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METABOLISMO BACTERIANO
Metabolismo o conjunto de reaes bioqumicas interconectadas de um ser vivo.
A definio correta, mas incompleta, pois tambm deveria considerar a funo das
reaes celulares. Podem ser apontadas funes especficas (biossntese de aminocidos,
degradao de carboidratos, etc.) e funes mais gerais, como a obteno,
armazenamento e utilizao de energia. Uma definio abrangente, que engloba
processos e funes : o metabolismo a estratgia de sobrevivncia de uma espcie.
Conceituar assim o metabolismo inclui a ideia de preservao do indivduo e a garantia
de gerao de descendentes. Para tanto, exigida do ser vivo a capacidade de interagir
com o ambiente de forma a obter os elementos necessrios para sua manuteno e sua
replicao. A reproduo a situao mais drstica e de maior complexidade em
comparao simples manuteno.
Os seres vivos so peculiares em sua capacidade de reproduzir-se. Ao faz-lo,
parecem contrariar as leis da termodinmica que estabelecem como tendncia de qualquer
sistema o aumento do seu grau de desordem - os seres vivos mantm sua organizao ao
longo das sucessivas geraes. Para obter esta estabilidade recorrem a transformaes
internas que aparentam ocorrer no sentido oposto tendncia termodinmica. o caso
das snteses em geral e das concentraes intracelulares de ons e de molculas, maiores
do que as encontradas no meio ambiente. Os seres vivos retiram do ambiente a matria
prima, para manter ou mesmo aumentar seu grau de organizao, e liberam diferentes
substncias, provocando um aumento da desorganizao do meio. Alm dos componentes
estruturais da nova clula, uma fonte energtica fundamental para manter o processo no
sentido contrrio quele considerado termodinamicamente favorvel. A conciliao entre
a organizao dos seres vivos e os princpios da termodinmica obtida quando se
consideram os indivduos juntamente com o ambiente. Contabilizando os seres vivos
mais o meio ambiente fica claro o aumento da desorganizao e, portanto, a subordinao
s leis termodinmicas.

As clulas necessitam de ATP, 13 compostos precursores e NADPH

Embora alguns processos possam ser realizados utilizando o potencial energtico


contido em gradientes de prtons ou de outros ons, a maior parte das necessidades

energticas celulares suprida pela energia qumica contida na molcula de adenosina


trifosfato, o ATP. Portanto, estudar os mecanismos de obteno de energia pelos
microrganismos significa analisar os processos pelos quais estas clulas sintetizam ATP.
Para esta sntese, duas so as fontes energticas primrias: a luz ou a oxidao de
compostos qumicos. Como grande parte dos compostos qumicos a serem oxidados foi
produzida custa da energia solar, v-se que a maior parte da energia primria usada
pelos seres vivos a luz do sol.
Alm de energia, a duplicao de uma clula requer matria para a duplicao dos
seus componentes. Grosso modo, as clulas de todos os seres vivos so quimicamente
semelhantes: so constitudas de cidos nucleicos, protenas, carboidratos, lipdios, etc.
Assim, ainda que as estratgias adotadas para a formao de uma nova clula possam ser
diferentes conforme o organismo, o desafio a ser superado semelhante para todos.
O grande nmero de compostos intermedirios presentes nos processos que
permitem a manuteno e duplicao de uma clula deixa claro que o metabolismo uma
rede muito complexa de reaes qumicas. Sua compreenso, entretanto, facilitada pela
anlise do metabolismo de bactrias que, como Escherichia coli, so capazes de sintetizar
todos os componentes necessrios sua replicao a partir apenas de glicose e sais
minerais. A partir da glicose, estas clulas obtm 13 compostos orgnicos intermedirios
que servem de precursores para a sntese de todos os outros constituintes celulares, ainda
que por vias diferentes, segundo o organismo analisado. Muitas espcies bacterianas,
principalmente patognicas estritas, no apresentam to completa capacidade metablica
e necessitam obter do meio ambiente diferentes compostos para completar o conjunto de
molculas fundamentais para seu desenvolvimento.
Grande parte dos processos biossintticos requer, alm da utilizao de ATP, a
reduo de compostos intermedirios, obtida graas ao emprego de coenzimas reduzidas.
A coenzima mais utilizada para estas redues a nicotinamida adenina dinucleotdio
fosfato (NADPH), que, em algumas reaes, pode ser substituda pelo seu congnere no
fosforilado, a nicotinamida adenina dinucleotdio (NADH). Por sua funo, o NADPH
muitas vezes referido como poder redutor.
H uma diferena importante no papel que exercem as coenzimas (ATP e
NADPH) e os 13 precursores nas reaes do metabolismo. A soma das concentraes das
duas formas possveis das coenzimas ATP (ATP/ADP) e NADPH (NADPH/NADP+)
constante na clula. No caso do ATP, a alternncia de formas mantida por uma fonte de
energia exgena que permite a fosforilao de ADP por fosfato, formando ATP; sua

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utilizao nas reaes celulares produz ADP e fosfato. A reduo de NADP+ provida
pela oxidao de compostos qumicos tambm exgenos, formando NADPH que
oxidado nas reaes redutoras de biossntese. A alternncia das duas formas reflete o
papel destas coenzimas: fornecer energia ou equivalentes redutores para as reaes do
metabolismo. Os processos cclicos envolvendo ATP/ADP e NADPH/NADP+
representam, portanto, fluxos contnuos de energia e poder redutor, necessrios para
manter o metabolismo e construir novas clulas. Quanto aos processos envolvendo os 13
compostos fundamentais, nenhum turnover existe e, uma vez que estes compostos so
convertidos nas molculas celulares, h constante necessidade de aporte de carbono e
demais macro e micronutrientes a partir do meio ambiente. Nas condies em que o meio
disponibiliza algumas das 13 molculas (ou seus derivados), sua sntese deixa de ser
necessria, trazendo economia e eficincia para a duplicao celular. A Figura 3.1 traz as
frmulas das coenzimas ATP e NAD(P)H e a Figura 3.2 a lista dos precursores
necessrios biossntese dos constituintes celulares.

ATP

NAD+

NADH

Figura 3.1. Coenzimas ATP e NAD+/NADH. O NADP+ difere do NAD+ por um grupo
fosfato ligado ribose.
Em resumo, a construo de nova clula guarda certa universalidade entre os seres
vivos. O metabolismo constitudo por uma srie de reaes cujo grande desafio a
obteno de ATP, NADPH e 13 molculas precursoras, que sero utilizados no processo
de biossntese de todos os constituintes celulares, bem como na manuteno da clula
(Figura 3.2). Clulas que no apresentam esta capacidade completa devem obter do meio

os precursores ou molculas produzidas a partir destes (blocos de construo Figura


3.2).

Figura 3.2. Formao de novas clulas a partir dos nutrientes com a formao dos 13
precursores, NADPH e ATP. (Schaechter et al., 2010).
ATP, os 13 precursores e NADPH podem ser conseguidos por vias diferentes
Do ponto de vista metablico, as bactrias so os organismos mais versteis
conhecidos. Sua grande diversidade reside na variedade de estratgias adotadas para a
obteno de ATP, NADPH e dos 13 precursores para biossnteses, muito mais ampla do
que a encontrada entre os eucariotos, permitindo que esses organismos colonizem os mais
diversos ambientes. A Figura 3.3 esquematiza diferentes estratgias de sobrevivncia
(metabolismo) encontradas em bactrias. Os esquemas apontam os compostos obtidos do
meio ambiente e os produtos do metabolismo excretados por bactrias de diferentes tipos
metablicos. A anlise dos esquemas permite inferncias sobre o habitat dos
microrganismos e suas necessidades nutricionais. Algumas das concluses principais
desta anlise esto assinaladas a seguir.

Figura 3.3. Esquemas de diferentes estratgias de sobrevivncia em bactrias. A, B e C


metabolismos heterotrficos; D, E e F metabolismos autotrficos. A, B, C e D
metabolismos quimiotrficos; E e F metabolismos fototrficos.
1. O ATP pode ser obtido:
1a por oxidao de compostos orgnicos (esquemas A, B e C) processo usado
por bactrias quimiorganotrficas.
1b - por oxidao de compostos inorgnicos (esquema D) - processo usado por
bactrias quimiolitotrficas.
1c a partir de energia luminosa sem produo de oxignio (esquema E) processo usado por bactrias fototrficas.
1d a partir de energia luminosa com produo de oxignio (esquema F) processo tambm usado por bactrias fototrficas.

2. Os esqueletos carbnicos dos 13 precursores podem provir de compostos


orgnicos (esquemas A, B e C), caracterizando as bactrias como heterotrficas, ou do
CO2 (esquemas D, E e F), definindo-as como autotrficas.
3. Um dos processos leva produo de O2 (esquema F); outros requerem O2
(esquemas C e D) e outros ainda ocorrem em anaerobiose (esquemas A, B e E).
4. A reduo do NADP+ pode ocorrer em vias de oxidao da glicose (A, B e C)
ou por vias de transporte de eltrons (D, E e F).
A seguir sero apresentadas as vias metablicas que permitem a obteno dos 13
intermedirios para a biossntese de molculas, de ATP e de NADPH. Sero apresentados
os dois grandes tipos de metabolismo, caracterizados pela fonte de carbono utilizada, o
heterotrfico e o autotrfico. Posteriormente, sero abordadas as diferentes estratgias de
sobrevivncia, ou seja, o conjunto de vias metablicas que permitem a sobrevivncia dos
diferentes microrganismos nos ambientes aos quais esto adaptados. Essa anlise ser
baseada em dois grandes momentos da vida na Terra: a vida em anaerobiose e a vida em
aerobiose.

A - METABOLISMO HETEROTRFICO
3.1 Obteno dos 13 precursores
Substncias orgnicas diversas (carboidratos, protenas, cidos graxos, etc.)
podem suprir as necessidades das clulas bacterianas, mas certamente a glicose, na sua
forma polimerizada como amido ou celulose, o composto disponvel em maior
quantidade na natureza. Por esta razo, este acar apresentado como a fonte universal
de carbono e conceitua-se o metabolismo central como o conjunto de reaes que levam
oxidao de glicose a CO2. A anlise de vias metablicas heterotrficas para obteno
dos 13 precursores, feita a seguir, considerar sempre a glicose como exemplo de matria
orgnica, sem que isto signifique ser esta a nica alternativa metablica para as clulas. A
oxidao da glicose para obteno dos 13 precursores tambm leva produo de ATP e
reduo de NADP+ (Sees 3.2. e 3.3).

3.1.1 Via de Embden-Meyerhof-Parnas - Gliclise.


A sequncia de reaes designada via de Embden-Meyerhof-Parnas, gliclise ou
via glicoltica a via mais comum de degradao de glicose (Figura 3.4.). Outros
monossacardios, como frutose, tambm so oxidados por esta via.
A via glicoltica inicia-se com a fosforilao da glicose por ATP, produzindo
glicose 6-fosfato (reao 1). Esta reao um recurso para o "aprisionamento" do acar
nas clulas, cujas membranas so impermeveis hexose fosforilada. Em muitas
bactrias, a fosforilao da glicose ocorre em associao ao seu transporte pela membrana
celular, por um processo denominado translocao de grupo. A estratgia seguida pela
via glicoltica na oxidao da glicose 6-fosfato pode ser resumida nas seguintes etapas:
a. nova fosforilao da hexose, com produo de uma molcula bifosforilada,
aproximadamente simtrica (reao 3);
b. quebra da molcula da hexose bifosforilada (reao 4), produzindo duas trioses
monofosforiladas interconversveis (reao 5); praticamente, portanto, h produo de
duas trioses idnticas;
c. oxidao da triose fosforilada, por transferncia de eltrons ao NAD+ (reao
6); nesta reao h incorporao de um grupo fosfato inorgnico;
d. transferncia, em reaes subsequentes, dos dois grupos fosfato presentes no
1,3 bisfosfoglicerato para o ADP, produzindo ATP (reaes 7 e 10).
A equao geral do processo a seguinte:
Glicose + 2 ADP + 2 Pi + 2 NAD+ 2 piruvato + 2 H2O + 2 NADH + 2 H+ + 2 ATP

Como se depreende da equao acima, a gliclise uma via de oxidao de


glicose a piruvato, capaz de conservar uma parte da energia derivada desta transformao
na forma de ATP. De fato, para cada mol de glicose oxidada a piruvato, so produzidos
dois mols de ATP. Deve-se notar ainda que a via glicoltica inclui uma reao de
oxirreduo, a oxidao de gliceraldedo 3-fosfato a 1,3 bisfosfoglicerato com reduo de
NAD+ a NADH (Figura 3.4, reao 6).
A gliclise tambm gera 6 das 13 molculas precursoras para biossntese de
constituintes celulares: glicose 6-fosfato, frutose 6-fosfato, gliceraldedo 3-fosfato, 3fosfoglicerato, fosfoenolpiruvato e piruvato (Figura 3.2).

Figura 3.4. Via de Embden-Meyerhoff-Parnas

3.1.2 Via de Entner-Doudoroff

A via de Entner-Doudoroff (Figura 3.5), descrita apenas em microrganismos,


uma alternativa para o metabolismo de glicose e apresenta apenas duas reaes
especficas, as de nmeros 3 e 4; as demais so encontradas tambm na via de EmbdenMeyerhof-Parnas (Seo 3.1.1) ou na via das pentoses (Seo 3.1.3). As vias de EntnerDoudoroff e de Embden-Meyerhof-Parnas tm caractersticas comuns: ambas envolvem a
fosforilao de acares de 6 carbonos e sua clivagem em compostos de 3 carbonos. A
distino entre as duas vias est no composto de 6 carbonos utilizado como substrato para
clivagem: frutose 1,6-bisfosfato na via de Embden-Meyerhof-Parnas e 2-ceto-3-desoxi-6fosfogliconato na via de Entner-Doudoroff. A frutose 1,6-bisfosfato clivada a
gliceraldedo 3-fosfato e di-hidroxiacetona fosfato e o 2-ceto-3-desoxi-6-fosfogliconato, a
piruvato e gliceraldedo 3-fosfato. O resultado lquido da degradao da glicose por esta
via representado pela equao seguinte.
Glicose + ADP + NADP+ + NAD+ + Pi 2 piruvato + ATP + NADPH + NADH

A via de Entner-Doudoroff tambm capaz de conservar uma parte da energia sob


a forma de ATP: para cada mol de glicose oxidada a piruvato, produzido um mol de
ATP. As vias de Entner-Doudoroff e de Embden-Meyerhof-Parnas tm a mesma reao
de reduo de NAD+. Na via de Entner-Doudoroff so produzidos um mol de NADH e
um mol de NADPH por mol de glicose oxidada. A via de Entner-Doudoroff produz 5 das
13 molculas precursoras para biossntese de constituintes celulares: glicose 6-fosfato,
gliceraldedo 3-fosfato, 3-fosfoglicerato, fosfoenolpiruvato e piruvato (Figura 3.2).
A via de Entner-Doudoroff a principal via de degradao de glicose em diversas
bactrias Gram-negativas: Pseudomonas, Zymomonas, Ralstonia, Xanthomonas etc.
Embora a glicose seja degradada pela via de Embden-Meyerhof-Parnas em diversas
bactrias, a via de Entner-Doudoroff utilizada para a degradao de outros substratos e
est presente em microrganismos que vivem em ambientes com disponibilidade de
gliconato, como o solo. A Tabela 3.1 apresenta a distribuio das vias Embden-MeyerhofParnas e Entner-Doudoroff em diferentes bactrias.

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Figura 3.5. Via de Entner-Doudoroff.


Tabela 3.1. Presena das vias Embden-Meyerhof-Parnas e Entner-Doudoroff em algumas
bactrias

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3.1.3 Via das Pentoses

A via das pentoses (Figura 3.6), outra via de degradao de glicose, pode ser
dividida em trs etapas:
1. fase oxidativa, na qual reaes de oxidao de glicose 6-fosfato e de 6fosfogliconato do origem a NADPH e a reao de descarboxilao do 6-fosfogliconato
produz CO2 (reaes 1 a 3).
2. fase das reaes de isomerizao a ribulose 5-fosfato, formada na fase
anterior, pode ser transformada em xilulose 5-fosfato ou em ribose 5-fosfato (reaes 4 e
5), por ao de enzimas diferentes; a ribose 5-fosfato precursora para a sntese de
ribonucleotdios de purinas e de pirimidinas e para a biossntese de aminocidos
aromticos.
3. fase das reaes de rearranjo de acares - tais rearranjos ocorrem em reaes
catalisadas por transaldolases e transcetolases, que transferem, respectivamente, grupos
de dois ou trs carbonos para aldoses receptoras (reaes 6 a 8).
O resultado lquido da oxidao parcial da glicose pela via das pentoses
representado pela equao seguinte.
Glicose +ATP + 6 NADP+ gliceraldedo 3-fosfato + ADP + 3 CO2 + 6 NADPH
A via das pentoses leva reduo de NADP+ a NADPH, a principal fonte de
eltrons para as reaes de biossnteses redutivas. Assim, a via das pentoses conserva a
energia de oxidao do acar apenas na forma de NADPH e no produz ATP. Alm de
NADPH, a via das pentoses produz 6 dos 13 precursores para biossntese de constituintes
celulares: glicose 6-fosfato, ribose 5-fosfato, sedoheptulose 7-fosfato, eritrose 4fosfato, frutose 6-fosfato e gliceraldedo 3-fosfato (Figura 3.2).

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Figura 3.6. Via das pentoses

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3.1.4 Via da fosfocetolase (hexose monofosfato)

Bactrias lticas heterofermentadoras, bem como bifidobactrias, fazem a


oxidao de carboidratos por uma via denominada via da fosfocetolase. Esta enzima cliva
cetoses fosforiladas por introduo de fosfato inorgnico.
A oxidao de glicose por Leuconostoc mesenteroides (Figura 3.7A) ocorre
inicialmente pela converso de glicose 6-fosfato a xilulose 5-fosfato em reaes
correspondentes quelas da via das pentoses. Em seguida, xilulose 5-fosfato clivada em
gliceraldedo 3-fosfato e acetilfosfato por ao da fosfocetolase. O gliceraldedo 3fosfato convertido a piruvato e o acetilfosfato, a acetil-CoA.
Bifidobacterium bifidum apresenta duas fosfocetolases: uma ativa com frutose 6fosfato e outra com xilose 5-fosfato. Inicialmente, glicose convertida a frutose 6fosfato, em reaes correspondentes s da via de Embden-Meyerhof-Parnas. Pela ao da
fosfocetolase, frutose 6-fosfato clivada a eritrose 4-fosfato e acetilfosfato. Eritrose 4fosfato e outra molcula de frutose 6-fosfato sofrero rearranjos em reaes da via das
pentoses para formar duas molculas de xilulose 5-fosfato. As molculas de xilulose 5fosfato sofrem a ao da outra fosfocetolase (semelhante quela encontrada em L.
mensenteroides), e formam gliceraldedo 3-fosfato e acetilfosfato (Figura 3.7B).
As vias da fosfocetolase permitem a obteno de 10 dos 13 precursores: glicose 6fosfato, gliceraldeido 3-fosfato, 3-fosfoglicerato, fosfoenolpiruvato, piruvato, acetilCoA, frutose 6-fosfato, ribose 5-fosfato, eritrose 4-fosfato e sedoheptulose 7-fosfato
(Figura 3.2).
As equaes globais da oxidao parcial da glicose pelas vias das fosfocetolases
so:

A.

Glicose + ADP + 3 NAD+ Acetil-CoA + Piruvato + ATP + 3 NADH + CO2

B.

2 Glicose + 2 ADP + 2 NAD+ 3 Acetil-CoA + 2 Piruvato + 2 ATP + 2 NADH

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A
Figura 3.7. Via da fosfocetolase. A. Em Leuconostoc. B. Em Bifidobacterium.

3.1.5. Os destinos do piruvato

Piruvato o produto comum da oxidao de carboidratos pelas principais vias


catablicas de acares, como pode ser verificado nas equaes globais das vias de
Entner-Doudoroff e de Embden-Meyerhof-Parnas. Embora no seja o produto final da via
das pentoses, o piruvato poder ser formado a partir do gliceraldedo 3-fosfato produzido
nesta via.
H vrias alternativas metablicas para o piruvato, dependendo das condies
celulares e ambientais e da espcie considerada (Figura 3.8).
No processo de fermentao (Seo C-3.1.1.), no h aceptores exgenos de
eltrons. O piruvato ou substncias dele derivadas so reduzidos por NADH, restaurando
a forma oxidada da coenzima (NAD+). A oxidao do NADH permite que esta coenzima
participe de novas oxidaes do substrato.
O piruvato pode ser convertido a acetil-CoA, por oxidao catalisada pelo
complexo piruvato desidrogenase ou por reao catalisada pela piruvato-formiato liase.
As reaes de converso so as seguintes:

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Piruvato + HS-CoA + NAD+ acetil-CoA + NADH + CO2


Piruvato + HS-CoA acetil-CoA + formiato
Note-se que, no primeiro caso, h reduo de NAD+ e produo de CO2.
Nas enterobactrias em anaerobiose, a piruvato-formiato liase ativada e o
complexo piruvato desidrogenase, inativado. Esta adaptao no deve ser generalizada,
pois em outras bactrias, como Pseudomonas, o complexo piruvato desidrogenase pode
estar ativo mesmo em anaerobiose.
Alm das alternativas descritas, o piruvato precursor para muitas snteses,
incluindo a de aminocidos.
NAD +

NADH
1

Piruvato

Produtos de
fermentao
4

NAD +
2

Produtos de
snteses

NADH

Formiato

CO2
Acetil-CoA

Figura 3.8. Diferentes destinos do piruvato. 1. Fermentaes. 2. Descarboxilao oxidativa


pelo complexo piruvato desidrogenase 3. Converso a acetil-CoA pela piruvatoformiato liase. 4. Snteses.
3.1.6 Ciclo de Krebs - Ciclo dos cidos tricarboxlicos.

O ciclo de Krebs, ou ciclo dos cidos tricarboxlicos (Figura 3.9), a via que
promove a oxidao completa dos tomos de carbono presentes na acetil-CoA. Constitui,
portanto, a etapa final de oxidao de carboidratos, cidos graxos e aminocidos, j que o
metabolismo degradativo destes compostos converge para a formao de acetil-CoA. A
equao geral do ciclo de Krebs a seguinte:
Acetil-CoA +2 NAD+ + NADP+ + FAD + ADP + Pi + H2O 2 CO2 + 2 NADH + NADPH + 2 H+ +
FADH2 + ATP + HSCoA

Na equao geral no aparece o oxaloacetato, substrato da primeira reao do


ciclo (reao 1), regenerado na ltima reao (reao 8). No h, portanto, gasto efetivo

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de oxaloacetato; este composto cumpre um papel cataltico e o ciclo est apto,


teoricamente, a oxidar qualquer quantidade de acetil-CoA sem consumo de oxaloacetato.
Como se nota pela equao geral, a oxidao de um mol de acetil-CoA est
associada produo de 2 mols de NADH, 1 mol de NADPH e de 1 mol de FADH2
(Figura 3.9). Destaca-se que na maioria das bactrias, ao contrrio dos organismos
eucariticos, a coenzima da isocitrato desidrogenase NADP+ e no NAD+.
A reduo de coenzimas no a nica funo do ciclo de Krebs: 1 mol de ADP
fosforilado e trs compostos intermedirios do ciclo so precursores em vias
biossintticas: -cetoglutarato, oxaloacetato e succinil-CoA.

Figura 3.9. Ciclo dos cidos tricarboxlicos (Ciclo de Krebs).

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3.1.7 Ramos oxidativo e redutor


Em algumas condies, o complexo -cetoglutarato desidrogenase no est
presente ou est inativado. Sem o complexo, o ciclo dos cidos tricarboxlicos no pode
operar plenamente, mas ainda assim, possvel a sntese de oxaloacetato, -cetoglutarato
e succinil-CoA por partes do ciclo, que so referidas como ramos oxidativo e redutor
(Figura 3.10).
No ramo redutor, o oxaloacetato reduzido a succinil-CoA, promovendo a
oxidao de coenzimas. No ramo oxidativo, o oxaloacetato condensa-se com acetil-CoA,
formando citrato, que oxidado a -cetoglutarato, levando reduo de coenzimas. Para
suprir os dois ramos e mant-los em funcionamento, necessrio o contnuo aporte de
oxaloacetato, formado pela carboxilao de piruvato ou de fosfoenolpiruvato.
Apesar de haver uma s reao de oxidao de coenzimas no ramo oxidativo e
duas reaes de reduo no ramo redutor, a estequiometria entre os dois ramos pode ser
estabelecida quando o ramo oxidativo for acionado em dobro em relao ao ramo redutor,
equilibrando as concentraes de coenzimas reduzidas e oxidadas.
Comparando os ramos oxidativo e redutor com o ciclo de Krebs verifica-se que os
ramos cumprem a funo de suprir precursores para biossnteses, enquanto o ciclo, alm
desta funo, oxida acetil-CoA a CO2. Esta oxidao est associada reduo de
coenzimas que doam eltrons para a cadeia de transporte de eltrons. Assim, o ciclo
tambm contribui para a produo de ATP (Seo 3.2.2), o que no ocorre quando os
ramos so acionados.

Figura 3.10. Ramos Oxidativo e Redutor.

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Ciclo do glioxilato

Bactrias com capacidade de crescer em acetato ou cidos graxos devem esta


possibilidade presena de duas enzimas, isocitrato liase e malato sintase, que atuando
em conjunto com enzimas do ciclo de Krebs, permitem a sntese de oxaloacetato a partir
de acetil-CoA. Esta via designada ciclo do glioxilato. Neste ciclo, citrato e isocitrato so
produzidos com reaes comuns ao ciclo de Krebs. O isocitrato clivado em succinato e
glioxilato pela ao da enzima isocitrato liase. O succinato, convertido a oxaloacetato,
repe aquele utilizado para sntese do citrato. O glioxilato condensa-se com acetil-CoA,
formando malato, em uma reao catalisada pela malato sintase. O malato origina um
oxaloacetato extra que, estequiometricamente, pode ser admitido como tendo sido
formado a partir de duas molculas de acetil-CoA, como mostra a equao geral do ciclo:
2 Acetil-CoA + 2 H2O + FAD + 2 NAD+ oxaloacetato + 2 CoA + FADH2 + 2 NADH + H+

Figura 3.11. Ciclo do glioxilato.

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A Tabela 3.2, que lista os precursores obtidos nas vias metablicas at o momento
analisadas, evidencia uma importante constatao: uma nica via metablica no
capaz de fornecer elementos suficientes para que a clula bacteriana possa crescer e
multiplicar-se. So necessrias pelo menos trs delas para que todos os 13 precursores de
biossntese sejam obtidos. Tambm importante ressaltar que nem todas as bactrias so
capazes de sintetizar todos os precursores, pois carecem de vias que os produzam,
necessitando para tanto, obt-los do meio de cultura, como precursores ou j como seu
produto final.

Tabela 3.2. Molculas Precursoras e Vias e Reaes que as produzem


Vias produtoras
Via
Glicoltica

Entner
Doudorof

Via das
Pentoses

Fosfocetolase

Ramos
Oxid. Red.

Ciclo de
Krebs

CPD ou
PFL

Glicose 6-fosfato

Frutose 6-fosfato

+/-

Ribose 5-fosfato

+/-

Eritrose 4-fosfato

+/-

Sedoheptulose 7-fosfato

+/-

Gliceraldedo 3-fosfato

3-fosfoglicerato

Fosfoenolpiruvato

Piruvato

+
+
+
+

Acetil-CoA

-cetoglutarato

Oxaloacetato

Succinil-CoA

Precursores

CPD Complexo Piruvato Desidrogenase

PFL Piruvato-Formiato Liase

3.1.9 Gliconeognese

comum o uso, por bactrias, de aminocidos, cidos graxos, lactato e glicerol


como fonte de carbono e energia. Para tanto, as clulas devem desenvolver vias
adequadas para sua utilizao. Os aminocidos podem ser desaminados, transformandose em intermedirios do ciclo de Krebs (Figura 3.12.), piruvato, acetoacetil-CoA ou
acetil-CoA. cidos graxos tambm do origem a acetil-CoA. O desafio para o
crescimento nessas fontes de carbono consiste em obter os outros precursores de
biossntese.

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A partir de piruvato pode ser acionada uma via denominada gliconeognese


(Figura 3.13), que consiste na converso desse composto a carboidratos, compreendendo,
assim, o inverso da via glicoltica. A maioria das reaes da via de Embden-MeyerhofParnas reversvel, mas duas so irreversveis e devem ser transpostas: as reaes
catalisadas pela piruvato quinase (fosfoenolpiruvato piruvato) e pela fosfofrutoquinase
1 (frutose 6-fosfato frutose 1, 6 bisfosfato). Em bactrias, piruvato pode ser convertido
diretamente em fosfoenolpiruvato. Em vrios organismos, fosfoenolpiruvato formado a
partir de oxaloacetato. Todas estas reaes requerem ATP.

Figura 3.12. Degradao de aminocidos a intermedirios das vias centrais do


metabolismo.
O fosfoenolpiruvato transformado em frutose 1,6-bisfosfato pelas mesmas
enzimas que participam da via de Embden-Meyerhof-Parnas catalisando reaes
reversveis. A desfosforilao de frutose 1,6-bisfosfato por hidrlise do grupo fosfato,
catalisada pela frutose 1,6-bisfosfatase, contorna a irreversibilidade da reao catalisada
pela fosfofrutoquinase.
A partir de frutose 6-fosfato podem ser gerados glicose 6-fosfato e outros
intermedirios da via das pentoses.

21

Com o concurso da gliconeognese, determinados microrganismos so capazes de


crescer exclusivamente em aminocidos e obter precursores para as biossnteses. A
gliconeognese proporciona os mesmos precursores fornecidos pela Via EmbdenMeyerhof-Parnas (Tabela 3.2).

Figura 3.13. Gliconeognese.


3.2 Obteno de ATP

A obteno de ATP por oxidao de compostos orgnicos por bactrias


heterotrficas cumprida de duas maneiras: fosforilao no nvel do substrato e
fosforilao associada cadeia de transporte de eltrons, a fosforilao oxidativa.

3.2.1 Fosforilao no nvel do substrato

A fosforilao no nvel do substrato o processo mais simples e com menor


rendimento. Em determinadas vias metablicas ocorrem reaes que permitem a
incorporao de um on fosfato a uma molcula orgnica; em reao subsequente, o
grupo fosfato pode ser transferido para o ADP (Figura 3.4), caracterizando a fosforilao

22

no nvel do substrato. Uma parcela dos microrganismos sobrevive utilizando apenas este
mecanismo de sntese de ATP. o que ocorre com bactrias fermentativas, que obtm
ATP exclusivamente pela via de Embden-Meyerhof-Parnas, semelhana do que ocorre
com as hemcias de mamferos.

3.2.2 Fosforilao oxidativa

A fosforilao oxidativa um processo muito mais complexo porque a sntese de


ATP, a partir de ADP e fosfato, aproveita e depende da energia de um gradiente de
prtons, formado pelo funcionamento da cadeia de transporte de eltrons Esta cadeia
oxida substratos, e transfere os eltrons at um aceptor final, com passagens
intermedirias pelos compostos que compem a cadeia. Concomitante transferncia de
eltrons do doador inicial at o aceptor final da cadeia, ocorre a extruso de prtons do
citoplasma para o exterior. Como consequncia, o citoplasma fica com pH maior do que o
exterior, formando-se o gradiente de prtons (qumico e eltrico). A membrana celular ,
em sua maior extenso, impermevel a prtons, que s podem retornar ao interior da
clula atravs de uma protena especfica, localizada na membrana, denominada ATP
sintase. ATP sintase esto ligados ADP e fosfato, que reagem formando ATP quando do
retorno dos prtons. Este tipo de fosforilao chamada oxidativa por iniciar-se com a
oxidao de coenzimas ou de outros compostos reduzidos. o processo responsvel pela
maior parte da produo de ATP nas clulas aerbias, encontrado tambm na fotossntese
e na respirao anaerbia.

3.2.2.1 Cadeia de transporte de eltrons.

A cadeia de transporte de eltrons aerbia de bactrias heterotrficas, como a


mitocondrial, formada por um conjunto de compostos que incluem flavoprotenas,
protenas ferro-enxofre, quinonas e citocromos.
Nas mitocndrias, estes componentes esto agrupados em quatro complexos, I, II,
III e IV, tendo a coenzima Q e o citocromo c como elementos mveis conectando,
respectivamente, os complexos I e II ao III e o complexo III ao IV. O doador de eltrons
inicial a coenzima reduzida NADH, que inicia a transferncia de eltrons doando-os ao
complexo I, de onde so transferidos at o oxignio, ligado ao complexo IV. Os
complexos I, III e IV so bombas de prtons.

23

NADH Complexo I CoQ Complexo III citocromo c Complexo IV O2


Faz parte da cadeia de transporte de eltrons um tipo especial de protenas com
capacidade de receber e doar eltrons, designadas protenas ferro-enxofre ou
ferredoxinas. Como seu nome sugere, este tipo de protena contm grupos de tomos de
ferro e enxofre, em diferentes arranjos: pode-se encontrar, por exemplo, Fe2.S2, Fe4.S4 ou
outros arranjos, dependendo da protena e da espcie de microrganismo considerado.
tambm ao ferro que as protenas ferro-enxofre devem suas propriedades oxidorredutoras,
pois podem apresentar-se com o ferro na forma Fe3+, quando oxidado, e, Fe2+, quando
recebem um eltron. Apesar da semelhana funcional, o on de ferro das protenas ferroenxofre no faz parte de um grupo heme, como acontece no caso dos citocromos. Estas
protenas so, por isto, muitas vezes referidas como possuindo ferro no hmico. As
protenas ferro-enxofre encontram-se associadas s desidrogenases ligadas membrana e
tambm ao complexo de citocromos b-c1.
Nas bactrias, as cadeias de transporte de eltrons esto dispostas na membrana
citoplasmtica e so mais variadas, por haver diferentes:
- doadores iniciais de eltrons,
- transportadores intermedirios e
- aceptores finais.

Em virtude da diversidade de substratos doadores de eltrons (Figura 3.14), os


eltrons podem entrar na cadeia de transporte de eltrons em trs nveis: pelas
desidrogenases, pelas quinonas ou pelos citocromos. O ponto de entrada depende,
naturalmente, dos potenciais de reduo padro dos componentes da cadeia respiratria e
dos doadores de eltrons (Tabela 3.3). As bactrias usam diferentes cadeias de transporte
de eltrons, muitas vezes simultaneamente. As cadeias de transporte de eltrons podem
conter desde uma at trs bombas de prtons (como nas mitocndrias).

24

Figura 3.14. Exemplos da diversidade de doadores de eltrons e aceptores da cadeia


respiratria, com a indicao do ponto de entrada e de sada dos eltrons. A seta maior
indica o sentido dos potenciais de reduo padro crescentes dos compostos referidos no
esquema.
Tabela 3.3. Potenciais de reduo padro em pH 7,0

As caractersticas principais dos componentes da cadeia de transporte de eltrons


bacteriana esto descritas a seguir.

25

Desidrogenases
Alm da entrada de eltrons feita por ao da NADH desidrogenase e succinato
desidrogenase,

nas

bactrias

entradas

alternativas,

oferecidas

por

outras

desidrogenases. Todas esto ligadas membrana e contm flavina adenina dinucleotdio


(FAD) ou flavina mononucleotdio (FMN) como coenzimas. Diferem, neste aspecto, das
desidrogenases citosslicas correspondentes, que geralmente usam NAD+ como
coenzima. As desidrogenases mais importantes so:

NADH desidrogenase

(NADH-ubiquinona

xido-redutase)- Em

bactrias

aerbias, heterotrficas , frequentemente, a primeira enzima da cadeia de transporte de


eltrons. componente do complexo I, constitudo por um domnio integrado
membrana e um domnio que se projeta para o interior da clula. O NADH doa eltrons e
um prton a FMN que se reduz formando FMNH2 usando tambm um prton do
citoplasma. Os eltrons do FNM so transferidos para centros Fe-S. Os prtons, por sua
vez, so liberados para o espao extracelular contribuindo para o gradiente qumico e
eltrico. Alm de FMN, bactrias podem apresentar FAD como coenzima. A maior parte
do NADH produzido pelo metabolismo oxidada pela cadeia de transporte de eltrons.

Succinato desidrogenase - Contm FAD como grupo prosttico e ao transferir os


eltrons provenientes da oxidao do succinato para a cadeia de transporte de eltrons,
produz fumarato.

Glicerol 3-fosfato desidrogenase Difere da enzima citosslica por apresentar


FAD como coenzima. Na membrana, catalisa a mesma reao, ou seja, a oxidao de
glicerol 3-fosfato a di-hidroxiacetona fosfato.

Lactato desidrogenase - Pela ao da lactato desidrogenase de membrana, os


eltrons originados da oxidao do lactato a piruvato podem ser oferecidos diretamente
cadeia de transporte de eltrons. Existe outra lactato desidrogenase, de localizao
citoplasmtica, que catalisa a reduo de piruvato a lactato na fermentao.
Alm destas desidrogenases, existem diversas outras, refletindo a diversidade de
substratos utilizados pelas bactrias: H2 desidrogenases, formiato desidrogenase, metanol
desidrogenase, metilamina desidrogenase e outras.

26

Quinonas

As quinonas, por serem compostos hidrofbicos, apresentam uma mobilidade


lateral relativamente grande na membrana de que fazem parte. Como membros da cadeia
de transporte de eltrons, podem receber prtons e eltrons ao se reduzirem e do-los ao
se oxidarem. As quinonas recebem os eltrons coletados dos substratos pelas
desidrogenases, sendo, assim, um composto de convergncia de eltrons de vrias
procedncias, que sero a seguir transferidos para os citocromos (Figura 3.14). Este papel
coletor pode explicar sua alta concentrao: em membranas de E. coli, por exemplo, sua
concentrao molar cerca de 10 vezes maior do que a dos citocromos.
As membranas de bactrias contm dois tipos principais de quinonas: ubiquinona
e menaquinona (Figura 3.15). Em E. coli, a ubiquinona a forma predominante em
condies aerbias, enquanto a menaquinona prevalece sob condies anaerbias.

Figura 3.15. Estruturas de menaquinona e ubiquinona presentes em bactrias.


Redutases

Na respirao anaerbia, as bactrias utilizam aceptores finais de eltrons


diferentes do oxignio: nitrato, sulfato, fumarato, etc. Os complexos enzimticos que
reduzem aceptores finais de eltrons diferentes do oxignio so chamados redutases.
Dependendo da fonte de eltrons e do aceptor, as bactrias podem sintetizar e substituir
um complexo desidrogenase por outro, ou complexos redutases por complexos oxidases.
Por exemplo, quando cresce anaerobiamente, E. coli produz os complexos redutases em
vez dos complexos oxidases, reprime a sntese de algumas desidrogenases e estimula a
sntese de outras. Por essa razo, os complexos transportadores de eltrons bacterianos s

27

vezes so referidos como mdulos, uma vez que podem ser sintetizados e "conectados"
cadeia respiratria em resposta s condies ambientais.

Oxidases (citocromos)
Citocromos so carreadores de eltrons que possuem um heme como grupo
prosttico. Existem 5 classes de grupos heme que distinguem os citocromos bacterianos:
hemes a, b, c, d e o. Os citocromos podem ter um ou mais grupos heme em sua
constituio e essa composio utilizada para denominar os diferentes citocromos
(citocromo b, d , c, o, bo, bd, etc).
Citocromos so oxidases que retiram um eltron do componente da cadeia que o
antecede transferindo-o para seu grupo heme. Alguns citocromos transferem o seu eltron
para o O2, reduzindo a H2O e so denominados oxidases terminais. As bactrias
apresentam diferentes oxidases terminais e com frequncia, duas ou trs podem estar
presentes na mesma bactria. Ao contrrio, a mitocndria tem a apenas uma citocromo c
oxidase (citocromo aa3).
So encontrados dois tipos bsicos de oxidases terminais bacterianas:

1. citocromo c oxidase - Transfere eltrons do citocromo c para o oxignio; pode


ser anloga oxidase mitocondrial

2. quinol oxidase - Este tipo de oxidase terminal transfere eltrons da ubiquinona


diretamente para o oxignio, sem passagem intermediria pelos citocromos do tipo c.

As diferentes oxidases terminais apresentam muitos subtipos, estabelecidos a


partir do nmero e do tipo de citocromos (hemes) presentes. Alm de encontrar-se
diversidade dentro de gneros e espcies, uma mesma clula pode apresentar mais de um
tipo, dependendo do meio e das condies em que est sendo cultivada. E. coli, por
exemplo, apresenta duas quinol oxidases (citocromo o e d), mas no possui citocromo c
oxidases. Citocromo o tem baixa afinidade pelo O2, enquanto o citocromo d tem maior
afinidade. Assim, E. coli capaz de respirar mesmo sob baixas concentraes de O2,
passando a expressar o citocromo d, embora a quantidade de ATP produzido menor.
Assim como a "escolha" da fonte de carbono a ser utilizada para oxidao controlada
por represso catablica, a "escolha" da via respiratria tambm est sujeita a controle
global.

28

3.2.2.2 Gradiente de prtons

Os componentes da cadeia de transporte de eltrons esto dispostos ao longo da


membrana plasmtica de acordo com seus potenciais de reduo padro (Eo'), cujos
valores esto mostrados na Tabela 3.3. Os eltrons partem do doador reduzido, que tem
Eo' menor que os componentes da cadeia de transporte de eltrons, e percorrem uma
sequncia de transportadores com Eo' crescentes, at atingirem o aceptor final, que tem o
maior Eo'. As transferncias de eltrons entre estes compostos so, portanto,
termodinamicamente favorveis e facilitadas pelo fato de tais compostos estarem
organizados em membranas, com posies definidas, de modo a situar cada componente
exatamente entre aquele que lhe fornecer eltrons e aquele ao qual seus eltrons sero
doados.
O rendimento energtico das transferncias varia grandemente, dependendo do
substrato oxidvel inicial e do aceptor final. Em bactrias, a variao muito maior que
em mitocndrias, uma vez que um maior nmero de doadores e de aceptores pode ser
utilizado. O total de energia disponvel para a formao do gradiente de prtons e, por
consequncia, para a sntese de ATP, depende da diferena entre os valores dos potenciais
de reduo padro (Eo') do doador de eltrons e do aceptor final, segundo a equao:
Go' = -n F. Eo'
onde,
Go '= variao de energia livre padro
n = nmero de eltrons transferidos
F = constante de Faraday (96.500 J.V-1.Mol-1)
Eo' = diferena entre os valores de potencial de reduo padro do aceptor e do
doador de eltrons.

3.2.2.3 Fora prton motriz

O acoplamento da sntese de ATP ao transporte de eltrons explicado pela


hiptese quimiosmtica, proposta por Mitchell. Segundo a hiptese, a energia do
transporte de eltrons primariamente utilizada para que prtons sejam liberados, contra
gradiente, no exterior da membrana plasmtica. Stios na cadeia nos quais as reaes

29

redox ocorrem acopladas extruso de prtons so chamados stios de acoplamento.


Como consequncia produz-se um gradiente de prtons, isto , uma concentrao
diferente de prtons dentro e fora da clula (Figura 3.16). No mximo 10 prtons
liberados para cada NADH oxidado utilizando O2 como aceptor final. A face interna da
membrana fica ainda mais negativa e a diferena de carga eltrica (gradiente eltrico)
gera um potencial de membrana, da ordem de 0,1 a 0,2 V. A energia conservada nesse
gradiente eletroqumico chamada fora prton motriz e constituda por dois
componentes: o gradiente de pH (concentrao de prtons maior na face externa da
membrana) e o gradiente eltrico (a face interna da membrana negativa em relao
face externa). O retorno dos prtons ao interior da clula um processo espontneo, a
favor do gradiente eletroqumico, capaz de levar sntese de ATP. Como a membrana
impermevel a prtons, estes s podem voltar ao citoplasma e desfazer o gradiente
atravs do complexo sintetizador de ATP, a ATP sintase (Figura 3.17).
Figura 3.16. Esquema geral de uma
cadeia de transporte de eltrons bacteriana
localizada na membrana plasmtica,
evidenciando o transporte de eltrons e o
bombeamento de prtons. O exterior da
membrana fica com maior concentrao de
prtons e o gradiente eltrico forma-se na
membrana.

Figura 3.17. Modelo de ATP


sintase de Escherichia coli.

30

O exato mecanismo do bombeamento de prtons ainda objeto de controvrsia.


Uma possibilidade consistente baseada no fato de alguns transportadores de eltrons, ao
serem reduzidos, captarem prtons do citoplasma e, ao transferirem eltrons para o
composto seguinte da cadeia, liberarem prtons fora da membrana. Esta alternativa s se
aplica s transferncias de eltrons associadas captao/expulso de prtons. Nos casos
em que isto no ocorre, ou seja, h transferncia apenas de eltrons, o bombeamento de
prtons explicado pela diferena de conformao dos transportadores nos estados
oxidado e reduzido. Estas diferenas de conformao provocariam alterao no valor de
pKa de alguns grupos ionizveis da cadeia lateral de aminocidos, que ficariam expostos
na face externa da membrana, liberando prtons para o exterior.

3.3 - Obteno de NADPH

H duas vias metablicas heterotrficas capazes de promover a reduo de


NADP+, gerando NADPH: a via das pentoses e via de Entner-Doudoroff. Alm disso, a
reao catalisada pela isocitrato desidrogenase (do ciclo de Krebs ou do ramo oxidativo)
bacteriana tambm pode originar NADPH.

B - METABOLISMO AUTOTRFICO
Microrganismos autotrficos so aqueles capazes utilizar CO2 como nica fonte
de carbono. Como a fonte de carbono est totalmente oxidada, energia e poder redutor
devem ser providos pela luz ou pela oxidao de compostos inorgnicos.

3.1 Obteno de ATP

3.1.1. Obteno de ATP por oxidao de compostos inorgnicos

As bactrias podem obter ATP pela oxidao de compostos inorgnicos exgenos,


incluindo monxido de carbono, hidrognio, compostos reduzidos de enxofre e de
nitrognio, e ons bivalentes, como Fe2+ e Mn2+. Os microrganismos com este tipo de
metabolismo so denominados quimiolitotrficos. Para que as oxidaes ocorram, a
clula apresenta uma cadeia de transporte de eltrons cujo aceptor final o oxignio

31

(aerbios), nitrato, nitrito, sulfato ou bicarbonato (anaerbios). A Tabela 3.4 apresenta as


reaes globais realizadas por quimiolitotrficos dos diferentes grupos citados.
Tabela 3.4. Bactrias quimiolitotrficas, respectivos substratos e valor do Go' da reao
de oxidao
Bactria
Reao
Go'(mV/mol)
Nitrosomonas europea
2 NH4+ + 3 O2 2 NO2- + 2 H2O + 4 H+
-551,2
Nitrobacter winogradskyi
2 NO2 + O2 2 NO3
-74,3
-472,5
Cupriavidus necator
2 H2 + O2 2 H2O
Pseudomonas carboxydovorans 2 CO + O2 2 CO2
-504,9
o
2+
-588,2
Acidithiobacillus thiooxidans
2 S + 3 O2 + 2 H2O 2 SO4 + 4 H
2+
+
3+
Acidithiobacillus ferrooxidans
4 Fe + O2 + 4 H 4 Fe + 2 H2O
-17,7
2+
+
-77,6
Leptothrix spp.
2 Mn + O2 + H2O 2 MnO2 + 4 H
+
Paracoccus denitrificans
5 H2 + 2 NO3 + 2 H 6 H2O + N2
-958,8
2+
-154,4
Desulfovibrio desulfuricans
4 H2 + SO4 + 2H H2S + 4 H2O
+
Methanobacterium
4 H2 + HCO3 + H CH4 + 3 H2O
-138,6
termoautrotrophicum
Como uma adaptao para a utilizao de grande variedade de substratos, com
valores diferentes de potenciais de reduo, as cadeias de transporte de eltrons dos
organismos quimiolitotrficos tm composio muito variada. A cadeia de transporte de
eltrons

de

bactrias

que

oxida

H2

(quimiolitotrfica),

por

exemplo,

tem

aproximadamente a mesma organizao e funcionamento da cadeia de transporte de


eltrons de E. coli (quimiorganotrfica) em aerobiose, ou de mamferos, porque os
doadores de eltrons (H2 e NADH) tm potencial de reduo semelhante e mesmo
aceptor final (O2) (Tabela 3.3). Nestes casos, a variao de energia livre entre doador e
aceptor de eltrons similar. Em bactrias pertencentes ao gnero Acidithiobacillus, a
cadeia de transporte de eltrons pode ser acionada a partir de diferentes transportadores,
dependendo da forma de enxofre utilizado como substrato, resultando em diferentes
rendimentos energticos. Em Nitrobacter, a cadeia de transporte de eltrons formada
por poucos componentes, uma vez que o alto potencial de reduo do doador inicial de
eltrons, o nitrito, impe a transferncia de eltrons diretamente para um citocromo
(Figura 3.18). Uma consequncia importante da pequena diferena dos potenciais de
reduo entre o doador inicial e o aceptor final de eltrons a pequena variao de
energia livre associada transferncia de eltrons (Tabela 3.4) e, portanto, a pequena
produo de ATP em relao ao total de substrato oxidado. Devido ao baixo rendimento

32

em ATP, uma grande quantidade do substrato deve ser oxidado e o crescimento destas
bactrias lento.

Figura 3.18. Cadeia de transporte de eltrons produtora de ATP em Nitrobacter.


3.1.2 Obteno de ATP por fotofosforilao

Um processo biolgico fundamental, do qual todos os outros dependem, a


fotossntese, que consiste na transformao da energia luminosa em energia qumica. Os
organismos atuais capazes de realiz-la so alguns grupos de bactrias, as algas e as
plantas. Os outros seres vivos usam a energia qumica contida em compostos direta ou
indiretamente derivados da fotossntese; portanto, em ltima anlise, toda a energia
consumida pelos sistemas biolgicos provm originalmente da energia solar.
Fotofosforilao o processo de obteno de ATP a partir da energia luminosa.
Neste processo, a energia luminosa captada por pigmentos especiais e transferida a
outros pigmentos capazes de emitir eltrons. O eltron emitido captado por um aceptor
e transferido por uma cadeia de transporte de eltrons at um receptor final. As
transferncias de eltrons esto associadas formao de um gradiente de prtons que
permite a sntese de ATP a partir de ADP e fosfato. Dependendo do aceptor final, o tipo
de fotossntese cclico ou no cclico.

33

Os pigmentos e as estruturas que os contm variam com as espcies

A fotossntese das bactrias no segue um padro, apresentando grandes variaes


quanto forma e aos componentes que dela participam. O processo caracterizado pela
participao de pigmentos fotossensveis: clorofila a e feofitinas, encontradas apenas nas
cianobactrias e bacterioclorofilas e bacteriofeofitinas, encontradas nas bactrias (Figura
3.19). Existem diferentes tipos de bacterioclorofilas, que se caracterizam por apresentar
picos de absoro luminosa em comprimentos de onda; a presena de diferentes
pigmentos aumenta a amplitude do espectro luminoso aproveitado e contribui para a
distribuio destes organismos por diferentes ambientes.

Figura 3.19. Estruturas das clorofilas, bacterioclorofilas, feofitinas e bacteriofeofitinas. O


longo e hidrofbico radical fitil, presente em todas estas molculas, possivelmente auxilia
a solubilidade em meio apolar.
As estruturas que contm os pigmentos fotossensveis tambm variam nos
diferentes grupos bacterianos, sendo diferentes da organela correspondente das plantas

34

superiores, os cloroplastos. Nas bactrias prpuras, o aparelho fotoqumico est


localizado em invaginaes da membrana citoplasmtica, formando tbulos. Nas
bactrias verdes, h vesculas envoltas por uma monocamada membranosa, chamadas
clorossomos, que se justapem s membranas. Os clorossomos abrigam bacterioclorofila
c, d e e, estando a cadeia de transporte de eltrons e bacterioclorofila a localizadas na
membrana plasmtica. Nas cianobactrias, o sistema fotossintetizante mais complexo,
formado por lamelas membranosas, dispostas em vrias camadas, os tilacoides,
semelhantes aos dos cloroplastos.

Nos centros de reaes h emisso de eltrons


O mecanismo de converso de luz em energia qumica envolve molculas capazes
de absorver energia luminosa. A absoro de um quantum de energia luminosa por uma
molcula sensvel luz eleva um eltron a um nvel de energia maior. A energia inerente
na molcula excitada pode seguir quatro destinos diferentes: ser dissipada na forma de
calor; levar emisso de luz; transferir a excitao para outra molcula e emitir o eltron,
reduzindo outro composto (Figura 3.20).

A
B
C
D
Figura 3.20 Formas de dissipao de energia de um composto excitado para a volta ao
estado fundamental.

35

Os pigmentos fotossintticos so divididos em duas categorias: pigmentos


captadores de luz (carotenoides, ficobilinas e bacterioclorofilas) e pigmentos do centro de
reao (bacterioclorofilas). Os pigmentos captadores de luz, pigmentos acessrios ou
pigmentos antena, constituem a maioria dos pigmentos fotossintticos. Desempenham um
papel crtico na fotossntese porque so capazes de absorver luz em diferentes
comprimentos de onda. A energia por eles absorvida transferida de uma molcula para
outra, at o centro de reao, onde excitam molculas de bacterioclorofila (Figura 3.20C)
chamadas par especial. Estas molculas tm a propriedade especial de emitir eltrons
(Figura 3.20D). A natureza dos pigmentos captadores de luz varia conforme o
microrganismo, mas todos absorvem luz em comprimentos de onda diferentes da
bacterioclorofila do centro de reao e, por apresentarem amplos limites de absoro,
tornam o processo mais eficiente.

3.1.2.1 Fotossntese cclica

Na fotofosforilao cclica (Figura 3.21), os eltrons emitidos pelo centro de


reao a ele retornam depois de percorrer uma cadeia de transportadores de eltrons.
As bactrias prpuras do enxofre, um tipo de bactria fotossintetizante anaerbia,
apresentam uma bacterioclorofila com o pico de absoro da luz no comprimento de onda
de 870 nm. Os pigmentos acessrios absorvem energia e transferem a excitao para o
par especial, a bacterioclorofila P870, localizada no centro de reao. Esta
bacterioclorofila, quando excitada, passa a apresentar um potencial de reduo muito
baixo, capaz de emitir um eltron. A emisso do eltron eleva o potencial de reduo,
convertendo a bacterioclorofila em forte oxidante. O eltron emitido captado por uma
bacteriofeofitina e segue para duas ubiquinonas no centro de reao. Uma das
ubiquinonas reduzidas capta prtons. As quinonas so hidrofbicas, podem se
movimentar pela membrana e transferem eltrons para o citocromo bc1. Este citocromo
transfere os eltrons para o citocromo c2 que os devolve para a bacterioclorofila P870,
fechando o ciclo. No nvel do citocromo bc1, h translocao de prtons para o exterior
da clula, gerando um gradiente de prtons. A presena da ATP sintase na membrana
torna possvel a sntese de ATP, a partir de ADP e fosfato, com o retorno dos prtons ao
interior da clula. Como no h desprendimento de oxignio, este tipo de fotossntese
chamada no oxignica, ou anoxignica, que tem por finalidade a formao de ATP.

36

Figura 3.21. Fotossntese cclica. A. Esquema de transferncia de eltrons considerando


os potenciais de reduo. B. Disposio na membrana plasmtica de componentes do
fotossistema e da cadeia de transporte de eltrons.

37

3.1.2.2 Fotossntese no cclica

A fotossntese de cianobactrias, semelhante das algas e das plantas verdes,


chamada fotossntese no cclica porque os eltrons emitidos pelo centro de reao tm
trajetria linear (Figura 3.22) e no retornam ao composto de origem.
A fotossntese no cclica diferencia-se da cclica por
desenvolver-se nos tilacoides.
ter a participao de dois fotossistemas.
levar reduo de NADP+, alm da formao de ATP.
acumular prtons no interior dos tilacoides.
envolver ficobilissomas, que so arranjos formados por ficobiliprotenas
ancoradas membrana do tilacoide, constituindo o sistema antena das
cianobactrias
apresentar clorofilas diferentes, que absorvem em comprimentos de onda
distintos

A fotofosforilao no cclica inicia-se pela absoro de luz pelos ficobilissomas


que transferem energia ao fotossistema II. O fluxo de eltrons envolve duas reaes
fotoqumicas interligadas, que ocorrem nos fotossistemas I e II (Figuras 3.21 A e B). O
fotossistema I tambm designado P700, porque absorve comprimento de onda de 700 nm
e, por razes anlogas, o fotossistema II chamado P680. Os fotossistemas tambm
diferem quanto aos valores dos seus potenciais de reduo: + 0,5 e + 1,0 volts, para P700
e P680, respectivamente. A diminuio do potencial de reduo do fotossistema II (P680)
possibilita a transferncia de um eltron da clorofila a para a feofitina. O eltron , a
seguir, transferido por uma cadeia que inclui plastoquinonas, citocromos, protenas ferroenxofre, complexo citocromos b-f e plastocianina, chegando finalmente ao fotossistema I
(P700). Ao longo destas passagens h bombeamento de prtons. O eltron emitido por P680
reposto por eltrons originados da gua: uma protena contendo mangans capaz de
cindir a molcula de gua, retirando-lhe eltrons que so transferidos para P680. Os
prtons so bombeados para o interior dos tilacoides, promovendo a formao de um
gradiente de prtons que, igualmente fotofosforilao cclica e ao transporte de eltrons
na respirao, promove a sntese de ATP. O oxignio da molcula de gua liberado
como O2 e, por isto, este tipo de fotossntese chamada oxignica.

38

Figura 3.22. Fotossntese no cclica. A. Esquema de transferncia de eltrons


considerando os potenciais de reduo. B. Disposio na membrana plasmtica de
componentes da cadeia de transporte de eltrons.
Concomitantemente, a excitao luminosa do centro de reao do fotossistema I
(P700) tambm provoca a emisso de eltron, captado por outra molcula de clorofila a e,

39

a seguir, transferido por quinonas e protenas ferro-enxofre para a ferredoxina. Pela ao


da ferredoxina:NADP+ oxidorredutase, feita a transferncia final para o NADP+,
gerando NADPH. O resultado lquido da fotofosforilao no cclica , portanto, a
produo de ATP, NADPH e O2.
Uma alternativa para os eltrons emitidos por P700 retornar ao P700, via complexo
b-f, em vez de serem dirigidos ao NADP+. Neste caso, no se produz NADPH mas gerase ATP, pois, no nvel do complexo b-f so bombeados prtons. Controlando o fluxo de
eltrons em cada uma das vias, a clula pode balancear as produes de ATP e NADPH,
coenzimas que so utilizadas na chamada fase escura da fotossntese. Esta fase
composta de reaes que se processam independentemente do estmulo luminoso e
consistem, em ltima anlise, na incorporao de CO2 em compostos orgnicos levando
sntese dos 13 precursores e demais molculas necessrias.

3.2 Obteno de NADPH

Assim como as bactrias heterotrficas, as autotrficas necessitam ATP e NADPH


para as biossnteses. Adicionalmente, tambm dependem dessas coenzimas para
promover a reduo do CO2 a compostos orgnicos, processo denominado fixao de
CO2. Organismos autotrficos estritos suprem esta necessidade a partir de uma fonte de
eltrons independente da fonte de carbono. Isto torna estes microrganismos capazes de
sintetizar matria orgnica, utilizando-se exclusivamente de matria inorgnica, energia e
de NADPH. Os procariotos autotrficos que realizam fotossntese cclica e os
quimiolitotrficos obtm poder redutor, o NADPH, por reduo de NADP+ envolvendo
uma cadeia de transporte de eltrons reversa.
A cadeia de transporte de eltrons reversa promove a reduo de NADP+

No metabolismo quimiolitotrfico autotrfico, o mesmo substrato reduzido


doador de eltrons para produo de ATP e para a reduo de NADP+. No existem
outros substratos para exercer esta funo. Como o doador de eltrons exgeno, a
enzima que o oxida est localizada na membrana celular e faz parte da cadeia de
transporte de eltrons. Os eltrons tm dois destinos: seguem a via termodinamicamente
favorvel, sendo recebidos por componentes da cadeia com maior potencial de reduo,
produzindo um gradiente de prtons e formando ATP ou so transferidos para

40

componentes da cadeia de transporte de eltrons com menor potencial de reduo at o


NADP+. Os compostos inorgnicos levam liberao de eltrons para intermedirios da
cadeia de transporte de eltrons com potencial de reduo superior ao do
NADP+/NADPH (Figura 3.23).
Em bactrias que oxidam compostos de enxofre, os eltrons deles derivados so
liberados no nvel dos citocromos, em razo dos valores de seus potenciais de reduo. A
reduo do NADP+ processa-se por um mecanismo que requer energia, porque os
eltrons fluem no sentido dos menores potenciais de reduo padro. Esse mecanismo
conhecido como cadeia de transporte de eltrons reversa (Figura 3.22). Para
exemplificar: os eltrons derivados do tiossulfato seguem dois sentidos. O primeiro, no
sentido termodinamicamente favorvel da cadeia de transporte de eltrons, gera fora
prton motriz, e o segundo no sentido contrrio, gera coenzimas reduzidas. O fluxo
reverso de eltrons, por processar-se no sentido dos menores potenciais de reduo,
demanda energia. A explicao para o fluxo reverso baseia-se no fato de algumas das
reaes redox na cadeia de transporte de eltrons estarem em equilbrio com a fora
prton motriz. Assim como o transporte de eltrons no sentido termodinamicamente
favorvel leva formao do gradiente de prtons, a fora prton motriz pode ser
utilizada para promover o fluxo dos eltrons no sentido dos menores potenciais de
reduo. Uma evidncia experimental para este fato a inibio da cadeia de transporte
de eltrons reversa provocada por ionforos, que provocam o colapso do gradiente de
prtons.

Figura 3.23. Reduo de NADP pela Cadeia de transporte de eltrons reversa


No caso das bactrias fotossintticas prpuras do enxofre, assim como em outras
bactrias que fazem fotossntese anoxignica, a reduo das coenzimas obtida custa

41

de compostos externos reduzidos, como H2S ou compostos orgnicos. O mecanismo


similar ao descrito para bactrias quimioautotrficas, ou seja, transporte eletrnico
reverso, no qual o NADP+ o aceptor final dos eltrons.

3.1.3 Obteno dos 13 precursores

Embora haja diferentes vias metablicas bacterianas que promovem a fixao


biolgica do CO2 (incorporao do CO2 em molculas orgnicas), este texto se restringe a
analisar o ciclo de Calvin-Benson, a via de fixao mais frequente.

3.1.3.1 Ciclo de Calvin-Benson.

Como a nica fonte de carbono dos auttrofos o CO2, molcula totalmente


oxidada, para sua reduo, as clulas devem investir ATP e NADPH, produzidos pelas
vias apropriadas de processos fotossintticos ou quimiossintticos litotrficos. Neste
caso, a obteno dos 13 precursores ocorre no sentido oposto ao dos heterotrficos nos
quais a oxidao do substrato orgnico garante a produo de ATP e de NADPH.
Para a fixao do CO2 h necessidade de duas enzimas chave: a ribulose 1,5bisfosfato carboxilase/oxigenase (rubisco) e a fosforribuloquinase. A primeira tida
como a enzima mais abundante da biosfera, ausente de clulas animais. Outras reaes do
ciclo so catalisadas por enzimas que participam de outras vias metablicas. O ciclo de
Calvin-Benson encontrado em Archaea, cianobactrias, bactrias prpuras, na maioria
das bactrias quimiolitotrficas e plantas superiores. A primeira reao do ciclo (Figura
3.24), catalisada pela rubisco constitui a etapa fundamental da incorporao do CO2 em
uma molcula orgnica. Nesta reao, uma molcula de CO2 ligada ribulose 1,5bisfosfato e gera um composto muito instvel que rapidamente convertido em duas
molculas de 3-fosfoglicerato, um intermedirio da via glicoltica. A fosforilao do 3fosfoglicerato, custa de ATP, produz 1,3-bisfosfoglicerato; em seguida, sua reduo a
gliceraldedo 3-fosfato, a mesma reao que ocorre na gliconeognese, entretanto, com
o gasto de NADPH. Parte das molculas de gliceraldedo 3-fosfato convertida em dihidroxiacetona fosfato, que se combina com gliceraldedo 3-fosfato formando frutose 1,6bisfosfato. Esta convertida em frutose 6-fosfato, que pode ser isomerizada a glicose 6fosfato. At este ponto, ocorreram os eventos principais do processo: a incorporao do

42

CO2 e o gasto de ATP e de coenzimas reduzidas. O destino metablico do CO2


incorporado varia muito e a formao de glicose apenas uma das alternativas.

Figura 3.24. Fixao de CO2 pelo Ciclo de Calvin


As reaes seguintes so semelhantes a algumas da via das pentoses, levando
formao de ribulose 1,5-bisfosfato, que permite o reincio do ciclo.
A equao geral do ciclo de Calvin-Benson :
6 CO2 + 11 H2O+ 18 ATP + 12 NADPH Glicose 6-fosfato + 18 ADP + 17 Pi + 12 NADP+

Se o ciclo for iniciado com 6 molculas de ribulose 1,5-bisfosfato e 6 molculas


de CO2, haver produo lquida de uma molcula de glicose 6-fosfato e a regenerao
das 6 molculas de ribulose 1,5-bisfosfato. Para efetuar estas converses h gasto de 18
ATP e 12 NADPH, o que corresponde ao dispndio energtico para a sntese de uma
molcula de glicose.
Em bactrias, o Ciclo de Calvin-Benson supre os seguintes precursores de
biossntese: ribose 5-fosfato, sedoheptulose 7-fosfato, eritrose 4-fosfato, 3fosfoglicerato, gliceraldedo 3-fosfato, frutose 6-fosfato e a glicose 6-fosfato.

43

Como nesta via formam-se apenas 7 dos 13 precursores necessrios para a


biossntese dos constituintes celulares, impossvel clula multiplicar-se utilizando
apenas o ciclo de Calvin-Benson. O fosfoenolpiruvato e o piruvato podero ser
sintetizados a partir de 3-fosfoglicerato em reaes semelhantes quelas encontradas na
via glicoltica. Em seguida, acetil-CoA seria formada a partir de piruvato por ao do
complexo piruvato desidrogenase ou pela piruvato-formiato liase. Finalmente, os demais
precursores podem ser obtidos nos ramos oxidativo e redutor, uma vez que o propsito,
neste caso, apenas biossinttico e no tem por finalidade obter energia.

C - ESTRATGIAS DE SOBREVIVNCIA
At este ponto, foram descritas neste captulo as potencialidades dos
microrganismos, observadas nos dias atuais, em obter energia (ATP), precursores de
esqueleto carbnico para biossntese de constituintes celulares e poder redutor (NADPH).
As vias aqui apresentadas so utilizadas conforme o microrganismo. Para a compreenso
da

diversificao

de

estratgias

metablicas

empregadas,

deve-se

considerar

principalmente o meio ambiente no qual vivem as distintas bactrias.


Para especular sobre a evoluo que proporcionou os diferentes tipos metablicos
bacterianos, deve-se considerar o incio da vida, as condies ento prevalentes e suas
alteraes bruscas ou gradativas ao longo do tempo. Grande parte desta anlise, embora
especulativa, baseia-se nas formas de vida atuais e suas estratgias de sobrevivncia.
impossvel reconstituir o processo de diversificao metablica ocorrido nos organismos
procariticos desde a origem da vida, mas uma abordagem que considere a evoluo
metablica contribui para uma melhor compreenso do metabolismo. As estratgias
metablicas sero divididas em dois grandes perodos da evoluo dos metabolismos. O
primeiro corresponde vida em anaerobiose e tratar do metabolismo nas condies
supostamente mais primitivas da Terra. A sucesso de estratgias de sobrevivncia que
ocorreram neste perodo provocaram mudanas no ambiente que, por sua vez, exerceram
forte presso seletiva e profundos ajustes nas estratgias at ento existentes. O marco
mais importante de mudanas nas condies prevalentes no planeta Terra foi o
surgimento do O2, criando condies para o surgimento de estratgias metablicas mais
eficientes e relegando a nichos especficos aquelas pr-existentes.

44

3.1. A VIDA EM ANAEROBIOSE

3.1.1. Oxidao de matria orgnica.

Os primeiros seres vivos eram anaerbios. Acredita-se que se nutriam e


metabolizavam matria orgnica originada por processos abiticos. Esta hiptese
pressupe a disponibilidade de diferentes molculas orgnicas j prontas para a absoro
e incorporao para a sntese de macromolculas, de modo que as clulas primitivas no
necessitariam apresentar todas as atividades biossintticas. Apesar de ainda existirem
bactrias com estas caractersticas, h, em contraposio, bactrias capazes de crescer em
meios de cultura compostos apenas de sais minerais e uma nica fonte orgnica de
carbono e energia (como a glicose). Estas clulas so, portanto, capazes de sintetizar
todos os constituintes celulares a partir de um nico tipo de molcula orgnica.
Dois processos metablicos atuais so baseados na oxidao anaerbia de
compostos orgnicos: fermentao e respirao anaerbia.

3.1.1.1 Fermentaes de acares

Supe-se que os primeiros organismos eram heterotrficos e apresentavam uma


estrutura celular simples, com uma membrana plasmtica sem complexidade, constituda
de poucas protenas funcionais. No deveriam existir, nestas clulas, os componentes de
cadeia de transporte de eltrons, nem aparatos fotossintticos, localizados nas
membranas. Sem protenas de membrana exclusivas que permitissem s clulas utilizar
um aceptor final de eltrons exgeno, os microrganismos passaram a oxidar compostos
orgnicos por um processo denominado fermentao. Neste tipo de metabolismo, as
reaes de oxirreduo ocorrem no citossol e o ATP produzido por fosforilao no nvel
de substrato. O NADH oxidado por compostos produzidos pelo prprio metabolismo e
as substncias reduzidas no so utilizadas pelas clulas, sendo eliminadas no meio. Por
esta razo, as fermentaes caracterizam-se pela excreo de grandes quantidades de
compostos orgnicos, como lcoois e cidos orgnicos. A forma de reoxidar a coenzima
na fermentao acarreta consequncias importantes para o processo de obteno de
energia:
a. a produo de ATP fica restrita s reaes de fosforilao no nvel do substrato.

45

b. a oxidao do substrato inicial incompleta e os produtos finais da


fermentao, excretados no meio, por serem molculas orgnicas apenas parcialmente
oxidadas, podem ser utilizadas como substrato oxidvel por outros organismos.
As fermentaes so denominadas de acordo com os principais produtos finais
que geram. Embora os microrganismos sejam capazes de fazer diversos tipos de
fermentao, alguns autores as classificam em seis grandes classes: ltica, alcolica,
butrica, cido mista, propinica e homoactica.

Figura 3.25 Quadro geral das fermentaes de acares. Os gneros mais comuns a
realizar cada um dos tipos de fermentao so Streptococcus, Lactobacillus (A),
Clostridium propionicum (B), Zymomonas e leveduras (C), Enterobacteriaceae (D),
Clostridia (E), Klebsiella e leveduras (F), Clostridia (G), bactrias do cido propinico
(H). As reaes assinaladas com asterisco so as que promovem a reoxidao de
coenzimas.
A maior parte das fermentaes bacterianas de acares tem o piruvato como
intermedirio chave uma vez que a oxidao do NADH ocorre por transferncia de seus
eltrons ao piruvato ou a substncias dele derivadas (Figura 3.25). No caso das via das
fosfocetolases, alm do piruvato gerado acetil-fosfato. Substncias dele derivadas sero
os aceptores endgeno de eltrons. Os aceptores dos eltrons so endgenos e variveis,
gerando diversos tipos de fermentao com distintos produtos finais. O tipo de
fermentao funo do meio em que a bactria vive. Bactrias que vivem em meios
capazes de tamponar o pH (como ocorre com o leite, tamponado pelas protenas que

46

contm) podem fermentar com produo de cidos apenas; bactrias que vivem em
ambientes sem tamponamento apresentam um tipo de fermentao em que outros
produtos no cidos so liberados, tornando a acidificao menos intensa no inibindo o
crescimento bacteriano.

Fermentao ltica

Quando o NADH produzido pela oxidao da glicose reduz o piruvato a lactato, a


fermentao chamada ltica. Este tipo de fermentao encontrado em bactrias que
fazem parte da microbiota da pele de animais e do trato gastrointestinal, incluindo boca e
faringe. H dois tipos de fermentao ltica, a homoltica e a heteroltica. Na primeira,
forma-se lactato como principal produto (caracterstica de Lactobacillus e Streptococcus).
e na segunda, forma-se lactato, etanol, CO2, acetato, etc. (Leuconostoc e Bifidobacterium)
(Figura 3.25 A).
Bactrias homo e heterolticas podem ser distinguidas por usar ou no a via da
fosfocetolase. As homolticas metabolizam carboidratos pela via de Embden-MeyerhofParnas. Os dois mols de piruvato geram lactato ou so utilizados como precursores de
biossntese. As heterolticas produzem simultaneamente piruvato e acetilfosfato a partir
da oxidao da glicose pela via da fosfocetolase. O piruvato pode ser convertido a lactato
e o acetilfosfato em acetato e/ou etanol (Figura 3.7A), originando vrios produtos de
fermentao.

Fermentao propinica

A fermentao de glicose ou outros substratos, formando propionato, acetato e


CO2 como principais produtos caracteriza esta fermentao (Figura 3.25). A produo de
propionato pode ocorrer por duas vias diferentes: uma envolve a converso de lactato a
acrilato, que reduzido a propionato, permitindo a oxidao de um NADH (Fig.3.25 item
B); a outra realizada a partir de succinato, que isomerizado a metilmalonato e este
descarboxilado a propionato (Figura 3.25 item H).

47

Fermentao frmica

Neste processo, a via de oxidao do NADH varia dependendo do tipo de


microrganismo considerado, originando diferentes produtos finais. Formiato sempre
formado, podendo ser cindido a CO2 e H2. De acordo com os demais produtos finais
formados, a fermentao frmica subdividida em cido mista e do butanodiol.
a. Fermentao cido mista - as oxidaes dos NADH so obtidas em diferentes
etapas:
(1) pela reduo de uma molcula de piruvato a lactato;
(2) outra molcula de piruvato origina acetil-CoA que reduzida a acetaldedo,
(3) e este, novamente reduzido a etanol.
(4) e na converso de oxaloacetato (a partir de fosfoenolpiruvato ou piruvato) a
succinato. Outra possibilidade a acetil-CoA ser fosforilada a acetilfosfato, dando origem
a um ATP ao ser convertida a acetato (Figura 3.26). Fermentao deste tipo realizada
principalmente por Escherichia coli e pelos gneros Salmonella, Shigella, Proteus, Vibrio
e Yersinia.

Piruvato
O
H3C

COO

OOC

CH2 C

H2C

COO

O
C

NADH
CoA
NAD+

Acetil-CoA

OH

NADH

OOC

Formiato

H3C

NADH

NAD+

NAD+
OH

H3C

Acetaldedo

NADH

H3C

H3C

OOC

H
C

C COO
H
Fumarato

ADP
ATP

O
H

H3C

OOC

CH2

CH2

COO

H
Lactato

Acetilfosfato

OH
COO

COO

O
COO

CH2 C
Malato

NAD+

COO

Fosfoenolpiruvato

Oxaloacetato

H3C

CO2

H2

Etanol

Acetato

Succinato

Figura 3.26 Fermentao cido mista. As coenzimas reduzidas so oxidadas pela


converso de piruvato a vrios compostos, entre os quais os cidos aparecem em maior
concentrao.

48

b. Fermentao do butanodiol - a quantidade de cidos formados pequena,


predominando como produtos finais compostos neutros como o etanol, acetona e
butanodiol (Figura 3.27). realizada pelos gneros Enterobacter, Aeromonas, Serratia,
Klebsiella, Bacillus, etc.

Piruvato
O
H3C

COO
O
H3C

O
H3C

COO

CoA

H3C

OH

Acetil-CoA

CH3

NADH

2 CO2

Acetona

NAD+
O
H3C

NADH
H

Acetaldedo

COO
NAD+

Formiato

NADH
NAD+
OH
H3C

OH OH
H

H3C

H
Etanol

CO2

H2

CH3

Butanodiol

Figura 3.27 Fermentao do butanodiol. Os produtos finais esto indicados em verde.


Fermentao alcolica

A fermentao com formao de etanol pode ocorrer por duas vias diferentes:
(1) piruvato descarboxilado a acetaldedo que reduzido a etanol com a
oxidao de NADH ou
(2) piruvato convertido a acetil-CoA e formiato; acetil-CoA reduzida a
acetaldedo com a oxidao de NADH e finalmente, acetaldedo reduzido a etanol com
a oxidao de mais um NADH.
Em Zymommonas mobilis, a oxidao da glicose at piruvato leva reduo de
dois mols de NAD+, que so reoxidados na formao de etanol pela primeira via
mencionada (1), permitindo que este seja o nico produto de fermentao (Figura 3.25).

49

Por outro lado, E. coli produz etanol utilizando a segunda via (Figura 3.26) mencionada
(2). Assim, so reduzidos dois mols de NAD+ na oxidao da glicose a piruvato, mas so
necessrios dois mols de NADH para formao de etanol a partir de cada mol de acetilCoA. E. coli necessitar formar outros produtos de fermentao para ajustar o balano de
coenzimas reduzidas/oxidadas, como foi visto acima (fermentao cido mista).

Figura 3.28 Esquema geral de fermentao (ou respirao anaerbia).


Ao analisar a fermentao como uma estratgia de sobrevivncia deve-se
considerar que, alm de ser um mecanismo de reoxidao de coenzimas e sntese de ATP,
ela tambm supre as necessidades de obteno de poder redutor e dos 13 precursores de
biossnteses. Para analisar esta questo, considere-se uma das situaes mais simples, ou
seja, uma bactria que oxida glicose pela via de Embden-Meyerhof-Parnas e que gera
lactato como nico produto de fermentao. Como pode ser verificado na Figura 3.28,
nesta bactria, o ATP gerado apenas por fosforilao no nvel de substrato. Os 13
precursores sero obtidos em pelo menos trs vias metablicas: Embden-Meyerhof-

50
Parnas, via das pentoses e ramos oxidativo e redutor. O NADP+ reduzido
principalmente na via das pentoses, embora possa ser obtido em parte pela ao da
isocitrato desidrogenase.

BOX 1
As fermentaes de acares geram produtos de interesse para o homem

Nas bactrias, alm das fermentaes j mencionadas, vrios outros tipos podem
ocorrer, levando a diferentes produtos finais, muitos dos quais tm grande aplicao
prtica. H microrganismos capazes de produzir solventes orgnicos, como acetona,
butanol e isopropanol. Deve-se ainda lembrar a extensa utilizao, em panificao, da
produo fermentativa de CO2 por leveduras. Ainda na rea de alimentos,
Propionibacterium utilizada na fermentao destinada produo do queijo suo, cujo
sabor caracterstico se deve ao propionato formado e os buracos internos, formao
de CO2. O cido propinico pode ser usado como conservante de alimentos, como o po,
inibindo o crescimento de fungos e de algumas bactrias. Outros usos do cido
propinico incluem sua aplicao como intermedirio qumico na sntese de herbicidas,
perfumes e produtos farmacuticos.
O etanol produzido por fermentao tem grande emprego no Brasil como
combustvel. Para a produo industrial deste lcool, utilizada a fermentao de melao
de cana de acar por leveduras (Saccharomyces cerevisiae). A fermentao alcolica de
extratos de malte e de macerados de uvas e de vrios outros frutos utilizada h muitos
sculos para o preparo de diferentes bebidas alcolicas.
A fermentao ltica tem grande emprego industrial na rea de alimentos: leite e
vegetais podem ser fermentados para a produo de coalhada, iogurte, picles, etc. O cido
ltico purificado utilizado como acidulante de alimentos enlatados ou como conservante
de couros, tecidos, etc. Lactatos de clcio e ferro so empregados como medicamentos
em caso de carncia destes ctions. O lactato tambm o monmero para produo de
polilactato, um polmero com diversas aplicaes como termoplstico.

51

BOX2
A fermentao provoca a crie dentria
Uma consequncia grave da fermentao de acares, que afeta praticamente toda
a populao humana, a crie dentria. Nos diferentes estgios do processo de formao
da crie, vrias combinaes de bactrias, entre as quais Streptococcus e Lactobacillus,
podem interagir para formao de uma placa dental. A alta atividade fermentadora
bacteriana aps a ingesto de carboidratos reduz o pH da cavidade oral a valores entre 5,4
e 4,4, apesar do efeito tamponante da saliva. Nestes valores de pH, ocorre significativa
desmineralizao do esmalte: a hidroxiapatita, seu principal constituinte, libera ons OH-,
Ca2+ e PO43-, e sua estrutura alterada. O dente perde assim a importante proteo que o
esmalte constitui.
3.1.1.2 Fermentao de aminocidos

Alguns grupos de bactrias so incapazes de utilizar acares como substratos


oxidveis, mas conseguem viver anaerobiamente fermentando aminocidos. Neste
processo, um determinado aminocido atua como doador de eltrons e o aceptor final ,
geralmente, outro aminocido. A via fermentativa processa-se com um nmero de reaes
menor do que na fermentao de carboidratos. Um exemplo de fermentao de
aminocidos dado pela oxidao de alanina (Figura 3.29). Nesta reao, o aminocido
oxidado a acetil-CoA, com reduo de NAD+. A reoxidao da coenzima acoplada
reduo de glicina a acetato. Na primeira reao, forma-se um composto rico em energia,
a acetil-CoA, que permite a produo de ATP atravs da formao intermediria de
acetilfosfato.
O processo de fermentao de alanina pode ser resumido pela seguinte equao
geral:
Alanina + 2 glicina + 2 H2O + ADP + Pi 3 acetato +3 NH4+ + ATP + CO2

Outros aminocidos - leucina, isoleucina e valina - podem ser utilizados como


doadores de eltrons para a fermentao. A fermentao de aminocidos ocorre em
bactrias proteolticas, como Clostridium histolyticum, causador de gangrena gasosa em

52

animais e Clostridium perfringens, agente necrosante em humanos, aps traumatismo


com contaminao por solo ou fezes. A protelise no msculo, com posterior fermentao
dos aminocidos, produz odor ptrido, caracterstico da molstia.
2 H2O CoA

+ NH

CO2 NH4+

H3C

COO

2 NAD+

H3C

CoA

2 NADH

2 H+

Acetil-CoA

H
Alanina

NH3

Pi

2 H2C

COO

Glicina

CoA
O
Acetilfosfato H3C

O
P

2 H3C

Acetato

ADP
2 NH4+
ATP
O
Acetato

H3C

2 NAD+

Figura 3.29. Fermentao de alanina, um exemplo de fermentao de aminocidos.


3.1.1.3 Respirao anaerbia.

Se os primeiros organismos eram anaerbios e apresentavam mecanismos de


obteno de energia simples e pouco eficientes, o surgimento da respirao anaerbia foi
consequncia de uma grande modificao na estrutura da membrana plasmtica, que se
tornou muito mais complexa ao abrigar todos os componentes da cadeia de transporte de
eltrons.
Nesse processo, as bactrias utilizam como aceptor de eltrons um composto
exgeno diferente do oxignio. Este composto pode ser inorgnico (NO3-, NO2-, SO42-,
CO32-, Fe3+) ou orgnico (fumarato). A cadeia de transporte de eltrons anaerbia
constituda por desidrogenases e redutases, interligadas por quinonas.. A transferncia de
eltrons est associada extruso de prtons e formao de um gradiente, aproveitado
para a sntese de ATP. O rendimento do processo maior do que o das vias fermentativas,
porm menor do que o da respirao aerbia (Figura 3.30). A respirao anaerbia
encontrada em bactrias facultativas, como E. coli (tambm capaz de respirao aerbia e
fermentao), Pseudomonas (que tambm faz respirao aerbia) e em bactrias
anaerbias estritas, como as do gnero Desulfotomaculum. A transferncia de eltrons do
ltimo citocromo para o aceptor final catalisada por redutases diferentes, especficas
para cada aceptor: nitrato redutase, nitrito redutase, sulfato redutase, etc. Estas enzimas

53

tm funo anloga das oxidases da cadeia de transporte de eltrons aerbia, mas, no


caso da respirao anaerbia, so sempre designadas redutases. A presena destas
enzimas nas clulas indicativa da ocorrncia de respirao anaerbia, uma vez que sua
sntese reprimida por oxignio.

B
Figura 3.30. Cadeia de transporte de eltrons anaerbia (A) e aerbia (B) em E. coli.

54

Os doadores de eltrons para cadeia de transporte de eltrons anaerbia podem ser


coenzimas reduzidas (NADH), mas tambm compostos no totalmente oxidados como:
lactato, succinato, formiato entre outros.
Comparadas fermentao, as mudanas que possibilitaram a ocorrncia de
respirao anaerbia levaram a um melhor aproveitamento energtico da fonte de
carbono, uma vez que, ao ser mais oxidada, maior quantidade de energia fica disponvel
para a clula. O meio ambiente tambm foi modificado, pois a respirao anaerbia levou
diminuio da liberao de substncias reduzidas pela clula. Tais substncias (como
cidos), em concentraes elevadas, inibem a multiplicao celular, restringindo, dessa
maneira, o nmero de indivduos da populao.
Em E. coli, na ausncia de oxignio, a inibio da -cetoglutarato desidrogenase
induz o funcionamento dos ramos redutor e oxidativo (Figura 3.10), seja na ausncia ou
presena de nitrato, situaes que caracterizam fermentao ou respirao anaerbia,
respectivamente. Esta claramente uma estratgia que reduz a quantidade de coenzimas
reduzidas geradas com a oxidao da fonte de carbono. Entretanto, nem sempre isto
ocorre com as bactrias em anaerobiose. Por exemplo, Pseudomonas stutzeri, em
anaerobiose, no fermenta - apresenta apenas respirao anaerbia e o ciclo de Krebs
completo, sendo o NADH o doador inicial de eltrons da cadeia de transporte de eltrons
anaerbia.
As estratgias de obteno de NADPH e dos 13 precursores de biossntese so
muito semelhantes nos processos de respirao anaerbia e fermentao (Figura 3.26).
NADP+ reduzido na via das pentoses, na via de Entner-Doudoroff ou pela isocitrato
desidrogenase e os 13 precursores so obtidos pela via de Embden-Meyerhof-Parnas ou
via de Entner-Doudoroff, na via das pentoses e nos ramos oxidativo e redutor ou ciclo de
Krebs.

3.1.2 Sobrevivncia pela oxidao de matria inorgnica.

Considerando que as condies primitivas da Terra eram redutoras, o metabolismo


quimiolitotrfico deve representar uma das primeiras formas de metabolismo a ter
surgido com capacidade de gerar matria orgnica a partir de CO2. Nessas condies,
entretanto, o oxignio ainda no estava disponvel e os primeiros quimiolitoautotrficos
dependeriam de outros compostos como aceptores finais de eltrons. Como a maioria dos

55

outros compostos apresentam potenciais de reduo menores que o oxignio, a


quantidade de energia til nessas condies seria baixa, mas compatvel, uma vez que o
oxignio no estava disponvel para qualquer outro organismo.
Atualmente, compostos inorgnicos reduzidos podem originar-se de atividades
humanas, vulcnica ou de depsitos geolgicos. Outra fonte importante a atividade
biolgica, que gera compostos inorgnicos reduzidos (respirao anaerbia, assimilao
do NO3- e outros compostos, fixao biolgica de N2, etc.).
Muitos quimiolitotrficos so capazes de utilizar CO2 como nica fonte de
carbono

so

denominados

quimiolitoautotrficos.

Quando

conceito

de

quimiolitoautotrfico foi estabelecido por Winogradsky, referia-se exclusivamente a


quimiolitotrficos estritos (quimiolitoautotrficos), ou seja, bactrias capazes de obter
energia exclusivamente pela oxidao de compostos inorgnicos e utilizando CO2 como
fonte de carbono. Entretanto, h maior diversidade de tipos metablicos em bactrias que
oxidam compostos inorgnicos. Quimiolitotrficos facultativos, tambm denominados
mixotrficos, podem crescer autotroficamente utilizando compostos inorgnicos, sendo
tambm capazes de realizar simultaneamente um metabolismo heterotrfico. Vias
caractersticas dos dois tipos de metabolismo so utilizadas, por exemplo, da seguinte
maneira: a energia obtida pela oxidao de compostos orgnicos e inorgnicos e a fonte
de carbono CO2 e compostos orgnicos. A mixotrofia ocorre apenas em baixas
concentraes de nutrientes e as vias so acionadas conforme a predominncia de um tipo
de substncia, orgnica ou inorgnica. Quando em concentraes altas de um dos tipos de
nutriente, um comportamento diuxico observado, ou seja, cada um dos metabolismos
ocorre sequencialmente e no simultaneamente.
Como visto, bactrias autotrficas estritas devero fazer outras reaes, alm do
ciclo de Calvin-Benson, para obter os 13 intermedirios precursores. Estas reaes
incluem parte da via glicoltica, correspondente converso de 3-fosfoglicerato a
piruvato, e algumas reaes correspondentes s reaes dos ramos oxidativo e redutor,
pois em bactrias autotrficas estas reaes tm a funo apenas de suprir os
intermedirios precursores e no representam uma estratgia para oxidar completamente
a acetil-CoA. A Figura 3.31 apresenta uma rede metablica que deve funcionar em
organismos quimioautotrficos.

56

Figura 3.31 Esquema geral da produo dos 13 precursores em clula que faz
metabolismo quimio(foto)autotrficos
3.1.3 Utilizao de luz em anaerobiose.

Nos primrdios da vida na Terra, com uma atmosfera desprovida de oxignio, as


clulas poderiam manter-se com metabolismo anaerbio e quimiotrfico, utilizando-se de
compostos orgnicos disponveis no meio, por fermentao e depois por respirao
anaerbia de compostos orgnicos disponveis no meio. A oxidao metablica de
compostos inorgnicos, e no os processos abiticos, provavelmente consistiu na forma
mais primitiva de produo de matria orgnica. Posteriormente, surgiram as primeiras
bactrias fotossintetizantes. O mecanismo desenvolvido por esses primeiros seres capazes
de utilizar luz como fonte de energia era anaerbio. Um apoio para esta hiptese a
toxidez do O2 para muitas bactrias que fazem fotossntese anoxignica, resultado da
inibio da sntese dos pigmentos fotossensveis. As bactrias fotossintetizantes
anaerbias vivem atualmente em fundos de lagos onde recebem luz em ambiente
anaerbio. Os processos utilizados para a obteno dos 13 precursores e de NADPH em
bactrias que fazem fotossntese anoxignica no essencialmente diferente dos

57

utilizados por bactrias quimioautotrficas. A produo de ATP por sua vez representa
uma especializao dessas clulas, pois se tornaram capazes de utilizar a energia
luminosa para gerao do gradiente de prtons.

3.2

A vida em aerobiose.

3.2.1. A fotossntese deu origem ao O2.


Bactrias que fazem fotossntese anoxignica e usam CO2 como fonte de carbono
dependem de compostos reduzidos para gerar poder redutor (NADPH), necessrio para
fixao do CO2 e para as reaes de biossntese. Nos primrdios da vida na Terra,
compostos reduzidos de enxofre, como H2S, provavelmente eram os principais supridores
de eltrons.
Um grande passo evolutivo foi obtido quando algumas cianobactrias
desenvolveram um fotossistema com poder oxidativo capaz de extrair eltrons da gua.
Esta adaptao expandiu enormemente o habitat dos organismos fotossintetizantes, que
no mais se restringiram aos locais ricos em compostos inorgnicos reduzidos. A grande
consequncia dessa transformao foi a disponibilizao de O2, produzido pela oxidao
da gua. Os sistemas geradores de O2 foram fundamentais para proporcionar mudanas
importantes nas diferentes estratgias de sobrevivncia. Os organismos que oxidam
matria orgnica puderam oxid-la completamente a CO2 e H2O utilizando o O2 como
aceptor final de eltrons em uma cadeia de transporte de eltrons aerbia. Os organismos
quimioautotrficos tambm puderam aprimorar suas cadeias de transporte de eltrons
utilizando esse aceptor, retirando mais energia da oxidao de compostos inorgnicos.
A Tabela 3.5 mostra a diversidade de tipos de fotossintticos bacterianos que
resultam de diferenas de pigmentos, doadores de eltrons, fonte de carbono e produo
de oxignio.

58

Tabela 3.5 Diversidade metablica em bactrias fotossintetizantes.


Produo
de O2

Tipo

Sim

Cianobactrias
Prpuras do
enxofre

No

Prpuras noenxofre

Pigmentos
Clorofila a,e b,
ficobilinas
Bacteriocloro
fila a ou b

Bacterioclorofila a ou b

Verdes do
enxofre

Bacterioclorofila a+ c,d ou e

Verdes no
enxofre
Heliobactrias

Bacterioclorofila a+ c ou d
Bacterioclorofila g

Doador de
eltrons

Fonte de
Carbono

H 2O
H2S, So,
S2O3-, H2
ou orgnico

CO2
CO2 ou

Via de fixao
de CO2
Calvin-Benson

Exemplos
Anabaena

Calvin-Benson
Chromatium

H2, Fe2+,H2S
(no o
principal)
ou orgnico
H2S, So,
S2O3-, H2

Orgnico
(etanol ou
piruvato)
CO2 ou
Orgnico
(succinato/
malato)
CO2 ou
orgnico

H2S, H2
ou orgnico
orgnico

CO2 ou
orgnico
orgnico

Calvin-Benson

Rhodopseudomonas
Rhodobacter
Rhodospirillum

CK redutivo
Chlorobium
Outras
vias
No fixam

Chloroflexus
Heliobacterium

3.2.2. Oxidao de compostos inorgnicos e orgnicos na presena de O2.


A disponibilidade de O2 no ambiente proporcionou a estratgia de sobrevivncia
por respirao aerbia. A Figura 3.32 apresenta a rede metablica desse processo com a
formao de 13 precursores, produo de ATP e obteno de poder redutor para um
organismo heterotrfico aerbio. O emprego de oxignio possibilitou a oxidao
completa do composto orgnico, aumentando a quantidade de ATP sintetizado por massa
de composto utilizado.
A presena do oxignio tambm resultou em vantagens para bactrias que oxidam
matria inorgnica. O alto potencial de reduo do oxignio resulta em maior diferena
entre os potenciais de reduo do doador e o aceptor final de eltrons; consequentemente,
maior quantidade de ATP pode ser gerada. Ainda mais, a utilizao de oxignio ampliou o
espectro de compostos inorgnicos que podem ser oxidados para obteno de energia por
bactrias quimiolitotrficas, tornando possvel a oxidao de compostos com potencial de
reduo muito alto.
De acordo com a hiptese endossimbitica, um dos passos importantes para o
surgimento das clulas eucariticas primitivas foi a associao com bactrias que
realizavam respirao aerbia e que passaram a constituir as mitocndrias dessas clulas.

59

A partir dessa clula, surgiram os metazorios, estabelecendo um novo domnio dos seres
vivos, Eucaria, com respirao aerbia como principal estratgia de sobrevivncia e
fermentao em casos especiais. Esse domnio de seres vivos diversificou-se com uma
nova relao endossimbitica que resultou no surgimento dos cloroplastos e da
fotossntese oxignica. A relao endossimbitica deve, portanto, ter sido estabelecida
com cianobactrias.

Figura 3.32 - Esquema geral de respirao aerbia de compostos orgnicos.


Esta anlise leva concluso que dentro dos domnios procariticos que as
estratgias metablicas se diversificaram. Hoje, encontram-se, pelos menos, sete
estratgias diferentes: (1) fermentao, (2) respirao anaerbia de compostos orgnicos e
(3) inorgnicos, (4) respirao aerbia de compostos orgnicos e (5) inorgnicos, (6)
fotossntese anoxignica e (7) oxignica. Isto faz dos microrganismos procariotos
importantes e nicos agentes em muitos dos processos de transformao da matria
orgnica e inorgnica na Terra.

60

3.2.3. Oxignio como inibidor do metabolismo

Cerca de 90% do oxignio consumido pelos microrganismos aerbios so


utilizados como aceptor final da cadeia de transporte de eltrons, resultando na formao
de H2O; os 10% restantes so substratos de reaes catalisadas por oxidases ou
oxigenases. O metabolismo oxidativo gera continuamente espcies de oxignio apenas
parcialmente reduzidas (Tabela 3.6), extremamente reativas, capazes de reagir com
qualquer composto orgnico e, portanto, muito txicas.

Tabela 3.6. Espcies reativas de oxignio formadas pela reduo parcial de O2. A reduo
completa, com a transferncia de quatro eltrons, leva formao de gua.

O2 + e
O
+
O + e + 2H
H2O2
e
H+
OH + e
H+

H2O2
H2O
H2O

OH

nion radical superxido


perxido de hidrognio
radical hidroxila
gua

Nos organismos aerbios, esto presentes vrias enzimas incumbidas do processo


de eliminao destas espcies ativas de oxignio. O nion radical superxido pode ser
eliminado pela ao sequencial de duas enzimas, a superxido dismutase e a catalase:
O2

+ O2

2H

2 H2O2

superxido
dismutase

H2O2

catalase

2 H2O

O2
O2

As superxido dismutases so encontradas em todos os organismos aerbios, mas


esto

ausentes

nos

anaerbios

obrigatrios

que,

na

ausncia

das

enzimas

desentoxicadoras, so danificados em tal extenso que no se mantm vivos. Esta


explicao tem confirmao no fato de mutantes de bactrias aerbias facultativas, ao
tornarem-se incapazes de sintetizar superxido dismutase converterem-se em anaerbios
estritos. Altas tenses de oxignio inibem a superxido dismutase em algumas espcies
microbianas. Provavelmente por isto bactrias microaerfilas s se desenvolvem em
ambientes com baixas concentraes de oxignio.
Os microrganismos anaerbios estritos tm graus diferentes de sensibilidade ao
oxignio. Os mais sensveis no sobrevivem alm de trs minutos exposio ao
oxignio, enquanto outros mantm a viabilidade por longo tempo, porm sem conseguir

61

multiplicar-se. possvel que tais anaerbios, por no utilizarem oxignio, tampouco


produzam radicais livres.
A presena de catalase utilizada para a identificao de bactrias.

D. UTILIZAO DE ENERGIA

A permanente necessidade de utilizao da energia contida no gradiente de


prtons ou na molcula de ATP prende-se a razes termodinmicas, ou seja, destina-se a
viabilizar processos cuja tendncia "natural" seria ocorrer no sentido contrrio ao das
necessidades celulares. Tome-se como exemplo a composio do meio em que o
microrganismo vive. A concentrao de ons e molculas no meio jamais reproduzir com
exatido a concentrao ideal destes ons e molculas para as funes celulares. Se a
concentrao de um determinado on no meio externo for menor do que a ideal, seu
transporte para o interior da clula contraria a tendncia termodinmica de igualar as
concentraes dos dois lados da membrana, e feito com gasto de energia. Este o caso
do transporte de lactose para as clulas de alguns microrganismos. A captao exclusiva
do acar no vivel; por outro lado, a concentrao de prtons no exterior da
membrana maior do que no interior e a tendncia termodinmica de igualar as
concentraes. A captao de lactose torna-se possvel por associar a entrada do acar
de prtons, de tal forma que o transporte conjunto (symport, Seo 2.2.1.3) torna-se
termodinamicamente vivel. Em situaes anlogas, o gradiente de prtons gerado pela
respirao ou pela fotossntese usado para promover a captao de molculas do meio,
em um processo quimiosmtico. Este mesmo gradiente fornece energia para a
movimentao dos flagelos bacterianos, promovendo tambm um trabalho mecnico.

O ATP o principal doador de energia

O nmero de processos que utilizam a energia contida no gradiente de prtons


baixo, apesar de qualitativamente importantes para a sobrevivncia do microrganismo. A
maior parte da energia utilizada pelos microrganismos provm da energia qumica
presente na molcula de adenosina trifosfato. O ATP responsvel, direta ou
indiretamente, pelo transporte de inmeras substncias para o interior das clulas e pela
excreo de outras tantas. Mas, sobretudo, custa de ATP que se processam as snteses
das substncias imprescindveis para a manuteno e reproduo celulares.

62

De uma maneira geral, pode-se admitir que os processos de obteno de energia


consistem em oxidao de molculas grandes e reduzidas, levando produo de
molculas menores e mais oxidadas; so processos espontneos, termodinamicamente
favorveis. As snteses, ao contrrio, consistem em produo de molculas grandes e
reduzidas a partir de molculas menores e mais oxidadas; tais processos no podem
ocorrer simplesmente por inverso do sentido das reaes de degradao. Esta
impossibilidade termodinmica contornada pela utilizao de uma via de sntese
diferente

da

via

de

degradao,

composta

de

outras

reaes,

estas

sim,

termodinamicamente viveis. O ATP participa de alguma (ou algumas) destas reaes e


desta forma que este composto contribui para tornar possveis as snteses. Tome-se como
exemplo a reao genrica de degradao, termodinamicamente vivel:

A + B

A reao no sentido contrrio ao que est escrito no vivel. Entretanto, o


composto A-B pode ser sintetizado a partir de A e B, no diretamente, mas utilizando
outras reaes das quais participa o ATP:

A + ATP

+ B

P = PO32

+ ADP

+ Pi

Pi = HPO42

Somando as duas reaes acima,

A + B + ATP

B + ADP + Pi

O exame da ltima reao mostra apenas o resultado geral do processo, no qual o


ATP "fornece a energia" para que a sntese de A-B possa ocorrer. Na verdade, o ATP
participa efetivamente de reaes, como mostram as reaes parciais.
Um exemplo real da contribuio do ATP observado nas interconverses de
glicose e lactato. A equao geral da transformao de glicose a lactato :
Glicose + 2 ADP + 2 Pi 2 Lactato + 2 ATP + 2 H2O

63

Deve-se notar que uma equao geral no representa uma reao qumica: a
degradao de glicose a lactato feita pela srie de reaes que constituem a via
glicoltica. A equao geral apenas o balano final do processo.
Se este processo termodinamicamente favorvel, o processo inverso (ou seja, a
sntese de glicose a partir de lactato) no o . A forma biolgica de contornar esta
impossibilidade a utilizao de outro caminho metablico para a sntese de glicose,
usando outras reaes. A converso de lactato a glicose (uma sntese, pois forma-se uma
molcula de seis carbonos a partir de duas molculas de trs carbonos) processa-se
segundo a equao geral:
+

2 Lactato + 6 ATP + 6 H2O Glicose + 6 ADP + 6 Pi + 4 H

Naturalmente, esta reao tambm jamais ocorre. Ela representa to somente o


resultado global de um processo constitudo por muitas reaes, em algumas das quais o
ATP aparece como reagente. A reao deve ser interpretada com cuidado. Um conceito
errneo frequentemente a ela associado imputar o dispndio energtico necessrio
sntese como resultado da hidrlise do ATP. Neste caso, como ocorre sempre, a equao
geral esconde as reaes parciais nas quais houve participao do ATP como componente
da reao, sem que em nenhuma delas tenha havido sua hidrlise. A comparao das duas
equaes gerais evidencia a utilizao de ATP para promover o processo de sntese.

A sntese de macromolculas exige grande dispndio de ATP

Quanto maior for a molcula a ser sintetizada, maior ser o gasto de ATP
necessrio para viabilizar a sntese. Portanto, o grande dispndio energtico celular
refere-se produo dos muitos tipos de macromolculas presentes nas clulas
bacterianas: a parede celular composta por peptidioglicano e a membrana externa das
Gram-negativas por lipopolissacardio, protenas e fosfolipdios; flagelos e pili so
compostos por protenas; a membrana citoplasmtica formada por fosfolipdios e
protenas; o citoplasma pode conter material de reserva, na forma de polissacardios,
polifosfato ou poli-3-hidroxialcanoatos; ribossomos so constitudos por protenas e
RNA; DNA est presente no cromossomo bacteriano e nos plasmdios; RNA mensageiro

64

e RNA transportador fazem parte da fisiologia celular. Destaque especial deve ser dado s
protenas, pois alm de sua funo estrutural constituem muitas toxinas bacterianas e as
enzimas, sintetizadas em grande variedade. Alm disso, o processo de sntese proteica,
pela necessidade do rigor estrutural que possibilita sua funo, energeticamente muito
dispendioso.
Deve-se notar que muitas das macromolculas sintetizadas pelas clulas tm
atuao no como molculas isoladas, mas participando de estruturas de ordem superior.
Muitas protenas so constitudas por vrias cadeias polipeptdicas (iguais ou diferentes),
sintetizadas independentemente. O processo que leva montagem (assembly) das
protenas oligomricas pouco conhecido, mas, aparentemente, no nesta fase que h
grande dispndio energtico. Casos ainda muito mais complexos de montagem aparecem
quando diferentes macromolculas ligam-se para constituir componentes estruturais
supramoleculares, como as membranas ou os ribossomos. Nestas montagens h poucas
regras gerais e o processo que leva organizao da organela depende de cada caso.
As snteses das macromolculas ocorrem por meio de vias metablicas
particulares a cada tipo. Como exemplo de um processo de sntese de macromolcula ser
descrita a seguir a sntese de peptidioglicano, uma macromolcula caracterstica das
bactrias.

3.1. SNTESE DO PEPTIDIOGLICANO

A rigidez da parede das bactrias garantida por uma molcula nica, gigante,
formando uma rede tridimensional, o peptidioglicano, murena ou mucopeptdio. Como
seu nome indica, composto por derivados de acares (N-acetilmurmico e Nacetilglicosamina) e por um oligopeptdio (nas Gram negativas) ou por dois tipos de
oligopeptdios (nas Gram positivas). A estrutura do peptidioglicano est detalhada na
Seo 2.2.2..
exceo dos micoplasmas e das Archaea, todas as bactrias apresentam este
biopolmero, que lhes garante uma estrutura perfeita, responsvel pela viabilidade celular.
Como ser descrito adiante, alguns antibiticos tm seu mecanismo de ao justamente
por interferncia na sntese deste polmero. A estrutura rgida do peptidioglicano
imprescindvel para a manuteno da estrutura celular porque a membrana citoplasmtica
sozinha incapaz de resistir tenso provocada pela entrada de gua nas condies
habituais de hipotonicidade a que esto submetidas as bactrias.

65

O peptidioglicano sempre composto por cadeias dos aminoacares Nacetilglicosamina (NAG) e N-acetilmurmico (NAM) ligadas por oligopeptdios; sua
sntese ocorre em duas fases, uma intracelular e outra extracelular. Como na fase
extracelular no possvel usar ATP, a primeira fase consiste em ativar os monmeros
precursores do polmero, de modo que, ao serem transferidos para o exterior da clula,
eles possam unir-se sem fornecimento de energia para a reao.
A sntese dessa macromolcula ocorre parte no citoplasma, parte na membrana
plasmtica e termina externamente com a polimerizao dos monmeros, pela ao de
glicosiltransferases que catalisam a insero dos glicanos e de transpeptidases, que
formam as pontes peptdicas cruzadas. Para a insero dos monmeros deve ocorrer uma
septao do peptidioglicano pr-existente, por ao de um sistema de autolisinas que
rompem as ligaes -1,4 entre os componentes N-acetilglicosamina e N-acetilmurmico
e entre os peptdios, quando novas unidades so inseridas ao longo das aberturas.
O crescimento do peptidioglicano ocorre, em cocos, em duas direes opostas ao
anel FtsZ (Seo 5.2.2) e, em clulas com formato de bacilos, o aumento da parede ocorre
em vrios pontos ao longo do eixo maior.
O processo geral de sntese do peptidioglicano semelhante em todas as bactrias;
a seguir ser descrita a sntese em Staphylococcus aureus, organismo em que melhor
conhecida.
A Figura 3.33 apresenta as reaes componentes do processo de sntese, que pode
ser resumido nas seguintes etapas:
1. Formao do NAM ativado (UDP-NAM) a partir de UDP-NAG e ligao de
uma cadeia de aminocidos (pentapeptdio I) ao UDP-NAM, produzindo Nacetilmuramilpentapeptdio. Cada aminocido inserido pela ao de uma enzima
diferente e requer ATP para ativar seu grupo carboxila.
2. Ligao do N-acetilmuramilpentapeptdio-UDP a um transportador de
membrana, o bactoprenol (undecaprenol), com a liberao de UMP.
3. Formao da ligao glicosdica entre N-acetilmuramilpentapeptdio (ainda
ligado ao transportador) e UDP-NAG, com a liberao de UDP.
4. Ligao sequencial de cinco glicinas, provenientes de cinco glicil-tRNA ao
terceiro aminocido do pentaptdio I, formando o pentapeptdio II (portanto, uma
pentaglicina).
5. Transporte da estrutura formada para o exterior da membrana.

66

6. Insero da estrutura transportada no interior do peptidioglicano pr-existente,


devidamente quebrado por autolisinas. Formam-se, ento, as ligaes entre os
aminocidos e os peptdios, conservando a estrutura de ligaes cruzadas do polmero,
expandindo-o nas trs dimenses.

Figura 3.33 Sntese de peptidioglicano.

N-acetilglicosamina

N-acetilmurmico

67

Alguns aspectos do processo de sntese do peptidioglicano merecem comentrios


especiais. A formao das ligaes peptdicas nos pentapeptdios I e II no segue o
processo habitual de sntese proteica: independente de ribossomos e m-RNA. Sua
composio, entretanto, muito especfica, apresentando sempre a mesma sequncia de
aminocidos; tal preciso obtida pela ao de ligases especficas, dependentes de ATP,
que catalisam a formao das ligaes peptdicas.
O transporte de precursores para o exterior da clula possibilitado pela ligao
da molcula a ser transferida ao undecaprenol fosfato (bactoprenol) que, com sua longa
cadeia isoprenoide (55 tomos de carbono), oferece a hidrofobicidade adequada para a
passagem pela membrana.
A polimerizao final, extracelular, compreende duas reaes: a primeira a
transferncia do dissacardio (presente na estrutura que transportada atravs da
membrana) do lipdio pirofosfato ao qual est ligado para uma cadeia polissacardica prexistente no peptidioglicano. A segunda reao consiste em uma transpeptidizao. A
pentaglicina est ligada ao terceiro aminocido do pentapeptdio I (lisina) por sua
carboxila, tendo, portanto, livre um grupo amino terminal; este grupo estabelece uma
ligao peptdica com a penltima alanina de um pentapeptdio I adjacente. Neste
processo, a alanina terminal liberada e o resultado final a formao de uma ponte de
pentaglicina ligando dois pentapeptdios I. A transpeptidizao catalisada por uma
transpeptidase. Nas bactrias Gram negativas, que no apresentam o peptdio II (a
pentaglicina), tambm ocorre transpeptidizao; neste caso, porm, a ligao feita entre
o grupo amino da lisina (que no participa de ligao peptdica no pentapeptdio I) com a
mesma alanina mencionada no caso anterior. Assim, os dois pentapeptdios I adjacentes
ficam unidos apenas por uma ligao peptdica (lisina de um pentapeptdio I + alanina de
outro pentapeptdio I).
Analisando a Figura 3.33 pode-se verificar que para a introduo de um
monmero no peptidioglicano h gasto de seis molculas de ATP, evidenciando o grande
dispndio energtico nas snteses dos polmeros.