciente, coleta, manipulao e
armazenamento do espcime diagnstico, antes da determinao analtica. Ou seja,
engloba todas as atividades que precedem o ensaio laboratorial, dentro ou fora do
laboratrio de anlises clnicas.
A fase analtica inicia-se com a validao do sistema analtico, atravs do
controle da qualidade interno na amplitude normal e patolgica, e se encerra, quando a
determinao analtica gera um resultado. J a fase ps-analtica, inicia-se, aps a
gerao do resultado analtico, quantitativo e/ou qualitativo, sendo finalizada, aps a
entrega do laudo conforme legislao vigente.
Diversos exames so realizados no laboratrio. Esses so divididos em setores
de acordo com o tipo de tcnica a ser usada, do que quer se pesquisar e do tipo de
material que se tem disponvel. Os exames so separados e encaminhados, de acordo
com o que solicitado, aos setores, so eles: Coleta, Bacteriologia, Bioqumica,
Hematologia, Hormnios, Micologia, Parasitologia e Sorologia.
O estgio curricular realizado teve como principal objetivo a integrao na rotina
do laboratrio. Esta integrao na prtica laboratorial foi fundamental para percepo de
todas as responsabilidades que tem um Biomdico em um laboratrio de anlises
clnicas. A tabela 1, mostra o perodo de estgio em cada setor, que sero posteriormente
abordados, com suas rotinas, na sua respectiva ordem.
Tabela 1 Tempo de atividade em cada setor
SETOR
Coleta

INCIO
23/03/2015

TRMINO
17/04/2015

Bacteriologia
Micologia
Bioqumica
Hormnios

13/07/2015
20/04/2015
04/05/2015
11/05/2015
18/05/2015

17/07/2015
01/05/2015
08/05/2015
15/05/2015
22/05/2015

Parasitologia/Urinlise
Sorologia
Hematologia
Setor de escolha livre

25/05/2015
15/06/2015
29/06/2015
20/07/2015

12/06/2015
26/06/2015
10/07/2015
22/07/2015

2. DESENVOLVIMENTO
2.1 Coleta
Para realizar um exame laboratorial pode-se utilizar de diferentes tipos de
amostras, so elas: sangue, urina, fezes, medula ssea, secrees, raspados, esperma e
lquidos cavitrios.
Para cada tipo de amostra deve-se observar as condies em que devem ser
coletadas e armazenadas para garantir que no sejam somados mais fatores de erros a
anlises. Alm disso, deve ser feito a assepsia do local que ser coletada a amostra,
obedecendo para cada material suas devidas orientaes.
Deve-se orientar adequadamente o paciente quanto ao preparo a ser realizado
antes da coleta, o qual especfico para cada tipo de anlise. Antes da coleta tambm
necessrio obter informaes sobre aspectos referentes ao paciente que podem interferir
nos resultados.
O sangue um tipo de amostra muito utilizado para anlises hematolgicas,
bioqumicas, hormonais e sorolgicas, sendo para cada finalidade necessrio separar a
frao do sangue mais indicada (soro, plasma ou sangue total). Para sua coleta, deve-se
primeiramente explicar o procedimento ao paciente, identificando-o, observando os
exames solicitados e etiquetando os tubos necessrios. Posteriormente, deve-se calar as
luvas de procedimento, garrotear o membro a ser avaliado e selecionar o local de
puno.
A figura 1 mostra as veias mais usuais para a coleta de sangue.
Figura 1 Principais veias para puno

Fonte: http://4.bp.blogspot.com/-s658fX5ubmQ/UgOjJpOJMI/AAAAAAAAAXE/Dhjx9J8OQH0/s1600/locais-para-puncao.png

Feito a escolha da veia, realiza-se a assepsia da pele no local a ser puncionado


com algodo embebido em lcool 70%, aguardando o antissptico secar. Introduz em
seguida a agulha no local selecionado para puno e os tubos no sistema a vcuo, um a
um, de forma que o sangue escorra pela parede do tubo, aguardo o completo
preenchimento para a retirada. O tubo deve ser homogeneizado por inverso por de 5 a
8 vezes. Retira-se o garrote do brao do paciente, retira-se o tubo e s assim retira-se a
agulha do membro do paciente escolhido para puno. Por fim, pressiona-se o local de
puno com um algodo por em mdia dois minutos, descarta-se o algodo de acordo
com as normas de descarte, e coloca-se um curativo. Aps a coleta, o tubo enviado
para cada setor de acordo com o exame solicitado para anlise.
A coleta de sangue pode ser feita ainda com seringa e agulha, obedecendo o
mesmo procedimento acima mencionado e sendo o sangue aspirado de acordo com a
quantidade necessria. Ainda pode ser solicitada a coleta de sangue arterial, feita com
seringa e agulha previamente heparinizadas, e puncionando o sangue das artrias.
O laboratrio de anlises clnicas utiliza de tubos de plstico de coleta de
sangue, obedecendo a seguinte sequncia para coleta: tubos com citrato (tampa azul);
tubos para soro com ativador de cogulo, com ou sem gel separador (tampa amarela ou
vermelha); tubos com heparina, com ou sem gel separador de plasma (tampa verde);
tubos com EDTA (tampa roxa); e tubos com fluoreto (tampa cinza).
Embora no seja necessrio conhecer todos os detalhes sobre os procedimentos
analticos dos testes, essencial conhecer o tipo de amostra necessria para cada tipo de
anlise, a tabela 2 resume as informaes relativas ao correto tubo a ser utilizado, alm
de seu departamento, os testes e a frao do soro a ser utilizada.

Tabela 2 Principais informaes sobre os tubos de coleta de sangue

Fonte:http://image.slid
esharecdn.com/1-aula-bioquimica-1214166631307520-8/95/1-aula-bioquimicahttpbioquimicablogspotcom-10-728.jpg?cb=1246345043

A urina colhida principalmente para exames parasitolgicos, microbiolgicos


e bioqumicos. Ela pode ser de jato mdia, primeiro jato, ou urina de 24 horas, de
acordo com o exame solicitado.
A coleta de urina em adultos, recomendvel ser feita com a primeira urina da
manh ou 4 horas aps a ltima mico. Havendo suspeita clnica de infeco urinria
aguda, a urina pode ser coletada e processada em qualquer horrio. Deve-se lavar com
gua e sabo as mos e a regio genital e depois secar usando papel higinico.
Posteriormente, deve-se afastar os grandes lbios/prepcio e com a outra mo segurar o
frasco j destampado, coletando o primeiro jato, a poro mdia da urina (20-50ml) ou a
urina de 24 horas, em frasco estril (de acordo com o solicitado) e tampando o frasco
imediatamente. Em crianas ou em pessoas com dificuldade de mico, deve ser feita a
higiene da regio genital com gua e sabo, com a posterior fixao do saco coletor
conforme as recomendaes. Se esses no urinarem em um perodo de 30 minutos,
necessrio repetir a higiene e trocar o saco coletor.
Para as coletas dos outros materiais, importante seguir as recomendaes do
laboratrio de acordo com o exame a ser feito. As coletas de raspados, secrees,
medula ssea e lquidos cavitrios devem ser feitas por pessoas treinadas e com
experincia nesse tipo de coleta.

2.2 Bacteriologia
Controle de qualidade
1. Interno: utilizam-se cepas ATCC (cepa universal, padronizada) com resultados
conhecidos.
2. CQ para o aparelho VITEX 2 COMPACT: so colocadas amostras com cepas
conhecidas no aparelho, que as combina com o resultado existente no banco de
dados. Quando os resultados no batem, repica-se a amostra e repete a anlise. A
manuteno e limpeza do aparelho so feitas quando o mesmo pede.
3. CQ para o aparelho BAC / ALERT 3D: faz-se a calibrao e checa a temperatura
diariamente, porm outras manutenes so realizadas pelos tcnicos da empresa
responsvel pelo aparelho.
4. Externo: Control Lab: periodicamente a Control Lab envia ao laboratrio cepas
de microorganismos para que possam ser analisadas e identificadas pelo
laboratrio, sem que o mesmo saiba o resultado. Os funcionrios tambm
respondem um questionrio via internet e enviam o resultado para a empresa,
que em seguida responde se esto certos ou no.
importante ressaltar que a temperatura ambiente deve estar ideal para que os
aparelhos funcionem corretamente.
A bacteriologia o estudo das bactrias e dos testes para isolar e identificar estes
microrganismos.
A cultura de bactrias o crescimento de colnias de microrganismos induzida
pelo homem para se conseguir um elevado nmero de microrganismos, para estudar as
caractersticas da bactria como, a capacidade de crescerem em meio seletivo e o
aspecto das colnias. Essa realizada em meios de cultura que fornecem os princpios
nutritivos indispensveis ao seu crescimento.
Entre os principais componentes de um meio de cultura esto s fontes de
carbono e energia como os acares, as fontes de nitrognio, fsforo e sais minerais.
Outros componentes mais especficos podem ser encontrados em um meio para
determinados organismos, estes so os fatores de crescimento como as vitaminas,
aminocidos, etc. Alm disso, preciso fornecer condies ambientais para o
desenvolvimento dos microrganismos, como pH, presso osmtica, umidade,
temperatura, atmosfera (aerbia ou anaerbia), etc.

Um meio de cultura pode ser slido, semisslido ou lquido, em relao a


consistncia. Animados ou inanimados quanto natureza. E so ainda classificados
quanto a finalidade em rimrios, indicadores ou seletivos. Este ltimo o mais utilizado
na rotina e contem ingredientes que inibem o crescimento de certos microrganismos,
enquanto deixa outros se desenvolverem. A tabela 3 mostra as amostras e os seus
principais meios de cultura para inculo primrio.
Tabela 3 Amostras e meios de cultura para inculo primrio
Amostra
Meios para inculo primrio
Abcesso
AS, MC
Aspirado e Lavado brnquico
AS, MC
Aspirado de linfonodo
AS, MC, AC
Biopsia
AS, MC, AC, Tioglicolato
Escarro
AS, MC, AC
Esperma
AS, MC, AC
Fragmento de tecido
AS, MC, AC, Tioglicolato
Fezes
SS, MC, Caldo selenito
Humor vitreo, raspado de crnea
AS, AC, Tioglicolato
Lquor
AS, AC
Lquidos estreis
AS, AC
Secreo anal
AS, MC
Secreo abdominal
AS, MC
Secreo de cnula de traqueostomia
AS, MC
Secreo de ferida
AS, MC
Secreo de pele
AS, MC
Secreo purulenta
AS, MC
Secreo traqueal
AS, MC
Secreo nasal
AS, AC
Secreo endocervical
AS, MC, AC
Secreo cervical
AS, MC, AC
Secreo vaginal
AS, MC, AC
Secreo prosttica
AS, MC, AC
Secreo uretral
AS, MC, AC
Sedimento primeiro jato
AS, MC, AC
Secreo ocular
AS, AC
Secreo de ouvido
AS, AC
Secreo de orofaringe
AS, AC
Urina
AS, MC
Ponta de catter
AS
Sangue
Frasco de automao, AS, MC, AC
Aspirado de medula ssea
Frasco de automao, AS, MC, AC
Cultura de anaerbios
Frasco de automao, Tioglicolato
AC: gar sangue; AS: gar chocolate; MC: gar Mac Conkey.

H diferentes tcnicas para se efetuar uma semeadura, com ala de platina, com
swab, com ala calibrada, tcnica de isolamento, tcnica para antibiograma. Para anlise
de morfologia, estudo e identificao da espcie e gnero da bactria, normalmente fazse a tcnica de isolamento em meio de cultura (figura 2) que consiste em isolar as
colnias para que no haja interferentes e contaminaes cruzadas aps a incubao.
Figura 2 Tcnica de isolamento de bactrias

Fonte:http://4.bp.blogspot.com/_erbDaS5fdLg/RtnzBRk7NRI/A
AAAAAAAAA0/Uq4QKx_qj08/s200/esgotamento.jpg

A cultura de urina um dos mais frequentes testes pedidos no laboratrio de


bacteriologia. Os mdicos requisitam uma cultura de urina quando o paciente tem
sintomas de infeco do trato urinrio como: frequncia de mices, dor e sensao de
ardncia quando urinando, sangue na urina, s vezes febre e dor nos rins. As infeces
do trato urinrio ocorrem quando bactrias migram uretra acima para a bexiga, ou at
mais adiante, aos rins. O microrganismo mais comumente responsvel Escherichia
coli.
Outros microrganismos encontrados so Pseudomonas, Proteus, Klebsiella e
Staphylococcus saprophyticus.
A

amostra a ser semeada deve ser coletada

por jato mdio;

rotular frasco com identificao do paciente e a hora da coleta.


Para a semeadura da placa para contagem de colnias primeiramente flamba-se a
ala calibrada e esfria, posteriormente a mergulha na urina e faz uma estria vertical
sobre o centro da placa de gar, por fim faz estrias na horizontal cruzando com a estria
vertical (figura 3) e incuba a placa por uma noite a 35-37C.
Figura 3 Semeadura na placa de cultura de urina

Fonte: http://laudos.labclim.com.br/intranet/documentos/micro/PROMIC-0024-1.pdf

Aps o perodo de incubao as placas so removidas da estufa e observado o


crescimento. Quaisquer caractersticas especficas do crescimento, assim como cor da
colnia ou morfologia, hemlise no gar, devem ser amotadas. As colnias so contadas
e multiplicadas de acordo com o volume da ala utilizada. Uma contagem de
100000/mL ou maior evidncia de infeco urinria, tenha ou no o paciente sintomas.
Para a hemocultura, tambm frequentemente realizada no setor de
bacteriologia, o sangue coletado em bales contendo meio de cultura enriquecidos que
possibilitam o crescimento rpido a abundante de bactrias aerbias facultativas,
anaerbias e fungos. O teste usado no isolamento, identificao e determinao da
susceptibilidade a antimicrobianos de organismos potencialmente patognicos,
causando bacteremia.
Embora o sangue normalmente seja estril, nmeros moderados de
microrganismos podem penetrar na corrente sangunea sem causar danos. O sangue
pobre em ferro (que se encontra abundante dentro das hemcias), que necessrio para
o crescimento bacteriano. Porm, se o sistema imunolgico falhar, os germes podem
sofrer uma proliferao exacerbada ocasionando a condio de septicemia. Se as
bactrias causarem a lise das hemcias, o contedo hemoglobnico liberado resultando
numa fonte de ferro para a acelerao do crescimento populacional bacteriano. A
hemocultura um dos exames mais importantes do laboratrio de microbiologia, porque a
presena de um microrganismo bastante crtica e significativa.
Devido ao fato de numerosos casos de invaso da corrente sangunea serem
provocados por organismos da flora endgena do paciente, importante a diferenciao
entre uma hemocultura positiva e uma contaminada.

Aps a coleta, o sangue deve ser imediatamente inoculado assepticamente em


frascos (10% de sangue para o volume total do meio lquido). No setor de bacteriologia
do Laboratrio de Anlises Clnicas HCU-UFU, as amostras de hemocultura
automatizadas so colocadas no aparelho Bact Alert, permanecendo por 5 dias. Quando
sinalizadas como positivas pelo sistema, as amostras so repicadas em gar chocolate,
Mac Conkey e sangue, nos tempos 24h, 48h, 72h, e realizado o gram. O resultado do
gram avisado para o mdico assistente, e aps o crescimento das bactrias nos meios,
realizada a identificao e o antibiograma.
Para uma primeira identificao do microrganismo necessrio fazer um gram,
podendo ser feito previamente a cultura, utilizando o prprio material biolgico ou
selecionando uma colnia aps o crescimento da bactria no meio semeado, sempre
procedendo a colorao para anlise no microscpio.
A figura 4 mostra a diferenciao das colnias gram-negativas e gram-positivas
a partir de sua colorao, o mtodo baseado na capacidade das paredes celulares de
bactrias gram-positivas de reterem o corante cristal violeta no citoplasma durante um
tratamento com etanol-acetona enquanto que as paredes celulares de bactrias gramnegativas no o fazem, permanecendo rosado.

Figura 4 Colnias gram positivas e gram negativas

Fonte: http://www.infoescola.com/wp-content/uploads/2010/02/GRAM.jpg

A tcnica de colorao de BAAR (bacilos lcool-cido resistentes) feita para


identificao de micobactrias que no se coram pela colorao de gram normalmente
utilizada, e presentes em lquidos biolgicos podendo indicar a presena de algumas
doenas graves como a tuberculose. Devido ao alto contedo de lipdeos, a parede

celular da micobactrias possui a singular capacidade de fixar o corante fucsina, de tal


modo que no sofre descolorao pelo lcool cido. Para tanto, a metodologia se baseia
na colorao para cido resistncia com carbolfucsina e tambm conhecido como
colorao de Ziehl Neelsen. As micobactrias coram-se em vermelho (fucsina) e o
fundo em azul claro (azul de metileno), como mostra a figura 5.
Figura 5 Colorao de BAAR

Fonte: http://anatpat.unicamp.br/Dscn67826+.jpg

Para identificao da bactria e os testes para deteco de resistncia a


antibiticos (antibiograma), utilizado o aparelho Vitek 2.
Os antibiogramas so realizados em bactrias isoladas de amostras clnicas
representativas de um processo infeccioso. Eles so indicados mais frequentemente
quando o agente causador pode pertencer a uma espcie capaz de exibir resistncia aos
agentes antimicrobianos mais frequentemente usados.
As diluies padronizadas da bactria de interesse so distribudas em cartes de
identificao e antibiograma. Estes so colocados no aparelho Vitek 2, e aps a
incubao a concentrao inibitria mnima medida e interpretada como sensvel,
intermediria ou resistente, de acordo com os critrios estabelecidos, e informada pelo
aparelho que tambm mostra qual a bactria da amostra de interesse.
2.3 Micologia
Controle de Qualidade:

1. Interno: diariamente realiza-se a limpeza do ambiente de trabalho, da capela,


microscpios, centrfuga e superfcies com lcool 70%. realizado o teste de
exausto da capela para ver se est funcionando, e a lmpada UV ligada 20
minutos antes de comearem os procedimentos. A cada 15 dias testa-se a capela
e a luz UV, colocando-se 2 placas de cultura abertas, por cerca de 30 minutos e
em seguida so incubadas por 24-48hrs. Se no crescer nada, a capela est apta
para o trabalho e funcionando adequadamente. A temperatura das estufas
checada diariamente e tudo anotado. Nos meios de cultura so semeados
material com cepas conhecidas, para ver se esto adequados.
2. Externo: a cada 3 meses a Control Lab envia amostras com cepas conhecidas
para serem realizadas anlises. Os resultados so enviados e conferidos. Se no
estiverem de acordo, refaz-se tudo.
Os exames micolgicos so utilizados para identificao de fungos que causam
micoses. Estes compreendem dois exames principais: o exame micolgico direto e a
cultura de fungos.
Os exames micolgicos diretos, so feitos diretamente sobre a amostra
biolgica que dever ser analisada. Para isso, a amostra preparada e colocada sobre
uma lmina e adicionado um clareador (NaOH 30%), logo em seguida recoberta com
uma lamnula e levada ao microscpio para uma primeira observao e pesquisa de
fungos. Esses exames so comumente feitos com amostras cutneas alm de pele, pelos
e unhas, em busca de dermatites causadas por fungos. No entanto, as pesquisas tambm
so feitas em secreo respiratria, medula ssea, amostra de tecido, urina, exsudatos e
lquor.
Para a pesquisa direta de fungos no lquor, normalmente se faz duas lminas. O
material deve estar em quantidade adequada (3 a 5 mL) para recuperao de fungos,
entretanto quando em quantidades menores devem ser processados. Para a concentrao
dos fungos necessria uma centrifugao do material, com utilizao do sedimento.
Deve-se utilizar uma gota do sedimento para fazer um preparo com tinta da China
(nanquim) para pesquisa de Cryptococcus neoformans, alm de outra lmina do lquor a
fresco. Pela morfologia caracterstica do fungo, a pesquisa direta na amostra com a tinta
da China (nanquim) permite identificar com alta especificidade sua presena (figura 6).
Alm de permitir firmar o diagnstico de meningite criptoccica, doena com alta

prevalncia em pacientes portadores de diversos tipos de imunodepresso, os portadores


de SIDA especialmente.
Figura 6 Cryptococcus neoformans em pesquisa direta no lquor

Fonte:https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/6/6f/Cryptococcus_neoformans_us
ing_a_light_India_ink_staining_preparation_PHIL_3771_lores.jpg

A colorao de Wright uma colorao utilizada em todos os casos de pesquisa


de fungos em que o material for fragmento ou bipsia de tecido. Ela ideal para
evidenciar fungos intracelulares. Esta colorao tambm utilizada para a pesquisa de
Histoplasma em esfregaos de medula ssea, sangue e creme leucocitrio. Tambm
utilizada para pesquisas de clulas gigantes multinucleadas, no diagnstico de herpes
em esfregaos de leses vesiculosas. A tcnica consiste em cobrir o esfregao com
corante de Wright por 3 minutos, adicionar igual volume de soluo tampo sobre a
lmina e deixar 7 minutos, lavar rapidamente e secar, observando ao microscpio.
A cultura de fungos, semeada nos meios de acordo com o tipo de amostra
biolgica. Os meios mais utilizados so o PBC ou Mycosel, Sabouraud com antibitico
e Sabouraud sem antibitico.
No gar Mycosel, a cicloheximida, um dos componentes do meio, serve para
selecionar dermatfitos a partir do material de investigao contaminado.
O gar Sabouraud um meio com nutrientes que favorece o crescimento de
diversos fungos leveduriformes e filamentosos. Utiliza-se, portanto, para o cultivo e
crescimento de Candidas e fungos filamentosos, particularmente associados a infeces
superficiais. adicionada antibitico ao meio para impedir o crescimento de algumas
bactrias e estas no inibirem o crescimento dos fungos, os quais deseja se fazer a
identificao.

As amostras so colocadas em estufas, em temperaturas recomendadas para cada


tipo de cultura, e observadas continuamente para verificao do crescimento dos fungos.
Alguns outros gares como gar arroz, gar batata, gar fub e gar niger podem
ser utilizados, a partir do que solicitado como pesquisa e dependendo das necessidades
dos tcnicos do setor.
As cepas de Candidas, aps o crescimento, podem ser identificadas no
Chromagar. Para isso, basta dividir a placa que contm o gar, e inocular as cepas
separadamente. Cada espcie de Candida produz uma colorao diferente quando
analisadas aps seu crescimento, facilitando a identificao das mesmas.
Para de fungos em hemocultura a amostra fica 15 dias no aparelho BactAlert, e em caso
de positividade feito um exame direto da amostra e posterior cultura de fungos. Para a
cultura, semeia-se o sangue no Sabouraud sem antibitico, uma vez que podem crescer
fungos filamentosos.
As micobactrias so microrganismos exigentes em seu crescimento, devendo
ser cultivados em meio rico em glicerol e asparagina como fonte de carbono e
nitrognio. O meio de Lowestein-Jensen ideal para o seu crescimento. Um resultado
negativo s liberado aps 8 semanas de sua semeadura. A pesquisa para micobactrias
(BAAR) feita atravs da colorao de Ziel Nilsen, j descrita neste relatrio.
2.4 Bioqumica
A bioqumica o setor do laboratrio que tem aproveitado o avano tecnolgico
para medir e expressar quimicamente as variaes normais e patolgicas que ocorrem
nos seres vivos.
As principais dosagens so: glicose, colesterol total e fraes, triglicrides, cido
rico, uria, creatinina, protenas, enzimas, eletrlitos e funo heptica entre outros.
Esse setor praticamente todo automatizado. Existe uma manuteno diria,
semanal e mensal dos aparelhos do setor, que so muito sensveis. A primeira coisa a se
fazer no dia calibrar os aparelhos com reagentes prprios e em seguida passar os
controles necessrios, que so kits que vem prontos para cada exame. Reagentes e
solues de limpeza devem ser repostos quando acabam.
O controle externo exercido pela Control lab, que envia material mensalmente
para ser dosado no laboratrio, e este enviar seus resultados de volta, para ver se esto
em acordo. O controle de qualidade incorporado com grfico de Levey-Jennings e
regras de Westgard para assegurar a integridade dos resultados. Quando as regras so

infringidas, tudo verificado novamente, passam novamente os controles, executam


limpezas, procuram erros, at que o problema seja solucionado.
Quando o sangue chega ao setor, feita uma primeira triagem, na qual separa os
pedidos urgentes para que sejam feitos primeiro, alm de separar os tubos de
hemoglobina glicada (tubo roxo com EDTA) do restante dos tubos (tubo amarelo com
gel de separao). Os tubos com gel de separao (amarelos), so colocados na
centrfuga em mdia por 10 minutos para separao do soro, parte do sangue a ser
utilizada para os exames. Logo em seguida, feita uma segunda triagem desses, para
analisar se h fibrina no soro (que precisa ser retirada), e se o mesmo no se encontra
lipmico ou com hemlise.
A hemoglobina glicada serve para diagnosticar e acompanhar o diabetes, em
conjunto com os exames de curva glicmica e glicemia de jejum. Para os exames de
hemoglobina glicada, o setor conta com o aparelho Bio-rad D10, o qual possui controles
(alto e baixo) que so diariamente diludos e passados no aparelho para conferir a
dosagem. A metodologia utilizada a cromatografia lquida de alta performance
(HPLC), em que os tubos de sangue colhidos com EDTA so colocados nas racks para
leitura e posterior informao dos valores.
O princpio do exame de gasometria baseado no equilbrio cido-bsico do
sangue. Alm do pH, deseja-se tambm saber a presso parcial do oxignio e gs
carbnico no sangue. Os equipamentos atualmente utilizados, Cobas b121 e Cobas
b221, realiza calibraes automticas em horrios pr-determinados em sua memria.
Para o controle interno, uma soluo pronta passada no aparelho diariamente. A
metodologia de determinao para eletrodos seletivos, na qual o sangue arterial
colhido vindo em uma seringa sugado pelo aparelho e analisado.
Exames como dosagem de sdio, potssio, cloro, fsforo, ferro, magnsio,
triglicrides, uria, cido rico, fosfatase alcalina, creatinofosfoquinase, entre
outros, so feitos no aparelho Architect c8000, o qual possui trs metodologias:
colorimetria, imunoturbidimetria e potencimetro. Este aparelho utiliza-se do soro
(frao do sangue), para suas anlises. Aps a manuteno diria do aparelho, com
passagem dos controles, calibrao dos reagentes e verificao dos nveis dos reagentes,
estando tudo dentro do padronizado se iniciam as anlises. Os tubos com soro, que
passaram anteriormente pelas triagens so colocados em racks, cadastrados na interface
do computador com a mquina a partir de seus cdigos de barra, e colocados nos stios
especficos do aparelho para suas anlises.

A pessoas responsvel por liberar os resultados observa se os resultados esto


prximos da normalidade, e aqueles que apresentarem valores muito diferentes so
repetidos no aparelho determinado caso o tcnico ou o responsvel pelo setor acredite
ser necessrio.
Os exames manuais ou semi-automatizados, incluem urina de 24 horas, dosagem
de cloro no suor e preparo de lquor para contagem de clulas.
No lquor faz-se dosagens principalmente de protenas e glicose, uma lmina
corada para anlise das clulas, e parte do lquor centrifugada na citocentrfuga e o
sedimento colocado na cmara de Fucs-Rosenthal para contagem de leuccitos (global e
diferenciada) e hemcias.
2.5 Hormnios
O desequilbrio hormonal capaz de causar diversos incmodos fsicos,
doenas, sndromes e at cncer. Com a dosagem hormonal feita no setor de hormnios,
possvel solucionar ou minimizar os danos causados por esse desequilbrio.
O sangue chega ao setor em tubos com gel separador, protegidos da luz ou no, e
em tubos de coleta de sangue para exame de paratormnio. Os exames so cadastrados
pela responsvel do setor, e os tubos so centrifugados em mdia por 10 minutos para
separao do soro, frao do sangue a ser utilizada para os exames. Posteriormente,
feita uma primeira fase pr-analtica de inspeo, na qual observada se existe fibrina
no soro dos pacientes (em caso positivo esta deve ser retirada), assim como se h
hemlise ou lipemia que devem ser anotados em caso positivo.
O setor totalmente automatizado, e dois aparelhos so utilizados para as
anlises hormonais.
O aparelho Cobas e441, faz os testes de dosagem de troponina total, HCG,
dosagem de tireoglobulina, PSAtotal, PSAlivre, progesterona, testosterona, SHBG,
estradiol, paratormnio, ferritina, vitamina D, vitamina B12, CA-125, CA15-3, CA19-9,
AFPR, PCN. A metodologia empregada a de eletroquimioluminescncia. Diariamente
observa-se o nvel dos reagentes de limpeza, produtos slidos, esgotos, consumveis e
resduos slidos, substituindo e complementando tudo o que necessrio. Posteriormente,
feito um processo de finalizao na mquina para limpeza de tubulaes e
desproteinizao. Em seguida a checagem das calibraes feita, e se caso haja alguma
calibrao vencida refeita a calibrao (da rack e do lote, de acordo com o necessrio).
Por fim, passa os controles para a validao final. Para cada laboratrio utilizado dois

ou trs nveis de controle. Com a validao dos controles o aparelho est pronto para
uso. A validao feita seguindo a regra de Levey-Jennings (2 desvios padres). Com
as validaes em dia, a mquina est pronta para ser utilizada para os exames, para isso,
coloca-se os tubos nas racks e o aparelho faz os exames.
O outro aparelho utilizado no setor, o Immulite. Os testes no qual este aparelho
faz so: TSH, FT4, T4T, T3, ATA, ATG, CT5, PRL, IGE, alergia alimentar (SPE), GH
ou GRH, CEA ou ACA, FSH, LH, HPG e alergia a poeira (IPO). A metodologia
empregada a quimiluminescncia. Para manuteno e preparao do aparelho,
diariamente se entra no diagnstico da mquina e faz primeiramente a manuteno
prime DRD por 5 minutos para retirar as bolhas da tubulao. Posteriormente, ao ler os
reagentes, coloca para purgar 3x de 20 para lavar as probes de reagente e amostra.
Tambm faz o prime manual para retirar as bolhas das mangueiras de gua e substrato.
Em seguida, programa-se o aparelho para fazer os ajustes de calibrao e controles. Se
validar as calibraes e os controles de acordo com o especificado, as amostras podem
ser colocadas para os devidos testes. Ao final do dia faz a manuteno diria do
aparelho, so retirados os resduos slidos e lquidos, completados o recipiente com
tubos de reaes e o recipiente de substrato. Retira-se os ajustes e controles do freezer
para geladeira para serem passados no dia seguinte.
H determinados exames que no so realizados todos os dias, devido baixa
demanda (vitamina D, vitamina B12, progesterona, testosterona, exames especficos
para deteco de alergias), sendo realizados em dias propostos pelo laboratrio.
Todos os resultados passam por uma primeira aprovao dos tcnicos do setor, e
posteriormente so enviados a validao final do responsvel pelo setor.
2.6 Parasitologia e Urinlise
Controle de qualidade interno: so armazenadas no setor amostras de pacientes com
resultados conhecidos que servem como controle.
Controle de qualidade externo:
Recebimento da amostra e/ou slide da Control Lab:
1. Receber do setor responsvel (Bioqumica) as amostras da Control Lab;
2. Entregar para o responsvel pela anlise Supervisor do setor;
3. Passar orientaes necessrias ao responsvel do ms pela anlise da Control Lab;
4. Consultar no computador os slides (urina e/ou fezes) enviadas pela Control Lab.
Realizao do exame e/ou anlise do slide e registro de resultados:

1. Realizar o exame com a amostra de acordo com procedimentos utilizados no setor;


2. Chamar outros funcionrios do setor para discutir sobre a anlise caso surja
alguma dvida;
3. Registrar os resultados;
4. Analisar o slide, se surgir dvidas chamar colegas de setor e se persistirem as
dvidas procurar docentes da disciplina bsica de parasitologia;
5. Tiradas as dvidas, registrar os resultados;
6.

Passar os resultados para secretaria e enviar para a Control Lab;

7.

Imprimir resultados e arquivar no setor.


Na urinlise feito exame fsico, qumico e microscpico da urina, comumente
conhecido como E.A.S (Anlise do Sedimento Urinrio). O exame de urina fornece uma
ampla variedade de informaes teis no que se relaciona as doenas envolvendo os rins
e o trato urinrio inferior, bem como sobre algumas molstias extra-renais. Pode ser
utilizado para avaliao diagnstica de distrbios funcionais (fisiolgicos) e estruturais
(anatmicos) dos rins e trato urinrio inferior, bem como para acompanhamento e
obteno de informaes prognsticas. um dos exames de rotina mais simples e
valiosos de auxlio diagnstico. Os tipos de coleta da urina so: amostra de 24 horas,
amostra colhidas por cateter, puno suprapbica, jato mdio de mico espontnea e
amostras peditricas (uso de coletores de plstico).
No exame fsico deve ser observado a colorao e o aspecto. A cor da urina
devido a um pigmento denominado urocromo, que um produto do metabolismo
endgeno, produzido em velocidade constante. A colorao indica de forma grosseira, o
grau de hidratao e o grau de concentrao de solutos. O procedimento adequado
observar macroscopicamente a colorao da urina, que normalmente amarelo-claro,
amarelo-citrino, amarelo-escuro e mbar.
Algumas condies alteram a colorao da urina, so elas: presena anormal de
bilirrubina que a deixa amarelo-escuro ou mbar (com espuma amarela); doenas
hepticas que confere a colorao amarelo-esverdeado, castanho ou esverdeado; urina
com hemcias que a deixa desde rosa, vermelho; urina com hipria ou quilria que
confere a colorao branca e est relacionado com a obstruo linftica e ruptura dos
vasos linfticos; e medicamentos que conferem a colorao laranja, vermelha, castanha
ou verde de acordo com o tipo de medicamento utilizado.

O aspecto da urina refere-se transparncia da amostra de urina. A urina normal,


recm eliminada geralmente lmpida, podendo apresentar certa opacidade devido a
precipitao de cristais, presena de filamentos de muco e clulas epiteliais. O correto
procedimento observar visualmente a amostra homogeneizada num ambiente de boa
iluminao. Os tipos de aspecto observados so: lmpido, ligeiramente turvo, turvo,
ligeiramente floculada e floculada.
As principais substncias que provocam turvao so os cristais, leuccitos,
hemcias, bactrias, smen, linfa, lipdios, clulas epiteliais, muco, e contaminantes
externos (como talcos e medicamentos).
A determinao do exame qumico realizada em fita reativa que determina
semi-quantitativamente

presena

de

protenas,

glicose,

corpos

cetnicos,

sangue/ hemoglobina, bilirrubina, urobilinognio, densidade, nitrito, pH e leuccito


(figura 7).

Figura 7: Teste de urina pela fita reativa SIEMENS

Fonte:http://learn.parallax.com/sites/default/files/content/Reference/Urinalysis/MultistixUrinalysis
ColorKey.png

A fita mergulhada na urina, seca-se o excesso e feita a leitura no aparelho da


Siemens prprio para a leitura. Os resultados so anexados no pedido, e posteriormente
faz-se a confirmao pela anlise do sedimento no microscpio.
Para a anlise do sedimento, a urina centrifugada por 5 minutos a 1500 rpm, e
descartado o sobrenadante. O sedimento homogeneizado e 0,2 mL colocado em uma
lmina e recoberto com uma lamnula. Observa-se e anota a presena de hemcias,
leuccitos, cilindros, clulas epiteliais, muco e de flora bacteriana. Pode ainda haver a
presena de espermatozoides, Trichomonas sp, leveduras, hifas e pseudohifas, corpos
graxos e gotculas de gordura que devem ser relatados em caso positivo.
Parasitologia clnica o estudo dos parasitas ou doenas parasitrias, dos
mtodos de diagnstico, dos controles das doenas parasitrias e a relao ntima e
duradoura entre os indivduos de duas espcies distintas a nvel histolgico. Na maioria
dos casos um organismo (o hospedeiro) passa a constituir o meio ecolgico que vive no
outro organismo (o parasito). A parasitologia engloba: os filos Protozoa (protozorios),
do reino Protista e Nematoda (nematdes), Annelida (aneldeos), Platyhelminthes
(platelmintos) e Arthropoda (artrpodes), do reino Animal.
Os principais mecanismos de transmisso de parasitoses so: fecal-oral,
penetrao ativa pela pele, vetorial ou por hospedeiros intermedirios, contato pessoal e
congnito.

Na clnica a amostra mais frequentemente examinada so as fezes, nas quais


encontra-se, mais comumente as seguintes formas:

Nematodas: larva e ovo de Ascaris lumbricoides; ovo de Trichurus trichiura;


ovo de Ancylostoma duodenale e Necator americanus; ovo de Enterobius

vermicularis; larva de Strongyloides stercoralis;


Protozorios: cisto e trofozoto de Entamoeba histolytica; Entamoeba coli;

Iodamoeba butschlii; Endolimax nana; Giardia lamblia;


Cestoda: ovo de Hymenolepis nana; Taenia solium e Taenia saginata;
Trematoda: ovo de Schistosoma mansoni.
O exame parasitolgico de fezes existe no sentido de identificar essas formas

parasitrias nas fezes e, por seguinte, diagnosticar os parasitos intestinais causadores de


doenas. Para isso conta com inmeros mtodos existentes para a anlise de parasitas
intestinais. Todavia de um modo geral, executa-se, de rotina, no setor de parasitologia
clnica, alguns mtodos de concentrao de ovos e cistos, que possibilitam a
identificao de cistos de protozorios e ovos de helmintos, tais como: mtodo de
Hoffmann Pons e Janer e mtodo de MIF. Algumas delas, aprendidas durante o estgio
de anlises clnicas, sero descritas abaixo.
No exame macroscpio, observa-se a consistncia das fezes (slidas, pastosas,
lquidas), odor, presena de elementos anormais, como muco ou sangue, e de vermes
adultos ou proglotes.
As preparaes a fresco so preparadas de fezes frescas ou fixadas (preservadas).
Nas fezes a fresco de amostras fixadas possvel observar cistos, ovos e larvas, mas no
trofozotos. Para isso usa-se fezes frescas onde possvel observar a mobilidade dos
trofozotos mveis (figura 8).

Figura 8 Preparo e exame de lminas a fresco

O mtodo de Hoffman, Pons e Janer indicado para pesquisa de ovos e larvas de


helmintos e, sobretudo, para a pesquisa de ovos de Schistosoma mansoni. De fcil
execuo o mais empregado nos laboratrios clnicos. uma tcnica usada para
concentrar os parasitas em uma amostra e aumentar a probabilidade de detectar os
parasitas ao mesmo tempo que diminui a quantidade de resduos das fezes. A tcnica
consiste em: triturar bem aproximadamente 2g de fezes, em um frasco plstico
descartvel, acrescentar 20mL de gua; filtrar a suspenso para um clice cnico de
200ml de capacidade, por intermdio de gaze cirrgica dobrada em quatro; os detritos
retidos so lavados com mais 20 mL de gua agitando-se constantemente, devendo o
lquido da lavagem ser recolhido no mesmo clice; completar o volume do clice com
gua; deixar essa suspenso em repouso durante duas a 24 horas.
O mtodo de MIF feito utilizando a metodologia de sedimentao por
centrifugao. Adiciona-se formol 2,5% as fezes, mistura e observa se h presena de
proglotes ou outras estruturas, notificando em caso positivo. Filtra de 4 a 6 mL da
suspenso de fezes com a ajuda de uma gaze, colocando-as em um funil e adicionando 5
mL de ter etlico. Agita na centrfuga por 2 minutos a 2000 rpm, formando quatro
camadas no tubo: ter, dendritos de fezes, conservante e sedimento. Descarta-se as
primeiras camadas, deixando somente o sedimento, onde encontra-se os ovos e
trofozotos de helmintos. Acrescenta-se 2 ou 3 gotas de lugol, inverte o tubo numa
lmina e cobre com uma lamnula para examinar no microscpio num aumento de 400x.
Para o registro dos resultados, um carimbo (figura 9) utilizado, sendo marcado
um X se h presena dos parasitas listados.

Figura 9 Carimbo para expresso de resultados do exame parasitolgico

Fonte: http://www.hc.ufu.br/sites/default/files/POP-PARAUR-24.pdf

Outro exame realizado no setor, a pesquisa de gordura fecal, exame de


referncia no laboratrio de parasitologia, uma vez que o nico laboratrio da regio a
fazer esse exame. A gordura fecal determinada pelo mtodo de titulao de Van de
Kamer et al. Por esse mtodo, colhida as fezes de um perodo de 72 horas
consecutivas, seguindo uma dieta alimentar de acordo com a orientao mdica e
conservao das fezes no congelador. Inicialmente, se faz uma anlise macroscpica
observando cor, consistncia, forma e volume das fezes. Posteriormente, as fezes sero
homogeneizadas no liquidificador, e uma alquota dever ser transferida para um
Erlenmeyer de 125 mL. Os triglicerdeos das fezes so inicialmente saponificados por
ao de uma soluo alcolica de hidrxido de potssio a 5% e deixados na geladeira
em repouso por 24 horas. A seguir, o contedo homogeneizado e levado a ebulio
durante 20 minutos usando o condensador de refluxo, sendo resfriado em seguida.
Posteriormente, acidificado com cido clordrico diludo, para liberao dos cidos
graxos dos sabes formados na saponificao. Os cidos graxos so, ento, extrados
com ter de petrleo, deixados em repouso por 40 minutos, sendo posteriormente
retirada uma alquota de camada etrea que ser colocada em um Erlenmeyer junto com
lcool etlico e azul de timol. Por fim, a titulao feita com soluo alcolica de
hidrxido de tetrametilamnio sulfrico, observando a inverso de cor (amarelo para
verde ou azul) e anotando o volume gasto para uma posterior mdia de 3 amostras
feitas. O teor de gordura expresso em gramas de cido esterico em 24 horas.
O espermograma um exame funcional do esperma, composto por um
complexo de exames fsico-qumicos e morfolgicos. O exame feito por anlises
macroscpicas; exame microscpio; diferencial de leuccitos; morfologia estrita,
avaliao de vitalidade e motilidade; e bacterioscopia (gram) (figura 10).

Figura 10 Expresso de resultados do espermograma

Fonte: http://www.hc.ufu.br/sites/default/files/POP-PARAUR-05.pdf

2.7 Sorologia
O setor de sorologia um setor semi-automatizado. Entre os testes
automatizados se encontram HIV Ag/Ac, Citomegalovrus IgM e IgG, Toxoplasmose
IgM e IgG, Rubola IgM e IgG, HBsAg, CORE, CORE-M, HBe, Anti-HBe, HAVAb,
HCV, HIV, Digoxina, Fenitona, Fenobarbital e Carbamazepina.
O sangue colhido em tubos com gel separador de cogulo (tubo amarelo), e
quando chega ao setor diretamente centrifugado para separao do soro, frao do
sangue a ser utilizada para os exames. feita uma triagem inicial, observando se h

presena de fibrina e hemlise no soro, e logo aps os mesmos so colocados em uma


rack para as anlises no aparelho ou separado para os testes manuais.
O setor conta com dois aparelhos principais, as quais passam por um controle de
qualidade interno (diariamente) e externo (trimestralmente Control Lab). A calibrao
dos aparelhos feita de forma individual para cada exame, podendo ser semanalmente,
quinzenalmente ou mensalmente, de acordo com a necessidade do aparelho. Depois que
o aparelho est calibrado, todas as manhs, a soluo controle colocada, gera um
resultado apresentado na forma de grfico Levey-Jennings, que se for condizente com
os valores esperados, o aparelho est pronto para uso. Se no estiver dentro do desvio
padro, prximo a mdia, tenta-se encontrar o erro, e vai passando o controle
novamente. Cada exame tem o seu controle, e a quantidade certa de nveis de cada
controle.
O aparelho Architect i1000 o mais utilizado pelo setor, o qual faz todos os
exames automatizados. Este aparelho usa como metodologia para realizao dos testes
um imunoensaio de micropartculas por quimiluminescncia. Em caso de valores de
referncia abaixo ou acima do pr-determinado para os exames de Toxoplasmose,
Rubola e Citomegalovrus, estes so confirmados no aparelho Vidas, no qual utiliza um
mtodo imunoenzimtico com uma deteco final em fluorescncia (ELFA).
Dentre os exames manuais, o V.D.R.L til para o diagnstico e
acompanhamento da teraputica, atravs de variaes de ttulos, em pacientes com
Sfilis. A amostra em anlise colocada em contato com uma suspenso antignica de
VDRL em uma lmina apropriada, e submetida a um processo de rotao mecnica por
4 minutos. Durante este tempo, as partculas de colesterol revestidas com cardiolipina e
lectina iro flocular caso a amostra contenha reaginas, floculao que uma vez formada,
forma grumos visveis ao microscpio, ou permanecero livres em suspenso no caso de
a amostra no conter reaginas.
A hemaglutinao passiva para Chagas, consiste em outra tcnica manual
usualmente empregada no setor. Na hemaglutinao so utilizadas hemcias
formolizadas com protenas antignicas adsorvidas em sua superfcie. Essas hemcias,
que podem ser chamadas sensibilizadas, quando expostas ao anticorpo anti a protena
adsorvida em sua superfcie, ficam em suspenso, observando-se a formao de um
manto ou tapete, formado pela malha de imunocomplexos Ag-Ac, que impede o
depsito das hemcias, pela fora da gravidade, no fundo da placa (figura 11).

Figura 11 Teste de hemaglutinao

Fonte: http://bvsms.saude.gov.br/bvs/publicacoes/cd07_08.pdf

O teste rpido para deteco de HIV, feito utilizando o teste


imunocromatogrfico. O teste consiste em pipetar a amostra de soro na cavidade da
amostra na placa-teste (figura 12). O HIV presente na amostra, liga-se ao conjunto
anticorpo monoclonal anti-HIV, formando um complexo antgeno-anticorpo. Este flui
pela rea absorvente da placa-teste indo se ligar aos anticorpos anti-HIV na rea de
reao positiva, determinando o surgimento de uma banda colorida. A mistura da reao
continua a fluir atingindo a rea controle.
Figura 12 Placa-teste para teste rpido de HIV

C: controle; T: teste; S: soro


Fonte:http://www.compresaude.com.br/media/catalog/product/cache/1/image/9df78eab33525d08d6
e5fb8d27136e95/i/m/image4-hiv.jpg

Os anticorpos heterotrficos, associados a mononucleose infecciosa so


detectados por sua capacidade de aglutinar os eritrcitos de cavalo, neutralizando

simultaneamente os anticorpos no associados a mononucleose (anticorpos de


Forssman) com extrato de rim de cobaia. Coloca-se uma gota da amostra inativada em
uma lmina e adiciona-se uma gota de reagente homogeneizado, observando os
resultados dentro de 2 minutos. A aglutinao se visualiza macroscopicamente.
Outros exames para doenas autoimunes, como lpus, so feitos no setor
seguindo os procedimentos operacionais padres (POPs) e as instrues dos kits para os
mesmos, e utilizando a metodologia de imunofluorescncia indireta (IFI). Em caso
positivo dos exames, outras metodologias so necessrias para confirmao, feitas em
laboratrio externo. Entre os exames se encontram o FAN, ANCA, anticorpo anti-ssa,
anticorpo anti-DNA, anticorpo anti-cardiolipina, entre outros.
2.8 Hematologia
Hematologia o ramo da biologia que estuda o sangue. A Hematologia estuda os
elementos figurados do sangue: hemcias (glbulos vermelhos), leuccitos (glbulos
brancos) e plaquetas. Estuda, tambm, a produo desses elementos e os rgos onde
eles so produzidos (rgos hematopoiticos): medula ssea, bao e linfonodos.
A seo de hematologia primariamente responsvel pelo exame dos elementos
figurados do sangue. Estes podem ser qualitativos, como a observao da aparncia das
clulas sanguneas. Ou os testes podem ser quantitativos, com na execuo das
contagens de clulas.
O laboratrio de hematologia executa testes para detectar e monitorar
tratamentos de anemias, leucemias e desordens hereditrias do sangue, como a
hemofilia. Os efeitos de certos tratamentos, como a quimioterapia contra o cncer,
podem ser determinados por testes hematolgicos.
Os exames utilizados na investigao hematolgica incluem:
Hemograma
Mielograma
Velocidade de hemossedimentao (VHS)
Tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA)
Tempo de protrombina (TP)
Fibrinognio
Dmeros-D
Dosagens de fatores de coagulao, entre outros.

O Controle de Qualidade Interno feito atravs de kits comprados prontos dos


fabricantes dos aparelhos utilizados no setor e devem ser passados nos mesmos todos os
dias pela manh, antes que qualquer exame seja feito. Ao passar o controle no aparelho
gerado um grfico, com os valores sucessivos encontrados em cada dia, esses
controles devem estar dentro do desvio padro preconizado. Os aparelhos tambm
precisam ser calibrados de tempo em tempo. A calibrao consiste em colocar no
aparelho uma soluo de calibrao, com valores conhecidos, referenciados, o que ir
ajustar o aparelho, deixando pronto para uso. Tambm importante ressaltar que os
aparelhos devem ser limpos, com solues prprias de limpeza, e cada um com sua
particularidade.
O Controle de Qualidade Externo, se baseia em utilizao de amostras
enviadas pela Control Lab nos devidos aparelhos, devendo os responsveis processar as
mesmas e enviar o resultado de volta a empresa. feita uma conferncia de resultados,
verificando se o aparelho est funcionando corretamente.
A triagem o primeiro e mais importante passo desse setor, onde o volume de
sangue no tubo tem que ser o correto e no pode haver coagulaes na amostra. As
amostras aps analisadas so armazenadas de um dia para o outro e depois descartadas.
A figura 13, mostra o fluxograma de realizao das tarefas do setor, a partir do
momento da entrada do material para anlise.
Figura 13 Fluxograma de realizao das tarefas no setor de Hematologia

Hemograma um exame realizado que avalia as clulas sanguneas de um


paciente. As clulas circulantes no sangue so divididas em trs tipos: clulas vermelhas
(hemcias ou eritrcitos), clulas brancas (ou leuccitos) e plaquetas (ou trombcitos).
O

hemograma

contagem de hemcias,

uma

combinao

de

testes

contagem de leuccitos,

ndice de hemcias,

que

usualmente

hemoglobina,

inclui:

hematcrito,

contagem diferencial de leuccitos,

avaliao do nmero de plaquetas, observao morfolgica das clulas do sangue.


No setor de hematologia, o aparelho utilizado para o hemograma completo o
Cell - DYN 3700 CS. So utilizadas quatro determinaes independentes para obter os
parmetros hematolgicos: contagem ptica e dados diferenciais de WBC (leuccitos)
determinados no canal de fluxo ptico; contagem de impedncia de WBC determinada
num canal de impedncia eltrica; dados de RBC (hemcias) e PLT (plaquetas)
determinados num canal de impedncia eltrica; e hemoglobina determinada num
canal espectrofotomtrico. Durante cada ciclo do equipamento a amostra aspirada,
diluda, misturada e as determinaes para cada parmetro so executadas.
Para a contagem diferencial de leuccitos, utilizada a colorao de Wright.
As clulas devem ser contadas sendo segregadas pelos tipos at resultarem um nmero
de 100. O valor final a porcentagem do tipo de leuccito na amostra de sangue. So
diferenciadas em: neutrfilo segmentado, neutrfilo bastonete, eosinfilo, moncito,
basfilo e linfcito.
A velocidade de hemossedimentao (VHS) baseada no princpio da
sedimentao, o processo no qual as partculas slidas tendem a depositar no fundo de
um lquido. Em uma amostra de sangue anticoagulado e deixado em repouso as
hemcias vo gradualmente separar-se do plasma e depositam-se no fundo do
recipiente. A velocidade com que as hemcias se depositam ou caem conhecida como
velocidade de hemossedimentao. O laboratrio de hematologia conta com o aparelho
Microtest 1X para medio da VHS.
Para a realizao dos testes de coagulao, o tubo a ser utilizado na coleta
contm citrato de sdio, que sequestra o clcio presente, inibindo a coagulao. A
coagulao um processo do organismo que, em caso de leso, impede o
extravasamento sanguneo atravs da formao do cogulo de fibrina. Ela pode ser
ainda dividida em duas vias, a extrnseca e a intrnseca.
Para a anlise da sua funcionalidade no sangue realiza-se a Determinao do
Tempo de Protrombina (TP) que consiste em adicionar tromboplastina em excesso ao

plasma (descalcificado pelo citrato de sdio presente no tubo) e recalcific-lo com


quantidades conhecidas de cloreto de clcio padronizado. O tempo levado para que o
coagulo se forme o TP. Esse sistema escolhido para a investigao da via extrnseca,
podendo demonstrar deficincia dos fatores de coagulao I, II, V, VII e X e ainda
auxiliar no controle da teraputica anticoagulante.
Pode-se realizar a Determinao do Tempo de Tromboplastina Ativado
(TTPA), onde se adiciona ao plasma, clcio e cefalina (substituto das plaquetas), o
tempo consumido para a coagulao representa o TTPA. um mtodo importante para a
investigao das alteraes do mecanismo de coagulao envolvendo a via Intrnseca,
com exceo das plaquetas e fatores VII e XIII.
Para as duas anlises acima mencionadas, o setor conta com o aparelho Amax
190, que aps a centrifugao dos tubos com citrato de sdio, so colocados em racks,
cadastrados os exames na interface, e levados ao aparelho para as devidas anlises.
Para a realizao do teste de Coombs e teste ABO, em um tubo de ensaio so
colocadas 4 gotas das hemcias do paciente e completado com salina, realizada a
centrifugao e logo aps, o sobrenadante descartado. Esse procedimento repetido
mais trs vezes.
Para o teste ABO so feitos dois testes: o direto e o reverso para confirmar. Na
tipagem direta, se ocorrer aglutinao quando as hemcias do paciente forem misturadas
com o anti-soro A, o antgeno A est presente e o sangue tipado como A. Se ocorrer
aglutinao quando as hemcias do paciente forem misturadas com anti-soro B, o antisoro B est presente e o sangue tipado como B. Se ocorrer aglutinao em ambas as
misturas, tanto antgenos A e B esto presentes e o sangue tipado como AB. Se no
ocorrer aglutinao em qualquer uma das misturas, no h antgenos presentes e o
sangue tipado como O. testado tambm o fator Rh com o anti- soro D. Se ocorrer a
aglutinao ele Rh+.
Na tipagem reversa, se ocorrer aglutinao quando as clulas B forem
misturadas com o soro do paciente, existe anti-B presente e o sangue tipado como A.
Se a aglutinao ocorrer quando as clulas A forem misturadas, existe o anti-A e o
sangue tipado como B. Se a aglutinao ocorrer tanto quando clulas A quanto B
forem misturadas, existem anti-A e anti-B e o sangue tipado como O. Se no ocorrer
aglutinao quando A e B forem misturados, nem anti-A nem anti-B est presente, o
sangue tipado como AB.

Para o teste de Coombs so feitos dois testes: direto e indireto. No teste de


Coombs Direto anticorpos maternos que atravessaram a placenta podem ser detectados
ligados nas hemcias Rh positivas do beb. Para isso as hemcias do beb so coletadas,
lavadas para remoo de anticorpos no ligados, e incubadas com anti-imunoglobulina
humana. O teste denominado de Coombs Direto pois a aglutinao presente vai
indicar a presena dos anticorpos anti-Rh ligados nas hemcias do beb.
O teste de Coombs Indireto detecta a presena de anticorpos anti-Rh no
aglutinantes no soro dos indivduos Rh negativos. Neste teste o soro inicialmente
incubado com hemcias do tipo O Rh positivas, que se ligaro caso os anticorpos
anti-D estejam presentes. Utiliza-se hemcias do tipo O para evitar a ligao cruzada de
antgenos A ou B cujos anticorpos tambm podem estar presentes no soro testado. Aps
este passo, as hemcias so lavadas para retirar os anticorpos no ligantes e, em seguida
incubadas com anti-imunoglobulina que levar aglutinao das hemcias indicando a
positividade do ensaio.
O teste de falcizao realizado para pesquisa de anemia falciforme. Mistura-se
uma gota da amostra de sangue com uma gota de metabissulfido, coloca uma lamnula
por cima evitando a formao de bolhas, limpa o excesso com uma gaze limpa e fecha o
sistema com esmalte para no deixar oxignio entrar. Na circulao as hemcias de uma
pessoa com anemia falciforme esto normais e s apresentam forma de foice em
situao de hipxia. O metabissulfido retira o oxignio da amostra com que ele foi
misturado e o esmalte serve para manter esse ambiente.
Na eletroforese de hemoglobina, so avaliadas hemoglobulinopatias (no caso
de troca de aminocidos) e talassemias (deleo de gene anemia hipocrmica e
microctica). Uma fita de acetato de celulose colocada para hidratar no tampo fosfato
(pH: 8,4), e posicionada corretamente em um suporte para estica-la, colocando o suporte
na cuba de eletroforese com tampo fosfato. Em uma placa separada, mistura-se uma
gota de saponina (para hemolisar hemcias e liberar hemoglobina) com uma gota da
amostra do sangue. Aplica-se 10 microlitros dessa mistura na fita de acetato
horizontalmente, liga o sistema e deixar a amostra correr por 45 minutos. As amostras
correm do polo negativo para o polo positivo. Quando acabar a corrida, deve-se cortar
as bandas da fita e colocar cada uma em um tubo diferente preenchendo com gua
destilada e aguardando 24 horas para leitura em espectrofotmetro a fim de quantificar a
amostra. Deve-se ler do mais fraco para o mais forte, ou seja, Hemoglobina A2 para
Hemoglobina A (mais comuns). Os resultados so anotados e faz a porcentagem dos

mesmos em relao a hemoglobina total. No caso das talassemias, classificada como


talessemia beta caso haja aumento da Hb A2, e como talassemia alfa caso haja Hb H. Na
anemia falciforme h o aumento da Hb S.
2.9 Aulas de Patologia Clnica
Foram ministradas aulas de Patologia Clnica, junto com o 8 perodo do curso
de Medicina, no perodo de 24/03 a 21/07/2015. As aulas eram divididas em aulas
tericas e prticas. As primeiras eram ministradas as teras e quintas-feiras, com
contedos como: hematopoiese, hemograma, diagnstico diferencial de anemias,
doenas autoimunes, leucemias agudas e crnicas, hepatites virais, doenas de chagas,
entre outros.
Os dias das aulas prticas foram divididos por grupos, de segunda a quinta-feira,
sendo as minhas ministradas as quartas-feiras. Entre os contedos dessas, incluam
coleta de sangue, anlise do hemograma, coloraes hematolgicas, sorologia, FAN e
autoanticorpos, mielograma, microbiologia, hemocultura, entre outros.

3. CONSIDERAES FINAIS
As atividades no decorrer do estgio estiveram concentradas principalmente no
acompanhamento das tarefas feitas pelos tcnicos de laboratrio e responsveis pelos
setores. Tambm tivemos a oportunidade de fazermos as prprias atividades
desempenhadas pelos tcnicos, mas com a superviso de um responsvel. Alm disso,
assistimos as aulas de Patologia Clnica ministradas ao curso de Medicina (UFU),
ampliando ainda mais o nosso conhecimento a respeito do diagnstico laboratorial de
algumas doenas.
Como qualquer outro local de trabalho, o Laboratrio de Anlises Clnica
HCU-UFU possui suas limitaes que poderiam ser sanadas com maiores
investimentos por parte do governo. Isso acaba exigindo um pouco mais dos
profissionais que l trabalham, que atuam de forma a minimizar tais dficits de
materiais para no haver prejuzo nas atividades a serem desenvolvidas.
Assim, avalio com satisfao o estgio feito, tanto pessoalmente quanto
profissionalmente. Em todos os setores do laboratrio prevaleceu um tratamento de
respeito entre todos os profissionais e uma ateno e dedicao enorme com os
estagirios, sempre atentos quanto a nossa segurana e satisfao perante as
atividades realizadas.
Creio que como ponto negativo, foi o fato de acontecer uma greve dos
tcnicos de laboratrio durante o estgio, diminuindo as atividades dos mesmos, e
tirando um pouco a percepo da rotina dos setores.
Diante da diversidade de atividades desenvolvidas no Laboratrio de
Anlises Clnicas e tendo a profisso tarefas condizentes com o curso de Biomedicina,
a oportunidade de estagiar no local foi de grande valia para acumular conhecimentos
na rea, dando embasamento prtico e vivncia com profissionais que nos permitiram
acompanh-los em seu dia-a-dia profissional.

4. CONCLUSO
As anlises clnicas uma rea de grande valia para a sade, contribuindo de
forma significativa com os diagnsticos hospitalares e ambulatoriais, assim como para
populao em geral. Suas diversas reas mostram a importncia do conhecimento
geral que o biomdico adquiri ao longo do curso e no exerccio da profisso, e
tambm a necessidade de interdisciplinaridade desses conhecimentos para melhorar os
servios de sade em geral.

5. REFERNCIAS
. 2009. Hemaglutinao. Roteiro de aula de estgio no LAC-MAC: mdulo
imunologia.
. 2009. Reao de V.D.R.L (Aglutinao para diagnstico da sfilis). Roteiro de
aula de estgio no LAC-MAC: Mdulo Imunologia.
ANVISA-BRAZIL. RDC 302 - Technical Regulations for Clinical Laboratory
Operation. ANVISA; 2005.
Descrio dos meios de cultura empregados nos exames microbiolgicos.Disponvel
em: <http://www.anvisa.gov.br/servicosaude/microbiologia/mod_4_2004.pdf>. Acesso
em: 01 maio 2015.
ISO. Medical laboratories Particular requirements for quality and competence
ISO 15189. 2 Ed. 2007.
Neves, David Pereira, et al. 2005. Parasitologia Humana. 11 ed. So Paulo: Atheneu,
2005
POPs Setor de Bacteriologia. Disponvel: http://www.hc.ufu.br/conteudo/setor-debacteriologia>. Acesso em: 3 maio 2015
POPs Setor de Bioquimica. Disponvel em: <http://www.hc.ufu.br/conteudo/setor-debioquimica>. Acesso em: 14 maio 2015
POPs Setor de Coleta e Triagem. Disponvel em:
<http://www.hc.ufu.br/conteudo/setor-de-coleta-triagem>. Acesso em: 15 abr 2015
POPs Setor de Hematologia. Disponvel em: <http://www.hc.ufu.br/conteudo/setorde-hematologia>. Acesso em: 10 jul 2015
POPs Setor de Hormnios. Disponvel em: <http://www.hc.ufu.br/conteudo/setor-dehormonios>. Acesso em: 21 maio 2015
POPs Setor de Micologia. Disponvel em: <http://www.hc.ufu.br/conteudo/setor-demicologia>. Acesso em: 3 maio 2015
POPs Setor de Parasitologia e Urinlise. Disponvel em:
<http://www.hc.ufu.br/conteudo/setor-de-parasitologia-e-urinlise>. Acesso em: 09 jun
2015
POPs Setor de Sorologia. Disponvel em: <http://www.hc.ufu.br/conteudo/setor-desorologia>. Acesso em: 22 jun 2015
Sociedade Brasileira de Patologia/Medicina laboral. Disponvel em:
<http://www.sbpc.org.br>. Acesso em: 6 jul 2015.

Vaz, Adelaide J., Takei, Kioko e Bueno, Ednia Casagrande. 2007. Imunoensaios:
Fundamentos e Aplicaes. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan,2007.
Walters, Norma J., Estridge, Barbara H. e Reynolds, Anna P. 1998. Laboratrio Clnico:
Tcnicas Bsicas. Porto Alegre: Artmed, 1998.