Identificacin de las

bacterias
Corineformes
Janet Salazar L.
Bacteriloga
IUCMde A.

BACILOS GRAM POSITIVOS

NO FORMADORES DE
ESPORAS

CLASIFICACIN DE LAS BACTERIAS

Reino: Mneras.

miembros son Procariotas (celulas sin ncleo)

Phylum: BXIV Actinobacteria
Clase: I Actinobacteria
Subclase: V Actinobacteridae
Orden: I Actinomicetales
Suborden: VII Corynebacterienae
Familia: I Corynebacteriaceae
Genero: Corynebacerium

BACILOS GRAM POSITIVOS

CORYNEFORMES
Genero korynebacterium

Del Griego Koryne, porra o clava;

bakterion bacilos pequeos.
Est compuesto por 59 especies, de las cuales solo 36
son de importancia mdica.
La pared celular de las corynebacterias

arabinosa, galactosa, cido Meso-diaminopimelico y

cadenas cortas de cido
micolico.

Los grnulos meta cromticos (inclusiones de

polifosfato) pueden ser vistos con coloraciones
especiales (Azul de metileno).
Las corynebacterias son AE o ANA facultativas.
Fermentan carbohidratos, produciendo cido
Lctico.
Los organismos son no mviles y catalasa positivo
crecen lentamente en medios enriquecidos.

1.Tincion de Gram
2.Catalasa
3.Prueba de
fermentacion u
oxidacion en medio
semisolido CTA ( agar
cistina tripticasa) o en
agar triple azucar hierro

movilidad
4. Reduccion de los
nitratos
5. Hidrlisis de la urea

1.Hidrlisis de la
esculina
2.Produccion de acido
partir de la glucosa,
maltosa, sacarosa,
manitol, y xilosa
3.Reaccion de CAMP

 En la tincin de Gram:

Bacilos Gram positivos

Algunos ligeramente
curvados, con lados no
paralelos, forma tipica de
porra o clava.
A partir de un medio lquido

se ven:
Solos, en pares, en forma de
V o Y, en palizadas o en
grupos ( letras chinas).

Corynebacterium diphtheriae

CORYNEBACTERIUM DIPHTHERIAE
El Dx. de la difteria
es ante
clnico.
TOMA
DEtodo
MUESTRA
La mta. se toma con aplicador de algodn
o dacron de varias reas inflamadas de la
nasofaringe.
Si la membrana esta presente y pude ser
removida, esta mta. Es de mayor valor.
Colocar en un medio de transporte
semislido (Amies). Enviar rpidamente al
lab. para cultivo.
Hacer un extendido y debe
ser teido con azul de metileno de Loeffler.
La sensibilidad del examen microscpico es

CORYNEBACTERIUM DIPHTERIAE
Es un bacilo pleomorfico, Gram

positivo, irregular, con grnulos

meta cromticos, inmvil, no
capsulado, no esporulado, con
una pared rica en lpidos.
El aislamiento primario puede ser
AS plus (conteniendo 100 ug de
fosfomicina). Cto. A 35gc a las 48 h.
En atmosfera de CO2.
Los medios selectivos empleados
son el As Cystine-Tellurite o Agar
Tinsdale Tellurite.
El Tellurite inhibe el cto. de las

CORYNEBACTERIUM DIPHTERIAE
El AS Cystine-Tellurite

(CTBA) no es especifico
parael C. diphteriae ya que
muchas corinebacterias
reducen el Tellurito de K.
El mejor medio para el

cultivo directo de el C.
diphteriae es el medio
deTinsdale modificado.
Limitacin: vida media corta <
de 4 semanas suero de

C. diphteriae
EVALUACIN DE LOS CULTIVOS:
Si el aplicador viene seco o en silica gel, caldo Tood-

Hewitt con sangre de conejo steril al 3% Incube por una

noche.
Inocule los medios a 35 gc AE y en una atmosfera de

CO2.
Si hay colonias sospechosas haga un coloracin con

Azul de metileno de Loeffler Por un minuto. Lave con

agua y deje secar.
(Coloracin: disolver 0.3 gs de azul de metileno en 30

EVALUACIN DE LOS CULTIVOS

Si la morfologa celular es tpica de C. diphteriae envie un
reporte preliminar: El examen microscpico es presuntivo de
C. diphteriae. Esta tincin no es especifica para este
organismo.
Despus de 24-48 h. subcultive a una segunda
caja de CTBA para reaislar.

Examine las cajas a 24 y 48 h. para colonias

tipicas de C. diphteriae que son catalasa positivas y exhiben una
morfologa tipica en
el Gram, proceda a la Id. Por pruebas bioquimicas, enviar Lab.
Referencia para pruebas de toxigenecidad.

IDENTIFICACION Y SISTEMAS DE
TIPIFICACIN
La tincin de Gram sirve para determinar el genero

correcto, segn la morfologa celular.

La morfologa, tamao, pigmento, olor, y hemlisis de las

colonias son criterios importantes para la diferenciacin

de bacterias corineformes.
La prueba de la catalasa, prueba de fermentacin

oxidacin es mejor en agar cystina Tripticasa

(semislido).

TIPIFICACIN
Varios tipos de sistemas comerciales se emplean

para la ID de las bacterias corineformes.

Sistema API coryne.
Paneles de MicroScan.
El sistemaCrystal de BBL.
El sistema API coryne identifica 49 especies de

bacterias coryneformes.

DETECCIN DE LA TOXINA DIFTERICA

PRUEBA DE INMUNODIFUSIN DE ELEK
Se basa en la doble difusin de la
toxina difterica y la antitoxina en un
medio de agar.
Una tirilla de papel de filtro
saturada de la antitoxina es
colocada en el medio del cultivo y los
aislamientos.
Los aislamientos de C. diphteriae
son inoculados en forma de raya
en un angulo de 90 C.
La produccin de la toxina difterica
puede ser detectada a las 24 a 48

Listeria

DESCRIPCIN DEL GENERO

Las bacteria gnero
Listeria son bacilos Gram
positivos cortos,
regulares, no
esporulados ni
ramificados.
Se observan individual o
formando cadenas
cortas.
En cultivos viejos forman
filamentos de 6-20 mm
de longitud.

COLECCIN, TRANSPORTE Y
ALMACENAJE DE LAS MUESTRAS
MUESTRAS CLNICAS:
1. Casi siempre es aislada de sitios estriles.
(Ej. Sangre, LCR, L. amnitico, placenta o
tejido fetal).
1.Cultivar de inmediato a 35C o guardar a 4C

hasta 48 h.
2.Las muestras de MF pueden ser inoculadas

en 100ml de un caldo selectivo o en (PALCAM): Polimixinaacriflavin-cloruro de litio-ceftazidime esculin y dejar a TAm

hasta el envio. Si no es posible congelar o hielo seco hasta
el envio.

DIAGNOSTICO DE LABORATORIO
MICROSCOPIO:

Coloracin de Gram:
En el LCR pueden no verse los organismos ya que estos
estn en concentraciones 100 a 1000 veces menos que
otras bacterias que causan meningitis.
Hay que tener mucho cuidado con la interpretacin del
Gram ya que este organismo es semejante a
Corynebacterium,
S. pneumoniae, Enterococo, o con haemophilus si queda
decolorada la placa.

DIAGNOSTICO DE LABORATORIO
CULTIVOS:

La Listeria crece medios convencionales.

Sobre AS en 1 a 2 das de incubacin se
observa colonias redondas lisas y pequeas.
La hemlisis beta es dbil por lo tanto no es
observada inicialmente.
La movilidad caracterstica en medio lquido
o agar semislido ayuda para una ID. Preliminar.
Todos los bacilos Gram positivos aislados de
sangre y LCR deben ser ID. Para diferenciar
entre Corynebacterium (presumiblemente contaminante) y
Listeria.

DIAGNOSTICO DE LABORATORIO
PRUEBA DE LA MOVILIDAD EN CALDO
Gota suspendida:
Mtodo:
Inocule 1 o dos colonias de la bacteria
sospechosa en 5 ml de caldo ( nutritivo o
BHI).
Incube a temperatura de(22 a 25C) por dos
o 3 horas o hasta que la turbidez sea vista.
Coloque vaselina en las 4 esquinas de una
laminilla y coloque en el centro una gota de
la suspencin bacteriana, e invierta la laminilla
sobre una lmina.

DIAGNOSTICO DE
LABORATORIO
PRUEBA DE MOVILIDAD
EN CALDO
Prueba de la gota suspendida:
INTERPRETACIN:
Las celulas de la L. monocytogenes giran en
crculos a su alrededor, voltearse-dejarse caer, y
dar volteretas demostrando un tipo de
movilidad caracterstica.

DIAGNOSTICO DE LABORATORIO
DETECCIN RPIDA:
Comercialmente hay pruebas
disponibles para la
deteccin rpida de especies de
Listeria de caldos enriquecidos de
muestras de alimentos.
Las pruebas estn basadas

en inmunoensayos que usan

anticuerpos monoclonales.

DIAGNOSTICO DE LABORATORIO
IDENTIFICACIN:
IDENTIFICACIN DE GNERO
Una ID simple esta basada en las siguientes

pruebas:
Coloracin de Gram.
Movilidad en caldo y movilidad en medio
semislido.
Catalasa positiva.
Hidrlisis de la Esculina positiva.
VP y rojo de metilo son pruebas confirmatorias
D glucosa positiva.

DIFERENCIACIN DE EL GNERO LISTERIA

DE OTROS GNEROS

Del gnero Streptococcus puede diferenciarse por la

tincin de Gram (bacilo gram-positivo), la movilidad
(mvil), la prueba de la catalasa (positiva) y la
sensibilidad a la gentamicina (sensible).

De Erysipelothrix rhusiopathiae puede diferenciarse por

el crecimiento a 4C (crece), catalasa (positiva), la
movilidad (mvil) y la sensibilidad a la vancomicina
(sensible).
De las corinebacterias mviles, por la hidrlisis de la
urea (negativa), Voges-Proskauer (positiva) y por la
produccin de cido de la D-glucosa en condiciones
estrictamente AE (positiva).

IDENTIFICACIN DE ESPECIE
La identificacin de especie es
importante ya que todas los
miembros del gnero Listeria son
capaces de contaminar alimentos
pero slo L. monocytogenes
produce patologa en humanos.
Dicha identificacin se realiza
mediante unas pocas reacciones
bioqumicas y la capacidad de
producir hemlisis caracterstica
esencial para distinguir L.
monocytogenes de L. innocua, que

HEMLISIS
Slo tres especies son
hemolticas, L.
monocytogenes, L.
seeligeri y L. ivanovii.
Las dos primeras
producen una estrecha
zona de hemlisis, a
veces limitada al
dimetro de la colonia.

L. ivanovii muestra una

hemlisis amplia. La
prueba de CAMP es
positiva para L.
monocytogenes y L.
seeligeri en la proximidad
de una estra de
Staphylococcus aureus,
mientras que L. ivanovii
slo da positiva la prueba
de CAMP en presencia
de una estra de

DIAGNOSTICO DE LABORATORIO
PRUEBA DE CAMP:
Se coloca una raya
de la cepa de la ATCC de S. aureus
productor de la betatoxina en el centro del AS.
Inocule simples rayas de la
Listeria perpendiculares al
S. aureus.
Incubar AE a 35C por una
noche o por 6 horas en CO2.
Observe si hay una zona de
incremento de la beta hemolisis
en la union de la listeria y el S.

Diagrama de flujo para la identificacion de Listeria

monocytogenes
Identificacion a partir de un cultuiivo puro en agar sangre de cordero
(ASC)
Colonias beta hemoliticas
Coloracion de gram
Bacilos gram positivos

Catalasa Positiva

Motilidad a 22C: positiva(forma de sombrilla)

Motilidad a 37 C: positiva
Prueba de camp: positiva
TSI: A/A , gas(-), H2S (-)
Ureasa: negativa
Nitratos: negativo
Hidrlisis de esculina: positiva
Rojo de metilo: positivo
Fermentacion de: glucosa:postiva
maltosa:positiva
rammnosa:positiva
manitol:negativa

ACTINOMICETOS

Nocardia

ACTINOMYCETES
Bacilos Gram positivos,

catalasa positivos.
Son aislados del suelo,

Estructura de su pared celular

y su sensibilidad
Antimicrobiana (bacterias).
Los miembros cido Micolico

mat. vegetal
de este grupo son
descomposicin,
tres familias:
sistemas de ventilacin y
- Corinebacteriaceae.
colonizan: animales y
- Nocardiaceae.
humanos.
- Micobacteriaceae.
Algunos filamentos

similares a los hongos

Hay 4 generos:

NOCARDIA
Es un organismo parcialmente
AAR.
Esta caracterstica
le sirve para dif. De
otros actinomicetos.
Son catalasa positivos.

Crecen en medios no
selectivos.
El aislamiento puede requerir

DX DE LABORATORIO
Las muestras de las cuales se puede aislar Nocardia
son: secreciones respiratorias , biopsias de piel o
aspirados
En el extendido se puede ver la bacterias filamentosas,
ramificadas, Gram positivas, general/ acido resistentes
Crece en los medios no selectivos de rutina pero se
aumenta la probabilidad de su hallazgo utilizando agar
Thayer martin con antibioticos
Las colonias se ven de 3-5 dias.
1.Coloracin de Gram.
2.Nocardia spp., micobacterias de cto. Rpido, y algunos
Rhodococcus spp. Son positivos para la
coloracin de kinyoun modificado.

DX DE LABORATORIO
1.MORFOLOGA:
- Streptomices, Actinomadura, y nocardiopsis spp.:
bacterias filamentosas
< 1 um.
- Micobacterias de cto. Rpido y Nocardia spp.,
ramificaciones, fragmentos de filamentos y formas
cocobacilares < 1 um.
- Grnulos: filamentos ramificados entrelazados
que varan en textura y color dependiendo del agente
etiolgico.

MEDIOS DE CULTIVO
PRIMARIOS
:

- Medios:
BHI agar con
cloranfenicol y
cicloheximide.
- Agar CNA

ANAEROBIOS:
BAP ANA.
THIO
Agar CNA.
MEDIOS DE RUTINA:
Sabouraud dextrosa agar.
AS
BHI
TSA

MEDIOS DE CULTIVO
OTROS MEDIOS:

Lowenstein-jensen
Middlebrook
Medio selectivo de
Middlebrook (7H10
7H11).
Medio selectivo Nocardia.
INCUBACIN:
Medios AE: 30C por 14 a 21 dias.
Revisar cada 3 o 4 dias.
ANA 37C 10 a 14 dias.

BACILOS GRAM POSITIVOS

FORMADORES DE ESPORAS

TAXONOMA
nueve gneros
1.Alicyclobacillus: 4 sp. Termoacidfilos
2.Paenibacillus: 27 sp.

P. polymyxa, P. macerans, P. alvei, P. pulvifaciens y P.

larvae ( las nuevas subsp. de P. larvae.)
3.Brevibacillus: 10 spp.

B. brevis y B. laterosporus.
4.Aneurinibacillus: con A. aneurinilyticus y

otras dos spp.

TAXONOMA

5. Virgibacillus: con V. pantothenticus y otra sp.

6. Gracilibacillus Cada una tiene dos spp.
de halfilos.
7. Salibacillus
1.Geobacillus: 8 sp. de termfilos B. stearothermophilus.
2.Ureibacillus: con dos sp. termofilicas.

GNERO BACILLUS
Contiene 70 sp.
Los ms conocidos son:
B.subtilis, B. anthracis,
B.cereus, B. licheniformis,
B. megaterium, B. pumilus,
B. sphaericus, y el B.
thuringiensis.

Bacillus anthracis
DIAGNSTICO BACTERIOLGICO
Es importante investigar la historia laboral y de
exposicin.
De las lesiones cutneas tomar la muestra en medio de
transporte con aplicador del fluido de la vescula.
Cultivo AS para aislar el B. anthracis.
Coloracin de Gram.: observando al microscopio los
bacilos Gram. positivos grandes, formando cadenas.
En la forma pulmonar:
Muestras de esputo o frotis farngeo.
LCR.
Sangre.

BACILLUS ANTHRACIS
Es no mvil.
Reduce los nitratos a

No fermentadores de:
xylosa, manitol, lactosa
y salicina.

nitritos.
Voges proskauer
positivo.
Sensible a la

Son fermentadores
de: glucosa, sucrosa
y maltosa.

DIAGNSTICO BACTERIOLGICO
Cultivo Bacillus anthracis

En AS de carnero las colonias

son circulares y tienen aspecto
de cabellera de medusa.
Cada colonia es una hilera
continua de bacilos con
apariencia de vidrio pulido,
alcanzando un dimetro de
3mm, despus de 18 a 24
horas de incubacin.
Produce hemlisis ligera.
Para que las esporas se
produzcan se requiere de
oxgeno y la temperatura

DIAGNSTICO BACTERIOLGICO
Bacillus anthracis

Cuando la bacteria se

inocula en agar nutritivo

con bicarbonato al 0.7% y
se le cultiva toda la noche
a 37C en atmsfera de
dixido de carbono al 520%, el germen puede
sintetizar su cpsula in
Vitro y las colonias
obtenidas son de aspecto
mucoide

DIAGNSTICO BACTERIOLGICO
Bacillus anthracis
IDENTIFICACIN
Antes de la ID. Se debe verificar si el bacilo es formador de
esporas o tiene inclusiones.
En el Gram. se ven espacios no teidos sugestivos de
esporas.
Coloracin de esporas:
Extender la muestra sobre la lmina.
Secar y colocar en una plancha caliente.
Adicionar verde de malaquita al 5% cubriendo la muestra.
Dejar en la plancha caliente, hasta que el colorante se
ponga rojo y se seque. Aproximadamente 45.
Sacar y lavar con abundante agua.
Adicionar safranina al 10% dejar por 1.