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Cromatografia
Cromatografia
http://www.rpi.edu/dept/chem-eng/Biotech-Environ/CHROMO/chromintro.html
http://ull.chemistry.uakron.edu/chemsep/gc/
http://ull.chemistry.uakron.edu/analytical/LC/
Cromatografia
Definio
Histrico
Michael Tseewt - botnico russo 1906
Dcada de 30
Dcada de 40 - pratos tericos/impulso CG
Dcada de 60 CLAE
Parmetros em cromatografia:
Tempo de reteno (distncia, volume, tempo de reteno corrigido)
Resoluo
Pratos tericos
Altura equivalente a um prato terico (HETP)
Cromatografia: Classificao
1. Forma fsica do suporte
Cromatografia planar: CP e CCD
Cromatografia em coluna CG e CL
-dimetro interno do tubo(preparativa/ analtica)
-estado fsico da F.M.(gas/lquido/supercrtico)
-tipo de coluna (aberta/fechada)
-fase estacionria (lquido/slido)
2.Mecanismo de separao (processos fsico-qumicos ou
mecnico)
3.Polaridade das fases utilizadas
Mecanismos de separao
http://www.rpi.edu/dept/chem-eng/Biotech-Environ/CHROMO/be_types.htm
Cromatografia em papel
Adsoro depende:
Tipos de adsorventes:
natureza qumica do
adsorvente
rea de superfcie/
tamanho da partcula
porosidade da partcula
F- contm fluorescncia
P-camada preparativa
CCD - exemplos
Requerimento da amostra::
detectvel no cromatograma
solvel na FM
estvel luz, oxignio, solvente, no ser voltil
Comparao
CP
CCD
Vantagens:
tcnica simples
no requer
instrumentao sofisticada
baixo custo
Vantagens:
maior sensibilidade
mais rpido
> repetibilidade
< difuso
> faixa de aplicao
reveladores reativos
permite aquecimento
Desvantagens
degradao de compostoslbeis
devido grande superfciede
exposio
dificuldades na quantificao
Desvantagens:
uso limitado
alargamento de banda-difusopouca alternativa de reveladores
Cromatografia Gasosa
Rapidez
Variedade de detetor
(especificidade)
Amostras volteis
Compostos termicamente
estveis
Tcnicas auxiliares p/
identificao
Gs de arraste (FM)
H2, N2, He, Ar
Funo: transporte da amostra
Propriedades: inerte, compatvel com o detetor, puro
Coluna empacotada
1-4
Compri/o (m)
1-3
Pratos tericos
2400
Espessura F.E.(m)
Vazo gs (ml/min)
20 - 60
02 - 20
Coluna capilar
0,15 - 0,75
10 -100
3000
0,5 - 2
1- 5
0,001- 0,5
http://ull.chemistry.uakron.edu/chemsep/gc/
Programao de temperatura
Alta sensibilidade
Destrutivos/ no destrutivos
Tempo de reteno
Tempo de reteno relativo
Co-cromatografia com padres (spiking)
Grficos p/ sries homlogas
ndices de reteno (Kovats, ECL)
Tcnicas auxiliares (EM, IR, RMN)
Normalizao
Relao concentrao
Padro interno
Padro externo
rea do pico
Fator de resposta
Normalizao:
Todo componente produz um pico (f)
A resposta do detector dependente apenas da
concentrao (f)
Calibrao externa
Soluo contendo padres de todas as substncias a serem analisadas
Padres em concentraes prximas amostra
Condies analticas devem ser as mesmas, inclusive o volume de injeo
Se assumirmos um fator
como 1,00 por ex. f3 =1,00
Ento, para uma amostra com estas trs substncias, a concentrao de cada
uma calculada utilizando estes fatores:
Z a referncia
Fx =1190/238 = 5,8
Fy = 1190/660 = 1,8
Y = 265 x 1,8 e
Z = 460 x 1
Padronizao interna
Uma substncia conhecida adicionada em concentrao
definida em todos os padres e nas amostras;
No co-elui com a amostra
estvel e detectado na concentrao em que se encontra
Etapas:
Faz-se uma curva de calibrao baseada na relao entre as
reas e concentraes do PI e da substncia de interesse
Contamina-se a amostra com um volume conhecido da soluo
estoque do padro interno (PI)
Adsoro:
Alumina, Silica, magnso, carbonato de clcio, amido
Natureza da amostra
1.saturados x insaturados
Comportamento cromatogrfico
2.grupos funcionais
COOH > -OH > -NH3 > -SH > -CHO > C=O > CO2R > OCH3 > CH=CH
e
3. Impedimento estrico
0----15%)
Colunas de guarda
C)Ligao Si-C
Detector:
Alta sensibilidade
Resposta rpida para todos os compostos da amostra
Insensvel mudanas na Fase mvel
Insensvel mudanas de temperatura
Resposta independente para a fase mvel
Resposta linear
No deve destruir a amostra
Fcil operao
Fornecer informaes qualitativas
Detector Uv-Vis
Detector de Fluorescncia
Detector de arranjo de diodos
Detector de ndice de Refrao
Detectores eletroqumicos
Quantificao:
Calibrao Externa
Calibrao Interna