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Expe rinc ia e ser iedad e em pes qui sa

germoplasma e
melhoramento gentico

2005

MARACUJ

Cerrados

MARACUJ
germoplasma e
melhoramento gentico

Repblica Federativa do Brasil


Luiz Incio Lula da Silva
Presidente
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento
Roberto Rodrigues
Ministro
Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria
Conselho de Administrao
Luis Carlos Guedes Pinto
Presidente
Silvio Crestana
Vice-Presidente
Alexandre Kalil Pires
Cludia Assuno dos Santos Viegas
Ernesto Paterniani
Hlio Tollini
Membros
Diretoria-Executiva
Silvio Crestana
Diretor-Presidente
Jos Geraldo Eugnio de Frana
Kepler Euclides Filho
Tatiana Deane de Abreu S
Diretores-Executivos
Embrapa Cerrados
Roberto Teixeira Alves
Chefe-Geral

Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria


Embrapa Cerrados
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento

Editores Tcnicos
Fbio Gelape Faleiro
Nilton Tadeu Vilela Junqueira
Marcelo Fideles Braga

Planaltina-DF
2005

Exemplares desta publicao podem ser adquiridos na:


Embrapa Cerrados
BR 020, Km 18, Rodovia Braslia/Fortaleza
Caixa Postal 08223
CEP 73310-970 Planaltina, DF
Telefone (61) 3388-9815 Fax (61) 3388-9879
Internet: http://www.cpac.embrapa.br
Email: sac@cpac.embrapa.br
Superviso editorial
Maria Helena Gonalves Teixeira

Capa
Wellington Cavalcanti

Reviso de texto
Maria Helena Gonalves Teixeira
Jamila Al-Hakim (estagiria)

Fotos da capa e das entradas de captulos


Nilton Tadeu Vilela Junqueira
Marcelo Fideles Braga
Fbio Gelape Faleiro

Normalizao bibliogrfica
Shirley da Luz Soares
Projeto grfico
Wellington Cavalcanti
Editorao eletrnica
Wellington Cavalcanti
Jussara Flores de Oliveira
Leila Sandra Gomes Alencar

Impresso e acabamento
Divino Baptista de Souza
Jaime Arbus Carneiro
1a edio
1a impresso (2005): 200 exemplares

Impresso no Servio Grfico da Embrapa Cerrados


Todos os direitos reservados.
A reproduo no autorizada desta publicao, no
todo ou em parte, constitui violao dos direitos
autorais (Lei n 9.610).
Dados Internacionais de Catalogao na
Publicao - CIP
Embrapa Cerrados
M 298 Maracuj : germoplasma e melhoramento gentico /
editado por Fbio Gelape Faleiro, Nilton Tadeu
Vilela Junqueira, Marcelo Fideles Braga.
Planaltina, DF : Embrapa Cerrados, 2005.
670 p. : il.
ISBN 85-7075-029-3
1. Maracuj-germoplasma. I. Faleiro, Fbio Gelape.
II. Junqueira, Nilton Tadeu Vilela. III. Braga, Marcelo
Fideles.
634.42 - CDD 21
Embrapa 2005

Autores

Adelise de Almeida Lima


Engenheira Agrnoma, M. Sc.
Embrapa Mandioca e Fruticultura Tropical
Rua Embrapa s/n, Cx. Postal 007
CEP 44380-000, Cruz das Almas, BA
adelise@cnpmf.embrapa.br.

Adilson Reinaldo Kososki


Coordenador da Produo Integrada da Cadeia Agrcola/SDS/MAPA
Membro do grupo gestor do projeto de Avaliao da Conformidade da Produo
Integrada de Frutas
Esplanada dos Ministrios, Bloco D - Ed. Anexo B, sala 128-B
CEP 70043-00, Braslia, DF, fone (61) 225-4538
adilsonkososki@agricultura.gov.br

Aldir Carlos Silva


Discente de Agronomia da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro
BR 465, Km 07, Campus Universitrio
CEP 23851970, Seropedica, RJ
agroaldirc@hotmail.com

Alexandre Pio Viana


Engenheiro Agrnomo, Doutor
Professor associado - Laboratrio de Melhoramento Gentico Vegetal
Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro
Av. Alberto Lamego 2000
CEP 28015-610, Campos dos Goytacazes, RJ
pirapora@uenf.br.

Amantino Martins Nicoli


Engenheiro Agrnomo, M.Sc.
Embrapa Transferncia de Tecnologia
Rod. MG 424, Km 06, Sete Lagoas, MG
amantino@cnpms.embrapa.br

Ana Maria Costa


Engenheira Agrnoma, M.Sc.
Embrapa Cerrados
BR 020, Km 18, Rod. Braslia-Fortaleza
Cx. Postal 08223 CEP 73301-970, Planaltina, DF

abarros@cpac.embrapa.br

Ana Vernica Silva do Nascimento


Engenheira Agrnoma, Doutora
Universidade Federal de Viosa, Centro de Cincias Agrrias
Dep. de Fitopatologia/Bioagro - Virologia Vegetal Molecular
Centro, CEP 36570-000, Vicosa, MG
averonicasilva@yahoo.com.br

Andrea Carvalho Silva


Discente de Agronomia da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro
BR 465, Km 07, Campus Universitrio
CEP 23851970, Seropedica, RJ
acs.andrea@click21.com.br

Antonio Srgio Kimus Braz


Engenheiro Agrnomo, Doutor
Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho, Instituto de Biocincias,
Departamento de Gentica - Instituto de Biocincias s/n
Rubio Junior
CEP 18618000, Botucatu, SP
askbraz@interair.com.br

Beatriz Appezzato-da-Glria
Engenheira Agrnoma, Doutora
Universidade de So Paulo, Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz,
Departamento de Cincias Biolgicas
Av. Pdua Dias, N 11
Cx. Postal 09, CEP 13418-900, Piracicaba, SP
bagloria@esalq.usp.br

Carlos Ruggiero
Engenheiro Agrnomo, Doutor
Professor de Fruticultura - Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho,
Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias de Jaboticabal
Via de Acesso Prof. Paulo Donato Castellane Rural
CEP 14884-900, Jaboticabal, SP
rbf@fcav.unesp.br

Ciro Scaranari
Engenheiro Agrnomo, M.Sc.
Embrapa Transferncia de Tecnologia
Av. Anchieta,173, Campinas, SP
ciro@campinas.snt.embrapa.br

Claudio Horst Bruckner


Engenheiro Agrnomo, Doutor
Universidade Federal de Viosa, Centro de Cincias Agrrias,
Departamento de Fitotecnia
Av. P.H. Rolfs, s/n - Campus Universitrio
CEP 36570-000, Viosa, MG
bruckner@ufv.br.

Daiva Domenech Tupinamb


Engenheira Agrnoma, M.Sc.
Embrapa Cerrados
BR 020, Km 18, Rod. Braslia-Fortaleza
Cx. Postal 08223 CEP 73301-970, Planaltina, DF

daiva@cpac.embrapa.br

Domingos de Azevedo Oliveira


Engenheiro Agrnomo, M.Sc.
Instituto Biolgico, Seo de Bioestatstica
Rua Fernando Ferrari, 50, Jardim Chapado,1370-076 - Campinas, SP
domingos@lexxa.com.br

Eder Jorge de Oliveira


Engenheiro Agrnomo, Doutorando
Programa de Ps-graduao em Gentica e Melhoramento de Plantas
Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz/ Usp
Pesquisador Cientfico I do Instituto Agronmico de Campinas,
Cx. Postal 28, CEP 13020-902, Campinas, SP
eder@esalq.usp.br

Endson Santana Nunes


Engenheiro Agrnomo, M.Sc.
Programa de Ps-Graduao em Gentica e Melhoramento
Universidade Federal de Viosa,
Conselho de Ensino, Pesquisa e Extenso
Secretaria de Gentica e Melhoramento de Plantas Prdio Principal UFV
Av. Ph Rolfs, Campus da UFV
CEP 36571-000, Vicosa, MG
endsonbahia@yahoo.com.br.

Enilton Nascimento de Santana


Engenheiro Agrnomo, Doutor
Instituto Capixaba de Pesquisa, Assistncia Tcnica e Extenso Rural,
Estao Experimental de Linhares, Fitopatologia
BR 101, Km 151
Cx. Postal 62, CEP 29900-970, Linhares, ES
enilton@incaper.es.gov.br

Euclides Braga Malheiros


Matemtico, Doutor
Professor de Estatstica - Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho,
Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias de Jaboticabal,
Departamento de Cincias Exatas
Via de Acesso Prof. Paulo Donato Castellani, s/n
CEP 14884900, Jaboticabal, SP
euclides@fcav.unesp.br

Evie dos Santos de Sousa


Engenheira Agrnoma, M.Sc.
Embrapa Cerrados
BR 020, Km 18, Rod. Braslia-Fortaleza
Cx. Postal 08223 CEP 73301-970, Planaltina, DF

evie@cpac.embrapa.br

Fbio Gelape Faleiro


Engenheiro Agrnomo, Doutor
Embrapa Cerrados
BR 020, Km 18, Rod. Braslia-Fortaleza
Cx. Postal 08223 CEP 73301-970, Planaltina, DF
ffaleiro@cpac.embrapa.br

Fabrcio de Oliveira Reis


Engenheiro Agrnomo, Ps-graduando
Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro,
Centro de Cincias e Tecnologias Agropecurias,
Laboratrio de Melhoramento Gentico Vegetal
Av. Alberto Lamego, 2000, Horto
CEP 28015-620, Campos dos Goytacazes, RJ
Fareoli@uenf.br

Fernando Correa Campos Neto


Graduando em Biologia - UFMG
Colecionador de Passifloraceae e Consultoria e Projetos de Borboletrios
Rua Guarda Custdio, 190-303, Bairro Ouro Preto
CEP 31 31310-140, Belo Horizonte, MG
fernandoccn@superig.com.br

Francisco Ferraz Laranjeira


Engenheiro Agrnomo, Doutor
Embrapa Mandioca e Fruticultura Tropical
Rua Embrapa s/n,
Cx. Postal 007, CEP 44380-000, Cruz das Almas, BA
chico@cnpmf.embrapa.br

Francisco Murilo Zerbini


Engenheiro Agrnomo, Doutor
Universidade Federal de Viosa,
Departamento de Fitopatologia/Bioagro,
CEP 36570-000, Viosa, MG
zerbini@ufv.br

Francisco Ricardo Ferreira


Engenheiro Agrnomo, Doutor
Embrapa Recursos Genticos e Biotecnologia
Parque Estao Biolgica, PqEB S/N - Plano Piloto
Cx. Postal 02372, Braslia-DF
fricardo@cenargen.embrapa.br

Frederico de Pina Matta


Engenheiro Agrnomo, Doutor
HY Biotecnolgica S/A
Av. Nilo Peanha, 307, Parque Santo Amaro
CEP 28030-035, Campos dos Goytacazes, RJ
fpmatta@bol.com.br

Geraldo Costa Nogueira Filho


Engenheiro Agrnomo, Doutor
Embrapa Roraima
BR 174, Km 08, Cx. Postal 133
Distrito Industrial
CEP 69301970, Boa Vista, RR
geraldo@cpafrr.embrapa.br

Givanildo Roncatto
Engenheiro Agrnomo, Doutor
Universidade Federal de Mato Grosso (UFMT),
Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinria,
Departamento de Fitotecnia e Fitossanidade.
Av Fernando Corra da Costa, s/n. Coxip,
CEP 78060-900, Cuiab, MT
givanildoroncatto@ig.com.br

Graciele Bellon
Engenheira Agrnoma, Ps-graduanda
Bolsista da Embrapa Cerrados
BR 020, Km 18, Rod. Braslia-Fortaleza
Cx. Postal 08223 CEP 73301-970, Planaltina, DF
bellon@cpac.embrapa.br

Gustavo Menezes Gonalves


Engenheiro Agrnomo, Doutorando
Programa de Ps-graduao em Gentica e Melhoramento de Plantas
Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro
Av. Alberto Lamego 2000
CEP 28015-610, Campos dos Goytacazes, RJ
gustavog@uenf.br.

Ilene Ribeiro da Silva Passos


Engenheira Agrnoma, Doutora
CPD Recursos Genticos e Vegetais, Instituto Agronmico
Cx. Postal 28, CEP 13.001-970, Campinas, SP
irpassos@iac.sp.gov.br

Joo Carlos de Oliveira


Engenheiro Agrnomo, Doutor
Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho
Via de Acesso Prof. Paulo Donato Castellane, s/n
CEP 14884-900, Jaboticabal, SP
fitotecnia@fcav.unesp.br

Jos Ricardo Peixoto


Engenheiro Agrnomo, Doutor
Universidade de Braslia, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinria,
Campus Darcy Ribeiro, ICC Sul, Asa Norte
Cx. Postal 04508, CEP 70910-900, Brasilia, DF
peixoto@unb.br

Jos Rozalvo Andrigueto


Coordenador Geral de Sistema de Produo Integrada e Rastreabilidade/SDS/
MAPA, Gerente do Programa de Desenvolvimento da Fruticultura-PROFRUTA
Esplanada dos Ministrios, Bloco D - Ed. Anexo B, sala 130-B
CEP 70043-900, Braslia, DF
jrozalvo@agricultura.gov.br

Juliana Aparecida Fernando


Biloga, Doutora
Universidade de So Paulo, Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz
Avenida Pdua Dias, 11, Agronomia
Cx. Postal 09, CEP 13418-900 - Piracicaba, SP
juli_fernando@carpa.ciagri.usp.br

Juliano Gomes Pdua


Engenheiro Agrnomo, Doutor
Embrapa Recursos Genticos e Biotecnologia
Parque Estao Biolgica - PqEB - Av. W5 Norte (final)
CEP 70770-900, Brasilia, DF
jgpadua@gmail.com

Keize Pereira Junqueira


Engenheira Agrnoma, Ps-graduanda
Universidade Federal de Lavras
Cx. Postal 3037, CEP 37200-000 Lavras, MG
e-mail: keize@ufla.br

Laura Maria Molina Meletti


Engenheira Agrnoma, Doutora
Instituto Agronmico de Campinas, Centro Experimental Central - Ncleo de
Negcios Tecnolgicos: Sementes
Av. Theodureto de Almeida Camargo, 1500, Vila Nova
Cx. Postal 28, CEP 13001-970, Campinas, SP
lmmm@iac.sp.gov.br

Leonardo Bolzani Torres


Engenheiro Agrnomo, M.Sc.
Universidade Federal de Viosa, Centro de Cincias Agrrias,
Departamento de Fitopatologia/Bioagro
Laboratrio de Virologia Vegetal molecular
CEP 36570-000, Viosa, MG
e34634@correio.ufv.br

Lus Carlos Bernacci


Bilogo, Doutor
Instituto Agronmico
Ncleo de Pesquisa e Desenvolvimento Jardim Botnico / CEC
Av. Baro de Itapura, 1481 - Jd. Guanabara
Cx. Postal 28, CEP 13001-970, Campinas, SP
bernacci@iac.sp.gov.br.

Malson Monteiro do Rego


Engenheiro Agrnomo, Doutor
Universidade Federal de Roraima, Escola Agrotcnica,
Direo Campus do Cauam - BR 174, Km 12, Monte Cristo
CEP 69310-270, Boa Vista, RR
mailsonrego@aol.com

Marcelo Fideles Braga


Engenheiro Agrnomo, M.Sc.
Embrapa Cerrados
BR 020, Km 18, Rod. Braslia-Fortaleza
Cx. Postal 08223 CEP 73301-970, Planaltina, DF
fideles@cpac.embrapa.br

Mrcio Elias Ferreira


Engenheiro Agrnomo, Doutor
Prof. Universidade Catlica de Braslia,
Embrapa Recursos Genticos e Biotecnologia
Parque Estao Biolgica - PqEB s/n - Plano Piloto
CEP 70770-900, Braslia, DF
ferreira@cenargen.embrapa.br

Marco Antonio da Silva Vasconcellos


Engenheiro Agrnomo, Doutor
Prof. da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro
Instituto de Agronomia, Departamento de Fitotecnia
CEP 23851-970, Seropdica, Rio de Janeiro, RJ
masv@ufrrj.br

Maria Lcia Carneiro Vieira


Biloga, Doutora
Prof Associada da Universidade de So Paulo,
Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz,
Departamento de Gentica
Av. Pdua Dias, 11 - Laboratrio de Biologia Celular e Molecular de Plantas
Cx. Postal 83, CEP 13.400-970, Piracicaba, SP
mlcvieir@esalq.usp.br

Mariza Monteiro
Biloga, Doutora
Universidade de So Paulo, Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz,
Departamento de Gentica
Av. Pdua Dias n 11, Agronomia
Cx. Postal 83, CEP 13418-900, Piracicaba, SP
Assist. de Pesquisa, Alellyx Applied Genomics, R. James Clerk Maxwell, 320
Condomnio Techno Park, CEP 13069-380, Campinas, SP
mariza.monteiro@alellyx.com.br

Marta Dias Soares-Scott


Biloga, Doutora
Instituto Agronmico
Centro de Pesquisa e Desenvolvimento de Recursos Genticos Vegetais
Av. Theodureto de Almeida Camargo, 1500, Laboratrio de Citogentica, Vila Nova
Cx. Postal 28, CEP 13075-630, Campinas, SP
scott@iac.sp.gov.br

Mauro Peixoto
Pesquisador autnomo, Estrada Miguel Martins, 50
Cx. Postal 383, CEP 08710-971, Mogi das Cruzes, SP
mpeixoto@uol.com. br

Messias Gonzaga Pereira


Engenheiro Agrnomo, Doutor
Professor Associado - Laboratrio de Melhoramento Gentico Vegetal
Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro
Av. Alberto Lamego 2000, CEP 28015-610, Campos dos Goytacazes, RJ
messias@uenf.br

Murilo Geraldo de Carvalho


Engenheiro Agrnomo, Doutor
Departamento de Fitopatologia/Bioagro
Universidade Federal de Viosa
CEP 36570-000, Viosa, MG

Nilton Tadeu Vilela Junqueira


Engenheiro Agrnomo, Doutor
Embrapa Cerrados
BR 020, Km 18, Rod. Braslia-Fortaleza
Cx. Postal 08223 CEP 73301-970, Planaltina, DF
junqueir@cpac.embrapa.br

Paulo Hideo Nakano Rangel


Engenheiro Agrnomo, Doutor
Embrapa Arroz e Feijo
Rod. Goinia a Nova Veneza, Km 12, Cx. Postal 179
CEP 75.375-000, Santo Antnio de Gois, GO
phrangel@cnpaf.embrapa.br

Poliane F. Alfenas
Biloga, Doutoranda
Universidade Federal de Viosa,
Centro de Cincias Biolgicas e da Sade, Departamento de Biologia Geral
Laboratrio de Virologia Vegetal Molecular - BIOAGRO
CEP 36571-000, Viosa, MG,
polianealfenas@hotmail.com

Reginaldo Resende Coelho


Engenheiro Agrnomo, M.Sc.
Embrapa Transferncia de Tecnologia
Rod. MG 424, Km 06 - Sete Lagoas, MG
coelho@cnpms.embrapa.br

Rogrio de S Borges
Engenheiro Agrnomo, M.Sc.
Embrapa Transferncia de Tecnologia
Av. Anchieta,173, Campinas, SP
rogerio@campinas.snt.embrapa.br

Silvia Rodrigues Machado


Biloga, Doutora
Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho,
Instituto de Biocincias, Campus de Botucatu,
Departamento de Botnica, Instituto de Biocincias, UNESP, Botucatu
18618000 - Botucatu, SP - Brasil
smachado@ibb.unesp.br

Tas de Moraes Falleiro Suassuna


Engenheira Agrnoma, Doutora
Embrapa Algodo
Rua Osvaldo Cruz 1143, Centenrio
Cx. Postal 174, CEP 58107-720, Campina Grande, PB
tais@cnpa.embrapa.br

Telma Nair Santana Pereira


Engenheira Agrnoma, Doutora,
Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro
Laboratrio de Melhoramento Gentico Vegetal
Av. Alberto Lamego, 2000, CEP 28015-610, Campos dos Goytacazes, RJ
telmasp@uenf.br

Wagner Campos Otoni


Engenheiro Agrnomo, Doutor,
Universidade Federal de Viosa,
Centro de Cincias Biolgicas e da Sade, Departamento de Biologia Vegetal
Av. Peter Henry Rolfs, s/n
CEP 36570-000, Viosa, MG
wotoni@ufv.br

Dedicamos este livro e agradecemos aos


pesquisadores, professores, estudantes, extensionistas,
empresrios, comerciantes e produtores que trabalham para o
desenvolvimento e sustentabilidade da cadeia produtiva do maracuj.

o maracuj
Letra e Msica: Fbio Gelape Faleiro e Geovane Andrade

D
G
D
Pinta com cores fecundas a mata perdida
G
Frutos e flores exalam perfumes que a ns

Em
C
Levam alm do Divino sabor
Em
C
inspirao nos poemas de amor
G
C G
C
o maracuj... o fruto da paixo
G
C G
C
o maracuj... minha inspirao
D
G
D
Brasileira espcie da flora que atrai ateno
G
D
De cientistas, poetas e msicos e dos agricultores
Em
C
Do mais indefeso ao mais sbio e forte
Em
C
Planta lendria do Brasil Centro-Norte
D
G
D
Encontrado em vales, montanhas, ladeiras e serras
G
D
No Bioma Cerrado e em outras terras brasileiras
Em
C
Nobre componente da ecologia
Em
C
Sua rara beleza transcende a poesia
D
G
Fruto dourado que encanta a populao

G
D
Que cura, alimenta, produto de exportao
Em
C
Que gera empregos, riqueza e renda
Em
C
da agricultura uma nobre oferenda

Apresentao

Este livro um dos produtos cientficos da IV Reunio Tcnica de


Pesquisas em Maracujazeiro (IV RTPM), realizada na Embrapa Cerrados, na
ocasio da comemorao dos seus 30 anos. Nesta reunio, foram discutidos
os avanos das pesquisas e os problemas tcnico-cientficos atuais e futuros
do maracujazeiro, estimulando o intercmbio de conhecimentos e a formao
de novas redes de pesquisa para maximizar o uso dos recursos financeiros e
humanos, com benefcios para toda cadeia produtiva do maracuj.
Participaram da reunio mais de 25 instituies de pesquisa em maracujazeiro.
O tema Germoplasma e melhoramento gentico do maracujazeiro,
devido a sua importncia estratgica atual e futura, foi escolhido para delinear
as discusses da IV RTPM e a edio desta obra. As pesquisas envolvendo a
conservao e a caracterizao do germoplasma de maracujazeiro so
essenciais para subsidiar o uso prtico dos recursos genticos, e os
programas de melhoramento gentico so estratgicos para o
desenvolvimento de novas variedades para os sistemas de produo do
maracuj. O avano do conhecimento nessa rea contribui, sobremaneira,
para a efetiva reduo de perdas na lavoura e dos custos de produo,
racionalizao do uso de insumos agrcolas, aumento da produtividade,
garantindo maior competitividade e sustentabilidade da atividade agrcola,
aumento de renda dos beneficirios diretos e da gerao potencial de
empregos.

Neste livro, pesquisadores de renome nacional e internacional abordam


temas atuais e futuros relacionados aos programas de conservao e uso de
germoplasma e aos programas de melhoramento gentico do maracujazeiro.
Novas demandas com a finalidade de direcionar futuros trabalhos de pesquisa
tambm so levantadas. Para atender a tais demandas, fica clara, nos
diferentes captulos do livro, a necessidade do envolvimento da iniciativa
pblica e privada e a formao de redes de pesquisa interinstitucionais e
multidisciplinares.
Roberto Teixeira Alves
Chefe-Geral da Embrapa Cerrados

Sumrio

Captulo 1
IV Reunio tcnica de pesquisas em maracujazeiro ....................... 35
Introduo ....................................................................................................................... 35
Histrico das reunies ..................................................................................................... 35
Objetivos da IV RTPM ..................................................................................................... 36
Estratgia e programao da IV RTPM ........................................................................... 36
Principais resultados ........................................................................................................ 37
Concluses ..................................................................................................................... 38

Captulo 2
Recursos genticos de passiflora ..................................................... 41
Introduo ....................................................................................................................... 41
Variabilidade e recursos genticos .................................................................................. 42
Colees e bancos de germoplasma ............................................................................. 43
Concluses ..................................................................................................................... 50
Referncias bibliogrficas ................................................................................................ 50

Captulo 3
Melhoramento gentico do maracuj: passado e futuro ................ 55
Introduo ....................................................................................................................... 55
Recursos genticos ......................................................................................................... 56
Objetivos do melhoramento gentico ............................................................................. 59
Histrico do melhoramento gentico ............................................................................... 60
Melhoramento visando resistncia a doenas .............................................................. 63
Virose - PWV (Vrus do endurecimento dos frutos) ......................................................... 65
Bacteriose ....................................................................................................................... 67

Hibridaes interespecficas ............................................................................................ 68


Cultivares ......................................................................................................................... 69
Concluses ..................................................................................................................... 74
Referncias bibliogrficas ................................................................................................ 75

Captulo 4
Potencial de espcies silvestres de maracujazeiro como fonte de
resistncia a doenas ...................................................................81
Introduo ....................................................................................................................... 81
Potencial uso de espcies silvestres de passifloras ........................................................ 82
Resistncia de espcies de passifloras silvestres a patgenos do solo ......................... 84
Resistncia de espcies de passifloras silvestres s doenas da parte area .......... 87
Reao de hbridos interespecficos s doenas da parte area ............................... 92
Reao de hbridos intraespecficos a doenas da parte area ............................... 104
Consideraes finais ..................................................................................................... 104
Referncias bibliogrficas .............................................................................................. 106

Captulo 5
Emprego de espcies silvestres no melhoramento gentico
vegetal: experincia em outras espcies com anlise de
retrocruzamento avanado de QTLs (AB-QTL) ........................111
Introduo ..................................................................................................................... 111
Base gentica de programas de melhoramento gentico ............................................. 112
Causas da limitao do uso de acessos do banco de germoplasma no
melhoramento gentico ................................................................................................. 116
Caracterizao de germoplasma em escala: o papel da anlise molecular ................... 118
Introgresso assistida: retrocruzamento avanado de QTLs ........................................ 121
Emprego de anlise de retrocruzamento avanado de QTLs no Brasil ......................... 130
Concluso ..................................................................................................................... 134
Referncias bibliogrficas .............................................................................................. 136

Captulo 6
Espcies de maracuj com potencial agronmico .......................143
Introduo ..................................................................................................................... 143
Passiflora nitida HBK ...................................................................................................... 144
Origem, ecologia e adaptao de P. nitida ............................................................... 145
Biologia floral e formao dos frutos ....................................................................... 145
Aspectos gerais e histrico ..................................................................................... 147
Reproduo via sementes ....................................................................................... 147
Reproduo por estaquia ........................................................................................ 148
Passiflora cincinnata MAST ............................................................................................. 150

Biologia floral e aspectos agronmicos .................................................................. 151


Passiflora setacea D.C. .................................................................................................. 154
Aspectos agronmicos ........................................................................................... 155
Concluses ................................................................................................................... 156
Referncias bibliogrficas .............................................................................................. 156

Captulo 7
Problemas e perspectivas da avaliao de doenas como
suporte ao melhoramento do maracujazeiro ............................ 161
Introduo ..................................................................................................................... 161
Requisitos de uma boa avaliao .................................................................................. 162
Acurcia e preciso ................................................................................................. 162
Reprodutibilidade .................................................................................................... 163
Eficincia .................................................................................................................. 164
Erros comuns em avaliao de doenas ...................................................................... 164
O que avaliar? ................................................................................................................ 165
Como avaliar? ............................................................................................................... 167
Freqncia de amostras doentes ............................................................................ 167
Escalas diagramticas ............................................................................................. 167
Chaves descritivas .............................................................................................. 170
ndices de doena ............................................................................................. 172
Auto-incompatibilidade, propagao por sementes e doenas .................................... 173
Amostragem ............................................................................................................ 173
Nmero e tamanho de repeties ........................................................................... 174
Variao ambiental .................................................................................................. 175
Importncia da fenologia ............................................................................................... 176
Escolhas ........................................................................................................................ 178
Doenas foliares ...................................................................................................... 178
Doenas que afetam o fruto .................................................................................... 179
Doenas radiculares ................................................................................................ 180
Viroses .................................................................................................................... 182
Concluses ................................................................................................................... 182
Referncias bibliogrficas .............................................................................................. 183

Captulo 8
Germoplasma e melhoramento gentico do maracujazeiro Desafios da pesquisa .................................................................. 187
Introduo ..................................................................................................................... 187
Variabilidade gentica, morfolgica, agronmica e molecular do maracuj .................. 188
Germoplasma de Passiflora no Brasil ............................................................................ 193
Utilizao do germoplasma de Passiflora em programas de melhoramento gentico
e como porta-enxerto visando resistncia a doenas ................................................ 195
O melhoramento gentico do maracujazeiro ................................................................ 199

Consideraes finais ..................................................................................................... 201


Referncias bibliogrficas .............................................................................................. 202

Captulo 9
Citogentica clssica e molecular em passifloras ..........................213
Introduo ..................................................................................................................... 213
Citogentica clssica ..................................................................................................... 213
Colorao diferencial, bandeamentos ........................................................................... 216
Citogentica molecular .................................................................................................. 219
Citogentica de Passiflora .............................................................................................. 222
Citogentica molecular em Passiflora ............................................................................. 231
Concluso ..................................................................................................................... 234
Referncias bibliogrficas .............................................................................................. 234

Captulo 10
Gentica quantitativa aplicada ao melhoramento gentico do
maracujazeiro ..............................................................................243
Introduo ..................................................................................................................... 243
Melhoramento do maracujazeiro ................................................................................... 244
Parmetros genticos ................................................................................................... 245
Delineamentos genticos aplicveis ao maracujazeiro-amarelo .................................... 247
Aplicao dos delineamentos em maracujazeiro-amarelo ............................................ 249
Anlises de varincia ...................................................................................................... 250
Anlises de varincia individuais .............................................................................. 250
Anlises de varincia conjunta ................................................................................. 252
Parmetros genticos da populao ............................................................................. 254
Componentes de varincia gentica ........................................................................ 254
Coeficientes de herdabilidade .................................................................................. 255
Co-varincias e coeficientes de correlao gentica aditiva ..................................... 257
Outros parmetros importantes que podem ser obtidos ........................................ 258
Alternativas de seleo no delineamento ....................................................................... 259
Seleo direta .......................................................................................................... 259
ndice de seleo ..................................................................................................... 262
Parmetros genticos da populao ............................................................................. 262
Estimativas de componentes genticos .................................................................. 262
Estimativas dos coeficientes de herdabilidade ......................................................... 265
Co-varincias e coeficientes de correlao gentica aditiva ........................................... 267
Estimativas de ganhos para as alternativas de seleo ................................................. 269
Concluso ..................................................................................................................... 272
Referncias bibliogrficas .............................................................................................. 272

Captulo 11
Marcadores moleculares aplicados ao melhoramento gentico
do maracujazeiro ........................................................................ 277
Introduo ..................................................................................................................... 277
Aspectos relevantes de um programa de melhoramento de maracujazeiro-amarelo ... 278
Caractersticas e categorias dos marcadores moleculares ........................................... 279
Etapas do programa de melhoramento de maracujazeiro-amarelo potencialmente
beneficiado pelo uso dos marcadores .......................................................................... 282
Emprego atual dos marcadores no melhoramento do maracujazeiro-amarelo ............ 288
Concluses ................................................................................................................... 291
Referncias bibliogrficas .............................................................................................. 292

Captulo 12
Ecofisiologia do maracujazeiro e implicaes na explorao
diversificada ................................................................................. 295
Introduo ..................................................................................................................... 295
Concluso ..................................................................................................................... 311
Referncias bibliograficas .............................................................................................. 312

Captulo 13
Auto-incompatibilidade do maracuj - implicaes no
melhoramento gentico ............................................................. 317
Introduo .....................................................................................................................
Auto-incompatibilidade em plantas ................................................................................
Sistemas de auto-incompatibilidade ........................................................................
Mecanismos de reao de auto-incompatibilidade .................................................
Auto-incompatibilidade em maracujazeiro .....................................................................
Auto-incompatibilidade e melhoramento gentico ...................................................
Concluses ...................................................................................................................
Referncias bibliogrficas ..............................................................................................

317
319
319
321
323
327
333
333

Captulo 14
Propagao vegetativa do maracujazeiro - conquista de novas
adeses ....................................................................................... 341
Introduo .....................................................................................................................
Experimentos com enxertia hipocotiledonar ..................................................................
Caractersticas avaliadas ...............................................................................................
Resultados obtidos .......................................................................................................

341
342
345
346

Concluses ................................................................................................................... 355


Referncias Bibliogrficas ............................................................................................. 356

Captulo 15
Cultura de tecidos aplicada manuteno de germoplasma
in vitro e ao melhoramento gentico do maracuj
(Passiflora spp.) ...........................................................................361
Introduo ..................................................................................................................... 361
Estabelecimento in vitro de plantas de maracuj ............................................................ 362
Estabelecimento in vitro de plantas de maracuj por meio de sementes ....................... 363
Estabelecimento in vitro de plantas de maracuj por meio de explantes vegetativos ..... 367
Organognese adventcia, a principal via de regenerao em espcies de Passiflora ... 368
Isolamento e cultura de protoplastos de espcies de Passiflora ................................... 372
Hibridao somtica entre espcies de Passiflora ......................................................... 376
Concluses ................................................................................................................... 377
Agradecimentos ............................................................................................................ 378
Referncias bibliogrficas .............................................................................................. 378

Captulo 16
Estudos morfolgicos, anatmicos, histoqumicos e ultra-estruturais
da organognese in vitro do maracujazeiro ..............................387
Introduo ..................................................................................................................... 387
Como avaliar o processo de regenerao in vitro em explantes de maracuj? ............. 388
Organognese in vitro em Passiflora edulis Sims f. flavicarpa Deg. populao FB100 . 392
Concluses ................................................................................................................... 403
Agradecimentos ............................................................................................................ 404
Referncias bibliogrficas .............................................................................................. 405

Captulo 17
Mtodos biotecnolgicos aplicados ao melhoramento gentico
do maracuj ................................................................................411
Introduo ..................................................................................................................... 411
Micropropagao ......................................................................................................... 412
Gerao de variabilidade gentica ................................................................................. 415
Via hibridao sexual ............................................................................................... 415
Via hibridao somtica ........................................................................................... 416
Via transformao de plantas .................................................................................. 418
Melhoramento molecular: a construo de mapas genticos e suas aplicaes .......... 422
Genmica ...................................................................................................................... 428
Diversidade gentica ..................................................................................................... 433
Concluses ................................................................................................................... 441

Agradecimentos ............................................................................................................ 441


Referncias bibliogrficas .............................................................................................. 442

Captulo 18
Problemas e perspectivas do maracuj ornamental ...................... 457
Introduo ..................................................................................................................... 457
Breve histrico do uso do maracuj como planta ornamental ...................................... 457
Situao atual no Brasil e no mundo .............................................................................. 458
Perspectivas .................................................................................................................. 459
Problemas ..................................................................................................................... 463
Concluses ................................................................................................................... 463
Referncias bibliogrficas .............................................................................................. 463

Captulo 19
Utilizao das Passifloraceae na criao de borboletas ................ 467
Introduo ..................................................................................................................... 467
O borboletrio ............................................................................................................... 468
A escolha de borboletas e de plantas ............................................................................ 469
O cultivo ........................................................................................................................ 470
Conservao ................................................................................................................. 471
Concluso ..................................................................................................................... 471
Referncia bibliogrfica .................................................................................................. 471

Captulo 20
O maracuj e suas propriedades medicinais - estado da arte ...... 475
Introduo ..................................................................................................................... 475
Etnofarmacologia .......................................................................................................... 476
Fitoconstituintes ............................................................................................................. 478
Fitoconstituintes de Passiflora incarnata ................................................................... 479
Alcalides ................................................................................................................ 480
Fitoconstituintes diversos ........................................................................................ 481
Fitoconstituintes da Passiflora edulis .............................................................................. 481
Glicosdeos ............................................................................................................. 481
Fenis ...................................................................................................................... 482
Alcalides ................................................................................................................ 482
Outros fitoconstituintes ............................................................................................ 483
Fitoconstituintes da Passiflora alata .......................................................................... 484
Fitoconstituintes presentes em outras espcies de Passiflora ................................. 484
Propriedades farmacolgicas ....................................................................................... 488
Passiflora alata, Passiflora caerulera, Passiflora edulis e Passiflora actinia ................. 489
Passiflora incarnata .................................................................................................. 491
Toxicologia ..................................................................................................................... 493

Propriedades do maracuj como alimento funcional ..................................................... 495


Concluses ................................................................................................................... 496
Referncias bibliogrficas .............................................................................................. 496

Captulo 21
Maracuj no contexto do desenvolvimento e conquistas da
produo integrada de frutas no Brasil .....................................509
Introduo ..................................................................................................................... 509
Sistema de produo integrada de frutas - PIF ............................................................. 510
Produo integrada de maracuj: normas tcnicas especficas .................................... 524
Concluses ................................................................................................................... 529
Referncias bibliogrficas .............................................................................................. 530
Anexo ............................................................................................................................ 532

Captulo 22
Espcies de maracuj: caracterizao e conservao da
biodiversidade .............................................................................559
Introduo ..................................................................................................................... 559
Distribuio e biodiversidade ........................................................................................ 561
Histrico da classificao .............................................................................................. 562
Identificao e caracterizao ........................................................................................ 563
Definies de espcies e entidades infra-especficas ..................................................... 569
Bancos de germoplasma .............................................................................................. 576
Concluses ................................................................................................................... 580
Agradecimentos ............................................................................................................ 580
Referncias bibliogrficas .............................................................................................. 580

Captulo 23
Transformao gentica do maracujazeiro para resistncia a
doenas .......................................................................................589
Introduo ..................................................................................................................... 589
Transformao gentica ................................................................................................ 590
Resistncia das plantas F1 ............................................................................................ 591
Resistncia das plantas F2 ............................................................................................ 593
Concluses ................................................................................................................... 596
Referncias bibliogrficas .............................................................................................. 596

Captulo 24
Maracuj-doce: melhoramento gentico e germoplasma ............ 601
A espcie ....................................................................................................................... 602
Biologia floral ................................................................................................................. 604
Propagao .................................................................................................................. 605
Variabilidade gentica e estratgia de melhoramento .................................................... 607
Bancos de germoplasma .............................................................................................. 612
Concluses ................................................................................................................... 613
Referncias Bibliogrficas ............................................................................................. 613

Captulo 25
Novas variedades: validao e transferncia de tecnologia .......... 619
Introduo ..................................................................................................................... 619
A Embrapa Transferncia de Tecnologia ........................................................................ 622
O programa IAC/Embrapa ............................................................................................ 624
O Projeto de Transferncia de Tecnologia para Novas Cultivares .................................. 629
Novas cultivares da Embrapa Cerrados ........................................................................ 633
Concluses ................................................................................................................... 638
Referncias Bibliogrficas ............................................................................................. 638

Captulo 26
Aspectos fitotcnicos: desafios da pesquisa .................................. 643
Introduo ..................................................................................................................... 643
Aspectos fitotcnicos .................................................................................................... 644
Propagao ............................................................................................................ 644
Propagao por sementes ................................................................................ 644
Propagao vegetativa ....................................................................................... 645
Estaquia ....................................................................................................... 645
Enxertia ........................................................................................................ 646
Nutrio e adubao ............................................................................................... 649
Calagem ............................................................................................................ 649
Adubao .......................................................................................................... 649
Viveiro ........................................................................................................... 650
Campo ........................................................................................................ 650
Localizao do adubo ....................................................................................... 652
Anlise foliar ....................................................................................................... 652
Amostragem ................................................................................................ 652
Preparo da amostra ..................................................................................... 653
Irrigao .................................................................................................................. 654
Requerimento de gua ....................................................................................... 655
Manejo da irrigao ............................................................................................ 656
Manejo da cultura .................................................................................................... 656

Conduo .......................................................................................................... 656


Latada ou caramancho ............................................................................... 657
Espaldeira vertical ......................................................................................... 657
Poda .................................................................................................................. 658
Poda de renovao ...................................................................................... 660
Polinizao e manejo da florao ....................................................................... 660
Como fazer a polinizao manual ................................................................. 662
Manejo de plantas infestantes ............................................................................ 662
Mtodos de controle de plantas infestantes ................................................. 663
Insetos-praga .......................................................................................................... 665
Insetos-praga de maior importncia ................................................................... 665
Doenas .................................................................................................................. 666
Doenas causadas por fungos .......................................................................... 666
Doenas que ocorrem na parte area ........................................................... 666
Doenas que ocorrem no sistema radicular ................................................. 666
Doenas causadas por bactrias ................................................................. 666
Doenas causadas por vrus ........................................................................ 667
Colheita .................................................................................................................... 667
Manejo ps-colheita .......................................................................................... 668
Controle da maturao ................................................................................. 668
Desafios da pesquisa .................................................................................................... 672
Concluses ................................................................................................................... 673
Referncias bibliogrficas .............................................................................................. 674

Pinta com cores fecundas a mata perdida.


Frutos e flores exalam perfumes que a ns,
Bichos famintos que esperam guarida
Inquietos, sedentos por cheiro ou comida.
Movem perplexos, por que tal sabor,
Faz do maracuj, que fruto e flor
Que brota nas ramas de seus entrens
Para aplacar a fome e garantir a vida.
Geovane Alves de Andrade

IV reunio tcnica de pesquisas em


maracujazeiro
Fbio Gelape Faleiro
Evie dos Santos de Sousa

Introduo

s Reunies Tcnicas de Pesquisas em Maracujazeiro (RTPM)

so eventos tradicionais, em nvel nacional, onde so


discutidos os avanos das pesquisas, os problemas atuais e

as perspectivas para novas pesquisas, objetivando a disseminao rpida dos


resultados e a viabilizao de solues tecnolgicas para problemas que
exijam investigao cientfica, garantindo a sustentabilidade da atividade
agrcola, a abertura de novos mercados e a descoberta de novas
potencialidades da cultura do maracujazeiro. Nessas reunies, temas atuais e
de grande importncia so discutidos, ocorrem a integrao e o intercmbio
de conhecimentos entre profissionais envolvidos nas pesquisas em maracujazeiro
e novas demandas e perspectivas para as pesquisas so identificadas.

Histrico das reunies


At o momento, foram realizadas trs Reunies Tcnicas: a primeira, em
Cruz das Almas, BA, organizada pela Embrapa Mandioca e Fruticultura; a
segunda, em Londrina, PR, organizada pelo Instituto Agronmico do Paran
(IAPAR); e a terceira, em Viosa, organizada pela Universidade Federal de
Viosa.

35

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Objetivos da IV RTPM
Na IV RTPM, foram mantidas a tradio e a importncia das Reunies
Tcnicas j realizadas. Nesta edio, foram discutidos os avanos das
pesquisas e os problemas tcnico-cientficos atuais e futuros do
maracujazeiro, estimulando o intercmbio de conhecimentos e a formao de
novas redes de pesquisa para maximizar o uso dos recursos financeiros e
humanos, com benefcios para toda cadeia produtiva do maracuj.
A IV RTPM teve como objetivo geral discutir os avanos das pesquisas e
os problemas tcnico-cientficos atuais e futuros do maracujazeiro no Brasil e
no mundo, estimulando o intercmbio de conhecimentos, a formao de novas
redes de pesquisa e a identificao de novas demandas para as pesquisas
visando contribuio cientfica para toda a cadeia produtiva do maracuj.

Estratgia e programao da IV RTPM


Para discutir os avanos da pesquisa, foram programadas 22 palestras
abordando o germoplasma do maracujazeiro no Brasil, o passado e o futuro
do melhoramento gentico, a utilizao do germoplasma nos programas de
melhoramento, na produo de mudas e na explorao diversificada do
maracujazeiro como planta ornamental e medicinal. Tecnologias modernas da
gentica quantitativa e molecular, como os marcadores moleculares, a
citogentica molecular e a transgenia tambm foram abordadas como
ferramentas para aumento da eficincia dos programas de conservao,
caracterizao e uso de germoplasma e dos programas de melhoramento
gentico. A fisiologia do maracuj e os aspectos relacionados autoincompatibilidade e propagao vegetativa foram discutidos,
principalmente, com respeito s implicaes nos programas de melhoramento
gentico. Aspectos taxonmicos de novas espcies, da proteo e registros
de novas variedades e da transferncia de tecnologia foram tambm
discutidos.
Para a identificao de novas demandas da pesquisa e formao de
redes de pesquisa, foi programado um workshop com a formao de cinco

36

IV reunio tcnica de pesquisas em maracujazeiro

grupos de trabalho envolvendo os temas germoplasma, melhoramento


gentico, descritores, explorao diversificada, aspectos fitotcnicos dos
sistemas de produo do maracujazeiro. Os planos de ao e as atividades do
projeto em rede Caracterizao de germoplasma e melhoramento gentico do
maracujazeiro assistidos por marcadores moleculares foram discutidos e
identificadas as contribuies de cada instituio e de cada pesquisador no
cumprimento das metas e no aumento da eficincia das aes de pesquisa
relacionadas aos programas de conservao e uso do germoplasma e de
melhoramento gentico do maracujazeiro. Visitas tcnicas s unidades
experimentais e ao banco de germoplasma de maracujazeiro da Embrapa
Cerrados tambm foram realizadas.

Principais

resultados

As discusses, o intercmbio de conhecimentos, a formao de novas


redes de pesquisa e o levantamento de novas demandas para a pesquisa em
maracujazeiro contaram com a participao de aproximadamente 200
pessoas entre pesquisadores, professores, estudantes, extensionistas,
produtores, empresrios. Participaram do evento aproximadamente 25
instituies com tradio em pesquisas em maracujazeiro como a Embrapa
Mandioca e Fruticultura, a Embrapa Cerrados, a Embrapa Recursos Genticos
e Biotecnologia, a Embrapa Transferncia de Tecnologia, o Instituto
Agronmico em Campinas, a Empresa Mineira de Pesquisa Agropecuria, a
Universidade Estadual do Norte Fluminense, a Universidade Federal Rural do
Rio de Janeiro, a Universidade Federal de Viosa, a Universidade Estadual
Paulista Jlio de Mesquita Filho, a Escola Superior de Agricultura Luiz de
Queiroz, a Universidade Federal do Paran, a Universidade Federal de Mato
Grosso, a Empresa de Pesquisa Agropecuria e Extenso Rural de Santa
Catarina, a Universidade Federal de Lavras, a Universidade de Braslia, entre
outras. Alm das 22 palestras, foram inscritos e apresentados na reunio 20
trabalhos abordando as pesquisas atuais nos diferentes temas.
Como resultado das palestras e mesas-redondas, foi editado este livro
com os temas abordados durante a reunio. So, ao todo, 26 captulos com

37

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

contribuies de pesquisadores de diferentes instituies. Foi produzido,


tambm, um CD contento o projeto da IV RTPM e os contedos das palestras
e dos trabalhos apresentados na reunio. Como resultado do workshop, foram
identificadas novas demandas da pesquisa visando ao aumento da eficincia
dos programas de conservao e uso do germoplasma e dos programas de
melhoramento gentico; abertura de novas potencialidades, com base na
explorao diversificada do maracuj; e ao aumento da eficincia dos
sistemas de produo, garantindo a competitividade e a sustentabilidade
econmica e ambiental da cultura do maracujazeiro.

Concluses
As contribuies de cada participante, as abordagens multidisciplinares
e o envolvimento de mais de 25 instituies de pesquisa em maracujazeiro
garantiram uma programao cientfica muito rica para que os objetivos da IV
RTPM fossem alcanados. Fica a boa perspectiva para a V RTPM a ser
realizada.

38

Cresce, enverdece, enobrece a latada esquecida.


Brota, rebrota e entorta o madeiro fiel.
Vai muito alm do perfume e sabor,
inspirao nos poemas de amor.
Deixa as abelhas roubarem seu mel.
Seu raro aroma transcende a poesia
nobre componente da ecologia,
Uma vez cultivada, amada e protegida.

Geovane Alves de Andrade

Recursos genticos de Passiflora


Francisco Ricardo Ferreira

Introduo

produo de maracuj vem ganhando grande importncia no


Brasil, notadamente, a partir das ltimas trs dcadas, o que
coloca o Pas numa situao de destaque no ranking mundial.
De acordo com estimativas da ITI Tropicals (2005), a produo mundial de
maracuj de 640.000 toneladas, e o Brasil, como primeiro produtor, apresenta
aproximadamente 70% desse total. O Equador aparece em segundo lugar e a
Colmbia em terceiro, com respectivamente 85.000 e 30.000 toneladas.
Atualmente, o maracuj plantado em quase todos os estados
brasileiros, proporcionando economia e renda em inmeros municpios, com
forte apelo social, j que se destaca como uma cultura que requer uso
intensivo de mo-de-obra. No obstante essa pujana da cultura, a pesquisa
no tem acompanhado esse crescimento de forma adequada, principalmente,
em relao ao melhoramento e obteno de variedades. Apenas nos ltimos
anos, tem sido lanado algum material melhorado.
As pragas, notadamente aquelas que afetam o sistema radicular, como
a morte prematura de plantas, entre outras, assim como os insetos, constituem
os principais entraves para a cultura do maracuj, constituindo, muitas vezes,
fator limitante. Alm disso, as dificuldades na obteno de sementes
selecionadas de variedades e de hbridos com boas caractersticas
agronmicas requerem esforo concentrado em melhoramento gentico.

41

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Por sua vez, a matria-prima para alimentar os programas de


melhoramento a variabilidade gentica, disponvel nos bancos de
germoplasma que, neste caso, bastante modesta, tanto em mbito
internacional quanto no nacional, apesar de as fontes de recursos genticos
disponveis na natureza serem muito amplas. Neste trabalho, procurou-se
mostrar esse paradoxo, qual seja, ampla variabilidade natural, com pequena
representatividade de recursos genticos disponveis nos bancos de
germoplasma, propondo aes emergenciais para reverter essa situao,
resgatando essa variabilidade e colocando-a disposio da pesquisa.

Variabilidade e recursos genticos


Vrios autores, entre eles Ferreira & Oliveira (1991) descrevem a ampla
variabilidade gentica existente no gnero Passiflora. Ferreira (1998), Castellen
et al. (2005) destacam que, grande parte dessa variabilidade est dispersa no
territrio brasileiro, o que coloca nosso pas entre um dos principais centros
de diversidade gentica desse gnero. Vieira & Carneiro (2004), compilando
dados do IPGRI, relacionam mais de 50 espcies de Passiflora que so
cultivadas ou apresentam potencial comercial, destacando a origem e as
formas de utilizao, alm do status de cultivo de cada uma delas.
Tendo em vista o grande nmero de espcies de Passiflora existente,
aliada s diferentes formas de utilizao (muitas so comestveis), notria a
expressiva variabilidade gentica interespecfica, alm da enorme variabilidade
intra-especfica que ocorre naturalmente.
Lamentavelmente, a eroso gentica que vem ocorrendo nas espcies
de Passiflora significativa, sobretudo, devido ao antrpica quer seja para
a expanso da fronteira agrcola, quer seja pelo crescimento industrial, como
construo de hidreltricas, rodovias, indstrias. Castellen et al. (2005) relatam
que as florestas tropicais que antes ocupavam grandes extenses contnuas,
com a devastao decorrente do crescente processo de urbanizao e
expanso das atividades agrcolas, ficaram restritas a pequenos e esparsos
fragmentos. Ultimamente, vrios estudos tm demonstrado os riscos inerentes
desse processo de fragmentao florestal, tais como: reduo na diversidade

42

Recursos genticos de Passiflora

e no tamanho populacional das espcies animais e vegetais, aumento dos


nveis de endogamia nas populaes e modificaes nas interaes biticas
como polinizao, disperso de sementes, predao e herbivoria. Diante
disso, o resgate e a conservao de germoplasma autctone em colees e
bancos de germoplasma so imperativos, assim como recomendvel a
introduo de material proveniente de outros pases.
Em conseqncia da escassez de pesquisa nessa rea, muitas das
espcies de Passiflora so ainda desconhecidas e outras esto em processo de
domesticao. Alis, Ford-Lloyd & Jackson (1986) relatam que, a domesticao
das plantas o resultado da inteligncia humana em conduzir o processo
evolutivo dirigido ao habitat que o homem criou, j Wet & Harlan (1975) destacam
que a variabilidade gentica inicialmente era explorada pela intuio, mas, com
base nos conhecimentos acumulados ao longo das geraes, esse patrimnio
gentico passou a ser cada vez mais utilizado, o que provocou amplas
mudanas fenotpicas, a fim de que as plantas atendessem s necessidades do
homem. Seguindo essa lgica, algumas espcies, como por exemplo, Passiflora
alata tm sido recentemente incorporadas ao processo produtivo, ocupando
importantes nichos de mercado.

Colees e bancos de germoplasma


Na Tabela 1, mostram-se os dados compilados a partir dos inventrios
realizados pelo Gulick & Van Sloten (1984), Bettencourt (1992) e IPGRI (2002,
2005) das colees mundiais de germoplasma de Passiflora. De maneira geral,
tanto para o nmero de colees por pas quanto para o nmero de acessos nas
colees houve incremento contnuo no perodo estudado. H de se destacar
que, no levantamento de 1999, foram consideradas apenas colees de
Passiflora edulis.
Os pases que tiveram maiores incrementos nos acervos de
germoplasma so: Brasil, Colmbia, Equador e Peru. Os Estados Unidos da
Amrica apresentaram, no ltimo inventrio de 2004, apenas uma coleo
com nmero reduzido de acessos em contraposio a nmeros elevados
apresentados nos levantamentos anteriores.

43

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Tabela 1. Colees e acessos de Passiflora spp. mantidos em diversos pases,


mostrando os levantamentos realizados pelo IPGRI.
Pas

frica do Sul
Argentina
Bolvia
Austrlia
Brasil
Camares
Chile
Colmbia
Costa Rica
Cuba
Cyprus
Equador
Filipinas
Frana
Gana
Honduras
Israel
Jamaica
Malawi
Mxico
Nicargua
Panam
Papua Nova Guin
Peru
Portugal
Qunia
Santa Lucia
Seycheles
Suriname
Taiwan
Uruguai
USA
Total

19984

1992

1999*

Col.

Acessos

Col.

Acessos

Col. Acessos

1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
2

5
14
20
2
7
12
4
8
6
16
3
2
16
215

1
1
4
1
1
1
1
1
1
2
1
2
1
1
1
1
1
1
1
2
3

7
14
165
2
2
7
13
4
1
16
6
34
1
16
3
5
2
16
2
8
211

1
1
5
1
1
2
1
1
1
1
1
1
2
1
1
1
1
1
1
2
3

15

330

29

540

30

2004
Col.

Acessos

4
14
153
2
41
7
2
1
1
3
5
1
2
2
1
16
2
8
3
4
103

1
1
1
9
1
1
2
3
1
1
3
1
2
1
2
1
1
1
1
1
1
5
2
2
1
1
2
2
1
1

7
2
1
391
2
2
104
27
4
1
370
6
34
1
3
3
16
3
2
2
2
174
3
21
8
3
4
8
1
30

375

53

1235

Fonte: Gulick & Van Sloten (1984); Bettencourt (1992); IPGRI, 1999 e 2004.
*Somente Passiflora edulis.

No por acaso que o Brasil e o Equador, maiores produtores mundiais


de maracuj, ostentam os maiores acervos de germoplasma, com mais de
60% dos acessos das colees internacionais catalogadas.
Analisando os totais de colees e acessos, nota-se que houve
incrementos significativos nestas duas dcadas estudadas. Atualmente,

44

Recursos genticos de Passiflora

existem mais de 50 colees de germoplasma de Passiflora espalhadas pelo


mundo as quais mantm mais de 1200 acessos, incluindo, obviamente, as
duplicatas. Embora haja crescimento do nmero de colees assim como do
nmero de acessos, pode-se constatar que o acervo de recursos genticos de
Passiflora ainda muito pequeno e que aes de coleta e intercmbio, aliadas
aos processos de conservao de germoplasma devem merecer prioridade
nas pesquisas com essa cultura.
Dados compilados por Ferreira (2002) mostram, na Tabela 2, oito
colees de germoplasma de maracuj no Brasil. As maiores e melhores
colees esto no Instituto Agronmico do Paran - IAPAR, no Instituto
Agronmico do Estado de So Paulo - IAC, na Universidade Estadual Paulista
- UNESP, Campus de Jaboticabal e na Embrapa Mandioca e Fruticultura
Tropical. Essas colees so mantidas no campo e em forma de sementes.
Elas tm sido parcialmente caracterizadas e avaliadas e, via de regra, so
utilizadas nos programas de melhoramento gentico. Cunha (1999) detalha
como as plantas so mantidas no BAG da Embrapa Mandioca e Fruticultura
Tropical.
Tabela 2. Colees de Germoplasma de Passiflora existentes no Brasil em 2002.
Espcies
Passiflora
Passiflora
Passiflora
Passiflora
Passiflora
Passiflora
Passiflora
Passiflora
Passiflora
Passiflora
Passiflora
Passiflora
Passiflora
Passiflora

edulis
sp (19)
edulis
sp.
edulis
sp.
edulis*
sp.*
edulis
sp (21)
sp.
edulis
sp.
sp.

Acessos

Instituio

Cidade/UF

20 60
40
1
2
1
70 101
31
20 45
25
37 75
38
22
1 14
13
6

UNESP/FCAVJ
UNESP/FCAVJ
UNESP/FCA
UNESP/FCA
IAPAR
IAPAR
Embrapa Mandioca e Fruticultura
Embrapa Mandioca e Fruticultura
IAC/EEJ
IAC/EEJ
EBDA
UESB
UESB
EMCAPA

Jaboticabal,SP
Jaboticabal,SP
Botucatu,SP
Botucatu,SP
Londrina-PR
Londrina-PR
Cruz das Almas-BA
Cruz das Almas-BA
Jundia-SP
Jundia-SP
Conc. Almeida-BA
V. da Coquista-BA
V. da Coquista-BA
C. Itapemirim-ES

Fonte: Ferreira, (1999); *Atualizado pelo autor.

45

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Em um amplo levantamento realizado recentemente, apresentado na


Tabela 3, mostrando o nmero de acessos por espcie, verifica-se que o
acervo de germoplasma de Passiflora mantido no Brasil consta de 67 espcies
e 599 acessos distribudos em oito colees. semelhana do que acontece
em mbito internacional, tem ocorrido aumento dos acervos nacionais,
todavia, aqum daquele esperado e desejado.
Tabela 3. Nmero de acessos por espcies nas colees de germoplasma de
Passiflora no Brasil.
Espcie

CNPMF

P. actinia Hook.
P. alata Curtis
P. ambigua Hemsl.
P. amethystina J.C. Mikan
P. auriculata Kunth
P. bahiensis Klotzsch
P. biflora Lam.
P. caerulea L.
P. capsularis L.
(= P. hassleriana Chodat.)
P. cerasina H. Annonay &
Feuillet
P. cerradense Sacco
P. cincinnata Mast.
P. coccinea Aubl.
P. coriacea Juss.
P. edulis Sims
(maracuj-roxo)
P. edulis Sims
(maracuj-amarelo)
P. eichleriana Mast.
P. foetida L.
P. galbana Mast.
P. gardneri Mast.
P. gibertii N. E. Br.
P. glandulosa Cav.
P. haematostigma Mart.
ex Mast.
P. hypoglauca Harms
P. incarnata L.
P. laurifolia L.
P. leptoclada Harms
P. ligularis Juss.
P. loefgrenii Vitta
P. malacophylla Mast.
P. maliformis L.
P. mansoi (Mart.) Mast.
P. micropetala Mart. ex
Mast.
P. miersii Mast.

UNESP

IAPAR

IAC

CPAC

ESALQ

UENF

UFRRJ

Total

3
1
1
-

3
1
2

1
13
1
2
1

4
8
1
2
1
1
3
-

2
18
2
2
1

19
14
13
-

1
-

1
1
-

7
65
1
20
1
1
1
23
4

1
3
1
4

5
2
2

1
1
2

2
2
1
20

1
4
2

7
4
-

1
1
1

1
-

1
21
11
5
31

15

30

20

12

84

1
1
1
2
-

1
1
1
-

1
2
-

4
1
2
-

2
1
1
1
1

5
8
-

1
2
2
-

1
1
-

1
16
4
2
19
1
1

1
1
1

1
2
1
2

1
1
1
-

3
1
2
1
1

1
1
2
1
-

2
7
-

1
1
-

1
2
12
1
3
2
2
8
1
4

Continua...

46

Recursos genticos de Passiflora

Tabela 3. Continuao.
Espcie

CNPMF

P. misera Kunth
P. morifolia Mast.
P. mucronata Lam.
P. nitida Bonpl. ex Kunth
P. odontophylla Glaziou ex
Harms
P. palmeri Rose
P. pentagona Mast.
P. picturata Ker Grawl.
P. pilosa DC.
P. pilosicorona Sacco
P. platyloba Killip
P. pohlii Mast.
P. quadrangularis L.
(= P. macrocarpa Linden
ex Mast.)
P. rubra L.
P. serrato-digitata L.
P. setacea DC.
P. setulosa Killip
P. sidifolia M. Roem.
P. speciosa Gardner
P. suberosa L.
P. subrotunda Mast.
P. tenuifila Killip
P. tricuspis Mast.
P. triloba Ruiz & Pav.
ex DC.
P. tripartita (Juss.) Poir.
(= P. mollissima (Kunth)
L. H. Bailey)
P. vespertilio L.
P. villosa Vell.
P. vitifolia Bonpl. ex
Kunth
P. watsoniana Mast.
Passiflora spp.
Total: 63 espcies

UNESP

IAPAR

IAC

CPAC

ESALQ

UENF

UFRRJ

Total

1
1
-

1
1
-

1
-

1
1
3
3
-

1
4
18
1

4
-

2
1
2
1
-

3
9
10
24
1

1
1
1
1
1
1
-

2
-

1
2

7
-

1
-

1
2
1
1
1
1
10
3

1
1
1
1
1
1
-

2
2
1
1
-

1
2
2
-

2
2
2
1
2
2
1

1
3
1
1
2
1
2
1
1
-

31
-

1
2
10
1
3
2
39
5
4
5
1

1
1

2
-

1
2
2

1
24

10

46

1
88

80

37

76

108

145

124

20

599

Fonte: Informao pessoal dos Curadores/Mantenedores das colees: Milene da Silva


Castellen, Joo Carlos de Oliveira, Neusa Maria Colauto Stenzel, Luis Carlos Bernacci, Nilton
Tadeu Vilela Junqueira, Fabio Gelape Faleiro, Maria Lucia Carneiro Vieira, Telma Nair
Santana Pereira, Marco Antonio da Silva Vasconcellos.

Comparando os dados da Tabela 2 com os da Tabela 3, nota-se que,


embora o nmero de colees (oito) tenha-se mantido constante, as
instituies mantenedoras das colees no so as mesmas, ou seja, algumas
instituies que tinham colees no as tm mais, e outras que no aparecem
no inventrio de 2002, esto presentes neste ltimo levantamento. Alm disso,
algumas colees importantes como a do IAPAR e a da UNESP Campus de

47

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Jaboticabal tiveram seus acervos reduzidos esta ltima, principalmente, por


problemas fitossanitrios.
Deve-se ressaltar que a coleo da Embrapa Cerrados, a que apresenta
maior nmero de acessos, inclui hbridos do programa de melhoramento. Esta
coleo, a da Embrapa Mandioca e Fruticultura Tropical e a do Instituto
Agronmico do Estado de So Paulo (IAC) so as que apresentam maior
nmero de espcies, respectivamente, 36, 34 e 33. A coleo da Escola
Superior de Agricultura Luiz de Queiroz da USP (ESALQ), com 14 espcies,
a que apresenta maior variabilidade intra-especfica nas espcies silvestres. As
colees do IAC e do Instituto Agronmico do Estado do Paran (IAPAR)
apresentam grande nmero de acessos de P. edulis, sendo que no IAPAR est
a maior coleo de maracuj-amarelo (P. edulis f. flavicarpa) e, no IAC, a maior
coleo de maracuj-roxo (P. edulis f. edulis).
Como era esperado, o maior nmero de acessos das colees de P.
edulis, sendo a grande maioria de maracuj-amarelo (P. edulis f. flavicarpa),
espcie mais cultivada no Pas. Existem outras espcies que esto entrando no
sistema produtivo ou em processo de domesticao que apresentam nmeros
expressivos de acessos, tais como: P. alata, P. suberosa, P. nitida, P. caerulea, P.
amethystina e P. giberti.
De maneira geral, as colees so conservadas no campo, em casa de
vegetao/telado ou sob a forma de sementes em cmaras frias e geladeiras.
A ESALQ dispe de protocolo para conservao de germoplasma de
Passiflora in vitro (Vieira & Carneiro, 2004).
Na Tabela 4, pode-se observar a movimentao de germoplasma de
maracuj, realizada pela Embrapa Recursos Genticos e Biotecnologia. Nos
ltimos 25 anos, foram importados 74 acessos de diversas espcies de
Passiflora, exportados 140 acessos, e o trnsito interno movimentou 401
acessos. Ao todo foram movimentados 615 acessos nestas duas dcadas e
meia. H de se destacar que foi exportado o dobro do que se importou, o que
pode ser explicado pelo fato de grande parte das espcies de Passiflora de
interesse econmico/social ser nativa do Brasil e, neste caso, o Pas tem mais
a oferecer do que a receber. No obstante ser essa a realidade, ou seja, no
Brasil existe enorme variabilidade gentica de Passiflora na natureza,

48

Recursos genticos de Passiflora

importante buscar enriquecer nosso acervo de recursos genticos de


Passiflora com material importado, alm de, obviamente, desenvolver um
programa sistemtico de resgate do material autctone.
Ainda na Tabela 4, pode-se observar que, nos ltimos trs a quatro
anos, houve diminuio drstica na movimentao de germoplasma de
Passiflora, sobretudo, no intercmbio internacional. Isso reflexo da legislao
em vigor que tem restringido o acesso e o intercmbio dos recursos genticos
de maneira geral, e, em especial, do maracuj que apresenta vrias espcies
nativas do Brasil.
Tabela 4. Germoplasma de Passiflora movimentado na Embrapa Recursos Genticos
e Biotecnologia, no perodo de 1981 a 2005.
Ano

Importao

Exportao

Trnsito interno

Total

1981
1982
1983
1984
1985
1986
1987
1988
1989
1990
1991
1992
1993
1994
1995
1996
1997
1998
1999
2000
2001
2002
2003
2004
2005*

2
6
6
0
2
1
0
0
0
0
12
0
0
0
0
1
15
0
8
0
12
1
8
0
0

13
13
12
7
0
0
3
15
0
0
0
13
10
3
2
17
0
2
4
19
0
7
0
0
0

24
2
23
11
1
5
0
1
1
12
48
61
33
17
21
16
43
3
12
25
21
10
0
11
0

39
21
41
18
3
6
3
16
1
12
60
74
43
20
23
34
58
5
24
44
33
18
8
11
0

Total

74

140

401

615

Fonte: Banco de dados (SIBRARGEN) da Embrapa Recursos Genticos e Biotecnologia.


*Dados obtidos at 24/10/2005.

49

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Concluses
No por acaso que o Brasil o maior produtor mundial de maracuj,
pois, aliado a outros importantes fatores, existem, no Pas, as maiores e
melhores colees de germoplasma de Passiflora do mundo, o que d
sustentabilidade a essa pujante agroindstria brasileira. Embora o Brasil tenha
essa posio privilegiada, quando comparado aos demais pases em termos
de recursos genticos, verifica-se que h, ainda, um longo e urgente caminho
a percorrer, notadamente, em relao ao resgate e conservao de
germoplasma.

Agradecimentos
O autor deseja expressar os mais sinceros agradecimentos aos
curadores-mantenedores de colees e bancos de germoplasma, nominados
no rodap da Tabela 3, pelas informaes fornecidas. Deseja, ainda, consignar
um agradecimento especial ao Dr. Lus Carlos Bernacci, pela reviso
taxonmica.

Referncias
BETTENCOURT, E. J. (Ed.). Directory of germplasm collections: 6.1 - tropical and
subtropical fruits and tree nuts. Rome: IBPGR, 1992. 337 p.
CASTELLEN, M. S.; CERVI, A. C.; AMARAL, W. A. N. O gnero Passiflora L. nos
Tabuleiros Costeiros. In: SILVA Jr., J. F. (Org.). Recursos genticos dos tabuleiros e
seus ecossistemas associados- fruteiras. Aracaju: Embrapa Tabuleiros Costeiros,
2005. 32 p. No prelo.
CUNHA, M. A. P. Banco ativo de germoplasma de maracuj. In: REUNIO TCNICA
DE PESQUISA EM MARACUJAZEIRO, 1999, Londrina. Anais... Londrina: IAPAR/SBF,
1999. p. 72-73.
FERREIRA, F. R. Germoplasma de maracuj. In: Reunio tcnica de pesquisa em
maracujazeiro no Brasil. Cruz das Almas: EMBRAPA-CNPMF, 1998. p. 48-53.
(EMBRAPA/CNPMF. Documentos 77).

50

Recursos genticos de Passiflora

FERREIRA, F. R. Recursos genticos de fruteiras tropicais e subtropicais no Brasil.


In: FERREIRA, F. R. (Org.). Recursos genticos de espcies frutferas no Brasil. Braslia,
DF: Embrapa Recursos Genticos e Biotecnologia, 1999. p. 9-27.
FERREIRA, F. R. Recursos genticos e germoplasma de maracuj (Passiflora spp). In:
Reunio tcnica de pesquisa em maracujazeiro. Viosa: Universidade Federal de
Viosa, 2002. p. 63-66.
FERREIRA, F. R.; OLIVEIRA, J. C. Germoplasma de Passiflora no Brasil. In: SO JOS,
A. R. A cultura do maracuj no Brasil. Jaboticabal: FUNEP, 1991. p. 187-200.
FORD-LLOYD, B.; JACKSON, M. Plant genetic resources: an introduction on their
conservation and use. Baltimore: Edward Arnold, 1986. 146 p.
GULICK, P.; VAN SLOTEN, D. H. (Ed). Directory of germplasm collections:
6.1 - tropical and subtropical fruits and tree nuts. Rome: IBPGR, 1984. 191 p.
IPGRI. Disponvel em: <http://www.ipgri.cgiar.org/germplasm/dbases.htm>.
Acesso em: 06 Maio de 2002.
IPGRI. Disponvel em: < http://www.ipgri.cgiar.org/germplasm/dbases.htm>.
Acesso em: 20 out. de 2005.
ITI Tropicals. Disponvel em: < www.passionfritjuice.com>. Acesso em: 31 out. de
2005.
POEHLMAN, J. M. Breeding field crops. New York: Holt, 1966. 427 p.
VIEIRA, M. L. C.; CARNEIRO, M. C. Passiflora spp. Passionfruit. In: LITZ, R. (Ed).
Biotechnology of fruit and nut crops. Oxford: CABI, p. 436-453, 2004.
WET, J. M. J.; HARLAN, J. R. Weeds and domesticates: evolution in the man made
habitat. Economy Botanic, v. 29, p. 99-107, 1975.

51

Oh fruto sagrado que caiu do cu!


Vegetal tesouro por onde encontrado!
Planta genuna do nobre Cerrado.
Generosa espcie espalhada ao lu
Por vales, montanhas, ladeiras e serras.
Que tanto valoriza as brasileiras terras.
o vinho dourado do irmo que labora
Este to amado gnero passiflora.

Geovane Alves de Andrade

Melhoramento gentico do maracuj:


passado e futuro
Laura Maria Molina Meletti
Marta Dias Soares-Scott
Lus Carlos Bernacci
Ilene Ribeiro da Silva Passos

Introduo
O maracuj-amarelo cultivado em quase todo o territrio nacional,
destacando-se como principais produtores os Estados da Bahia, Sergipe, So
Paulo, Par e Minas Gerais. O Brasil , atualmente, o maior produtor mundial
desse maracuj, tendo cultivado 34.778 ha em 2002 (Agrianual, 2004). Isso
representa mais um ciclo de retrao da rea cultivada no Pas, uma vez que,
em 1996, por exemplo, estimava-se que 44.000 hectares fossem ocupados
com maracuj. Entre outros fatores, as vrias molstias que afetam a cultura e
a inexistncia de cultivares resistentes despontam como as causas mais
significativas.
Algumas espcies no cultivadas tm acenado com contribuies
importantes ao melhoramento gentico por apresentar resistncia a doenas
ou a pragas, longevidade, maior adaptao a condies climticas adversas,
perodo de florescimento ampliado, maior concentrao de componentes
qumicos interessantes para a indstria farmacutica e outras potencialidades,
quase todas, ainda, inexploradas. Entre essas, destacam-se P. setacea,
P. cincinatta, P. caerulea, P. incarnata, P. maliformis, P. foetida, P. nitida e
P. quadrangularis.
No entanto, a utilizao da ampla diversidade gentica dentro do
gnero Passiflora, em funo do elevado nmero de espcies nele presente,
ainda tem sido pouco explorada, inclusive, no Brasil onde se localiza o maior

55

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

centro de disperso geogrfica do maracuj. Apesar dessa condio


privilegiada quanto aos recursos genticos de Passiflora, a maioria dos
hbridos interespecficos obtidos apresenta problemas de desenvolvimento,
esterilidade masculina, baixa viabilidade polnica ou dificuldade em florescer
(Meletti & Brckner, 2001). Por isso, a hibridao interespecfica no tem sido
explorada adequadamente em nenhum programa de melhoramento, em nvel
mundial (Nakasone & Paull, 1999). Outras tcnicas de melhoramento tm sido
bem-sucedidas em desenvolver novas cultivares mais produtivas, homogneas
e que atendam os interesses dos dois segmentos de mercado atualmente
dominantes: frutas frescas e agroindstria.
Os resultados so apresentados a seguir. No entanto, nenhuma dessas
cultivares possui resistncia gentica a molstias. Com o advento da
biotecnologia e o desenvolvimento de tcnicas mais precisas de manipulao
de genes, a possibilidade de incorporao dos genes de resistncia virose
ou bacteriose, por exemplo, seria ampliada significativamente. A
transformao gentica vem sendo bastante pesquisada ultimamente, com
relatos de sucesso, o que tem transformado tambm o panorama do
melhoramento gentico do maracujazeiro.

Recursos genticos
Para estabelecimento de um programa de melhoramento de Passiflora,
desejvel a criao e a manuteno de Bancos de Germoplasma (BAGs) ou
no mnimo colees de trabalho, compostos do maior nmero de espcies
possvel.
No Brasil, a preservao de germoplasma tem sido feita em BAGs
(Bancos Ativos de germoplasma), a maioria deles instalada e mantida por
instituies pblicas de pesquisa. Os principais BAGs nacionais esto
localizados na UNESP, em Jaboticabal (SP); no Instituto Agronmico, em
Campinas (SP); no IAPAR, em Londrina (PR); na Embrapa Cerrados/UnB, em
Planaltina (DF); na Embrapa Mandioca e Fruticultura Tropical, em Cruz das
Almas (BA), na UESB, em Vitria da Conquista (BA) e no Instituto Plantarum,
em Nova Odessa (SP). Todos trabalham com escassez de recursos para

56

Melhoramento gentico do maracuj: passado e futuro

manuteno das espcies. A necessidade de reas amplas nem sempre


disponveis, compatveis com o espaamento recomendado, que exigem
bastante mo-de-obra qualificada, tem levado alguns pesquisadores a fazer
manuteno de germoplasma com a colaborao de produtores-elite, em
troca de assistncia tcnica especializada.
Muitas espcies dessas colees tm sido caracterizadas (Meletti et al.,
1992, 1997) e/ou perdidas, devido a condies climticas adversas em
algumas regies e incidncia de patgenos limitantes em outras. Por isso,
parte dessas colees vem sendo mantida na forma de sementes, em cmaras
frias e secas. Os campos so reinstalados periodicamente, quando h
necessidade de rejuvenescimento dos estoques, conforme a espcie em
questo. Procura-se reduzir o custo e a mo-de-obra envolvida na manuteno
permanente dos campos que passam a conter apenas as colees de
trabalho. Isso no tem sido visto como soluo adequada, mas um paliativo.
No caso de P. edulis, em que a vida til da semente tem sido considerada de
apenas um ano, esse mtodo no traz vantagens (Meletti & Brckner, 2001).
Algumas espcies tm sido mantidas in vitro, mediante tcnicas de
cultura de tecidos. H equipes integradas por profissionais especializados em
desenvolver as tcnicas necessrias ao estabelecimento de cada espcie,
com aplicao imediata, reduo de custo e necessidade mnima de espao,
o que tem feito com que essa tcnica venha ganhando fora e adeptos entre
os mantenedores dos BAGs nacionais (Otoni et al., 1995; Passos, 1999;
Passos et al., 2002a, 2002b; Passos et al., 2004).
Mais recentemente, trabalhos de criopreservao de sementes de
Passiflorceas esto sendo desenvolvidos, visando manuteno da
diversidade das espcies por um tempo mais longo, na forma de sementes, a
fim de reduzir os custos e as perdas comuns aos BAGs (Meletti et al., 2004).
Nesse caso, o mais importante verificar as condies das sementes aps
submisso a temperaturas to baixas, de forma a garantir sua viabilidade e a
manuteno das caractersticas genticas das espcies.

57

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

O comportamento das espcies no cultivadas em relao aos


principais patgenos vem sendo estudado h mais de duas dcadas, tendo
sido um dos primeiros aspectos observados e relatados pelos primeiros
pesquisadores da cultura. Em funo do grande nmero de patgenos que
afetam a cultura do maracuj (vrus e bactrias, alm das doenas radiculares),
que atualmente no dispe de controle qumico satisfatrio, busca-se a
incorporao de resistncia gentica advinda de espcies relacionadas. A
resistncia bactria Xanthomonas campestris pv. passiflorae foi encontrada
em Passiflora setacea, P. giberti, P. foetida, P. laurifolia e P. maliformis (Kuroda,
1981; Barbosa, 1995). P. suberosa, P. incarnata, P. macrocarpa e o chamado
maracuj-mirim mostraram resistncia ao vrus do mosaico do maracuj-roxo
(Oliveira et al., 1994). Resistncia a Fusarium oxysporum f. passiflorae foi
encontrada em P. giberti (Oliveira, 1987), P. alata (Yamashiro e Landgraf, 1979)
e P. caerulea (Grech e Rijkenberg, 1991). P. caerulea mostrou tambm
resistncia a Phytophthora (Grech & Rijkenberg, 1991). Resistncia ao
nematide Meloidogyne incognita foi encontrada em P. caerulea, P. edulis, P.
cincinatti e P. macrocarpa (Klein et al., 1984; Silva Jr. et al., 1988).
Outro problema da manuteno de espcies selvagens a
desuniformidade na germinao de suas sementes. No se conhece o perodo
de viabilidade da maioria delas e para aquelas em que ele conhecido,
observa-se longo perodo de dormncia, natural ou induzida que impede a
obteno de material de propagao em quantidade suficiente para a maioria
dos estudos necessrios. Diferentes mtodos de quebra de dormncia devem
ser empregados, visando maior e melhor utilizao das sementes das
espcies no comerciais (Meletti et al., 2002).
Conforme as condies ambientais, os resultados so distintos. Em
Jaboticabal, por exemplo, Oliveira & Ruggiero (1998) citam que sementes
recm-colhidas de Passiflora nitida germinaram menos de 1%, alcanando
25% aos trs meses e 44,5% aos seis meses. Em Campinas, essa espcie
germina somente na primavera-vero, com ndices nunca superiores a 40%.
Em Manaus, esses autores fazem referncia germinao rpida, sendo que
aos 10 dias de armazenamento, observou-se 83% de germinao. Como essa
espcie da regio amaznica, certamente, a temperatura fator decisivo
para a germinao das sementes.

58

Melhoramento gentico do maracuj: passado e futuro

Objetivos do melhoramento gentico


O melhoramento do maracujazeiro tem diversas finalidades, em funo
do produto a ser considerado (fruto, folhas ou sementes) e da regio de
cultivo. Em linhas gerais, a produtividade, a qualidade dos frutos, a resistncia
a doenas, aos nematides e a viroses, mais a alta taxa de vingamento dos
frutos tm sido os principais objetivos, porque o melhoramento est dirigido
ao fruto, o produto mais significativo do mercado nacional. A seleo de
plantas produtoras de folhas maiores ou com maior concentrao de
passiflorina para a indstria farmacutica ainda incipiente, assim como a
possibilidade de utilizao das sementes de algumas espcies como matriaprima para extrao de compostos qumicos de uso medicinal.
Por isso, o melhoramento gentico do maracujazeiro, no Brasil, est
diretamente relacionado ao fruto seja no aspecto produtividade, seja no de
qualidade. Em termos de qualidade, considera-se que uma variedade in natura
desenvolvida para o mercado deve apresentar frutos grandes e ovais, a fim de
conseguir boa classificao comercial. Deve ter boa aparncia, ser resistente
ao transporte e perda de qualidade durante o armazenamento e
comercializao. Se desenvolvido para a agroindstria, o maracuj precisa ter
casca fina e cavidade interna completamente preenchida, o que lhe confere
maior rendimento em suco. Deve apresentar, tambm, maior acidez,
colorao constante e alto teor de slidos solveis, acima de 13 Brix (Oliveira
et al., 1994). Atualmente, alm dessas caractersticas, a tolerncia aos
principais patgenos tem sido uma urgncia a ser acrescentada, sob pena de
reduo drstica nas reas cultivadas.
Assim sendo, o principal objetivo dos programas de melhoramento, no
Brasil, a incorporao de resistncia a molstias nas atuais cultivares ou
desenvolvimento de outras com alguma tolerncia a elas, sendo que a virose
do endurecimento dos frutos e a bacteriose (causada por Xanthomonas
campestris pv. Passiflorae) tm sido as mais importantes. J foi constatada
variabilidade entre as espcies de maracujazeiro e mesmo dentro da espcie
maracuj-amarelo no tocante resistncia a essa bacteriose (Kuroda, 1981;
Barbosa, 1995; Leite Jr. et al., 1999). Para essas duas graves molstias, a

59

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

transformao gentica, mediada por Agrobacterium tumefasciens, e a fuso


de protoplastos tm sido os caminhos mais pesquisados atualmente, visando
incorporao de genes de resistncia.
A transformao gentica do maracuj (P. edulis), mediada por
Agrobaterium tumefaciens, foi relatada inicialmente por Manders et al. (1994).
Essa tcnica permite a incorporao de genes responsveis por caractersticas
agronmicas desejveis, como os relacionados resistncia a insetos, fungos,
bactrias e vrus, provenientes de outras espcies de Passiflora ou mesmo de
espcies botanicamente distantes. Um exemplo do potencial benfico dessa
tecnologia a incorporao de resistncia ao vrus do endurecimento dos
frutos do maracujazeiro (Passionfruit woodiness virus, PWV), por meio da
clonagem de genes virais e transferncia desses genes para o maracujazeiro
(Braz et al., 1998; Alfenas et al., 2005).

Histrico do melhoramento gentico


O melhoramento do maracujazeiro constitui-se, desde seu incio, em
campo de pesquisa aberto e promissor. Segundo Nascimento et al. (2003), a
grande variabilidade gentica existente, o ciclo relativamente curto e o
interesse crescente pela cultura so apenas alguns dos fatores que justificaram
o incio das pesquisas. O primeiro caminho escolhido foi o da seleo massal.
Esse mtodo de seleo eficiente para caracteres de fcil mensurao e que
possuam considervel herdabilidade. Para o maracuj, enquadram-se nessa
categoria: o formato do fruto, o teor de suco, o teor de slidos solveis totais,
a produtividade e o vigor vegetativo (Oliveira, 1980).
As primeiras publicaes referiram-se ao melhoramento visando ao
aumento de produtividade, como o desenvolvido por Oliveira (1980). Uma vez
que a mdia nacional de produtividade ainda bastante baixa, em torno de
15 t/ha, os primeiros trabalhos de melhoramento foram desenvolvidos com a
finalidade de ampliar esse ndice e de reduzir o custo de produo do
maracuj. Embora o nvel tecnolgico dos pomares possa ser melhorado pela
adoo de algumas prticas culturais importantes j disponveis ao produtor, a
exemplo da polinizao manual complementar, o melhoramento gentico vem

60

Melhoramento gentico do maracuj: passado e futuro

dando sua parcela de contribuio, desenvolvendo cultivares geneticamente


superiores para essa caracterstica.
Os trabalhos pioneiros para obter incrementos de produtividade na
cultura foram publicados por Oliveira (1980) e Maluf et al. (1989), com dados
de pesquisa nacionais. Eles se basearam na observao de que possvel
obter significativos ganhos genticos para essa e outras caractersticas
quantitativas, devido diversidade disponvel e pequena disponibilidade de
selees compatveis e estveis.
Outros trabalhos concomitantes, ligados ao melhoramento gentico,
concentraram-se na caracterizao de germoplasma, como precursores de
um programa de melhoramento propriamente dito. O comportamento das
espcies no cultivadas em relao aos principais patgenos foi igualmente
abordado nas primeiras publicaes referentes cultura do maracuj, assim
como a constatao das doenas incidentes para as quais havia de se buscar
fontes de resistncia (Yamashiro & Landgraf, 1979; Oliveira et al., 1986).
A partir de ento, as publicaes da rea de melhoramento ampliaram-se
em nmero e em diversidade, especialmente, nos ltimos dez anos, quando a
equipe de pesquisadores ligados cultura foi significativamente incrementada.
Comparando-se aos primeiros simpsios de maracuj realizados no Brasil h
menos de 15 anos, quando os pesquisadores dessa cultura no Pas inteiro no
chegavam a uma dezena, observou-se nitidamente aumento na qualidade e na
quantidade de trabalhos realizados com a cultura do maracujazeiro, incluindo
a rea de melhoramento gentico.
No tocante produtividade, vrias selees regionais foram utilizadas,
na dcada de 1990, como precursoras das atuais cultivares. No eram
conhecidas nacionalmente nem foram cultivadas de forma generalizada, um
dos motivos da baixa produtividade da cultura. Entretanto, realizaram
importante trabalho de conscientizao dos produtores sobre os benefcios
de uma semente geneticamente selecionada.
Enquadram-se nessa categoria a seleo Maguary, mais cultivada em
Minas Gerais; a seleo Sul-Brasil e o COMPOSTO IAC-270 (Meletti, 1998;

61

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Meletti et al., 2000), mais utilizados em So Paulo; a seleo Golden Star,


disseminada principalmente no Rio de Janeiro e no Esprito Santo. Mais
recentemente, tambm uma seleo da Amafrutas, disponvel no Par,
alimentou um programa de melhoramento na Embrapa Amaznia Oriental, em
Belm (Nascimento et al., 2003). A maioria delas resultou de um trabalho de
seleo massal bem conduzido por profissionais que dominam a cultura e
obtiveram incrementos significativos em pouco espao de tempo. Essas
selees dominaram os pomares durante a dcada de 1990.
No caso do maracuj, os compostos tambm podem ser considerados
boas opes de melhoramento, porque a maior produtividade pode ser
combinada com maior eficincia de polinizao, e as sementes ainda podem
ser multiplicadas pelo produtor, sem perda de caractersticas. Os compostos
resultam de cruzamentos entre variedades ou diferentes populaes de
polinizao livre, todas com boa capacidade de combinao, cruzadas em
todas as direes (Meletti & Brckner, 2001). O Composto IAC-27 era
exatamente isto e foi comercializado para todos os estados da federao,
entre 1998 e 2000, quando ento foi definitivamente substitudo pelos hbridos
IAC, mais produtivos e homogneos, que haviam sido lanados em 1999
(Meletti & Maia, 1999; Meletti, 2000).
Da em diante, o mercado profissionalizou-se, e os programas de
pesquisa tiveram de acompanhar as novas tendncias de mercado. A alta
qualidade dos frutos exigida para comercializao nos grandes centros
consumidores tornou-se uma necessidade. Foram criados padres de
classificao, o que obrigou os pesquisadores a desenvolver gentipos mais
homogneos quanto s caractersticas de fruto, direcionados ao segmento de
mercado que desejavam atingir, e no apenas mais produtivos. Surgiram,
ento, as primeiras cultivares de maracuj-amarelo disponibilizadas aos
produtores a partir de 1999.
Essas primeiras cultivares foram desenvolvidas com caractersticas
distintas em funo dos dois segmentos de mercado vigentes na ocasio, o
mercado de frutas frescas e a agroindstria, conforme detalhado nos objetivos
do melhoramento. Cada segmento procura um tipo de fruta mais interessante

62

Melhoramento gentico do maracuj: passado e futuro

ao consumidor final, da as exigncias mercadolgicas. Essas cultivares


possuem caractersticas definidas e distintas, sendo IAC-273 e IAC-277 para
mercado de frutas frescas e IAC-275 para agroindstria, conforme descrio de
Meletti (2000) e a Casca Fina CCF, com descrio de Nascimento et al.
(2003), que sero consideradas mais adiante, por estarem devidamente
registradas como cultivares no Ministrio da Agricultura, Pecuria e
Abastecimento (MAPA).
Foi na dcada de 1990, portanto, que se observou o incremento do
melhoramento gentico do maracujazeiro, no s pelo lanamento das
primeiras cultivares, mas tambm pela consolidao de equipes
multidisciplinares de pesquisa em diferentes centros nacionais.
A partir de 2000, essas equipes vem desenvolvendo pesquisas bastante
sedimentadas em novas tecnologias, com objetivos definidos, multiplicidade
de mtodos e, mais recentemente, com a adoo de ferramentas importantes
para o melhoramento gentico, como a biotecnologia.

Melhoramento visando resistncia a doenas


As linhas de pesquisa atualmente desenvolvidas concentram-se
principalmente na obteno de cultivares com resistncia a molstias seja
incorporando genes de resistncia nas atuais cultivares-elite, seja no
desenvolvimento de novas cultivares. Os patgenos mais visados so aqueles
que causam molstias de ocorrncia generalizada, algumas de mbito
nacional. Em algumas regies com histrico de incidncia, h molstias
limitantes para a cultura, nos casos em que no se conhece controle qumico
eficiente e/ou econmico para elas, at o momento. Destacam-se: virose do
endurecimento dos frutos (woodness), bacteriose (Xanthomonas axonopodis
pv. passiflorae) e fusariose (Fusarium oxysporum).
Existem tambm esforos considerveis para esclarecer a morte
prematura de plantas, murcha ou morte repentina, com tentativas de controle
pelo uso de porta-enxertos resistentes. A maioria desses porta-enxertos de
espcies selvagens do gnero Passiflora, integrantes dos BAGs nacionais. O

63

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

germoplasma tem sido avaliado quanto a sua tolerncia aos patgenos e,


posteriormente, quanto a sua compatibilidade como porta-enxerto para o
maracuj-amarelo (Meletti & Brckner, 2001).
Alternativamente ao melhoramento gentico, desenvolvem-se estudos
com a tcnica de enxertia do maracuj-amarelo em outras espcies, visando ao
controle da morte prematura de plantas ou da fusariose, vrios deles
concentrados na equipe da UNESP-Jaboticabal. Atualmente, sabe-se que a
enxertia tecnicamente vivel, sendo a enxertia hipocotiledonar estudada com
mais sucesso. Todavia, a aplicao do processo em escala comercial ainda
tem se mostrado antieconmica, devido pequena disponibilidade de sementes
das espcies de porta-enxerto, alm da dificuldade e da irregularidade de
germinao da maioria dessas sementes. Assim, independente do mtodo de
enxertia bem-sucedido, os porta-enxertos mais recomendados no dispem de
produo regular de sementes, por se tratar de espcies presentes apenas em
alguns BAGs, com pequeno nmero de plantas, utilizadas somente para fins de
pesquisa. Uma vez que a adoo da enxertia carece de disponibilidade de
sementes de porta-enxertos e de mtodos eficientes de quebra de dormncia
das sementes da maioria deles, resta ainda a questo do custo. A enxertia para
uma planta que vai ficar no mximo trs anos em campo bastante questionvel.
Portanto, considera-se, atualmente, que a soluo mais prxima para os
patgenos de solo deva vir do melhoramento gentico.
A biotecnologia tem apresentado diversas tcnicas passveis de
utilizao como ferramenta ao melhoramento. Como exemplos podem ser
citadas: a cultura de tecidos, as hibridaes interespecficas naturais (sexuais)
e artificiais (hibridao somtica), a fuso de protoplastos e as transformaes
genticas, que sero abordadas em captulos especficos, por especialistas da
rea e/ou equipes que se dedicam a essas laboriosas linhas de pesquisa.
No tocante aplicao de mtodos biotecnolgicos, a cultura de
tecidos pode ser considerada a tcnica com maior volume de resultados de
pesquisa para o gnero, at o presente momento. Espcies de Passifloraceae,
quando cultivadas in vitro, apresentam respostas morfogenticas satisfatrias.
Nesse aspecto, j foram realizados importantes trabalhos para

64

Melhoramento gentico do maracuj: passado e futuro

estabelecimento ou na otimizao de protocolos de regenerao de plantas a


partir de explantes diversos (Passos, 1999; Monteiro, 2000; Passos et al.,
2002a, 2002b). No entanto, as baixas taxas de multiplicao observadas in
vitro e a necessidade de protocolos individualizados por espcie ainda limitam
a utilizao dessa tcnica, em larga escala, na propagao do maracujazeiro.

Virose - PWV (Vrus do endurecimento dos frutos)


O maracujazeiro-amarelo pode ser infectado por diferentes vrus, sendo
que, no Brasil, at o momento, o vrus do endurecimento dos frutos - PWV
(passionfruit woodness virus) considerado o mais importante. Ele reduz
significativamente a rea foliar e o peso da planta. Como a produo do
maracujazeiro est diretamente relacionada ao enfolhamento da planta, os
efeitos so ntidos. Quanto mais cedo a planta infectada, maior o efeito
negativo. O PWV causa danos quantitativos e qualitativos produo,
reduzindo nmero, peso e valor comercial dos frutos. O vrus facilmente
transmissvel por meios mecnicos e tambm por afdeos, de maneira no
persistente (Kitajima et al., 1986; Gioria, 1999).
O controle ainda no conhecido e, por isso, as recomendaes
tcnicas tm sido relativas a medidas de excluso, evitando-se a disseminao
do vrus por reas indenes ou convivncia com o PWV nas reas
medianamente afetadas. reas bastante afetadas so condenadas, muitas
vezes, com as plantas eliminadas sumariamente antes mesmo do incio da
primeira safra, o que representa prejuzo total ao produtor.
A tcnica da pr-imunizao no se mostrou vivel para o
maracujazeiro. Plantas pr-imunizadas so facilmente infectadas em
condies de campo por estirpes mais virulentas1.
Na Austrlia, o controle do PWV tem sido feito mediante uso de hbridos
de maracuj-amarelo e roxo que parecem ser mais tolerantes. O uso de
estirpes fracas na pr-imunizao produziu bons resultados por algum tempo,
1

Comunicao pessoal de Rezende, em 2004 autora.

65

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

pois essa poltica de convivncia com o vrus aparentemente permitiu o


surgimento de estirpes mais severas, capazes de prejudicar at mesmo esses
hbridos (Meletti & Brckner, 2001).
No Brasil, h disponibilidade de uma cultivar de frutos rosados,
denominada Maracuj-Ma (Figura 1), lanada em 2000 pelo Instituto
Agronmico em Campinas (Meletti, 2000). Trata-se de um hbrido entre o
maracuj-amarelo IAC-277 e um maracuj-roxo nativo, de frutos arredondados
e de casca rosada, muito parecido com uma ma tradicional, da sua
denominao. No entanto, essa hibridao produz frutos pouco apreciados
no mercado atualmente, devido a sua colorao rosada, formato
arredondado, peso inferior ao do maracuj-amarelo e menores dimenses.

Figura 1. Cultivar de frutos rosados, denominada Maracuj-Ma


lanada pelo Instituto Agronmico em Campinas (Meletti, 2000).

A incorporao de genes para resistncia a viroses e a outras molstias,


mediante transformao gnica de P. edulis, tornou-se realidade, utilizando a
bactria Agrobacterium tumefasciens como mediadora. Para a incorporao
de genes de resistncia ao PWV, tm sido utilizadas cultivares de maracujamarelo de ampla aceitao no mercado. Tratando-se de uma metodologia
cara e bastante trabalhosa, deveria ser aplicada apenas a cultivares
devidamente registradas no Ministrio da Agricultura, Pecuria e

66

Melhoramento gentico do maracuj: passado e futuro

Abastecimento que tivessem autorizao para comrcio de sementes e


mudas, o que representaria uma segurana para o produtor.
Recentemente, j foram obtidas plantas transgnicas com o gene de
resistncia ao vrus incorporado no gentipo do maracujazeiro-amarelo, por
diferentes equipes de pesquisadores, tanto na UFV (equipe do Dr. Murilo
Zerbini) quanto na ESALQ-CENA (equipe do Dr. Jorge Rezende).

Bacteriose
A resistncia bacteriose, causada por Xanthomonas axonopodis pv.
Passiflorae, tem sido estudada por algumas equipes, munidas de tcnicas
diferenciadas. Esse agente causal tem resultado numa bacteriose que afeta
intensamente as plantas no campo, especialmente, nas reas em que o
maracuj cultivado sem quebra-vento ou prximo a pomares velhos, com a
sanidade comprometida. Essa bactria propaga-se pelo vento ou pelo
caminhamento de pessoas pelo pomar quando h alta umidade, sendo
bastante danosa s plantas. O controle atualmente preconizado inclui
medidas preventivas (Meletti & Maia, 1999), nem sempre observadas, que se
iniciam pelo uso de sementes sadias de origem conhecida. Mais uma vez,
enfatiza-se a importncia do uso de sementes de cultivares desenvolvidas por
instituies idneas para evitar a contaminao at mesmo na fase de viveiro.
No campo, o uso de antibiticos restrito a situaes crticas, sendo bastante
limitado. Vrias aplicaes seqenciais resultam na nulidade do efeito
bactericida. Portanto, a alternativa de incorporao de resistncia gentica
seria duplamente bem-vinda, porque poderia inclusive reduzir o volume de
produtos qumicos atualmente aplicados na cultura.
Dado ao grande elenco de tcnicas aplicativas da rea biotecnolgica,
capaz de adiantar etapas e antecipar ganhos genticos em relao ao
melhoramento gentico convencional, estima-se que a resistncia bacteriose
seja rapidamente incorporada s cultivares comerciais mais produtivas ou com
qualidades comerciais diferenciadas. O trabalho tem sido extensivo ao maracujdoce (Passiflora alata Curtis), uma espcie altamente suscetvel bacteriose, nas
condies de campo do Estado de So Paulo onde produtores de vrios
municpios deixaram de cultivar esse tipo de maracuj por causa da limitao

67

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

imposta pela bacteriose. O germoplasma silvestre, nesse caso, tambm j est


sendo explorado pela biotecnologia, transferindo-se caracteres desejveis para
as espcies cultivadas e promovendo a introgresso de genes de resistncia.
Dada a crescente importncia da cultura do maracuj no contexto da
agricultura nacional e mundial, espera-se que outros trabalhos sejam
conduzidos com o auxlio da biotecnologia, associados a programas de
melhoramento gentico convencional, visando ao cumprimento das diversas
etapas no menor tempo possvel.

Hibridaes

interespecficas

Nas hibridaes interespecficas, tem-se dado nfase transferncia de


caracteres favorveis de outras espcies para Passiflora edulis. Essa espcie
tem sido considerada como um bom progenitor por apresentar florescimento
abundante e ininterrupto de fins de outubro a comeo de maio, nas condies
paulistas, e de at onze meses por ano, em regies tropicais (Meletti &
Brckner, 2001). Alm disso, diferentemente da maioria das Passifloras,
apresenta ndices de germinao previsveis e manuteno da viabilidade das
sementes por quase um ano em condies normais de armazenamento.
No entanto, a maioria dos hbridos interespecficos apresenta
problemas de desenvolvimento, macho-esterilidade, baixa viabilidade polnica
ou dificuldade em florescer (Otoni, 1995; Soares-Scott et al., 2003).
A hibridao interespecfica para transferncia dos genes de resistncia
ao maracuj comercial tem apresentado pouca aplicao prtica. J foram
obtidos muitos hbridos interespecficos com Passifloraceae porque as
barreiras de incompatibilidade, nesses casos, so frgeis. Foram igualmente
relatados problemas de macho-esterilidade parcial e alta variao morfolgica
nos frutos os quais, normalmente, so intermedirios entre as duas espcies e
sem caractersticas comerciais desejveis. Para recuper-las, muitas geraes
de retrocruzamento com o progenitor comercial so necessrias.
De acordo com Meletti & Brckner (2001), o caminho da hibridao
natural interespecfica exige muitos ciclos de retrocruzamento para recompor o

68

Melhoramento gentico do maracuj: passado e futuro

vigor natural das plantas e as caractersticas interessantes para comercializao,


o que torna o programa de melhoramento demasiadamente longo.
Por isso mesmo, os cultivos comerciais baseiam-se numa nica
espcie, P. edulis, uma vez que ela ocupa 95% dos pomares. Mesmo tendo se
tornado comercial h poucos anos, o maracuj-amarelo apresenta grande
variabilidade gentica natural para as diversas caractersticas da planta e do
fruto. Isto define um significativo potencial de explorao por seleo massal,
podendo-se encontrar algumas populaes selecionadas e cultivares.

Cultivares
Depois da especializao do mercado e das exigncias de cada
segmento, comearam a surgir cultivares direcionadas ao mercado de frutas
frescas e ao da agroindstria, com caractersticas distintas, como as IAC-273
(Figura 2) e IAC-277 (Figura 3) para mercado de frutas frescas e IAC-275 (Figura 4)
para agroindstria (Meletti, 2000), Casca Fina - CCF (Nascimento et al., 2003),
Yellow Master (FB-200) e IAC-Paulista (Meletti et al., 2005), Figura 5.

Figura 2. Frutos da Cultivar IAC-273 para segmento de frutas


frescas.

69

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Figura 3. Frutos da Cultivar IAC-277, com casca fina e maior


proporo de polpa em relao ao IAC-273.

Figuras 4. Frutos da Cultivar IAC-275, especialmente,


desenvolvida para a agroindstria. Frutos com casca muito fina,
cavidade interna completamente preenchida, teor de SST (Brix)
mais elevado e maior rendimento em polpa.

70

Melhoramento gentico do maracuj: passado e futuro

Figura 5. Frutos de Maracuj-roxo cv. IAC-Paulista.


Fonte: Meletti et al. (2005).

H tambm algumas selees brasileiras relativamente disseminadas


que ainda no esto inseridas na Listagem Nacional de Cultivares Registradas,
do Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento (MAPA). Portanto, as
informaes tcnicas a respeito do desempenho agronmico desse material e
das caractersticas de seus frutos encontram-se nas mos de seus obtentores.
Nesses casos, inclusive a comercializao na forma de sementes ou mudas,
est limitada pela falta de registro. Por lei, isso impede que os viveiros
credenciados possam adquirir as sementes e comercializar as mudas
resultantes. De acordo com a nova Lei de Sementes (em vigor desde 1998), o
registro no MAPA e a insero na Listagem Nacional de Cultivares do Servio
Nacional de Proteo de Cultivares (SNPC) condio para a comercializao
de sementes e mudas de uma cultivar, qualquer que seja a espcie.
Atualmente, nem todas as instituies responsveis pela colocao de
novas cultivares no mercado tm levado em conta essa questo legal, uma
vez que pelo menos duas entre as mais utilizadas no esto inseridas nessa
listagem. Alm do aspecto legal, a insero na listagem do SNPC representa
uma garantia para o produtor, porque as caractersticas da cultivar e a

71

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

instituio responsvel por ela ficam igualmente registradas no MAPA,


servindo de referncia. , tambm, uma garantia de que a cultivar est sendo
mantida em suas caractersticas originais, geneticamente falando, sem que o
produtor corra o risco de que sua disponibilidade seja precocemente
interrompida.
Na Tabela 1, esto relacionadas as cultivares de maracuj devidamente
inseridas na Listagem Nacional de Cultivares do SNPC instituda por lei pelo
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento (MAPA).
Pela Tabela 1, observa-se que so poucas as cultivares disponveis ao
produtor e que nessa tabela no se incluem todas as cultivares ora plantadas,
contrariando a legislao em vigor.
O maracuj-cerula (Tabela 1) atualmente utilizado somente para fins
ornamentais. Corresponde espcie botnica Passiflora caerulea. Foi
inserida na listagem por uma empresa do ramo paisagstico, visando
produo de mudas para formao de cercas-vivas.
As cultivares inseridas como Passiflora edulis seja maracuj-amarelo,
seja maracuj-roxo, deveriam estar sob a mesma denominao e numerao,
uma vez que a espcie botnica atualmente referida como P. edulis, tanto
para o amarelo, quanto para o roxo ( Bernacci, 2003). O registro 02404 no
possui mantenedor, o que significa que ningum lhe atribuiu paternidade.
Pode ser comercializado, mas h dvidas quanto a que material realmente se
refere, por estar denominado da forma mais genrica possvel. O registro
03605 igualmente pouco definido e, embora o responsvel por sua
manuteno seja uma empresa do Rio de Janeiro, o nome certamente no
confere com o que tem sido comercializado, em larga escala, naquele
estado. Restam, portanto, como alternativas claras ao produtor, as cultivares
CPATU-casca fina, IAC-273, IAC-277, IAC-275. As caractersticas dos hbridos
IAC foram divulgadas em diversas oportunidades, em eventos nacionais, alm
das publicaes especficas (Meletti, 1999; Meletti & Maia, 1999; Meletti,
2000; Meletti & Brckner, 2001). As caractersticas das prognies que
compem o material CPATU-casca fina podem ser encontradas em
Nascimento et al. (2003).

72

Melhoramento gentico do maracuj: passado e futuro

Tabela 1. Cultivares de maracuj-azedo inseridas na Listagem Nacional de Cultivares


do Servio Nacional de Proteo de Cultivares (SNPC), com comercializao de
sementes e mudas legalizada pelo MAPA. Dados atualizados at 24/10/2005.

Espcie: 635 - Maracuj-azedo (Passiflora edulis Sims f. flavicarpa Deg.).


N.Ref.

Cultivar

Resp. p/ Manuteno

Data

11308

CPATU-casca fina

0412

16/01/2002

11314

IAC-273 - Monte Alegre

0026

17/01/2002

11315

IAC-275 Maravilha

0026

17/01/2002

11316

IAC-277 Jia

0026

17/01/2002

Espcie: 103 - Maracuj (Passiflora edulis Sims.).


N.Ref.

Cultivar

Resp. p/ Manuteno

Data

02404

Amarelo

13/05/1999

03605

Redondo Amarelo

0204

06/06/2000

Espcie: 2607 Maracuj-cerula (Passiflora caerulea L. SP)


N.Ref.

Cultivar

19447

Maracuj-cerula

Resp. p/ Manuteno

Data

0365

29/12/2004

A manuteno dessas cultivares exige muitos e intensivos cuidados por


parte da instituio mantenedora. So bastante comuns os relatos de
pesquisadores que obtm material superior e depois tm grande dificuldade
em mant-lo e at em multiplic-lo para atender a demanda dos produtores,
nas condies atuais da pesquisa pblica brasileira, carente de recursos
humanos e financeiros. H grandes dificuldades na manuteno do material
gentico envolvido na produo das cultivares seja pela grande necessidade
de mo-de-obra envolvida nos cruzamentos controlados, seja pela
degenerao das caractersticas das plantas que sempre ocorre e exige
manuteno dos seus antecessores.
Por que a manuteno de matrizeiros de maracuj e,
conseqentemente, a produo de sementes exigem numerosos cuidados

73

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

com a identidade gentica e envolve mo-de-obra especializada e grande


nmero de cruzamentos controlados, nem todos os materiais listados esto
disponveis para comercializao. Informaes recentes, obtidas de
pesquisadores da Embrapa Amaznia Oriental (CPATU), ligados ao
desenvolvimento dessa cultivar, mostram que a disponibilidade dessas
sementes est temporariamente suspensa pelos motivos supracitados.
A produo de sementes dos hbridos IAC est sendo feita
regularmente desde o seu lanamento e envolve todos os aspectos citados
pelos colegas da Embrapa Amaznia Oriental (CPATU). H, no entanto,
atualmente, uma equipe constituda para essa finalidade que tem garantido
os estoques. Alm disso, durante uma cooperao tcnico-cientfica
estabelecida com a Embrapa, houve um campo de multiplicao das
cultivares IAC em Sete Lagoas, MG que gerou sementes adicionais para
comercializao no perodo de 2001-2003. Isso ajudou na ampliao da
disponibilidade das sementes em mbito nacional.
A ampliao do uso das cultivares IAC, desde o lanamento em 1999
at os dias atuais, representa um avano considervel em produtividade e
qualidade de frutos (Meletti & Brckner, 2001). O mesmo se pode dizer em
relao cultivar Yellow Master que tambm tem auxiliado na melhoria dos
pomares nacionais pelas suas caractersticas. A Golden Star, utilizada
anteriormente disponibilidade das demais, continua ainda a ser
comercializada para alguns produtores das principais regies de cultivo.
Ambas devem ser registradas no MAPA pelos seus obtentores, para as
finalidades a que se destinam, de forma a cumprir a legislao vigente.

Concluses
Atualmente, em pomares que usam sementes melhoradas
geneticamente, associadas tecnologia de produo recomendada para a
cultura, a produtividade tem alcanado nveis de at 50 t/ha/ano. Isso prova
que o melhoramento gentico est indo por caminhos certos, fazendo o seu
trabalho de ampliar a produtividade e a qualidade da matria-prima
resultante.

74

Melhoramento gentico do maracuj: passado e futuro

Como o preo do maracuj, tanto no mercado interno quanto no


externo continua em elevao, dada escassez do produto, acredita-se que a
demanda pelo trabalho dos melhoristas s vai aumentar nos prximos anos.
Espera-se que o melhoramento gentico, uma vez fortalecidas as
equipes atuantes, possa contribuir rpida e significativamente para a obteno
de resistncia a doenas, de modo a permitir que as cultivares j lanadas e as
selees regionais se estabeleam definitivamente nos pomares.
O objetivo maior que os produtores sintam-se estimulados a
permanecer na atividade, apesar das dificuldades de produo ora
enfrentadas. A elevada incidncia de doenas na cultura envolve bastantes
recursos financeiros e mo-de-obra para tratamentos preventivos que
poderiam ser significativamente reduzidos pela incorporao de resistncia
gentica s cultivares j disponveis.

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Aubl.) a partir de protoplastos derivados de mesofilo. Revista Ceres, v. 42, n. 243,
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78

Brasileira espcie que atrai a ateno


De cientistas, curiosos, msicos e poetas.
De abelhas, mamangavas, toda a classe insecta.
E do mais indefeso ao mais sbio e forte,
Contempla com fascnio e tal devoo
A planta-flor lendria do Brasil Centro-Norte
Que cura, alimenta, perfuma e d sorte.
Por todo tropical rinco onde vegeta.

Geovane Alves de Andrade

Potencial de espcies silvestres de


maracujazeiro como fonte de
resistncia a doenas
Nilton Tadeu Vilela Junqueira
Marcelo Fideles Braga
Fabio Gelape Faleiro
Jos Ricardo Peixoto
Lus Carlos Bernacci

Introduo
As espcies de maracuj pertencem famlia Passifloraceae que
composta por dezenove gneros, sendo o gnero Passiflora, o de maior
expressividade, com cerca de 400 espcies, embora haja divergncias entre
autores (Bernacci et al. 2004; Bernacci, 2003; Braga & Junqueira, 2000; Oliveira
et al., 1994; Souza & Meletti, 1997). O nmero de espcies no Brasil de 111 a
150, sendo que o maior centro de distribuio geogrfica deste gnero
localiza-se no Centro-Norte do Brasil (Oliveira et al., 1994; Souza & Meletti, 1997).
O maracujazeiro-azedo ou maracujazeiro-amarelo o mais cultivado no Brasil e
pertence a espcie Passiflora edulis Sims. Por ter frutos de casca amarela, recebe
tambm a denominao de Passiflora edulis Sims f. flavicarpa Degener. A
segunda espcie mais cultivada no Brasil Passiflora alata Curtis ou maracujdoce. O maracuj-roxo, tambm pertencente a espcie Passiflora edulis Sims,
muito cultivado na Austrlia, frica e Sudeste Asitico. Estima-se que, juntos, o
maracuj-azedo e o maracuj-roxo ocupem mais de 90 % da rea cultivada no
mundo.
No Brasil, as doenas e pragas (abelhas africanizadas, broca-da-haste,
mosca-do-boto floral) constituem-se nos principais fatores que ameaam a
expanso e a produtividade dos cultivos de maracuj-azedo e maracuj-doce,
provocando prejuzos expressivos e preceituando os produtores a usarem defensivos agrcolas de forma indiscriminada. Em algumas regies do pas, doenas
como a bacteriose [Xanthomonas axonopodis pv. passiflorae (Pereira) Gonalves
& Rossato], murcha de fusarium (Fusarium oxysporum f. sp. passiflorae W.L.

81

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Gordon apud G.S. Purss), virose do endurecimento do fruto (Passionfruit


Woodiness Virus - PWV ou Cowpea aphid-born mosaic virus - CABMV), a
antracnose [Colletotrichum gloeosporioides (Penz.). Penz. & Sacc.] tm sido limitantes. Essas doenas, facilitadas por condies edafoclimticas favorveis, no
podem ser controladas de forma eficaz pelos mtodos tradicionais de controle.
O uso de cultivares resistentes associado a outras tcnicas de manejo
integrado a medida mais eficaz, econmica e ecolgica de controle de doenas. O desenvolvimento de cultivares resistentes a doenas estratgico para
todas culturas agrcolas visando reduo de custos de produo, segurana de
trabalhadores agrcolas e consumidores, qualidade mercadolgica, preservao
do ambiente e sustentabilidade do agronegcio (Quirino, 1998).

Caractersticas potenciais de espcies de passifloras


nativas
Entre as vrias espcies de passifloras nativas do Brasil, algumas tm
caractersticas interessantes que poderiam ser introduzidas no maracujazeiro
comercial. Alm da resistncia a doenas e a algumas pragas, h espcies
autocompatveis como a P. tenuifila Killip, P. cf. elegans Mast., P. capsularis L.,
P. villosa Vell., P. suberosa L., P. morifolia Mast. e P. foetida L. Essa caracterstica
importante para aumentar a produtividade e reduzir custos com mo-deobra para a polinizao manual, bem como para reduzir o impacto negativo
provocado pelas abelhas-africanizadas. H espcies como a P. setacea DC. e
P. coccinea Aubl. que, nas condies do Distrito Federal, comportam-se como
planta de dias curtos, pois florescem e frutificam durante o perodo de dias
mais curtos do ano, e a colheita ocorre de agosto a outubro, poca da
entressafra do maracuj-azedo comercial. Essa caracterstica, se incorporada
ao maracujazeiro comercial, poder eliminar os problemas referentes a sua
sazonalidade, permitindo a produo de frutos durante o ano todo na regio
Centro-Sul do Pas.
Outra caracterstica importante, observada em algumas espcies
silvestres, a presena de androginforo mais curto que reduz a distncia dos
estigmas em relao coroa, facilitando a polinizao por insetos menores. O
androginforo a estrutura formada pelo prolongamento do receptculo floral
que sustenta o gineceu e o androceu. Em alguns acessos de maracuj roxo,

82

Potencial de espcies silvestres de maracujazeiro como fonte de resistncia a doenas

silvestre e P. odontophylla Harms ex Glaz. (Figura 1), no momento de mxima


curvatura do estilete, os estigmas chegam a tocar na coroa e, dessa forma,
podem ser polinizados facilmente por pequenos insetos, sobretudo, pelas
abelhas que, atualmente, so consideradas pragas importantes por
transportar todo o plen e no fazer a polinizao de forma eficaz. Variaes
no comprimento do androginforo ocorrem, tambm, dentro de P. edulis
f. flavicarpa comercial conforme pode ser visto na Figura 2.

Figura 1. Flor de Passiflora odontophylla mostrando


androginforo muito curto e estigmas quase tocando na
coroa.

Figura 2. Diferenas no comprimento de androginforos


entre cultivares comerciais de P. edulis f. flavicarpa.

83

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Em relao resistncia a doenas, vrios autores (Menezes et al.,


1994; Oliveira et al., 1994a; Fischer, 2003; Meletti & Bruckner, 2001) relataram
as espcies de passifloras silvestres: Passiflora caerulea L., P. nitida Kunth.,
P. laurifolia L., alguns acessos de P. suberosa, P. alata, P. coccinea, P. gibertii
N.E. Br. e P. setacea, como resistentes morte precoce e a outras doenas
causadas por patgenos do solo. Segundo Menezes et al. (1994), Fischer
(2003) e Roncatto et al. (2004), a P. nitida Kunth., alm de rstica, possui boa
resistncia a doenas e tem grande potencial para uso em programas de
melhoramento que incluam hibridao interespecfica.
Em pesquisas em andamento na Embrapa Cerrados, com o objetivo de
avaliar os ndices de compatibilidade gentica entre espcies de passifloras
(Tabela 3), verificou-se que, por meio de cruzamentos artificiais, podem-se obter
hbridos frteis e promissores para o melhoramento. A P. setacea, P. coccinea e
P. glandulosa Cav., P. mucronata Lam., P. galbana Mast., quando utilizadas como
genitor feminino ou masculino, cruzam muito bem com P. edulis f. flavicarpa,
produzindo frutos com muitas sementes frteis. J a P. caerulea como genitor
feminino nos cruzamentos com P. edulis f. flavicarpa dificilmente gera frutos com
alguma semente, e o problema se repete na gerao RC1. No entanto, quando
utilizada como genitor masculino, os frutos obtidos possuem muitas sementes F1
frteis, mas h dificuldades para se obter sementes em RC1. Na gerao RC2 em
que se utilizou o maracuj-azedo comercial como recorrente e genitor masculino,
podem ser encontradas plantas mais produtivas e frutos com muitas sementes.

Resistncia de espcies de passifloras silvestres a


patgenos do solo
Na Tabela 1, so apresentadas referncias sobre o comportamento de
vrias espcies de passifloras em relao resistncia aos principais
patgenos do solo, conforme relatado por Menezes et al. (1994), Oliveira et al.
(1994a), Pio-Ribeiro & Mariano (1997), Santos Filho (1998), Roncatto et al.
(2004) e Fisher et al. (2003). Alm das espcies constantes na Tabela 1, outras
como P. speciosa Gardner, P. glandulosa, P. odontophylla, P. actinia Hook,
P. elegans e P. haematostigma Mart. ex Mast., podem ter potencial para
produo de hbridos e/ou para porta-enxertos.

84

Potencial de espcies silvestres de maracujazeiro como fonte de resistncia a doenas

Tabela 1. Reao de espcies e cultivares de maracuj s principais doenas causadas


por patgenos do solo.
Espcie/Acesso
P. edulis f. flavicarpa
Acesso de Morretes (PR)
Acesso de Amparo (SP)
Acesso de Sapuca (SP)
Composto IAC-270
IAC-273 - Monte Alegre
IAC-275 - Maravilha
IAC-277 - Jia
Maguary
Sul-Brasil
Passiflora alata Curtis
Passiflora caerulea L.
Passiflora capsularis L.
Passiflora cincinnata Mast.
Passiflora coccinea Aubl.
P. edulis (nativo)
P. edulis f. edulis
Passiflora foetida L.
Passiflora gibertii N.E.Br.
Passiflora laurifolia L.
P. ligulares Juss
Passiflora macrocarpa Linden
ex Mast.
P. maliformis L.
P. tripartita (Juss.) Poir
Passiflora morifolia Mast.
Passiflora nitida Kunth.
Passiflora pohlii Mast.
Passiflora quadrangularis L.
Passiflora serratodigitata L.
Passiflora setacea DC.
Passiflora sidiifolia M. Roem.
Passiflora suberosa L.

F. oxysporum

F. solani

Phytophtora sp.

S
R
R
S
S
-

S
T
S
T
S
S
T
S
T
S
T
S
S
T

S
T
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S
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S
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T

R/S
S
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R
S
S
R

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T
T
-

S
T
T
T
-

S
S
R
R
R
-

S
T
T
S
T
T
S
S
S

T
T
T
T
T
T
S
S
T

Fonte: Menezes et al., 1994; Oliveira et al., 1994b; Pio-Ribeiro e Mariano, 1997; Santos Filho,
1998; Roncatto et al., 2004 e Fisher et al., 2005.

85

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

O uso de espcies de passifloras nativas como porta-enxerto para o


maracujazeiro-azedo tem sido preconizado por Chaves et al. (2004) que
utilizaram estacas herbceas enraizadas; por Nogueira Filho (2003) que usou a
enxertia hipocotiledonar; por Pace (1984), Maldonado (1991), Junqueira
et al. (2006) e Braga et al. (2004). Trabalhando com um clone de maracujazeiro
comercial enxertado em estacas enraizadas de P. nitida (acesso EC-PN 01),
Junqueira et al. (2006) verificaram que, durante 14 meses de colheitas, as
plantas enxertadas tiveram produtividade similar das plantas propagadas por
sementes e foram menos afetadas pela podrido-de-razes ou do colo
(Fusarium solani (Mart.) Appel e Wollenweb que as plantas propagadas por
estaquia, mas a produtividade das plantas por estaquia foi o dobro das
propagadas por enxertia e por sementes. Resultados similares foram obtidos
por Braga et al. (2004) que, utilizando plantas de um clone de maracujazeiro,
propagadas por enxertia em estacas enraizadas de um hbrido F1 entre P.
edulis f. flavicarpa x P. setacea, verificaram que as plantas propagadas por
enxertia no foram atacadas por patgenos do solo, mas tiveram
produtividade similar das propagadas por sementes e 30% inferior s de
estaquia. Dessa forma, como a murcha ou fusariose no constitui um problema
para o maracujazeiro no Planalto Central, experimentos dessa natureza devem
ser estabelecidos no nordeste e norte de Minas Gerais onde essa doena tem
causado prejuzos expressivos. No Distrito Federal e Entorno, o principal
patgeno de solo tem sido o Fusarium solani, causador da podrido-de-razes
ou podrido-do-colo.
Quanto morte precoce, acredita-se que a causa primria da doena
seja o esgotamento repentino da planta em decorrncia da alta produtividade
e de um sistema radicular pouco eficaz na absoro de nutrientes. Nos
experimentos conduzidos por Junqueira et al. (2006) e Braga et al. (2004),
citados acima, a antracnose (Colletotrichum gloeosporioides) foi o agente
responsvel pela morte precoce das plantas, antes mesmo de o plantio
completar dois anos de idade. Caso essa hiptese seja confirmada, o uso de
porta-enxertos de espcies nativas com sistemas radiculares amplos e mais
eficazes pode ter elevado valor prtico.

86

Potencial de espcies silvestres de maracujazeiro como fonte de resistncia a doenas

Resistncia de espcies de passifloras silvestre s


doenas da parte area
Alguns autores (Junqueira et al., 2003; Nascimento, 2003; Sousa, 2005),
trabalhando com vrias cultivares comerciais de maracuj-azedo, no
constataram, entre as cultivares, graus de resistncia que pudessem oferecer
resultados satisfatrios no controle da virose, bacteriose, antracnose e
septoriose. Esses autores verificaram que a variabilidade para resistncia a
essas doenas, entre as cultivares comerciais estudadas, muito baixa.
Quanto s espcies silvestres, Oliveira et al. (1994b) trabalhando com
inoculaes artificiais de Colletotrichum gloeosporioides, verificaram que P. nitida
mostrou-se imune ao fungo, P. edulis Sims f. flavicarpa Deg., P. giberti, P.
cincinnata, P. mollisima, P. caerulea, P. setacea, P. serrato digitata, P. coccinea, P.
edulis vs. P. setacea, P. edulis vs. P. alata foram susceptveis, enquanto P. edulis
Sims acesso Serra do Mar, Santos SP apresentou maior tolerncia inicial.
Moraes et al. (2002) constataram a presena do Passion fruit woodiness
virus (PWV), gnero Potyvirus, famlia Potyviridade, infectando plantas de P.
nitida acesso Manaus. Segundo a autora, o vrus provoca sintomas
semelhantes queles caracterizados por mosaico foliar, amarelecimento entre
as nervuras, rugosidade, encarquilhamento das folhas e reduo no
crescimento das plantas. Pereira (1998) relata a alta rusticidade da espcie P.
nitida e sua resistncia a certas pragas e doenas do maracuj-amarelo,
apresentando-se como fonte potencial de genes a ser explorada. Segundo a
mesma autora, a nica doena constatada nas plantas de P. nitida acesso
Manaus foi a verrugose, causada por Cladosporium. A incidncia dessa
doena foi observada somente em frutos desenvolvidos no inverno. Oliveira &
Ruggiero (1998) tambm relataram que, em condies de campo, frutos de
P. nitida e P. cincinnata apresentaram danos severos causados por
Cladosporium herbarum Link. Junqueira et al. (2004a) verificaram que alguns
acessos de P. nitida nativos no Cerrado vm apresentando boa tolerncia
bacteriose e a patgenos do solo, mas alguns acessos de P. alata,
P. cincinnata, P. nitida, P. quadrangularis, P. amethystina, P. setacea, P. edulis
f. edulis e P. edulis f. flavicarpa tm-se comportado como suscetveis.

87

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Na Tabela 2, esto apresentados os dados referentes ao


comportamento de espcies e hbridos artificiais em relao s principais
doenas da parte area (virose, bacteriose, antracnose no fruto e antracnose
nas ramas), em condies de campo, no Distrito Federal.
As avaliaes dos danos causados pela virose do endurecimento do
fruto nas folhas foram feitas com base nos sintomas apresentados aps as
anlises de 10 ramos do ano. As plantas que no apresentaram sintomas
foram consideradas altamente resistentes (AR); plantas cujas folhas
apresentavam mosaico leve, visvel em menos de 50% das folhas, foram
consideradas resistentes (R); plantas com mosaico leve em todos os ramos
foram consideradas suscetveis (S); plantas cujas folhas apresentavam
mosaico intenso, reduo no tamanho ou deformaes foliares e bolhas
foram consideradas altamente suscetveis (AS).
Para avaliar os danos causados pela bacteriose, determinou-se, em um
metro linear de espaldeira, em ambos os lados, o nmero de folhas com
leses durante o ms de maro, perodo de maior incidncia dessa doena.
Plantas com folhas sem sintomas foram consideradas altamente resistentes
(AR); plantas com at cinco folhas lesadas com pontos de infeco iniciando
pelos hidatdios foram consideradas resistentes (R); plantas com 5 a 10
folhas lesadas com pontos de infeco iniciando pelos hidatdios foram
consideradas suscetveis (S) e plantas com mais de cinco folhas com infeco
iniciando pelos estmatos e pelos hidatdios e com mais de trs leses por
folhas foram consideradas altamente suscetveis (AS).
No processo de avaliao da reao antracnose, as plantas
que produziram frutos sem sintomas foram consideradas resistentes (R) e
aquelas que apresentaram pelo menos uma leso por fruto foram
consideradas suscetveis (S). Quanto antracnose no ramo, as plantas que
apresentaram leses ou seca de ramos ou ponteiros foram consideradas
suscetveis (S) e aquelas que no apresentaram sintomas foram consideradas
resistentes (R).

88

Potencial de espcies silvestres de maracujazeiro como fonte de resistncia a doenas

Tabela 2. Comportamento de espcies e hbridos de maracujazeiro em relao s


principais doenas da parte area, Braslia, 2005.
Espcies e hbridos

P. edulis f. flavicarpa, Cv. CSBMarlia


P. alata comercial (CEAGESP)
P. actinia (Santa Terezinha MT)
P. actinia (IAC)
P. gibertii
P. serrato-digitata
P. odontophylla
P. tenuifila
P. edulis f. edulis (Itumirim, MG)
P. edulis f. edulis cinza
(Taguatinga-TO)
P. edulis (Cachoeira Paulista, SP)
P. edulis f. flavicarpa silvestre
(TO)
P. setacea
F1E-S= P. edulis f. flavicarpa (CSB) x
P. setacea)
F1E-S x P. edulis f. flavicarpa
(EC-2-O) = RC1E-S
RC1E-S x P. edulis f. flavicarpa
(redondo) = RC2E-S
RC2E-S x P. edulis f. flavicarpa (GA2) = RC3E-S
RC3E-S x P. edulis f. flavicarpa (GA2) = RC4E-S
P. nitida (Corumb GO)
P.nitida (Itiquira MT)
P. amethystina (DF)
P. amethystina (SP)
P. coccinea (MT)
F1E-CO- P. edulis f. flavicarpa (CSB) x
P. coccinea
F1E-CO x P. edulis f. flavicarpa
(CSB) = RC1E-CO
P. caerulea
F1E-CE- P. edulis f. flavicarpa
(EC-2-O) x P. caerulea
F1E-CE x P. edulis f. flavicarpa
(EC-2-O) = RC1E-CE
RC1E-CE x P. edulis f. flavicarpa
(EC-2-O)
F1CO-S - P. coccinea x P. setacea
F1CO-S x P. edulis f. flavicarpa
(GA-2) = F1CO-S-E
F1CO-S-E x P. edulis = F1CO-S-E-E
P. mucronata

Acesso

Virose nas
folhas

Bacteriose
nas folhas

Antracnose
nos frutos

Antracnose
nos ramos

AS

AS

CPAC MJ-04-01
CPAC MJ-22-01
CPAC MJ-11-01
CPAC MJ-09-01
CPAC MJ-30-01
CPAC MJ-21-02
-

AS
AR
AR
AS
S
S
S
S
R

AS
AR
AR
AR
AR
R
AR
R
R

S
*
*
R
R
R
S
R
S

R
R
R
R
R
R
R
R
R

CPAC MJ-36-01

AS
AS

*
R

S
S

S
S

CPAC MJ-12-03
-

R
R

S
AS

R
R

R
R

AS

AS

AS

AS

AS

AS

AS

CPAC MJ-01-10
CPAC MJ-01-07
CPAC MJ-13-02
CPAC MJ-13-01
CPAC MJ-08-01
-

AS
S
AS
S
R
R

R
AR
AS
R
AS
AS

R
R
R
R
R
R

R
R
R
R
R
R

CPAC MJ-H-34

AS

CPAC MJ-14-02
CPAC MJ-H-35

S
AS

AR
R

R
R

R
R

CPAC MJ-H-19

AS**

AS**

CPAC MJ-H-01
CPAC MJ-H-05

R
S

AS
AS

R
R

R
R

AS
AS

AS
R

R
R

R
R

*Sem informao ** Informaes obtidas de apenas trs plantas

89

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

A P. actinia a nica espcie que vem apresentando alto grau de


resistncia a essas doenas, inclusive, a virose. No entanto, at ao momento,
todas as tentativas para se obter hbridos por meio de cruzamentos diretos
dessas espcies com o maracujazeiro-azedo comercial no foram bemsucedidas. H possibilidades de se obter hbridos de forma indireta, pelo fato
de P. actinia ser compatvel com outras espcies que cruzam com o maracujazedo (Tabela 3) produzindo hbridos frteis. Como exemplo, cita-se a P.
coccinea que compatvel com P. actinia e tambm com P. edulis f. flavicarpa.
Dessa forma, um hbrido F1 de P. coccinea x P. actinia pode ser compatvel
com o maracujazeiro-azedo, gerando RCs frteis.
Tabela 3. ndice de compatibilidade gentica (CG) entre diferentes espcies e hbridos
artificiais de maracujazeiro, incluindo a P. edulis f. flavicarpa comercial. Braslia, 2004/
2005.
Cruzamentos

N. de flores
cruzadas

Frutos
vingados

CG
(%)

Passiflora edulis f. flavicarpa x P. coccinea

53

42

79,2

F1E-CO (P. edulis f. flavicarpa x P. coccinea) x

36

28

77,8

P. edulis f. flavicarpa x P. setacea

63

54

85,7

F1E-S (P. edulis f. flavicarpa x P. setacea) x

58

51

87,9

RC1E-S x P. edulis f. flavicarpa

42

38

90,5

RC2E-S x P. edulis f. flavicarpa

60

52

86,7

RC3E-S x P. edulis f. flavicarpa

22

16

72,7

P. coccinea x P. setacea

36

36

100,0

P. edulis f. flavicarpa

P. edulis f. flavicarpa

F1CO-S(P. coccinea x P. setacea) x P. edulis f. flavicarpa

42

25

59,5

P. edulis f. flavicarpa. x P. caerulea

35

8,6

F1CE-ES (P. edulis f. flavicarpa x P. caerulea) x

4*

50,0*

12

8*

66,0*

65

0*

0*

P. edulis f. flavicarpa = RC1CE-E


RC1CE-E ( P. edulis f. flavicarpa) x P. edulis f. flavicarpa
x P. edulis f. flavicarpa = RC2CE-E
P. caerulea x P. edulis f. flavicarpa

Continua...

90

Potencial de espcies silvestres de maracujazeiro como fonte de resistncia a doenas

Tabela 3. Continuao.
Cruzamentos

N. de flores
cruzadas

Frutos
vingados

CG
(%)

P. edulis f. flavicarpa x P. tenuifila

41

P. glandulosa x P. edulis f. flavicarpa

100,0

P. glandulosa x P. sidiifolia

100,0

P. sidiifolia x P. actinia

10

80,0

P. mucronata x P. alata

100,00

P. mucronata x P. edulis f. flavicarpa

50,00

P. galbana x P. alata

100,00

P. coccinea x P. actinia

10

60,0

P. edulis f. flavicarpa x P. actinia

12

P. eichleriana x P. gibertii

15

52,0

P. galbana x P. actinia

100,0

P. mucronata x P. coccinea

10

30,0

P. edulis f. flavicarpa (cv. MSC) x

38

29

76,3

17

13

76,4

100,00

0,00

P. edulis f. flavicarpa (cv. Rubi)


F1E-CE (P. edulis f. flavicarpa. x P. caerulea) x
P. edulis f. flavicarpa = RC1E-CE
RC1E-CE [F1 (P. edulis f. flavicarpa x P. caerulea) x
P. edulis f. flavicarpa] x P. edulis f. flavicarpa = RC2E-CE
* Estes cruzamentos geram frutos sem sementes ou raramente com uma ou duas sementes
frteis

Quanto resistncia bacteriose, alm da P. actinia, outras espcies


como P. odontophylla, P. serrato-digitata, P. gibertii, P. caerulea, P. morifolia,
P. mucronata, P. tenuifila e alguns acessos de P. edulis e P. nitida vm-se
comportando como resistentes aos isolados do Distrito Federal. Em relao
antracnose, a P. setacea, P. coccinea, P. caerulea, P. gibertii, P. amethystina,
P.

odontophylla,

alguns

acessos

de

P.

edulis,

P.

serrato-digitata

P. morifolia, P. mucronata e P. nitida vm-se comportando como resistentes.


P. caerulea, P. mucronata, P. incarnata, P. nitida e P. gibertii, assim como os
hbridos de P. caerulea com maracuj-azedo comercial tm sido preferidos
pela broca-do-maracuj (Philonis passiflorae) que ataca hastes e a regio do

91

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

colo das plantas provocando a morte delas . A P. gibertii, P. caerulea e seus


hbridos vm-se comportando como suscetveis podrido-do-colo causada
por Fusarium solani.

Reao de hbridos interespecficos s doenas da


parte area
Com objetivo de se obter resistncia a doenas causadas por
patgenos do solo, virose do endurecimento do fruto e antracnose,
avaliaram-se plantas de geraes F1, RC1, RC2 e RC3 e RC4 oriundas do
cruzamento entre a P. edulis f. flavicarpa comercial (Figura 4) x P. setacea
(Figura 3), tendo a espcie comercial como genitor feminino e masculino para
a obteno das prognies F1,s e como genitor masculino para a obteno
das prognies RC,s (Tabela 2). Nas plantas obtidas na gerao F1, tendo o
maracuj-azedo como genitor feminino ou masculino, prevaleceram o vigor
hbrido e as caractersticas marcantes da P. setacea, como folhas verdes mais
claras, alta capacidade de florao, flores com androginforo muito longo,
ptalas e coroa com ligeira tonalidade lils (Figura 5) herdada do P. edulis f.
flavicarpa (Figura 4), horrio da antese e frutos com caractersticas
intermedirias (Figura 5) em todas as 98 plantas das duas prognies
analisadas. No entanto, essas plantas, embora apresentem boa resistncia
podrido-do-colo ou de razes (Fusarium solani), antracnose e virose
(PWV) e tima florao, s produzem frutos por polinizao manual, pelo fato
de possurem androginforo muito longo, o que faz com que a altura ou a
distncia do estigma em relao coroa seja elevada, no permitindo, dessa
forma, a polinizao por insetos. O horrio de antese das plantas F1s pode,
tambm, estar contribuindo para a ausncia de frutos obtidos via polinizao
natural. No Distrito Federal, a antese de P. setacea inicia-se s 19 h, e a flor
permanece aberta e frtil at as 7 h da manh seguinte. Os possveis
polinizadores dessa espcie podem ser morcegos e mariposas. A antese de
P. edulis f. flavicarpa inicia-se as 12 h, e a flor permanece aberta at as 18 h. J
a antese das plantas F1 inicia-se em torno das 17 h e as flores permanecem
abertas at as 22 horas. Portanto, parece no serem visitadas por animais
durante o perodo de antese.

92

Potencial de espcies silvestres de maracujazeiro como fonte de resistncia a doenas

Foto: Nilton Junqueira

Todas as plantas F1,s so altamente suscetveis bacteriose, mas com


alto grau de tolerncia, o que faz com que as plantas se recuperem
rapidamente aps o perodo favorvel doena.

Figura 3. Flor de P. setacea mostrando androginforo longo.

Figura 4. Flor de P. edulis f. flavicarpa comercial com


androginforos mais curto.

93

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Figura 5. Flor e frutos de um hbrido F1 entre P. edulis f.


flavicarpa comercial x P. setacea: Observa-se que a flor
branca da P. setacea ganha tonalidades lilases, mas
mantm o androginforo longo.

Quanto s geraes RC1, RC2, RC3 e RC4, pode-se verificar,


respectivamente, nas Figuras 6, 7, 8 e 9, que a tonalidade das flores foi
modificando em decorrncia dos retrocruzamentos, at adquirir formato e cor
similares aos da flor do recorrente (Figura 4) nas geraes RC3 e RC4. Fato
semelhante aconteceu com os frutos e as folhas. A confirmao do sucesso
da fecundao cruzada para a obteno dessas populaes foi realizada por
Faleiro et al. (2005) por meio de marcadores moleculares RAPD. Em relao
resistncia a doenas, verificou-se, tambm, que a resistncia virose
(PWV) foi diluda durante os retrocruzamentos, chegando, nas geraes RC3
e RC4, com graus de suscetibilidade similares aos observado no recorrente
(Tabela 2). Quanto resistncia bacteriose, todas as geraes RCs foram
altamente suscetveis e perderam a capacidade de tolerncia observada em
P. setacea e na gerao F1 (Tabela 2).

94

Potencial de espcies silvestres de maracujazeiro como fonte de resistncia a doenas

Figura 6. Flor e fruto de um hbrido


RC1 de P. edulis f. flavicarpa x P.
setacea (F1) x P. edulis f. flavicarpa.
Observa-se que a flor ganha
tonalidade um pouco mais
arroxeada.

Figura 7. Flor e fruto de um hbrido


RC2 de P. edulis f. flavicarpa x P.
setacea (F1) x P. edulis f. flavicarpa
(RC1) x P. edulis f. flavicarpa: A flor
adquire tonalidades arroxeadas
mais intensas e sua aparncia
aproxima-se a da flor do P. edulis f.
flavicarpa.

95

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Figura 8. Flor e fruto de um hbrido RC3 de P. edulis f.


flavicarpa x P. setacea, ou seja, RC2 x P. edulis f. flavicarpa.
Observa-se que o formato e as tonalidades da flor so
semelhantes de P. edulis f. flavicarpa (Figura 4), mas o
androginforo ainda continua longo, e os primeiros
sintomas de alta suscetibilidade ao vrus do endurecimento
j aparecem.

Figura 9. Flor de um hbrido RC4. O formato e as


tonalidades da flor so muito semelhantes de P. edulis
f. flavicarpa comercial.

96

Potencial de espcies silvestres de maracujazeiro como fonte de resistncia a doenas

Em relao produtividade, em experimentos conduzidos por Sousa


(2005) em vargem Bonita, DF onde foi comparado o desempenho agronmico
de plantas de duas prognies RC3 (Prognies PS-09 e RC-03) de P. edulis f.
flavicarpa x P. setacea juntamente com outras cultivares de P. edulis f. flavicarpa
comerciais, com polinizao natural, verificou-se que ambas as prognies
foram resistentes antracnose e suscetveis verrugose, bacteriose e virose
e tiveram baixa produtividade em relao cultivar mais produtiva. Durante
seis meses de colheita, a PS-09, RC-03 e EC-RAM (hbrido entre P. edulis
australiano, produziram respectivamente 2.602,00 kg/ha, 7.586,67 kg/ha e
23.457,15 kg/ha, ou seja, a melhor cultivar produziu durante seis meses de
colheita, respectivamente 10 vezes e trs vezes mais que as RC3,s. Por sua
vez, o tamanho dos frutos das plantas dessas prognies foi similar ao das
cultivares comerciais. A causa da baixa produtividade pode estar relacionada
com a elevada altura do estigma em relao coroa, proporcionada pelo
androginforo longo, o que dificulta a polinizao por insetos. Ademais, o
comportamento destas em relao a doenas causadas por patgenos do
solo ainda est sendo analisado.
Quanto aos hbridos obtidos de cruzamentos de P. edulis f. flavicarpa
comercial (Figura 4) e P. coccinea (Figura 10), verifica-se que as plantas da
gerao F1 apresentam caractersticas marcantes de P. coccinea, como folhas
simples, lbulos com bordas serrilhadas, verde-escuras, flores de cor vinho e
rosa-pink, androginforo longo (Figuras 11 e 12), mas, tambm com alguma
caracterstica de P. edulis f. flavicarpa como flores com coroa e filetes brancos
e excelente vigor. Embora apresentem boa resistncia a doenas, as plantas
F1,s produzem poucos frutos por polinizao natural pelas mesmas causas
encontrados nos hbridos com P. setacea, ou seja, androginforo longo e
elevada altura dos estigmas em relao coroa. No Distrito Federal, as flores
de P. coccinea abrem das 6 s 7 h e as dos F1,s a partir das 11 h, mas, estas
no so visitadas por mamangavas e sim por abelhas arapus e africanizadas.
As plantas da gerao RC1 tendo P. edulis f. flavicarpa como genitor masculino
e recorrente apresentam, tambm, excelente vigor e caractersticas marcantes
de P. coccinea, porm, suas flores so de colorao rseo-aroxeada (Figura
13) e geram poucos frutos por polinizao natural e demoram muito para
iniciar a frutificao.

97

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Figura 10. Flores e frutos de P. coccinea.

Figura 11. Flor de um hbrido F1 entre P. edulis f.


flavicarpa comercial x P. coccinea com tonalidades
vinho e branca.

98

Potencial de espcies silvestres de maracujazeiro como fonte de resistncia a doenas

Figura 12. Flor de um hbrido entre P. edulis f. flavicarpa x


P. coccinea com tonalidades rosa-pink e branco.

Figura 13. Flor de um hbrido RC1 de P. edulis f. flavicarpa


x P. coccinea (F1) x P. edulis f. flavicarpa com tonalidade
rosa-lils.

99

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Quanto aos hbridos obtidos entre a P. edulis f. flavicarpa comercial


(Figura 4) x P. caerulea (Figura 14), as plantas da gerao F1 e RC1 tm boa
resistncia bacteriose e antracnose (Tabela 2), mas produzem frutos sem
sementes, so preferidas pela broca-do-maracuj e so suscetveis virose. As
plantas da gerao RC2 tendo o maracuj-azedo como genitor masculino e
recorrente, frutificam bem, produzem frutos grandes semelhantes aos do
maracujazeiro-azedo comercial, tm flores com cores semelhantes s do
maracujazeiro-azedo e formato similar ao de P. caerulea, como ptalas e
spalas com pices arredondados (Figura 15).
As plantas da gerao F1 entre P. coccinea x P. setacea so muito
vigorosas, resistente podrido-de-razes ou do colo (Fusarium solani)
virose, antracnose e verrugose, no entanto, so altamente suscetveis
bacteriose (Tabela 2), porm, tolerantes, ou seja, as plantas atacadas
recuperam-se rapidamente aps o perodo favorvel bacteriose. As plantas
F1 apresentam caractersticas marcantes de P. coccinea (flores com ptalas e
spalas vermelhas e androginforo muito longo) e algumas de P. setacea
como a coroa e filetes brancos e androginforo tambm longo (Figura 16).
Parte das plantas tem folhas compostas trilobadas (herana de P. setacea) e
parte tem folhas simples (herana de P. coccinea). As plantas da gerao F1
(hbrido triplo) obtida do cruzamento deste F1 x P. edulis f. flavicarpa
comercial, tendo este ltimo como genitor masculino, so altamente
suscetveis bacteriose e virose do endurecimento do fruto. Produzem flores
variando do rosa-claro ao lils (Figura 17) com androginforo bastante longo
em relao aos produzidos pelo maracuj-azedo; folhas trilobadas com
caractersticas do P. edulis f. flavicarpa e frutos grandes com mais de
150 gramas e baixa produtividade. A gerao RC1 obtida do cruzamento de
F1 x P. edulis f. flavicarpa comercial produz flores vinho-escuro (Figura 18),
baixa produtividade, androginforo um pouco mais longo que do
maracuj-azedo e pouco atrativa para polinizadores. Quanto reao dessas
geraes s doenas causadas por patgenos do solo, no foi possvel,
ainda, avali-las. Esses hbridos foram tambm confirmados por marcadores
moleculares, conforme relatado por Faleiro et al. (2005).

100

Potencial de espcies silvestres de maracujazeiro como fonte de resistncia a doenas

Figura 14. Flor de P. caerulea.

Figura 15. Flor de um hbrido RC2 de P. edulis f. flavicarpa


x P. caerulea (RC1) x P. edulis f. flavicarpa. Observa-se que
a flor adquiriu as mesmas tonalidades da P. edulis f.
flavicarpa, mas mantm o formato da flor da P. caerulea
como spalas e ptalas com pices arredondados e firmes.

101

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Figura 16. Flor e fruto de um hbrido F1 de P. coccinea x P.


setacea. Observam-se detalhes de P. coccinea e P. setacea
na mesma flor e androginforo muito longo detalhado na
Figura 19.

Figura 17. Flor de um hbrido triplo entre P. coccinea x P.


setacea (F1) x P. edulis f. flavicarpa comercial. Observam-se
caractersticas das trs espcies, como cores, detalhes do
geniceu, androceu e coroa.

102

Potencial de espcies silvestres de maracujazeiro como fonte de resistncia a doenas

Figura 18. Flor de um hbrido RC1 entre o hbrido triplo de


P. coccinea x P. setacea x P. edulis f. flavicarpa (F1) x P.
edulis f. flavicarpa. Observa-se flor com tonalidades
arroxeadas e formato similar ao da P. edulis f. flavicarpa.

Figura 19. Flor de um hbrido F1 de P. coccinea


x P. setacea mostrando androginforo muito
longo.

103

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Reao de hbridos intra-especficos a doenas da


parte area
Entre acessos de maracuj-roxo (P. edulis Sims) nativos ou
domesticados como nas selees australianas, h plantas que apresentam
graus variados de resistncia a doenas da parte area. Entre as plantas de
um acesso australiano introduzido na Regio Norte, no final da dcada de
1980, algumas apresentavam boa resistncia bacteriose e antracnose. Na
dcada de 1990, foram efetuados alguns cruzamentos entre o acesso Sul
Brasil com uma dessas plantas de roxo australiano. Dos hbridos F1,s
obtidos, foi selecionada uma planta que produzia frutos grandes, de casca
avermelhada e com boa resistncia/tolerncia a doenas da parte area. Essa
planta foi retrocruzada com outra selecionada do acesso Sul Brasil
denominada de MSC. Entre as plantas RC1,s, foi selecionada e clonada
algumas bastante vigorosa, com boa tolerncia a doenas da parte area e
frutos oblongos grandes, de casca vermelho-ma ou amarela, que foi
denominada de EC-RAM. Essas plantas so, atualmente, uma das matrizes
utilizada para produo dos hbridos EC-2-0 e EC-3-O (Geraes RC1, RC2 e
RC3, tendo o maracuj-azedo-amarelo como recorrente) e outros que
devero ser lanados nos prximos anos para serem cultivados na regio do
Planalto Central. O EC-RAM, embora tenha a maioria das plantas com boa
tolerncia virose e bacteriose, boa produtividade, frutos com bom
rendimento de suco, tem produzido em torno de 30% de frutos com casca
vermelha, caracterstica esta, ainda indesejvel no mercado de frutas frescas.
Desses cruzamentos, foram tambm selecionadas e clonadas as matrizes
codificadas como GA-2, AR1, AR2, AP1, FP1, FP2, FP3, todas com uma ou
mais caractersticas desejveis, como alta produtividade, maior grau de
resistncia e/ou tolerncia a doenas da parte area ou tendncia de
florescimento em dias curtos.

Consideraes finais
Sabe-se que a base gentica do maracujazeiro-azedo comercial para
resistncia a doenas muito estreita. Dessa forma, as espcies nativas, por

104

Potencial de espcies silvestres de maracujazeiro como fonte de resistncia a doenas

apresentar grande diversidade gentica, podem contribuir para aumentar o


grau de resistncia das cultivares comerciais a doenas por meio de
hibridaes interespecficas. No entanto, para se obter sucesso necessrio
conhecer melhor o germoplasma de maracujazeiro quanto a sua diversidade
e compatibilidade gentica, bem como os hbitos fenolgicos das espcies,
tipos e graus de resistncia a pragas e doenas, assim como a variabilidade
dos patgenos que as acometem.
Os resultados referentes aos hbridos interespecficos F1,s e RC,s
discutidos neste captulo ainda so preliminares.Todavia, h fortes indcios de
que o nvel de resistncia dos hbridos a algumas doenas da parte area vai
diminuindo com os retrocruzamentos com a cultivar comercial, o que pode
ser devido natureza quantitativa ou polignica dessa resistncia. No
entanto, ainda no se conhece a reao desses hbridos aos patgenos do
solo. Dessa forma, geraes RC5 de P. edulis f. flavicarpa x P. setacea e RC3
de P. edulis f. flavicarpa x P. caerulea j esto disponveis e sero avaliadas em
vrias regies do Pas onde doenas causadas por patgenos do solo como
a murcha ou fusariose (Fusarium oxysporum f.sp. passiflorae) e/ou
podrido-do-colo (Fusarium solani) tm sido limitantes. Acredita-se que
desses retrocruzamentos ser possvel obter alguma cultivar mais tolerante ou
resistente a doenas de razes.
Quanto obteno de resistncia s doenas da parte area,
necessrio continuar as avaliaes do germoplasma existente, bem como
introduzir novas espcies por meio de intercmbio e conseguir outras
geraes de hbridos por cruzamentos diretos ou indiretos das cultivares
comerciais com outras espcies com resistncia bacteriose, antracnose e
virose do endurecimento do fruto.
Quanto aos cruzamentos intra-especficos, os potenciais de espcies
nativas e cultivadas de P. edulis (maracuj-roxo) e P. edulis f. flavicarpa
silvestre (perobinha ou noel) devem ser investigados, pois, como mostrado
na Tabela 2, alguns desses acessos vm apresentando boa tolerncia a
doenas.

105

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

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108

Flores que enfeitam vistosas parreiras


Folhas que esculpia o caramancho,
Frutos que adoam nossas geladeiras,
Que encanta e conquista a populao.
E se a tantos empregos e riquezas gera,
Torna esta bebida que to brasileira
Cobiado produto para exportao,
e faz do ano inteiro uma s primavera.

Geovane Alves de Andrade

Emprego de espcies silvestres no


melhoramento gentico vegetal:
experincia em outras espcies com
anlise de retrocruzamento avanado
de QTLs (AB-QTL)
Mrcio Elias Ferreira
Paulo Hideo Nakano Rangel

Intr
oduo
Introduo
A vulnerabilidade gentica, observada em longas extenses de plantios
comerciais com uma mesma variedade, clone ou linhagens aparentadas,
tpicos da produo em escala da agricultura moderna, levou a lamentveis
episdios de perdas, na agricultura, de grande impacto social e econmico.
Ainda no sculo XIX, os danos decorrentes de uma epidemia de Phytophtora
em plantios clonais de batata, na Irlanda, causaram fome e induziram uma
onda migratria de cidados irlandeses para os Estados Unidos e outros
pases europeus que marcou a sociedade da poca. O uso intensivo de
linhagens T de macho-esterilidade citoplasmtica em hbridos de milho levou a
perdas significativas na produo dessa cultura nos EUA, causadas por uma
devastadora epidemia fngica h pouco mais de trs dcadas (Levings, 1993),
com graves reflexos econmicos.
Como conseqncia de episdios dessa natureza, h muito se discute a
diversificao do uso de variedades melhoradas na agricultura. A
vulnerabilidade gentica pode ser contornada, por exemplo, com o
enriquecimento da variabilidade gentica das colees de trabalho dos
programas de melhoramento que servem de base para as atividades de
recombinao e seleo desses programas (Frankel & Brown, 1984). O
enriquecimento corrigiria, concomitantemente, as limitaes de ganho
gentico impostas pela estreita base gentica que restringe a obteno de

111

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

recombinaes gnicas interessantes devido ao limitado acervo de alelos que


compe a coleo de trabalho. No entanto, ainda hoje se constata a grande
necessidade de avanos significativos nessa rea, visto que os programas de
melhoramento modernos ainda se concentram, por vrias razes, em
germoplasma caracterizado por reduzida diversidade gentica.
Neste captulo, discute-se a necessidade de expanso da base gentica
dos programas de melhoramento por meio da introgresso de genes de
interesse econmico. nfase foi dada discusso do mtodo de
melhoramento baseado na anlise de retrocruzamento avanado de QTLs (ABQTL analysis) que permite a introgresso de genes de interesse econmico de
germoplasma silvestre para linhagens-elite, geralmente, pouco utilizado em
programas de melhoramento.

Base gentica de programas de melhoramento


gentico
No incio do sculo XX, Nikolai Vavilov chamou a ateno de
pesquisadores do mundo inteiro para a necessidade de conhecer, coletar e
conservar recursos genticos vegetais para uso no presente e, tambm, no
futuro pela humanidade. Os conceitos fundamentais de centros de origem e de
diversidade de espcies vegetais por ele desenvolvidos influenciaram um
processo de organizao de esforos nacionais em diversos pases para
estabelecer colees de germoplasma das principais espcies de importncia
econmica. A partir do episdio da epidemia em citoplasma T de milho nos
EUA, devido grande presso poltica e econmica ento suscitada,
observou-se maior intensidade nos esforos de coleta de germoplasma em
todo o mundo e a criao de institutos nacionais e internacionais pr-ativos no
suporte a iniciativas de coleta, conservao, caracterizao e uso de recursos
genticos. Uma das instituies resultante dessas percepes e com misso
internacional de estimular as atividades de conservao de recursos genticos
vegetais em todo o mundo foi o International Plant Genetics Resources Institute
(IPGRI). No Brasil, a Embrapa, pela atuao de suas unidades de pesquisa,
vem desde 1973 desempenhando, tambm, importante papel nesse
segmento.

112

Emprego de espcies silvestres no melhoramento gentico vegetal ...

Equipes de coleta, compostas de pesquisadores de diferentes


especialidades, tm sido organizadas para amostrar a diversidade gentica
das populaes naturais das espcies cultivadas e dos seus parentes
silvestres, bem como de variedades tradicionais, clones e linhagens
comerciais, de acordo com o modo de propagao da espcie de interesse.
O resultado desse esforo culminou na obteno de grandes quantidades de
acessos depositados em bancos de germoplasma mantidos em diversas
partes do mundo. Para algumas espcies, como trigo e arroz, a quantidade de
acessos conservada em bancos de germoplasma significativa (Tabela 1).
Tabela 1. Estimativa do nmero de acessos depositado em bancos de germoplasma
de espcies cultivadas em diversas partes do mundo.
Espcie

Acessos

% de espcies silvestres

trigo

410.000

60

arroz

215.000

10

milho

100.000

15

soja

100.000

30

batata

42.000

40

tomate

32.000

70

algodo

30.000

20

Adaptado de Tanksley & McCouch (1997).

Outras espcies, no entanto, ainda esto na fase inicial de esforos de


coleta e conservao de germoplasma. Espcies autctones de importncia
econmica, no Brasil, vm recebendo ateno especial pelo potencial
agronmico e comercial que despertam. Pesquisadores e entusiastas
visionrios no medem esforos para conservar e estudar espcies que devem
ser utilizadas em maior escala pelas geraes futuras. Essas iniciativas devem
ser apoiadas para fomentar o avano do conhecimento e o desenvolvimento
de variedades superiores para uso mais intensivo pela sociedade.
A domesticao das espcies vem sendo desenvolvida, nos ltimos
sculos, com a finalidade de selecionar indivduos nas populaes naturais

113

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

com caractersticas mais homogneas no que tange, por exemplo,


arquitetura da planta (menor altura e maior rigidez do colmo para dificultar
acamamento) ou proteo dos gros (eliminao de mecanismos de
disperso de sementes, importante para a propagao da espcie em
condies naturais, no entanto, inadequado para condies agrcolas). O
melhoramento gentico de plantas utiliza a seleo para fixar caractersticas
importantes para a produo agrcola, mas isso, por sua vez, reduz a
diversidade. No limite, a ausncia de diversidade gentica simplesmente no
permite que a seleo artificial possa ser desenvolvida. A existncia de
variantes allicas na coleo de trabalho fundamental para ganho gentico
contnuo. O processo de seleo opera com a finalidade de limitar a
diversidade gentica, capitalizando os esforos no desenvolvimento de
material superior, homogneo, de acordo os objetivos do programa, todavia,
necessita dessa diversidade para que haja continuidade de ganho de seleo.
Os programas de melhoramento gentico de plantas, de modo
organizado e fundamentado nos princpios mendelianos, foram inaugurados
em sua grande maioria somente a partir de meados do sculo passado. Vrios
desses programas foram estabelecidos com base em um grupo pequeno de
amostras varietais, resultando numa estreita base gentica e, por conseguinte,
limitada diversidade allica. A estreita base gentica dos programas de
melhoramento gentico tem levado diminuio nos percentuais de ganho
gentico para produtividade em gramneas e outras espcies (Figura 1).
Taxas de ganho anual de produtividade da ordem 2% a 3% vinham
sendo observadas ao longo das dcadas de 1960 e 1970 e passaram a
apresentar valores preocupantes nestas ltimas duas dcadas (Figura 1). A
perdurar essa tendncia, novas estratgias devero ser desenvolvidas para
atingir as metas de produtividade esperadas para atender demanda prevista
de gros para consumo pela populao humana nos prximos anos. Com o
rpido crescimento populacional, urgente o incremento dos atuais nveis de
produtividade do arroz para satisfazer satisfazer as necessidades de cerca de
8,9 bilhes de pessoas no planeta estimados para 2010 (Tanksley & McCouch,
1997). Os incrementos observados no so suficientes no momento.

114

Emprego de espcies silvestres no melhoramento gentico vegetal ...

porcentagem

4,0

3,0

2,0

1,0

1964

1968

1972

1976

1980

1984

1988

1992

Figura 1. Taxa de decrscimo de ganho de produo em gramneas (linha contnua)


e na agricultura em geral (linha pontilhada).

A limitao da variabilidade gentica nas populaes submetidas


seleo compromete a extenso do ganho gentico. Dados dos programas
de melhoramento de arroz irrigado, conduzidos no Brasil, indicam, por
exemplo, que os ganhos genticos para produtividade de gros recentemente
documentados tm sido inferiores a 1% ao ano (Soares et al., 1994;
Breseghello et al.,1999; Santos et al., 1999; Rangel et al., 2000). Anlise
recente indica que apenas dez ancestrais contribuem com 68% do conjunto
gnico das variedades brasileiras de arroz irrigado (Rangel et al., 1996). Na
Amrica Latina, o nmero de variedades de arroz, utilizado como base para
programas de melhoramento, limita-se a doze acessos (Cuevas-Perez et al.,
1992). Considerando as cultivares mais plantadas nos principais estados
produtores de arroz irrigado no Brasil, observa-se que apenas sete ancestrais
so mais freqentes nos pedigrees e so responsveis por 70% dos genes
(Rangel et al., 1996; Breseghello et al., 1999). Tal situao de alta uniformidade
gentica pode trazer srias conseqncias produo brasileira de arroz.
Uma delas a j mencionada vulnerabilidade, especialmente, para patgenos
de grande importncia para a cultura, como Magnaporthe grisea que causa a
brusone do arroz. Outra a possibilidade de que o desenvolvimento de novas
variedades no acompanhe as expectativas de produtividade necessrias para

115

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

atender ao consumo brasileiro. Dados similares tm sido descritos para outras


espcies vegetais, como soja e trigo. Nos Estados Unidos, por exemplo, os
programas de melhoramento gentico de soja tm por base populaes
derivadas do cruzamento de apenas 12 variedades (Tanksley & McCouch,
1997). Mais drstica, ainda, a situao de programas de melhoramento
gentico do trigo-vermelho, derivado do cruzamento de duas variedades
oriundas da Polnia e da Rssia.
So vrias as razes para estagnao e declnio dos percentuais de
ganho de produtividade, mas no h dvida de que o componente gentico
devido limitao de variabilidade nos programas de melhoramento deve ser
levado em considerao. Esse incremento de produtividade s ser possvel
se houver melhor aproveitamento da diversidade gentica, especialmente, da
conservada em bancos de germoplasma. Para isso, o conhecimento gentico
do germoplasma depositado nos bancos fundamental, assim como a
ampliao da diversidade gentica das colees de trabalho.

Causas da limitao do uso de acessos do banco de


germoplasma no melhoramento gentico
Independentemente da espcie, constata-se que incipiente o uso do
recurso gentico, em especial, de acessos conservados em bancos de
germoplasma nas rotinas dos programas. Alguns dos fatores responsveis so
discutidos a seguir:
(a) Limitaes na caracterizao de germoplasma a constatao de que o
processo de caracterizao do germoplasma, conservado em bancos
genticos, limitado no recente (Frankel & Brown, 1984), e a carncia
de informaes sobre os acessos depositados constitui-se em um dos
grandes entraves para emprego desse acervo gentico nos programas de
melhoramento. O acervo de material de algumas espcies de importncia
econmica coletado e conservado bastante extenso (Tabela 1). No
entanto, o conhecimento dos acessos conservados no que tange a sua
correta classificao botnica, nvel de diversidade, caractersticas

116

Emprego de espcies silvestres no melhoramento gentico vegetal ...

agronmicas, fentipos de interesse econmico ou polimorfismo


molecular ainda inicial. Essa carncia de dados, naturalmente,
desestimula seu emprego nas rotinas dos programas de melhoramento. Na
falta de informao, o melhorista continuar a explorar da melhor maneira
possvel sua coleo de trabalho. Esta , por conseguinte, a primeira razo
para o uso limitado e o conseqente estreitamento da base gentica dos
programas.
(b) resistncia do emprego de novo material no programa de melhoramento a
incluso de novo germoplasma nas colees de trabalho dos programas
de melhoramento encontra grande entrave inicial no prprio sucesso de
desenvolvimento de novas variedades melhoradas advindas da
recombinao de germoplasma-elite enormemente trabalhado ao longo
de vrias geraes de seleo. H, portanto, confiana do melhorista no
progresso que pode advir do material com o qual o programa de
melhoramento trabalha. Por sua vez, a incorporao de variedades
tradicionais ou espcies silvestres traz invariavelmente consigo genes
deletrios ou indesejveis de difcil eliminao no programa. Tais genes, em
geral, ligados aos genes de interesse, so incorporados por arraste ou
linkage drag por estarem presentes no bloco haplotpico incorporado do
genoma doador e que s poder ser eliminado do genoma recorrente por
recombinao. A extenso do linkage drag varivel ao longo do genoma
e heterognea em volta do loco de interesse. O nmero de genes,
potencialmente deletrio, em torno do loco gnico de interesse
introgredido, tambm bastante varivel. Segmentos em torno de 1cM do
genoma de tomate em programas de retrocruzamento podem incluir 100
ou mais genes (Young & Tanksley, 1989).
(c) incorporao de caractersticas quantitativas de germoplasma silvestre em
linhagem-elite as caractersticas mais importantes dos programas de
melhoramento possuem tipicamente controle gentico quantitativo, como
produtividade ou tolerncia estresse abitico. A introgresso simultnea
de alelos em vrios locos complexa e trabalhosa.

117

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Caracterizao de germoplasma em escala: o papel


da anlise molecular
A caracterizao de germoplasma vegetal refere-se observao,
mensurao e documentao de caractersticas da planta que so herdveis,
consistentes e expressas homogeneamente em vrios ambientes (Ferreira et
al., 2005). A caracterizao permite identificar e separar geneticamente os
acessos que compem a coleo de germoplasma, fomentar o catlogo de
descritores dos acessos com informaes biolgicas essenciais para o
manejo e gesto da coleo e estimular a utilizao desses acessos no
melhoramento gentico de plantas ou diretamente na agricultura. A
caracterizao de germoplasma vegetal, portanto, procura descrever e
compreender, em ltima anlise, a diversidade gentica dos organismos
estudados.
No nvel mais bsico, a diversidade gentica refere-se diretamente a
diferenas na seqncia linear de nucleotdeos da molcula de DNA entre os
indivduos considerados, incluindo seqncias funcionais (genes) e nofuncionais do genoma, bem como variaes ocasionadas por efeitos de
posio de genes ou seqncias reguladoras. A caracterizao
tradicionalmente se baseia em descritores morfolgicos que possibilitam a
separao dos acessos da coleo. A caracterizao agromorfolgica vem
permitindo grandes avanos no processo de conhecimento e de organizao
das colees de germoplasma vegetal. certo que a organizao atual das
colees tem sua base na caracterizao agromorfolgica. No entanto, essa
caracterizao tem sido complementada por outros critrios, visto que os
descritores agromorfolgicos apresentam algumas limitaes, como: (a)
pouco polimorfismo, isto , geralmente apresentam limitada variao de
morfotipos. (b) algumas caractersticas morfolgicas podem estar sujeitas a
variaes ambientais, o que torna complexo o processo de avaliao e
comparao entre acessos; (c) algumas caractersticas morfolgicas podem
ter impacto na viabilidade do acesso, dificultando sua manuteno; (d) a
caracterizao agromorfolgica intensiva em tempo e recursos para sua
execuo. O grande nmero de acessos depositado em colees de
germoplasma vegetal tem tornado essa tarefa muito difcil e intimidado sua
execuo.

118

Emprego de espcies silvestres no melhoramento gentico vegetal ...

Nos ltimos anos, mtodos moleculares de caracterizao de


germoplasma tiveram grande desenvolvimento. Entre esses mtodos, os que
revelam polimorfismo de seqncia de cido desoxiribonuclico, conhecidos
como marcadores moleculares, tm sido de grande importncia para a anlise
de diversidade gentica e caracterizao de germoplasma. A utilizao desses
mtodos tem sido cada vez mais comum nas rotinas de caracterizao de
germoplasma vegetal.
Marcadores de regies hipervariveis do genoma, conhecidos como
microssatlites ou repeties curtas em tandem (STR short tandem repeats),
foram recentemente desenvolvidos e caracterizados no genoma de vrias
espcies vegetais (Ferreira & Grattapaglia, 1996). Marcadores microssatlites
so analisados por meio da diferenciao da variao de seqncias
repetitivas de dois a seis nucleotdeos, lado a lado, em um stio do DNA. O
nmero de repeties, em geral, varia de algumas unidades a vrias dezenas,
fazendo com que a variao allica intraloco possa ser detectada pela
separao com base no peso molecular de produtos de PCR (reao de
polimerase em cadeia), realizada por meio de eletroforese em gis de
poliacrilamida (PAGE) corados com nitrato de prata (Tautz,1989; Litt & Luty,
1989; Weber & May, 1989). Mais recentemente, a deteco precisa da
variao allica tem sido feita em seqenciadores automticos de DNA. Nesse
caso, a marcao com fluorocromo de um dos primers que flaqueiam a
seqncia microssatlite no loco possibilita que o produto de PCR emita
fluorescncia quando excitado com o laser do equipamento, permitindo sua
acurada deteco em pares de base. Os alelos de locos microssatlites so
analisados via PCR e, por isso, podem ser detectados a partir de amostras de
nanogramas de DNA. Quando a variao de alelos de dois ou mais
marcadores microssatlites no se sobrepem, eles podem ser combinados
para execuo simultnea de PCR e separao por eletroforese. Com a
utilizao de diferentes fluorocromos que emitem luz de comprimentos de
onda especficos para marcar os alelos de vrios locos, mesmo os locos com
variao sobreposta de tamanho de alelos podem ser resolvidos
simultaneamente. Isso permite que uma amostra possa ter o gentipo
determinado simultaneamente em vrios locos (multiplex), o que uma grande
vantagem no processo genotipagem em escala.

119

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Microssatlites apresentam as seguintes vantagens para anlise


gentica: (a) so marcadores co-dominantes, possibilitando a determinao
dos alelos de um loco e, por conseguinte, a diferenciao de homozigotos e
heterozigotos; (b) so altamente polimrficos, isto , apresentam bom nmero
de alelos por loco, com freqncia varivel nas populaes do organismo
estudado, o que permite a diferenciao gentica de indivduos testados; (c)
esto distribudos por todo o genoma, geralmente, de maneira uniforme,
possibilitando boa representatividade da poro genmica analisada e,
quando selecionados, independncia de recombinao entre os locos
considerados; (d) uma vez desenvolvidos, permitem uma anlise de baixa
relao custo-benefcio e extremamente acurada (Ferreira, 2001). Essa classe
de marcadores moleculares tem sido utilizada extensivamente em anlise
gentica de plantas, animais e microrganismos (Ferreira & Grattapaglia, 1996).
O polimorfismo de DNA em plantas, observado por meio de
marcadores moleculares microssatlites amplamente distribudos por todo
genoma e altamente polimrficos, vem sendo estudado e empregado na
estimativa de parmetros genticos e em procedimentos de diagnose. Os
dados obtidos so utilizados como suporte para a tomada de deciso na
conservao de germoplasma, no mapeamento de locos que controlam
caractersticas de interesse e em seleo assistida. Marcadores microssatlites
tm sido empregados na construo de mapas de ligao, na identificao de
plantas e seus produtos, em testes de paternidade e de maternidade, em
testes de identidade gentica, na anlise de variabilidade gentica de
populaes, em estudos filogenticos, entre outras aplicaes (Ferreira &
Grattapaglia, 1996).
A recente utilizao do seqenciador automtico de DNA na
genotipagem de locos hipervariveis vem revolucionando os estudos de
identificao e anlise gentica em vrias espcies. A tecnologia disponvel
permite a genotipagem em escala de vrios indivduos ao mesmo tempo,
seguindo estratgia baseada em marcao de primer utilizado na amplificao
de alelos em loco STR com fluorocromos que emitem fluorescncia em
diferentes comprimentos de onda. Seqenciadores de DNA permitem a

120

Emprego de espcies silvestres no melhoramento gentico vegetal ...

deteco precisa dos alelos, com possvel identificao de diferenas allicas


em nvel de par de bases. Assim, diferenas de um par de bases entre alelos ou
microvariantes, representando fraes da seqncia repetitiva, podem ser
detectadas com acurcia e, conforme comentado anteriormente, permitem a
anlise multiloco em sistemas multiplex, quando os alelos de cada loco so
amplificados em uma nica reao PCR ou, alternativamente, em diferentes
reaes PCR com anlise simultnea. A tecnologia propicia a obteno de
grande quantidade de dados em curto espao de tempo, permitindo o
escalonamento de processos de genotipagem.
A caracterizao de germoplasma pode ser revolucionada com o
emprego, em escala, de anlise de polimorfismo de DNA no processo de
genotipagem. Por atuarem como marcadores genticos, os marcadores
moleculares podem ser utilizados em reaes multiplex analisadas em
seqenciadores de DNA para, com apenas algumas reaes de PCR, cobrir
dezenas de locos do genoma, distribudos ao longo dos cromossomos.
Dessa forma, colees inteiras, incluindo milhares de acessos, poderiam ser
genotipadas. Os dados obtidos, genuinamente genticos, poderiam ser
utilizados para estimar as relaes de vnculo gentico entre acessos da
coleo, identificar duplicaes, sugerir cruzamentos mais interessantes para
maximizar novas combinaes gnicas, aprimorar o sistema de gesto dos
bancos de germoplasma, contribuir para dirimir dvidas de classificao de
espcies ou definir amostras de acessos para utilizao em testes de
associao visando ao isolamento gnico. Isso seria, sem dvida, um grande
passo para fomentar a caracterizao de acessos de banco de germoplasma e
incrementar seu uso em programas de melhoramento.

Introgresso assistida: retrocruzamento avanado de


QTLs
A grande maioria das caractersticas de interesse econmico
quantitativa, ou seja, controlada por grande nmero de genes, cada qual
com uma contribuio especfica no fentipo e com significativa interao
com o ambiente. Um loco de caracterstica quantitativa (QTL) segue os

121

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

mesmos princpios de gentica mendeliana. Um QTL pode ser individualizado


em um nico gene ou representar um conjunto de genes fortemente ligado que
pode ser diferenciado por recombinao (Ferreira, 2003). A anlise de QTLs
representa a mendelizao de uma caracterstica quantitativa ao isolar os
locos gnicos que a controlam, permitindo sua avaliao individual ou em
conjunto (Paterson et al., 1991).
A anlise de fragmentos polimrficos de DNA, em plantas, completa
pouco mais de 15 anos de experimentao intensiva. A preocupao inicial
dos estudiosos da rea foi o estabelecimento da tecnologia em diferentes
espcies seguida de um grande esforo de desenvolvimento de mapas
genticos baseados em marcadores moleculares. Em seguida, os
experimentos foram concentrados no mapeamento de regies genmicas que
controlam caractersticas qualitativas. Concomitantemente, observou-se
progresso na dissecao do controle gentico de vrias caractersticas
complexas, estimando o nmero de locos envolvidos no seu controle,
localizando esses locos nos cromossomos, avaliando a magnitude do efeito
de cada loco no controle gentico da caracterstica, estudando os efeitos de
substituio allica nos locos envolvidos, medindo as possveis interaes
epistticas entre locos ou, ainda, analisando a expresso dos genes
envolvidos em locos distintos em diferentes ambientes (Ferreira &
Grattapaglia, 1996). No h dvida, portanto, de que houve grande avano no
conhecimento do controle gentico de vrias caractersticas de interesse
econmico em diferentes espcies agrcolas nos ltimos anos. importante
reiterar que, em vrios casos, a estratgia de mapeamento e dissecao do
controle gentico levou at mesmo clonagem do gene de interesse em
plantas (Martin et al., 1993; Sasaki et al., 2002).
Por sua vez , o emprego de seleo assistida por marcadores nos
programas

de

melhoramento,

especialmente

para

caractersticas

quantitativas, tem sido, regra geral, incipiente. No h dvida de que, nesse


perodo, houve grande desenvolvimento da teoria de seleo assistida, por
meio da anlise de diferentes variveis em simulaes estatsticas, mas a

122

Emprego de espcies silvestres no melhoramento gentico vegetal ...

utilizao direta de informao de gentipos moleculares visando seleo


de indivduos superiores para caractersticas complexas carece ainda de
informao emprica, com os experimentos limitando-se a alguns poucos
exemplos.
Uma exceo a anlise de retrocruzamento avanado de QTLs
(Tanksley & Nelson, 1996) que integra um mtodo clssico de melhoramento
(retrocruzamento) com a anlise de polimorfismo de DNA para fins de seleo.
Um grande desafio para os programas de melhoramento gentico a tarefa de
introgredir genes de interesse econmico de germoplasma silvestre para
material-elite. O germoplasma silvestre, conforme comentado, retm grande
poro da diversidade gentica de uma espcie e esse acervo gnico muito
pouco explorado. Nessa tarefa, o melhorista deve ser capaz de reter os genes
positivos para o idetipo que tem em mente e eliminar aqueles que no so
adequados, alm de tentar suplantar problemas comuns em cruzamentos
interespecficos, como limitao da fertilidade e conservao de blocos
haplotpicos com reduzida recombinao. Como a maior parte das
caractersticas de interesse econmico tem controle quantitativo, a
manipulao

adequada

dos

locos

gnicos

que

controlam

essas

caractersticas vital para o futuro dos programas de melhoramento gentico.


Em geral, os programas de mapeamento de QTLs so desenvolvidos a
partir de populaes segregantes oriundas do cruzamento entre genitores
contrastantes para as caractersticas de interesse. Para isso, so utilizadas
populaes F2, retrocruzamentos ou linhagens recombinantes puras. Essa
estratgia muito eficiente para anlise de caractersticas quantitativas em
cruzamentos intra-especficos. Cruzamentos amplos entre a espcie
domesticada e um parente silvestre, por sua vez, apresentam outros desafios.
Deve ser notado, contudo, que apesar de eficiente no avano do
conhecimento do controle gentico da caracterstica de interesse, o
mapeamento de QTLs apresenta-se quase sempre dissociado do processo de
desenvolvimento varietal. Uma vez obtida a informao sobre QTLs, o
pesquisador, em geral, reinicia o processo de cruzamento para potencial

123

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

utilizao de seleo assistida para a caracterstica. O ideal, naturalmente,


seria o emprego da informao na mesma populao desenvolvida para
mapeamento.
Uma espcie silvestre ao ser diretamente analisada para uma
caracterstica de interesse econmico ter desempenho muito inferior s
linhagens melhoradas. Por causa disto, comum a suposio de que o
acesso silvestre analisado no possui alelos positivos que incrementem a
caracterstica quantitativa estudada. Entretanto, ao contrrio, h muito que
fentipos transgressivos, isto , que suplantam os desempenhos de um ou de
ambos os genitores, em populaes derivadas de cruzamentos entre
linhagens-elite e acessos silvestres, vm sendo detectados (Wehrhahn &
Allard, 1965). Deve ser notado que a avaliao do efeito de alelos para uma
caracterstica quantitativa de difcil realizao prtica no germoplasma
silvestre que o contm. Ao avaliar uma caracterstica quantitativa em uma
espcie silvestre, os dados ficam prejudicados pelo fato de caractersticas
relacionadas ao processo de domesticao (ex., arquitetura da planta,
deiscncia dos frutos, etc.) estarem ainda operando. Mesmo quando o estudo
realizado diretamente em uma populao segregante (ex., populao F2 ou
famlias F3) as mesmas caractersticas relacionadas com o processo de
domesticao prejudicam a anlise. necessrio que as caractersticas de
interesse sejam analisadas em etapas avanadas em programa de
introgresso j estabilizadas no background gentico recorrente.
No mtodo de melhoramento denominado retrocruzamento avanado
de QTLs (AB-QTL) (Tanksley & Nelson, 1996), utiliza-se a mesma populao
empregada para desenvolver o mapa gentico de uma espcie para
selecionar alelos positivos, monitorados pela informao de polimorfismo de
DNA, os quais foram introgredidos de uma espcie silvestre ou variedade
tradicional para uma linhagem-elite do programa de melhoramento. AB-QTL
baseia-se em modificaes de outro mtodo chamado IBL (inbred backcross
line) desenvolvido h mais de 40 anos (Wehrhahn & Allard, 1965), mas com a

124

Emprego de espcies silvestres no melhoramento gentico vegetal ...

grande vantagem de incorporar informao de mapa no processo de seleo


(Tanksley & Nelson, 1996). No mtodo IBL, uma linhagem-elite cruzada com
uma linhagem doadora de uma caracterstica quantitativa e retrocruzada
algumas vezes para a linhagem-elite recorrente, obtendo prognie de
retrocruzamento avanado. Em seguida, centenas de linhagens puras,
derivadas do retrocruzamento avanado, so obtidas por SSD (single seed
descent). Na prtica, observa-se que o mtodo tem potencial para separar as
linhagens puras em classes discretas, principalmente, se a caracterstica for
controlada por poucos QTLs, permitindo inferncias sobre o nmero e o efeito
de QTLs (Wehrahahn & Allard, 1965). IBL, portanto, baseado em seleo
fenotpica de linhagens puras obtidas ao acaso ou, ainda, do cruzamento
entre linhagens selecionadas que apresentam fentipo superior ao da
linhagem recorrente (Wehrahahn & Allard, 1965).
J a anlise AB-QTL baseia-se na informao de mapa e na magnitude
do efeito de alelos provenientes da linhagem doadora para selecionar
linhagens superiores linhagem recorrente (Tanksley & Nelson, 1996). A
seleo, portanto, baseada na localizao e no efeito de QTLs identificados
na gerao de mapeamento cujos alelos so provenientes do doador (Figura
2). Os produtos obtidos de um programa AB-QTL so linhagens quaseisognicas linhagem recorrente, com a vantagem de se ter identificado e
mapeado a regio do genoma introgredida do acesso doador.
Retrocruzamento avanado de QTLs (AB-QTL) baseia-se em duas ou
trs geraes de retrocruzamento a partir do cruzamento de uma linhagemelite com acesso silvestre. No processo, um mapa gentico para
caractersticas quantitativas de interesse gerado, e as linhagens so
avanadas com base em seleo de marcadores associados ao controle
gentico da caracterstica quantitativa sob estudo (Figura 2). O mtodo tem
sido aplicado com sucesso em diferentes espcies (Tabela 2), permitindo no
s a compreenso da base gentica de caractersticas quantitativas de
interesse econmico, como tambm o desenvolvimento de linhagens para
programas de melhoramento gentico.

125

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

O. sativa

BG 90-2

O. glumaepatula RS 16

F1

seleo

BG 90-2

RC1

Construo do mapa gentico

seleo
RC2

Mapeamento de QTLs

RC2F2

Fenotipagem

(...)
X

RC2F3

(...) seleo
X
RC2F7

Linhagens quase-isognicas

Figura 2. Esquema geral do mtodo de retrocruzamento avanado de QTLs (ABQTL), utilizado no desenvolvimento de linhagens de O. sativa com introgresso de
genes da espcie silvestre O. glumaepatula.

126

Emprego de espcies silvestres no melhoramento gentico vegetal ...

A abordagem AB-QTL possibilita:


(a) A utilizao em maior escala de recursos genticos (especialmente
espcies silvestres) do banco de germoplasma tambm na introgresso de
genes associados ao controle gentico de caractersticas quantitativas.
(b) A avaliao do efeito desses genes no background gentico da linhagemelite recorrente.
(c) A identificao dos segmentos genmicos introgredidos do genitor
doador ao longo dos cromossomos.
(d) A utilizao de gentipos grficos para selecionar linhagens com diferentes
composies de segmentos introgredidos.
(e) A seleo de linhagens quase-isognicas com introgresses que afetam
caractersticas quantitativas e a sua utilizao em rotina no programa de
melhoramento.
(f) A seleo negativa de plantas ainda em RC1 ou RC2 para caractersticas
deletrias advindas do doador silvestre (ex., deiscncia, arquitetura da
planta) sem prejuzo de outros QTLs de interesse (independentes). QTLs
deletrios por certo complicariam a anlise fenotpica nas geraes
avanadas de retrocruzamento.
(g) A obteno de linhagens quase-isognicas linhagem recorrente em
apenas uma gerao aps a deteco de QTL com alelos desejveis
advindos do doador, o que pode acelerar significativamente o programa
de melhoramento.
Uma importante conseqncia de um programa de AB-QTL a
possibilidade de combinar linhagens com diferentes segmentos genmicos
introgredidos de vrios doadores de uma caracterstica quantitativa para a
mesma linhagem recorrente. Para tanto, a informao de mapa do segmento
introgredido em cada linhagem serviria de base para seleo de
recombinantes de QTLs no allicos.

127

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Tabela 2. O mtodo AB-QTL vem sendo aplicado em diferentes espcies para o


mapeamento de locos associados ao controle de caractersticas quantitativas e
desenvolvimento de linhagens quase-isognicas linhagem-elite recorrente.

128

Cruzamento

Gerao
AB-QTL avaliada

Nmero de
caracterstica
avaliada

Referncia

Tomate (L. esculentum x L.


pimpinellifolium)
Tomate (L. esculentum x L.
peruvianum)
Tomate (L. esculentum x L.
hirsutum)
Tomate (avaliao de
linhagens quase-isognicas
de L. esculentum x
L. hirsutum
e pimpinellifolium)
Arroz (O. sativa x
O. rufipogon)
Tomate (L. esculentum x L.
parviflorum)
Arroz (O. sativa x
O. rufipogon)
Arroz (O. sativa x O.
glumaepatula)
Tomate (avaliao de
linhagens quase-isognicas
de L. esculentum x hirsutum,
peruvianum, pimpinellifolium
e parviflorum)
Milho (intra-especfico)
Arroz (O. sativa x
O. rufipogon)
Cevada (Hordeum vulgare x
H. vulgare spp. Spontaneum)
Arroz (O. sativa x
O. rufipogon)
Trigo (intra-especfico)
Pssego (Prunus persica x
P. davidiana
Tomate (L. esculentum x L.
pennellii)
Algodo (Gossypium
hirsutum x G. barbadense)
Cevada (Hordeum vulgare
x H. vulgare spp.
Spontaneum)

BC2F1 and BC3

21

Tanksley et al., 1996

BC2, BC3 e BC4

35

Fulton et al., 1997 a,b

BC3

19

vrias

Bernacchi et al.,
1998a
Bernacchi et al.,
1998b

BC2 testcross

12

Xiao et al., 1998

BC3

30

Fulton et al., 2000

BC2F2

Moncada et al., 2001

BC2F2

11

Brondani et al., 2002

vrias

16

Fulton et al., 2002

BC2 testcross
BC2F1

6
13

Ho et al., 2002
Thomason et al., 2003

BC2F2

13

Pillen et al., 2003

BC2F2

14

BC2F3
BC2

5
24

Septiningsih et al.,
2003
Huang et al., 2003
Quilot et al., 2004

BC2F1

84

Frary et al., 2004

BC3F2

Chee et al., 2005

BC2 dihaplide

3 (resistncia
a doenas)

Von Korff et al., 2005

Emprego de espcies silvestres no melhoramento gentico vegetal ...

O mtodo, por sua vez, no indicado para a deteco de QTLs


recessivos, provenientes do genoma doador, visto que baseado em
retrocruzamento avanado. Assim, o gentipo homozigoto para o alelo
doador no poderia ocorrer na populao de mapa (Tanksley & Nelson,
1996). Tampouco adequado para a deteco de QTLs com efeito episttico
se a populao de retrocruzamento utilizada para mapeamento for avanada.
AB-QTL tambm no indicado para espcies para as quais se tem
dificuldade de obteno de linhagens puras seja por depresso por
endogamia, seja por que o ciclo da espcie muito longo (ex. espcies
frutferas e arbreas). A obteno de linhagens puras importante para que
sejam possveis comparaes adequadas entre as linhagens quaseisognicas derivadas do mtodo com a linhagem recorrente. E por ser
baseado em ciclos de retrocruzamento avanado, demandando a obteno
de algumas geraes de recombinao e autofecundao, o mtodo
torna-se muito extenso para aproveitamento em espcies de ciclo longo.
Simulaes do mtodo AB-QTL indicam que, para detectar
eficientemente uma QTL associada caracterstica quantitativa de interesse
proveniente de um doador, o pesquisador dever utilizar maior nmero de
indivduos em geraes de retrocruzamento recentes (como RC2) ou um
nmero bem menor de indivduos em geraes de retrocruzamento mais
avanadas (ex. RC3). medida que a gerao de retrocruzamento se torna
mais avanada, no entanto, a capacidade de deteco de QTLs reduzida
(Tanksley & Nelson, 1996).
A transferncia desses alelos para linhagem-elite e o seu
monitoramento no genoma por meio de marcadores moleculares tem
permitido ao melhorista obter informaes e desenhar novas estratgias de
melhoramento (Tabela 2). Dessa forma, utilizando o conceito de gentipo
grfico, possvel certificar que a contribuio positiva para uma
caracterstica quantitativa advinda do alelo recebido do acesso silvestre e
no de novas combinaes apistticas de genes da linhagem-elite (Young &
Tanksley, 1989, Brondani et al., 2002).

129

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Emprego de anlise de retrocruzamento avanado de


QTLs no Brasil
As espcies silvestres de arroz vm sendo utilizadas nos programas de
melhoramento gentico tanto para a ampliao da base gentica das
populaes quanto para a transferncia de caractersticas especficas para as
variedades cultivadas. O uso desse germoplasma muitas vezes dificultado
devido ao fato de os cruzamentos com o arroz cultivado produzirem hbridos
com vrios nveis de esterilidade, alm de as prognies apresentarem uma
srie de caractersticas indesejveis. Do ponto de vista taxonmico, o gnero
Oryza dividido em quatro complexos: O. sativa, O. officinalis, O. ridleyi e O.
meyeriana (Buso et al., 2002). O complexo O. sativa consiste nas espcies com
o genoma diplide AA, incluindo as espcies cultivadas (Oryza sativa e O.
glaberrima) e seus parentes silvestres, como O. glumaepatula, encontrado no
Brasil (Buso et al., 2002). As espcies do complexo O. officinalis so diplides
com genomas BB, CC, EE ou FF e tetraplides com genomas BBCC ou
CCDD, incluindo trs espcies tetraplides de genoma CCDD que ocorrem no
Brasil: O. latifolia, O. alta e O. grandiglumis, embora haja evidncia de que se
trata da mesma espcie (Buso et al., 2002). Os complexos O. ridleyi e O.
meyeriana so ainda pouco estudados e, aparentemente, incluem as espcies
mais divergentes dos outros complexos. Das espcies silvestres de arroz que
ocorrem no Brasil, a Oryza glumaepatula por ser autgama, diplide e possuir
genoma AA semelhante ao da espcie cultivada Oryza sativa a que apresenta
maior potencial de uso no melhoramento gentico (Buso et al., 1998, 2002;
Brondani et al., 2002). Um exemplo de aplicao do mtodo AB-QTL
descrito a seguir (Brondani, 2000; Brondani et al., 2002), focalizado na
introgresso de genes associados ao controle gentico de produtividade de
O. glumaepatula para uma linhagem-elite de O. sativa. Para tanto, os seguintes
passos foram seguidos (Figura 2):
1. Seleo de uma planta do acesso de Oryza glumaepatula RS-16 (Buso
et al., 1998) oriunda de uma populao coletada no Rio Solimes,
Amaznia a qual foi cruzada com a linhagem-elite BG 90-2 de O. sativa.
Essa uma das mais produtivas linhagens de arroz irrigado do programa

130

Emprego de espcies silvestres no melhoramento gentico vegetal ...

de melhoramento de arroz da Embrapa e foi por essa razo selecionada.


Assim, a obteno de linhagens quase-isognicas mais produtivas que
BG 90-2 por AB-QTL, por meio da seleo de alelos advindos de
O. glumaepatula, poderia demonstrar a eficcia do mtodo.
2. Obteno de plantas hbridas F1 de cruzamento interespecfico. A natureza
hbrida das plantas foi confirmada por marcadores RAPD (Random Amplified
Polymorphic DNA e SSR (Simple Sequence Repeats) (Cavalheiro et al., 1996).
3. Retrocruzamento de uma das plantas F1 com BG 90-2.
4. Obteno de uma prognie de cerca de 300 plantas RC1F1. Desse total,
aproximadamente 100 indivduos foram selecionados para a construo de
um mapa gentico (Brondani et al., 2001). Um total de 256 plantas RC1F1
remanescentes, com caractersticas fenotpicas favorveis (arquitetura,
indeiscncia, ciclo) foi retrocruzado novamente com BG 90-2, obtendo-se
a gerao RC2F1 .
5. As plantas RC2F1 sofreram novamente seleo negativa para
caractersticas deletrias e 93 plantas foram autofecundadas para produzir
sementes RC2F2.
6. Noventa e seis famlias RC2F2, os dois parentais (BG 90-2 e RS-16) e a
cultivar comercial BR-IRGA 409 (controle) foram avaliadas no campo em
ensaios multilocais replicados. As caractersticas avaliadas foram: dias at
o florescimento; altura da planta; nmero de perfilhos; nmero de
panculas; comprimento da pancula; espiguetas por pancula;
porcentagem de gros cheios por pancula; peso de 100 gros;
produtividade por planta; nmero de gros cheios por pancula;
produtividade de gros por pancula.
7. A deteco de QTLs de produtividade foi desenvolvida utilizando os dados
fenotpicos coletados de RC2F2 e as informaes do mapa gentico
(Brondani et al., 2002).
8. Com base no mapa gentico, nas anlises de QTLs e nos dados
fenotpicos, foram selecionadas famlias RC2F2 que foram colhidas em bulk

131

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

(RC2F3) e avanadas para RC2F4 (Figura 2). As famlias RC2F4 mais as


testemunhas (incluindo BG 90-2) foram avaliadas no campo.
9. Linhagens selecionadas em RC2F2 foram avaliadas ainda em RC2F4 e
RC2F7.
Os resultados da anlise AB-QTL possibilitaram dissecar o controle
gentico de produtividade de gros no cruzamento O. sativa x O. glumaepatula
(Brondani, 2000; Brondani et al., 2002). O percentual de genoma de O.
glumaepatula (no estado heterozigoto) na gerao RC2F1, por exemplo,
variou de 0,0% a 26,0%, com mdia de 6,3%, em contraste com um esperado
de 12,5%. Os dados permitiram identificar 22 linhagens RC2F2 que
apresentavam 0,0% do genoma de O. glumaepatula. Essas linhagens so,
portanto, quase-isognicas a BG 90-2. No foi possvel identificar segmentos
do genoma de O. glumaepatula nelas com a estringncia permitida na anlise
(um marcador a cada 10 cM em mdia nos 12 cromossomos de arroz).
Entre as 22 linhagens, oito quase-isognicas a BG 90-2, denominadas
CNAi 9930, CNAi 9931, CNAi 9932, CNAi 9933, CNAi 9934, CNAi 9935, CNAi
9936 e CNAi 9937 foram avaliadas nas geraes RC2F2, RC2F4, RC2F7
(Tabela 3). Em RC2F7, foram tambm coletados dados de cultivo principal
(primeira colheita) e soca (colheita da rebrotao aps a primeira colheita) de
cada uma das linhagens quase-isognicas, sem que houvesse necessidade de
novo preparo de solo e semeadura (Figura 3a). A possibilidade de fazer duas
colheitas do mesmo plantio, uma do cultivo principal e outra da soca,
representa uma mudana no modo de produo de arroz, j adotada em
outros pases como os Estados Unidos. As oito linhagens quase-isognicas
no apresentaram segmentos cromossmicos da espcie silvestre detectveis
com o nvel de saturao do mapa de ligao utilizado no estudo (1 marcador
a cada 10 cM), mas se mostraram transgressivas para produtividade de gros
em relao testemunha BG 90-2.
Os componentes de produtividade nmero de panculas (PNR) e
perfilhamento (TNR) tiveram famlias transgressivas significativamente
superiores a BG 90-2. Na segregao transgressiva, os recombinantes
apresentam fentipo superior ao dos genitores. Invariavelmente, os alelos que

132

Emprego de espcies silvestres no melhoramento gentico vegetal ...

contriburam para um aumento de TNR e PNR eram provenientes de O.


glumaepatula. Perfilhamento e nmero de panculas so caractersticas que
alteram a arquitetura da planta. Se uma pancula produzida para cada novo
perfilho, ento a produtividade pode ser positivamente incrementada pela
ao combinada dos genes que controlam TNR e PNR.
Uma das famlias RC2F2 (CNAi 9920) apresentou aumento de 145,8% no
nmero de panculas por planta em relao linhagem elite BG 90-2. CNAi
9920 possui 12,6% do genoma de O. glumaepatula e supera BG 90-2 em TNR
tambm. Por sua vez, o comprimento de pancula de CNAi 9920 foi o menor
entre todas as 96 famlias testadas. interessante observar que a caracterstica
PNR negativamente correlacionada com comprimento de pancula
(Brondani et al., 2002). O loco marcador RM223 (cromossomo 8) est
significativamente correlacionado com o controle de PNR.

Figura 3. Alterao de arquitetura de linhagem quase-isognica derivada do


cruzamento entre O. sativa BG 90-2 e O. glumaepatula RS 16 atravs de AB-QTL. (a)
Linhagem com alto perfilhamento, conferindo planta maior competitividade no
estande inicial, e a possibilidade de efetuar duas colheitas a partir de um mesmo
plantio (plantio principal + soca). (b) Linhagem quase-isognica CNAi 9930, uma
das mais promissoras do programa AB-QTL, reunindo um bom nmero de
caractersticas interessantes para o programa de melhoramento gentico.

A observao dos dados de produtividade nas geraes RC2F2,


RC2F4 e RC2F7 e dos dados do cultivo principal e da soca, alm dos dados
de qualidade de gros (Tabela 3), permitiu concluir que as linhagens-elite de O.
sativa com introgresso de genes da espcie silvestre O. glumaepatula, CNAi

133

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

9937, CNAi 9935, CNAi 9931, CNAi 9936, CNAi 9934, CNAi 9930, CNAi 9933,
CNAi 9932 podem ser utilizadas imediatamente como genitores no programa
de melhoramento de arroz irrigado. Essas linhagens apresentam produtividade
to boa quanto uma das linhagens mais produtivas da Embrapa e superam a
Metica 1, uma variedade comercial de grande impacto na rizicultura nacional.
A linhagem CNAi 9930, especialmente, destacou-se das demais por reunir
maior nmero de caractersticas agronmicas favorveis, apresentando
caractersticas adequadas para seu lanamento como cultivar comercial
(Figura 3b).

Concluso
O emprego de anlise de retrocruzamento avanado de QTLs (AB-QTL)
ainda incipiente, mesmo em espcies mais estudadas como o tomate e o
arroz. Os resultados obtidos at agora indicam, no entanto, que a estratgia
uma promissora combinao da fora de um mtodo de melhoramento
clssico como o retrocruzamento com o monitoramento de polimorfismo
molecular por meio da anlise de DNA. Esse mtodo de melhoramento
singular permite que a mesma populao de mapa seja utilizada para fins de
seleo, tendo como base o monitoramento de QTLs de interesse econmico
advindos do doador (espcie silvestre) e introgredidos na linhagem elite
recorrente. Linhagens avanadas quase-isognicas, apresentando alelos
favorveis do doador silvestre em QTLs de produtividade, por exemplo, foram
desenvolvidas para diferentes espcies. Algumas dessas linhagens, como as
desenvolvidas para arroz no Brasil, participam de ensaios de competio
varietal com material avanado dos programas de melhoramento. Dada a
rapidez e a eficincia dos programas baseados em anlise de retrocruzamento
avanado de QTLs (cerca de dois anos para espcies anuais) e com a
capacidade de genotipagem em escala hoje existente nos laboratrios, a
experimentao desse mtodo de melhoramento gentico deve ser mais
difundida, visando ao maior ganho gentico para caracteres quantitativos e,
ao mesmo tempo, ampliao da base gentica dos programas de
melhoramento.

134

Nome da
linhagem

RC2F2

RC2F4

RC2F7

SOMA
CP
(CP+SOCA)

BG 90-2
CNAi 9930
METICA 1
CNAi 9931
CNAi 9932
CNAi 9933
CNAi 9934
CNAi 9935
CNAi 9936
CNAi 9937

8118 a
10413 a
9967 a
9940 a
9823 a
9757 a
9754 a
9660 a
9084 a

9828 a
9839 a
9531 a
9244 a
8440 b
9672 a
9643 a
10177 a
10256 a

8781
9083
8802
9292
7667
8271
9135
9031
8365
9063

11854 a
12010 a
9822 b
12197 a
10968 a
11593 a
12052 a
12875 a
12281 a
12197 a

a
a
a
a
b
a
a
a
a
a

8781
9083
8802
9292
7667
8271
9135
9031
8365
9063

a
a
a
a
b
a
a
a
a
a

SOCA

TNR PNR CP

3073
2927
1021
2906
3302
3323
2917
3844
3917
3135

408
421
425
488
400
472
430
515
463
404

a
a
c
a
a
a
a
a
a
a

406
419
419
485
395
464
420
511
456
399

INT
58
65
68
55
52
65
42
68
57
53

TOT
73
73
73
73
73
73
73
74
73
73

SOCA

CP

INT
54
50
55
49
49
52
51
46
49
46

TA
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A

TOT
72
69
69
70
71
71
70
71
70
69

TG
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A

CB
4
4
3
4
4
4
4
4
4
4

CLA
LE
LE
LF
LE
LE
LE
LE
LE
LE
LE

C
LP
S
LP
LP
LP
LP
LP
LP
P
LP

TX
D
M
D
M
D
D
M
D
D
D

R%
250
250
250
250
250
275
233
250
225
250

TC
26
25
25
21
23
25
24
16
15
23

Emprego de espcies silvestres no melhoramento gentico vegetal ...

Tabela 3. Produtividade mdia de linhagens quase-isognicas linhagem recorrente BG 90-2, derivadas de programa AB-QTL
baseado no cruzamento O. sativa BG 90-2 x O. glumaepatula IR-16. Dados de produtividade coletados nas geraes RC2F2,
RC2F4 e RC2F7. Foram coletados ainda dados produtividade mdia de gros em kg/ha da soma do cultivo principal (CP) mais
a soca e isoladamente (CP e SOCA), nmero de perfilhos (PER), panculas (PAN), e dados em porcentagem de rendimento de
gros inteiros (INT) e total (TOT) do cultivo principal (CP) e da soca, teor de amilose (TA), temperatura de gelatinizao (TG),
centro branco (CB), classe dos gros (CLA), coesividade (C) textura (TX), rendimento de panela (R) e tempo de cozimento (TC)
em minutos das linhagens avaliadas.

135

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

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VON KORFF, M.; WANG, H.; LE, J.; PILLEN, K. AB-QTL analysis in spring barley. I.
Detection of resistance genes against powdery mildew, leaf rust and scald introgressed
from wild barley. Theor. Appl. Genet., v. 111, p. 583-590, 2005.

140

Desde o verde Brasil tropical


Prosperou bela flor secular.
Cuja espcie ousou propagar
Acudindo ao reino animal.
Vive aonde piou o inhambu
Na floresta serrana de Minas.
E ao norte, em selvagens colinas,
Nas paragens do Uirapuru.

Geovane Alves de Andrade

Espcies de maracuj com potencial


agronmico
Joo Carlos de Oliveira
Carlos Ruggiero

Intr
oduo
Introduo

mais de quinhentas e oitenta espcies de maracujazeiros,


sendo a maioria com centro de origem na Amrica Tropical e
Subtropical e, principalmente, nativa do Brasil. Apesar do
excelente trabalho descritivo de Killip, 1938, Hoene, 1946, Sacco, 1980, Cervi,
1986, agronomicamente, so conhecidas apenas algumas espcies.
Neste Captulo, prope-se tecer comentrios sobre algumas espcies
existentes no Banco Ativo de Germoplasma (BAG) da UNESP - Campus de
Jaboticabal - que tem recebido apoio constante da Embrapa Recursos
Genticos e Biotecnologia Instituto de Gentica da ESALQ-USP, Instituto
Agronmico em Campinas, Instituto Agronmico do Paran, da Embrapa
Mandioca e Fruticultura Tropical, EPAMIG, Universidade Estadual do Sudoeste
da Bahia. H, ainda, muitos colaboradores que enriqueceram o germoplasma
dessa Passiflora e ajudaram a conhec-lo via projetos de pesquisa ou mesmo
utilizando-o como porta-enxerto ou planta ornamental. Outros, determinando
a fonte de genes ou, ainda, divulgando as qualidades desse gnero como
fonte de frutos, para consumo ao natural, na forma de refresco, suco,
compota, gelia, sorvete, doce.
Passiflora edulis Sims e Passiflora edulis Sims f. flavicarpa Deg,
maracuj-roxo e maracuj-amarelo respectivamente. Na opinio dos autores,
trata-se da mesma espcie de maracujazeiro, pois descendentes hbridos

143

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

entre as duas formas so frteis e normais. O maracuj de casca roxa e o de


casca amarela ocorrem em boa parte do Brasil, ainda, so encontradas formas
silvestres, em margens de leito de rio, em grotes e em locais no
desmatados. Algumas formas so to definidas que podem ser caracterizadas
pelo aroma e pelo gosto do suco. Recentemente, incorporou-se ao BAG uma
amostra proveniente de Torres, litoral sul de Santa Catarina; praticamente
Passiflora edulis, casca roxa ou casca amarela, ocorre em todo o litoral
brasileiro. No litoral norte de So Paulo, o fruto bastante apreciado e
consumido pelos caiaras.
A abertura da flor do maracuj-roxo brasileiro ocorre no perodo da
tarde, semelhante ao maracuj-amarelo, entretanto, algumas formas silvestres
apresentam a abertura da flor ligeiramente antes, aps as 10h30. A antese das
flores de hbridos de maracuj-roxo com o maracuj-amarelo sempre ocorreu
depois das 11 horas.
O maracuj roxinho do Kenia comercializado na Europa como fruta
fresca. Esse material apresenta gosto, aroma e acidez diferenciados dos
roxinhos ou dos maracujs-amarelos brasileiros. A abertura da flor do roxinho
do Kenia ocorre de manh, permanecendo aberta o dia todo, o que difere de
relatos encontrados na literatura de que a flor se abre e fica aberta pelo
perodo da manh. Os frutos desse gentipo apresentam boas caractersticas
organolpticas, entretanto, o maracujazeiro muito suscetvel s doenas do
maracuj-amarelo, sendo bastante difcil sua manuteno no BAG.

Passiflora nitida HBK


Baseada nas descries de Killip (1938), Sacco (1980) e Vanderplank
(1991), P. nitida HBK, conhecida no Brasil como maracuj-do-mato ou
maracuj-suspiro, uma espcie do subgnero Passiflora, srie Laurifolia.
Caracteriza-se por ser uma trepadeira, como todas as espcies do gnero,
munida de gavinha, com caule cilndrico. As folhas so ovado-oblongas e
brilhantes em ambas as faces, medem de 9 a 17 cm de comprimento por 6 a
10 cm de largura, exibem estpulas linear-subuladas e apresentam duas
glndulas peciolares junto base da lmina. As flores so grandes e vistosas,

144

Espcies de maracuj com potencial agronmico

de cor branca e azul-prpura, com 9 a 11 cm de largura; possuem 3 brcteas


foliceas de 3 a 4 cm, spalas oblongas, verde-plidas, ptalas estreitas e
brancas; coroa com vrios vrtices de filetes, os dois extremos tendo os filetes
roxos, com faixas brancas na metade inferior. O fruto, uma baga globosa ou
ovide, mede cerca de 8 cm de altura e 3 a 7 cm de dimetro; casca
externamente amarelo-alaranjada, internamente branca, cerca de 1,5 cm de
espessura e essencialmente esponjoso. As sementes so achatadas,
codiformes, com 0,6 cm de comprimento por 0,4 cm de largura, so
tridentadas no pice e reticuladas no centro; arilo sucoso, transparente e
adocicado.

Origem, ecologia e adaptao de P. nitida


Nativo das terras baixas do trpico mido da Amrica do Sul, P. nitida
HBK parece estar adaptado ao clima tropical e a solos cidos da Amaznia,
mas em zonas onde h perodos secos bem definidos (Villachica, 1996).
Cavalcante (1976, 1991) relata que o maracuj-suspiro uma espcie
silvestre, comestvel, dos mais comuns, distribudo por toda regio Norte da
Amrica do Sul, tendo por habitat ideal as capoeiras ou vegetao baixa de
estradas ou qualquer outro local mais ou menos sombreado, com suficiente
luz solar.
A espcie no encontrada dentro da mata, nem vegetando
naturalmente a pleno sol. Observaes feitas em Manaus, AM mostram que a
espcie pode ser conduzida a pleno sol, da mesma maneira que o maracujamarelo (Hidalgo & Taveira, 1996).

Biologia floral e formao dos frutos


Pouco se conhece da botnica, fisiologia, aspectos agronmicos,
comercializao e industrializao de P. nitida, entretanto, existe tecnologia de
espcies afins como o maracuj-amarelo que pode ser utilizada como
referncia para sua utilizao (Villachica, 1996).

145

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Dentro do gnero Passiflora, as espcies apresentam diferenas quanto


biologia floral, at mesmo entre plantas da mesma espcie. Essas
caractersticas sofrem inclusive grande influncia das condies climticas do
local de cultivo (Gonzales, 1996).
Alguns resultados sobre P. nitida mostraram o comportamento dessa
espcie em diferentes locais. Menezes et al. (1994) verificaram abundante
florescimento nas condies de Jaboticabal, SP nos meses de outubro a abril.
Oliveira (1996) observou em So Jos do Rio Preto, SP que as plantas do
maracuj-suspiro floresceram mais intensamente no primeiro ano em janeiro e
fevereiro e no ano seguinte em maro. Vrios picos de florao foram
observados durante os dois anos consecutivos cuja produo de flores
ocorreu em perodos curtos (dois ou trs dias) e numerosas vezes durante o
ano.
Villachica (1996) avaliou, no Peru, plantas que floresceram de sete a oito
meses do plantio, enquanto Oliveira (1996) constatou o incio da florao de
plantas em So Jos do Rio Preto, SP cerca de vinte meses depois do plantio
definitivo.
Menezes (1990) observou que as flores do maracuj-suspiro abrem-se
no perodo da manh e no apresentam diferenas nas curvaturas dos
estigmas, fenmeno encontrado em outras espcies como em P. edulis que
apresenta, segundo Ruggiero (1973), flores com trs tipos de curvatura (TC totalmente curvas, PC - parcialmente curvas e SC - sem curvaturas).
Pereira et al. (1997), Pereira (1998) verificaram, nas condies de
Jaboticabal, SP que o florescimento de maracuj-suspiro ocorre de outubro a
fevereiro, com pico em dezembro e janeiro. No ms de maio, tambm ocorre
pequena florada de outono. A frutificao natural foi de 93,7% no inverno e
71,7% no vero. Na polinizao cruzada artificial, a frutificao foi 100%. Na
mesma rea, Ballaris (1996), trabalhando com maracuj-amarelo, obteve 68%
de frutificao com polinizao natural, concluindo que, em virtude da
eficincia da polinizao natural feita pelas mamangavas foi possvel dispensar
a polinizao artificial.

146

Espcies de maracuj com potencial agronmico

A frutificao no estudo de autocompatibilidade por meio da


polinizao natural foi zero, enquanto na autopolinizao artificial foi de
24,4%, mostrando que a espcie apresenta boa taxa de autocompatibilidade
quando comparada a outras passiflorceas. No estudo da incompatibilidade
cruzada, ocorreram diferentes graus de incompatibilidade entre as plantas.
Pereira (1998) verificou, ainda, que as flores iniciaram a abertura nas
primeiras horas da manh permanecendo assim at cerca das 20 horas do
mesmo dia, no mais abrindo no dia seguinte. Os frutos, oriundos da florada
primavera-vero, demoraram cerca de 60 a 70 dias da antese da flor at o
amadurecimento, e os frutos da florada de outono, cerca de 80 a 90 dias.

Aspectos gerais e histrico


Frutos

dessa

espcie

so

comumente

encontrados

para

comercializao em mercados, feiras livres, quitandas, vendedores


ambulantes ocasionais, em Belm do Par, Manaus e outras localidades do
Norte. Os frutos so colhidos de maracujazeiros silvestres, atividade
extrativista.
Em 1983, o Banco Ativo de Germoplasma de maracujazeiros, sediado
em Jaboticabal, SP recebeu sementes dessa espcie com a participao
decisiva do Engenheiro Agrnomo Charles Clement (Tcnico do INPA).
Posteriormente, recebeu outras amostras, mas com apenas duas conseguiu-se
viabilizar a manuteno as quais prosperaram e tem sido objeto de pesquisa.

Reproduo via sementes


As sementes de Passiflora nitida so preparadas semelhana das
demais espcies de maracujazeiro, ou seja, retirada do arilo por fermentao
natural ou artificial, retirada mecnica com o uso do liqidificador domstico,
uso de cal virgem ou cal hidratada. Melo (1997, 1999) verificou que a
germinao de sementes obtidas pela retirada do arilo com auxlio de
liqidificador foi ligeiramente superior da fermentao natural. As sementes

147

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

com arilo recm-retirado dos frutos so colocadas no liqidificador e d-se


apenas de 2 a 3 ligadas/desligadas do aparelho. Devem-se preferir aparelhos
de baixa rotao e colocar proteo nas lminas, como capa de fio eltrico,
esparadrapo ou fita adesiva para no danificar as sementes. Posteriormente,
colocam-se as sementes sobre peneira nmero 18 (peneira de arroz) e
completa-se a retirada do arilo e do suco, com lavagem drstica. As sementes
lavadas so colocadas sobre papel absorvente (jornal) e postas para secar
sombra. Na retirada do arilo pela fermentao natural, a polpa da fruta (suco +
sementes) colocada em vasilha de vidro ou porcelana, podendo ficar em
fermentao at sete dias. Constatada a decomposio da goma ou
mucilagem, as sementes so lavadas com gua corrente e postas a secar.
Melo (1999), avaliando o tempo, o local de armazenamento e o tipo de
embalagem verificou que sementes recm-colhidas, independente do mtodo
da retirada do arilo, apresentavam baixa germinao, menos de 1%, com
sementes armazenadas h quatro meses, a germinao subiu para 25%,
armazenadas h nove meses, a germinao subiu para 60%; e h treze meses
praticamente no mais germinou. O tipo de recipiente (papel, vidro) e o local
de armazenamento (meio ambiente, cmara seca e cmara fria) no
influenciaram na taxa de germinao. Numa amostra de sementes posta para
germinar, esse autor observou as primeiras emergncias depois de 50 dias,
prolongando-se por mais de 100 dias, temperatura alternada de 30/23 oC.

Reproduo por estaquia


Pereira et al. (1998), Melo (1999) conseguiram bons resultados na
obteno de mudas por estaquia de ramos primaveris e com duas meias
folhas, em cmara de nebulizao. Comparadas a mudas oriundas de
sementes, a muda obtida por estaquia foi mais precoce no florescimento e na
frutificao. Comparado ao maracuj-amarelo, o desenvolvimento vegetativo
do maracuj-suspiro bastante lento, fato tambm observado por Menezes
et al. (1994).
Pereira (1998), acompanhando um lote experimental de P. nitida, plantio
no espaamento de 3 m entre ruas, com moires de sustentao de 6 em 6 m,

148

Espcies de maracuj com potencial agronmico

sendo: vo com uma muda e vo com duas mudas, observou que as plantas
mostraram-se bastante vigorosas, mesmo no inverno com completa ausncia
de irrigao suplementar. A verrugose constituiu-se na principal doena
observada na espcie. A produo mdia da populao de plantas avaliadas
foi de 17 kg de frutos/planta, variando de 2 kg a 45 kg/planta. No vero, os
frutos apresentaram mdias de peso, altura, dimetro e perodo de frutificao
menores do que no inverno.
Os frutos podem ser colhidos no estgio maduro ou de vez, mas,
quanto ao sabor, aqueles colhidos maduros so superiores aos amadurecidos
ps-colheita. Mesmo maduro, o fruto fica preso planta-me at 120 dias.
Essa caracterstica facilita a colheita e a distribuio, pois permite sincronizar a
colheita com o consumo. Frutos armazenados em condies ambientais
perdem peso rapidamente. Frutos armazenados em cmara fria e sem
embalagem, conservaram-se bem at o oitavo dia depois da colheita. Quando
se utilizou embalagem, o recipiente plstico, associado refrigerao,
proporcionou menor perda de peso aos frutos maduros e de vez, alm de
mant-los hidratados e com brilho, polpa normal, contedo de slidos
solveis totais entre 15 e 16 Brix e acidez entre 1,02 g e 1,76 g de cido ctrico/
100 g de suco e cor da casca sem evoluo, at 22 dias de armazenamento.
Frutos maduros e selecionados quanto aparncia foram fornecidos
creche (crianas de 2 a 6 anos de idade), a estudantes do Ensino Fundamental
de escola municipal, a asilo de idosos, jantares e almoos festivos, restaurante
universitrio freqentado por alunos de Ensino Mdio e Superior e a
funcionrios. Fez-se tambm ensacamento de frutos em sacola plstica
rendada com 20 e 25 frutos por recipiente e colocados venda em banca de
mercado de produtor. Considerando as opinies e as sugestes quanto ao
tamanho do fruto e ao sabor, conclui-se que ele foi bem-aceito, despertando
no consumidor o interesse de cultivar algumas plantas dessa espcie,
utilizando cercas divisrias, caramanches ou mesmo outras plantas arbreas
como tutor.
Essa espcie de maracujazeiro apresenta grande potencial para ser
usada tanto em cultura para produo de frutos quanto como trepadeira

149

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

ornamental ou, ainda, como material gentico para trabalhos de transferncia


de genes e como porta-enxerto.

Passiflora cincinnata MAST


Passiflora cincinnata MAST uma espcie polimorfa muito varivel. Das
introdues efetuadas s foi em menor nmero que P. edulis, tm-se frutos
grandes (80 g), frutos pequenos (40 a 50 g), variao no colorido da flor, cor e
gosto do suco. Na regio norte do Estado de So Paulo, ocorre
espontaneamente, seu uso para consumo no difundido, provavelmente,
porque o gosto do suco dessa variao regional no seja atraente. Na regio
de Vitria da Conquista, BA, tambm nativo e visto margeando a rodovia
Rio-Bahia (BR 116) onde se destaca pelo colorido de suas flores. muito
confundido com P. caerulea. Dentro dos acessos de P. cincinnata, tm-se
plantas vigorosas, flores grandes que se impem pela beleza e colorido vivo,
em outros acessos, a folhagem e as flores no apresentam tanto brilho.
P. cincinnata MAST uma trepadeira, em geral, inteiramente glabra,
raramente aveludada-pilosa, caule cilndrico ou subangular. As folhas so
simples, 3 a 5 palmatipartidas, verde-escuras na fase adaxial, plidas na fase
abaxial; com 8 cm de comprimento e 8 a 10 cm de largura, pecolos com 1,5 a
5,0 cm de comprimento, 2 a 3 glndulas, glndulas ssseis com cerca de 0,2 cm
de dimetro. Flores cor-de-rosa plido violeta e violeta azul, de 7,0 a 12 cm de
dimetro, pednculos de 2,0 a 8,5 cm de comprimento, com spalas oblongolanceoladas, com 5,0 cm de comprimento. Os filamentos da coroa possuem de
2,0 a 4,0 cm de comprimento; na parte mais baixa, apresentam colorao
prpura carregada, banda mdia azul-rosado e azul-plido. Os frutos so
ovides ou oblongos, 5,0 cm de comprimento e 3,0 cm de largura. As sementes
so ovais, com 0,5 a 0,6 cm de comprimento e 0,4 cm de largura.
Essa espcie recebe nomes populares regionais como: maracuj
(Santa Catarina, Mato Grosso, Minas Gerais, Pernambuco) maracuj-mochila
(Alagoas, Paraba), maracuj-do-mato (So Paulo, Paraba) e outros como:
maracuj-tubaro, maracuj-brabo, maracuj-de-casca-verde.

150

Espcies de maracuj com potencial agronmico

Biologia floral e aspectos agronmicos


Gonzlez (1996) acompanhou o desenvolvimento de dois acessos de P.
cincinnata. O primeiro foi introduzido na Flrida, EUA em 1983, com a
participao da Embrapa Recursos Genticos e Biotecnologia. Esse material
conhecido como maracuj-cincinnata. As plantas so rsticas e vigorosas,
apresentando tolerncia a nematides (Meloidogyne sp.) e bacteriose
(Xanthomonas campestris pv. passiflorae). Os frutos so arredondados, com
suco de gosto caracterstico e de bom sabor.
O outro acesso foi introduzido em dezembro de 1993, proveniente da
cidade de Correntes, PI. Conforme o engenheiro agrnomo J. Pessoa Neto
(COPAGRO-EMATER, PIAUI), esse maracuj recebe o nome popular de maracuj-nativo e ou maracuj-de-porco cujas plantas tm um comportamento
rstico, com longevidade em torno de cinco anos. A safra anual, ocorrendo
no perodo de julho a outubro, produzindo frutos de porte pequeno, oval e
suco bastante cido, porm, de boa aceitao no mercado local.
Exemplares desses dois acessos foram plantados em local definitivo em
setembro de 1994, iniciando, em dezembro, o florescimento; o pico da florada
ocorreu nos meses de fevereiro e maro, idntico ao observado por Oliveira
(1996) para o florescimento dessa espcie em So Jos do Rio Preto, SP.
O tempo entre o aparecimento do boto floral at a antese da flor foi de
20 a 24 dias, sendo que, no vero, (14/02 a 06/03/95) 93% dos botes
chegaram a florescer e, no outono, variou de 35% a 60%. Nenhuma se formou
depois de 20 de maio de 1995 at o outro ano agrcola. A no-formao
normal de flores est relacionada luminosidade (11h30) e poca mais fria
do ano. A abertura da flor iniciou-se por volta das sete horas, demorando em
mdia 10,57 minutos para total abertura e de 36,52 minutos para ocorrer a
total curvatura dos estiletes.
O mecanismo de abertura das flores de P. cincinnata semelhante ao
descrito por Vasconcellos (1991) para a P. alata, sendo que na pr-antese o
boto floral apresenta visvel parte do pice das ptalas; no incio da abertura,

151

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

ocorre a separao das ptalas foradas pela expanso dos filamentos da


coroa. Antes de a flor ter as spalas, as ptalas e a coroa totalmente
estendidas, as anteras do um giro de 180o e expem os microgametfitos,
enquanto, na maioria das vezes, os estigmas s iniciam seu movimento
quando a flor est quase totalmente estendida (aberta). Quando as flores
fecham, a coroa, as ptalas e as spalas voltam a posio inicial, ficando a flor,
logo no incio do fechamento, com aspecto de sino.
Quanto ao tipo de flor, essa espcie semelhante ao maracuj-amarelo,
ou seja, tambm apresenta tipos de flores e, em mdia, observou-se 43,4% de
flores TC, 39,3% tipo PC e 17,3% tipo SC para acesso Cincinnata e 54,2% de
tipo TC, 42,5% PC e 3,2% SC, para o acesso Correntes, PI.
Quanto ao desenvolvimento do fruto depois da antese, foi verificado
que o tempo necessrio da antese colheita foi de 230 a 371 dias, dos frutos
marcados, a maioria caiu da planta nos meses de outubro e novembro. H um
aspecto importante a mencionar no que diz respeito maturao dos frutos
dessa espcie, os ramos que os sustentaram comearam o processo de
secagem (morte do ramo) no final de julho de 1995, aproximadamente 160
dias depois da antese. Oliveira (1996) observou que os frutos produzidos num
perodo de florescimento permaneceram nas plantas at a prxima florao.
Quanto ao crescimento do fruto, observou-se que 24 dias depois da antese,
praticamente o fruto atinge 90% do seu tamanho e aos 87 dias completa seu
tamanho definitivo.
O desenvolvimento e a maturao de frutas de P. cincinnata so bem
mais demorados que de P. edulis, sendo que a maturao do fruto ocorre a
aproximadamente 71 dias em Jaboticabal, SP (Vallini et al., 1976), 57 na Ilha
Solteira, SP (Bianco et al., 1982) e 77 dias em Botucatu, SP (Urashima &
Cereda, 1989). A colorao da casca do fruto verde-palha, sem brilho;
algumas vezes a casca fica amarelada, com consistncia deformvel, mas o
fruto exala aroma agradvel, tpico da espcie.
Na avaliao da compatibilidade, verificou-se que a taxa de frutificao
foi nula quando se fez autofecundao controlada. Com polinizao manual, a

152

Espcies de maracuj com potencial agronmico

frutificao foi ligeiramente superior efetuada por insetos. A taxa de


frutificao natural foi em mdia de 50%. Oliveira & Coleman, 1994 observaram
taxa de frutificao natural para a espcie de 13,7%.
As caractersticas dos frutos e do suco encontram-se na Tabela 1.
Tabela 1. Caractersticas de frutos de P. cincinnata e P. edulis Sims f. flavicarpa Deg,
P. nitida e P. setacea.
P.

P.

Caractersticas

Cincinnata

P. cincinnata
Nativo

Populao 1

P. edulis
Populao 2

nitida

setacea

Peso do fruto (g)

85,26

83,95

91,3

> 170,00

35,80

50,60

Altura do fruto (cm)

5,5

5,96

6,53

8,15

5,60

5,30

Dimetro do fruto (cm)

5,78

5,47

6,36

7,1

4,40

3,80

2,0 a 4,0

6 - 8,4

3,00

Espessura da casca (mm)


Nmero sementes/fruto

273

287

370

106

240

% rendimento em suco p/p

49,7

42,3

23 - 37

51

38,70

Slidos solveis totais oBrix

10,3

10,70

13 - 18

15

15 - 16

16

Acidez total titulvel em %

3,40

4,01

4,0 - 5,9

1,02 - 1,76

3,90

Em testes preliminares de degustao, alguns provadores indicaram


que o sabor do suco diludo e adoado lembra, em parte, o suco de
carambola, outros mencionaram que o sabor era mais parecido ao da
graviola, concordando todos que o sabor difere do gosto do suco do
maracuj-amarelo. Na preparao do suco, a diluio da polpa sem as
sementes foi de 1:4, enquanto para o maracuj-amarelo, recomenda-se em
mdia 1:8 - volume do suco integral/volume de gua.
O suco dos frutos dessa espcie de passiflora comumente servido em
hotis de Vitria da Conquista, BA. Em visita ao mercado municipal de Cruz
das Almas, teve-se oportunidade de ver o comrcio desse material. Os frutos
estavam acondicionados em sacos de aniagem ou semelhante, vendido a
granel. Na anlise visual do fruto, observou-se muita heterogeneidade quanto
ao tamanho, formato, maturao. A durabilidade da fruta bastante longa
quando comparada do maracuj-amarelo e tambm muito resistente ao
transporte e ao manuseio.

153

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Passiflora setacea D.C.


Conforme Inglez de Souza & Meletti 1997, conhecida como maracujsururuca, passiflorcea brasileira ou, mais precisamente, fluminense, j
classificada por Vellozo, citado pelos primeiros autores em 1827 como
Passiflora sururuca vell; atualmente Passiflora setacea D.C. e, anteriormente
Cieca sururuca Roem. uma fruta de antiga popularidade, Caminhoa (1877),
citado por Inglez de Souza & Meletti, 1997, j a inclua no rol das
passiflorceas de frutos saborosos, conhecida como maracuj-sururuca, muito
apreciado para a fabricao de doces.
Planta de caule rolio, sutilmente revestido de tomento pardacento.
Folhas trilobadas com 5 a 8 cm longitudinalmente por 6 a 8 cm
transversalmente; pecolo com 3 cm de comprimento, portanto, na base um
par de glndulas ssseis. As flores so brancas e solitrias, a antese ocorre
depois das 18 horas, apresentando baixa taxa de frutificao em Jaboticabal, SP
e Araguari, MG, provavelmente, devido falta de agentes polinizadores. A
polinizao artificial d bons resultados, dando origem a frutos grandes. No
sul da Bahia e no semi-rido mineiro conhecido como maracuj-de-cobra.
Essa espcie foi introduzida no BAG de Passiflora da FCAV - UNESP de
Jaboticabal em 1980, via Embrapa Recursos Genticos e Biotecnologia.
Posteriormente, depois de 1986, outras introdues foram efetuadas com a
colaborao do Professor Engenheiro Agrnomo Abel Rebouas So Jos.
Em janaba, MG, o Engenheiro Agrnomo Elpdio Francisco Neto observou
extensa rea coberta com essa espcie; as plantas estavam dispostas de
forma a sugerir a hiptese de se tratar de plantio artificial proposital com
mecanizao, mas se chegou concluso de que se tratava de uma capoeira
em pousio.
Frutos ovides e globosos, com peso de 50 a 60 g e com 5,3 cm de
comprimento por 3,8 cm de dimetro, casca verde-amarelada e rajadas,
quando prximos maturao, apresentando cinco listas longitudinais da
base ao pice do fruto, casca coricea, suco doce-acidulado, saboroso,

154

Espcies de maracuj com potencial agronmico

16 Brix, 127/233 sementes por fruto; quando maduros, os frutos caem da


planta, semelhante ao maracuj-amarelo. As sementes so obovadas,
levemente reticuladas/sementes por grama.
As sementes so de tamanho reduzido, em relao a outras
passiflorceas e perdem rapidamente a capacidade de germinao. No incio
do desenvolvimento, as plntulas so delicadas com caule delgado. Em
cultivo, apresentam crescimento inicial lento e posteriormente vigoroso.
Algumas plantas chegaram a viver nove anos.

Aspectos agronmicos
Essa espcie tem-se mostrado resistente morte precoce de plantas de
outras passiflorceas (Oliveira, 1987) e suscetvel ao nematide Meloidogyne
incognita, raa I, de modo generalizado, tolerante bacteriose, antracnose
e verrugose, doenas do maracuj-amarelo.
Descendente de hbridos interespecficos de P. edulis vs. P. setacea , os
frutos mostraram-se vigorosos, mas com a presena de plntulas anormais,
com ausncia parcial de clorofila, albinas, gros de plen de baixa viabilidade,
entretanto, os vulos foram bastante frteis, permitindo a reproduo sexual
entre hbridos e os progenitores. Em relao morfologia, as folhas, flores e
frutos dos hbridos foram intermedirios aos progenitores, embora em alguns
caracteres tenha ocorrido predominncia de um dos progenitores. Entre os
descendentes, foram observados indivduos com baixa reproduo do
Meloidogyne incognita, raa I, o que indica resistncia ao parasito (Priolli,
1991).
Em relao morte precoce de plantas, os hbridos F1 dos
cruzamentos: P. edulis vs. P. setacea, P. alata e P. giberti mostraram-se
suscetveis, indicando a hiptese de que a resistncia doena devida a
gene recessivo (Oliveira & Ferreira, 1991), isso dificulta a transferncia do gene
para P. edulis.

155

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Concluso
Considerando a diversidade gentica do gnero Passiflora e o potencial
agronmico relatado neste captulo para algumas espcies, de extrema
importncia a intensificao dos trabalhos de pesquisa visando ao maior
conhecimento do germoplasma de maracujazeiro silvestre para produo de
frutos, como trepadeira ornamental ou, ainda, como material gentico para
trabalhos de melhoramento e como porta-enxerto.

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158

Poderosa e lendria famlia


Que difere na adaptao.
Cada espcie tem sua funo
Comprovada em seu uso e valia.
Alimento da fauna silvestre
De alados, serpentes, roedores,
E de humanos, seres predadores,
Que habitam a crosta terrestre.
No mais puro pensar de um poeta
Flor igual em beleza no h.
Cujo nome Maracuj,
E faz parte da nossa dieta.
Geovane Alves de Andrade

Problemas e perspectivas da avaliao


de doenas como suporte ao
melhoramento do maracujazeiro
Francisco Ferraz Laranjeira

Introduo
Quantificao de doenas ou patometria o processo pelo qual os
sintomas so mensurados e expressos em unidades que permitam
comparaes objetivas. Nesse contexto, medidas subjetivas como muito
intenso, baixa severidade ou grandes reas lesionadas so de muito pouca
valia. O objetivo precpuo da patometria fornecer dados quantitativos sobre
as doenas que possibilitem:
i. Estimar a extenso dos danos e realizar estudos de perdas.
ii. Comparar a eficincia de sistemas de controle.
iii. Realizar estudos bsicos de ecologia de fitopatgenos e epidemiologia.
iv. Comparar selees e variedades em programas de melhoramento.
Pela descrio dos objetivos, percebe-se a razo de tantos
pesquisadores considerarem a quantificao de doenas como to necessria
quanto diagnose. Nesse caso, racionaliza-se que mais importante do que
conhecer o agente causal de dada doena saber quanto esse patgeno
pode induzir sintomas.
Considerando-se especificamente a aplicao da patometria no
melhoramento vegetal, ver-se- que exatamente essa a situao. O

161

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

melhorista nunca est apenas interessado em saber qual o patgeno que afeta
a variedade desenvolvida. Ele quer saber se aquela doena relevante, como
seria possvel classificar a reao da variedade e como o material selecionado
se posiciona em relao a cultivares j lanadas. Em outras palavras, a
quantificao de sintomas de doenas aspecto fundamental do
melhoramento gentico vegetal.
Neste texto, sero discutidos aspectos da patometria relacionados ao
melhoramento, em especial, aos que se refiram ao melhoramento de plantas
do gnero Passiflora. Sem pretender esgotar o assunto, sero vistos aspectos
bsicos da quantificao de doenas, caractersticas da cultura que favorecem
ou no a patometria e ainda observaes especficas sobre alguns tipos de
doenas que afetam o maracujazeiro.

Requisitos de uma boa avaliao


Uma boa avaliao de doena deve considerar quatro atributos
bsicos:
i. Acurcia.
ii. Preciso.
iii. Reprodutibilidade.
iv. Eficincia.
Os dois primeiros atributos referem-se qualidade da avaliao, o
terceiro diz respeito possibilidade de mais grupos de pesquisa utilizarem
os mesmos mtodos, e o ltimo atributo refere-se ao balano entre a
qualidade e o tempo de execuo.

Acurcia e Pr
eciso
Preciso
A acurcia a medida de quo prximo ao real esto as estimativas
de um dado avaliador. Preciso a medida dos desvios de avaliao em

162

Problemas e perspectivas da avaliao de doenas ...

relao s estimativas do prprio avaliador (Figura 1). Em outras palavras, a


preciso diz respeito a quanto um avaliador erra ao avaliar amostras do
mesmo valor.
Considerando-se essas definies, um avaliador pode apresentar
quatro perfis (Figura 1). bvio que se procura sempre um avaliador de
perfil A. Por sua vez, com treinamento adequado, possvel desenvolver as
habilidades necessrias.
80

Severidade Estimada
Severidade Real

Severidade Estimada (%)

60

80

60

40

40

20

20

0
0

10 20 30 40 50 60 70

80

0
80

60

60

40

40

20

20

10 20 30 40 50 60 70
D

0
0

10 20 30 40 50 60 70

10 20 30 40 50 60 70

Severidade Real (%)


Figura 1. Perfis de avaliadores de doenas. Preciso e acurado (A); Acurado, mas
impreciso (B); Preciso, mas no-acurado (C); Impreciso e no-acurado (D).

Reprodutibilidade
Essa caracterstica est mais relacionada ao mtodo utilizado. Como
ideal, procura-se aquele que possa ser utilizado de maneira eficiente por
diversos grupos de pesquisa ou pelo menos que seja aceito pelos parceiros

163

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

de um mesmo projeto. O melhor, entretanto, que os mtodos sejam


estabelecidos e aceitos por um grupo mais amplo e tornem-se referncia para
trabalhos futuros.
Mesmo que o mtodo seja adequado, o treinamento dos avaliadores
deve ser feito. A existncia de falhas sistemticas pode comprometer os
esforos de um grupo ou mesmo de todo um projeto.

Eficincia
Esse atributo tambm se relaciona com o mtodo de quantificao,
mas igualmente com o esquema de amostragem e nmero de repeties.
Nesse caso, deve haver um balano eficiente entre a qualidade da avaliao,
seu custo e, em especial, o tempo despendido para sua execuo.
Uma avaliao pode vir a ser de muito boa qualidade, mas se no
permitir ao melhorista um resultado rpido que possibilite a avaliao de um
bom nmero de gentipos, ser ineficiente. Ademais, de nada adiantar
rapidez se o resultado no discriminar as variedades de maneira conveniente.

Erros comuns em avaliao de doenas


So quatro os equvocos mais corriqueiros na avaliao de doenas. O
primeiro deles relaciona-se expectativa do avaliador. Essa expectativa pode
advir do que se conhece da doena - doena importante ou no -, do que o
avaliador imagina que v acontecer com cada tratamento e da experincia de
quem avalia. Os mais experientes costumam ter uma expectativa baseada em
seu prprio conhecimento prtico e, em conseqncia, cometem erros de
avaliao.
O segundo erro mais comum a tendncia natural da superestimao
os sintomas. Isso ocorre, pois as avaliaes normalmente so feitas
determinando-se a rea sintomtica e no a sadia. Aparentemente, quem

164

Problemas e perspectivas da avaliao de doenas ...

avalia est to concentrado na doena que falha em estabelecer a correta


relao do observado com o resto da unidade amostral.
O terceiro erro acontece tambm por causa de fatores intrnsecos ao
homem. Diante de folhas com a mesma porcentagem de rea sintomtica,
mas com tamanhos diferentes de leso, tende-se a afirmar que a folha com
leses de menor tamanho a mais afetada. O crebro, nesse caso, distingue
melhor freqncia que rea.
O quarto erro tem relao com a tendncia de grande nmero de
pessoas concentrar as estimativas em valores com 1, 5% e 10%. Por algum
motivo, o ser humano aprecia os valores redondos.
O reconhecimento da existncia dessas fontes de erro no uma
sentena de impreciso ao processo de avaliao de doenas. Antes, mais
uma lembrana das nossas falhas e um estmulo a corrigi-las.

O que avaliar?
Existem quatro medidas bsicas que podem ser usadas na
quantificao de doenas:
i. Incidncia.
ii. Severidade.
iii. Intensidade.
iv. Densidade do patgeno.
A incidncia refere-se sempre proporo de unidades sintomticas
num total de unidades amostrais avaliadas. Dessa forma, faz-se referncia a
medidas como: proporo de plantas sintomticas; porcentagem de folhas
afetadas; porcentagem de ramos com desfolha. Adiante, ser discutida, para
cada tipo de doena, qual a medida de danos mais adequada. No entanto, de
maneira geral, a incidncia utilizada quando a unidade amostral est doente,

165

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

o que implica danos diretos produo ou fatalidade. Esse o caso, por


exemplo, de plantas com murcha (porcentagem de plantas murchas) ou frutos
podres (porcentagem de frutos com podrido).
A severidade faz referncia incidncia de doena por unidade de rea
ou volume avaliado. Por exemplo: porcentagem de rea foliar sintomtica ou
de volume de copa afetada. Embora, na teoria, seja uma medida mais precisa
que a incidncia, muito mais difcil de se estimar, e os erros associados
podem ser maiores se o mtodo usado no estiver bem calibrado.
A intensidade pode ser classificada apenas como uma designao geral
das medidas de avaliao de doenas e, portanto, englobando a incidncia e
a severidade. Pode, no entanto, assumir um significado alternativo e designar
medidas menos quantitativas como aquelas existentes em chaves descritivas
(ver adiante). Nesses casos, a intensidade assume valores arbitrrios conforme
a descrio da chave. Geralmente, utilizam-se escalas de nmero com zero
para unidade amostral sadia e um nmero inteiro entre 3 e 5 para o valor
mximo da chave. possvel ainda combinar avaliaes de incidncia com
intensidade ou severidade, gerando os ndices de doena. Esses ndices, na
classificao aqui adotada, so considerados medidas de intensidade da
doena.
Embora as medidas referentes a sintomas sejam as mais utilizadas, para
algumas doenas, elas podem no ser suficientes. Essa a situao que
ocorre quando a incidncia e a severidade so homogeneamente altas ou
baixas, independente do tratamento. Outra circunstncia em que as medidas
de sintomas so irrelevantes quando os sintomas so inespecficos. Nesses
casos, deve-se lanar mo da densidade do patgeno que mede a
quantidade de propgulos ou outros sinais do patgeno por unidade ou
mesmo por unidade de rea, volume ou massa do hospedeiro. A avaliao de
viroses um caso tpico: sintomas inespecficos, alta incidncia e
possibilidade de quantificao - ao menos indireta - dos vrus.

166

Problemas e perspectivas da avaliao de doenas ...

Como avaliar?
A avaliao de uma doena est diretamente ligada deciso sobre
quais apectos avaliar. A escolha de uma medida de avaliao pode implicar a
escolha do mtodo de avaliao. Sero apresentados aqui alguns dos
mtodos mais utilizados e que podem ter alguma aplicao na patometria da
passicultura.

Freqncia de amostras doentes


Esse mtodo consiste em computar a incidncia de determinada classe
de sintoma num conjunto de amostras. Como comentado anteriormente, esse
mtodo mais ligado a doenas que atingem diretamente a produo
podrido-de-frutos, por exemplo, ou quelas que determinam a morte da
unidade amostral ou comprometem a produo da planta como um todo.
Nesse ltimo caso, as mais comuns so as doenas que matam as plantas
como, a fusariose, e a podrido-do-p e a podrido-do-colo. As viroses, de
maneira geral, tambm se enquadram aqui. Apesar disso, doenas foliares
podem ser avaliadas com base na freqncia de unidades afetadas. Isso
tanto mais verdadeiro quanto mais a presena dos sintomas implicarem o
aniquilamento da unidade amostral. Tpica dessa situao a doena que
causa desfolha. Assim, pode-se perfeitamente avaliar a porcentagem de folhas
afetadas ou a de desfolha.

Escalas

diagramticas

Escalas diagramticas so representaes ilustradas de uma srie de


plantas, folhas, frutos ou outras partes de plantas com sintomas em diferentes
nveis de severidade (Figura 2). Atualmente, essas escalas so a principal
ferramenta para se estimar a severidade de uma doena. bom esclarecer que
a correta utilizao das escalas que determina seu sucesso. Sua principal
funo servir de guia para que o avaliador possa estimar o percentual de

167

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

sintomas existente na unidade amostral. Caso seja usada para se enquadrar


a unidade amostral em um dos nveis da escala, ela passa a ser meramente um
tipo de chave descritiva, mas j com erro sistemtico embutido na avaliao.
Para que uma escala seja corretamente usada, os avaliadores devem ser
treinados, procurando-se corrigir eventuais problemas de acurcia. Nota-se a
razo da demanda por treinamento: o processo no de classificao, mas
de estimativa. Caso no seja bem treinado, o erro pode ser grande se for
necessrio estimar a severidade de uma folha com 30% de rea foliar afetada,
mas os nveis da escala sejam 3%, 6%, 15%, 25%, 38% e 50%, por exemplo.

20

10

25
(a)

50

70

5
1

50

80
(b)

(c)

Figura 2. Exemplos de escalas diagramticas representando nveis de doena em


diversos rgos das plantas.
Fonte: Bergamin Filho & Amorim (1996).

Na passicultura, s foi possvel encontrar um exemplo de escala


diagramtica (Figura 3). A escala para o crestamento bacteriano foi
desenvolvida com o objetivo de avaliar a severidade da doena em gentipos
de maracuj inoculados em casa de vegetao (Miranda, 2004). Embora a
autora relate o sucesso da escala e das avaliaes, necessrio apontar que
sua utilizao est condicionada ao mtodo de inoculao por corte de
tesoura.

168

Problemas e perspectivas da avaliao de doenas ...

Figura 3. Escala diagramtica para avaliao de bacteriose do maracujazeiro em


plantas inoculadas em casa de vegetao pelo mtodo da tesoura.
Fonte: Miranda (2004).

A confeco de uma escala diagramtica tarefa rdua, embora no


seja excessivamente complexa. O candidato a desenvolvedor de escalas deve
ter bom conhecimento da doena, equipamento para medio precisa da
rea foliar afetada e disposio para trabalhar com um nmero significativo de
avaliadores at o ajuste final da escala. Outro requisito fundamental a
observncia dos aspectos tericos como, por exemplo, o respeito aos limites
da acuidade visual humana (Kranz, 1988; Campbell & Madden, 1990;
Bergamin Filho & Amorim, 1996; Do Vale et al., 2004). Embora a grande
maioria das escalas publicadas at hoje faa uso de desenhos nas cores preta
e branca, o uso de escalas coloridas para doenas especficas deve aumentar
a qualidade das avaliaes. Isso especialmente verdadeiro quando se sabe
que o matiz da cor fator de discriminao de sintomas. Avaliaes de

169

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

doenas cujos sintomas apresentam reas clorticas, necrticas e em


esporulao podem ser as mais beneficiadas.

Chaves

descritivas

As chaves descritivas so compostas de escalas arbitrrias com um


nmero varivel de graus ou classes que so usados na quantificao de
doenas. Por serem arbitrrias, baseiam-se na experincia do
desenvolvedor com a doena e podem ser no apenas descritivas, mas
considerar tambm diagramas. Embora as classes da chave possam ser
de qualquer tipo - smbolos, letras, nmeros ou expresses - o uso de
classes numricas muito conveniente. Ao contrrio das escalas
diagramticas, as unidades amostrais avaliadas com chaves descritivas so
classificadas nos graus da chave. importante frisar que a confeco dessas
chaves deve ser criteriosa, pois em essncia so imprecisas. Deve-se, por
exemplo, abolir expresses subjetivas como moderado, severo, intenso,
levemente. Esse tipo de expresso, alm de no descrever os sintomas de
maneira adequada, ainda inibe o uso da chave por outros grupos de
pesquisa. Ao contrrio das escalas diagramticas, muito difcil treinar
avaliadores e padronizar o que se quer como severo ou equivalentes.
O cuidado deve ser ainda maior quando se sabe que as chaves
descritivas so comumente usadas em programas de melhoramento. Isso
se d em funo de sua praticidade. Obviamente, muito mais simples
atribuir uma nota a uma planta do que estimar a severidade de cada uma
de suas folhas. Essa praticidade se reflete na rapidez das avaliaes e,
claro, na quantidade de plantas avaliadas por unidade de tempo.
Nas Tabelas 1, 2 e 3 so apresentadas propostas de chaves
descritivas para avaliao de doenas foliares do maracuj no campo. Como
essas chaves no foram ainda testadas em programas de melhoramento,
devem ser ainda validadas e, eventualmente, modificadas. De qualquer forma,
essa proposta pretende deixar clara a ausncia de chaves e escalas
adequadas ao suporte de programas de melhoramento na passicultura.

170

Problemas e perspectivas da avaliao de doenas ...

Tabela 1. Proposta de chave descritiva para avaliao da cladosporiose em plantas


de maracuj-amarelo.
Classe

Descrio

Ausncia de sintomas

Sintomas apenas em folhas

Sintomas em folhas, ramos e botes florais

Sintomas em frutos, sem deformao

Ocorrncia de frutos deformados

Tabela 2. Proposta de chave descritiva para avaliao da antracnose em plantas de


maracuj-amarelo.
Classe

Descrio

Ausncia de sintomas

Sintomas apenas em folhas

Desfolha ou morte descendente de ramos

Desfolha e morte descendente de ramos

Desfolha, morte descendente de ramos e sintomas em frutos

Tabela 3. Proposta de chave descritiva para avaliao da bacteriose em plantas de


maracuj-amarelo.
Classe

Descrio

Ausncia de sintomas

Folhas com sintomas pontuais

Coalescncia de leses foliares

Desfolha

Sintomas sistmicos

171

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

ndices de doena
Os ndices de doena so calculados a partir de avaliaes com chaves
descritivas. Podem ser usados para determinar a intensidade de uma doena
em determinada populao de um gentipo ou mesmo em uma planta ou
campo de cultivo. Na Figura 4, detalha-se o procedimento de clculo do
ndice bsico da doena. Entretanto, mesmo mais trabalhoso, o ndice de
Czermainski (Czermainski, 1999) mais adequado a anlises estatsticas. No
importando o ndice escolhido, fundamental que a unidade amostral - planta
ou folha - reflita os objetivos e as metas do programa de melhoramento. No
caso do maracuj, deve-se fazer distino entre trabalhos em campo e em
casa de vegetao. Em campo, seriam interessantes chaves descritivas e
ndices para a planta ou para espaos entre moires das espaldeiras. Para
casa de vegetao, mais adequada a avaliao em folhas. Isso decorrncia
do tamanho das plantas e das caractersticas da infeco nos dois ambientes.
Em casa de vegetao, rara a manuteno das plantas em crescimento at
depois do lanamento das primeiras gavinhas. Alm disso, os sintomas so
oriundos de apenas um processo de inoculao, ao contrrio das condies
de campo em que a infeco no controlada. Assim, mais conveniente
que, em casa de vegetao, sejam usados ndices relacionados a folhas.

Folhas avaliadas

1
(

Graus atribudos
s folhas

Nmero de folhas* grau da chave) / (Nmero total de folhas* Valor mximo da chave)
[(1*0) + (1*1) + (2*2) + (2*3) + (1*4)] / (7*4) = 0,54

ndice obtido

Figura 4. Processo de determinao do ndice de McKinney para um conjunto de


folhas avaliadas com chave descritiva com graus variando de 0 a 4.

172

Problemas e perspectivas da avaliao de doenas ...

Auto-incompatibilidade, pr
opagao por sementes e
propagao
doenas
Existem algumas caractersticas do maracuj que influenciam
diretamente a qualidade da quantificao de doenas na passicultura.
Entre essas caractersticas, destacam-se a auto-incompatibilidade e a
propagao por sementes. A auto-incompatibilidade induz o produtor a ter
no seu pomar grande variedade de plantas geneticamente distintas, e a
maneira mais fcil de conseguir isso por meio de sementes. Embora essa
situao no traga muitos inconvenientes ao produtor, transforma a vida do
pesquisador numa luta sem fim. Com implicaes diretas na amostragem e
no nmero de unidades amostrais, aqueles aspectos so cruciais e devem
ser observados, caso se deseje uma boa avaliao de doenas. Embora as
informaes referentes a esse tpico e que poderiam subsidiar o
melhoramento sejam escassas, considera-se que o fundamental a
atuao conjunta de melhoristas e fitopatologistas para a soluo desses
entraves.

Amostragem
A grande variao encontrada num plantio de maracuj implica
tambm uma provvel heterogeneidade na reao maioria das doenas.
Aqui se deve lamentar que esse sempre foi um aspecto no muito
considerado. O ideal seria ter-se pelo menos um estudo para cada uma das
mais importantes doenas do maracuj e que apontasse a real
variabilidade na reao. Isso ajudaria na elaborao de planos de
amostragem mais eficientes.
Para que um plano de amostragem seja eficiente, ele deve considerar
aspectos como tcnica de amostragem, unidade amostral e tamanho da
amostra. Esse ltimo aspecto ser visto adiante com implicaes mais
relacionadas experimentao.

173

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

A tcnica de amostragem tem ligao direta com a distribuio espacial


da doena no campo. No caso de experimentos com inoculao controlada
ou com distribuio aleatria ou regular do patgeno, esse aspecto no
crtico, pois a avaliao normalmente feita em todas as parcelas. Pode-se
ainda, como alternativa, optar por uma amostragem aleatria. No entanto, o
emprego de uma tcnica de amostragem adequada fundamental na
quantificao de doenas em populaes comerciais a serem selecionadas.
De maneira geral, recomenda-se que, para deteco de baixas incidncias,
seja usada a amostragem estratificada. Em outras situaes, a amostragem
sistemtica em W, ou seja, o caminhamento em zigue-zague com avaliao
de certo nmero de plantas suficiente.
A escolha da unidade amostral tambm crucial e, como j visto, est
ligada escolha da medida e do mtodo de quantificao. Ateno especial
deve ser dada relevncia dessa unidade e sua conexo com a fenologia da
planta. Por exemplo, se o interesse for selecionar populaes com maior
resistncia desfolha, no faz sentido avaliar a ocorrncia de sintomas em
frutos. No entanto, se essa mesma doena afeta os frutos, em algum
momento, eles devem ser a unidade amostral de escolha. Isso tanto mais
importante quanto mais correlacionados estiverem uma dada parte da planta e
os danos produo causados pela doena. Como exemplo hipottico,
pode-se admitir uma doena que afeta frutos, mas que afete tambm os
botes florais. Caso haja alta correlao entre severidade de sintomas nos
botes florais e danos aos frutos, o melhorista pode optar por avaliar os
botes e obter assim uma medida precoce da resistncia das populaes
estudadas.

Nmero e tamanho de repeties


O nmero e o tamanho das unidades amostrais talvez sejam os
aspectos mais importantes de um plano de amostragem. O outro lado da
questo mostra, entretanto, que so tambm mais afetados pela variao

174

Problemas e perspectivas da avaliao de doenas ...

no comportamento dos gentipos. Praticamente, nada foi feito nesse campo


para pesquisas com maracuj. fundamental apontar que a grande limitao
para a pesquisa com maracuj o tamanho das parcelas. Ao contrrio de
fruteiras como citros ou manga, a clonagem de pouco interesse, pois no
possvel formar pomares produtivos com apenas um clone. Assim, torna-se
quase irrelevante o fato de uma planta apresentar menor quantidade de
sintomas ou menores danos produo. A questo-chave aqui trabalhar
com populaes. O que vlido para outros aspectos do melhoramento
continua vlido quando se aborda a resistncia a doenas. Nesse caso,
fundamental que sejam feitos estudos especficos para se determinar o nmero
e o tamanho das repeties de modo a permitir uma correta comparao de
tratamentos, no contexto deste trabalho, que permitam a comparao entre
gentipos de maracuj. Em trabalho que procurou contribuir para o
esclarecimento dessa questo, Ledo e Laranjeira (2003) mostraram que, em
casa de vegetao, dez era o nmero mnimo de plantas por parcela para se
obter um tratamento estatstico confivel, considerando-se variveis como
peso da matria seca (razes) e da parte area, altura das plantas. Assim
sendo, o uso de poucas plantas por parcela pode levar execuo de
trabalhos pouco confiveis que no contribuem para o avano das pesquisas
na passicultura. Esse um caso tpico em que no h compensao em
enfatizar fatores logsticos em detrimento dos biolgico-estatsticos.

Variao

ambiental

parte variao gentica, deve-se atentar tambm para a variao


ambiental. No caso da quantificao de doenas, o fator ambiental pode
ser preponderante. Em programas de melhoramento, isso ainda mais
importante: dificilmente ser encontrada resistncia vertical em P. edulis
flavicarpa. Assim, fundamental que as comparaes entre gentipos sejam
feitas no maior nmero possvel de condies ambientais e para isso se deve
considerar no apenas as variaes espaciais, mas tambm as sazonais.

175

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Importncia da fenologia
Como visto em outro tpico, h forte conexo entre a quantificao de
doenas e a fenologia da planta. Considerando que, segundo uma de suas
definies, uma doena seria a conseqncia da interao entre patgeno e
hospedeiro sob a influncia do ambiente, como desconsiderar ento as
mudanas significativas por que passa uma planta desde sua emergncia at
sua fase reprodutiva? No mbito do melhoramento, para informar
corretamente a reao de uma populao, no deveria a dupla melhoristafitopatologista apontar o estdio exato em que as quantificaes foram feitas?
Como divulgar na sociedade, informaes confiveis sobre a resistncia de
selees se no houver clareza quanto ao perodo da avaliao? Mais ainda,
num pas como o nosso onde o maracuj cultivado em pelo menos 107 das
137 mesorregies, como padronizar o perodo de avaliao? Certamente, em
funo de nossa diversidade climtica, no possvel usar datas de calendrio
ou falar em estaes do ano.
A padronizao de uma escala fenolgica pode ser a resposta. A
fenologia ainda mais importante se for levada em considerao a
possibilidade de correlao entre quantificao de sintomas, danos
produo e estdios de crescimento das plantas. Caso um programa de
melhoramento adotasse uma escala fenolgica para o maracuj, certamente
muitas discrepncias desapareceriam. O dilogo entre parceiros de projeto
seria facilitado e, o que crucial, dados de diferentes regies poderiam ser
comparados. Em consulta bibliografia disponvel sobre passicultura, foi
possvel encontrar diversos textos que descrevem a biologia da planta,
fatores que afetam seu crescimento, aspectos de sua reproduo,
desenvolvimento de frutos. No entanto, parece que no houve preocupao
ou necessidade de sistematizar esse conhecimento numa escala prtica. Isso
espantoso quando se sabe que tal escala nada mais que uma representao
diagramtica ou descritiva de fases da planta (Figura 5). Entretanto, por uma

176

Problemas e perspectivas da avaliao de doenas ...

questo de justia interessante ressaltar que Maciel et al. (1997a) elaboraram


uma escala fenolgica, mas apenas para a fase entre a pr-emergncia e a
expanso dos cotildones. Produziram, ainda, muitas outras informaes teis
(Maciel et al., 1997b) sobre as fases embrinica, juvenil, transicional ou
lianescente e adulta de P. edulis flavicarpa. Essas informaes, aliadas s da
literatura nacional sobre o tema, serviram de base para a elaborao de uma
proposta de escala fenolgica para o maracuj apresentada aqui (Tabela 4).
Essa escala, dever ser aperfeioada. muito provvel, por exemplo, que,
para trabalhos de melhoramento que visem resistncia a doenas, seja
necessria a criao de uma escala especfica para a fase de desenvolvimento
e crescimento dos frutos ou, como alternativa, o estabelecimento de estdios
especficos para a fase reprodutiva. No entanto, uma caracterstica que pode
dificultar o processo a produo contnua de flores no maracuj, o que leva
a mesma planta a ter flores e frutos em diversos estdios de desenvolvimento.

Figura 5. Exemplo de escala fenolgica para a batata, englobando desde a


germinao at a fase reprodutiva da cultura.
Fonte: Bergamin Filho & Amorim (1996).

177

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Tabela 4. Proposta de escala fenolgica para a cultura do maracuj..


Fasesx

Cdigo para
as subfases

Embrionria

Juvenil

Transicional

Adulta

Descrio

E1

Pr-germinao

E2

Formao da radcula

E3

Emergncia ou formao do gancho

E4

Aparecimento das folhas cotiledonares

J1

Folhas cotiledonares completamente expandidas

J2

Duas folhas definitivas

J3

Seis folhas definitivas

J4

Dez folhas definitivas

T1

Emisso da primeira gavinha

T2

Emisso da primeira folha trilobada

A1

Emisso do primeiro boto floral

A1a

Crescimento de ramos laterais

A1b

Crescimento da cortina de produo

As fases foram estabelecidas e descritas por Maciel et al. (1997a, 1997b).

Para a fase adulta, certamente ser necessrio criar uma escala especfica para o
crescimento e o desenvolvimento dos frutos.

Fonte: Maciel et al. (1997ab)

Escolhas
Depois de trabalhados os conceitos bsicos de patometria e sua
relao com o melhoramento, necessrio que se faam alguns
comentrios sobre as escolhas referentes s doenas do maracujazeiro.

Doenas foliar
es
foliares
As doenas foliares mais importantes do maracujazeiro so a
antracnose (Colletotrichum gloeosporioides), o crestamento bacteriano
(Xanthomonas axonopodis pv. passiflorae), a cladosporiose (Cladosporium

178

Problemas e perspectivas da avaliao de doenas ...

herbarum) e a septoriose (Septoria passiflorae). Essas doenas causam


manchas foliares, mas podem induzir desfolha e mesmo morte de ramos
(Liberato & Costa, 2001; Santos Filho et al., 2004; Yamashiro, 1987).
A quantificao desse tipo de doena pode ser bem complexa, no
pela avaliao em si, mas pela difcil definio sobre o que avaliar. Visto que
vrios tecidos so afetados pela doena, o melhorista deve ser bem criterioso
em relao ao que mais importante quantificar. A primeira deciso, certo,
deve estar relacionada ao objetivo do programa. Assim, a seleo de
populaes com maior resistncia desfolha ou menor severidade de
sintomas foliares suficiente para iniciar os trabalhos? Por sua vez, o objetivo
obter uma populao com baixa proporo de plantas sintomticas ou uma
intensidade mdia de doena que seja baixa? Dependendo das respostas,
pode-se optar por uma gama de medidas e mtodos, sendo possvel e at
desejvel, a combinao de estratgias conforme o estdio fenolgico e o
local da avaliao. No entanto, doenas que causam deformao nas folhas
so mais difceis de serem avaliadas por escalas diagramticas. Outra ressalva
que doenas que se diferenciam pela severidade nos rgos afetados tm
sua quantificao seriamente prejudicada quando a opo se faz apenas por
medidas de incidncia. Enfim, a definio de como avaliar as doenas foliares
do maracuj complexa e deve levar em conta os aspectos abordados aqui,
mas, em essncia, deve ser uma deciso tomada preferencialmente por uma
equipe multidisciplinar de cada programa de melhoramento.

Doenas que afetam o fruto


H trs maneiras bsicas para se quantificar esse tipo de molstia:
incidncia de frutos afetados, severidade de sintomas e intensidade. O
primeiro caso mais adequado para doenas que causam podrides, ou
seja, inutilizam o fruto. bvio, porm, que, em etapas intermedirias do
melhoramento, pode ser necessria seleo de gentipos que apresentem
menor severidade da doena para efeito de deteco de possveis fontes de
resistncia.

179

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

O segundo caso - avaliao da severidade - aplica-se de maneira mais


consistente a doenas que no inutilizam a polpa do fruto, mas antes alteram
sua aparncia. Um bom exemplo desse caso a cladosporiose (Liberato &
Costa, 2001; Santos Filho et al., 2004; Yamashiro, 1987). Imaginemos a
avaliao de dois gentipos de maracuj-amarelo: ambos com incidncia
mdia de 20% de frutos afetados. Iguais? E se um deles apresentasse apenas
de uma a duas verrugas por fruto enquanto o outro tivesse frutos deformados
pela doena? O terceiro caso, qual seja a avaliao da intensidade da doena
pode ser aplicvel quando a rapidez da avaliao mais importante que um
alto nvel de acurcia.

Doenas

radiculares

Para doenas como a murcha de Fusarium, a podrido-do-p e a


podrido-do-colo, a nica avaliao confivel e rpida por meio da
incidncia de plantas doentes. Obviamente, possvel que algum dia sejam
desenvolvidos mtodos que permitam, por exemplo, quantificar a incidncia
de vasos danificados ou mesmo a extenso desse dano. No caso de toxinas
produzidas por Fusarium, poder-se-ia delinear um mtodo com base numa
curva-resposta a nveis de toxina.
Entretanto, enquanto no houver alterntiva, o uso da porcentagem de
plantas afetadas continuar a ser usada. No entanto, possvel obter
informaes mais precisas apenas com esse tipo de dado, como se pode
observar, por exemplo, nos resultados obtidos por Laranjeira et al. (2005) em
que o autor quantificou a incidncia da murcha de Fusarium em plantas de
maracuj-amarelo enxertadas em quatro porta-enxertos (Figura 6). Nota-se
que a incidncia final muito semelhante nos quatro tratamentos. Entretanto,
foi possvel submeter os dados anlise de sobrevivncia (Figura 7). Essa
anlise comprovou estatisticamente que o porta-enxerto de maracuj-amarelo
apresentou um perfil de sobrevivncia diferente e pior do que o apresentado
pelos outros trs que no se distinguiram entre si. Caso os autores tivessem se
baseado apenas na avaliao final da incidncia, nenhuma informao seria
obtida e, pior, os outros trs porta-enxertos seriam considerados to
suscetveis quanto o maracuj-amarelo.

180

Problemas e perspectivas da avaliao de doenas ...

1,0
P. edulis f. flavicarpa
P. gibertii
P. alata
P. cincinnata

Proporo de plantas afetadas

0,9
0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0,0
0

10 12 14 16
Meses aps plantio

18

20

22

24

Figura 6. Progresso da murcha de Fusarium em plantas de maracujazeiro-amarelo


enxertadas em quatro porta-enxertos do gnero Passiflora.

Proporo cumulativa de sobrevivncia

1,0
P. edulis f. flavicarpa
P. gibertii
P. alata
P. cincinnata

0,9
0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0,0
0

10

12 14 16 18
Meses aps plantio

20

22

24

26

28

30

Figura 7. Perfil de sobrevivncia em relao murcha de Fusarium, de plantas de


maracujazeiro-amarelo, enxertadas em quatro porta-enxertos do gnero Passiflora. P.
edulis flavicarpa diferenciou-se dos outros trs de acordo com o teste Gehans Wilcoxon
(P<0,002).

181

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Viroses
As viroses mais importantes para o maracuj so o endurecimento dos
frutos e a pinta verde, tambm conhecida como definhamento precoce. Em
princpio, como afetam a planta como um todo, a escolha lgica o uso da
incidncia. Da mesma forma que, para doenas radiculares, no cabe a
quantificao da severidade ou da incidncia em frutos. No entanto,
sempre importante ter em mente que o objetivo final de um programa de
melhoramento direcionado resistncia a doenas a obteno de plantas
cuja produo seja menos afetada pelas molstias. Sendo assim, advoga-se,
sempre que possvel, no s a quantificao de sintomas, mas tambm a
quantificao de danos produo. Se assim for feito, talvez sejam
encontradas populaes que mesmo afetadas consigam alguma produo
comercializvel. Esse j seria um grande feito.
Outra possibilidade na avaliao de viroses a quantificao de
partculas virais por mtodos indiretos como ELISA ou PCR. O uso da
incidncia acoplada com quantificao de danos e da densidade do
patgeno pode ser bem eficiente na discriminao de gentipos.

Concluses
A pesquisa com doenas do maracujazeiro ainda incipiente, em
especial, aquela relacionada a programas de melhoramento. Entretanto, j
existem informaes suficientes, notadamente, as referentes patometria, que
permitem a execuo de trabalhos relevantes. Para que isso ocorra, preciso,
porm, que os trabalhos estejam inseridos no contexto de um amplo
programa de melhoramento. Estudos pontuais, fruto apenas do esforo de
apaixonados pela passicultura, sero de pouca conseqncia para a soluo
dos problemas que se apresentam.

182

Problemas e perspectivas da avaliao de doenas ...

Referncias

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183

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

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184

Alegra e enriquece a paisagem pobre.


Com densas ramagens forma sua teia,
Ou vestindo fios onde serpenteia,
Agarra, enrosca, abraa e encobre.
Contm no seu fruto o quinho mais nobre.
dali que o comrcio se desencadeia.
No h nenhuma parte que despreze ou sobre
Deste fruto maduro cor de lua cheia.
Devolve aos ramos secos sua cor nativa,
E ao solo as sementes para que reviva
Num ciclo infinito em que renascer.
esse o destino do Maracuj;
Remdio, ornamento e fruto in natura
Para o bem de cada gerao futura.
Geovane Alves de Andrade

Germoplasma e melhoramento gentico


do maracujazeiro - Desafios da pesquisa
Fbio Gelape Faleiro
Nilton Tadeu Vilela Junqueira
Marcelo Fideles Braga
Jos Ricardo Peixoto

Intr
oduo
Introduo

tema Germoplasma e melhoramento gentico do


maracujazeiro, devido a sua importncia estratgica atual e
futura, foi escolhido para orientar as discusses durante a IV
Reunio Tcnica de Pesquisas em Maracujazeiro, realizada na Embrapa
Cerrados, a qual culminou com a edio deste livro.
Pesquisas envolvendo prospeco, conservao, caracterizao e uso
do germoplasma de maracujazeiro so fundamentais para subsidiar a
incorporao de novos materiais de maracujazeiro-azedo e doce com
caractersticas agronmicas de interesse em programas de melhoramento
gentico. So importantes, tambm, em sistemas de produo de mudas
por enxertia objetivando a resistncia a fungos de solo e morte precoce.
Tais pesquisas so igualmente essenciais para a diversificao do uso de
maracujazeiro como, por exemplo, plantas ornamentais e medicinais.
Com o avano das fronteiras agrcolas no Centro-Norte do Brasil
(principal centro de distribuio geogrfica do maracuj), os trabalhos
visando

conservao
de
recursos
genticos
tornaram-se
estrategicamente importantes. Em relao ao melhoramento gentico,
novas variedades esto sendo desenvolvidas e sero incorporadas aos
sistemas de produo do maracuj. Tal fato contribuir para a efetiva

187

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

reduo de perdas na lavoura, para racionalizao do uso de insumos


agrcolas e incremento da produtividade e, conseqentemente, reduo de
custos de produo, garantindo maior competitividade e sustentabilidade
da atividade agrcola, aumento de renda dos beneficirios diretos e da
gerao potencial de empregos. Nos ltimos anos, com os avanos da
biotecnologia moderna, novas ferramentas esto sendo desenvolvidas para
tornar mais eficientes os programas de melhoramento e diminuir o tempo
gasto no desenvolvimento de novas variedades. Tais ferramentas tambm
merecem uma discusso com equipes multidisciplinares com vistas na
utilizao prtica e aplicada delas.
Neste captulo, so discutidos alguns aspectos relacionados ao
germoplasma e ao melhoramento gentico do maracujazeiro no Brasil que
motivaram a apresentao do projeto em rede Caracterizao de
germoplasma e melhoramento gentico do maracujazeiro assistidos por
marcadores moleculares e a realizao da IV Reunio Tcnica de Pesquisas
em Maracujazeiro.

Variabilidade gentica, morfolgica, agr


onmica e
agronmica
molecular do maracuj
Maracuj uma denominao indgena, de origem tupi, que significa
alimento em forma de cuia. Os maracujs pertencem famlia
Passifloraceae e tambm so conhecidos como flor-da-paixo, nome
popular pouco usual no Brasil que tem origem na correlao da morfologia
da flor com os smbolos da Paixo de Cristo (Souza & Meletti, 1997). Tal
correlao explicada por Frei Vicente (Hoehne, 1937) referindo-se,
inicialmente, aos trs estiletes/estigmas que representam a Santssima
Trindade ou aos trs cravos utilizados na crucificao de Jesus Cristo; os cinco
filetes/estames representam as cinco chagas e a corona/verticilos, a coroa de
espinhos de Jesus Cristo. As folhas, em forma de lana, tambm, segundo Frei
Vicente, esto relacionadas Paixo de Cristo.

188

Germoplasma e melhoramento gentico do maracujazeiro Uma viso geral

As Passifloraceae esto largamente distribudas pelos trpicos (Oliveira,


1987). Segundo Souza & Melleti (1997), h mais de 580 espcies, a maioria
procedente da Amrica tropical e, principalmente, do Brasil. Grande parte
dos autores, incluindo Killip (1938) e Sacco (1980), considera que essa famlia
composta de 12 gneros. Lopes (1994) cita que no Brasil so encontrados
os gneros Dilkea e Passiflora. Segundo Vanderplank (1996), a famlia
Passifloraceae formada por 630 espcies em 18 gneros. Desses, o gnero
Passiflora o mais importante economicamente e o que apresenta maior
nmero de espcies cujo maior centro de distribuio geogrfica localiza-se
no Centro-Norte do Brasil (Lopes, 1991). Estima-se que o gnero Passiflora
seja composto de 465 espcies, das quais de 150 a 200 so originrias do
Brasil e podem ser utilizadas como alimento, remdio e ornamento. Cerca de
70 espcies produzem frutos comestveis (Cunha et al., 2002). Portanto, existe
ampla variabilidade gentica a ser conhecida, caracterizada, protegida,
conservada e convenientemente utilizada comercialmente ou em programas
de melhoramento gentico.
Em relao citogentica do maracuj, Snow (1993) menciona que 75
espcies foram estudadas, com o nmero de cromossomos 2n=12, 14, 18,
20, 24, 27, 36 e 84 sendo que os nmeros bsicos de cromossomos devem ser
x=6 e x=9 no gnero Passiflora. Lopes (1994) tambm relata a existncia de
x=10, alm dos citados acima. Beal (1975), em estudos da meiose de
maracuj-amarelo e roxo, ambos com 2n=18, indicou uma homologia
prxima dos cromossomos das duas formas.
Quanto variabilidade morfolgica, o gnero Passiflora compreende
plantas trepadeiras herbceas ou lenhosas, podendo apresentar-se como
ervas e arbustos de hastes cilndricas ou quadrangulares, angulosas,
suberizadas, glabras ou pilosas, sendo que as principais espcies fruteiras
de

Passiflora

so

diferenciadas

morfologicamente

com

base

nas

caractersticas das hastes, nmero de pecolos, glndulas peciolares,


brcteas, sementes, alm da morfologia foliar e dos frutos (Teixeira, 1994).
Dentro da mesma espcie, diferenas na morfologia dos frutos como
comprimento, dimetro, peso da polpa, semente, casca do prprio fruto,

189

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

espessura da casca e Brix so comuns, a exemplo das verificadas por Ferreira


et al. (1976) em P. edulis f. flavicarpa e Meletti et al. (2003) e Martins et al. (2003)
em P. alata. Cunha & Rocha (1997) tm utilizado vrias caractersticas para
diferenciar acessos do banco ativo de germoplasma da Embrapa Mandioca e
Fruticultura Tropical: vigor vegetativo, produtividade, poca de florescimento,
horrio de abertura das flores, colorao e tamanho das flores, nmero de
frutos por planta, peso mdio de 100 frutos, tamanho dos frutos, dimetro
mediano do fruto, colorao externa e interna do fruto maduro, nmero de
sementes por fruto maduro, espessura de casca, cor do suco, teor de slidos
solveis totais (Brix), acidez titulvel, rendimento em suco, ocorrncia de
insetos-praga e inimigos naturais, avaliao visual de doenas, ocorrncia de
morte

precoce,

viabilidade

de

plen

avaliao

do

grau

de

incompatibilidade. Diversas outras caractersticas das folhas, flor e fruto so


tambm utilizadas como fatores da correta identificao dos acessos
existentes no banco de germoplasma.
Muitas das espcies de Passiflora so cultivadas pelas propriedades
alimentcias,

ornamentais

medicinais,

mas,

principalmente,

pela

qualidade de seus frutos (Souza & Meletti, 1997; Tocchini et al., 1994). Os
frutos, alm de consumidos in natura, so usados para fazer sucos, doces,
refrescos, sorvetes. O valor ornamental conferido pelas belas flores que a
planta produz que exercem atrao pelo seu tamanho, pela exuberncia de
suas cores e pela originalidade de suas formas. O uso medicinal, bastante
difundido, baseia-se nas propriedades calmantes, sendo um sedativo
natural encontrado nos frutos e nas folhas (Souza & Meletti, 1997), nas
propriedades como vermfugo e febrfugo e tambm nos efeitos diurticos,
antiblenorrgicos, hipnticos e abortivos para o gado (Oliveira, 1987).
No Brasil, as espcies com maior expresso comercial so a
Passiflora edulis f. flavicarpa (maracuj-amarelo ou azedo), a Passiflora
edulis (maracuj-roxo) e a Passiflora alata (maracuj-doce) (Souza &
Melleti, 1997). O maracuj-azedo o mais conhecido, cultivado e
comercializado devido qualidade de seus frutos e ao seu maior
rendimento industrial. O maracuj-roxo muito apreciado na Austrlia e na

190

Germoplasma e melhoramento gentico do maracujazeiro Uma viso geral

frica do Sul, sendo usado para fazer suco ou consumido como fruta fresca. O
maracuj-doce tem sua produo e comercializao limitada pela falta de
hbito de consumo e pelo desconhecimento pela maioria da populao. Ao
contrrio do maracuj-azedo, o maracuj-doce consumido exclusivamente
como fruta fresca (Souza & Melleti, 1997).
O cultivo do maracujazeiro em escala comercial teve incio no comeo
da dcada de 1970, com o maracuj-azedo. Atualmente, segundo Lima
(2001), o agronegcio do maracuj no Brasil gera R$ 500 milhes, emprega
250.000 pessoas e pode gerar de 5 a 6 empregos diretos e indiretos por
hectare, durante dois anos, com apenas R$ 12.000,00 de investimentos,
fazendo com que tal cultura seja excelente alternativa para a agricultura
familiar. Em 2000, a espcie P. edulis f. flavicarpa ocupava, no Brasil, rea de
aproximadamente 33.400 ha com uma produo de 330,8 mil toneladas e
produtividade de 9,9 t/ha (Frutisries, 2002).
Apesar da grande importncia econmica do maracuj atual e
potencial, incipiente o nmero de cultivares comerciais lanado no
mercado com caractersticas definidas e garantia de origem. Os plantios
comerciais tm-se limitado simplesmente ao emprego de sementes
botnicas do maracuj-azedo, do maracuj-roxo e do maracuj-doce. No
caso do maracuj-azedo, algumas variedades botnicas como Gigante
Amarelo, Redondo, Moranga, Vermelho, Marlia Longo, Marlia Seleo
Cerrado, IAC 277, IAC 275 tm sido avaliadas para a produtividade e
resistncia a doenas. Estudos preliminares tm mostrado que existe
pouca variabilidade gentica entre as cultivares atuais para a resistncia a
doenas (Junqueira et al., 2003; Nascimento, 2003). Estudos de gentipos de
maracujazeiro-azedo, cultivados no Rio de Janeiro, baseados em
caractersticas morfoagronmicas e marcadores RAPD (Random Amplified
Polymorphic DNA), tambm no mostraram expressiva variabilidade
gentica (Pio Viana et al., 2002a, 2002b; Pio Viana et al., 2003).
Por sua vez, espcies silvestres do gnero Passiflora (P. laurifolia, P.
nitida, P. tenuifilla, P. mucronata, P. giberti, P. amethytina, P. quadrangularis, P.
setacea, P. coccinea, P. caerulea, entre outras) tm apresentado, com base

191

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

em estudos preliminares, variabilidade para resistncia s principais doenas


do maracujazeiro (Cunha et al., 2002; Santos Filho & Junqueira, 2003) e
tambm variabilidade ao nvel do DNA (Vieira et al., 1997; Angel et al., 1998;
Cassiano et al., 1998; Crochemore, 2002; Pio Viana et al., 2003; Faleiro et al.,
2004a, 2005a). Vrias dessas espcies tm sido citadas como potenciais
fontes de resistncia que podem contribuir para o controle de doenas
causadas por fungos (Santos Filho & Santos, 2003) por bactrias (Seixas,
1989, Santos & Santos Filho, 2003) e por alguns vrus (Rezende, 1994). Alm
disso, tais espcies tambm poderiam ser testadas como porta-enxertos
visando resistncia a fungos de solo e morte precoce, considerando que
existe um potencial j referenciado na literatura (Maldonado, 1991; Junqueira
et al., 2002; Santos Filho & Santos, 2003). Esses resultados mostram que tais
espcies apresentam grande potencial, entretanto, estudos bsicos e
essenciais de caracterizao agronmica e molecular de tais espcies
praticamente no existem.
A caracterizao e a explorao da variabilidade gentica entre as
espcies de Passiflora e, tambm, dentro da espcie cultivada (P. edulis f.
flavicarpa) podem revelar fontes de resistncia ou tolerncia de grande
valor para o controle dessas doenas no campo ou utilizao em
programas de melhoramento gentico. Alm das espcies silvestres, o uso de
variedades comerciais em programas de melhoramento necessrio com a
finalidade de fornecer genes relacionados produtividade e qualidade dos
frutos. Segundo Meletti et al. (1992), Souza & Meletti (1997) citado por Oliveira
& Ruggiero (1998) possvel e recomendvel utilizar a variabilidade gentica
natural da espcie comercial P. edulis f. flavicarpa em programas de
melhoramento gentico, com significativos ganhos. Tal variabilidade j foi
observada por Landgraf (1978), Oliveira (1980), Maluf et al. (1989), entre
outros. Estudos mais aprofundados de caracterizao agronmica e
molecular de variedades comerciais de maracuj so necessrios e de grande
interesse para o melhoramento gentico, orientando a escolha de genitores e
o planejamento dos cruzamentos. Segundo Cunha (1998a), estudos acurados
e detalhados da variabilidade gentica do maracujazeiro podero indicar

192

Germoplasma e melhoramento gentico do maracujazeiro Uma viso geral

recursos genticos valiosos sejam novas espcies nos sistemas de produo


como opes adicionais aos maracujazeiros azedo e doce, sejam genes de
espcies silvestres ou selvagens teis ao melhoramento das atuais espcies
cultivadas. Nesse sentido, esse mesmo autor aponta que tais estudos so
prioritrios para as pesquisas com o maracuj.

Germoplasma de Passiflora no Brasil


O Brasil um dos mais importantes centros de diversidade do
maracuj, pois muitas espcies selvagens de Passiflora so nativas,
notadamente, no Centro-Norte do Pas (Ferreira, 1994). Estima-se que mais de
200 espcies de Passiflora sejam nativas do Brasil (Oliveira et al., 1988). Alm
desse nmero expressivo de espcies, deve-se enfatizar que, em geral, existe
material ainda no descrito que provavelmente constitua espcie nova
(Ferreira, 1994). Afora essa ampla variabilidade interespecfica, h de se
destacar que, na espcie cultivada P. edulis, existe tambm variabilidade,
tendo em vista que uma espcie algama e apresenta autoincompatibilidade (Ruggiero et al., 1975) e compatibilidade interespecfica
(Lopes, 1991), notadamente, aquelas espcies compatveis com as cultivadas,
com 2n=18 (Ferreira, 1998).
Segundo Ferreira (1994), o Sistema Nacional de Recursos Genticos
conta com dois componentes bsicos: a Embrapa Recursos Genticos e
Biotecnologia e os Bancos Ativos de Germoplasma, espalhados por todo
territrio brasileiro, a exemplo dos bancos da UNESP/FCAVJ, em Jaboticabal,
SP, da Embrapa Mandioca e Fruticultura Tropical, em Cruz das Almas, BA.
Cunha (1998b) relata os atuais acessos disponveis no banco de germoplasma
da Embrapa Mandioca e Fruticultura Tropical. Alm desses dois bancos, tmse, no Brasil, outras colees ativas ou colees de trabalho de Passiflora,
mantidas por diversas instituies, tais como: EBDA e UESB na Bahia, IAPAR
no Paran, IAC e ESALQ em So Paulo, Embrapa Cerrados e UnB no Distrito
Federal.

193

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Apesar da grande variabilidade gentica natural do maracuj, a


preocupao em preserv-la no tem sido expressiva, em mbito nacional e
mundial, visto que o material mantido em colees modesto (Souza &
Meletti, 1997). Em levantamento realizado pelo International Board for Plant
Genetic Resources (IBPGR), foi verificado que apenas 15 pases mantm
colees de germoplasma de Passiflora (Gulick & Van Sloten, 1984), sendo
o nmero de acessos inferior a quatrocentos (Souza & Meletti, 1997).
Ferreira (1998) registrou os acessos dos principais bancos de germoplasma
de maracuj no mundo. No Brasil, ainda existe preocupao com a
ampliao de novas reas do Centro-Norte para fins agrcolas, o que
implica a eliminao de espcies selvagens e o desaparecimento de muitos
gentipos que poderiam ser empregados, por exemplo, no melhoramento
gentico do maracuj-azedo. Para minimizar o problema, importante a
criao, ampliao e manuteno de maior nmero de bancos de
germoplasma. Alm disso, so necessrios trabalhos minuciosos de
caracterizao morfolgica, agronmica, citogentica e molecular de todos
os acessos. Com esses trabalhos, estaria garantida sua utilizao prtica
em cultivos comerciais, em programas de melhoramento gentico, como
porta-enxertos, em intercmbio de germoplasma, bem como o uso de
princpios ativos, molculas e genes desse valioso patrimnio gentico.
Segundo Ferreira (1994), no obstante a importncia da cultura do
maracuj para o Brasil, nota-se uma carncia de pesquisa, notadamente
nas reas bsicas, em relao a germoplasma e taxonomia. Tais estudos
so fundamentais para a utilizao da variabilidade gentica em programas
de melhoramento e para subsidiar uma futura e estratgica relao de
intercmbio de germoplasma em nvel mundial, uma vez que a demanda
desse material tem sido cada vez maior. Infelizmente, por questes polticas
e fitossanitrias, esse intercmbio est cada vez mais restrito, continuando
a ser o material existente na natureza a maior fonte de germoplasma, no
momento atual (Ferreira, 1998). Segundo Cunha (1998a, 1998b, 1998c),
expandir a variabilidade gentica existente nas colees, caracterizar e
avaliar o germoplasma e utiliz-los em programas de melhoramento so
prioridades da pesquisa relacionada a recursos genticos do maracuj.

194

Germoplasma e melhoramento gentico do maracujazeiro Uma viso geral

Utilizao do germoplasma de Passiflora em pr


ogramas
programas
de melhoramento gentico e como por
ta-enxer
to
porta-enxer
ta-enxerto
visando rresistncia
esistncia a doenas
O maracujazeiro-azedo atacado por vrias doenas causadas por
fungos, bactrias e por vrus e similares, afetando o sistema radicular e a
parte area (Santos Filho & Junqueira, 2003). Entre elas, destaca-se a
morte precoce do maracujazeiro (agente causal no identificado), virose do
endurecimento do fruto (PWV), bacteriose (Xanthomonas axonopodis pv.
passiflorae) fusariose (Fusarium oxysporum f.sp. passiflorae), antracnose
(Colletotrichum gloeosporioides) e verrugose (Cladosporium spp.)
(Ruggiero et al., 1996).
Nas revises de literatura, feitas por Oliveira et al. (1994) e Oliveira &
Ruggiero (1998), so citados vrios usos do germoplasma de Passiflora
como potenciais fontes de resistncia a doenas em programas de
melhoramento gentico ou como porta-enxertos. Purss (1958) verificou que
algumas espcies de Passiflora (P. aurantia, P. incarnata, P. suberosa, P.
herbetiana, P. edulis foram resistentes fusariose. Oliveira et al. (1984)
estudaram a sobrevivncia de plantas de P. edulis, enxertadas em P. giberti,
em rea com histrico de ocorrncia de morte precoce, e observaram uma
porcentagem de sobrevivncia de mais de 93% das plantas enxertadas e
menos de 5% das plantas de p-franco. Seixas et al. (1988), utilizando P.
macrocarpa como porta-enxerto, observaram uma porcentagem de
sobrevivncia de 44% das plantas enxertadas e 0% das plantas de pfranco aps dois anos e meio de cultivo em rea com histrico de morte
precoce e presena de nematides. Yamashiro & Landgraff (1979)
verificaram a resistncia das espcies P. alata, P. macrocarpa e P.
quadrangularis fusariose e recomendaram-nas como porta-enxerto do
maracujazeiro-azedo. Oliveira & Ruggiero (1998) citaram o potencial das
espcies P. alata, P. nitida, P. macrocarpa, P. setacea, P. giberti, P. laurifolia e
P. suberosa como fontes de resistncia a doenas em porta-enxerto do
maracuj-azedo ou em programas de melhoramento gentico. Esses
mesmos autores citam as espcies P. giberti, P. maliformis, P. cincinnata, P.

195

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

laurifolia, P. caerulea e P. setacea como promissoras fontes de resistncia


bacteriose e as espcies P. edulis, P. laurifolia, P. setacea, P. giberti e alata
verrugose. Oliveira et al. (1994) mostraram, com base em inoculaes
controladas, a imunidade da espcie P. nitida antracnose. Em relao ao
PWV, segundo Leo (2001), no h relatos de fontes de imunidade em
plantas do gnero Passiflora, embora diferentes nveis de resistncia
tenham sido verificados mesmo dentro da espcie P. edulis f. flavicarpa.
Para que toda essa variabilidade gentica para resistncia a doenas
seja aproveitada em programas de melhoramento, torna-se necessria a
realizao de hibridaes intra-especficas ou o uso da biotecnologia
moderna na obteno de hbridos somticos ou na utilizao da tecnologia
do DNA recombinante e engenharia gentica.
Oliveira & Ferreira (1991) obtiveram muitos hbridos interespecficos.
Priolli (1991) caracterizou plantas oriundas de cruzamentos entre P. edulis e
Passiflora sp.; de P. edulis e P. gilberti. Relatos preliminares mostraram
progresso na transferncia de resistncia a nematides de P. edulis para P.
coccinea. Por sua vez, Oliveira & Ruggiero (1998) relataram alguns
problemas com os hbridos interespecficos, como a suscetibilidade
doena, falta de adaptao, baixo vigor, macho esterilidade, produo de
plen invivel, entre outros. Por exemplo, o hbrido P. edulis vs. P. gilberti
apresentou macho esterilidade, com reduzida produo de plen vivel; o
hbrido P. edulis vs. P. alata permitiu a obteno de plantas F2, entretanto, os
descendentes apresentaram alta suscetibilidade a doenas da parte area
e o hbrido P. edulis vs. P. setacea permitiu a obteno de plantas F2 e RC1,
embora tais plantas apresentassem problemas de suscetibilidade morte
precoce e macho esterilidade. No programa de melhoramento gentico do
maracujazeiro realizado na Embrapa Cerrados, hbridos interespecficos de
P. edulis f. flavicarpa com P. setacea, P. coccinea e P. caerulea tm sido
obtidos com sucesso e confirmados com base em marcadores moleculares
(Faleiro et al., 2005b).
Em relao ao uso da biotecnologia moderna na obteno de
hbridos somticos, vrios autores tm obtido sucesso utilizando as

196

Germoplasma e melhoramento gentico do maracujazeiro Uma viso geral

espcies P. edulis f. flavicarpa, P. incarnata, P. alta, P. amethystina, P. cincinnata,


P. gilberti e P. coccinea (Otoni et al., 1995; Dornelas & Vieira, 1993; Dornelas
et al., 1995; Barbosa & Vieira, 1997; Barbosa, 1998). A hibridao somtica,
via fuso de protoplastos, representa alternativa de transferncia de genes
presentes em espcies selvagens para a espcie cultivada. Tcnicas de cultura
de tecidos e de protoplastos de vrias espcies de Passiflora foram
estabelecidas por pesquisadores da ESALQ. Hbridos somticos, envolvendo
a espcie cultivada e espcies selvagens de Passiflora, devido sua natureza
tetraplide prestam-se, em princpio, como porta-enxertos, uma vez que seus
caules so mais vigorosos do que o parental selvagem resistente. A obteno
desses hbridos laboriosa, sendo evidente a necessidade de avaliar seu
potencial agronmico em programas de melhoramento do maracujazeiro,
visando resistncia a doenas. O pareamento homelogo e a ocorrncia de
recombinao so essenciais para a introduo de genes de espcies
selvagens para a espcie domesticada. Em relao engenharia gentica,
grupos de pesquisa da ESALQ e da UFV tm trabalhado na obteno de
plantas transgnicas para resistncia bacteriose e resistncia a PWV. Sendo
o maracuj uma cultura em franca expanso, muito pouco estudada e com
ampla base gentica a ser explorada, possvel que muito ainda deva ser feito
em estudos bsicos e melhoramento gentico convencional com boas
perspectivas de ganhos genticos.
Segundo Oliveira & Ruggiero (1998), estudos detalhados de biologia
floral e cruzamentos controlados precisam ser realizados para incorporar
genes favorveis de espcies silvestres nas espcies P. edulis f. flavicarpa e
P. alata. Souza & Pereira (2000) e Souza et al. (2002) estudaram o
desenvolvimento do gro de plen e do saco embrionrio de P. edulis f.
flavicarpa distinguindo com mais detalhes todos os estgios do processo
de formao dos gametas. Segundo Akamine & Girolami (1959), a abertura
da flor ocorre de meio-dia at noite no maracuj-amarelo, e a polinizao
feita, em especial, por insetos, sendo a mamangava o principal agente
polinizador. Segundo Vallini et al. (1976), o maracuj-amarelo uma planta
de dia longo, necessitando de fotoperodos superiores a 11 horas para o
florescimento. Segundo Akamine & Girolami (1959), um mnimo de 190 gros

197

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

de plen necessrio para efetivar a polinizao com a formao de frutos,


sendo de dois a sete gros de plen para cada semente formada. Segundo
esses autores, a melhor hora para a polinizao, quando o estilete curva-se
totalmente, aps a antese. De acordo com a curvatura do estilete, Ruggiero
et al. (1976) verificaram que ocorrem trs tipos de flor no maracuj-amarelo: de
estiletes totalmente curvos, parcialmente curvos e sem curvatura. Segundo
esses autores, as flores com estiletes sem curvatura no frutificam devido
inviabilidade dos vulos, contudo, apresentam plen vivel quando transferido
para os outros tipos de flor.
A auto-incompatibilidade tambm uma caracterstica importante da
biologia floral encontrada em maracujazeiro-amarelo (Knight Jnior & Winters,
1962; Akamine & Girolami, 1959). Tal caracterstica tem implicaes
importantes nas metodologias de melhoramento gentico (Allard, 1966) por
induzir a alogamia e o alto grau de heterozigose, alm de ter influncias na
compatibilidade entre cruzamentos. Por sua vez, Payan & Martin (1975) no
consideraram a auto-incompatibilidade uma barreira em cruzamentos
interespecficos, sendo a falta de estmulo hormonal o principal obstculo
hibridao. Segundo eles, a aplicao de substncias promotoras de
crescimento no ovrio possibilitou a produo normal de frutos, o mesmo
sendo conseguido pela polinizao dupla, na qual dois estigmas so
polinizados por outra espcie e o terceiro por uma planta compatvel da
mesma espcie. Bruckner (1994) demonstrou que a auto-incompatibilidade
em maracujazeiro do tipo homomrfica e esporoftica, de herana
monofatorial e que possvel a autofecundao quando as flores esto na prantese.
Oliveira & Ruggiero (1998) relatam que a transferncia de resistncia de
P. setacea para P. edulis a mais promissora, embora estudos devam ser feitos
para contornar a macho esterilidade dos descendentes hbridos e as
dificuldades das metodologias de avaliao da resistncia gentica. Estudos
detalhados de caracterizao da gentica da resistncia em espcies
cultivadas e silvestres so essenciais para subsidiar a utilizao do
germoplasma de Passiflora em programas de melhoramento gentico e como
porta-enxerto visando resistncia a doenas.

198

Germoplasma e melhoramento gentico do maracujazeiro Uma viso geral

O melhoramento gentico do maracujazeiro


A introduo de plantas, mtodos de seleo massal, entre e dentro de
famlias de meios-irmos e irmos completos, seleo recorrente e a seleo
clonal mostraram a eficincia, principalmente, para o aumento da
produtividade (Oliveira, 1980; Maluf et al., 1989; Cunha et al., 1997a, 1997b;
Meletti et al., 2000). Segundo Cunha (1996, 1998a), tais estudos precisam ser
conduzidos de forma sistematizada, embora reconhea a escassez de
recursos no s financeiros, mas tambm humanos, com poucos se
dedicando integralmente ao maracuj. Segundo esse autor, cruzamentos
podem ser realizados entre plantas irms, retrocruzamentos e autopolinizao,
no havendo problemas em relao tcnica de hibridao e utilizao da
heterose em maracuj, devendo-se levar adiante programas de hibridao
como prioridade.
Nos ltimos anos, tem-se observado reduo na produtividade do
maracujazeiro (Frutisries, 2002), o que se deve, principalmente, ocorrncia
de doenas nessa cultura, as quais depreciam a qualidade do fruto,
diminuindo seu valor comercial e reduzindo a produtividade e a longevidade
da cultura. Oliveira et al. (1994) comentam que, em algumas regies, a cultura
tem-se comportado como nmade, ou seja, tem um perodo curto de vida, de
1 a 2 anos; em outros, a vida til tem sido de 3 a 5 anos e explicam que, em
local indene, onde a cultura nunca foi comercialmente cultivada, em geral,
inexistem problemas graves, mas medida que a populao de
maracujazeiros cresce, crescem tambm os problemas fitossanitrios,
principalmente, com as doenas, reduzindo drasticamente a vida til da
lavoura.
Para atenuar o problema, produtores vm aplicando fungicidas e
antibiticos, o que onera os custos de produo e diminui a qualidade
mercadolgica devido presena de resduos de agroqumicos em frutos,
alm de afetar o meio ambiente com resduos de agroqumicos no solo, no ar
e na gua e colocar em risco a sade dos trabalhadores rurais e
consumidores. A intensificao do uso de defensivos agrcolas tem onerado

199

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

de tal forma a produo que, juntamente com a reduo da longevidade da


lavoura, tem tornado o cultivo do maracuj economicamente invivel.
O uso de cultivares resistentes, bem como o de outras tcnicas de
manejo integrado tem sido a medida mais eficaz, econmica e ecolgica de
controle de doenas. O desenvolvimento de variedades resistentes a doenas
bsico para todas culturas agrcolas visando: minorar custos de produo,
garantir a segurana de trabalhadores agrcolas e de consumidores e a
qualidade mercadolgica, a preservao do ambiente e a sustentabilidade do
agronegcio (Quirino, 1998). No caso do maracuj (Passiflora edulis f.
flavicarpa), tal estratgia ainda mais necessria considerando a alta
suscetibilidade das atuais cultivares virose do endurecimento dos frutos
(PWV), antracnose, septoriose, verrugose e bacteriose (Junqueira et al., 2003).
As hibridaes intra e interespecficas tm sido relatadas com
resultados promissores por Oliveira (1980), Oliveira et al. (1994), Vanderplank
(1996) e por vrios autores citados neste projeto, sendo que hbridos tm sido
produzidos na natureza e pela interveno do homem. Espcies silvestres de
maracuj nativas e espontneas no Centro-Norte brasileiro so alternativas
para a ampliao da base gentica da resistncia, entretanto, trabalhos de
melhoramento gentico so necessrios para combinar a resistncia com
caractersticas de produtividade e qualidade de frutos. Mtodos de
melhoramento, baseados em hibridaes interespecficas, tm sido citados
como promissores, embora possam existir alguns problemas dos hbridos F1
relacionados a macho esterilidade, viabilidade de plen, falta de adaptao e
suscetibilidade s doenas de parte area (Oliveira & Ruggiero, 1998). O
mtodo do retrocruzamento tem sido muito utilizado para incorporao de
genes de resistncia em variedades comerciais.
Marcadores moleculares do DNA tm sido empregados como
ferramenta auxiliar nas diferentes etapas do melhoramento gentico, desde a
caracterizao do germoplasma at as etapas finais de seleo de plantas
melhoradas (Ferreira & Grattapaglia, 1997). No caso do mtodo dos
retrocruzamentos, os marcadores moleculares do DNA apresentam aplicao
adicional para acelerar a recuperao do genoma recorrente por meio da

200

Germoplasma e melhoramento gentico do maracujazeiro Uma viso geral

metodologia de gentipos grficos (Young & Tanksley, 1989). O potencial


dessa metodologia foi levantado por Openshaw et al. (1994) e vem sendo
utilizada com sucesso no melhoramento gentico do feijoeiro (Faleiro et al.,
2004b; Souza et al., 2003) e do maracujazeiro (Faleiro et al., 2004c) visando
resistncia a mltiplas doenas. A reduo do tempo necessrio para a
recuperao do genoma recorrente feita diminuindo o nmero de
retrocruzamentos de oito ou nove para trs ou quatro.
Considerando que o maracuj uma cultura em franca expanso,
pouco estudada e ainda em fase de domesticao, trabalhos de
melhoramento gentico so cada vez mais necessrios com a finalidade de
equacionar problemas como baixa produtividade, falta de adaptao a certos
ecossistemas, no-atendimento a exigncias do consumidor e indstria e
principalmente suscetibilidade a vrias doenas. Logicamente, cada regio
produtora deve desenvolver suas variedades de maracuj-azedo e doce que
atendam as exigncias de toda cadeia produtiva e que permitam que tal
atividade seja desenvolvida de forma econmica, sustentvel e com menor
impacto ao meio ambiente.

Consideraes Finais
Programas de conservao, caracterizao e uso de germoplasma de
maracujazeiro so cada vez mais importantes e estratgicos, considerando
que o Centro-Norte do Brasil o maior centro de distribuio geogrfica, que
a base gentica do maracujazeiro-doce e do azedo deve ser ampliada e que
existe potencial pouco explorado de utilizao do maracujazeiro como planta
ornamental e medicinal. Programas de melhoramento gentico tambm so
estratgicos uma vez que o maracujazeiro uma cultura em franca expanso
com problemas agronmicos que podem ser equacionados por tais
programas. Nesse sentido, as demandas de pesquisas so inmeras e
somente podero ser atendidas com o esforo conjunto da iniciativa pblica e
privada e com a formao de redes de pesquisa interinstitucionais e
multidisciplinares que garantam a continuidade da pesquisa e sua atuao nas
diferentes fases dos programas de conservao e uso de germoplasma e de
melhoramento gentico do maracujazeiro.

201

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Referncias

Bibliogrficas

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209

O maracujazeiro uma planta mutante


Por ser filho dileto da selva tropical
Suas folhas conservam o verde pujante
Para sobressair como espcie vegetal.
Num remoto passado agora distante
Talvez por contemplar um recurso natural,
Buscou da natureza cada tom resultante
Para vestir suas flores com a cor do local.
Geovane Alves de Andrade

Citogentica clssica e molecular em


passifloras
Marta Dias Soares-Scott
Laura Maria Molina Meletti
Lus Carlos Bernacci
Ilene Ribeiro da Silva Passos

Introduo

citogentica desenvolveu-se principalmente a partir do incio


do sculo passado, e seu progresso acompanhou o
aprimoramento de tcnicas e equipamentos de microscopia.
a cincia que estuda os constituintes celulares portadores da informao
gentica (cromossomos). Com o renascimento das leis de Mendel, surgiu a
teoria da herana cromossmica que relaciona os cromossomos com as leis
mendelianas de herana sendo um marco para o estudo dos cromossomos,
no qual a citologia e a gentica passaram a sobrepor seus conhecimentos
numa rea denominada Citogentica.

Citogentica

clssica

A partir da forma e do nmero de cromossomos de uma espcie,


estabelecido seu caritipo. A representao do caritipo pode ser um
cariograma (imagem dos cromossomos) ou um ideograma (esquema dos
cromossomos) e ele que fornece as informaes substanciais para o
estabelecimento das relaes entre espcies, com respeito organizao dos
cromossomos.
Estudos cromossmicos tm sido utilizados na determinao das
relaes filogenticas e evolutivas entre grupos de plantas (Raven, 1975).

213

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

A anlise citogentica comumente utilizada na citotaxonomia vegetal


inclui basicamente o nmero e a morfologia dos cromossomos mitticos, o
aspecto do ncleo interfsico, o comportamento de cromossomos meiticos
e a microsporognese (Vosa, 1985; Guerra, 1988).
A anlise cariotpica, envolvendo a avaliao de dados como tamanho
de cromossomos, relao entre os braos, presena de constrio secundria
e satlite, propriedades de colorao, pode trazer informaes valiosas,
principalmente, quando se quer comparar espcies diferentes ou examinar a
variao entre indivduos da mesma espcie (Ruas, 1989). Rearranjos
estruturais podem ser detectados por meio de diferenas no tamanho relativo,
posio de centrmero, nmero bsico de cromossomos (x) e nmero,
tamanho e posio de satlites.
Variaes quanto ao nmero, posio e tamanho de constries
secundrias e de satlite so freqentemente observadas em vegetais, sendo
teis como marcadores. Murray (1975) e Stebbins (1971) sugerem que esses
marcadores possam ser incorporados ou suprimidos ao longo do processo
evolutivo.

Telfase

Prfase

Cedoc

Lamela
mdia

Cedoc

Cedoc

Nessa anlise cromossmica para determinao de um caritipo, so


utilizadas coloraes ditas convencionais usando corantes como Giemsa,
Orcena Actica, reativo de Schiff, hematoxilina/eosina (Figura 1).

Metfase

Anfase

Figura 1. Diviso celular, fases da mitose.

214

Citogentica clssica e molecular em passifloras

A diviso meitica tem sido descrita e estudada em diferentes


organismos, mostrando alta estabilidade evolutiva. Alteraes cromossmicas,
quando aparecem, podem ser barradas pela complexidade desses eventos
pela dificuldade no pareamento dos cromossomos, na formao e na
manuteno de quiasmas e na co-orientao dos centrmeros (MoraesFernandes et al., 1985). Alguns estudos tm mostrado a ocorrncia de
irregularidades meiticas em clulas-me de plen que est relacionada com
o comportamento e a distribuio dos cromossomos. As irregularidades mais
freqentes so: presena de clulas com alterao de nmero cromossmico;
ocorrncia de univalentes por falta de pareamento de alguns pares de
homlogo; bivalentes no orientados por problemas de fuso; pontes,
terminalizao inadequada de quiasmas; microncleos resultantes de quebras
ou univalentes (Consolaro et al., 1996; Pagliarini, 1990; Soares-Scott al., 2003).
A fertilidade dos gametas masculinos e femininos dependente da
normalidade meitica.
A poliploidia o tipo de variao cromossmica predominante na
evoluo das plantas, sendo de fundamental interesse para o melhoramento
vegetal. Diferentes tipos de clula podem sofrer ciclos endomitticos ou
mesmo um erro meitico (no-reduo cromossmica) e resultam em clulas
poliplides (Guerra, 1988).
Dentro de um gnero ou mesmo de uma espcie, podem ocorrer
diversos nmeros gamticos que so mltiplos perfeitos, denominados de
srie poliplide, sendo considerado como nmero bsico o menor nmero
haplide dessa srie, representado por x (Rieger et al., 1976; Guerra, 1988).
Do mesmo modo, quando se trabalha com qualquer grupo vegetal a fim
de desenvolver novas combinaes e cruzamentos, necessrio conhecer o
nmero, o tamanho e a forma dos cromossomos, alm de marcadores teis
para o reconhecimento de cada par cromossmico. A partir das informaes
citogenticas de duas espcies de plantas, pode-se prever a viabilidade de um
possvel hbrido. Moraes-Fernandes et al. (2000) enfatizam que o
conhecimento sobre relaes citotaxonmicas, estrutura citogentica e
histria evolutiva das espcies envolvidas nos cruzamentos tambm

215

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

importante para a escolha da espcie doadora de caractersticas como


resistncia a doenas e fornecem contribuio valiosa ao melhoramento
varietal (Moraes-Fernandes, 1982). Vrios genes de resistncia a estresses
biticos e abiticos esto localizados em cromossomos homelogos com
distncias similares do centrmero, sugerindo que eles devem representar
variantes allicas em diferentes locos homelogos. Como a homologia no
perfeita, pois no ocorre com todos os genes, os cromossomos so
chamados homelogos (Moraes Fernandes, 1982; Law et al., 1987). A
introduo de genes pode ser incrementada por procedimentos eficientes
para a deteco de cromossomos ou segmentos cromossmicos (Jiang et al.,
1994), pois o estado hbrido de uma planta pode ser determinado pelo
nmero somtico de cromossomos e tambm pelo comportamento meitico
(Sharma & Gill, 1983; Sethi, 1989).

Colorao diferencial, bandeamentos


A caracterizao cromossmica foi por muito tempo baseada
unicamente em parmetros morfolgicos, como tamanho dos braos,
posio dos centrmeros e localizao das constries secundrias
(Figura 2).
A introduo das tcnicas de bandeamento permitiu a visualizao de
blocos de colorao diferenciada, essas regies geralmente aparecem como
faixas transversais mais coradas nos cromossomos, recebendo assim a
denominao de bandas, permitindo que a caracterizao cromossmica seja
significativamente melhorada.
Os bandeamentos identificam a distribuio e a quantidade de
heterocromatina (C, G, N), diferenciao de tipos de heterocromatina (AT e
CG) usando fluorocromos (DAPI e CMA), localizao de regies organizadoras
de nuclolo, mediante impregnao pela prata (Ag-NOR). Estes so
importantes para a identificao de cromossomos homlogos e homelogos
e para a caracterizao de polimorfismos ou de relaes de parentesco entre
espcies prximas, distinguindo possveis rearranjos cromossmicos.

216

Citogentica clssica e molecular em passifloras

Figura 2. Esquema de cromossomo metafsico com bandas.

As tcnicas de bandeamento cromossmico expandiram os horizontes


da citogentica, e a primeira aplicao do bandeamento deu-se no
pareamento cromossmico. Essas tcnicas tm possibilitado compreender
melhor as alteraes cromossmicas que se estabelecem em cada gentipo
(Guerra, 1988).
O bandeamento C diferencia regies de heterocromatina constitutiva
que so seqncias de DNA altamente repetitivas as quais no codificam
protenas (no tm atividade gnica). Outra caracterstica desse tipo de
cromatina seu alto grau de condensao em quase todas as fases do ciclo
celular. Ela se concentra em blocos, distribudos preferencialmente em
algumas regies dos cromossomos, como ao redor da constrio secundria,
e em pores proximais e terminais. Essa distribuio, como tambm o
tamanho dos blocos, igual nos cromossomos homlogos.

217

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Assim, esse procedimento pode ser empregado na caracterizao de


diferentes acessos de uma mesma espcie, na identificao de linhas de
adio e de substituio (Friebe et al., 1993) e na deteco de alteraes
estruturais, como delees, inverses e translocaes (Gill et al., 1991).
O bandeamento N um procedimento inicialmente reportado por
Gerlach (1977) e modificado por Endo & Gill (1984). Consiste na imerso das
lminas em cido actico 45% quente e uma curta imerso em tampo fosfato
quente. Assim como o bandeamento C, o bandeamento N uma tcnica
usada na anlise de caritipos e na construo de ideogramas (Jewell, 1979;
Gill et al., 1991).
O DNA ribossmico (DNAr) responsvel pela sntese de protenas por
meio da transcrio dos diferentes tipos de RNAr. Esses genes esto
localizados em pores que, aps a compactao, formam as constries
secundrias, denominadas regies organizadoras de nuclolos ou RONs. Para
a deteco das RONs so utilizadas diversas tcnicas. A mais comum a da
impregnao pela prata, o bandeamento com a prata, (AgAS) que detecta as
regies ativas na interfase precedente pela associao da prata com as
protenas nucleolares (Howell & Black, 1980; Margarido & Galettip, 2000). Nem
toda constrio secundria pode ser considerada regio organizadora de
nuclolo.
A tcnica de bandeamento C-CMA/DAPI um procedimento de
colorao com os fluorocromos CMA (reconhece stios ricos em GC) e DAPI
(reconhece stios ricos em AT) aplicado aps o desgaste cromossmico pelos
passos normais de bandeamento: hidrlise cida, relaxamento dos
cromossomos com hidrxido de brio 5% e retirada de cromatina com 2xSSC.
Esse tipo de tratamento oferece maior contraste entre as regies marcadas
pelos fluorocromos e o restante dos cromossomos, proporcionando melhor
diferenciao entre regies ricas em GC (CMA+/DAPI-), AT (CMA-/DAPI+) e
balanceada GC/AT ou neutra (CMA0/DAPI0).
O fato de se detectar a ocorrncia e a posio fsica de diferentes
famlias de DNA altamente repetido (heterocromatina) implica maior
compreenso de como os genomas esto organizados e as relaes entre

218

Citogentica clssica e molecular em passifloras

espcies, gneros e famlias, bem como os mecanismos de ajustes que


ocorrem nos caritipos de diferentes organismos durante o processo evolutivo.

Citogentica

molecular

Mais recentemente, com o advento das tcnicas em Biologia Molecular,


a citogentica tem acumulado refinamentos, sobretudo, os relacionados com
a localizao de genes ou de seqncias de DNA repetitivo. Esses estudos so
possveis com as Hibridaes Fluorescentes in situ ou FISHs. Alm dessas, a
hibridao de genomas inteiros, atravs de GISH (Hibridao Genmica in
situ), tem fornecido interessantes dados sobre o estudo de hbridos e espcies
proximamente relacionadas. Essas tcnicas tm sido amplamente utilizadas
para localizar diferentes seqncias de DNA em cromossomos mitticos ou
meiticos, em ncleos interfsicos e em fibras de cromatina estendidas (Dong
et al., 2001). A deteco dessas seqncias in situ tem gerado avanos
importantes na citogentica de plantas, destacando-se a construo de
mapas fsicos, a investigao detalhada da estrutura cromossmica, o
acompanhamento da quantidade de cromatina introduzida em cruzamentos
interespecficos e a anlise de pareamentos intergenmicos em plantas
hbridas.
A tcnica de FISH (fluorescent in situ hybridization) tornou-se a mais
promissora dentro da Citogentica nos ltimos anos. Os segmentos de DNA
ou RNA, marcados, funcionam como sondas para localizar as seqncias do
DNA cromossomal complementares a ela e reconhecem especificamente um
nico par cromossmico, regies especficas, tais como centrmeros e
telmeros ou at mesmo um stio especfico denominado DNA-alvo. Para
visualizar as regies hibridizadas com a sonda, necessrio associar um
corante sonda e outro ao restante dos cromossomos. A deteco da sonda
era feita, inicialmente, por auto-radiografia, utilizando radioistopos ou pela
associao da seqncia de DNA com um sistema enzimtico (geralmente a
fosfatase alcalina). Atualmente, realizada mediante o emprego de
fluorocromos (molculas que fluorescem quando excitadas por um
comprimento de luz especfico). A marcao das sondas envolve a

219

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

incorporao de anlogos de nucleotdeos trifosfatados, diretamente


associados a compostos fluorescentes (marcao direta), ou a molculas
reprteres marcadoras que sero detectadas atravs de reagentes
secundrios (deteco indireta). As molculas marcadoras mais usadas na
marcao indireta so a biotina e a digoxigenina, enquanto os fluorocromos
mais utilizados para sinalizar a presena das sondas so o FITC (isotiocianato
de fluorescena), de cor verde, e a rodamina, de cor vermelha. O primeiro
passo o desenvolvimento da sonda que so seqncias de DNA,
geralmente, com cerca de 100 a 300 pb at acima de 1Mpb, complementar ao
DNA-alvo (Figura 3).
Essas seqncias podem ser cpias de um gene ou de qualquer
fragmento do DNA que possa ser isolado. Sondas contendo elementos
repetitivos, usados para detectar regies heterocromticas ou grandes
repeties gnicas so particularmente teis no mapeamento e estudo
evolutivo dessas seqncias nos genomas vegetais.
O grau de especificidade cromossmica varia de sonda para sonda e
depende, em muitos casos, do rigor da reao de hibridao. A
especificidade de uma hibridao est baseada no princpio da
complementaridade das bases na dupla fita.
As primeiras seqncias detectadas foram as de DNA repetitivo cujas
unidades de repetio podem estar distribudas em tandem ou dispersas ao
longo do genoma. As seqncias em tandem ocorrem em blocos de centenas
a milhares de cpias, localizadas em um ou mais stios de um dado genoma.
Essa categoria inclui DNA codificante, como genes para RNAr, e nocodificante, como DNA telomrico, centromrico e outros (Leitch et al., 1994).
Os genes ribossomais 5S e 45S tm sido as seqncias mais utilizadas na
hibridizao in situ. A unidade de repetio do DNAr 45S uma seqncia com
cerca de 9,2 kb contendo os genes para DNAr 18S, 5,8S e 26S, sempre nessa
ordem. Esses genes foram muito bem conservados durante a evoluo
vegetal, o que permite a hibridizao de uma seqncia extrada de uma
espcie em qualquer outra espcie vegetal.

220

Citogentica clssica e molecular em passifloras

Figura. 3. Esquema simplificado da tcnica de hibridizao in situ. (a) A seqncia de


DNA a ser utilizada como sonda deve ser isolada e marcada. (b) Paralelamente,
devem ser preparadas lminas com cromossomos bem espalhados. (c, d, e)
Posteriormente, os DNAs da sonda e dos cromossomos devem ser desnaturados e
colocados em contato para que ocorra a renaturao e conseqentemente a
hibridizao in situ. (f, g) A localizao da sonda feita por uma molcula
reconhecedora ligada a um fluorocromo e observada na microscopia de fluorescncia.
Fonte: Brasileiro-Vidal & Guerra, (2002).

221

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Alm dos genes ribossomais, as seqncias em tandem mais utilizadas


na FISH so as do DNA telomrico e as do DNA centromrico. A hibridizao
de seqncias exclusivas da regio terminal ou da regio centromrica permite
identificar alteraes estruturais que modifiquem a localizao dessas sondas,
como delees, inverses ou translocaes.
Os microssatlites so formados geralmente por unidades de repetio
com cinco nucleotdeos ou menos, tambm, encontram-se arranjados em
tandem e podem ser detectados por FISH.
A segunda categoria de DNA repetitivo a de seqncias dispersas,
intercaladas por seqncias de DNA de cpia simples ou repetitivas. Um
exemplo de seqncias dispersas so os retrotransposons, amplamente
encontrados nos genomas de plantas, em especial, naqueles com elevada
quantidade de DNA.
A hibridizao in situ tambm pode utilizar como sonda o DNA
genmico total de uma espcie, proporcionando a marcao de todos os
seus cromossomos. Esse tipo de hibridizao denominado de GISH
(Genomic In Situ Hybridization). A tcnica de GISH permite distinguir os
cromossomos oriundos de diferentes parentais, em hbridos interespecficos,
ou em espcies alopoliplides (Raina & Rani, 2001).
Um fator que interfere na visualizao dos sinais de hibridao o nvel
de condensao dos cromossomos mitticos; a alternativa para aumentar o
nvel de resoluo da hibridizao in situ o uso de cromossomos meiticos
na fase de paquteno. Esses cromossomos encontram-se de 7 a 40 vezes mais
estendidos que os cromossomos mitticos (De Jong et al., 2000). Esses
aprimoramentos tambm sero importantes para facilitar a integrao dos
mapas cromossmicos com os de ligao j existentes e a anlise comparada
desses mapas em espcies prximas (Cheng et al., 2001; Draye et al., 2001).

Citogentica de Passiflora
O gnero Passiflora, bem como os demais gneros de passiflorceas,
tem sido muito pouco estudado citolgicamente. As mais amplas contagens
cromossmicas foram realizadas por Bowden (1945), Beal (1969ab,1973),

222

Citogentica clssica e molecular em passifloras

Storey (1950), Guerra (1986) e Snow & MacDougal (1993). Segundo SoaresScott (1998), existem informaes citogenticas registradas na literatura para
apenas 68 espcies do gnero Passiflora, 8 subespcies e 14 hbridos
interespecficos, mostrando que das 400 espcies conhecidas, menos de 30%
apresentam identificao cromossmica, restringindo-se em sua maioria (mais
de 20%) contagem do nmero cromossmico (Tabela 1). Segundo Melo
et al. (2001) esse nmero de espcies representa 16,1% das 83 registradas no
gnero. A maioria dos trabalhos compilados nesse levantamento cita apenas o
nmero cromossmico, raramente, com anlises cariotpicas e medidas
cromossmicas. A escassez de tais dados pode ser, em parte, justificada pela
dificuldade de coleta e germinao de sementes das espcies e pelo pequeno
tamanho dos cromossomos nas espcies do gnero.
Tabela 1. Nmeros cromossmicos de Passiflora spp.: espcies subespcies e hbridos.
Nomes dos subgneros em negrito. * Apud Snow & MacDougal (1993).
Espcies
Astephia Killip
P. penduliflora DC.
Astrophea (DC.) Mast.
P. lindeniana Triana & Planch.

Beal, 1971*

12

Berry, 1987

Decaloba (DC.) Rchb.


P. aurantia G.Forst.

P. biflora Lam.

18

Beckett, 1960

12
12

Beal, 1969
Snow & MacDougal, 1993
Beal 1971*
Snow & MacDougal, 1993
Bowden, 1945; Snow & MacDougal,
1993 Bowden, 1945
Snow & MacDougal, 1993
Bowden, 1945; Beal, 1971*; Snow &
MacDougal, 1993; Melo et al., 2001
Beal, 1969
Bowden, 1945
Snow & MacDougal, 1993
Snow & MacDougal, 1993
Diers 1961*; Beal, 1971*
Snow & MacDougal, 1993;
Melo et al., 2001
Snow & MacDougal, 1993

12
12
24
12
12

P. bryonioides Kunth
P. aff. candollei Triana & Planch.
P. capsularis L.
6

12
12
12
12

6
12

P. costaricensis Killip

Referncias

Calopanthanthus (Harms) Killip


P. racemosa Brot.

P. cinnabarina Lindl.
P. citrina J.M.MacDougal
P. cobanensis Killip
P. conzattiana Killip
P. coriacea Juss.

2n

12

Continua...

223

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Tabela 1. Continuao.
Espcies
P.
P.
P.
P.

escobariana J.M.MacDougal
exsudans Zucc.
gibertiana J.M.MacDougal
gracilis Link

P.
P.
P.
P.
P.

herbetiana Ker Gawl.


holosericea L.
juliana J.M.MacDougal
karwinskii Mast.
lutea L.

P. misera Kunth
P. morifolia Mast.
P.
P.
P.
P.
P.
P.

6
6

nubicola J.M.MacDougal
6
oaxacensis J.M.MacDougal
obtusifolia Sess & Moc.
porphyretica Mast.
bicornis Mill.
6
quinquangularis J.M.MacDougal

P. rovirosae Killip
P. rubra L.
P. sanguinolenta Mast. & Linden
P. standleyi Killip
P. suberosa L.

2n

Referncias

12
24
12
20
18
12
14
12

Snow & MacDougal, 1993


Snow & MacDougal, 1993
Snow & MacDougal, 1993
Bowden, 1945
La Cour, 1952*
Beal, 1969; Melo et al., 2001
Snow & MacDougal, 1993
Snow & MacDougal, 1993
Snow & MacDougal, 1993
84
Bowden1940, 1945; Darlington &
Janaki Ammal ,1945*
24
Baldwin, 1949
12 36 Melo et al., 2001
Snow & MacDougal, 1993
12
Melo et al., 2001
MacDougal, 1989b
12
Snow & MacDougal, 1993
12
Snow & MacDougal, 1993
12
Snow & MacDougal, 1993
12
Storey, 1950
12
Snow & MacDougal, 1993

P. tricuspis Mast.
P. xiikzodz J.M.MacDougal

12
12
12
12
24
36
12
24
12
12

Snow & MacDougal, 1993


Snow & MacDougal, 1993
Snow & MacDougal, 1993
Snow & MacDougal, 1993
Storey, 1950; Beal, 1969
Storey, 1950
Diers, 1961*
Beal, 1971*; Snow & MacDougal, 1993.
Melo et al. 2001
Snow & MacDougal, 1993

Distephana (Juss.) Killip


P. cocicnea Aubl.

18

Beal, 1971*; Soares-Scott et al., 2001;


Melo et al., 2001
Storey, 1950
Beal, 1969
Snow & MacDougal, 1993

P. vitifolia Kunth

12
18

9
9

18
18

Dysosmia (DC.) Rchb.


P. foetida L.

18
20
10
10

22
20

Heitz, 1927*; Janaki Ammal, 1945*


Nishiyama & Kondo, 1942*;
Guerra, 1986
Bowden ,1945; Harvey, 1966*
Storey, 1950
Beal, 1969

Continua...

224

Citogentica clssica e molecular em passifloras

Tabela 1. Continuao.
Espcies

2n

Referncias

Murucuja (Tourn. ex Mill.) Mast.


P. cubensis Urb.

12

Lepper & Duharte Gongora, 1988*

Passiflora
P. actinia Hook.

18

Soares-Scott et al., 2001;Melo et al.,


2001
Beal, 1969
Guerra, 1986; Mayeda & Vieira, 1994;
Souza et al., 2003; Meletti et al., 2003.
Mayeda & Vieira, 1994
Heitz, 1926*; Nakajima, 1931 Simonet &
Miedzyrzecki, 1932*; Bowden, 1940;
Darlington & Janaki Ammal, 1945*
Beal, 1969
Beal, 1971*; Guerra, 1986.
Melo et al., 2001; Souza et al., 2003
Jannaki Ammal, 1945*; Beal, 1969
Storey, 1950; Dornelas & Vieira, 1991;
Mayeda & Vieira 1994; Soares-Scott
et al.,2003
Beal, 1969; Soares-Scott et al., 2003
Melo et al., 2001
Mayeda & Vieira, 1994
Heitz, 1926*; Bowden, 1945; Storey,
1950; Mayeda & Vieira, 1995; SoaresScott et al., 2003
Lloyd, 1963*
Beal, 1969; Soares-Scott et al., 2003
Melo et al., 2001
Storey, 1950; Beal, 1969
Mayeda & Vieira, 1995; Melo et al., 2001
Storey, 1950
Simmonds, 1954
Storey, 1950
Beal, 1969
Beal, 1971*
Guerra, 1986; Snow & MacDougal,
1993; Soares-Scott et al., 2001
Souza et al., 2003
Storey, 1950
Guerra, 1986; Melo et al., 2001; Souza
et al., 2001
Dornelas & Vieira, 1991; Passos, 1999;
Melo ect al., 2001
Janaki Ammal, 1945; Beckett, 1960;
Soares-Scott et al., 1999; Souza et al.,
2003
Storey, 1950; Beal, 1969

P. alata Curtis

9
18

P. amethystina J.C.Mikan
P. caerulea L.

18
18
9

P. cincinnata Mast.
P. edmundoi Sacco
P. edulis Sims

9
9

18
18
18
18

9
P. galbana Mast.
P. gibertii N.E.Br.
P. incarnata L.

18
18
18
36

P. jilekii Wawra
P. kermesina Link & Otto

9
9
9

P. laurifolia L

P. ligularis Juss
9
9

18
18
18
18
18
18
18

P. malacophylla Mast.
P. manicata (Juss) Pers.
P. mucronata Lam.

9
9

18
18
18

P. nitida Kunth

18

P. quadrangularis L.

18
9

Continua...

225

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Tabela 1. Continuao.
Espcies

2n

Referncias
Storey, 1950; Beal, 1969
Soares-Scott et al., 1999
Soares-Scott et al., 1998, 2003
Melo et al., 2001; Soares-Scott et al.,
2003
Storey, 1950; Beal, 1969; Melo et al.,
2001
Snow & MacDougal, 1993

P. semantic Grebes.
P. serrato-digitata
P. setacea DC.

9
9
9
9

18
18
18

P. subpeltata Ortega

18

P. trisulca Mast.

18

Pseudomurucuja (Harms) Killip


P. perfoliata L.

12

Tacsonia (Juss) Triana & Planch.


P. antioquiensis H.Karst.

Beal, 1971*

18
P. cumbalensis (H.Karst.) Harms
P. mixta L.f.
P. tripartita (Juss.) Poir.

9
18
9
18

hbridos
P. alata x P. caerulea
P. caerulea x P. quadrangularis
P. caerulea x P. sp
P. edulis + P. amethystina
P. edulis + P. cincinatta
P. edulis + P. giberti
P. edulis + P. incarnata
P. edulis x P. alata
P. maliformis x P. laurifolia
P. quadrangularis x P. racemosa
P. racemosa x P. coccinea

18
9

36
36
36
36
18
18
27
18

Beal, 1969
Snow & MacDougal, 1993
Escobar, 1986
La Cour, 1952*; Melo et al., 2001
Beal, 1969; Berry, 1987
Bowden, 1945; Storey, 1950; Heiser,
1963*
Storey, 1950
La Cour, 1951*
Storey, 1950
Dornelas, 1995
Dornelas, 1995
Dornelas, 1995
Knight, 1991; Soares-Scott et al., 1995
Soares-Scott et al., 1995
Storey, 1950
Beckett, 1960
Janaki Ammal ,1945*; Storey, 1950

As espcies estudadas no gnero Passiflora possuem amplitude


significativa para tamanho e nmero de cromossomos, podendo ser
agrupadas segundo o nmero bsico de cromossomos (x) em trs grupos: x =
6, x = 9 e x = 9 ou 10 que esto em maior freqncia, mas h registros para x=
7, 10, 11, 12,18 e 42. O nmero cromossmico 2n varia no grupo x = 6,
havendo espcies com 2n = 12, 2n = 24, 2n = 36 e 2n = 84 cromossomos; no
grupo x = 9 com espcies onde 2n = 18 cromossomos e no grupo x = 9 ou 10
com espcies 2n = 18, 2n = 20, 2n = 22. Em P. foetida, foram identificados
vrios nmeros cromossmicos, 2n = 18, 28 e 22. Esses resultados parecem
indicar a ocorrncia de aneuploidia na evoluo dessa espcie, o que nos

226

Citogentica clssica e molecular em passifloras

permite acreditar que esse processo tambm faz parte do processo evolutivo
no gnero Passiflora.
O menor nmero haplide x = 6 (n = 6) e sugere a ocorrncia de
poliploidia nos processos evolutivos. Uma possvel triploidia foi sugerida para
a origem das espcies com 2n = 18 (Storey, 1950), hexaploidia nas espcies
com 2n = 36 (Meletti et al., 1992) e poliploidia na espcie P. lutea com
2n = 84 (Bowden, 1940, 1945).
No gnero, constata-se uma variao no nvel de ploidia que vai at 14x
(14n).
Todas as espcies horticulturalmente importantes mostram 2n = 18,
inclusive, Passiflora edulis (Figura 4) (Lopes, 1994; Soares-Scott, 1998).
H indicaes sugerindo que as espcies com 2n = 18 poderiam ter
evoludo atravs da poliploidia ou pelo processo inverso, a partir de espcies
com 2n = 24 por sucessivas perdas de pares cromossmicos.
Em P. suberosa, so descritos trs nmeros cromossmicos, 2n=12,
24 e 36; essas diferenas esto associadas a grandes diferenas morfolgicas
nesse grupo.
A hiptese de perdas cromossmicas pode ser sustentada pela
existncia de espcies com nmeros cromossmicos intermedirios, com 2n
= 18 (Heitz, 1927; Janaki Ammal, 1945), 2n = 20 (Nishiyama & Kondo, 1942;
Guerra, 1986) e 2n = 22 (Bowden, 1945; Harvey, 1966) em P. foetida e 2n = 20
(Bowden, 1945), 2n = 18 (La Cour, 1952) em P. gracilis.
Segundo Melo et al. (2001), a anlise citogentica, at o presente,
divide o gnero Passiflora em trs grandes grupos: um com n=6, 12,18 (5
subgneros); outro com n=10 (1 subgnero); um terceiro grupo com n=9,36
(6 subgneros). H uma exceo com 2n=14, para P. holosericea L. e P. lobata
(Snow & MacDougal, 1993) que pode ter sido originado por disploidia de
2n=12. Ainda segundo e autor, o registro para P. lutea L. (2n=84) no foi
confirmado em trabalhos posteriores, sugerindo que possam ser contagens
imprecisas, devido no-utilizao de bloqueadores de diviso, assim como
os diferentes nmeros em P. foetida (2n=18, 20, 22).

227

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Figura 4. Metfase mittica de Passiflora edulis 2n=18.

Melo & Guerra (2003) passam a considerar o grupo x=12, no como


grupo secundrio, j que ele aparentemente tem papel importante na
evoluo do gnero e representado em outros gneros da famlia. Dentro da
citotaxonomia do grupo, importante lembrar que x=6 derivado de x=12 ou
vice-versa.
Todas as espcies estudadas mostram cromossomos pequenos, com
comprimento mdio variando de 1,63 a 3,73 mm. Possuem caritipos em sua
maioria simtricos, mas com diferenas significativas entre os txons
analisados at agora. Os centrmeros em posio mediana e submediana,
com relao de braos variando de 1,12 a 1,59 mm e presena de satlites.
Foi detectada a presena de satlites em P. maliformis, P. seemanni e
P. quadrangularis que possuem cromossomos muito pequenos sendo trs
pares com satlites (Beal, 1969a, 1969b).

228

Citogentica clssica e molecular em passifloras

Alguns cromossomos com satlite foram identificados por Mayeda &


Vieira (1995) no par 8 das espcies, P. edulis, P. amethystina, P. alata e P. giberti.
Soares-Scott (1998) identificou satlites em P. edulis (4 e 7) e P. incarnata
e trs pares em P. setacea (4, 7 e 8) (Figura 5).
Melo et al. (2001) identificam satlites em P. capsularis, P. misera,
P. morifolia, P. coccinea e P. nitida. Souza et al. (2003) apontam satlites em seis
espcies (P. alata, P. malacophylla, P. edmundoi, P. mucronata, P. galbana e
P. quadrangularis).
Foram encontradas divergncias em relao a nmero de satlites e a
posio deles. Em P. edulis, Mayeda & Vieira (1995) apontam dois satlites e
Soares-Scott et al. (1999) trs. Em P. alata, h divergncias na localizao dos
cromossomos com satlite. Melo et al. (2001) observaram satlites nos dois
pares menores, Soares-Scott et al. (1998, 1999) concordaram quanto ao par 7,
mas indicaram tambm o par 4 e Souza et al. (2003) observaram-nos nos pares
1 e 2. Essas diferenas devem ocorrer por causa da qualidade da preparao
citolgica, devido ao grau de compactao dos cromossomos ou mesmo em
razo da variabilidade em diferentes populaes dentro das espcies.
Estudos citogenticos em hbridos interespecficos de Passiflora, tanto
zigticos como somticos, so muito pouco freqentes. importante
considerar que a maioria dos hbridos obtidos, mesmo os que no foram
analisados citogeneticamente originada de progenitores com 2n = 18
cromossomos sempre envolvendo espcies de interesse agronmico. Esses
hbridos sexuais mostraram compatibilidade interespecfica, j que
apresentaram alguma fertilidade na parte masculina ou feminina, apesar de
no produzirem frutos sugerindo que podem ser espcies relacionadas e com
origens em comum.

Figura 5. Cromossomos metafsicos de P. setacea


portadores de satlites.

229

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Hbridos interespecficos em Passiflora foram obtidos por fuso de


protoplastos por Otoni et al. (1995), Dornelas. (1995), Barbosa & Vieira (1997).
Matos et al. (2005) obtiveram plantas por fuso de protoplastos, este material
est sendo analisado molecular e citogenticamente para confirmao da
hibridao. Soares-Scott et al. (2003) observaram irregularidade meitica e
alteraes na formao do plen, bem como diminuio na viabilidade
polnica em ambos os hbridos, sexual (P. edulis x P. setacea) e somtico
(P. edulis + P. incarnata). Quando se compara a meiose entre os hbridos, o
hbrido sexual (Figuras 6 e 7) mostra-se mais regular que o somtico.
O nmero cromossmico foi identificado nesses hbridos, mostrando
2n=18 (P. edulis x P. setacea) e 4n=36 (P. edulis + P. incarnata)
Na microsporognese, observa-se a presena de multivalentes e a de
univalentes confirmando, tambm, a recombinao meitica no hbrido,
fundamentais para a introduo gnica.
No hbrido somtico P. edulis+ P. incarnata, observam-se diferenas no
tamanho de gro de plen e diminuio na viabilidade polnica (Soares-Scott
et al. 2003). Barbosa & Vieira (1997) apesar de constatarem irregularidades na
meiose, obtiveram alta viabilidade polnica no hbrido somtico P. edulis f.
flavicarpa + P. amethystina. A obteno de plens viveis indica que esses
hbridos podem e devem ser usados em novos cruzamentos, sendo material
com potencial no melhoramento gentico.

Figura 6. Anormalidades em
hbrido sexual P. edulis x P.
setacea: A. multivalentes em MI.
B. cromossomos retardatrios
em anfase I. C. diferena de
nmero de cromossomos
diferentes nos plos.
Fonte: Soares-Scott et al.
(2003).

230

Citogentica clssica e molecular em passifloras

Figura 7. Gros de plen de P. edulis x P. setacea,


plens viveis e inviveis.

Citogentica molecular em Passiflora


Melo & Guerra (2003), utilizando hibridao in situ FISH, tentaram
encontrar correlao entre nmero de stios rDNA 45s e 5S com nvel de ploidia
em 20 espcies de Passiflora. Entretanto, esse nmero pode variar bastante,
conforme j observado por diversos autores em outros vegetais (Vanzela et al.,
1998; Frello & Heslop-Harrison, 2000). Para o rDNA 5S, mostra-se em um nico
stio exceo de P. suberosa e P. foetida com 2 stios e P. misera com 6 stios,
talvez indicando possvel origem poliplide.
Quanto a rDNA 45S, o sinal maior, o nmero de sinais maiores
tambm. A metodologia usada resultou em cromossomos muito
compactados com dificuldade na localizao dos pares portadores desses
stios, talvez pelo tempo empregado com o bloqueador de diviso que utiliza
24 horas. Segundo esses autores, as espcies de importncia agronmica (do
grupo x=9) indicam que a posio e o nmero de stios de rDNA so muito
restritos e que esse marcador no seria um marcador citolgico para
caracterizar espcies.
Soares-Scott et al. (2003 ) vm trabalhando com hibridao in situ FISH
utilizando a sonda de Pta 71 para a deteco das regies organizadoras do
nuclolo (Pta 71 que tem 9 kb e que contm o DNAr 45S (18S + 5,8S = 26S)
de Triticum aestivum (Gerlach & Bedbrook, 1979).

231

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

As anlises foram realizadas nas espcies P. edulis, P. incarnata,


P. setacea, P. coccinea e nos hbridos P. edulis x P. incarnata e P. edulis x
P. setacea. O hbrido P. edulis x P. incarnata apresentou dois sinais fluorescentes
(Figura 8). No hbrido P. edulis x P. setacea, foi observado de quatro a seis
sinais fluorescentes com essa mesma sonda (Figura 9). Pde-se verificar que
algumas marcaes dos stios de DNAr 45S envolveram apenas parte das
constries secundrias. Em P. incarnata, verificaram-se apenas dois sinais. As
espcies P. setacea e P. coccinea mostraram 4 sinais.
A espcie progenitora, P. edulis, mostra quatro sinais, concordante com
Melo & Guerra (2003) que observaram, tambm, nessa espcie 4 stios
subterminais de DNAr 45S. Esses resultados parecem confirmar a hiptese de
herana nos hbridos de cromossomos portadores de satlite conforme
sugerido anteriormente (Soares-Scott, 1998). No caso, talvez se possa
observar perda ou recombinao de seqncias de rDNA 45S nesses hbridos
por mecanismos de supresso gnica (Leitch & Bennet, 1977; Vogel et al.,
1999).
A hibridizao in situ, utilizando como sonda o DNA genmico total de
uma espcie denominado de GISH (Genomic In Situ Hybridization), est sendo
feita em hbridos de Passiflora (Soares-Scott et al., 2003).
O resultado demonstrou que existe realmente um hbrido (P. edulis x P.
setacea) (Figura 10) e que a sonda feita foi capaz de evidenciar diferentes
seqncias cromossmicas das duas espcies. Pde-se verificar um lote de
cinco cromossomos inteiros corados em vermelho o de P. setacea, outro lote
de 9 com fluorescncia em amarelo de P. edulis e um lote de colorao laranja
indicando seqncias de ambas as espcies P. setacea e P. edulis.
Na microsporognese, observa-se a presena de multivalentes e
univalentes confirmando tambm a recombinao meitica nos hbridos,
fundamentais para a introduo gnica. Outros hbridos esto sendo
trabalhados e vm confirmando a eficincia do mtodo e da sonda.

232

Citogentica clssica e molecular em passifloras

Figura 8. HIS rDNA45S P. edulis x P. incarnata 2 sinais.


A

A1

B1

Figura 9. Hibridao in situ P.edulis x P. setacea quatro a seis


sinais.

233

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Figura 10. Hibridao genmica in situ (Gish),


P. edulis x P. setacea.

Concluso
O conhecimento mais exato e preciso possvel da origem e da relao
entre as espcies indicar os procedimentos adequados manipulao
gentica dentro de um programa de melhoramento gentico. Portanto, o
conhecimento adquirido nas reas de biologia celular e molecular tem e vem
contribuindo para o entendimento de como os genes esto organizados nos
genomas.

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239

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

240

Misturou o azul da montanha distante,


E o brilho impetuoso de um manancial,
Junto ao branco das garas no exato instante
Em que todas revoavam sobre amplo ninhal.
Foi da plumagem rubra da arara elegante,
E dos tons de carmim de um ocaso outonal
Que surgiram as cores mais predominantes
Das espcies encontradas no Brasil Central.
Mas faltava algo para l de importante
Retratar o sol em sua cor triunfal.
Por isso o amarelo a cor mais constante
Do fruto quando est em maturao final.
Geovane Alves de Andrade

Gentica quantitativa aplicada ao


melhoramento gentico do
maracujazeiro
Alexandre Pio Viana
Gustavo Menezes Gonalves

Intr
oduo
Introduo

fruticultura constitui-se em um dos mais promissores ramos


do agronegcio brasileiro a qual vem aumentando em
importncia, nos ltimos anos, no Brasil, propiciando
diversificao agrcola e sendo expressiva fonte de renda para produtores.
Nesse contexto, na cultura do maracujazeiro, tem-se notado grande
crescimento, com seu mercado em expressiva expanso, tendo sido
produzidas no Brasil 317.146 toneladas em 1999 (Agrianual, 2002).
Essa cultura apresenta caractersticas interessantes sob o ponto de vista
socioeconmico, pois necessita de considervel mo-de-obra, fornece
estabilizao do fluxo de renda, uma vez que colhido e de forma
continuada por safra e gera divisas para o Pas (Leite et al., 1994).
Entretanto, para vislumbrar todo esse mercado, necessrio
considerar fatores limitantes da cultura do maracujazeiro, como o caso da
baixa produtividade causada, entre outras causas, pela falta de gentipos
altamente produtivos e pela grande variabilidade existente em pomares
comerciais, refletindo a necessidade do melhoramento gentico para a
espcie.
Nesse contexto, estudos em gentica quantitativa para essa espcie,
envolvendo as vrias caractersticas de interesse para o melhoramento, so

243

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

raros e tm uma abordagem bastante superficial, levando a uma insipincia no


conhecimento da ao gnica das principais caractersticas. Trabalhos que
visem estimar parmetros genticos nas populaes de maracujazeiroamarelo em estudo, selecionar alternativas de seleo mais eficientes por
meio de ganhos preditos, estimar as associaes entre as diversas
caractersticas estudadas, entre outros, so de fundamental importncia e
devem ser estimulados nas vrias equipes de pesquisa com essa cultura no
Brasil.

Melhoramento do maracujazeiro
O melhoramento do maracujazeiro est diretamente relacionado ao
fruto, focalizando trs pontos principais: melhoramento visando atender as
exigncias do mercado qualidade, aumento na produtividade e
resistncia a doenas.
A escolha do germoplasma base essencial de qualquer programa
de melhoramento. As caractersticas do germoplasma determinaro o
potencial mximo ao qual a populao submetida ao melhoramento pode
chegar, e os mtodos de melhoramento o quanto do potencial mximo ser
alcanado (Hallauer & Miranda Filho, 1988).
Sendo o maracujazeiro uma planta algama, possvel aplicar vrios
mtodos de melhoramento seja via aumento da freqncia de genes
favorveis, seja pela explorao do vigor hbrido (Bruckner, 1997). A
freqncia de genes favorveis pode ser aumentada pela seleo massal
ou pela seleo com teste de prognies, j o vigor hbrido explorado por
meio de hbridos, variedades sintticas ou compostos (Albuquerque, 2001).
Oliveira & Ferreira (1991) citaram como mtodos de melhoramento
para o maracujazeiro a introduo de plantas, a hibridao, a seleo
massal e a seleo com teste de prognie.
A seleo com teste de prognies pode ser realizada com prognies
de meios-irmos ou irmos completos. Prognies de meios-irmos podem

244

Gentica quantitativa aplicada ao melhoramento gentico do maracujazeiro

ser facilmente obtidas coletando-se um fruto por planta selecionada, sendo


esta fecundada por plens provenientes da populao. No caso de irmos
completos, h necessidade de realizao de polinizao controlada entre
plantas selecionadas (Bruckner, 1997).
A heterose mais bem explorada em hbridos que podem ser obtidos
a partir de linhagens endogmicas selecionadas, variedades de polinizao
aberta, clones ou outras populaes divergentes (Allard, 1999).
De acordo com Hallauer & Miranda Filho (1988) compostos podem
ser produzidos de cruzamentos, em todas as combinaes possveis, entre
variedades ou populaes de polinizao livre, com boa capacidade geral
de combinao. Assim, compostos podem ser considerados como boa
opo de melhoramento para o maracujazeiro em que a maior
produtividade pode ser combinada com maior eficincia na polinizao,
diminuindo os efeitos da incompatibilidade, sendo que suas sementes
podem ser multiplicadas pelo produtor.

Parmetr
os genticos
armetros
A estimao de parmetros genticos tem fundamental importncia
para programas de melhoramento, pois permitem identificar a natureza da
ao dos genes envolvidos no controle dos caracteres quantitativos e assim
avaliar a eficincia das diferentes estratgias de melhoramento pela
obteno de ganhos genticos preditos e manuteno de uma base
gentica adequada, sendo os parmetros genticos mais importantes, as
varincias genticas aditiva e no-aditiva, as herdabilidades e as
correlaes (Cruz & Carneiro, 2003). As estimativas de parmetros
genticos no devem ser extrapoladas para outras populaes ou outras
condies experimentais, pois so caractersticas prprias da populao
em estudo.
Os parmetros genticos podem ser obtidos da anlise de varincia
dos dados, realizadas conforme delineamentos genticos pelos quais se
estimam os componentes de varincia gentica de uma populao.

245

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Segundo Cruz & Carneiro (2003), um delineamento gentico qualquer


sistema de cruzamento planejado, estabelecido de forma que se conhea a
relao de parentesco entre indivduos ou grupos de indivduos, sendo
exemplos os delineamentos I e II de Comstock e Robinson, os dialelos e os
ensaios de famlias.
Fisher (1918), citado por Furtado (1996), foi quem primeiro partiu a
variao genotpica desmembrada em: varincia gentica aditiva - atribuda
aos efeitos mdios dos genes, varincia devida aos desvios da dominncia
- resultante de interaes entre alelos de um mesmo loco e varincia
episttica - atribuda a interaes allicas entre diferentes locos.
Segundo Falconer (1987), a varincia gentica aditiva a principal
causa da semelhana entre parentes, pois a parte da variao gentica
herdvel, assim, ela o determinante principal das propriedades genticas
de uma populao e da resposta da populao seleo.
De acordo com Hanson (1963), a herdabilidade pode ser definida
como a frao do diferencial de seleo que se espera ganhar quando a
seleo praticada sobre uma unidade de seleo definida. Assim, a
herdabilidade pode ser usada no sentido amplo ou no restrito, no primeiro
caso considera-se a variabilidade gentica total em relao fenotpica. J
a herdabilidade no sentido restrito considera apenas a poro aditiva da
variao gentica em relao fenotpica, ou seja, a frao das diferenas
fenotpicas entre os pais que se espera recuperar entre os descendentes.
A herdabilidade no sentido restrito mais til nos programas de
melhoramento do que a no sentido amplo, pois quantifica a proporo
aditiva da varincia gentica que pode ser transmitida para a prxima
gerao, sendo a herdabilidade no sentido amplo importante no caso de
plantas de propagao vegetativa, em que o gentipo herdado
integralmente pelos descendentes. No caso de maracujazeiro-amarelo, a
seleo baseada em clones no tem apresentando resultados de ampla
aplicao, demonstrados pela falta de adaptabilidade e estabilidade dos
gentipos selecionadas, alta incidncia de doenas em locais especficos,

246

Gentica quantitativa aplicada ao melhoramento gentico do maracujazeiro

causados provavelmente pelo estreitamento da base gentica da populao.


Estudos com seleo recorrente devem ser estimulados, uma vez que podem
potencializar os ganhos em vrias caractersticas pelo uso de ndices
multivariados e correta aplicao dos mtodos de melhoramento.
O conhecimento da associao entre as caractersticas ponto
importante de um programa de melhoramento bem planejado. As
correlaes so levadas em considerao na escolha dos mtodos de
melhoramento quando se formulam estratgias de seleo simultneas para as
vrias caractersticas estudadas, predizendo a alterao na mdia de um
carter quando se seleciona em outro, ou quando se objetiva melhorar
algum carter especfico que apresente baixa herdabilidade ou problemas
em sua avaliao, em que pode ser utilizada uma caracterstica de fcil
mensurao e alta herdabilidade correlacionada com esta outra.

Delineamentos genticos aplicveis ao


maracujazeiro-amarelo
Vrios delineamentos esto disponveis para utilizao na cultura do
maracujazeiro-amarelo, seu uso e aplicao vo depender da facilidade de
obteno das prognies. Citam-se os delineamentos I, II e III de Comstock
& Robinson (1948), os dialelos e suas variaes nas interpretaes dos
resultados. O Delineamento II parte do cruzamento entre um grupo de
fmeas e machos em esquema fatorial onde se tem as mesmas
pressuposies do delineamento I. O delineamento III parte de
progenitores em linhas puras, obtendo-se os F1 e F2 e retrocruzando-se os
F2 com ambos os pais para a obteno das prognies, sendo os machos
indivduos F2 (efeito aleatrios) e os parentais apresentando efeito fixo.
Sendo este ltimo de aplicao restrita para maracujazeiro-amarelo, devido
dificuldade de obteno de linhagens puras.
O Delineamento I utilizado com o objetivo de se estimarem os
componentes de varincia gentica de uma populao (Hallauer & Miranda
Filho, 1988, Cruz & Carneiro, 2003). O esquema de famlias desse

247

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

delineamento, freqentemente utilizado na cultura do milho (Hallauer &


Miranda Filho, 1988; Eyherabide & Hallauer, 1991; Furtado, 1996; Paterniani &
Campos, 1999), permite adotar diferentes estratgias de seleo, como
seleo entre machos, entre fmeas, entre fmeas dentro de machos e
seleo combinada, quando a avaliao feita em nvel de mdia ou total
de parcelas, que so representadas por um grupo de indivduos, amostras
da descendncia de determinado cruzamento (Cruz & Carneiro, 2003).
Utilizando o Delineamento I de Comstock & Robinson (1948), possvel
estimar os coeficientes de correlao gentica aditiva (Furtado, 1996), ou seja,
a frao herdvel da correlao gentica. A correlao pode ser causada por
efeitos pleiotrpicos dos genes ou pela falta de equilbrio de ligao
(Vencovsky, 1978), mas de acordo com Falconer (1987), a principal causa da
correlao gentica a pleiotropia, pois as ligaes gnicas so causas
transitrias.
Esse delineamento envolve a avaliao de prognies obtidas de
cruzamentos entre plantas tomadas ao acaso em uma populao na qual
cada macho (m) cruzado com um igual nmero de fmeas (f), sendo um
grupo diferente de fmeas para cada macho, produzindo mf prognies para
avaliao (Cruz & Carneiro, 2003). Furtado (1996) relata que a estrutura
gentica das prognies formada por irmos completos e meios-irmos,
apresentando o primeiro, ambos os pais em comum, e o segundo, apenas o
progenitor masculino em comum. De acordo com o esquema abaixo,
percebe-se a facilidade de aplicao desse delineamento para maracujazeiroamarelo e seu potencial de aplicao em estudos de gentica quantitativa.

Por ser um delineamento gentico com efeitos aninhados, as


esperanas dos quadrados mdios so obtidas para um modelo estatstico
hierarquizado. Assim, os componentes de varincia, associados aos efeitos de

248

Gentica quantitativa aplicada ao melhoramento gentico do maracujazeiro

machos e aos efeitos de fmeas dentro de machos, podem ser estimados a


partir dos quadrados mdios apropriados. O conhecimento da co-varincia
entre parentes possibilita o relacionamento desses componentes de varincia
com os componentes de varincia gentica: varincia gentica aditiva (
2A ) e
2 ) (Furtado, 1996;
varincia gentica devida aos desvios de dominncia (
D
Cruz & Carneiro, 2003). No modelo utilizado, o componente de varincia
2 ) representa a co-varincia entre meiosassociado ao efeito do macho (
M
irmos, e o componente de varincia associado aos efeitos de fmeas dentro
de macho (
F2 ) corresponde diferena entre a co-varincia de irmos
completos e a co-varincia de meios-irmos.

Aplicao dos delineamentos em


maracujazeiro-amarelo
Na cultura do maracujazeiro, alguns delineamentos genticos podem
ser utilizados para a correta estimao de parmetros importantes na
orientao dos procedimentos a serem adotados, assim como os mtodos
de melhoramento a serem elaborados. A obteno das prognies pode ser
alcanada facilmente por meio de esquemas de cruzamentos controlados,
como exemplo, citam-se as prognies de irmos completos obtidas de
trabalhos desenvolvidos por Viana (2004) e Gonalves (2005) no norte do
Estado do Rio de Janeiro onde foram amostradas plantas ao acaso nas
linhas de plantio, em reas comerciais, em uma populao formada pelos
seguintes materiais: Maguary, Yellow Master e selees de So Francisco
do Itabapoana, com coeficiente de endogamia F=0. Foram feitos
cruzamentos seguindo o Delineamento I, procedimento proposto por
Comstock & Robinson (1948), formando prognies de irmos completos e
meios-irmos. Para tanto, uma planta doadora de gros de plen (macho)
foi cruzada com um grupo de cinco plantas receptoras (fmeas), de modo
que cada macho foi cruzado com um grupo de fmeas diferentes,
obtendo-se trs frutos por fmea.
A estrutura gentica das prognies incluiu irmos completos e meiosirmos. Os indivduos dentro de cada prognie de fmea so irmos

249

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

completos e, dentro de prognies de macho, dois indivduos tomados ao


acaso podem ser irmos completos ou meios-irmos.
Logo em seguida, foram instalados experimentos em trs ambientes,
Miracema, RJ, Viosa, MG e Campos dos Goytacazes, RJ.
O delineamento estatstico utilizado foi em blocos ao acaso em que as
prognies (tratamentos) foram agrupadas em trs sets que constituem
grupos de tratamentos, cada qual com trs repeties. As principais
caractersticas avaliadas foram: nmero de dias at a antese, nmero de
frutos por planta, peso de frutos, comprimento de frutos, largura de frutos,
espessura de casca, porcentagem de polpa. A seguir sero discutidas as
anlises envolvidas nesse tipo de delineamento e as informaes obtidas
deste trabalho.

Anlises de varincia
Anlises de varincia individuais
Pela estrutura do delineamento adotado, pode-se montar o
seguinte quadro de anlise de varincia, considerando-se os ambientes
individuais.

Yjkmf = + Sj + R/S ( j ) k + M/S( j ) m + F/M/S( jm ) f + jkmf


onde:
m = constante geral;
S j = efeito do j-simo set. j = 1, 2, ..., s. S j ~ NID (0, s2S);
R/S ( j ) k = efeito da k-sima repetio dentro do j-simo set. k = 1, 2, ..., r. R/
S ( j ) k ~ NID (0, s2R);
M/S ( j ) m = efeito do m-simo macho dentro do j-simo set. m = 1, 2, ..., m.
M/S ( j ) m ~ NID (0, s2M);
F/M/S ( jm ) f = efeito da f-sima fmea hierarquizada ao m-simo macho. f = 1,

250

Gentica quantitativa aplicada ao melhoramento gentico do maracujazeiro

2, ..., f. F/M/S ( jm ) f ~ NID (0, s2F);

jkmf = erro experimental, ~ NID (0, s2).


Quando se tem nmero de fmeas desigual aos demais para algum
macho, nas estimativas realizadas atravs das esperanas do quadrado
mdio, em que se utiliza o nmero de fmeas f, este pode ser corrigido
conforme recomendam Cruz & Carneiro (2003) e Barbin (1993),
considerando um nmero k de fmeas que representa um valor mdio
ponderado, dado por:

fi
m
k = fi i
i=1
fi
i

1
m 1

onde: f representa fmeas e m machos.


Encontram-se, na Tabela 1, as esperanas dos quadrados mdios e
o teste F para as fontes de variao utilizadas nas anlises individuais,
consideram-se os efeitos associados a esse modelo todos aleatrios.
Tabela 1. Modelo gentico estatstico com as esperanas dos quadrados mdios e
teste F utilizados nas anlises individuais.
FV

GL

QM

E(QM)

Set (S)

s-1
[s(mf-1)]

QM4

s2 + rs2P

Machos (M) / S

s(m-1)

QM3

s + rs F + rfs

Fmeas (F) / M / S

sm(f-1)

QM2

s + rs

Erro

s(r-1)(mf-1)

QM1

Total

smfr-1

Repetio (R) / S
[Prognies]

s(r-1)
2
2

2
2

QM4/QM1
2

QM3/QM2
QM2/QM1

251

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Anlises de varincia conjuntas


Para as anlises de varincia conjuntas, pode-se adotar o modelo
misto, com efeito de ambiente sendo fixo e os demais aleatrios, seguindo o
seguinte modelo:
Yljkmf = + El + Sj + ESlj + R/ES( lj ) k + M/S( j ) m+ F/M/S( jm) f + EM/S( j ) lm + EF/M/S( j ) mfl + ljkmf

onde:
m = constante geral;
E l = efeito do l-simo ambiente. l = 1, 2, ..., e.;
S j = efeito do j-simo set. j = 1, 2, ..., s. Sj ~ NID (0, s2S);
ES lj = efeito da interao do l-simo ambiente com o j-simo set;
R/ES ( lj ) k = efeito da k-sima repetio dentro da interao ambiente x set. k
= 1, 2, ..., r. R/ES
M/S

(j)m

( lj ) k

~ NID (0, s2R);

= efeito do m-simo macho dentro do j-simo set. m = 1, 2, ..., m.


M/S ( j ) m ~ NID (0, s2M);

F/M/S

( jm ) f

= efeito da f-sima fmea hierarquizada ao m-simo macho. f =


1, 2, ..., f. F/M/S

EM/S

( j ) lm

( jm ) f

~ NID (0, s2F);

= efeito da interao ambiente x macho dentro do j-simo set.


EM/S ( j ) lm ~ NID (0, s2EM);

EF/M/S

( j ) mfl

= efeito da interao ambiente x fmea dentro do m-simo


macho. EF/M/S (j ) mfl ~ NID (0, s2EF);

= erro experimental, jkmf ~ NID (0, s2).


Encontram-se, na Tabela 2, as esperanas dos quadrados mdios e
o teste F para as fontes de variaes utilizadas na anlise conjunta.

252

Tabela 2. Modelo gentico estatstico com as esperanas dos quadrados mdios e teste F utilizados nas anlises conjuntas.

e
;
e 1

E =

Ei2
e -1

Gentica quantitativa aplicada ao melhoramento gentico do maracujazeiro

1/

253

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Parmetr
os genticos da populao
armetros
Componentes de varincia gentica
Com base nos valores de quadrados mdios, obtidos pela anlise de
varincia, podem-se estimar os componentes de varincia associados aos
2 )
efeitos de natureza gentica do modelo estatstico, efeitos de macho (
M
e de fmea dentro de macho (
F2 ), por:
2
M
=

QM 3 QM 2
QM 5 QM 4
2
; M =
, para anlise individual e conjunta
rf
ref
respectivamente.

F2 =

QM 2 QM1
QM 4 QM1
2
; F =
, para anlise individual e conjunta
r
re
respectivamente.

A natureza desses componentes pode ser estabelecida pelo


conhecimento da co-varincia entre os indivduos aparentados avaliados no
Delineamento I (irmos completos - IC e meios-irmos - MI), segundo
Furtado (1996) e Cruz & Carneiro (2003), dadas por:
2
COV(IC) = M
+ F2 ;

2
COV(MI) = M

Por princpio de semelhana entre aparentados, as co-varincias


entre IC e MI podem ser expressas em termos de varincia gentica aditiva
2 ).
2A ) e varincia gentica devida aos desvios de dominncia ( D
(
Considerando a ausncia de epistasia e uma populao no endogmica
(F=0), de acordo com Falconer (1987) e Cruz & Carneiro (2003), tm-se:

254

COV(IC) =

1 2 1 2
A + D ;
2
4

COV(MI) =

1 2
A
4

Gentica quantitativa aplicada ao melhoramento gentico do maracujazeiro

Ento as co-varincias entre parentes podem ser relacionadas com os


componentes de varincia gentica, assim:
2 ;
2A = 4 M
2
2
= 4( F2 M
D
)

Coeficientes de herdabilidade
A herdabilidade, sob o conceito de seleo, pode ser definida como a
frao do diferencial de seleo que se espera ganhar quando a seleo
praticada sobre determinada unidade de seleo, assim, para cada
unidade de seleo, podem-se estimar os coeficientes de herdabilidade nos
sentidos amplo e restrito, conforme descrito por Furtado (1996) e Cruz &
Carneiro (2003).
a) Herdabilidades para seleo baseada na mdia de machos
Neste caso, a seleo praticada entre os valores mdios obtidos
para cada famlia de macho, assim, as herdabilidades nos sentidos amplo
2
2
( h MA
) e no restrito ( h MR
), so dadas por:
- Para as anlises individuais:

2
h MA

2
f +1 2 1 2
2
A + D
+ F
M
4f
f
= 4f
=
2
2
QM

2
+ F+
M
rf
f
rf

2
h MR

f +1 2
A
= 4f
QM 3
rf

2
h MR

f +1 2
A
4f
=
QM 5
ref

- Para a anlise conjunta:

2
h MA

2
f +1 2 1 2
2
A + D
+ F
M
4f
f
= 4f
=
2
2
QM
5

2
+ F+
M
ref
f
ref

255

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

b) Herdabilidades para seleo baseadas na mdia de fmeas


Nesse tipo de seleo, pratica-se a seleo entre famlias de fmeas,
independentemente do grupo de macho a que ela pertena, sendo as
2 ) e restrito ( 2 ), dadas por:
herdabilidades, nos sentidos amplo ( h FA
h FR
- Para as anlises individuais:

2
h FA

2mf - f - 1 1 2 1 2
f(m - 1) 2 2
M + F
A + D
4
4
= mf - 1
= mf - 1
QM 4
mf f 2 2 2
M + F +
r
mf 1
r

2
h FR

2mf - f - 1 1 2
A
mf
1
4
=
QM 4
r

- Para a anlise conjunta:

2
h FA

2mf - f - 1 1 2 1 2
f(m - 1) 2 2
A + D
M + F
4
mf - 1
4
= mf - 1
=
QM 6
mf f 2 2 2
M + F +
re
mf 1
re

2
h FR

2mf - f - 1 1 2
A
4
= mf - 1
QM 6
re

c) Herdabilidades para seleo baseadas na mdia de fmeas dentro de


machos
Nessa estratgia de seleo, pratica-se a seleo estratificada de
famlias de fmeas onde um nmero de famlias de cada grupo de fmeas
selecionado dentro de cada grupo de macho, assim, as herdabilidades, nos
2
2
sentidos amplo ( h F/MA
) e restrito ( h F/MR
), so dadas por:

256

Gentica quantitativa aplicada ao melhoramento gentico do maracujazeiro

- Para as anlises individuais:

2
h F/MA

1 2 1 2
1 2 1 2
+ D
+ D
4
4
4
4
=
=
2
QM

F2 +
r
r

2
h F/MA

1 2

= 4
QM 2
r

- Para a anlise conjunta:

2
h F/MA

1 2 1 2
1 2 1 2
+ D
+ D
4
4
= 4
= 4
2
QM

F2 +
re
re

2
h F/MA

1 2

= 4
QM 4
re

Co-varincias e coeficientes de corr


elao gentica
correlao
aditiva
Podem-se estimar os coeficientes de correlao gentica aditiva ( rGA )
entre duas caractersticas, x e y, de acordo com o procedimento relatado
por Furtado (1996), ou seja:

rGA =
onde:

A xy =

A xy
2A 2A
x

estimador
caractersticas;

da

co-varincia

gentica

aditiva

entre

duas

2
2A e A y = estimadores da varincia gentica aditiva em relao s
x

caractersticas x e y respectivamente.

A co-varincia gentica aditiva entre dois indivduos pode ser


estimada de maneira semelhante aos componentes de varincia gentica.
As co-varincias em machos ( Mxy ) podem ser expressas em funo da
co-varincia gentica aditiva, assim:

257

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Mxy =

1
A xy , ou seja:
4

A xy = 4 Mxy
E do conhecimento das esperanas do produto mdio, pode-se estimar

Mxy pela expresso:


Mxy =

PMM PMF
, onde:
fr

PMM = produto mdio em macho;

PMF = produto mdio em fmea dentro de macho.


Avalia-se a hiptese de que o coeficiente de correlao seja igual a zero
pela estatstica t, segundo Cruz & Regazzi (2001), pela expresso:

t=

r
1 r 2

n2

Em que t est associado a n-2 graus de liberdade e a 1% ou a 5% de


probabilidade. Sendo:
n = nmero de pares de observaes.

Outros parmetros importantes que podem ser obtidos


a) Grau mdio de dominncia

GMD =

2 D2
2A

b) Coeficiente de variao gentico aditivo

CV a =

258

100 2A

Gentica quantitativa aplicada ao melhoramento gentico do maracujazeiro

c) Coeficiente de variao experimental

CV e =

100 QM1

d) Varincia gentica aditiva por ambiente


2
2AE = 4 EM

e) Varincia gentica devida aos desvios da dominncia por ambiente


2
2
2
DE
= 4( EF
EM
)

Alternativas de seleo no Delineamento I


Neste caso, utilizando-se o Delineamento I, podem-se avaliar as
seguintes alternativas de seleo: seleo entre famlias de machos,
seleo entre famlias de fmeas, seleo entre famlias de fmeas dentro
de machos e seleo combinada. Em cada alternativa de seleo, foram
utilizados os mtodos de seleo direta e seleo baseada nos ndices de
seleo. Os ganhos esperados por seleo na caracterstica nmero de
frutos por planta (NF) foram utilizados para a comparao entre as
diferentes estratgias de seleo, pois, de acordo com trabalho de Viana
et al. (2004), h grande possibilidade de identificao de gentipos superiores
na anlise de populaes para o carter, pois essa varivel apresenta grande
variabilidade gentica, alm de ser a caracterstica produtiva de maior
importncia para a cultura, sendo os demais caracteres utilizados como
auxiliares no processo. Para o clculo dos ganhos esperados com a seleo,
consideraram-se como unidades de recombinao as prprias prognies
avaliadas.

Seleo

direta

a) Seleo direta entre machos


Pratica-se a seleo entre os valores mdios obtidos de cada macho
que constituram a unidade de seleo para a qual foram atribudos valores

259

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

e ndices. Nesse processo, selecionaram-se as 30% famlias de machos


superiores, ou seja, sete e seis famlias, correspondentes a 35 e 30 famlias
de fmeas. O ganho esperado com a seleo direta em nmero de frutos
por planta ( GSDM ), entre mdias de machos, foi obtido por meio da
expresso:
2 , onde:
GS DM = DS M h MR

DSM = o diferencial de seleo entre mdias de machos para nmero


mdio de frutos (NF), ou seja, a diferena da mdia dos indivduos
selecionados com a mdia da populao original.
2 = a herdabilidade da mdia de machos para NF, no sentido restrito.
hMR

b) Seleo direta entre fmeas


Selecionaram-se as famlias de fmeas (prognies) independentemente do grupo de macho a que pertenam as quais constituram as
unidades de seleo. Nesse processo, selecionaram-se as 30% famlias de
fmeas superiores, ou seja, 35 e 30 famlias de fmeas selecionadas.
O ganho esperado com a seleo direta em NF ( GSDF ), entre
mdias de fmeas, foi obtido por meio da expresso:
2 , onde:
GS DF = DS F h FR

DSF = o diferencial de seleo entre mdias de fmeas para NF.


2 = a herdabilidade da mdia de fmeas para NF, no sentido restrito.
h FR

c) Seleo direta entre fmeas dentro de machos


Nesse caso, selecionaram-se as duas famlias de fmeas superiores
dentro de cada famlia de macho, de forma que todos os machos
contribuiro para a prxima gerao, totalizando assim, 46 (41%) e 40
(41%) famlias de fmeas.

260

Gentica quantitativa aplicada ao melhoramento gentico do maracujazeiro

O ganho esperado com a seleo direta em NF ( GSDF/M ), entre


mdias de fmeas dentro de machos, foi obtido por meio da expresso:
2
, onde:
GS DF/M = DS F/M h F/MR

DSF/M = o diferencial de seleo entre mdias de fmeas dentro de machos

para NF.

2
= a herdabilidade da mdia de fmeas dentro de machos para NF no
h F/MR

sentido restrito.

d) Seleo direta pelo ndice combinado


A estratgia de seleo combinada foi realizada com a substituio
dos valores das caractersticas do experimento pelo escore do ndice
combinado para cada uma das mfs. prognies avaliadas em que se
consideram, simultaneamente, o desempenho individual de uma fmea e o
desempenho da famlia do macho na qual ela est inserida. Assim,
selecionaram-se as 30% famlias de fmeas superiores, ou seja, 35 e 30
famlias. Furtado (1996) e Cruz & Carneiro (2003) definem que o ndice
combinado para as mfs. famlias avaliadas ( ICmf ) no Delineamento I pode
ser gerado por:
2
2
IC mf = hMR
(Ym.. Y... ) + h F/MR
(Ymf. Ym.. ) , onde:

Ym.. = mdia do m-simo macho;


Y... = mdia geral;
Ymf. = mdia da f-sima fmea acasalada com o m-simo macho;
2
2
= herdabilidades, no sentido restrito, das mdias de machos e
h MR
e h F/MR

de fmeas dentro de machos para NF respectivamente.

O ganho esperado com a seleo do ndice combinado ( GSIC ) foi


obtido por:

GS IC = DS IC , onde:
DSIC = o diferencial de seleo feita por meio do ndice combinado que
equivale mdia do ndice combinado dos indivduos selecionados para NF.

261

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

ndice de seleo
Usou-se para fins de seleo, o ndice de seleo baseado na soma de
ranks proposto por Mulamba & Mock (1978), conforme descrito por Cruz &
Regazzi (2001), pois foi o mtodo que apresentou os melhores resultados para
os dados avaliados, no qual se utilizou o programa computacional Genes
(Cruz, 2001). Esse ndice consiste em classificar os gentipos em relao a
cada uma das caractersticas, em ordem favorvel ao melhoramento, assim, as
ordens referentes s caractersticas so somadas para cada gentipo,
obtendo a soma de ranks, que, quanto menor for esta, melhor ser

desempenho de um gentipo em relao s vrias caractersticas estudadas.


A partir desse ponto, selecionam-se os gentipos que obtiveram menor soma
de ranks e calculam-se os ganhos de seleo.
Esse ndice foi empregado para cada uma das alternativas de seleo
avaliadas: entre famlias de machos; entre famlias de fmeas; entre famlias de
fmeas dentro de machos; e combinada, sendo os nmeros de unidades
seletivas selecionadas correspondentes aos da seleo direta.

Parmetr
os genticos da populao
armetros
Estimativas de componentes genticos
Na Tabela 3, so apresentadas as estimativas dos componentes
genticos da populao para a anlise conjunta.
Tratando-se da anlise conjunta, os valores dos graus mdios de
dominncia (GMD) no diferiram muito em relao aos ambientes nas anlises
individuais, demonstrando maior importncia dos desvios de dominncia
2 ) em relao varincia gentica aditiva ( 2 ) para as caractersticas
( D
A

262

Gentica quantitativa aplicada ao melhoramento gentico do maracujazeiro

nmero de frutos por planta, espessura da casca e nmero de dias at a


antese, indicando, assim, a presena de sobredominncia.
Para as caractersticas peso, comprimento e largura de frutos,
encontrou-se GMD inferior unidade, como nas anlises individuais,
mostrando que o componente aditivo tem maior expresso nesses caracteres.
Pode-se verificar que a caracterstica que apresentou, na anlise conjunta, o

) foi tambm nmero de


maior coeficiente de variao gentico aditivo ( CV
a
frutos por planta, sendo de 27,99%, indicando, realmente, que ganhos mais
expressivos podem ser obtidos para essa caracterstica.
Assim, optou-se, neste trabalho, por considerar nmero de frutos por
planta como a principal caracterstica a ser selecionada, tanto pela sua maior
possibilidade de ganhos quanto pela sua maior importncia entre as
caractersticas produtivas para a cultura do maracujazeiro-amarelo.
A escolha de um mtodo de melhoramento trabalhado pela seleo
recorrente depende, alm da caracterstica-objeto de um programa, da
finalidade das prognies selecionadas, dos recursos disponveis e do tipo de
ao gnica que o melhorista deseja enfatizar.
Mtodos de melhoramento interpopulacionais que enfatizam a
explorao da heterose podem ser mais apropriados quando o objetivo o
desenvolvimento de hbridos, j que capitalizam os efeitos genticos aditivos e
os

desvios

de

dominncia.

Os

mtodos

de

seleo

recorrente

intrapopulacionais so mais utilizados quando o objetivo melhorar o nvel


geral de populaes, e a ao gnica predominante aditiva. Os mtodos
intrapopulacionais so de mais fcil execuo e aplicveis a vrias
caractersticas,

sendo

mais

comumente

utilizados

do

que

os

interpopulacionais.

263

264
Tabela 3. Estimativas dos componentes genticos para seis caractersticas avaliadas em gentipos de maracujazeiro-amarelo
na anlise conjunta.
Caractersticas1/

Componentes genticos2/

2M

2F

2A

2D

2AE

NF

14,3896

43,9622

57,5584

118,2904

9,4340

46,7086

2,0274

27,99

PF

150,4461

145,8314

601,7844

0,0000

51,7992

0,0000

0,0000

13,23

CF

9,2469

11,2747

36,9876

8,1112

2,1558

1,5463

0,6623

7,05

LF

2,7228

3,2676

10,8912

2,1792

0,5892

0,9074

0,6326

4,38

EC

0,1221

0,2985

0,4884

0,7056

0,1090

0,0609

1,6998

10,84

DA

17,5169

29,0295

70,0676

46,0504

9,7521

35,3233

1,1465

6,60

2
DE

GMD

(%)

2/

2 , 2 = estimativas dos componentes de varincia associados aos efeitos de natureza gentica: efeito de macho e efeito de fmea
M
F

dentro de macho respectivamente.

2 = estimativas dos componentes de varincia gentica entre os indivduos: varincia gentica aditiva e varincia devida aos
2A e D

desvios da dominncia respectivamente.

2 = estimativas das varincias: gentica aditiva X ambiente e desvios da dominncia X ambiente.


2AE e DE

GMD e CV a = grau mdio de dominncia e coeficiente de variao gentico aditivo respectivamente.

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

NF - nmero de frutos por planta; PF - peso de frutos em gramas; CF - comprimento de frutos em mm; LF - largura de frutos em mm;
EC - espessura da casca em mm; DA - nmero de dias at a antese.

1/

Gentica quantitativa aplicada ao melhoramento gentico do maracujazeiro

Contudo, apesar de a caracterstica considerada principal - nmero de


frutos por planta - ter apresentado como ao gnica predominante
devida aos desvios da dominncia, indicou-se, para essa populao, mtodo
de seleo recorrente intrapopulacional pela sua maior facilidade de execuo
e por outras caractersticas terem apresentado como ao gnica
predominante a aditiva, assim, com o uso de ndice de seleo, espera-se
que se obtenham ganhos pela seleo para as vrias caractersticas avaliadas
na populao. Optou-se, desse modo, pela seleo recorrente intrapopulacional
entre famlias de meios-irmos, por se tratar de um mtodo mais facilmente
aplicado ao maracujazeiro, em que as prprias prognies, avaliadas como
superiores, sero recombinadas, ganhando-se tempo no trabalho de
melhoramento.

Estimativas dos coeficientes de herdabilidade


Estimaram-se, neste trabalho, os coeficientes de herdabilidade, nos
sentidos amplo e restrito, para as mdias das unidades de seleo entre
famlias de machos, entre famlias de fmeas e entre famlias de fmeas
dentro de machos, para a anlise conjunta (Tabela 4).
Em geral, os valores dos coeficientes de herdabilidade mais elevados
foram obtidos para famlias de machos, no entanto, isso no significa que
as maiores respostas seleo sero obtidas para esse tipo de famlia, j
que os valores dos diferenciais de seleo tambm variaram com a unidade
de seleo. Ento, a eficincia do processo seletivo para cada tipo de
famlia deve ser comparada apenas pelas respostas esperadas seleo.
A principal caracterstica avaliada, nmero de frutos por planta (NF),
no apresentou as maiores estimativas de herdabilidade, no entanto, no
se pode concluir que esta ter pequeno ganho com a seleo, pois
estimativas de valores altos de herdabilidade podem ocorrer para
caracteres de pequena varincia gentica aditiva, desde que seja pequena
a influncia ambiental no carter, e a caracterstica NF tenha sido
possivelmente a mais afetada por esse fator, apresentando os maiores
coeficientes de variao experimental. Alm de tudo, foi o carter que
apresentou os maiores coeficientes de variao gentico-aditivos.

265

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Tabela 4. Coeficientes de herdabilidade no sentido amplo e no restrito, considerando,


como unidades de seleo, famlias de machos, famlias de fmea e famlias de
fmeas dentro de machos, para a anlise conjunta.
Caractersticas1/

h 2 (%) 2/

NF

PF

CF

LF

EC

DA

2
hMA

80,82

89,56

93,94

88,22

86,90

83,13

2
hMR

59,97

89,56

90,49

85,33

69,83

74,82

2
h FA

68,85

76,11

86,87

74,42

76,69

67,53

2
h FR

33,65

76,11

78,15

67,54

44,19

50,61

2
h F/MA

61,77

59,21

75,19

59,52

68,80

55,43

2
h F/MR

20,22

59,21

61,67

49,59

28,14

33,45

NF - nmero de frutos por planta; PF - peso de frutos em gramas; CF - comprimento de


frutos em mm; LF - largura de frutos em mm; EC - espessura de casca em mm; DA - nmero
de dias at a antese.
1/

2
2
hMA
e h MR
= herdabilidades da mdia de macho nos sentidos amplo e restrito
2
2
respectivamente. h FA
e h FR
= herdabilidades da mdia de fmea nos sentidos amplo e restrito
2
2
respectivamente. h F/MA
e h F/MR
= herdabilidades da mdia de fmea dentro de macho nos
sentidos amplo e restrito respectivamente.
2/

Os valores dos coeficientes de herdabilidade, na anlise conjunta,


para a caracterstica nmero de frutos por planta (NF) variaram de 20,22% e
61,77%, para famlias de fmea dentro de macho, de 59,97% e 80,22% para
famlias de machos, nos sentidos restrito e amplo respectivamente.
As estimativas de herdabilidade em uma populao podem variar de
acordo com a caracterstica avaliada, o mtodo de estimao, a diversidade
na populao, o tamanho da amostra avaliada, o nvel de endogamia da
populao, o nmero e tipos de ambientes considerados, a preciso na
conduo do experimento e na coleta de dados e com a unidade experimental
considerada, ento essas estimativas no devem ser extrapoladas para outras
populaes ou outros ambientes.

266

Gentica quantitativa aplicada ao melhoramento gentico do maracujazeiro

Como a herdabilidade no sentido restrito

refere-se frao das

diferenas fenotpicas entre os pais que se espera recuperar entre os


descendentes, optou-se por utiliz-la neste trabalho para os clculos dos
ganhos de seleo, pois a herdabilidade no sentido amplo considera a
variabilidade gentica total que transmitida apenas em parte aos
descendentes.

Co-varincias e coeficientes de correlao gentica


aditiva
No estudo da associao entre caractersticas, o mais apropriado o
uso dos coeficientes de correlao, pois esses so adimensionais, o que
permite a comparao entre diferentes pares de caracterstica, diferentemente
das co-varincias. As correlaes fenotpicas encontradas para duas
caractersticas quaisquer possuem causas genticas e ambientais, porm,
somente as associaes de natureza gentica so herdveis, portanto, podem
ser utilizadas na orientao de programas de melhoramento. De acordo com
Falconer (1987), a principal causa da correlao gentica a pleiotropia, pois
as ligaes gnicas so causas transitrias.
Assim, neste trabalho, estimaram-se as co-varincias e os coeficientes
de correlao gentico-aditiva, pois so os herdveis, para os ambientes
estudados individualmente e para a anlise conjunta.
Esto apresentados, na Tabela 5, os valores das estimativas das covarincias e das correlaes gentico-aditivas para a anlise conjunta.
Analisando esses valores, nota-se que no houve grandes divergncias em
relao anlise dos ambientes, individualmente, o que era esperado devido
falta de interao entre gentipos e ambientes.
O carter nmero de frutos por planta demonstrou estar associado
negativamente com peso, comprimento e largura de frutos e positivamente

267

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

com espessura de casca, o que pode dificultar o trabalho de melhoramento, j


que ganhos em peso, no comprimento e na largura de frutos tambm so
considerados de grande importncia para uma populao-elite.
Tabela 5. Estimativas das co-varincias gentico-aditivas ( A xy ) e dos coeficientes
de correlao gentico-aditiva ( rGA ) entre seis caractersticas de maracujazeiro para
a anlise conjunta.
Caracte-

Co-varincias e correlaes
PF

CF

LF

EC

A xy

-115,8862

-25,2674

-16,8898

2,2501

-67,3155

rGA

-0,6227**

-0,5476**

-0,6746**

0,4244**

A xy

131,7861

68,9829

2,8528

112,0845

rGA

0,8833**

0,8521**

0,1664**

0,5458**

A xy

13,3966

0,2317

28,6592

rGA

0,6675**

0,0545

0,5630**

A xy

0,3443

18,1230

rGA

0,1493**

0,6560**

A xy

-1,9662

rGA

-0,3361**

rsticas1/
NF

PF

CF

LF

EC

DA

NF - nmero de frutos por planta; PF - peso de frutos em gramas; CF - comprimento de


frutos em mm; LF - largura de frutos em mm; EC - espessura da casca em mm; DA - nmero
de dias at a antese.
** Significativo a 1% de probabilidade pelo teste t.
= Valores de correlao fora do intervalo de -1,00 a 1,00.
1/

Ao comparar a caracterstica peso de frutos com as demais, nota-se


que esta apresentou correlaes gentico-aditivas positivas com todas as
demais, excluindo-se nmero de frutos por planta, assim, parece estar

268

Gentica quantitativa aplicada ao melhoramento gentico do maracujazeiro

constatado que um aumento nas dimenses do fruto pode resultar em


diminuio da produo em nmeros de frutos. Assim sendo, no
melhoramento, mtodos mais elaborados de seleo podem ser necessrios
para que se atinja uma populao de alta produtividade e com boas
caractersticas comerciais, como tamanho de frutos, por exemplo, podem-se
citar os ndices de seleo que permitem ganhos simultneos em vrias
caractersticas, mesmo que correlacionadas negativamente.

Estimativas de ganhos para as alternativas de seleo


Procurou-se tambm, neste trabalho, aplicar um ciclo de seleo na
populao estruturada no Delineamento I. Nesse caso, existem vrias
opes de seleo possveis, como: seleo entre famlias de machos,
entre famlias de fmeas, entre famlias de fmeas dentro de machos e
seleo baseada no ndice combinado. Para decidir qual a melhor opo
a ser aplicada populao, foram estimados os ganhos esperados com a
seleo para cada uma das opes via seleo direta para nmero de
frutos por planta e via ndice de seleo, baseado na soma de ranks, proposto
por Mulamba & Mock (1978), para depois compar-los.
Deve-se lembrar que, na populao estruturada no Delineamento I, a
seleo deve ocorrer, eventualmente, apenas quando este for estabelecido
com o propsito de estimar os parmetros genticos de uma populao que
so importantes na sua avaliao em relao s possibilidades de se obterem
ganhos pela seleo e na escolha de mtodos de melhoramento mais
apropriados e no por vrios ciclos como uma tcnica de melhoramento
(Furtado, 1996).
Nos casos em que no so significativas as interaes gentipos X
ambientes ou que se deseja maximizar os ganhos para uma srie de
ambientes, o mais correto estimar esse ganho pela utilizao do
componente de varincia gentica da anlise conjunta, mesmo que a
unidade de recombinao seja de apenas um dos ambientes avaliados

269

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

(Cruz & Regazzi, 2001). Assim, neste trabalho, estimaram-se os ganhos para a
anlise conjunta.
Apresentam-se, na Tabela 6, as estimativas de ganhos esperados por
seleo na anlise conjunta, para as diversas alternativas de seleo
avaliadas, pela seleo direta em nmero de frutos por planta e pelo ndice
de seleo, para todas as caractersticas analisadas.
Comparando os ganhos estimados para a caracterstica nmero de
frutos por planta, tanto pela seleo direta quanto pela utilizao dos
ndices de seleo, constata-se que, na estratgia de seleo entre famlias de
fmeas dentro de machos, obtiveram-se os menores valores de ganhos
preditos.
Analisando as alternativas de seleo direta em nmero de frutos por
planta (NF), conclui-se que a utilizao do ndice combinado foi a alternativa
que apresentou os maiores ganhos para a caracterstica em questo, sendo os
acrscimos nos ganhos com essa alternativa iguais a 10,79%, 35,22% e
254,23% maiores que os ganhos esperados para famlias de machos, famlias
de fmeas e famlias de fmeas dentro de machos respectivamente. Esses
resultados confirmam os de Falconer (1987) que afirma que a seleo
baseada nos ndices combinados to boa ou superior a qualquer um dos
outros mtodos.
Ao se selecionar gentipos superiores para uma dada caracterstica,
mudanas indesejveis podem ocorrer em outras devido existncia de
correlaes entre elas. Cruz & Regazzi (2001) relatam que a seleo com base
em uma nica caracterstica tem-se mostrado inadequada, pois conduz a um
produto final superior no que se refere a essa caracterstica, mas pode levar a
desempenhos no to favorveis para as demais. Uma maneira de se aumentar
o xito seletivo por meio da seleo simultnea de caractersticas, assim, o
uso dos ndices de seletividade apresentam-se como alternativas eficientes,
pois permitem a seleo com base em vrios caracteres de interesse.

270

Gentica quantitativa aplicada ao melhoramento gentico do maracujazeiro

Tabela 6. Estimativas de ganhos esperados para as alternativas de seleo avaliadas,


por meio da seleo direta em nmero mdio de frutos e ndice de seleo, para a
anlise conjunta.

Seleo direta em NF

Alternativas
de seleo

Entre machos

Entre fmeas

Entre fmeas/
macho

Seleo
combinada

ndice de seleo

GS

GS(%)

GS

GS(%)

NF

4,54

16,75

3,28

12,10

PF

-8,80

-4,75

2,25

1,21

CF

-1,07

-1,24

0,06

0,07

LF

-0,93

-1,23

0,79

1,05

EC

-0,13

-2,02

0,25

3,88

DA

-4,41

-3,48

-2,30

-1,81

NF

3,72

13,72

3,28

12,10

PF

-7,63

-4,11

3,18

1,72

CF

-1,59

-1,84

0,77

0,89

LF

-0,55

-0,73

0,66

0,88

EC

-0,04

-0,62

0,02

0,31

DA

-2,72

-2,15

-1,90

-1,50

NF

1,42

5,24

0,80

2,95

PF

-1,99

-1,07

3,74

2,02

CF

-0,27

-0,32

0,99

1,15

LF

-0,12

-0,16

0,55

0,73

EC

-0,01

-0,13

0,00

0,00

DA

-0,52

-0,41

-0,01

-0,01

NF

5,03

18,55

4,09

15,09

PF

-10,76

-5,80

1,52

0,82

CF

-1,54

-1,79

0,30

0.35

LF

-1,57

-2,08

0,58

0,77

EC

-0,10

-1,55

0,10

1,55

DA

-4,07

-3,21

-3,24

-2,55

271

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Pela utilizao do ndice seletivo, pode-se notar que os ganhos


esperados com a seleo para a caracterstica nmero de frutos por planta
diminuram um pouco, mas, em contrapartida, obtiveram-se ganhos para as
outras caractersticas estudadas, com interesse em diminuir a mdia dos
caracteres espessura da casca e nmero de dias at a antese, indicando que o
emprego desse ndice de seleo foi vantajoso para as alternativas de seleo
avaliadas, pois resultou em ganhos para nmero de frutos por planta sem
fornecer grandes perdas de ganho em outras caractersticas de interesse.
Analisando os valores de ganhos preditos pela seleo, baseada em
ndices seletivos, pode-se perceber que novamente os ganhos com a seleo
combinada foram maiores, obtendo-se os seguintes valores: 15,09% para
nmero de frutos por planta, 0,82% para peso de frutos, 0,35% para
comprimento de frutos, 0,77% para largura de frutos, 1,55% para espessura da
casca e de -2,55% para nmero de dias at a antese.

Concluso
Delineamentos experimentais apropriados em estudos de gentica
quantitativa em maracujazeiro-amarelo so prticas de fcil introduo em
programas de melhoramento de maracujazeiro-amarelo. So ferramentas de
grande poder de informao no que se refere a prticas e a mtodos de
melhoramento a serem utilizados em populaes de estudo.
Tal abordagem deve ser estimulada em equipes de pesquisadores com
essa cultura nas vrias regies do Pas.

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274

Cai a noite escura, e no cu estendidas,


As estrelas cintilam com pele reluzente.
E a flor-da-paixo, toda em seda vestida,
Enfeita a nossa terra da aurora ao poente.
Planta audaciosa e de flor colorida
Igual que a uma estrela de brilho atraente.
Filhas de um s cu que gerou, que deu vida,
Separadas pelo abismo, unidas pela mente.

Geovane Alves de Andrade

Marcadores moleculares aplicados ao


melhoramento gentico do
maracujazeiro
Messias Gonzaga Pereira
Telma Nair Santana Pereira
Alexandre Pio Viana

Intr
oduo
Introduo

s marcadores moleculares vm sendo, cada vez mais,


incorporados a programas de melhoramento gentico.
Tm

procedimentos

que

sido

empregados

constituem

os

nas

diferentes

programas

de

etapas

ou

melhoramento.

Notadamente, tratando-se das plantas semiperenes, como o caso do


maracujazeiro, a utilizao desses marcadores se reveste ainda de maior
importncia.
No presente captulo, a abordagem a ser apresentada restringir-se-
utilizao dos marcadores moleculares como ferramenta auxiliar aos
procedimentos de melhoramento em uso ou potencialmente utilizados no
melhoramento gentico do maracujazeiro-amarelo. Para tanto, visando
melhor avaliar as potencialidades dos marcadores como ferramenta, os
seguintes tpicos sero considerados: (a) aspectos relevantes de um
programa de melhoramento de maracujazeiro; (b) caractersticas e
categorias dos marcadores moleculares; (c) etapas do programa de
melhoramento de maracujazeiro, potencialmente beneficiado pelo uso dos
marcadores; e (d) emprego atual dos marcadores no melhoramento do
maracujazeiro. Finalmente, algumas concluses sobre o tema sero
apresentadas.

277

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Aspectos relevantes de um programa de


melhoramento de maracujazeiro-amarelo
O maracujazeiro, mais especificamente, o maracuj-amarelo, uma
importante fruteira tropical. A principal espcie cultivada, Passiflora edulis f.
flavicarpa Deg., uma planta semiperene e algama. Sua alogamia
assegurada principalmente por se tratar de uma espcie auto-incompatvel,
com possibilidades de interincompatibilidade. Outro aspecto relevante a
possibilidade de reproduo tanto seminal, via sementes, quanto assexual ou
vegetativa.
Como a maioria das demais fruteiras tropicais e semiperenes, muito
pouco tem sido feito no melhoramento dessa importante cultura. Isto, em
grande parte, em decorrncia das particularidades e dificuldades inerentes ao
melhoramento de uma planta semiperene. Os procedimentos, em geral,
demandam muito tempo, grandes reas e recursos financeiros. Em
conseqncia, a oferta de material melhorado aos agricultores muito
pequena. No existem, semelhana de muitas outras culturas, variedades
recomendadas com caractersticas agronmicas bem definidas, com suas
regies de adaptao estabelecidas. Como resultado, os problemas
agronmicos so os mais diversos, com destaque para a incidncia de
doenas nas diferentes regies produtoras, desuniformidade das plantas e
conseqentemente de produo, em especial, de caractersticas como
nmero de frutos produzidos por planta.
Atualmente, so recomendadas para cultivo, tanto populaes de
polinizao livre, via seminal, quanto vegetativa. Nas populaes seminais,
verificam-se lavouras desuniformes, demonstrando ampla segregao
gentica entre os indivduos da populao. Se por um lado a variabilidade
gentica entre plantas desejvel do ponto de vista de melhoramento e de
fontes de genes, do ponto de vista agronmico a desuniformidade prejudica
bastante o padro produtivo e o manejo das lavouras. As reas clonais, por
sua vez, potencialmente podem ser mais uniformes e de mais fcil manejo. Por
outro lado, h que se ter cuidado com o aspecto da auto-incompatibilidade e,

278

Marcadores moleculares aplicados ao melhoramento gentico do maracujazeiro

em alguns casos, com a interincompatibilidade, alm do estreitamento da


base gentica, uma vez que um nmero reduzido de clones utilizado para se
compor a populao melhorada.
Portanto,

considerando

estdio

atual

dos

programas

de

melhoramento do maracujazeiro, os desafios so enormes e muito h que se


fazer. Assim sendo, precioso agregar aos procedimentos clssicos de
melhoramento gentico, uma ferramenta poderosa como os marcadores de
DNA para que se possa acelerar a busca de resultados. Como ser discutido
nos prximos tpicos, os marcadores possuem potencialidades para
efetivamente serem utilizados nas diferentes etapas do melhoramento tais
como: a quantificao da variabilidade gentica disponvel; a relao de
proximidade gentica entre as diferentes espcies relacionadas; o
mapeamento e a anlise dos genes de interesse para o melhoramento; o
melhor entendimento da herana das principais caractersticas, inclusive, no
nvel dos genes

ou dos QTLs (Quantitative trait loci) que controlam as

determinadas caractersticas; a previsibilidade de sucesso de cruzamentos em


termos de potencialidades para explorao da heterose.

Caractersticas e categorias dos mar


cador
es molecular
es
marcador
cadores
moleculares
Os marcadores moleculares, em especial, os de DNA, caracterizam-se
como diferenas genticas em nvel de DNA, geradas por mutaes de ponto
ou por aberraes cromossmicas, as quais so repassadas aos seus
descendentes, o que constitui, em outras palavras, polimorfismos de DNA que
podem ser visualizados por meio de procedimentos laboratoriais especficos.
Marcadores de DNA so, portanto, diferenas nas seqncias de nucleotdeos
as quais podem ser identificadas e, muitas vezes, suas funes permanecem
desconhecidas. Dependendo dos procedimentos, as diferenas de
nucleotdeos que constituem os marcadores moleculares podem ser
quantificadas, qualificadas e seu comportamento verificado em acordo com
as leis bsicas da herana de Mendel, definindo-os, como marcadores
genticos (Ferreira & Grattapaglia, 1995). Como caractersticas principais, os

279

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

marcadores de DNA possuem as vantagens de serem potencialmente


ilimitados, neutros do ponto de vista seletivo, independentes da idade ou do
rgo da planta, no deletrios e livres de influncia ambiental.
Com os avanos das pesquisas na rea da biologia molecular, assim
como do desenvolvimento de equipamentos cada vez mais modernos, e da
bioinformtica, cada vez se torna mais fcil a identificao de um nmero
virtualmente ilimitado de marcadores em determinado organismo, permitindo
a cobertura completa do genoma de interesse. Tais avanos vm potencializar
ainda mais a tecnologia dos marcadores moleculares, tornando-a cada vez
mais atrativa e vivel ela ser incorporada aos procedimentos de gentica e de
melhoramento de plantas.
Entre os marcadores de DNA, o primeiro a ser utilizado foi o baseado
em enzimas de clivagem do DNA (Restriction fragment length polymorphism
RFLP). O RFLP, embora bastante trabalhoso, constitui metodologia poderosa,
capaz de gerar marcas co-dominantes de grande contedo em termos de
informao gentica. Essa categoria, alm de ter sido aplicada em vrios
estudos de diversidade gentica, na construo de mapas genticos de
ligao, no mapeamento e na anlise de genes, tambm, contribuiu,
sobremaneira, para os estudos de similaridade genmica, facilitando estudos
evolutivos das espcies relacionadas. Com o advento do processo da
amplificao em cadeia com o uso da enzima DNApolimerase (PCR), outras
categorias de marcadores foram desenvolvidas. Como exemplos, os mais
utilizados, baseados na PCR, so RAPD (Random amplified polymorphic
DNA) e AFLP (Amplified fragment Length polymorphism).
O primeiro, RAPD, por ser uma metodologia mais simples e
relativamente mais barata, tem sido intensamente usado pelos diversos
laboratrios, em diferentes culturas, para as mais variadas finalidades. O RAPD
se baseia no uso de iniciadores arbitrrios que so utilizados na amplificao
de DNA via PCR. Embora sejam bastante empregados, esses marcadores
apresentam algumas limitaes, sendo as principais: baixa reprodutibilidade

280

Marcadores moleculares aplicados ao melhoramento gentico do maracujazeiro

e no-separao dos indivduos homozigotos dos heterozigotos, ou seja, so


dominantes.
Os marcadores AFLP foram estabelecidos na expectativa de se explorar
as vantagens do RFLP por se basear, igualmente, em enzimas de clivagem e
tambm nas vantagens do RAPD, uma vez que so da mesma forma baseados
na PCR. A grande vantagem dos marcadores AFLP o elevado potencial de
se detectar polimorfismo, permitindo com isto, rpida cobertura genmica. A
grande desvantagem que, semelhana dos marcadores RAPD, so
tambm co-dominates.
Outras categorias de marcadores so ainda utilizados, merecendo
destaque os minissatlites ou VNTR (variable number of tandem repeats), os
microssatlites ou SSRs (Single sequence repeats) e os SNPs (Single
nucleotide polymorphisms). Cada uma dessas categorias de marcadores
possui suas particularidades, sendo que a utilizao de uma ou de outra
metodologia depende de alguns fatores, entre eles as condies laboratoriais
e os objetivos da investigao. Tanto os marcadores SSRs quanto os SNPs
so bastante robustos, com elevado grau de aplicabilidade. Os marcadores
SSRs tm a grande vantagem de serem co-dominantes e usualmente
multiallicos. So, portanto, bastante efetivos nos diferentes procedimentos
de melhoramento incluindo trabalhos de divergncia gentica, de
fingerprinting, de mapeamento e anlise de genes. A dificuldade associada a
esse marcador que demanda melhores condies laboratoriais,
especialmente, quando ainda no se dispe de uma coleo de primers SSR
para a cultura de interesse. Os SNPs, por sua vez, seguramente so os mais
efetivos na deteco de polimorfismos. Em situaes em que o polimorfismo
bastante reduzido, possivelmente, a alternativa seria a aplicao dos SNPs.
Estes so capazes, como o prprio nome indica, de identificar polimorfismos
em nvel de um nico nucleotdeo. A dificuldade associada a essa categoria
de marcador a grande dependncia de seqenciamento. Mas, com os
avanos que vm ocorrendo, especialmente, na rea genmica, o
seqenciamento em grande escala, de um conjunto de gentipos, vem cada
vez mais sendo facilitado e factvel de processamento.

281

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Independente de sua categoria, considerando as particularidades dos


marcadores de DNA, sobretudo, o fato de serem ilimitados, de atuarem no
DNA, de serem independentes da idade da planta e, de no sofrerem influncia
ambiental, e, ainda, as particularidades do maracujazeiro:

semiperene,

algama, auto-incompatvel fica bastante evidente a importncia da utilizao


dos marcadores no melhoramento dessa fruteira.

Etapas do programa de melhoramento de


maracujazeiro-amarelo potencialmente beneficiado
pelo uso dos mar
cador
es
marcador
cadores
semelhana das demais culturas de interesse econmico, os
principais procedimentos de melhoramento do maracujazeiro so:
caracterizao e avaliao de germoplasma (silvestre e cultivado); estudo da
herana dos principais caracteres agronmicos; melhoramento intra e
interpopulacional e seleo de genitores para hibridao. Alm das citadas, o
maracujazeiro-amarelo possui algumas particularidades no que diz respeito
auto-incompatibilidade, com implicaes no somente nos procedimentos de
melhoramento, como tambm nos de recomendao de cultivares clonal ou
seminal e, ainda, na multiplicao e conservao dos gentipos-elite,
especialmente, quando via seminal.
No que diz respeito caracterizao e avaliao de germoplasma, os
marcadores de DNA so especialmente aplicveis. Em geral, o melhorista
precisa manipular o germoplasma disponvel, a fim de usar a diversidade
gentica existente nas colees, buscando gentipos que, por meio de
metodologias adequadas, possam gerar material gentico superior. No
adequado o uso direto de germoplasma em programas de melhoramento, j
que muito desse material traz consigo genes responsveis por caractersticas
indesejveis e de difcil manejo, o que vai, de alguma forma, prolongar,
sobremaneira, o tempo necessrio para o desenvolvimento de uma variedade.
H alguns anos, os melhoristas lanavam mo de tcnicas de caracterizao
morfolgica para conhecer o material gentico existente nas colees; e, com

282

Marcadores moleculares aplicados ao melhoramento gentico do maracujazeiro

base nos dados de caracterizao e avaliao, decidiam sobre quais acessos


deviam ser includos nos programas de melhoramento. Atualmente, com o
advento dos marcadores moleculares, os pesquisadores tm uma ferramenta
para auxili-los na estimativa da diversidade gentica existente na coleo, nas
relaes genticas entre material para definio de direo de cruzamentos ou
seleo de progenitores, alm de poder acompanhar a introduo de genes
durante o processo de melhoramento. O conhecimento do germoplasma
disponvel seja ele silvestre, seja cultivado, principalmente, do ponto de vista
de variabilidade gentica, distncia gentica entre os distintos acessos,
identificao de possveis duplicatas,
programa

de

melhoramento

uma etapa fundamental de um

gentico.

Considerando

caso

do

maracujazeiro-amarelo, com suas peculiaridades j descritas, o emprego dos


marcadores moleculares propicia um trabalho mais eficiente e eficaz,
permitindo ao melhorista, projetar com mais propriedade o uso de
germoplasma

dessa

variedade

nos

diferentes

procedimentos

de

melhoramento.
Quanto ao estudo da herana dos principais caracteres agronmicos,
estes so fundamentais para tomadas de deciso do ponto de vista do
melhoramento. Por exemplo, se a herana de determinada caracterstica
predominantemente aditiva, mtodos intrapopulacionais de melhoramento
so os mais indicados. Por sua vez, se o caractere possui herana
predominantemente dominante ou sobredominante, ento as melhores
estratgias so baseadas em procedimentos interpopulacionais, visando
explorar o vigor hbrido ou o fenmeno da heterose. No obstante os
importantes resultados dos trabalhos clssicos de herana, principalmente,
aqueles baseados em delineamentos genticos apropriados, os marcadores
moleculares vm contribuir, sobremaneira, para o conhecimento da herana.
Uma das grandes vantagens do uso dos marcadores de DNA est no
mapeamento de genes. Com os marcadores, pode-se mapear tanto os genes
associados a caracteres qualitativos quanto aqueles associados a caracteres
quantitativos, sendo os ltimos denominados QTLs (Quantitative trait loci), ou
seja, locos associados a caractersticas quantitativas.

283

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

No caso de caracteres quantitativos, naturalmente controlados por


vrios genes, os marcadores constituem ferramenta diferenciada, pois
permitem a identificao e a anlise de cada um dos genes envolvidos na
caracterstica ou pelo menos daqueles de maior importncia. Alm do
mapeamento, possvel o estudo dos efeitos gnicos e da ao dos genes de
maneira isolada, interativa e cumulativa. Entende-se como efeito dos genes a
determinao de quanto da variao de uma dada caracterstica explicada
por uma regio genmica especfica ou simplesmente um QTL. Para ao
gnica, faz-se uma anlise mais qualitativa, classificando a atuao de
determinado gene, se ele atua com ao aditiva, dominncia parcial,
dominncia completa ou, ainda, com sobredominncia. Os marcadores vo
alm, permitindo o estudo das epistasias, ou seja, de como esses genes
atuam no genoma: se eles agem aditivamente ou se a presena de
determinado alelo influencia o efeito e a ao de alelos de outros genes,
caracterizando a ocorrncia de epistasias. Como se pode perceber, os
marcadores de DNA permitem uma abordagem muito mais profunda sobre a
herana de determinada caracterstica. Em realidade, enquanto via mtodos
biomtricos clssicos estuda-se a herana de uma caracterstica como um
todo, quantificando seu efeito, sua herdabilidade e seu tipo de herana, com
os marcadores, fraciona-se a caracterstica em seus componentes primrios,
os genes, e cada um deles submetido s determinaes qualitativas e
quantitativas, alm da anlise de suas interaes no genoma. O mapeamento
dos genes constitui informao privilegiada para o melhorista, permitindo
tomadas de deciso sobre a maneira de aperfeioar determinada
caracterstica, com muito mais conhecimento de causa para o
estabelecimento dos procedimentos de melhoramento. Por exemplo,
sabendo-se a priori que um nmero definido de genes atua em determinada
caracterstica, e o mais importante, como eles atuam no genoma em termos
quantitativos, qualitativos, individuais e em conjunto, a estratgia de quais
alelos ou genes pode ser definida, tendo-se em mente o fentipo a ser
buscado.
Quanto aos procedimentos de melhoramento intra e interpopulacional,
com j foi discutido, a tomada de deciso est na dependncia,

284

Marcadores moleculares aplicados ao melhoramento gentico do maracujazeiro

principalmente, da herana das principais caractersticas. Outro fator


importante na tomada de deciso a distncia gentica existente entre os
distintos gentipos disponveis ao melhoramento. Neste sentido,

os

marcadores moleculares podem contribuir expressivamente com ambos os


aspectos: padro de herana das caractersticas, bem como divergncia
gentica disponvel.
Um

dos

procedimentos

clssicos

bastante

eficientes

no

melhoramento populacional a seleo recorrente. Esta, embora mais


utilizada em plantas anuais como o milho, potencialmente, pode ser tambm
utilizada em plantas semiperenes, como o caso do maracujazeiro-amarelo.
Nesse caso em particular, os marcadores, quando utilizados como ferramenta
auxiliar (marker assisted selection - MAS), so ainda mais importantes uma vez
que podem maximizar os ganhos genticos, contribuindo para que os
resultados ocorram em um tempo menor quando comparados aos
procedimentos clssicos sem os marcadores. Os ganhos genticos na
seleo recorrente dependem, em grande parte, dos procedimentos a serem
adotados os quais, por sua vez, dependem da variabilidade gentica
disponvel, bem como da natureza da varincia gentica em determinada
populao. Nesse sentido, com os marcadores de DNA, pode-se inclusive
melhor compor uma populao, pela recombinao de indivduos
previamente conhecidos em termos de distncia gentica entre eles. Uma
populao composta de indivduos geneticamente distintos e distantes entre
si, seguramente contemplar maior varincia gentica que, por sua vez,
contribuir com maiores ganhos genticos nos ciclos de seleo recorrente.
Outro exemplo da utilizao dos marcadores na seleo recorrente o usado
na conduo dos ciclos de seleo. Considerando que cada ciclo envolve trs
etapas: obteno de prognies, avaliao das prognies e recombinao dos
indivduos superiores, uma etapa interessante de se utilizar os marcadores na
identificao entre os indivduos, daqueles com maior divergncia gentica
para serem recombinados. Assim, fazendo-se a combinao gnica de
indivduos sabidamente superiores (pelo teste de avaliao) e sabidamente
divergentes (pelos marcadores de DNA), os ganhos genticos so

285

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

assegurados e potencializados em cada ciclo e ao longo dos demais ciclos. A


divergncia gentica entre os indivduos a serem recombinados garante a
manuteno

ou at mesmo o crescimento da varincia gentica na

populao. Considerando que os ganhos genticos so diretamente


proporcionais varincia gentica, conclui-se pelo bem-sucedido uso dos
marcadores moleculares nos ciclos de seleo recorrente.
No que diz respeito potencialidade de seleo de genitores para
hibridao, h que considerar primeiro, a viabilidade ou no de se explorar, na
cultura, a heterose. Esta funo de dois componentes: a distncia gentica
entre os genitores e ou grau de dominncia da caracterstica de interesse, ou
seja, quanto maior a distncia gentica e quanto maior o grau de dominncia,
maior a heterose. Depois de conceituar a heterose, percebe-se que os
marcadores moleculares so potencialmente interessantes para explor-la
uma vez que eles podem auxiliar em ambos os componentes dela.
Considerando primeiramente o aspecto da distncia gentica, os marcadores
de DNA so particularmente eficientes, pois atuam no nvel de DNA, livre,
portanto, das influncias ambientais. Considerando que o DNA que
contempla e revela a totalidade das diferenas genticas, a quantificao das
distncias como base no prprio DNA s pode ser a melhor escolha. Quanto
ao segundo componente, o grau de dominncia, novamente os marcadores
moleculares so bastante efetivos em tais mensuraes e determinaes. Os
marcadores permitem o conhecimento qualitativo e quantitativo da herana
no apenas da caracterstica de interesse, mas tambm no nvel das regies
genmicas ou simplesmente dos QTLs associados a tal caracterstica.
Portanto, com o uso dos marcadores moleculares, a previsibilidade de
sucesso nos trabalhos de hibridao bem maior. Tratando-se do
maracujazeiro-amarelo, uma planta semiperene, os procedimentos para se
explorar a hibridao so bastante demorados, consumindo no somente
tempo, mas tambm, grandes reas e, conseqentemente, recursos
financeiros. Nesse particular, a associao dos marcadores reveste-se ainda
de maior importncia.

286

Marcadores moleculares aplicados ao melhoramento gentico do maracujazeiro

Os marcadores moleculares podem tambm ser utilizados em etapas


conhecidas como ps-melhoramento. Nesse sentido, podem ser empregados
para assegurar a paternidade (proteo de cultivar) de determinada cultivar e
para monitorar a pureza gentica das sementes produzidas. A importncia da
paternidade de uma variedade refere-se no somente ao aspecto da proteo,
mas tambm a sua utilizao em futuras etapas de melhoramento, bem como
correta multiplicao das sementes nos servios de produo destas, para
repasse aos produtores. Com o advento da lei de proteo de cultivares, a
paternidade ou a genealogia de uma nova cultivar adquire ainda mais
importncia. H que se considerar que uma das condies para se proteger
uma cultivar a distinguibilidade. No que diz respeito a essa condio, com o
acmulo do lanamento e recomendao de um nmero crescente de
cultivares, essa tarefa vai-se tornando cada vez mais difcil. Tradicionalmente,
os caracteres morfolgicos so descritores capazes de diferenciar uma
cultivar, contudo, existe limitao do nmero de caracteres morfolgicos
disponveis.
Outra situao bastante comum acontece com variedades com
polinizao aberta em espcies algamas, como o caso do
maracujazeiro-amarelo. Nessas variedades, previsvel a segregao de
parte dos caracteres morfolgicos, dificultando ainda mais os trabalhos de
identificao e de proteo de cultivares, principalmente em espcies
semiperenes, comum o uso de genitores no endogmicos na gerao de
hbridos. Esses hbridos, semelhana das variedades com polinizao
aberta, apresentam padres de segregao que, tambm, impedem a
distinguibilidade entre essas combinaes hbridas. Diante das dificuldades
para a correta identificao de um gentipo, bem como de sua genealogia,
baseada nos caracteres morfolgicos, verifica-se a potencialidade do uso dos
marcadores de DNA. A grande vantagem desses marcadores para essa
finalidade a propriedade que os caracteriza como potencialmente ilimitados,
ou seja, diferentemente dos caracteres morfolgicos, os marcadores de DNA
so abundantes, podendo ser gerados tantos quantos forem necessrios para
a correta distinguibilidade de determinada cultivar. Outro aspecto importante
que os marcadores morfolgicos tradicionais vo-se manifestando, em seus

287

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

diferentes estdios, conforme o desenvolvimento da planta. J os marcadores


de DNA permitem concluir sobre a paternidade ou a correta identificao de
determinado gentipo ainda em estdios de plntulas, sem que haja a
necessidade de longas esperas por estdios de desenvolvimentos especficos.
Finalmente, como possvel perceber, os marcadores moleculares
podem ser eficientemente utilizados nas diferentes etapas ou procedimentos
de melhoramento do maracujazeiro-amarelo. Em etapas de prmelhoramento, eles so usados na caracterizao e na avaliao de bancos
de germoplasma, bem como no mapeamento e na anlise de genes de
interesse. No melhoramento propriamente dito, os marcadores so
empregados tanto no melhoramento populacional quanto nos trabalhos de
hibridao, maximizando no s os ganhos genticos mas tambm a
heterose. E, no ps-melhoramento, podem ser utilizados para assegurar a
paternidade de cultivares seminais ou clonais, desenvolvidas, bem como para
monitorar a pureza das sementes e ou clones produzidos e repassados aos
agricultores.

Empr
ego atual dos mar
cador
es no melhoramento do
Emprego
marcador
cadores
maracujazeiro-amarelo
Apesar da importncia da cultura para o Pas, pouco tem sido feito em
termos de melhoramento gentico. Em parte, isso se deve s dificuldades
inerentes prpria cultura. Com o advento da biologia molecular, espera-se
que se possa fazer mais nessa cultura; entretanto, mesmo no aspecto
molecular os trabalhos ainda so muito poucos.
Um dos principais empregos dos marcadores moleculares o
conhecimento da diversidade existente no germoplasma das diferentes
espcies. Assim sendo, marcadores moleculares como isoenzimas, DNA
cloroplastdico, RAPD tm sido empregados visando conhecer melhor a
diversidade do gnero e as relaes genticas entre as diferentes espcies que
compem o gnero. Como exemplo, tem-se o trabalho desenvolvido por
Seguro et al. (2003) que estudaram as relaes entre 87 acessos
representantes de espcies cultivadas e silvestres do subgnero Tacsonia e

288

Marcadores moleculares aplicados ao melhoramento gentico do maracujazeiro

Manicata via isoenzimas. Esses autores observaram a formao de grupos


sendo que os acessos representantes das espcies P. tarminiana,
P. tripartita, P. mixta e P. cumbalensis constituram um grupo distinto daquele
formado pelas outras espcies.
Viana et al. (2003) avaliaram a diversidade gentica entre acessos de
espcies do gnero Passiflora via RAPD e observaram que h grande
variabilidade gentica entre as espcies P. foetida, P. alata, P. giberti,
P. suberosa, P. cincinnata, P. maliformis, P. edulis. f. edulis, sendo que as
espcies P. edulis f. flavicarpa e a P. giberti foram as mais distantes entre as
espcies estudadas. P. cincinnata e P. edulis f. edulis formaram um mesmo
grupo, sugerindo que elas compartilham uma similaridade gentica; o mesmo
foi observado entre as espcies P. foetida e P. suberosa. Neste trabalho, os
autores investigaram a diversidade de populaes de maracujazeiro-amarelo.
Os gentipos dessa espcie seguiram um padro de divergncia consistente
com o observado nos trabalhos de campo, mostrando baixa variabilidade
existente entre os indivduos estudados, indicando que, para um programa de
melhoramento com bons ndices e ganhos satisfatrios, variabilidade
adicional deve ser introduzida nas populaes de estudo.
Ganga et al. (2004) estudaram a diversidade gentica em populaes
de maracujazeiro-amarelo utilizando marcadores moleculares fAFPL. Foram
avaliados 36 acessos provenientes de 18 estados da federao. Verificou-se
grande diversidade gentica entre os acessos estudados e uma noestruturao geogrfica entre os acessos de um mesmo estado ou regio. Os
autores concluram que tais marcadores foram consistentes na avaliao da
diversidade e que tais resultados podem auxiliar na definio de estratgias
mais eficientes a serem utilizadas em programas de melhoramento de
maracuj-amarelo.
Muschner et al. (2003), objetivando estudar a variabilidade gentica e as
inter-relaes entre 61 espcies classificadas em 11 dos 23 subgneros e
utilizando trs marcadores moleculares nrITS (nuclear ribossomal Internal
Transcribed Spacer), o plastdio trnL-trmF (~1000bp) e o rps4 gene (~570bp),
observaram que independente do marcador e do mtodo de filogenia

289

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

utilizados formaram-se trs grupos principais (clades): um inclua os


subgneros Distephana, Dysosmia, Dysosmioides, Passiflora e Tacsonoides, um
segundo incluindo os subgneros Adopogyne, Decaloba, Murucuja e
Pseudomurucuja e um terceiro com o subgnero Astrophea. Os autores
concluram que os diferentes subgneros por eles estudados deveriam ser
agrupados em trs grupos maiores (clade): Passiflora, Decaloba e Astrophana
respectivamente. Mais recentemente, Lorenz-Lemke et al. (2005) realizaram um
estudo filogeogrfico avaliando a evoluo de P. actinia e P. elegans, duas
espcies encontradas na Regio Sul brasileira, baseado na variao de nrITS
concluram que a diferenciao de P. actinia em grupos geogrficos e a origem
de P. elegans podem ter sido influenciadas pela migrao da Mata Atlntica
em direo ao sul do Pas.
Outro uso muito importante dos marcadores moleculares a construo
de mapas genticos e a determinao de QTLs (Quantitative Trait Loci) e QRL
(Quantitative Resistance Loci) que aos poucos vo sendo desenvolvidos para a
cultura do maracujazeiro. Carneiro et al. (2002) construram um dos primeiros
mapas em maracuj-amarelo usando marcadores RAPD em uma populao de
mapeamento constituda por 90 plantas de uma populao F1 oriunda do
cruzamento entre os acessos IAPAR-06 e IAPAR-123; os autores empregaram a
configurao dupla pseudo-testcross. Lopes et al. (2003), utilizando AFLP,
construram outro mapa usando 117 plantas oriundas dessa mesma populao.
Em ambas as pesquisas, foram encontrados nove grupos de ligao para cada
genitor que correspondem aos nove pares de cromossomos da espcie. Em
outro trabalho, Lopes (2003) observou, no acesso IAPAR 123, pelo uso da anlise
de mapeamento por intervalo composto, um QRL na posio 39,57 cM (LOD
score 4,41) do grupo de ligao 2, entre as marcas de AFLP EM161461r e
EM01156a que explica 15,8% da variao fenotpica relacionada resistncia a X.
c. pv. passiflorae.
Dentro da mesma linha de pesquisa, Moraes (2005) confeccionou
mapas de ligao em maracujazeiro-amarelo e realizou o mapeamento de QTL
para caractersticas ligadas produo (velocidade de produo, produo
total, nmero total de frutos, peso mdio de fruto, comprimento e largura
mdia de fruto, porcentagem de polpa, teor de slidos solveis totais e
formato mdio de frutos). O mapeamento de QTL, utilizando mapeamento por

290

Marcadores moleculares aplicados ao melhoramento gentico do maracujazeiro

intervalo composto, identificou vrias regies associadas ao controle desses


caracteres nos mapas individuais. Foram mapeados QTLs para todos os
caracteres que apresentaram variabilidade gentica na populao. A
proporo da variao fenotpica, explicada pelos QTLs detectados, variou de
4,6% a 21,8%. No caso especfico da varivel nmero total de frutos, foi
mapeado o total de sete QTLs. A proporo da variao fenotpica explicada
por esses QTLs variou de 4,6% a 16,5%, sendo que um dos QTL apresentou
maior efeito aditivo entre todos os outros.

Concluses
Considerando as caractersticas do maracujazeiro-amarelo: cultura
algama, semiperene e auto-incompatvel, considerando tambm a pouca
disponibilidade de cultivares seja clonal, seja seminal, aliada aos grandes
desafios agronmicos dessa cultura, conclui-se que h necessidade de
programas de melhoramento capazes de associar os procedimentos clssicos
s ferramentas biotecnolgicas. Nesse particular, conclui-se pela
potencialidade dos marcadores moleculares em atuar como ferramenta
auxiliar a praticamente todas as etapas dos procedimentos de melhoramento.
Em resumo, os marcadores podem contribuir para melhorar o conhecimento
do material gentico disponvel aos melhoristas, caracterizando e
quantificando a diversidade e a divergncia gentica. Podem, tambm,
facilitar e aprofundar o conhecimento da herana dos caracteres de interesse,
permitindo com isso, direcionar os procedimentos de melhoramento. Podem
atuar como ferramenta na escolha de genitores de forma a explorar a heterose.
Os marcadores podem atuar, ainda, no ps-melhoramento, em fingerprintinge
no monitoramento da pureza gentica das cultivares desenvolvidas sejam
clonais, sejam seminais.

Referncias

bibliogrficas

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291

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

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nativas determinada por marcadores RAPD. Revista Brasileira de Fruticultura, v. 25, p.
489-493, 2003.

292

muito mais que encanto sade sustento,


a mo da natureza aos mortais exibida
Na condio de flor delicada e inocente.
Por mais fascinao e beleza envolvida
to misteriosa como nosso firmamento
Que d tom celestial ao sul do continente.

Geovane Alves de Andrade

Ecofisiologia do maracujazeiro e
implicaes na explorao diversificada
Marco Antonio da Silva Vasconcellos
Aldir Carlos Silva
Andrea Carvalho Silva
Fabrcio de Oliveira Reis

Intr
oduo
Introduo

maioria das 530 espcies de Passiflorceas descrita


originada da Amrica Tropical. Embora sejam encontradas
desde a regio Amaznica at o Paraguai e o nordeste da
Argentina, o Brasil um dos principais centros de diversidade gentica
dessa famlia de plantas, apresentando mais de 150 espcies nativas.
Contudo, a falta de um programa de pesquisa especfico, voltado para a
prospeco, identificao, coleta e manuteno de colees ativas de
germoplasma de plantas da famlia Passifloraceae limita a grande
possibilidade de explorao dessa diversidade gentica presente em nosso
pas.
Atualmente, os objetivos gerais mais importantes no melhoramento
gentico do maracujazeiro esto relacionados produtividade (seleo de
plantas potencialmente produtivas para os diferentes nveis de tecnologia
empregados), resistncia a pragas e doenas (nfase para as viroses e
bacterioses) e a qualidade dos frutos direcionados para os diferentes
mercados (fruta in natura ou industrializao) (Meletti & Bruckner, 2001). Da
mesma forma, pesquisas relacionadas obteno de princpios
fitoterpicos nas diferentes espcies podero servir de orientao em
programas de melhoramento especfico para obteno de plantas que
produzam determinado princpio fitoterpico em elevada quantidade.

295

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

O uso comercial direto e indireto de espcies de Passiflorceas, em


parte, esbarra na falta de informaes sobre o comportamento dessas
plantas (suas fenofases), nas diferentes condies climticas de cultivo.
Portanto,

conhecimento

do

crescimento,

desenvolvimento

caractersticas especficas da produo fundamental para maior


uniformidade na explorao comercial, obtendo-se dessa forma maiores
produtividades e conseqentemente elevao da renda do produtor.
Os estudos da ecofisiologia das fruteiras de clima tropical (as
fenofases e a fisiologia das plantas) so escassos, no permitindo
compreenso mais definida dos fenmenos relacionados ao crescimento e
ao desenvolvimento das plantas, notadamente, da biologia floral, do
florescimento, das relaes fonte-dreno e da qualidade dos produtos em
ps-colheita.
Aspectos relacionados ao comportamento dessas espcies, nas
diferentes regies produtoras, so reportados, em sua grande maioria, sob
o ponto de vista de produo e da qualidade de frutos, no sendo dada a
devida ateno para uma anlise mais detalhada na qual aspectos
anatmicos, morfolgicos e fisiolgicos, que poderiam dar subsdios para
uma melhor explicao dos resultados, s vezes contraditrios, observados
nos trabalhos de pesquisa, no so considerados.
Vrios autores tm demonstrado que a produo do maracujazeiro
encontra-se confinada a certas pocas do ano com frutificao afetada por
mudanas na temperatura, fotoperodo, radiao solar e precipitao
pluvial (Menzel & Simpson, 1994). Todavia, a maioria desses estudos no
se reporta aos modelos de crescimento vegetativo, ao efeito sobre as taxas
fotossintticas e s relaes fonte-dreno das plantas, alm do florescimento
e pegamento de frutos. A falta de um programa de pesquisa especfico,
voltado para a prospeco, identificao, coleta e manuteno de colees
ativas de germoplasma de plantas da famlia Passifloraceae, limita a grande
possibilidade de explorao dessa diversidade gentica presente em nosso

296

Ecofisiologia do maracujazeiro e implicaes na explorao diversificada

pas. Tendo em vista tais consideraes, este trabalho teve como objetivo
apresentar os dados preliminares das pesquisas em conduo, envolvendo
a anlise dos parmetros de crescimento e desenvolvimento das plantas,
trocas gasosas e explorao da diversidade gentica em relao aos
princpios fitoterpicos e suas implicaes para as fenofases das plantas
das diferentes espcies do gnero Passiflora presentes na coleo ativa de
germoplasma de Passiflorceas instalada na UFRRJ, de forma que estudos
futuros, realizados sobre a influncia de distintos rgos da planta ou de um
mesmo rgo em estdio de desenvolvimento diferente, possam ser
conduzidos com maior preciso.
As Passiflorceas tm seu uso comercial definido no apenas pelos seus
frutos para fabricao de bebidas e sucos de frutas, mas tambm apresentam
potencial de explorao da diversidade gentica em relao ao
comportamento quanto resistncia, tolerncia ou suscetibilidade s pragas,
doenas e nematides (explorao como porta-enxerto), alm do potencial
uso como ornamental e no atendimento s indstrias de fitoterpicos.
Em relao ao uso como porta-enxerto, necessrio que essa espcie
tenha facilidade de propagao, principalmente, nos aspectos relacionados
germinao e crescimento das plantas no viveiro, uma vez que a viabilizao
comercial dessa prtica necessita que as plantas tenham crescimento uniforme
e sejam vigorosas, atingindo o ponto de enxertia num perodo de tempo curto.
Contudo, a utilizao de espcies de Passiflorceas como porta-enxertos
esbarra na falta de informaes sobre o comportamento delas na fase de
viveiro, bem como no sucesso ou no da combinao copa/porta-enxerto,
utilizando, principalmente, como copa o maracujazeiro-amarelo.
Num estudo comparativo entre P. giberti, P. cincinnata e P. edulis f.
flavicarpa, constatou-se que as diferentes espcies de Passiflorceas
apresentam grande variabilidade quanto porcentagem de sementes
normais germinadas, uniformidade e velocidade de germinao, fato esse que
influencia no manejo das mudas na fase de viveiro. Da mesma forma, depois

297

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Altura (cm)

da germinao, o crescimento das plantas tambm diferenciado na


comparao entre as espcies, sendo observado que P. giberti apresenta vigor
de crescimento superior a P. cincinnata e esta a P. edulis f. flavicarpa, porm,
apresentando menor dimetro de caule. Essa determinao permite indicar
que, em funo de a espcie ser utilizada como porta-enxerto, o manejo das
plantas no viveiro dever ser diferenciado, bem como o momento da enxertia
e por conseqncia os mtodos de enxertia devero ser avaliados. Deve ser
ressaltado que algumas espcies, como P. giberti, emitem gavinhas j a partir
do sexto n, o que tambm deve ser considerado no manejo de plantas no
viveiro.

50
45
40
35
30
25
20
15
10
5
0

1 Avaliao
2 Avaliao
3 Avaliao

giberti

cincinnata

flavicarpa

Espcies

Figura 1. Dados mdios da altura de plantas (cm) das diferentes espcies de


Passiflorceas, nas trs avaliaes durante o crescimento no viveiro.

Na Figura 2, observa-se que P. giberti apresentou maior nmero mdio


de ns (e, conseqentemente, de folhas) que P. edulis f. flavicarpa e esta maior
que P. cincinnata, reflexo do crescimento das plantas em altura. Na anlise da
razo altura de planta/nmero de ns (valor que caracteriza o comprimento
mdio do entren), podem ser observadas grandes diferenas entre as
espcies em que plantas de P. edulis f. flavicarpa apresentavam entrens com
menor comprimento que plantas de P. giberti e com comprimentos maiores
que P. cincinnata.

298

Ecofisiologia do maracujazeiro e implicaes na explorao diversificada

1 Avaliao
2 Avaliao

N de Ns

14

3 Avaliao

12
10
8
6
4
2
0
giberti

cincinnata

flavicarpa

Espcies

Figura 2. Dados mdios do nmero de ns das diferentes espcies de Passiflorceas,


nas trs avaliaes, durante o crescimento no viveiro.

Observa-se que, para o parmetro dimetro do caule (Figura 3), entre as


espcies, plantas de P. edulis f. flavicarpa mantiveram maior vigor ao longo do
crescimento no viveiro, diferindo de P. giberti e P. cincinnata que apresentaram
os menores valores mdios. Portanto, plantas de P. cincinnata levaro mais
tempo que plantas de P. giberti para atingir dimetro de enxertia ou, ento,
para serem utilizadas como porta-enxerto para o maracujazeiro-amarelo,
devero ser utilizados garfos selecionados de ramos com menor dimetro.
2,5

1 Avaliao
2 Avaliao

Altura (cm)

2,0

3 Avaliao

1,5
1,0
0,5
0

Giberti

Cincinnata

Flavicarpa

Espcies

Figura 3. Dados mdios dos valores de dimetro de caule (mm) de mudas de


diferentes espcies de Passiflorceas em funo do perodo de desenvolvimento no
viveiro.

De acordo com os dados apresentados na Tabela 1, constata-se que P.


giberti e P. edulis f. flavicarpa apresentaram valores prximos de rea foliar total

299

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

com 140,73 cm2 e 135,70 cm2, porm, superiores a P. cincinnata que


apresentou 80,94 cm2. Contudo, na anlise da razo entre a rea foliar total e o
nmero de folhas presentes (estimativa mdia da rea do limbo foliar), P.
edulis f. flavicarpa apresentou folhas com maior rea foliar que
P. giberti e P. cincinnata, com 19,11 cm2/folha, 14,51 cm2/folha e 9,09 cm2/
folha respectivamente. Da mesma forma, as folhas de P. edulis f. flavicarpa
alm de maiores tambm apresentaram maior peso mdio que P. giberti
(0,06g/folha e 0,04 g/folha respectivamente). A relao entre a massa seca
de folha e a massa seca total da planta mostrou que plantas de P. cincinnata
e P. edulis f. flavicarpa apresentaram maior porcentagem de seu peso total
em folhas que P. giberti que apresentaram maior porcentagem de seu peso
na formao do caule + gavinhas. Quanto s razes, P. giberti apresentou
maior massa seca e relao massa seca de raiz por massa seca total da
planta que P. edulis f. flavicarpa e esta em relao a P. cincinnata.
Tabela 1. Dados mdios da anlise destrutiva de plantas de trs espcies de
Passiflorceas na fase de desenvolvimento para o plantio no campo.
Espcie

Altura (cm)

N de ns**

N de folhas**

giberti

34,08

11,4

9,7

1,8

cincinnata

17,23

9,9

8,9

1,6

flavicarpa

17,12

8,7

7,1

2,0

giberti

rea foliar
(cm2 )

rea foliar (cm )/


n folhas

MS* total da
planta (g)

MS* Caule+
gavinha (g)

140,73

14,51

0,885

0,319

cincinnata

80,94

9,09

0,371

0,087

flavicarpa

135,70

19,11

0,640

0,148

MS* folha
(g)

MS folha/
n folhas

MS* raiz (g)

MS* folha (g)/


MS total da
planta (g)

giberti

0,42

0,04

0,146

0,474

cincinnata

0,26

0,03

0,024

0,700

flavicarpa

0,42

0,06

0,072

0,656

* MS = massa seca.
** foram considerados todos ns da base at o pice do caule).

300

Dimetro (mm)

Ecofisiologia do maracujazeiro e implicaes na explorao diversificada

A observao dos dados apresentados na Tabela 1 permite constatar o


maior crescimento das plantas de P. giberti em relao s de P. edulis f.
flavicarpa e estas em relao a P. cincinnata.
No campo, a avaliao do comportamento de plantas da mesma
espcie acima listadas mostrou que a resposta delas s condies
ambientais distinta e que o elevado vigor das plantas de P. giberti no viveiro
foi mantido nas condies de campo.
Na anlise dos dados apresentados na Figura 4, verifica-se que, em
relao ao crescimento do ramo principal, as plantas de P. giberti
apresentaram maior velocidade de crescimento que P. edulis f. flavicarpa e
P. cincinnata atingiu mais rapidamente a altura de desponte (aos 147 DAS) para
a formao do espaldar, enquanto as outras duas espcies apresentaram
comportamento semelhante, apenas atingindo o ponto de desponte aos 175
DAS (Figura 4 (a)).
Em relao ao comprimento dos entrens e ao nmero de ns, pode
ser constatado que P. giberti apresentou entrens com maior comprimento e
maior nmero de ns que as demais espcies at os 147 DAS, sendo
posteriormente igualado a P. cincinnata para nmero de ns e a P. edulis
flavicarpa para comprimento do entren (Figura 4 (c)). Observa-se que, para o
parmetro dimetro do caule (Figura 4 (b)), as espcies apresentaram o
mesmo padro de aumento do dimetro de caule, devendo ser ressaltado
que, tanto P. giberti como P. cincinnata, por possurem razes gemferas,
apresentam a formao de brotaes vegetativas de raiz, com a formao
de grande nmero de caules oriundos da brotao de gemas vegetativas
localizadas prximo ao colo da planta. Essas brotaes de raiz surgem em
distncias superiores a dois ou trs metros ou mais do caule principal da
planta.

301

200
180
160
140
120
100
80
60
40
20
0

154

168

161

140

147

126

133

119

105

112

91

(a)

98

Altura (cm)

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Dias aps a semeadura


P. giberti

P. cincinnata

P. edulis

Dimetro (mm)

10

(b)

8
6
4
2

168

161

154

147

140

133

126

119

105

112

98

91

0
Dias aps a semeadura
P. edulis

40

35

30
25

20

15
10

168

161

154

147

140

133

126

105

119

112

98

(c)
Nmero de ns (NN)

P. cincinnata

91

Comp. mdio entren


(CE - cm)

P. giberti

Dias aps a semeadura


giberti CE

cincinnata CE

flavicarpa CE

giberti NN

cincinnata NN

flavicarpa NN

Figura 4. (a) Dados mdios da altura (cm); (b) Dimetro do caule de plantas (mm);
(c) Comprimento do entren (CE) (cm) e nmero de n (NN), de diferentes espcies
de Passiflorceas.

302

Ecofisiologia do maracujazeiro e implicaes na explorao diversificada

Constata-se, na Figura 5, que a espcie P. giberti manteve nos ramos


secundrios o mesmo comportamento j observado na Figura 1, com maior
vigor de crescimento, sendo que essa sua caracterstica permite o
surgimento mais precoce dos ramos tercirios. Quando se considera,
tambm, o nmero de ns formados e o comprimento dos entrens,
percebe-se outra caracterstica interessante de P. giberti, ou seja,

a de

potencialmente formar mais ramos tercirios por unidade de medida que as


outras espcies os quais produziro as flores e frutos.
Ao observar a Figura 6, verifica-se que, na espcie P. cincinnata, houve
maior velocidade de crescimento em relao s demais espcies,
mantendo o mesmo comportamento para o parmetro nmero de ns.
Contudo, para o parmetro comprimento mdio dos entrens P. cincinnata
e P. giberti apresentaram valores semelhantes, porm, inferiores ao de P.
edulis flavicarpa. Essas caractersticas fazem com que P. cincinnata
apresente, em relao aos ramos tercirios, maior potencial de produo,
uma vez que numa dada unidade de comprimento de ramo tercirio
existiro potencialmente maior nmero de ns com possibilidade de
produo de flores e, em conseqncia, de frutos. Outro aspecto
interessante a ser considerado a quantidade de material propagativo com
probabilidade de uso para estaquia e enxertia que, em funo do
comprimento dos entrens, ser em maior quantidade nas espcies que
apresentarem menores comprimentos de entren, como P. cincinnata e
P. giberti.
A florao foi verificada apenas em P. giberti, aproximadamente,
cinco meses depois da semeadura, bem como a frutificao um ms aps
a florao. A presena de botes florais foi observada j em ns do ramo
principal e do ramo secundrio, enquanto plantas de P. cincinnata e P. edulis
f. flavicarpa no haviam emitido rgos reprodutivos.

303

Comprimento (cm)

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

200

(a)

150
100
50
0
7

14

21

28

35

42

49

56

63

Intervalo de avaliaes (dias)

Nmero de ns

P. giberti

P. cincinnata

P. edulis

35
30
25
20
15
10
5
0

(b)

14

21

28

35

42

49

56

63

Intervalo de avaliaes (dias)

Comp. mdio entren


(cm)

P. giberti

P. cincinnata

P. edulis

9
8
7
6
5
4
3
2
1

(c)

14

21

28

35

42

49

56

63

Intervalo de avaliaes (dias)


P. giberti

P. cincinnata

P. edulis

Figura 5. (a) Dados mdios do comprimento de ramos; (b) nmero de ns e;


(c) comprimento mdio do entren de ramos secundrios de diferentes espcies de
Passiflorceas.

304

160
140
120
100
80
60
40
20
0

84
91
98
105

77

63

70

56

42
49

35

28

(a)

7
14

Comprimento (cm)

Ecofisiologia do maracujazeiro e implicaes na explorao diversificada

Intervalo de avaliaes (dias)


P. cincinnata

P. edulis

8
7
6
5
4
3
2
1

84
91
98
105

77

70

63

56

42
49

35

28

(b)

7
14

Comp. mdio entren


(cm)

P. giberti

Intervalo de avaliaes (dias)


P. cincinnata

40
35
30
25
20
15
10
5
0

P. edulis

84
91
98
105

77

70

63

56

42
49

35

28

(c)

7
14

Nmero de ns

P. giberti

Intervalo de avaliaes (dias)


P. giberti

P. cincinnata

P. edulis

Figura 6. (a) Dados mdios do comprimento de ramos; (b) comprimento mdio do


entren (b) e; (c) nmero de ns de ramos tercirios de diferentes espcies de
Passiflorceas.

305

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Em relao ao florescimento, os dados obtidos mostraram que P. giberti


apresentou, em relao a P. edulis f. flavicarpa e P. cincinnata, maior perodo de
florescimento (com emisso de flores durante praticamente todo o ano),
demonstrando ter diferenas quanto exigncia fotoperidica de estmulo
diferenciao floral. Cada espcie apresentou um horrio diferente de abertura
de flores, sendo que, para a espcie P. giberti, a antese se deu s 16h com
fechamento s 10h do outro dia, P. cincinnata abertura s 6h e fechamento s
20 h e P. edulis f. flavicarpa com incio de abertura s 11h e fechamento s 18h.

Figura 7. Avaliao do horrio de abertura das flores das trs espcies de Passiflora,
P. edulis flavicarpa, P. cincinnata e P. giberti.

A ocorrncia de diferentes tipos de flores foi verificada em maracujamarelo por (Ruggiero, 1973) no qual se constatou a presena de flores com
diferenas no ngulo de curvatura dos estiletes, classificando-as em flores do
tipo TC, PC e SC. Como se pode observar na Figura 8, as espcies estudadas
apresentaram, tambm, tipos diferentes de flores e, nas avaliaes, constatouse maior quantidade de flores TC em P. giberti quando comparada s outras
espcies que apresentaram valores similares de flores TC e PC, mas estas com
comportamento igual e j as flores SC tiveram uma quantidade igual em P.
giberti e P. edulis flavicarpa, diferentemente de P. cincinnata em que os valores
foram quase iguais para flores PC e SC.

306

Ecofisiologia do maracujazeiro e implicaes na explorao diversificada

Figura 8. Porcentagem de ocorrncia de diferentes tipos florais em P. giberti, P.


cincinnata e P. edulis f. flavicarpa.

Na avaliao da fotossntese, realizada pelas plantas das espcies


acima testadas, observou-se que P. giberti apresentou valores mdios da taxa
de fotossntese lquida de +/- 15 molCO2.m-2.s-1, enquanto P. cincinnata
e P. edulis f. flavicarpa apresentaram valores mdios em torno de
13,5 molCO2.m-2.s-1 e 9,5 molCO2.m-2.s-1 respectivamente. A principal
constatao foi a reduo dos valores da taxa de fotossntese lquida da
ordem de 85% a 95%, nas folhas localizadas nas pores internas do dossel
das plantas.
Observa-se que o fluxo de ftons fotossintetizantes bastante afetado
pela localizao da folha no dossel, desse modo, interferindo marcantemente
na eficincia fotossinttica das folhas. Da mesma forma, a condutncia
estomtica e a transpirao so afetadas pela localizao das folhas, levando
tambm a um menor valor das taxas fotossintticas dessas folhas pela noabertura dos estmatos.

307

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Figura 9. Dados das trocas gasosas das


folhas de P. edulis flavicarpa (M), P. giberti
(G) e P. cincinnata (C), localizadas em
diferentes posies no dossel das
plantas, em que: (1) folhas totalmente
expostas ao sol, parte externa do dossel;
(2) folhas localizadas na poro
intermediria do interior do dossel e (3)
folhas localizadas na parte mais interna
do dossel.

Na avaliao da fluorescncia, os valores de Fv/Fm revelam as


condies do aparato fotossinttico das folhas. Os valores de Fv/Fm entre
0,75 e 0,85 demonstram eficiente converso da energia luminosa no PSII. No
caso do maracujazeiro, nenhuma das espcies estudadas apresentou
problemas em seu aparato fotossinttico. Os valores reduzidos observados de
taxa fotossinttica lquida foram limitados ento pelo fluxo de ftons

308

Ecofisiologia do maracujazeiro e implicaes na explorao diversificada

fotossintticos, pois, se as folhas sombreadas (intermediria e sombra)


recebessem quantidade maior de irradincia, seria possvel acrscimo
considervel na taxa fotossinttica lquida. Portanto, com base nessas
informaes, possvel justificar a poda desses ramos, uma vez que suas
folhas no produzem fotoassimilados adequados por ausncia total ou parcial
de luz, comportando-se, assim, como um rgo-dreno.

0,85

Fv /F m

0,80

0,75

0,70
M1 M2 M3

G1 G2 G3

C1 C2

C3

Tratamento

Figura 10. Dados mdios de Fv/Fm das folhas de P. edulis flavicarpa (M), P. giberti (G)
e P. cincinnata (C), localizadas em diferentes posies no dossel das plantas, em que:
(1) folhas totalmente expostas ao sol, parte externa do dossel; (2) folhas localizadas
na poro intermediria do interior do dossel e (3) folhas localizadas na parte mais
interna do dossel.

Em relao perspectiva de explorao da diversidade gentica em


Passiflorceas, visando ao mercado de fitoterpicos, ressalta-se que
diversas classes de compostos qumicos j foram isoladas de diferentes
Passiflorceas, com destaque para P. incarnata, P. alata e P. edulis Sims. Entre
esses compostos isolados, tm-se os alcalides, flavonides, glicosdeos
cianognicos, frao de esteride, gomas, taninos, resinas e cidos.
Os flavonides so compostos importantes para o controle de
qualidade de medicamentos fitoterpicos, pois, por meio deles, possvel

309

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

identificar muitas espcies do gnero Passiflora. Os flavonides encontrados


em Passiflora so do tipo C-glicosdeo (h relatos de aproximadamente 50
flavonides C-glicosdeos presentes nas folhas de plantas do gnero
Passiflora).

Flavonides

C-glicosdeos

so

pigmentos

polifenlicos

abundantes em plantas, possuem atividade biolgica de interesse


quimiotaxonmico. Essas substncias so tambm freqentemente usadas
como marcadores na anlise de medicamentos fitoterpicos.
De acordo com os estudos iniciados na dcada de 1980, observou-se
que a constituio de flavonides complexa, tendo sido verificada a
influncia de diversos fatores na constituio dos diferentes flavonides nas
plantas, tais como: a metodologia de anlise utilizada, a poca e o perodo de
colheita das amostras, o local de cultivo, bem como a parte da planta
amostrada. Nessa ltima referncia, pode-se exemplificar que, em P. incarnata,
as folhas e flores apresentam teores de flavonides totais equivalentes, ao
passo que, no caule, esses teores so quatro vezes menores.
Outro tpico importante est relacionado s diferentes pocas do ano
em que ocorre a coleta do material vegetal, ou seja, relacionado fenologia
da planta. A concentrao de princpios ativos na planta coletada, em funo
do seu estdio de crescimento, pode ser diferente, dependendo da poca em
que ocorre essa coleta, sendo, portanto, interessante a realizao de testes
com material coletado em diferentes pocas do ano, de acordo com as fases
fenolgicas da planta (vegetativa e/ou reprodutiva), assim como a avaliao
de diferentes rgos.
Portanto, a fase fenolgica da planta ponto fundamental de anlise,
visto que a produo de princpios ativos e metablitos secundrios, numa
planta jovem, em pleno desenvolvimento, pode ser diferente da que ocorre
numa planta madura cuja produo de frutos j est estabelecida.
Quanto aos alcalides, os encontrados em Passiflora so do tipo
indlico que compreendem o segundo grande grupo de alcalides

310

Ecofisiologia do maracujazeiro e implicaes na explorao diversificada

atualmente conhecidos. Destes, muitos tm valor na medicina como


tranqilizantes ou no tratamento de hipertenso. P. incarnata tambm a
espcie do gnero Passiflora mais estudada quanto aos alcalides, sendo
detectados a harmina, harmol, harmalina, harmalol e harmana.
Diversos autores relatam que a parte do vegetal amostrada tem grande
influncia no teor do alcalide analisado, sendo que os maiores teores de
alcalides harmnicos foram detectados nas folhas em relao ao caule, tanto
para P. edulis e P. edulis f. flavicarpa.
Dessa forma, a avaliao do germoplasma de Passiflorceas abre um
leque de possibilidades de execuo de projetos de pesquisa nas diversas
reas da agronomia e correlatas. A carncia de informaes sobre as
potencialidades de uso direto ou indireto na produo comercial para o
atendimento grande demanda das indstrias farmacuticas e de cosmticos
por metablitos (flavonides e alcalides) presentes nas Passiflorceas
dificulta ou limita a explorao comercial da grande diversidade gentica
dessa famlia de plantas presentes em nosso pas. Nesse sentido, a definio
de sistemas de produo, visando ao atendimento de produtos especficos
para o mercado de fitoterpicos e de cosmticos, torna-se preponderante,
pois, nesses sistemas, o produto final passa a ser as folhas e os entrens que
devero apresentar alto rendimento nos metablitos desejados os quais
podem ou no ser obtidos de plantas ainda em fase vegetativa ou reprodutiva.

Concluso
Os dados obtidos demonstram as diferenas existentes entre as
espcies de Passiflorceas sob os mais diferentes aspectos de seu
crescimento, desenvolvimento e fisiologia, ressaltando que esses aspectos
influenciam na tomada de deciso e nas formas de manejo das plantas, nas
suas diferentes fases de cultivo, com intuito de atingir os maiores rendimentos
de produo quais sejam seus frutos, flores ou folhas.

311

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Referncias

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Fortaleza:SBF, 2000. 1 CD-ROM.

313

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

314

Alm da opulncia das boas colheitas


Do gnero passiflora de tudo aproveita.
Das razes profundas s folhas derradeiras
Porque nutritiva, cosmtica e milagreira.
Ningum sabe contar a origem desta planta
Milnios se passaram como o vento que canta.
E o maracuj se espalha em contorcidas rotas
Sofrendo mutaes desde pocas remotas.
Geovane Alves de Andrade

Auto-incompatibilidade do maracuj
implicaes no melhoramento gentico
Claudio Horst Bruckner
Tas de Moraes Falleiro Suassuna
Malson Monteiro do Rgo
Endson Santana Nunes

Intr
oduo
Introduo

maracujazeiro uma planta algama por excelncia. A


polinizao importante fator a se considerar na cultura
dessa planta, pois a frutificao, a qualidade, o tamanho e
o peso dos frutos, alm da porcentagem de suco, dependem da eficincia
da polinizao (Akamine e Girolami, 1959). Hardin (1986) confirmou esses
dados determinando correlao significativa e positiva entre nmero de
sementes e peso dos frutos, volume de suco e percentual de acar. Os
agentes polinizadores mais eficientes so as mamangavas (Xylocopa spp.).
Insetos menores podem coletar o nctar sem polinizar o estigma. A abelha
Apis mellifera tem efeito prejudicial polinizao, e a ao do vento como
agente polinizador nula (Akamine & Girolami, 1959; Ruggiero et al., 1976a;
Leone, 1990), porque o plen pesado e pegajoso.
As flores das plantas do gnero Passiflora so grandes, vistosas e
protegidas na base por brcteas foliares. O clice, tubuloso, herbceo ou
subcarnoso, com cinco spalas oblongas, membranceas ou coriceas. A
corola tem cinco ptalas do tamanho das spalas ou pouco menores que
elas, livres ou levemente concrecionadas na base, insertas no bordo do
tubo calicinal. A corona formada por um a cinco verticilos, inserta na base
do tubo calicinal e composta de filamentos ou/e figuraes diversas, de
cores vivas e atraentes (Leito Filho & Aranha, 1974).

317

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

O centro da flor contm o androginforo colunar bem desenvolvido. O


ovrio globoso, unilocular, com placentao parietal e multiovulado. Os
estiletes, em nmero de trs, so livres ou conatos na base, com estigmas
capitados. O androceu formado por cinco estames, com filetes livres
inseridos abaixo do ovrio e anteras dorsifixas e versteis (Leito Filho &
Aranha, 1974).
O florescimento do maracuj-amarelo (Passiflora edulis f. flavicarpa)
inicia-se por volta do meio-dia e vai at o final da tarde. O florescimento do
maracuj-roxo (Passiflora edulis f. edulis) pode iniciar-se mais cedo, pela
manh, havendo certa variabilidade no horrio de abertura da flor (Akamine
& Girolami, 1959; Oliveira, 1980, 1987; Meletti et al., 1992; Bruckner et al.,
1995). As plantas necessitam de dias longos para florescer. Nas condies
de Jaboticabal, SP, verificou-se que o florescimento no ocorre em dias com
durao inferior a 11 horas (Vallini et al., 1976).
Quando a flor se abre, os estiletes encontram-se em posio vertical.
Depois de completada a antese, os estiletes curvam-se at os estigmas atingirem
o mesmo nvel das anteras, quando podem ser tocados pelos insetos
polinizadores. Esse tempo de curvatura foi de 71,24 minutos, determinado por
Ruggiero et al. (1978), em Jaboticabal. Em Botucatu, Cereda & Urashima
(1989) registraram 86,15 minutos e, no Hava, Akamine & Girolami (1959)
marcaram esse tempo como 60 minutos. Essas diferenas podem ser
atribudas s variaes climticas.
Parte das flores pode ter estiletes sem curvaturas que no frutificam
mesmo quando polinizadas artificialmente (Akamine & Girolami, 1959).
Ruggiero et al. (1976b) encontraram menor porcentagem de clulas em
diviso nos ovrios de flores sem curvatura, indicando que a esterilidade
desse tipo de flor decorre da inviabilidade dos vulos. Pereira et al. (1996)
observaram que, nas flores sem curvatura, o desenvolvimento do saco
embrionrio anormal e no apresenta oosfera. O plen, entretanto,
vivel, independentemente da curvatura do estilete (Ruggiero et al., 1976c).

318

Auto-incompatibilidade do maracuj implicaes no melhoramento gentico

Akamine & Girolami (1959) encontraram plantas com 0% a 50% de flores com
estiletes sem curvatura por planta.
Em diversos artigos, tem sido avaliada a porcentagem de flores com
curvatura completa, parcial e sem curvatura. Entretanto, segundo dados
apresentados em simpsio por Caglianoni (2005), a porcentagem de flores
com curvatura completa aumenta com o horrio de avaliao, indicando
que as flores podero ser classificadas como de curvatura parcial ou total,
dependendo do horrio em que foram avaliadas.

Auto-incompatibilidade em plantas
A auto-incompatibilidade um mecanismo importante que determina
a alogamia, pois impede que plantas produtoras de gametas masculinos e
femininos funcionais produzam sementes quando polinizadas.
Autofecundaes e algumas hibridaes podem ser inviveis devido
presena de auto-incompatibilidade que muito freqente na natureza. Nas
espcies cultivadas, ela se torna menos freqente, em razo da presso de
seleo contrria causada pela domesticao (Mather, 1953; Rowlands, 1964
e Nettancourt, 1977).

Sistemas de auto-incompatibilidade
Os sistemas de auto-incompatibilidade tm sido divididos em
heteromrficos, quando h diferenas nas estruturas florais, e
homomrficos, quando essas diferenas esto ausentes. O controle
gentico do fentipo do gro de plen pode ser dividido em duas classes:
gametoftico, com o gene S sendo transcrito e traduzido no gametfito,
aps a segregao dos genes na meiose; e esporoftico, com o gene sendo
transcrito e provavelmente traduzido antes da meiose, no tecido do
esporfito (Lewis, 1994). Conseqentemente, no sistema gametoftico, o
fentipo do gro de plen corresponde a seu respectivo gentipo, enquanto,
no esporoftico, o fentipo do gro de plen o mesmo da planta que o
gerou.

319

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Estima-se que mais da metade das espcies de angiospermas


apresentem algum tipo de auto-incompatibilidade. O sistema gametoftico
foi bem caracterizado em 15 famlias, destacando-se os trabalhos em
Solanaceae (Newbigin et al., 1994). J o sistema esporoftico tem sido
descrito em Brassicaceae, principalmente, Asteraceae, Convolvulaceae
(Hinata et al., 1993), Compositae (Gerstel, 1950; Hughes & Babcock, 1950,
citados por Nettancourt, 1977) e, mais recentemente, Passifloraceae
(Bruckner et al., 1995).
As principais caractersticas do sistema gametoftico so: (1) controle
monognico (gene-S) com alelos mltiplos; (2) controle do fentipo do
plen gametoftico; (3) alelos apresentam ao individual no estigma, sem
nenhuma interao; (4) tubos polnicos so incapazes de crescer nos
estiletes que tenham um alelo S em comum. Esse sistema apresenta trs
tipos principais de polinizao: (1) totalmente incompatvel, quando ambos
os alelos so comuns; (2) parcialmente compatvel, em que apenas um
alelo diferente, ento metade dos gros de plen penetra no estigma e
estilete, realizando a fertilizao, enquanto o restante inibido, geralmente
no estilete; e (3) plenamente compatvel, sendo todos os quatro alelos
diferentes. A prognie do segundo tipo de cruzamento apresenta dois
grupos compatveis entre si, ambos compatveis reciprocamente com o
genitor feminino e apenas um deles compatvel com o genitor masculino. J
a prognie originada de cruzamento tipo trs apresenta quatro grupos
compatveis entre si, todos eles compatveis com os genitores feminino e
masculino (Lewis, 1954).
O sistema esporoftico similar ao gametoftico por apresentar controle
monognico (gene-S) com alelos mltiplos, mas difere no controle do fentipo
da reao de incompatibilidade que esporoftico. Os alelos podem
apresentar dominncia, ao individual ou competitividade no plen e
estigma de acordo com a combinao presente. Segundo Lewis (1954), suas
principais caractersticas so: (1) as diferenas em cruzamentos recprocos so
freqentes; (2) a incompatibilidade pode ocorrer com genitor feminino;
(3)

320

uma

famlia

pode

apresentar

trs

grupos

auto-incompatveis;

Auto-incompatibilidade do maracuj implicaes no melhoramento gentico

(4) os homozigotos so comuns no sistema; e (5) um grupo auto-incompatvel


pode conter dois gentipos.
Exemplos de controle por mais de um loco no sistema gametoftico so
relatados em Poaceae, Chenopodiaceae e Ranunculaceae (sterbye, 1986).
J, no sistema esporoftico, uma nica espcie em Brassicaceae, Eruca sativa,
citada por apresentar controle em que pelo menos trs locos esto
envolvidos (Verma et al., 1977, citados por Lewis, 1994).
Lewis et al. (1988) e Zuberi & Lewis (1988) verificaram a existncia de
um segundo gene de ao gametoftica em Raphanus sativus e Brassica
campestris. Esses autores acreditam que isso seja regra em Brassicaceae e
no sistema esporoftico em geral. Os autores justificam essa hiptese pela
ausncia de resultados inexplicveis no sistema gametoftico e de 2% a 10%
de resultados inesperados em todas as espcies estudadas do sistema
esporoftico. Por ser utilizada a mesma a metodologia para os dois sistemas,
os resultados no esperados, encontrados nos trabalhos com o sistema
esporoftico, passam a ser significativos, no podendo, portanto, ser
atribudos ao acaso.

Mecanismos de rreao
eao de auto-incompatibilidade
Existem diferenas fundamentais entre os sistemas gametoftico e
esporoftico, conforme revisado, entre outros autores, por Elleman &
Dickinson (1994). No sistema gametoftico, o plen binucleado e a
superfcie estigmtica mida. Essa umidade facilita a hidratao do plen.
Alm disso, a superfcie estigmtica se rompe na maturao. Esses fatos
favorecem a germinao rpida, de modo que a reao de autoincompatibilidade ocorre com inibio do crescimento do tubo polnico, j
no estilete. Essa inibio ocorre tanto com polinizao auto-incompatvel
quanto com a interespecfica.
Na auto-incompatibilidade esporoftica, por sua vez, o plen
trinucleado, e a superfcie do estigma seca e sua cutcula permanece intacta.
O plen tem de ser capaz de retirar a gua do protoplasto da clula papilar

321

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

para sua germinao. A principal funo da capa polnica, nesse caso,


absorver gua do estigma. Em cruzamentos compatveis, a capa do plen e a
parede da clula da papila interagem, permitindo que o tubo polnico penetre
duas camadas de paredes e, at a passagem dessa barreira, o estigma no
distingue entre plen compatvel e incompatvel. A reao de autoincompatibilidade ocorre entre produtos do estigma e componentes do plen
de origem esporoftica.
Conforme revisado por Takayama & Isogai (2005), o loco S um
complexo multignico que segrega como uma unidade. Os variantes desse
complexo so chamados hapltipos S. O reconhecimento da
autopolinizao ocorre em nvel de interao protena-protena dos
determinantes feminino e masculino, e a resposta incompatvel ocorre
quando os dois determinantes se originam do mesmo hapltipo S.
Em Brassicaceae, cuja auto-incompatibilidade do tipo esporoftica,
ocorrem glicoprotenas no estigma, chamadas glicoprotenas do loco S (SLG)
que co-segregam com o hapltipo S. Fazem parte do loco o determinante
feminino, o gene kinase receptor do loco S (SRK) e o determinante masculino,
chamado
SP11
(S-locus
protein
11)
ou
SCR
(S-locus cysteine rich), todos polimrficos e co-segregantes com o
hapltipo S. Havendo autopolinizao, ocorre inibio da hidratao do
plen ou rpido impedimento do desenvolvimento do tubo polnico.
Estudos histoqumicos indicam que as protenas SP11/SCR so secretadas
em clulas do tapetum na antera e translocadas para a superfcie do plen,
o que explica sua ao esporoftica.
Na auto-incompatibilidade gametoftica, foram encontrados
diferentes mecanismos nas famlias. Em Solanaceae, Rosaceae e
Scrophulariaceae, o determinante feminino uma RNAse, a S-RNAse. As
S-RNAses se expressam exclusivamente no pistilo, sendo as protenas
localizadas principalmente na parte superior do estilete onde ocorre a
inibio. As RNAses degradam o RNA do tubo polnico do mesmo
hapltipo S. As hipteses para explicar os mecanismos de inibio so
discutidas por Takayama & Isogai (2005). Em Papaveraceae, a

322

Auto-incompatibilidade do maracuj implicaes no melhoramento gentico

incompatibilidade envolve mecanismo dependente da concentrao de Ca+2


(Takayama & Isogai, 2005).

Auto-incompatibilidade em maracujazeir
maracujazeiroo
A ocorrncia de incompatibilidade em cruzamentos em populaes
de plantas auto-incompatveis de Passiflora j foi relatada por Munro, 1868,
citado por Nettancourt (1977). Trabalhos como os de Akamine & Girolami
(1959), Knight Jr. & Winters (1962, 1963) e Chang (1974) relatam, tambm, a
ocorrncia de auto-incompatibilidade e incompatibilidade em alguns
cruzamentos.
Diferenas na frutificao em cruzamentos recprocos foram
encontradas por Akamine & Girolami (1959) (Tabela 1), Knight Jr. & Winters
(1962) e Chang (1974). Akamine & Girolami (1959) consideraram a
possibilidade da presena de esterilidade masculina, o que improvvel,
pois as diferenas podem ser explicadas pela incompatibilidade
esporoftica com interao allica diversa no plen e no pistilo (Lewis, 1954)
ou por gene de ao gametoftica, associado ao sistema esporoftico
(Lewis, 1994; Suassuna et al., 2003).
Tabela 1. Diferenas em cruzamentos recprocos encontradas por Akamine & Girolami
(1959).
Cruzamento (feminino x masculino)

Frutificao (%)

W-83 x W-88

57,5

W-88 x W-83

0,0

W-94 x W-99

0,0

W-99 x W-94

82,6

W-84 x W-89

0,0

W-89 x W-84

60,0

W-88 x W-89

0,0

W-89 x W-88

82,9

323

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Ho & Shii (1986) estudaram a auto-incompatibilidade no maracujazeiro


com flores destacadas, avaliando, in vitro, a formao do tubo polnico, a
fertilizao e a expanso do ovrio. Verificaram que o estigma do tipo seco e
que a superfcie estigmtica o stio de reconhecimento ou rejeio do plen,
sugerindo que a incompatibilidade no maracujazeiro do tipo homomrfica
esporoftica.
Bruckner et al. (1995) estudaram a incompatibilidade no maracujazeiro
em duas prognies de irmos completos e uma prognie proveniente de
autofecundao. Com os resultados de cruzamentos recprocos em dialelo,
separaram as prognies em grupos de incompatibilidade e, a partir de
cruzamentos entre esses grupos, identificaram trs alelos S. autofecundando
uma planta de fentipo S2, obtiveram plantas S2 e S1 na proporo 3:1,
indicando dominncia de S2 sobre S1. Do cruzamento entre duas plantas S2,
originaram plantas S3, indicando, da mesma forma, dominncia de S2 sobre S3.
Tambm ocorreu incompatibilidade em cruzamentos com o genitor feminino.
Com base nesses resultados, os autores determinaram que o sistema de
incompatibilidade no maracujazeiro do tipo homomrfico-esporoftico,
provavelmente, controlado por um gene.
Rgo et al. (1999) continuaram o estudo da auto-incompatibilidade
com quatro prognies oriundas dos trabalhos de Bruckner et al. (1995) e uma
proveniente de Jaboticabal, SP. Das quatro prognies citadas primeiramente,
duas apresentaram resultados compatveis com herana bifatorial. Na
prognie oriunda de Jaboticabal, denominada BJ, houve diferena nos
cruzamentos entre dois grupos, com hibridaes bem-sucedidas apenas
unilateralmente.
Com o objetivo de identificar protenas que co-segregam com os alelos
relacionados

auto-incompatibilidade,

Rgo

(1997)

verificou

que:

(1) a expresso das protenas tecido-especfica, ocorrendo na superfcie


do estigma e em pequena concentrao na parte superior do estilete;

324

Auto-incompatibilidade do maracuj implicaes no melhoramento gentico

(2) a sntese dessas protenas perceptvel no gel, a partir de botes com


comprimento de 40 mm at a antese; (3) os alelos S2, S3, S4 e S6 foram
identificados com base nos pesos moleculares das protenas a eles
associados.
Rgo (2001) verificou que a tcnica PCR com oligonucleotdeos,
iniciadores especficos, sintetizados a partir da regio conservada das SLGs
de Brassica, foi eficiente na amplificao dos alelos S1 e S3 do maracujazeiro
e permitiu inclu-los no subgrupo I das SLGs de Brassica.
Rgo et al. (2000) investigaram a interao plen-pistilo em
autofecundaes e cruzamentos compatveis e incompatveis. Confirmando
os trabalhos de Ho & Shii (1986), verificaram que o tubo polnico em
autofecundaes e em cruzamentos incompatveis inibido na superfcie
estigmtica, 30 minutos aps a polinizao, no interior das clulas da
papila. No caso de cruzamentos compatveis, a fertilizao ocorreu,
aproximadamente, 12 horas aps a polinizao. No caso de diferena em
cruzamentos recprocos entre grupos da prognie BJ, os autores verificaram
que a inibio do crescimento do tubo polnico ocorreu no tecido de
transmisso do estilete que uma caracterstica do sistema gametoftico.
Suassuna et al. (2003), estudando prognies obtidas de cruzamento
entre plantas de mesmo fentipo S (S3S3), mas cujo cruzamento era vivel,
dependendo de qual planta fornecia o plen, sugeriram que h um gene de
efeito gametoftico (G) associado ao sistema esporoftico. Segundo essa
hiptese, as diferenas em cruzamentos recprocos ocorrem quando o
genitor feminino homozigoto para G e o masculino heterozigoto, com um
dos alelos em comum, dentro de um mesmo gentipo em relao ao
gene S (Tabela 2), sendo a frutificao decorrente de um cruzamento
parcialmente compatvel, conforme caracterizado no trabalho de Lewis
(1988), ou seja, metade do plen compatvel e metade incompatvel.

325

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Tabela 2. Diferenas em cruzamentos recprocos segundo a hiptese da autoincompatibilidade gametoftica-esporoftica.


Grupo de

XIII

XIV

Incompatibilidade

Planta
Testadora S3

Gentipo

S3 S3 G 1G 2

S3S3 G 1G 1

S3S3 G 1 G 2

XIII

S3S3 G 1G 2

XIV

S3S3 G 1G 1

Planta Testadora S3

S3S3 G 1G 2

(-): incompatvel; (+): compatvel, devido ao alelo G2, ausente na planta receptora do
plen; rea sombreada: diferena em cruzamentos recprocos.
Fonte: Suassuna et al. (2003).

Investigando a interao plen-pistilo dos cruzamentos incompatveis


entre os grupos XIII e XIV, Rgo et al. (2000) verificaram que a inibio do
crescimento do tubo polnico ocorria na parte mediana do estigma, uma
caracterstica tpica do sistema gametoftico.
Lewis (1994) mencionou a ocorrncia da inibio do tubo polnico na
regio intermediria do estigma em espcies Compositae cujo sistema de
auto-incompatibilidade identificado havia sido o esporoftico. O autor
identificou-as como reaes P*, ressaltando que tambm eram
encontradas em cruzamentos parcialmente compatveis, caractersticos do
sistema gametoftico. Os estudos de Rgo et al. (2000) e Suassuna et al.
(2003) no incluram avaliao da interao plen-pistilo para detectar
cruzamentos parcialmente compatveis, porm, a indicao de Lewis (1994)
de que reaes P* segregam associadas a cruzamentos parcialmente
compatveis reforam a hiptese da existncia de um segundo gene, de
efeito gametoftico, associado ao sistema esporoftico no maracujazeiro.
A autocompatibilidade tem sido relatada em plantas de maracujazeiroroxo por vrios pesquisadores (Chang, 1974, 1981, 1983; Division..., 1975;
Rgo, 1997). Rgo (1997) realizou, em Viosa, MG, autofecundaes em

326

Auto-incompatibilidade do maracuj implicaes no melhoramento gentico

plantas de maracujazeiro-roxo, obtendo 100% de frutificao em alguns casos.


Falleiro (2000) prosseguiu com esses estudos e verificou que a maioria das
prognies obtidas por autofecundao e todas as plantas das prognies F1 e
F2, obtidas das plantas autocompatveis, eram auto-incompatveis, indicando
que a autocompatibilidade no condicionada por alelos da srie S ou de
outro loco, devendo ser condicionada, provavelmente, por complexo gnico.

Auto-incompatibilidade

melhoramento

gentico

O melhoramento do maracujazeiro foi revisado em diversos trabalhos


recentes (Bruckner, 1997; Oliveira & Ruggiero, 1998; Meletti & Bruckner, 2001;
Bruckner et al., 2002; Bruckner, 2003). O maracujazeiro uma planta algama
qual vrios mtodos de melhoramento so aplicveis, objetivando o
aumento da freqncia de alelos favorveis ou a explorao do vigor hbrido
ou heterose. A freqncia de genes favorveis pode ser aumentada pela
seleo massal ou pela seleo com teste de prognies. O vigor hbrido
explorado por meio de hbridos, variedades sintticas ou compostos, como
os obtidos por Meletti (1998) e Meletti et al. (2000).
Trabalhos de seleo so largamente empregados em fruteiras. A
propagao vegetativa uma das ferramentas mais importantes no
melhoramento de fruteiras, pois abrevia o tempo gasto no melhoramento,
uma vez que qualquer gentipo superior encontrado pode ser propagado,
constituindo nova cultivar, uniforme do ponto de vista gentico, facilidade que
os melhoristas de plantas anuais propagadas por sementes normalmente no
dispem. Entre os mtodos de propagao vegetativa, os mais utilizados so
a estaquia e a enxertia.
A estaquia permite a propagao dos gentipos selecionados e certa
reduo no perodo juvenil da planta. A enxertia realizada com o objetivo de
propagar gentipos selecionados, reduzir o perodo juvenil, reduzir o porte
das plantas e promover adaptao a solos especficos ou resistncia a
patgenos do sistema radicular, utilizando-se de porta-enxertos selecionados
para esse fim. No maracujazeiro, a reduo do porte e do perodo juvenil no

327

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

essencial, visto serem estes satisfatrios. Como objetivos da utilizao da


estaquia e da enxertia em maracujazeiro restam a propagao de gentipos
selecionados e a utilizao de porta-enxertos resistentes a fatores biticos ou
abiticos. Ainda no se dispem de porta-enxertos resistentes aos patgenos
que causam enfermidades ao sistema radicular, como Fusarium oxysporum f.
sp. passiflorae, por falta de programas de melhoramento com esses objetivos.
A propagao de gentipos selecionados pode ser feita visando obteno
de clones para cultivo ou para cumprir etapas dentro de um programa de
melhoramento. Cuidados devem ser tomados para que seja mantida suficiente
diversidade de alelos de auto-incompatibilidade nas lavouras e para que no
haja disseminao de doenas com o material propagado, principalmente,
bacterioses e viroses.
A auto-incompatibilidade necessita ser considerada no melhoramento
gentico do maracujazeiro. Cultivares devem ter suficiente diversidade
gentica em relao auto-incompatibilidade para que haja maior eficincia
na polinizao, com alta frutificao. Em fruteiras auto-incompatveis, como
ameixeira e macieira, so cultivados pelo menos dois clones compatveis entre
si e coincidentes quanto poca de florao, introduzindo-se colmias de
abelhas no pomar quando a populao natural de insetos polinizadores
baixa na poca do florescimento (Petri, 2002). Em caf conilon, clones
selecionados e compatveis entre si so misturados, visando ao aumento da
frutificao (Ferro et al., 2004) processo que poderia ser denominado
compostos clonais.
Em maracujazeiro, a especificidade do polinizador e a dificuldade de
criar as mamangavas ocasionam a necessidade de que a diversidade de
gentipos de auto-incompatibilidade seja maior do que em outras espcies.
Esse aspecto importante caso a propagao vegetativa venha a ser
empregada. A proporo de cruzamentos compatveis C em um pomar com n
clones uniformemente distribudos e com o mesmo nmero de plantas pode
ser estimada pela expresso C = (n-1)n-1 (Bruckner et al., 1995). Com dois

328

Auto-incompatibilidade do maracuj implicaes no melhoramento gentico

clones, apenas metade do plen utilizado na polinizao seria til para a


fertilizao das flores (Tabela 3), o que suficiente em algumas espcies, mas
no no maracujazeiro uma vez que a populao de mamangavas
freqentemente insuficiente, e a polinizao manual (Grisi Jr., 1973) acarreta
custos adicionais. Os compostos clonais, com diversos clones selecionados,
compatveis entre si e uniformes quanto qualidade dos frutos, poderiam ser
produzidos e propagados vegetativamente. A quantidade mnima de clones
para compor esse conjunto clonal necessita ser objeto de experimentao.
Tabela 3. Estimativa de cruzamentos viveis (C) de acordo com o nmero de clones
(n), uniformemente distribudos e em igual proporo.
Nmero de clones (fentipos) (n)

Proporo de cruzamentos viveis (C)

0,0

0,5

0,67

0,75

...

...

10

0,90

...

...

(n-1)/n

A explorao da heterose importante estratgia de melhoramento


de plantas algamas. Ela mais bem explorada em hbridos. As plantas
que melhor se adaptam produo comercial de hbridos so aquelas que
possuem flores de sexos distintos na mesma planta (milho) ou em plantas
distintas (mamoeiro), esterilidade masculina (beterraba, cebola, cenoura,
milho) ou auto-incompatibilidade (Brassica, maracujazeiro).
Hbridos so obtidos de linhagens endogmicas selecionadas,
variedades de polinizao aberta, clones ou outras populaes divergentes
(Allard, 1960). Linhagens endogmicas de maracujazeiro podero ser
obtidas de cruzamento entre plantas-irms, retrocruzamentos ou

329

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

autofecundaes no estdio de boto (Bruckner et al., 1995) ou sucessivas na


antese (Fernandes et al., 1996). As autofecundaes proporcionam maior
endogamia (Falconer, 1972).
Embora as tcnicas de hibridao sejam bem simples, conforme
descritas por Bruckner & Otoni (1999), a auto-incompatibilidade pode ser
til para viabilizar a produo comercial de semente hbrida de
maracujazeiro, tal como feito em Brassica.
Em Brassica (repolho, couve-flor), o produto comercial parte
vegetativa da planta, no havendo necessidade de frutificao no hbrido
comercial. No maracujazeiro, por sua vez, os hbridos devero ter suficiente
diversidade de gentipos de auto-incompatibilidade para que ocorra a
mxima produo de frutos (Bruckner et al., 1995). Para isso, a semente
hbrida poder ser produzida a partir de linha auto-incompatvel
interplantada com linha de grande diversidade de alelos de autoincompatibilidade (Figura 1). As sementes sero coletadas apenas na linha
auto-incompatvel que poder ser uma linhagem endogmica, um hbrido
simples ou um clone. Os alelos presentes na linha auto-incompatvel
devero ter baixo nvel de dominncia.

Figura 1. Esquema de produo de hbrido simples


de maracujazeiro a partir de uma linhagem autoincompatvel ou clone, polinizado por uma linhagem
ou linha com diversidade de gentipos de autoincompatibilidade (hapltipos S).

A linhagem endogmica poder ser produzida mediante polinizao no


estdio de boto. Para autopolinizar nesse estdio, utilizam-se duas flores da
mesma planta. Pela manh, protege-se a flor doadora de plen, e tarde,

330

Auto-incompatibilidade do maracuj implicaes no melhoramento gentico

abre-se o boto da flor a ser polinizada em cujo estigma se deposita o plen


coletado na flor em antese (Bruckner et al., 1995). Rgo (1997) verificou que as
protenas responsveis pela incompatibilidade so encontradas no estigma e
na parte superior do estilete dois dias antes da antese (boto com 40 mm de
comprimento), aumentando gradativamente at o dia da antese. Fernandes
et al. (1996) verificaram que a autopolinizao pode tambm ser conseguida
realizando-se duas autopolinizaes no dia da antese, s 13 e s 17 horas.
Provavelmente, a primeira autopolinizao anule o efeito das protenas de
auto-incompatibilidade, de maneira que a segunda consiga, em parte, fertilizar
os vulos. As linhagens podero ser mantidas por autofecundaes no estdio
de boto ou por meio de propagao vegetativa. Cruzamentos entre plantas
incompatveis entre si podem ser realizados de maneira anloga s
autopolinizaes acima descritas.
A linhagem endgama poder ter como problema o baixo vigor, com
baixa produo de sementes, tal como ocorre em milho. Para solucionar
esse obstculo, a linha auto-incompatvel poder ser um hbrido simples,
vigoroso e produtivo, o que contribuir para aumentar a produo e reduzir
os custos de produo da semente (Figura 2). Esse hbrido simples poder
ser produzido intercalando-se duas linhagens auto-incompatveis,
devidamente isoladas de outras plantas ou
hibridao manual. O hbrido produzido ser um
hbrido triplo.

Figura 2. Esquema de produo de hbrido triplo


de maracujazeiro a partir de um hbrido simples e
uma linhagem (ou linha) com diversidade de
gentipos de auto-incompatibilidade.

331

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Existe carncia de estudos sobre o isolamento das plantas para que se


possa estabelecer distncias ou condies em que no haver polinizao
indesejvel ou que pelo menos esta seja desprezvel para a produo de
hbridos. A hibridao manual tambm pode ser utilizada na produo de
hbridos. O florescimento abundante e ocorre durante muitos meses no ano.
As flores produzem bastante plen que pode ser coletado com facilidade. A
liberao do plen e a receptividade do estigma ocorrem no mesmo dia.
Como a planta auto-incompatvel, no h necessidade de emasculaes. As
flores destinadas a fornecer e a receber o plen so protegidas pela manh,
antes da antese, com um saquinho de papel, de preferncia parafinado. Aps
a abertura da flor, retira-se o saquinho da flor doadora de plen e coleta-se o
plen, com o auxlio de cotonete, palito, pincel ou outro instrumento. Esse
plen , em seguida, levado flor receptora de onde se retira o saquinho para,
posteriormente, realizar a polinizao. No prprio saquinho, fazem-se as
anotaes necessrias para identificar o cruzamento, recolocando-o, em
seguida, na flor. Esse saquinho pode permanecer at o amadurecimento do
fruto. As anotaes devem ser feitas a lpis ou tinta que no se apague com
a incidncia de luz solar. Uma semana depois do cruzamento, possvel
verificar se houve sucesso na operao. Posteriormente, conveniente colocar
uma rede de nilon envolvendo o fruto, amarrando-a ao ramo, para que o fruto
no seja perdido quando amadurecer e cair (Bruckner & Otoni, 1999). O plen
permanece vivel, em temperatura ambiente, por 24 horas aps a coleta. Se a
hibridao no puder ser feita no mesmo dia, possvel coletar o plen e
realizar a polinizao no dia seguinte. Temperatura e umidade baixas no so
adequadas para o armazenamento de plen do maracujazeiro (Bruckner et al.,
2000). O isolamento das plantas com telados, associado polinizao
manual, alternativa para a produo dos hbridos.
Para que se estabelea a produo comercial de semente hbrida de
maracujazeiro, necessrio que se aprofundem as pesquisas com os
processos seletivos intra e interpopulacionais, visando aumentar a eficincia
dos processos.

332

Auto-incompatibilidade do maracuj implicaes no melhoramento gentico

Variedades sintticas e compostos, tambm, so boas opes de


aproveitamento da heterose. A semente, nesses casos, pode ser multiplicada
pelo produtor. Variedades sintticas so produzidas a partir de cruzamentos,
em todas as combinaes, entre vrias linhas endogmicas, todas com boa
capacidade de combinao. Quando as linhas so variedades ou populaes
de polinizao livre, as populaes resultantes tm sido denominadas
compostos (Hallauer & Miranda Filho, 1988).

Concluses
A auto-incompatibilidade deve ser levada em conta em
programas de melhoramento do maracujazeiro, garantindo suficiente
diversidade de hapltipos S para proporcionar boa frutificao, enquanto no
puderem ser selecionadas plantas autocompatveis de maracujazeiro.
A auto-incompatibilidade poder ser til na produo de hbridos
de maracujazeiro.

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338

Brotou destas florestas entre morros e ribeiras


Extico e disperso como a flora brasileira.
E se a mamangava assanha ao beijar sua flor
O homem se emociona ao provar seu sabor.
Cobiada pelos povos como jia viva
No bero desta ptria aonde nativa.
E a flor que hoje cai murcha e despedaada
Amanh crescer fruta ento ressuscitada.
Geovane Alves de Andrade

Propagao vegetativa do
maracujazeiro-conquista de novas
adeses
Geraldo Costa Nogueira Filho
Givanildo Roncatto
Carlos Ruggiero
Joo Carlos de Oliveira
Euclides Braga Malheiros

Introduo
A cultura do maracujazeiro (Passiflora edulis Sims. f. flavicarpa Deg.)
difundida nas regies tropicais do mundo, e sua pouca longevidade em
cultivo um grave problema para os produtores, j destacava Delano
(1991). O maracujazeiro pode ser propagado por sementes, estaquia e
enxertia. No Hava, Brasil, Sri Lanka, Qunia e Nova Zelndia, a produo
comercial baseada em plantas de maracujazeiro-amarelo ou roxo
propagadas por sementes. Em contraste, na Austrlia, onde a indstria
explora hbridos entre os dois tipos de maracujazeiro (amarelo e roxo) e onde
caractersticas particulares dos porta-enxertos so favorecidas, a enxertia
utilizada como a principal forma de propagao (Menzel et al., 1989). Vale
destacar que a enxertia hipocotiledonar abordada neste trabalho possibilita a
multiplicao de hbridos pela enxertia (Nogueira Filho, 2003).
No Brasil, a propagao do maracujazeiro-amarelo feita basicamente
por meio de sementes, havendo, portanto, segregao e existncia de
indivduos diferentes (Stenzel & Carvalho, 1992). A elevada heterozigose
existente nessa espcie determina alta variabilidade, decorrendo, por isso, a
desuniformidade de plantas nos pomares. Desse modo, a propagao
vegetativa apresenta vantagens na manuteno de material com boas
caractersticas agronmicas, favorecendo a multiplicao de plantas
produtivas e tolerantes a pragas e a doenas (Lima et al., 1999).

341

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

As doenas provocadas por patgenos do solo em maracujazeiro


constituem-se em um dos principais problemas para essa cultura no Brasil. A
alternativa de controle dessas doenas seria a utilizao de porta-enxertos
resistentes. Vrias espcies de passifloras nativas vm apresentando
resistncia a essas doenas, mas a utilizao delas como porta-enxertos,
oriundos de sementes, tem sido dificultada pelas diferenas de espessura
entre o porta-enxerto e o enxerto da espcie comercial (Chaves et al., 2003).
Para resolver essa incompatibilidade de dimetro entre as peas envolvidas
na enxertia, Kimura (1994) preconiza o uso da enxertia hipocotiledonar de
plntulas de maracujazeiro como um processo vivel.
O desenvolvimento desse mtodo, aliado s vantagens advindas do
uso de adequados porta-enxertos, abre grande espao para o
desenvolvimento dessa cultura em novas bases.
O que realmente est faltando a avaliao desse conjunto copaporta-enxertos em diferentes localidades. inegvel que, para o
desenvolvimento desse processo, imprescindvel
contar com a
colaborao de empresas, associaes etc.
Neste captulo, so discutidos os procedimentos, para ajustes do
mtodo, e os possveis conjuntos copa-porta-enxertos em diferentes localidades.

Experimentos com enxertia hipocotiledonar


O experimento foi realizado em casa de vegetao e no ripado de
fruticultura do Departamento de Produo Vegetal da Faculdade de Cincias
Agrrias e Veterinrias de Jaboticabal (UNESP), no perodo de 30 de outubro
de 2001 a 2 de abril de 2002.
A variedade-copa utilizada para todos os tratamentos foi o
maracujazeiro-amarelo FB 200 (Flora Brasil 200) do viveiro Flora Brasil
(Araguari, MG), e os porta-enxertos foram Passiflora edulis f. flavicarpa; P.
caerulea; P. alata; P. giberti; P. coccinea; P. cincinnata; P. setacea (sete
tratamentos). Foi utilizado o delineamento experimental inteiramente
casualizado, com 36 repeties por tratamento.

342

Propagao vegetativa do maracujazeiro...

Foram realizadas duas semeaduras para a obteno de porta-enxertos.


Na primeira (30/10/2001), utilizaram-se 100 sementes de cada porta-enxerto
sem qualquer tratamento prvio. Na segunda (7/12/2001), foram utilizadas 120
sementes de cada porta-enxerto previamente embebidas em gua destilada
por cerca de doze horas e, posteriormente, semeadas em bandejas plsticas
com substrato comercial Plantmax para hortalias. Da mesma forma, foram
produzidos os seedlings de maracujazeiro-amarelo para fornecimento dos
garfos, semeando-se a cada semana 100 sementes em uma bandeja durante
sete semanas.
O mtodo de enxertia utilizado foi o de fenda cheia no topo
hipocotiledonar. Quando os porta-enxertos e os enxertos atingiram a fase de
enxertia, cerca de 6 a 8 cm de altura e uma a duas folhas definitivas, o que
ocorreu, em cerca de 30 dias aps a semeadura, para as espcies mais
precoces ou vigorosas, e 90 dias para as de crescimento mais lento, realizou-se
a enxertia. Umedeceu-se previamente o substrato do porta-enxerto de forma a
retir-lo com o mnimo de danos ao seu sistema radicular, decepando-o
abaixo dos cotildones e abrindo-se uma fenda longitudinal (1,0 cm).
Procedeu-se a retirada do garfo, cortando a plntula doadora abaixo dos
cotildones e fez-se uma cunha em bisel duplo com uma lmina de platina
bem afiada do tipo gilete de forma a expor os tecidos do cmbio. Em
seguida, juntaram-se enxerto e porta-enxerto com cuidado para que
coincidissem nos tecidos cambiais e utilizou-se de fita adesiva (crepe) para
envolver a regio da enxertia, protegendo-a, evitando seu ressecamento,
assim como o excesso de umidade e funcionando tambm como tutor da
muda (Figuras 1 a 3).
Imediatamente aps a realizao da enxertia propriamente dita, a
muda j enxertada foi transplantada em copo plstico (200 mL) com o mesmo
substrato utilizado anteriormente. J transplantada, a muda foi tutorada por
uma estaca de madeira (18 cm) e coberta com um saco plstico transparente
(15 x 20 cm) que foi preso com um elstico de borracha para formar uma
cmara mida (Figura 4). Posteriormente, as mudas foram colocadas em
bandeja plstica com uma lmina de cerca de 1,0 cm de gua e deixadas

343

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

sombra, no ripado (Figura 4). Aos dez dias, retirou-se o elstico de borracha
e, aos quinze, removeu-se o saco plstico; aos vinte dias, foram levadas para
uma zona limtrofe entre a sombra e a meia-sombra; aos vinte e cinco dias
foram retiradas das bandejas e aos trinta dias, foram levadas para o ambiente
de meia-sombra do ripado.
Enquanto ainda nas bandejas, a gua era reposta sempre que
necessrio. Depois de retiradas das bandejas, as mudas eram regadas
diariamente com o sistema de microaspersores colocado junto cobertura
do ripado e a cada quinze dias eram regadas com uma soluo de 10 gotas
por litro de gua do produto comercial ouro-verde (N 6%, P205 6%, K20 8%,
Mg 0,5%, S 0,5%, B 0,03%, Zn 0,05%, Fe 0,1%, Mn 0,03%), fertilizante
lquido.

Figura 1. Seqncia de etapas para a realizao da enxertia hipocotiledonar.


(A) Corte da plntula na regio do colo para a obteno do garfo. (B) Garfo.
(C) Realizao dos cortes para a formao da cunha e a exposio dos tecidos
vasculares.

Figura 2. Seqncia de etapas para a realizao da enxertia hipocotiledonar.


(D) Corte da plntula abaixo dos cotildones para a obteno do porta-enxerto.
(E) Porta-enxerto. (F) Realizao do corte para a formao da fenda do porta-enxerto.

344

Propagao vegetativa do maracujazeiro...

Figura 3. Seqncia de etapas para a realizao da enxertia hipocotiledonar.


(G) Justaposio de enxerto e porta-enxerto. (H) Colocao da fita crepe. (I) Planta j
enxertada.

Figura 4. Seqncia de etapas para a realizao da enxertia hipocotiledonar.


(J) Tutoramento da muda. (K) Confeco da cmara mida individual. (L) Colocao
das mudas na bandeja plstica com lmina de 1 cm de gua.

Caractersticas

avaliadas

Percentual de germinao - foi avaliado por contagem semanal das


plntulas germinadas. Essa contagem foi iniciada 30 dias depois da
primeira semeadura e oito dias aps a segunda.

Sobrevivncia - a sobrevivncia (%) foi observada mediante contagem nos


primeiros 30 dias em intervalos de cinco dias depois da enxertia e aos 45 e
60 dias.

Altura das plantas - para mensurao foi utilizada rgua com 1,0 mm de
preciso, medindo-se a planta do colo ao pice, aos 0; 30; 45 e 60 dias
aps a realizao da enxertia.

345

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Nmero de folhas - fez-se a contagem do nmero de folhas, aos 0; 30; 45 e


60 dias aps a realizao da enxertia.

Dimetro do porta-enxerto - para mensurao do porta-enxerto, foi


utilizado paqumetro digital de 0,001 mm de preciso, medido-o aos 0; 30
e 60 dias aps a realizao da enxertia e a altura de cerca de 1 cm acima
do colo da muda.

Resultados obtidos
Tanto na primeira semeadura quanto na segunda, entre os vrios portaenxertos, Passiflora giberti e P. alata foram o primeiro e o ltimo, respectivamente.
Quando as plntulas comearam a germinar, P. giberti iniciou a emergncia na
primeira semeadura, aps 10 dias, e, na segunda, com sete dias. P. alata iniciou
a emergncia na primeira semeadura aps 20 dias, e, na segunda, aos 13 dias.
Para ambos, o tratamento de pr-embebio em gua antecipou a emergncia
das plntulas. Para as demais espcies de porta-enxertos, na primeira
semeadura, no se fez o registro do incio da emergncia. J na segunda
semeadura, ela foi observada depois de oito dias para P. flavicarpa, P. cincinnata
e P. coccinea e depois de 12 dias para P. setacea.
As sementes da P. caerulea no germinaram na segunda semeadura,
embora tivessem sido usadas sementes do mesmo lote em ambas as
semeaduras. Isso pode ter ocorrido ou por perda do poder germinativo, ou
por entrada em dormncia no perodo de 37 dias entre as duas semeaduras.
Espcies silvestres apresentam esse tipo de adaptao e com isso seus
descendentes tm maior chance de sobrevivncia em um perodo futuro, em
condies edafoclimticas mais favorveis, ou, ainda, o tratamento de prembebio no foi adequado para essa espcie.
Como pode ser observado na Tabela 1, nas duas semeaduras, as
espcies cultivadas (P. flavicarpa e P. alata) apresentaram, no geral, os maiores
percentuais de germinao. A exceo entre as espcies silvestres foi P.
coccinea que apresentou percentuais de germinao prximos aos das
espcies cultivadas, tendo mesmo superado P. alata na segunda semeadura.

346

Propagao vegetativa do maracujazeiro...

Tabela 1. Porcentagens de germinao das sementes (%) de sete espcies de


passifloras silvestres no perodo de 30/10/2001 a 2/4/2002, Jaboticabal, SP.

(Primeira semeadura1)
Porta-enxerto

Dias aps a semeadura


30

37

44

51

58

P. flavicarpa

46,00

52,00

68,00

76,00

76,00

P. giberti

24,00

28,00

32,00

32,00

32,00

P. cincinnata

20,00

32,00

32,00

33,00

33,00

P. caerulea

42,00

55,00

55,00

55,00

55,00

P. alata

51,00

60,00

65,00

69,00

69,00

P. coccinea

08,00

49,00

65,00

67,00

67,00

P. setacea

08,00

13,00

14,00

22,00

28,00

(Segunda semeadura)2
Porta-enxerto
8

15

22

29

36

8,33

53,33

58,33

58,33

63,33

15,83

31,67

39,17

39,17

39,17

P. cincinnata

9,17

24,17

26,67

26,67

26,67

P. caerulea

P. alata

2,50

18,33

39,17

45,00

P. coccinea

3,33

47,50

58,33

58,33

58,33

P. setacea

9,17

33,33

41,67

41,67

P. flavicarpa
P. giberti

Dias aps a semeadura

Semeadura efetuada em 30/10/2001 com sementes no pr-embebidas.


Semeadura efetuada em 7/12/2001 com sementes pr-embebidas (12 horas).

347

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Tambm se pode observar que grande parte das espcies atingiu o


maior percentual de germinao entre 44 e 51 dias aps a primeira semeadura
e entre 22 e 29 dias aps a segunda. Assim, pode-se dizer que o tratamento de
pr-embebio das sementes reduziu praticamente pela metade o tempo
necessrio para atingir o maior percentual de germinao.
Como se pode verificar na Tabela 2, a morte de plantas s foi constatada
15 dias aps a enxertia. Para cinco (P. flavicarpa, P. giberti, P. cincinnata, P.
caerulea e P. alata) dos sete porta-enxertos, o pegamento foi de cerca de 100%,
tendo-se perdido uma muda de P. caerulea e duas de P. alata, das 36 mudas
enxertadas. O pior desempenho do P. setacea deveu-se ao fato de que, em
virtude do seu lento desenvolvimento inicial, mesmo que se tenha realizado a
enxertia nele dois meses aps as primeiras, ele ainda se apresentava muito tenro,
e vrias plantas sequer suportavam o peso da fita crepe. Tambm de
desenvolvimento lento, o P. coccinea inicialmente demonstrou bom pegamento,
embora esse ndice no tenha sido mantido no perodo seguinte.
Em geral, os resultados obtidos para pegamento da enxertia foram
superiores aos encontrados na literatura (Corra, 1978; Oliveira et al., 1983;
Pace, 1983; Seixas et al., 1987; Baccarin, 1988; Menezes, 1990; Kimura, 1994;
Menezes et al., 1994; Lima et al., 1997, 1999; Chaves et al., 2003). Vale
ressaltar a variao de mtodos, porta-enxerto e mesmo enxertos encontrada
nessa literatura. Tambm se verifica grande variao no pegamento relatado
na literatura, mesmo quando utilizados o mesmo mtodo de enxertia e a
mesma combinao enxerto/porta-enxerto.
Em relao altura das plantas, observou-se, como esperado, uma
diferena significativa entre as quatro avaliaes realizadas (0; 30; 45 e 60
dias) para cada porta-enxerto (Tabela 3). Analisando de forma geral, constata-se
um destaque para o P. caerulea que, mesmo tendo apresentado a terceira
mdia inicial, superou os demais e mostrou, no final, maior velocidade de
crescimento em altura (Figura 5). Tambm se observou a formao de dois
grupos distintos, dentro dos quais as alturas medidas pouco diferiram. No
primeiro, estavam P. caerulea, P. giberti P. cincinnata e P. flavicarpa que se
pode chamar de porta-enxertos de maior desenvolvimento inicial.

348

Propagao vegetativa do maracujazeiro...

No segundo, encontram-se P. alata, P. setacea e P. coccinea, os porta-enxertos


de menor desenvolvimento inicial.
Tabela 2. Porcentagens de enxertos pegos por enxertia hipocotiledonar em
maracujazeiro-amarelo (Passiflora edulis f. flavicarpa) em sete espcies de passifloras
silvestres, no perodo de 30/10/2001 a 2/4/2002, Jaboticabal, SP.

Porta

Dias aps a enxertia

enxerto

05

10

15

20

25

30

45

60

P. flavicarpa
P. giberti
P. cincinnata
P. caerulea
P. alata
P. coccinea
P. setacea

100
100
100
100
100
100
100

100
100
100
100
100
100
100

100
100
100
100
100
100
44,4

100
100
100
100
97,2
97,2
44,4

100
100
100
100
97,2
97,2
41,6

100
100
100
100
97,2
97,2
41,6

100
100
100
100
97,2
77,8
38,8

100
100
100
97,2
94,4
72,2
30,6

Tabela 3. Altura (cm) de mudas de maracujazeiro-amarelo produzidas por enxertia


hipocotiledonar em plntulas de sete espcies de passifloras silvestres, no perodo
de 30/10/2001 a 2/4/2002, Jaboticabal, SP.

Porta-enxerto

P. caerulea
P. giberti
P. cincinnata
P. flavicarpa
P. alata
P. setacea
P. coccinea
Geral

Dias aps a enxertia


00

30

45

60

8,96 Dab
10,04 Da
9,51 Cab
8,49 Db
5,48 Dc
6,06 Cc
5,52 Cc
7,72

11,97 Cab
13,l2 Ca
11,36 Cb
12,86 Cab
8,41 Cc
8,63 BCc
7,l2 Bc
10,72

17,01 Bab
17,73 Ba
15,32 Bb
16,37 Bab
10,42 Bc
10,l5 Bc
8,23 Bc
14,30

23,62 Aa
22,l0 Aab
18,68 Abc
18,l0 Ac
12,00 Ad
12,45 Ad
11,l8 Ad
17,95

- Mdias seguidas de mesma letra, maiscula na horizontal e minscula na vertical, no


diferem, significativamente, pelo teste de Tukey a 5%.

349

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

25
P. camulea
P. giberti
P. cincinnata
P. flavicarpa

Altura (cm)

20

P. alata
P. setacea
P. coccinea

15

10

30

45

60

Dias aps a enxertia

Figura 5. Altura (cm) de mudas de maracujazeiro-amarelo produzidas por enxertia


hipocotiledonar em plntulas de sete espcies de passifloras silvestres, no perodo
de 30/10/2001 a 2/4/2002, Jaboticabal, SP.

Merece destaque o fato de que, aos 45 dias aps a realizao da


enxertia, as plantas do grupo de maior desenvolvimento inicial j haviam
atingido a altura mnima de 15 cm (Ruggiero, 1980; Steinberg, 1988; So
Jos, 1991; Lima, 1999; Lima et al., 1999); portanto, aptas para plantio no
campo. Somando-se a esses 45 dias, cerca de 40 dias necessrios
germinao e ao desenvolvimento das plntulas para atingirem o estdio
fenolgico para a execuo da enxertia, pode-se dizer que foram necessrios
85 dias ou cerca trs meses para a obteno de plantas prontas para o
plantio no campo com os porta-enxertos de maior desenvolvimento inicial.
Esse resultado mostra uma antecipao da obteno das mudas em 25 dias,
cerca de um ms, em relao aos resultados obtidos por Kimura (1994),
trabalhando com os porta-enxertos P. caerulea, P. giberti P. alata e P. foetida, o
que, provavelmente, ocorreu por cinco fatores: (1) semeadura realizada em
espaamento suficiente nas bandejas a fim de evitar o estiolamento das
plntulas, para elas atingirem o mais rpido possvel um dimetro compatvel
realizao da enxertia hipocotiledonar; (2) o substrato utilizado com
nutrientes, ao invs de areia lavada; (3) antecipao do estdio fisiolgico

350

Propagao vegetativa do maracujazeiro...

para a realizao da enxertia de duas a trs folhas definitivas para apenas


uma, totalmente expandida; (4) eliminao do estresse do segundo
transplantio, fazendo-se o primeiro logo para recipiente individual, e;
(5) embora de forma emprica, a fertirrigao realizada nas mudas aos 30
dias aps a enxertia.
J com os porta-enxertos P. setacea e P. coccinea, foram necessrios
cerca de 90 dias para se obter as primeiras plntulas em condies de serem
enxertadas e provvel que P. setacea necessitasse de um tempo ainda
maior. Estimando-se que esses dois porta-enxertos mais o P. alata
mantivessem o ritmo de crescimento (Tabela 4 e Figura 6) observado entre 45
e 60 dias no perodo seguinte, s aos 75 dias atingiriam a altura recomendada
para o plantio no campo. Considerando, ainda, que foram necessrios cerca
de 40 dias da semeadura para a realizao da enxertia com o P. alata, pode-se
dizer que seriam necessrios 115 dias ou cerca de quatro meses da
semeadura obteno de plantas prontas para o plantio no campo com o P.
alata e pelo menos 165 dias ou cinco meses e meio, para obt-las com os
porta-enxertos P. setacea e P. coccinea.
Observando as Tabelas 4 e 5 e as Figuras 6 e 7, constata-se que houve
diferena significativa para o incremento de altura e dimetro de cada portaenxerto em relao ao tempo. Inicialmente, o P. flavicarpa apresentou maior
velocidade de crescimento, sendo depois alcanado e at superado pelo P.
giberti e P. caerulea. De modo geral, o incremento de altura dobrou no
segundo ms. Isso provavelmente ocorreu devido ao fato de, no segundo
ms, j terem sido vencidos os eventos que envolvem a formao da unio da
enxertia (soldadura, formao da ponte de calo entre as parte enxertadas e a
conexo dos tecidos vasculares); dessa forma, toda a energia excedente
manuteno dos tecidos da planta estava canalizada para o crescimento
vegetativo. Da mesma forma, observou-se que geralmente mais que dobrou o
incremento de dimetro no segundo ms, o que pode ser atribudo s
mesmas razes expostas anteriormente. Cabe ainda ressaltar o desempenho
de P. giberti, P. caerulea, P. alata e mesmo o P. setacea, em relao a essa
caracterstica.

351

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Tabela 4. Incremento de altura (cm) de mudas de maracujazeiro-amarelo produzidas


por enxertia hipocotiledonar em plntulas de sete espcies de passifloras silvestres,
no perodo de 30/10/2001 a 2/4/2002, Jaboticabal, SP.

Porta-enxerto

Dias aps a enxertia


30

45

60

P. caerulea

3,01 Cb

8,09 Ba

14,84 Aa

P. giberti

3,08 Cb

7,54 Bab

11,88 Aab

P. flavicarpa

4,37 Ca

7,98 Ba

9,71 Abc

P. cincinnata

1,85 Ccd

5,80 Bbc

9,16 Abcd

P. alata

2,92 Cbc

4,91 Bc

6,58 Ade

P. setacea

2,57 Bbcd

4,25 Bcd

6,68 Acde

P. coccinea

1,60 Bd

2,82 Bd

5,95 Ae

Geral

2,81

6,21

9,79

- Mdias seguidas de mesma letra, maiscula na horizontal e minscula na vertical, no


diferem significativamente pelo teste de Tukey a 5%.

15
45

Incremento (cm)

30

60

12
9
6
3
0
P. caerulea

P. giberti

P. flavicarpa

P. cincinnata

P. alata

P. setacea

P. coccinea

Porta-enxerto

Figura 6. Incremento de altura de mudas de maracujazeiro-amarelo produzidas por


enxertia hipocotiledonar em plntulas de sete espcies de passifloras silvestres, no
perodo de 30/10/2001 a 2/4/2002, Jaboticabal, SP.

352

Propagao vegetativa do maracujazeiro...

O incremento do nmero de folhas em relao ao tempo inicial nas


avaliaes realizadas, de forma geral, s apresentou diferena significativa
para o porta-enxerto P. flavicarpa (Tabela 6 e Figura 8). No primeiro ms aps
a enxertia, houve destaque para P. cincinnata, seguida por P. giberti, P. edulis,
P. alata e P. caerulea. Aos 45 dias, houve diferena significativa apenas entre P.
flavicarpa e P. coccinea. J aos 60 dias, no houve diferena significativa entre
nenhum dos porta-enxertos. Vale ressaltar que foi mostrado o maior
incremento do nmero de folhas no primeiro ms em relao ao segundo.
Isso se justifica pelo fato de as folhas serem rgos destacveis e por
senescncia ou efeito das toxinas injetadas por percevejos, ocorrendo a
queda de parte das folhas mais velhas no segundo ms. Assim, deve-se
ponderar que o nmero de intemdios, usado por Staveley & Wolstenholme
(1990), uma caracterstica mais apropriada e menos sujeita a variaes,
como as relatadas para a avaliao de crescimento dessas plantas.
Tabela 5. Incremento de dimetro (mm) de mudas de maracujazeiro-amarelo
produzidas por enxertia hipocotiledonar em plntulas de sete espcies de passifloras
silvestres, no perodo de 30/10/2001 a 2/4/2002, Jaboticabal, SP.

Porta-enxerto

Dias aps a enxertia


30

60

P. flavicarpa

0,57 Bab

1,31 Aab

P. giberti

0,31 Bab

1,53 Aa

P. alata

0,34 Bab

1,21 Aab

P. caerulea

0,07 Bb

1,40 Aab

P. cincinnata

0,65 Ba

1,26 Aab

P. setacea

0,14 Bc

0,90 Aab

P. coccinea

0,22 Bc

0,80 Ab

Geral

0,15

1,27

- Mdias seguidas de mesma letra, maiscula na horizontal e minscula na vertical, no


diferem significativamente pelo teste de Tukey a 5%.

353

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

15
45

Incremento (cm)

30

60

12
9
6
3
0
P. caerulea

P. giberti

P. flavicarpa

P. cincinnata

P. alata

P. setacea

P. coccinea

Porta-enxerto

Figura 7. Incremento de dimetro (mm) na produo de mudas de


maracujazeiro-amarelo produzidas por enxertia hipocotiledonar em plntulas de
sete espcies de passifloras silvestres, no perodo de 30/10/2001 a 2/4/2002,
Jaboticabal, SP.

Tabela 6. Incremento do nmero de folhas de mudas de maracujazeiroamarelo produzidas por enxertia hipocotiledonar em plntulas de sete
espcies de passifloras silvestres, no perodo de 30/10/2001 a 2/4/2002,
Jaboticabal, SP.
Porta-enxerto

P. flavicarpa
P. giberti
P. cincinnata
P. alata
P. setacea
P. caerulea
P. coccinea
Geral

Dias aps a enxertia


30

45

60

3,58 Bab
3,60Aab
3,65 Aa
3,43 Aab
3,06 Ac
3,41 Ab
2,97Ac
3,42

4,l8Aa
3,72 Aab
3,61 Aab
3,68 Aab
3,40 Aab
3,22 Aab
3,2lAb
3,75

4,20 Aa
4,00 Aa
3,87 Aa
3,76 Aa
3,68 Aa
3 53 Aa
3,26Aa
3,68

Dados transformados em x + 8
- Mdias seguidas de mesma letra, maiscula na horizontal e minscula na vertical, no
diferem significativamente pelo teste de Tukey a 5%.

354

Propagao vegetativa do maracujazeiro...

4,5

30

45

60

3,5

Incremento

3
2,5
2
1,5
1
0,5
0
P. flavicarpa

P. giberti

P. cincinnata

P. alata

P. setacea

P. caerulea

P. coccinea

Porta enxerto

Figura 8. Incremento do nmero de folhas de mudas de maracujazeiro-amarelo


produzidas por enxertia hipocotiledonar em plntulas de sete espcies de passifloras
silvestres, no perodo de 30/10/2001 a 2/4/2002, Jaboticabal, SP.

Concluses
Nas condies em que o experimento foi realizado:
O mtodo de enxertia hipocotiledonar utilizado foi bem-sucedido para a
maioria das espcies utilizadas e eficiente para a produo de mudas de
maracujazeiro-amarelo.
O ndice de enxertos pegos aos 60 dias aps a enxertia, exceto em P.
setacea, variou de 72,2% a 100%.
Nessa fase de produo de mudas, destacaram-se como portaenxertos: as espcies Passiflora caerulea, P. giberti, P. cincinnata e P. edulis
tanto pelo excelente ndice de pegamento quanto pela precocidade na
obteno da muda enxertada pronta para ir ao campo (cerca de trs meses).
O nmero de folhas uma caracterstica que, no maracujazeiro, pode
sofrer muitas variaes devido a fatores no inerentes ao crescimento; assim,
melhor a adoo de outro parmetro como nmero de intemdio para avaliar
o desenvolvimento.

355

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Pretende-se sensibilizar empresas e associaes a se inserir no


processo em que cada bom produtor venha, na formao de uma lavoura
comercial de maracuj-amarelo, propagado por sementes, a plantar em torno
de 50 plantas dos vrios porta-enxertos j testados, enxertados na espcie
comercial e outros dentro da grande famlia da Passifloraceae, o que
inegavelmente, em curto espao de tempo, permitir o mapeamento nas
diferentes regies brasileiras, fato que representar inegvel ajuda no
desenvolvimento da cultura.

Referncias

Bibliogrficas

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356

Propagao vegetativa do maracujazeiro...

MENEZES, J. M. T. Seleo de porta-enxertos tolerantes morte prematura de


plantas para P. edulis Sims f. flavicarpa Deg. e comportamento de P. nitida H.B.K.
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PACE, C. A. M. Comparao de quatro mtodos de enxertia para a maracujazeiro-amarelo Passiflora edulis Sims f. flavicarpa Deg. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE
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SEIXAS, L. E. Z.; OLIVEIRA, J. C.; TIHOHOD, O.; RUGGIERO, C. Comportamento de
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Anais... Campinas: Sociedade Brasileira de Fruticultura, 1987. p. 597-601.
STAVELEY, G. W.; WOLSTENHOLME, B. N. Effects of water stress on growth and
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STEINBERG, E. Maracuj: guia prtico para um manejo equilibrado. So Paulo:
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357

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

STENZEL, N. M. C.; CARVALHO, S. L. C. Comportamento do maracujazeiro-amarelo


(Passiflora edulis Sims f. flavicarpa Deg.) enxertado sobre diferentes porta-enxertos.
Revista Brasileira de Fruticultura, v. 14, n. 3, p. 183-l86, 1992.

358

Como um astro que nas trevas se apaga e some


No creio que o homem a despreze, a abandone.
E a perseguio por gente que no tem escrpulos
Confere a esta planta seus ltimos crepsculos.
Vegetais e humanos! Temos um qu de iguais.
Comemos, respiramos e outras coisas mais.
Somos um do outro, riso ou pranto que esvai...
Como a onda evaporada que condensa e cai.
Geovane Alves de Andrade

Cultura de tecidos aplicada


manuteno de germoplasma in vitro e
ao melhoramento gentico do
maracuj (Passiflora spp.)
Ilene Ribeiro da Silva Passos
Lus Carlos Bernacci

Introduo

cultura de tecidos tem auxiliado de maneira consistente o


melhoramento gentico de diversas espcies cultivadas no
mundo todo. Entre elas podem-se citar, sem medo de errar as
seguintes: arroz, trigo, videira, girassol, espcies florestais, Citrus, batata,
tomate, espcies ornamentais e de brssicas. Muitas dessas espcies,
domesticadas h sculos, encontram na cultura de tecidos uma ferramenta
essencial para a introduo de novas caractersticas e para sua propagao e
manuteno.
Muitos estudos tm sido feitos sobre vrios aspectos da cultura in vitro
de maracuj, principalmente, para a espcie P. edulis (maracujs amarelo e
roxo). Esses estudos incluem desenvolvimento de protocolos para o
estabelecimento de plantas in vitro, clonagem, organognese in vitro e cultura
de clulas em suspenso, visando dar sustentao para que outras tcnicas
biotecnolgicas, como a transformao gentica, possam ser aplicadas com
sucesso.
A hibridao somtica, por meio da fuso de protoplastos, tambm
uma tcnica promissora para o melhoramento gentico do maracuj e
demanda protocolos de estabelecimento in vitro, organognese adventcia e
muitas vezes, cultura de clulas em suspenso, bem estabelecidos. A

361

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

hibridao somtica uma alternativa para a reproduo sexual a fim de


combinar (por meio de tratamentos qumicos ou por eletrofuso) dois
genomas completos, incluindo as organelas citoplasmticas (Binsfeld, 1999).
A hibridao somtica abriu inmeras possibilidades para manipulaes do
genoma tais como: (1) superao de

incompatibilidades sexuais; (2)

produo de anfidiplides; (3) transferncia de parte de um genoma de uma


espcie para outra; (4) transferncia do DNA citoplasmtico para a produo
de plantas macho-estreis; (5) produo de plantas resistentes a estresses
ambientais ou pragas e doenas (Binsfeld, 1999). Em recente reviso, Davey
et al. (2005) apresentam resultados positivos em que a fuso de protoplastos
(simtrica ou assimtrica) colaborou no melhoramento gentico de diversas
culturas economicamente importantes. Os autores enfatizam que os
protoplastos fornecem tambm sistemas para investigar a maioria dos aspectos
da gentica e da fisiologia celular de plantas, incluindo estudos de genmica e
protemica. Felizmente, como se poder ver nesta reviso, o maracuj tem
revelado totipotncia celular a partir de calos provenientes de protoplastos, o
que possibilita o uso dessa tcnica para obteno de hbridos somticos.
Neste captulo discutido o estado de arte, com base na literatura, da
cultura in vitro de Passiflora no que concerne ao estabelecimento in vitro,
regenerao in vitro por meio da organognese e embriognese somtica;
isolamento, cultura de protoplastos e regenerao de plantas e hibridao
somtica para vrias espcies de maracuj, tendo em vista sua utilizao na
manuteno de germoplasma de maracuj in vitro e no melhoramento
gentico da cultura.

Estabelecimento in vitro de plantas de maracuj


O estabelecimento in vitro de plantas para diversas espcies de
maracuj essencial quando se deseja fazer a manuteno de germoplasma
de Passiflora usando procedimentos biotecnolgicos. Para tanto, devem estar
disponveis na literatura protocolos de assepsia para explantes obtidos de:

362

Cultura de tecidos aplicada manuteno de germoplasma in vitro

sementes, folhas, gemas, segmentos entrenodais etc., bem como protocolos


para germinao de sementes das diversas espcies, protocolos de
regenerao de novo de plantas a partir de cotildones, hipoctilos, folhas e
de segmentos entrenodais e desenvolvimento de plantas a partir de pices
meristemticos e gemas. Os diversos protocolos desenvolvidos daro opes
ao interessado, de acordo com o objetivo e disponibilidade de infra-estrutura
e material vegetal. Por exemplo, alguns pesquisadores s podero dispor de
sementes que lhes sero enviadas pelo correio; outros, s podero dispor de
material vegetal obtido em coletas; outros ainda, e estes se constituem em
poucas excees, dispem de um banco de germoplasma no campo em sua
instituio. Tambm, a organognese de novo pode ser uma estratgia para se
introduzir in vitro material vegetal do campo ou de casa de vegetao.

Estabelecimento in vitro de plantas de maracuj por


meio de sementes
No so muitos os trabalhos em que se estudou, em profundidade, a
germinao in vitro de sementes de maracuj. Hall et al. (2000) afirmaram que
no obtiveram sucesso com germinao de sementes do hbrido australiano
(Passiflora edulis x Passiflora edulis var. flavicarpa) in vitro utilizado em suas
pesquisas. Isso demonstra a importncia desses estudos, pois vrios fatores
podem levar ao insucesso do estabelecimento de plantas in vitro por meio de
sementes. Dentre esses, destacam-se como principais, alm das
contaminaes: qualidade da semente, dormncia e temperatura de
incubao, fatores muitas vezes j estudados na germinao ex-vitro (Tsuboi
& Nakagawa, 1992; Melo, 1996; Santos et al., 1999; Rossetto et al., 2000;
Pereira & Dias, 2000; Osipi, 2000; Catunda, 2001).
A metodologia utilizada na remoo do arilo e as condies de
armazenamento influenciam, sobremaneira, a viabilidade das sementes de
maracuj. Melo (1996), estudando a germinao de Passiflora nitida, uma
espcie que apresenta srios problemas de dormncia, verificou que, aps as

363

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

sementes serem colhidas, o arilo deve ser retirado por processo mecnico
(liqidificador adaptado), em detrimento da fermentao natural, para no
prejudicar a viabilidade da semente. Verificou, ainda, que necessrio um
perodo de quatro a seis meses de armazenamento para a superao da
dormncia, antes de serem colocadas para germinar.
Melo (1999) constatou que as sementes de Passiflora nitida apresentam
permeabilidade gua e que, portanto, a dormncia no est relacionada
com a impermeabilidade do tegumento. O perodo de embebio para essas
sementes, que se inicia a partir do momento em que elas entram em contato
com a gua, foi de aproximadamente duas horas. Esse autor comprovou,
ainda, que as sementes imersas em soluo de giberelina (GA3) alcanaram a
quebra de dormncia.
Partindo desses resultados, Passos et al. (2004a) estudaram o efeito do
cido giberlico na quebra de dormncia de sementes de P. nitida germinadas in
vitro. Esses autores verificaram o efeito significativamente positivo do tratamento
de pr-embebio de sementes de Passiflora nitida por seis horas em uma
soluo de cido giberlico (GA3), na germinao in vitro dessa espcie.
O GA3 promove a germinao de sementes estimulando o crescimento
do embrio e induzindo a produo de hidrolases para enfraquecer as
estruturas ao redor do embrio (Hooley, 1994).
O cido giberlico tambm incrementou a germinao no escuro
(Passos et al., 2004a) (Tabela 1). O tratamento de embebio na ausncia de
cido giberlico (testemunha) induziu maior porcentagem (26%) de
germinao na luz contra 6,6%, no escuro. J, aos 28 dias 84% das sementes
de Passiflora nitida inoculadas, submetidas ao tratamento de imerso em
soluo de 1000 mg.L-1 de GA3, j haviam germinado na luz enquanto 82,6%
germinaram no escuro aos 50 dias. Segundo Yamaguchi & Kamiya (2002), a
luz um sinal ambiental importante na determinao da germinao das
sementes. Estudos com sementes de alface, que requerem iluminao para a
germinao, tm mostrado que a germinao induzida pela luz vermelha
resultado do aumento no nvel da forma biologicamente ativa do hormnio
giberelina. Dessa maneira, o fitocromo capaz de promover a germinao de

364

Cultura de tecidos aplicada manuteno de germoplasma in vitro

sementes pela ativao da degradao de fatores negativos envolvidos na


transmisso de sinais para a giberelina (Taiz & Zeiger, 2004), e a aplicao
exgena de GA3 nas sementes pode compensar o efeito da luz.
Embora alguns trabalhos afirmem que espcies como Passiflora edulis
(Medina et al., 1998) sejam fotoblsticas negativas, em nosso laboratrio, as
espcies de Passiflora estudadas (Figura 1) germinam com vigor sob luz
(Figuras 2, 3) (Passos et al., 2002a). Passos et al. (2004a) utilizaram um nvel
de irradiao por volta de 30 mol. m-2.s-2 nos experimentos. Rosseto et al.
(2000), trabalhando com germinao de sementes de P. alata ex-vitro, no
escuro, verificaram, tambm, o efeito positivo da embebio prvia em
soluo de GA3. Kantharajah & Dodd (1990) igualmente executaram trabalhos
com germinao sementes de Passiflora spp. (maracuj-roxo - Passiflora
edulis) in vitro, sob luz, com uma intensidade luminosa de 35 mol. m-2.s-2.
Por sua vez, na germinao in vitro, a necessria descontaminao das
sementes, para posterior inoculao, pode ser fator de queda da viabilidade
das sementes, quando no efetuada de maneira adequada. Uma maneira de
evitar a injria das sementes descontamin-las depois de um perodo de
embebio de 4 a 6 horas com gua destilada, como foi efetuado para
sementes de P. edulis, o maracuj-amarelo, por Passos et al. (2002a, 2004a).
Tabela 1. Nmero mdio de sementes de Passiflora nitida germinadas aos 14, 28 e 50
dias aps a semeadura quando tratadas com trs dosagens (0; 500; 1000 mg.L-1) de
GA3 nos tratamentos sob luz (L) e escuro (E) (mdia desvio-padro). Campinas, SP,
2001.
Tempo

Tratamento (mg.L-1 GA3)

14 dias

28 dias

50 dias

0,100,31ab

1,301,15ab

2,301,15b

500

0,900,73c

2,600,96bc

3,400,96bc

1000

1,801,31c

4,200,63d

4,300,67c

0,000,00a

0,330,50a

0,440,72a

500

0,770,83bc

3,000,70c

3,331,00bc

1000

1,661,11c

3,661,11d

4,130,83c

*Mdias seguidas pelas mesmas letras dentro das colunas no diferem entre si pelo teste
t (5%P).
Fonte: Passos et al. (2004a).

365

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Figura 1. Sementes de
P. alata, P. edulis e P. nitida.

Foto: Ilene Passos

Figura 2. Plntula de P.
alata germinada in vitro
sob luz branca (30
E.m-2.s-2).

Foto: Luciana Rocha Antunes

Figura 3. Semente de P.
cincinnata germinanda in
vitro sob luz branca (30
E.m-2.s-2).

Foto: Ilene Passos

366

Cultura de tecidos aplicada manuteno de germoplasma in vitro

Estabelecimento in vitro de plantas de maracuj por


meio de explantes vegetativos
O estabelecimento de plantas de maracuj in vitro pode ser efetuado
por explantes vegetativos obtidos no campo ou em casa de vegetao, como
pices meristemticos de caule, segmentos nodais, utilizando-se de gemas
preexistentes no explante ou de outros explantes do qual ser necessrio obter
a organognese adventcia ou de novo. Esse procedimento vantajoso para
se estabelecer plantas in vitro porque com ele possvel escolher gentipos
superiores.
Os pices meristemticos e os segmentos nodais apresentariam, ainda,
a vantagem da estabilidade gentica, se no fosse o srio problema de
contaminao de explantes que se enfrenta uma vez que, no processo de
descontaminao, sempre se agridem os tenros explantes vegetativos,
levando-os, com freqncia, oxidao. Bricolti & Chiari (1994) relatam que
no utilizaram pices meristemticos em seus trabalhos com P. edulis f. edulis,
mas segmentos nodais, pois os pices eram muito fracos para a esterilizao.
De qualquer maneira, explantes sadios de plantas jovens, crescidas em casa
de vegetao, so sempre mais fceis de estabelecer in vitro do que explantes
de campo. Um dos mais antigos trabalhos sobre cultivo in vitro de Passiflora trata
do estabelecimento de Passiflora caerulea L. com brotos tenros (Nakayama,
1966). Esse autor relata as dificuldades pelas quais passou no incio de seu
trabalho com explantes mais velhos que acumulavam microrganismos
endofticos que inevitavelmente se desenvolviam no meio de cultura.
Dornelas & Vieira (1994) lograram sucesso no estabelecimento in vitro
de plantas de cinco espcies de Passiflora (P. amethystina, P. edulis var.
flavicarpa, P. giberti, P. maliformis e P. mollissima), por meio de pices
meristemticos de caule. As plantas, de onde foram extrados os explantes,
estavam com vinte dias aps a germinao e foram cultivadas em casa de
vegetao. Os explantes foram cultivados em meio MS (Murashige & Skoog,
1962), na metade das concentraes de seus componentes, sem a adio de
hormnios ou gua de coco.

367

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Para o estabelecimento in vitro de plantas de Passiflora nitida, tanto por


meio de pices meristemticos de caule, quanto por meio de gemas axilares,
houve necessidade de adicionar a citocinina 6-BA (6- Benzilaminopurina) ao
meio de cultura MS/2 (Passos, 1999). Os explantes foram coletados em casa
de vegetao a partir de plantas multiplicadas por estaquia. A dose de
0,5 mg.L-1 de 6-BA foi suficiente para incrementar o nmero de folhas verdes
aos 28 e 56 dias para pices meristemticos de caule. J para gemas axilares,
a melhor dose foi a de 1,0 mg.L-1 de 6-BA. O efeito benfico da citocinina deve-se
ao fato de estas promoverem o movimento de nutrientes para a folha a partir
de outras partes da planta, um fenmeno conhecido por mobilizao de
nutrientes induzida por citocinina. Elas tambm promovem o desenvolvimento
de cloroplastos e retardam a senescncia foliar (Taiz & Zeiger, 2004). O efeito
positivo da citocinina adicionada ao meio de cultura no estabelecimento de
plantas in vitro de P. nitida a partir de pices meristemticos de caule ou de
gemas axilares deve-se provavelmente aos baixos nveis endgenos de
citocinina nos explantes utilizados. Por sua vez, a adio de citocinina ao
meio de cultura no perturbou a estabilidade mittica das plantas de Passiflora
nitida estabelecidas in vitro (Passos et al., 1998).
Outro fator que pode interferir no desenvolvimento de gemas a partir de
segmentos nodais in vitro a concentrao de etileno no frasco de cultura
(Reis et al., 2003). Os fatores que desencadeiam a produo e o acmulo de
etileno em frascos de cultura so vrios, tais como a utilizao de auxina no
meio de cultura, o tipo de tampa usada, uma vez que alguns tipos no
permitem a adequada troca gasosa, os procedimentos de assepsia, como
flambar o frasco etc.

Organognese adventcia: a principal via de


regenerao em espcies de Passiflora
A obteno de um protocolo otimizado de regenerao de novo de
plantas de maracuj in vitro imprescindvel para viabilizar a utilizao da
transformao gentica por meio de Agrobacterium tumefaciens ou
biobalstica (Takahashi, 2002; Monteiro, 2005). Da mesma forma, hbridos

368

Cultura de tecidos aplicada manuteno de germoplasma in vitro

somticos no podero ser obtidos sem passar pela fase de regenerao de


plantas a partir de calos in vitro (Dornelas & Vieira, 1993; Dornelas, 1995;
Dornelas et al., 1995; Otoni et al., 1995a, 1995b; Passos et al., 2004b; Matos
et al., 2005). A via preferencial de regenerao, para as espcies de Passiflora
estudadas, tem sido a organognese adventcia (Moran-Robles, 1979;
Dornelas & Vieira, 1994; Faria & Segura, 1997; Passos, 1999; Hall et al., 2000;
Monteiro et al., 2000; Becerra et al., 2004) (Figuras de 4 a 7). Entretanto Otoni
(1995) observou a regenerao pela via da embriognese somtica para a
espcie Passiflora giberti.
Quando se fala de regenerao de novo, logo se pensa em explantes
responsivos e, obviamente, em explantes embrionrios como hipoctilos e
cotildones que, por possurem clulas menos determinadas so mais
responsivos induo hormonal. Entretanto, nem sempre se pode partir de
explantes embrionrios. Vrios so os motivos: pode-se no se dispor de
muitas sementes de uma espcie; pode-se querer estabelecer in vitro uma
espcie rara que no esteja produzindo sementes no momento da coleta, por
exemplo. Dessa forma se faz necessrio que seja estudada a regenerao a
partir de outros explantes tanto obtidos in vitro quanto no campo ou em casa
de vegetao.
J existem muitos estudos publicados sobre a regenerao in vitro de
diversas espcies de Passiflora, mas o assunto est longe de ter sido
esgotado. Diversos fatores contribuem para isso e um dos principais a
variao da resposta entre gentipos que tem sido extensivamente descrita na
literatura. As variaes so mais evidentes quando so feitos experimentos
com espcies pouco domesticadas de maracuj, em que a variabilidade
gentica existente muito grande. As respostas diferentes se acentuam por
conta dos vrios explantes utilizados, das diversas condies ambientais de
incubao como luz, temperatura e fotoperodo, tipos de frascos de cultura,
meios de cultura e suas variaes, somente para citar alguns.
Na literatura, verifica-se que h consenso entre os autores sobre os
protocolos para P. edulis, principalmente, o do maracuj amarelo, o mais
estudado. Um dos procedimentos-consenso que, para a maioria das

369

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

espcies estudadas, no importando o explante, o hormnio 6-BA foi o


indutor por excelncia da regenerao na faixa de concentrao de 0,5 e
2,0 mg. L-1 de 6-BA tendo sido demonstrado para P. edulis (Dornelas & Vieira,
1994; Alexandre, 2002; Passos et al., 2002b), P. amethystina, P. giberti,
P. molissima, P. maliformis (Dornelas & Vieira, 1994) P. nitida (Passos, 1999;
Passos et al., 2002b), P. cincinnata, P. setacea e P. alata (Passos et al., 2002b) e
P. cincinnata (Lombardi, 2003; Lombardi et al., 2003).
Outra condio importante tem sido a regenerao na presena de luz.
Muitos trabalhos j demonstraram a importncia da luz na morfognese para
diversos explantes de maracuj (Dornelas & Vieira, 1994; Couceiro, 2002). Por
sua vez, diferentes nveis de irradiao so utilizados nos diversos trabalhos
publicados. Nesse assunto, merece destaque o trabalho de Alexandre (2002).
Esse autor estudou a regenerao adventcia in vitro de segmentos de
hipoctilo de Passiflora edulis f. flavicarpa e encontrou importante interao
entre o nvel de irradincia utilizado e a concentrao de sacarose no meio de
cultura. Via de regra, maior irradincia requer menor concentrao de
sacarose e vice-versa, para a regenerao adventcia. Por exemplo, o autor
observou que a melhor resposta organognica em segmentos de hipoctilo
ocorreu no extremo proximal dos explantes, ou seja, explantes extrados mais
prximos aos ns cotiledonares, cultivados em meio contendo 1,0 mg.L-1 de
BAP + 0,1 mg.L-1 de ANA e submetidos a uma concentrao de 10 g.L-1 de
sacarose no nvel de irradincia de 150 E.m-2.s-2. J, as maiores mdias de
comprimento de brotos foram encontradas no extremo distal dos segmentos
de hipoctilo, extrados mais distantes dos ns cotiledonares, cultivados em
meio contendo 1,0 mg.L-1 de BAP, 20 g.L-1 de sacarose e quando expostos
irradincia de 50 E.m-2.s-2. Em ambos os casos, o melhor nvel de irradincia
foi o mais alto testado.
O meio MS (Murashige & Skoog, 1962) integral ou contendo metade
das concentraes de seus componentes tem sido o mais utilizado nos
trabalhos publicados. No entanto, Monteiro et al. (2000) relatam severa
deficincia nutricional observada em plantas jovens, regeneradas a partir de
discos foliares de P. edulis f. flavicarpa, quando o meio MS foi utilizado e
propem um meio modificado para reverter essa deficincia (Monteiro et al.,

370

Cultura de tecidos aplicada manuteno de germoplasma in vitro

2000). Igualmente, Ribas (2002), utilizando explantes cotiledonares de P.


edulis f. flavicarpa, encontrou maior quantidade de explantes regenerativos e
maior nmero mdio de gemas por explante quando utilizou o meio MS com
as vitaminas do meio B5 (Gamborg et al., 1968).
Os fatores que incrementaram a organognese adventcia em espcies
de Passiflora foram: a adio de gua de coco ao meio de cultura (Dornelas &
Vieira 1994) e de inibidores da ao do etileno, como nitrato de prata e
tiossulfato de prata (Faria & Segura, 1997; Passos et al., 2002b) Figuras 4, 6 e 7.

Figura 4. Organognese
de novo em P. alata a
partir de discos foliares.

Foto: Luciana Rocha Antunes

Figura 5. Organognese
de novo em P. cincinnata
a partir de razes.

Foto: Ilene Passos

371

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Figura 6. Organognese
de novo em P. edulis a
partir de discos foliares.

Foto: Ilene Passos

Figura 7. Organognese
de novo de P. nitida a
partir de discos foliares.

Foto: Ilene Passos

Isolamento e cultura de protoplastos de espcies de


Passiflora
A membrana plasmtica das clulas vegetais est envolvida por uma
parede celulsica, e as clulas adjacentes esto conectadas com uma matriz
rica em pectina. A desconexo das clulas vegetais e a remoo da parede,
experimentalmente, tanto por um processo mecnico quanto enzimtico
resultam na produo de clulas vegetais nuas, nicas, denominadas
protoplastos isolados. Estes representam de fato a nica fonte de clulas
individuais que se pode obter de plantas superiores. Os protoplastos,

372

Cultura de tecidos aplicada manuteno de germoplasma in vitro

formando clulas individuais em cultura, podem ser manipulados com


tcnicas microbiolgicas (por exemplo: isolamento de mutantes, clonagem
celular, fuso celular, transformao gentica etc.) e a sua totipotncia
permite a regenerao de plantas inteiras (Fehr & Dudits, 1994).
Esse sistema pode ser til para extrao de organelas celulares,
transferncia gnica por meio da tcnica de transformao direta por
eletroporao, produo de novos gentipos mediante formao de
hbridos entre espcies sexualmente incompatveis e obteno de
citoplasmas hbridos, a fim de combinar organelas de espcies herdadas do
progenitor materno ou para se obter recombinao entre organelas de
espcies diferentes (Fungaro & Vieira, 1989).
Embora sejam clulas desprovidas de parede celular, os protoplastos
vegetais no podem ser vistos como anlogos de clulas animais, mas como
clulas injuriadas que devem passar por um processo de recuperao antes
de serem capazes de sustentar divises (Fehr & Dudits, 1994). Por isso, o
cultivo de protoplastos se faz em meio de cultura rico em componentes
orgnicos e inorgnicos, suplementado com fitorreguladores e
concentraes adequadas de polissacardeos que funcionam como
estabilizadores osmticos (Vieira, 1997).
Entre os fatores que influenciam o sucesso da cultura de protoplastos
esto: fonte e estdio fisiolgico do explante, soluo enzimtica para a digesto
da parede, densidade de cultivo, mtodos de cultivo e meios de cultura.
Os explantes mais utilizados para o isolamento de protoplastos de
espcies de Passiflora tm sido cotildones (Dornelas & Vieira, 1993; Passos
et al., 2004b) e folhas recm-expandidas (DUtra Vaz et al., 1993; Dornelas,
1995; Otoni, 1995). Verificou-se que, protoplastos isolados do mesfilo tm
seu rendimento e sua viabilidade reduzidos de acordo com a idade da planta,
principalmente, aps a emisso de gavinhas (DUtra Vaz et al., 1993; Otoni,
1995).
A soluo comumente utilizada para pr-plasmlise dos tecidos de
Passiflora, dissoluo de enzimas e lavagem dos protoplastos tem sido CPW-

373

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

13 que composta dos sais do meio CPW (Frearson et al., 1973) e manitol a
13% (Dornelas & Vieira, 1993; DUtra Vaz, 1993; Dornelas, 1995; Otoni, 1995;
Passos et al., 2004b).
Os rendimentos (nmero de protoplastos isolados/grama de tecido)
encontrados em diversos isolamentos de protoplastos em Passiflora variaram de
acordo com a espcie e o explante utilizados, mas apresentaram amplitude de
9,2.106 - 1,4. 107 protoplastos por grama de tecido (Dornelas & Vieira, 1993;
DUtra Vaz et al., 1993; Otoni, 1995; Passos et al., 2004b) (Figura 8). A viabilidade
dos protoplastos, aps o isolamento, apresentou amplitude de 78,10 7,06%
para P. seemannii (Otoni, 1995) a 96,4 0,9% para P. gibertii (Dornelas, 1995).
O tamanho mdio dos protoplastos depende da espcie analisada e do
explante utilizado. Podem variar de 19 a 47 m, quando isolados de tecidos de
folhas ou de 30 a 60 m quando os protoplastos derivam de tecidos
cotiledonares (Vieira & Dornelas, 1996).
As densidades de cultivo, mtodos de cultivo e meios de cultura
empregados vo influenciar na induo e na manuteno da diviso celular e na
obteno de colnias e microcalos (1mm de dimetro). As densidades de cultura
usadas para Passiflora spp. tm variado de 0,5 a 2,0.105 protoplastos por mL de
meio de cultura. Usou-se desde cultura em meio lquido, passando por camadas
finas, fatias at gotas de agarose. Os meios de cultura mais utilizados foram o de
Kao (1977), modificado por Gilmour et al. (1989) e o de Kao & Michayluk (1980).

Fotos: Ilene Passos

Figura 8. Isolamento e cultura de protoplastos em Passiflora spp.: (a) protoplastos


recm-isolados de P. setacea; (b) protoplastos em incio de cultivo de P. alata; e (c)
microcolnias de P. alata. Fotos obtidas em microscpio de luz invertida: CENA/USP.

374

Cultura de tecidos aplicada manuteno de germoplasma in vitro

A densidade de 1,0.105 protoplastos por mL de meio e o mtodo de


cultura em gotas de agarose forneceram as freqncias mais altas de diviso
celular e de formao de colnias (Otoni, 1995; Vieira & Dornelas, 1996). Em
P. nitida, o cultivo de protoplastos, na densidade de 1,0.105 protoplastos por
mL em meio de cultura, imobilizados em alginato, foi um procedimento
adequado para obteno de microcolnias (Passos et al., 1999; Passos,
1999).
Mourad-Agha & Dexheimer (1979) cultivaram calos de Passiflora
quadrangularis L. no meio de cultura, descrito por Bourgin & Nitch (1967),
com modificaes. Esse meio tem sido muito eficiente para o cultivo de calos
provenientes de protoplastos de Passiflora spp. (Dornelas, 1995; Passos
et al., 2004b).
Passos et al. (2004b), em seus experimentos com protoplastos
cultivados em gotas de agarose, utilizaram o meio K8 sem 2,4 D, pois foi
verificada reduo no aparecimento de budding nos protoplastos em cultivo.
No entanto, a diminuio gradativa da osmolaridade, por meio de trocas de
meio de cultura, teve de ser realizada a cada trs ou quatro dias para evitar a
morte dos protoplastos. Com esse procedimento, as seguintes eficincias de
plaqueamento foram obtidas: 45,8% para P. edulis; 36,8% para P. alata e
24,5% para P. nitida.

Figura 9. Regenerao
de protoplastos de P.
cincinnata por meio da
organognese in vitro.

Fotos: Ilene Passos

375

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Matos et al. (2005) verificaram que a idade dos cotildones e a


exposio ou no destes luz influenciaram o rendimento do isolamento de
protoplastos de Passiflora edulis. Explantes mais jovens (6 dias) com
cotildones no expostos luz isolaram maior quantidade de protoplastos.
Por sua vez, o ndice de diviso das clulas, aps sete dias das placas em
cultivo, foi maior para os explantes mais velhos (21 dias) aps a germinao no
escuro, tanto no nmero de clulas em primeira diviso (15%) quanto no
nmero de clulas acima da primeira diviso (4,1%).

Hibridao somtica entr


entree espcies de Passiflora
A hibridao interespecfica tem sido, para muitas espcies, a melhor
alternativa em busca de resistncia a doenas. O mesmo verdadeiro para o
gnero Passiflora. Esse gnero compreende mais de 400 espcies e em vrias
delas j foram encontradas caractersticas de resistncia s principais pragas e
doenas que atacam Passiflora edulis, umas das espcies mais importantes
economicamente para o Brasil. No maracuj (Passiflora spp.), devido baixa
fertilidade dos hbridos interespecficos, a hibridao somtica via fuso de
protoplastos representa uma alternativa de transferncia de genes do
germoplasma selvagem para a espcie cultivada (Vieira, 1997). Recursos
tcnicos, como fuso de protoplastos, visando obteno de hbridos
somticos interespecficos, podem vir a ser de grande utilidade para o
melhoramento gentico de Passiflora (Dornelas, 1995), semelhana de
programas de melhoramento gentico importantes como os de citros,
girassol, brssicas, trigo, realizados no mundo inteiro (Davey et al., 2005).
Otoni (1995) obteve cinco hbridos somticos da eletrofuso de
protoplastos isolados de mesfilo de P. edulis f. flavicarpa e P. incarnata. Esses
hbridos foram utilizados em experimentos na primeira gerao de
retrocruzamento com P. edulis e P. incarnata.
Dornelas (1995) obteve hbridos da fuso qumica de protoplastos de P.
edulis var. flavicarpa, P. alata, P. amethystina, P. cincinnata, P. coccinea e P.
gilberti. Para a fuso qumica, o autor utilizou solues de PEG

376

Cultura de tecidos aplicada manuteno de germoplasma in vitro

(polietilenoglicol) em que as melhores concentraes foram as de 20% e 30%


para a formao de heterodmeros entre protoplastos de Passiflora (Dornelas
et al., 1995).
Para que hbridos somticos possam ter importncia significativa dentro
de um programa de melhoramento gentico de maracuj, eles devem ser
obtidos de forma ininterrupta e serem avaliados por uma equipe
multidisciplinar para que uma utilidade imediata lhe seja atribuda. A
infertilidade do hbrido somtico, em Passiflora, um impedimento para que
ele possa ter utilizao comercial imediata. Em caso de infertilidade parcial,
ele poder ser aproveitado em retrocruzamentos; entretanto, se o hbrido
obtido, aps ser avaliado, no tiver caractersticas desejveis, ele dever ser
descartado. Em outras culturas, para amenizar o problema da infertilidade dos
hbridos somticos, tem sido usada a tcnica da hibridao somtica
assimtrica.

Concluses
A maioria das espcies de Passiflora apresenta grande variabilidade
gentica e, devido a diferentes acessos utilizados, a repetio de protocolos
constantes na literatura muitas vezes dificultada. Portanto, ao se publicar
protocolos de estabelecimento in vitro, organognese adventcia, isolamento
e cultura de protoplastos, devem-se descrever com detalhes o material e os
mtodos utilizados. Devem-se descrever, tambm, a origem dos acessos
usados, os processos de obteno, idade, processo de retirada do arilo e
conservao das sementes ou o que couber para material obtido do campo
ou de casa de vegetao.
Muito pouco se sabe sobre a germinao das sementes de Passiflora
tanto in vitro como ex-vitro e recomenda-se que esses estudos devam ser
intensificados para que a cultura in vitro possa ser til para o melhoramento
gentico e para a conservao de germoplasma.
Finalmente, visando manuteno de germoplasma de Passiflora in
vitro muitos estudos, como de meios de cultura, por exemplo, devero ser

377

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

efetuados para que se possa lograr sucesso nessa atividade tendo em vista
que a maioria dos trabalhos publicados concentra-se apenas em Passiflora
edulis, e o gnero Passiflora compreende cerca de 400 espcies.

Agradecimentos
FAPESP pelo auxlio financeiro (processo n 00/05780-4).
Dra. Sigrid Luiza Jung Mendaolli (IAC), pelo emprstimo do
equipamento microscpio esteroscpico, para as fotos de sementes,
germinao e regenerao de plantas de Passiflora spp.
Ao Prof. Dr. Augusto Tulmann Neto (CENA/USP), pelo emprstimo do
equipamento microscpio de luz invertida para fotos de cultura de
protoplastos de Passiflora spp.
Dra. Neiva Izabel Pierozzi (IAC), por digitalizar as fotos aqui
apresentadas.
Dra. Vera Maria Quecini (IAC) pela reviso crtica do manuscrito.

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383

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

384

Estudos morfolgicos, anatmicos,


histoqumicos e ultra-estruturais da
organognese in vitro do maracujazeiro
Beatriz Appezzato-da-Glria
Juliana Aparecida Fernando
Silvia Rodrigues Machado
Maria Lcia Carneiro Vieira

Intr
oduo
Introduo
A suscetibilidade das espcies comerciais de Passiflora a doenas tem
limitado a expanso da cultura do maracuj no Brasil, justificando o
desenvolvimento de estratgias biotecnolgicas de apoio aos programas de
melhoramento. A produo de plantas geneticamente transformadas constitui
alternativa de transferncia de genes de resistncia a doenas, principalmente,
quelas causadas por vrus e bactrias. Contudo, o sucesso na obteno de
plantas transgnicas depende de protocolos eficientes para a regenerao de
brotos in vitro.
No gnero Passiflora, a organognese in vitro a via de regenerao
predominante podendo ser direta (Kantharajah & Dodd, 1990; Dornelas &
Vieira, 1994; Appezzato-Da-Glria et al., 1999; Hall et al., 2000; Becerra et al.,
2004) ou indireta (Monteiro et al., 2000; Lombardi et al., 2003) a partir de
diferentes fontes de explantes: foliares, cotiledonares, hipocotiledonares,
segmentos do entren e de raiz.
Em Passiflora, freqente a formao de estruturas foliares as quais so
erroneamente interpretadas como gemas que no se alongam. Outro aspecto

387

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

importante que a eficincia dos sistemas de transformao de plantas


depende

de

que

as

clulas

transformadas

sejam

aquelas

que

coincidentemente tenham envolvimento no processo morfognico. Por isso,


estudos anatmicos e ultra-estruturais so importantes para caracterizar as
estruturas e determinar as reas meristemticas envolvidas no processo de
regenerao de brotos in vitro, auxiliando na determinao dos protocolos de
transformao. A formao de brotos quimricos, isto , com ramos
transformados e no-transformados, outro aspecto que preocupa o
pesquisador, pois se pode perder o ramo transformado ao longo do processo
de estaquia da planta. Assim sendo, necessrio conhecer a extenso da
quimera e entender a sua origem anatmica.
A despeito da importncia dos estudos estruturais e ultra-estruturais,
pouco tem sido publicado em Passiflora. Appezzato-da-Glria et al. (1999)
realizaram cortes histolgicos de discos foliares de P. edulis f. flavicarpa
(gentipo no determinado) os quais apresentaram respostas morfognicas
distintas quando cultivados em meio MS (Murashige &

Skoog, 1962)

contendo 1,0 mg L BA (caulognese) ou ANA (rizognese). Lombardi et al.


-1

(2003) analisaram a origem indireta das gemas em discos foliares de P.


cincinnata Mast. e a origem direta e indireta a partir de segmentos de razes.
Neste captulo so apresentados os resultados de estudos
morfolgicos, anatmicos, histoqumicos e ultra-estruturais da organognese
in vitro em maracuj-amarelo (Passiflora edulis Sims f. flavicarpa Deg.).

Como avaliar o processo de regenerao in vitro em


explantes de maracuj?
As anlises estruturais da organognese in vitro em Passiflora edulis
Sims f. flavicarpa Deg. e em P. cincinnata Mast. tm mostrado grande

388

Estudos morfolgicos, anatmicos, histoqumicos e ultra-estruturais da organognese...

determinao dos explantes para a formao de primrdios foliares. Esse


caminho organognico compromete o sucesso da cultura in vitro, pois a
presena de meristema apical caulinar essencial para produo de brotos.
As anlises anatmicas dos segmentos de entren de P. edulis
f. flavicarpa gentipo Cajuba, cultivados em meio MS contendo 1,0 mg L-1 de
BA e 5% de gua de coco, mostram intensa diviso das clulas dos
parnquimas cortical e medular formando calo. Na periferia dessa regio de
proliferao celular, verifica-se a formao de reas meristemticas
(Figura 1A, setas) que, posteriormente, originam primrdios foliares
(Figura 1B-C). Na base desses primrdios, tambm se formam regies
meristemticas que originam outras estruturas foliares (Figura 1D). Processo
similar ocorre nos discos foliares desse mesmo gentipo; as reas
meristemticas formam-se diretamente a partir das clulas subepidrmicas do
explante, principalmente, na regio da nervura central (Figura 2A-B).
Sob as mesmas condies de cultivo in vitro utilizadas para o gentipo
Cajuba, os explantes cotiledonares, foliares e hipocotiledonares do gentipo
FB-100 produzem gemas e primrdios foliares (Figuras 2C-D e 3A-D).
A diferena morfolgica entre gemas caulinares e estruturas foliares
isoladas baseia-se no fato de que, nestas, a base se insere diretamente no
explante (Figuras 2A-C e 3A-B), enquanto nas gemas, os primrdios foliares
saem de um eixo comum (Figuras 2D e 3C-D). As observaes ao microscpio
eletrnico de varredura das estruturas originadas in vitro so fundamentais e
constituem maneira rpida de caracterizao morfolgica permitindo a
distino entre gemas e primrdios foliares.

389

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Figura 1. Passiflora edulis f. flavicarpa gentipo Cajuba. A. Corte longitudinal de


segmentos de entren mostrando reas meristemticas (setas) formadas na periferia
da regio de proliferao celular. B, C. Corte longitudinal de primrdios foliares
originados a partir das reas meristemticas indicadas em A. D. Corte longitudinal de
uma regio meristemtica (seta) formada na base do primrdio foliar. (Barras: A, D =
74 m, B, C = 37 m).

390

Estudos morfolgicos, anatmicos, histoqumicos e ultra-estruturais da organognese...

Figura 2. Passiflora edulis f. flavicarpa gentipo Cajuba (A, B) e FB-100 (C, D). A, B.
Eltron-micrografias de explantes foliares evidenciando a formao de primrdios
foliares com base inserida no explante. C, D. Eltron-micrografias de explantes
cotiledonares mostrando estruturas foliares (C) e uma gema (D) com os primrdios
foliares originando-se a partir de um eixo comum. (Barras: A = 261,3 m;
B = 89,64 m; C = 49,47 m; D = 48,48 m).

391

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Figura 3. Passiflora edulis f. flavicarpa gentipo FB-100. Eltron-migrografias de


primrdios foliares (A, B) apresentando base estreita inserida no tecido do explante
hipocotiledonar e gemas com os primrdios foliares (setas) originando-se de um eixo
comum formado do explante foliar (C) e hipocotiledonar (D). (Barras: A, C, D =
100 m; B = 30 m).

Or
ganognese in vitr
Organognese
vitroo em Passiflora edulis Sims f.
flavicarpa Deg. populao FB100
As anlises anatmicas seqenciais e peridicas do explante
hipocotiledonar de P. edulis f. flavicarpa, cultivado em meio MS
suplementado com 1,0 mg L-1 de BA e 5% de gua de coco, mostram que, a
partir do segundo dia de cultura, possvel verificar divises nas clulas dos
parnquimas cortical e medular prximas superfcie de seccionamento do
explante. Esse processo contnuo de diviso celular origina reas
meristemticas perifricas, apresentando divises intensas na camada
epidrmica e camadas subepidrmicas do explante hipocotiledonar, cerca

392

Estudos morfolgicos, anatmicos, histoqumicos e ultra-estruturais da organognese...

de cinco dias aps a inoculao in vitro. Em algumas regies dessas reas de


mitose, grupos de clulas meristemticas tornam-se isoladas das demais,
formando meristemides (Figura 4A).
Alguns desses meristemides desenvolvem-se em estruturas estreitas e
alongadas que originam primrdios foliares; outros meristemides formam
estruturas de maior dimetro (0,5 a 2,0 mm) as quais foram aqui denominadas
protuberncias (Figuras 4B e 5A-D). Eventualmente os meristemides
formam gemas. O processo organognico assincrnico: gemas, estruturas
foliares e protuberncias podem ser observadas em diferentes etapas de
desenvolvimento em um mesmo explante (Figura 5A) e em explantes com
diferentes dias de cultivo in vitro, sendo possvel identificar gemas a partir do
13o dia de cultura.
As protuberncias (Figuras 4C e 5B, 5D) so constitudas por diferentes
tipos celulares e recobertas por substncia de natureza pctica (Figuras 4C). A
anlise ao microscpio eletrnico de transmisso confirma a presena dessa
matriz extracelular nas clulas perifricas das protuberncias (Figura 4D). O
revestimento epidrmico unisseriado contnuo, juntamente com as camadas
subepidrmicas, constitui as clulas perifricas da protuberncia. Em quase
toda a extenso dessas protuberncias, as clulas perifricas apresentam
aspecto meristemtico: tamanho pequeno, citoplasma denso, ncleo e
nuclolo evidentes. Somente essas clulas perifricas formam gemas e/ou
primrdios foliares (Figura 5B, 5E e 5F). Alm das clulas perifricas, as
protuberncias possuem clulas centrais parenquimticas e elementos
traqueais (Figuras 4C e 5D).
Cabe ressaltar que as propriedades hidroflicas das substncias
pcticas e seu estado geleificante (Morris et al., 1982) sugerem que o
material extracelular nas protuberncias analisadas possa ter papel na
hidratao (Machado & Sajo, 1996) das clulas perifricas e na
manuteno da integridade estrutural (Morris et al., 1982) dessas
protuberncias. Em Papaver somniferum L., a sntese de mucilagem foi

393

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

observada durante a diferenciao do meristemide no estgio de diviso de


suas clulas perifricas. A presena dessa substncia mucilaginosa na
superfcie dessas clulas perifricas e a maior espessura das paredes
periclinais externas servem como uma separao mecnica entre esses
centros meristemticos (Ovecka & Bobk, 1999).

Figura 4. Passiflora edulis f. flavicarpa gentipo FB100. A. Meristemide formado na


extremidade do explante hipocotiledonar aos sete dias de cultivo in vitro. B. Protuberncia
originada no explante hipocotiledonar com revestimento epidrmico contnuo. A seta
indica regio meristemtica originada nas camadas perifricas dessa protuberncia que,
posteriormente, formar gemas ou primrdios foliares. C. Protuberncia originada
do explante foliar sem revestimento epidrmico contnuo. A seta indica a presena de
substncia de natureza pctica. D. Eltron-micrografia da matriz extracelular (p) que
envolve as clulas perifricas das protuberncias. (Barras: A,B = 30 m; C = 74 m;
D = 0,23 m).

394

Estudos morfolgicos, anatmicos, histoqumicos e ultra-estruturais da organognese...

Figura 5. Passiflora edulis f. flavicarpa gentipo FB-100. Explantes foliares (A, B) e


hipocotiledonares (C-F) inoculados em meio MS suplementado com 1,0 mg L-1 de BA e
5% de gua de coco. A. Protuberncias (seta) formadas na nervura central do explante
foliar aos 25 dias de cultivo in vitro. B. Corte longitudinal das estruturas evidenciadas em
A. A seta indica um primrdio foliar originando-se na periferia da protuberncia.
C. Protuberncia originada no explante hipocotiledonar aos 26 dias de cultura.
D-F. Explantes aos 48 dias de cultivo in vitro. D. Corte longitudinal de protuberncias
originadas da camada epidrmica e das subepidrmicas do explante, caracterizando
a origem superficial. E. Gema formada na superfcie da protuberncia.
F. Corte longitudinal da gema mostrado em E, confirmando a origem da estrutura na periferia
da protuberncia. (Barras: A = 870 m; B, D, F = 199 m; C = 308 m; E = 410 m).

395

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Considerando as fases da via organognica in vitro quais sejam:


(a) aquisio de competncia habilidade para responder induo
organognica, (b) induo as clulas responsivas ao estmulo tornam-se
determinadas para formar um rgo; nessa fase, a composio de
fitorregulador do meio de cultura crtica e, (c) diferenciao morfolgica e
desenvolvimento crescimento de gemas ou razes a partir do explante
(Christianson & Warnick 1983, 1985), nas condies analisadas, o perodo de
cultivo dos explantes in vitro pode ter levado falha na determinao das
clulas dos meristemides que passaram a desenvolver protuberncias.
A falha na formao dos meristemides pode ser em decorrncia da
desdiferenciao incompleta das clulas epidrmicas que originam os
meristemides, da competio entre clulas desdiferenciadas ou, ainda, da
inibio da induo das gemas por meristemides formados em reas
adjacentes (Lo et al., 1997), lembrando que o processo assincrnico.
Para Dhaliwal et al. (2003), os meristemides determinados para
produzir gemas seguem seu caminho de desenvolvimento e aqueles ainda no
determinados so inibidos ou revertem a tecido parenquimtico. Nas
condies analisadas, a reverso a tecido parenquimtico no completa,
pois apenas as clulas centrais da protuberncia so parenquimticas,
enquanto as clulas perifricas dividem-se, formando novos meristemides os
quais do origem s gemas.
As anlises estruturais e ultra-estruturais, realizadas com P. edulis f.
flavicarpa, indicam a necessidade de definir o tempo necessrio de induo
dos explantes, fato que pode ter contribudo para o desenvolvimento das
protuberncias. Experimentos envolvendo transferncia recproca de explantes
entre meio de induo de gemas e meio basal poderiam ser conduzidos com
objetivo de avaliar a competncia e a determinao dos tecidos durante o
processo organognico in vitro.
As protuberncias formadas diretamente do explante hipocotiledonar
possuem contorno bem delimitado (Figuras 4B e 5D, 5F) e apresentam
potencial para formar mais de uma gema adventcia na sua superfcie.
Nos explantes hipocotiledonares, tambm ocorre a formao de um
pequeno calo. Cerca de 18 dias aps a inoculao, protuberncias,

396

Estudos morfolgicos, anatmicos, histoqumicos e ultra-estruturais da organognese...

primrdios foliares e, esporadicamente, gemas (Figura 6B-C) formam-se a


partir desse calo.

Figura 6. Passiflora edulis f. flavicarpa gentipo FB-100. A. Proliferao celular (pc) na


extremidade do explante. B. Corte longitudinal da amostra documentada em A. A seta
indica o meristema apical caulinar formado na regio proliferada, caracterizando a
via organognica indireta. C. Detalhe do meristema apical caulinar indicado pela
seta em C. (Barras: A, B = 410 m; C = 74 m).

397

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Os explantes foliares cultivados in vitro formam protuberncias (Figuras


4C e 5A-B) similares quelas descritas para o explante hipocotiledonar.
Contudo, no decorrer da cultura, as protuberncias aumentam em dimetro,
deixam de apresentar contorno bem delimitado (Figura 4C) e formam poucas
gemas quando comparadas aos explantes hipocotiledonares. Ressalte-se que
no h formao de calo a partir desses explantes.
O fator relevante, documentado neste estudo, a competncia dos
explantes foliares e hipocotiledonares de P. edulis f. flavicarpa para a formao
de gemas a partir das camadas perifricas das protuberncias. Processo
similar ocorre em explantes foliares, entrenodais e nodais de Eucalyptus gunnii
Hook. (Herv et al., 2001).
As protuberncias apresentam elementos traqueais entre as clulas
centrais de ambos os explantes: hipocotiledonares e foliares. A maioria das
anlises mostrou que as clulas centrais se diferenciaram diretamente em
elementos traqueais, ou seja, h transdiferenciao (Sugiyama & Komamine,
1990). Entretanto, algumas vezes, possvel verificar a formao de elementos
traqueais a partir de divises das clulas centrais. A adio de auxina e/ou
citocinina ao meio de cultura indispensvel para a transdiferenciao de
clulas parenquimticas em elementos traqueais (Sugiyama & Komamine,
1990). De acordo com Fukuda & Komamine (1980), a presena de ANA e BA
foi essencial para a transdiferenciao de elementos traqueais em cultura de
clulas do mesofilo de Zinnia elegans. A formao de elementos traqueais com
paredes espessas e lignificadas a partir das clulas centrais das protuberncias
pode estar associada reteno de gua e ao suporte mecnico, como
verificaram Scatena & Nunes (1996) ao analisar a formao de espessamentos
helicoidais de lignina nas paredes dos idioblastos do mesofilo de Pleurothalis
rupestris Lindl.
Os estudos ao microscpio eletrnico de transmisso confirmam
diferenas entre as clulas perifricas e as centrais encontradas nas
protuberncias (Figura 7A-B). Tanto na via organognica direta como na
indireta, as clulas centrais das protuberncias apresentam baixa densidade

398

Estudos morfolgicos, anatmicos, histoqumicos e ultra-estruturais da organognese...

citoplasmtica quando comparadas s clulas perifricas. As clulas centrais


caracterizam-se pela presena de grande quantidade de plastdios contendo
gros de amido localizados prximos parede celular e acmulo de protena
no vacolo (Figura 7B). As clulas perifricas recm-divididas das
protuberncias,

originadas

diretamente

dos

explantes

foliares

hipocotiledonares, apresentam parede celular delgada e plasmodesmos,


promovendo a interao entre as clulas-filhas via simplasto, citoplasma rico
em organelas (Figura 7C). So abundantes principalmente mitocndrias com
matriz eltron-densa, o ncleo esfrico com cromatina bem dispersa, h a
presena de plastdios com gros de amido, dictiossomos ativos, retculo
endoplasmtico rugoso, muitos ribossomos e vacolos. As clulas perifricas
enquadram-se no padro ultra-estrutural de clulas envolvidas com os eventos
do processo regenerativo, ou seja, com caractersticas indicativas de alta
atividade metablica no citoplasma (Fournier et al., 1991, Appezzato-DaGlria & Machado, 2004).
As clulas perifricas da protuberncia na via indireta de regenerao
so similares s encontradas na via direta quanto presena de protena no
vacolo e de organelas. A diferena marcante entre as clulas nas duas vias de
regenerao encontrada no ncleo. Enquanto na organognese direta o
ncleo apresenta formato circular, na via indireta de regenerao, o ncleo
apresenta complexo de poros no envoltrio (Figura 7D) e profundas
invaginaes. Em algumas clulas, observa-se fragmentao nuclear. O
processo amittico tambm foi verificado na organognese indireta em
Bauhinia forficata por Appezzato-da-Glria & Machado (2004). A presena de
constries no envoltrio nuclear e a modificao de seu formato esfrico para
irregular

em

protoplastos

de

Solanum

lycopersicoides

tm

como

conseqncia a diviso amittica (Tylicki et al., 2002). Similarmente, Wang


et al. (1998), investigando mudanas na ultra-estrutura do ncleo durante o
desenvolvimento de calo de Allium sativum Red Six Cloves, verificaram a
formao de invaginaes, denominadas por esses autores como profundas
fissuras, ao longo do envoltrio nuclear e, posteriormente, constrio desse
envoltrio.

399

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Figura 7. Passiflora edulis f. flavicarpa gentipo FB100. A. Clulas perifricas das


protuberncias mostrando alta densidade citoplasmtica. B. Clulas centrais das
protuberncias com plastdios (p) e acmulo de protena (setas) no vacolo.
C. Dictiossomos (d), mitocndrias (m) e retculo endoplasmtico rugoso (RER). D.
Ncleo (N) de formato irregular observado nas clulas perifricas de protuberncias
formadas indiretamente no explante hipocotiledonar. As setas indicam a presena de
poros nucleares. (Barras: A,B = 4,08 m; C = 0,23 m; D= 0,58 m).

De acordo com Bayliss (1980), a fragmentao do ncleo pode


contribuir para a variao cromossmica da cultura resultante. Appezzatoda-Glria & Machado (2004) sugerem que, se a variao cromossmica
gerada por processos amitticos puder gerar variabilidade de natureza
gentica, a via organognica direta seria mais indicada para obteno de
plantas transgnicas. Entretanto, Nuti Ronchi et al. (1973) ressaltam que,

400

Estudos morfolgicos, anatmicos, histoqumicos e ultra-estruturais da organognese...

sob condies apropriadas de cultura, o estado diplide e uninucleado das


clulas que passam por processo de fragmentao nuclear pode ser
restaurado. Tambm, Tylicki et al. (2002) observam que, em condies
apropriadas de cultura, h um processo de seleo em que protoplastos
anucleados e polinucleados (resultantes de processos amitticos) so
eliminados, permitindo a estabilizao da cultura e, conseqentemente, a
regenerao de plantas geneticamente estveis.
Importante ressaltar que a origem das gemas est sempre associada s
reas meristemticas observadas na periferia das protuberncias,
independente da via de regenerao ser direta ou indireta. Essas regies
meristemticas

so

constitudas

de

clulas

competentes

para

transformao gentica, ou seja, apresentam caractersticas tais como


clulas pequenas, isodiamtricas com paredes delgadas, citoplasma denso
e ncleo proeminente (Sangwan et al., 1992), pois o que se pretende nessa
tcnica que o DNA exgeno sofra transfeco para as clulas em diviso.
Numa

anlise

comparativa

entre

os

explantes

foliares

hipocotiledonares, observa-se que, no trigsimo dia de cultura, o explante


foliar forma mais protuberncias que o hipocotiledonar, enquanto o nmero de
gemas observado nos discos foliares foi menor. A maior freqncia de gemas
verificada no hipoctilo deve-se ao fato de que uma protuberncia pode
originar mais de uma gema. Apesar de as protuberncias formadas nos discos
foliares apresentarem, tambm, mais de uma estrutura na sua superfcie, essas
formaes geralmente so folhas. Alm disso, o desenvolvimento da maioria
das protuberncias dos explantes foliares difere daquelas observadas no
hipoctilo: enquanto no explante hipocotiledonar as protuberncias
apresentam-se individualizadas e com a camada epidrmica e as
subepidrmicas definidas, nos explantes foliares, a maioria das protuberncias
apresenta desenvolvimento contnuo em tamanho sem ocorrer a formao de
gemas. Possivelmente, a perda de definio da camada epidrmica e das
subepidrmicas das protuberncias dos explantes foliares (Figuras 4C e 5B)
interfere no processo de regenerao de gemas uma vez que os novos
meristemides so formados a partir das clulas perifricas. Outro carter

401

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

morfolgico diferencial entre esses explantes o fato de as gemas originadas


nos discos foliares apresentarem caractersticas de hiperidricidade, ou seja,
colorao verde-escura e aspecto quebradio e brilhante. A inferioridade dos
explantes foliares j havia sido observada por Hall et al. (2000). Importante
ressaltar que a idade e a condio fisiolgica das plantas doadoras afetam a
morfognese in vitro em explantes foliares de P. edulis f. flavicarpa (Becerra et
al., 2004).
A superioridade do explante hipocotiledonar em relao ao foliar
pode explicar as diferenas nas respostas da populao FB-100 que vem
sendo usada no Laboratrio de Biologia Celular e Molecular de Plantas do
Departamento de Gentica da ESALQ/USP em ensaios de transformao
gentica. Dados desses estudos indicam a obteno de 0,13% de plantas
transgnicas a partir de explantes foliares submetidos ao processo de
biobalstica (8 plantas em 6000 discos bombardeados por micropartculas
recobertas com DNA) (Castro, 2005). Por sua vez, os explantes
hipocotiledonares
transformados
via
Agrobacterium
tumefaciens
apresentaram 11% de eficincia de transformao, enquanto os discos
foliares submetidos a esse mesmo processo produziram 6% de brotos
transgnicos (Monteiro, 2005). Essas diferenas se devem ao mtodo
usado e tambm ao explante que recebeu o DNA exgeno.
A despeito da diferena do mtodo de transformao utilizado, o
potencial de regenerao dos explantes certamente interfere na
porcentagem de plantas transgnicas obtidas, ratificando a necessidade
dos estudos histolgicos e ultra-estruturais em auxlio aos grupos de
pesquisadores que estudam a transformao gentica de plantas.
Protocolos para organognese in vitro de espcies de Passiflora
podem ou no ser suplementados com gua de coco. Kantharajah & Dodd
(1990), Dornelas & Vieira (1994) e Hall et al. (2000) relatam que suplementar
o meio MS com gua de coco auxilia na obteno de gemas in vitro de
espcies de Passiflora. Todavia, para outros autores (Manders et al., 1994;
Appezzato-Da-Glria et al., 1999; Biasi et al., 2000; Monteiro et al., 2000), esse
mesmo meio suplementado somente com fitorreguladores sem adio de

402

Estudos morfolgicos, anatmicos, histoqumicos e ultra-estruturais da organognese...

gua de coco suficiente para induzir a resposta in vitro. Considerando o fato


de o uso dessa soluo orgnica algumas vezes gerar controvrsias entre os
autores, devido presena de inmeros compostos que podem exercer
influncia sobre a resposta morfognica in vitro, foi realizada uma anlise
morfolgica comparativa utilizando explantes hipocotiledonares. Os
resultados confirmam que os segmentos de hipoctilo de P. edulis f.
flavicarpa, inoculados em meio MS, contendo 5% de gua de coco,
apresentam maior nmero de gemas e protuberncias. Contudo,
independentemente da adio de gua de coco, a organognese in vitro,
sob o ponto de vista estrutural, similar, ou seja, h formao de
protuberncias e gemas em ambas as condies de cultivo. Portanto, a
adio da gua de coco ao meio de cultura torna-se uma vantagem para
protocolos que visam transformao gentica, uma vez que o nmero de
gemas formado significativamente superior e morfologicamente similar
em ambos os tratamentos.
Informaes detalhadas sobre os dados apresentados neste captulo
podem ser obtidas em Fernando (2005).

Concluses
O maracuj-amarelo tem alta determinao para diferenciar estruturas
foliares nos cultivos in vitro. Portanto, na avaliao do nmero de brotos
regenerados, necessrio reconhecer a diferena morfolgica entre gemas
caulinares e estruturas foliares isoladas. Nestas, a base insere-se diretamente
no explante, enquanto nas gemas, os primrdios foliares saem de um eixo
comum.
Como a resposta nos cultivos in vitro varia de acordo com o gentipo,
os autores, ao estabelecerem protocolos de regenerao para o maracujamarelo, devem levar em conta e indicar o gentipo estudado.
Explantes foliares e hipocotiledonares do maracuj-amarelo, populao
FB-100 inoculados em meio MS suplementado com 1,0 mg L-1 de BA e 5% de
gua de coco (ou na ausncia de gua de coco) formam meristemides que

403

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

podem originar estruturas foliares,


protuberncias (mais freqentemente).

gemas

(excepcionalmente)

Tanto as protuberncias originadas de forma direta quanto as de forma


indireta apresentam camadas superficiais meristemticas que, posteriormente,
originam gemas.
Nos explantes foliares, somente a via organognica direta ocorre, sendo
que a falta de definio da camada epidrmica e das camadas
subepidrmicas das protuberncias formadas interfere na regenerao de
gemas.
Apenas nas clulas perifricas das protuberncias formadas no calo dos
explantes hipocotiledonares, h ocorrncia de fragmentao nuclear.
A superioridade do explante hipocotiledonar em relao ao foliar pode
explicar as diferenas na eficincia de transformao da populao FB-100
observadas em estudos prvios. Essas diferenas se devem ao mtodo usado
e tambm ao explante que recebeu o DNA exgeno. A despeito da diferena
do mtodo de transformao, o potencial de regenerao dos explantes
certamente interfere na porcentagem de plantas transgnicas obtidas,
ratificando a necessidade dos estudos histolgicos e ultra-estruturais em
auxlio aos grupos que estudam a transformao gentica de plantas.

Agradecimentos
Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de So Paulo pelo
auxlio financeiro para a realizao deste estudo. CAPES pela concesso
da bolsa de Doutorado Juliana Aparecida Fernando e ao CNPq pela bolsa
de Produtividade em Pesquisa s demais autoras. Ao Prof. Elliot W. Kitajima,
responsvel pelo laboratrio de Microscopia Eletrnica da ESALQ/USP, e ao
Centro de Microscopia do Instituto de Biocincias da UNESP/Botucatu
pelas facilidades nas anlises ultra-estruturais. A Sra. Marli K. M. Soares e
ao Sr. Carlos Alberto de Oliveira pelo apoio tcnico.

404

Estudos morfolgicos, anatmicos, histoqumicos e ultra-estruturais da organognese...

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407

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

408

De cuia nas mos do voraz curumim,


A nctar pitoresco no distante Japo.
Embelezei florestas com o azul e o carmim,
Sou a marca registrada do Brasil serto.
H at quem diga que eu sou sagrado
Patrimnio perptuo do povo cristo
E tenho o prprio nome assim modificado
Sem ser maracuj, viro a flor-da-paixo.
Geovane Alves de Andrade

Mtodos biotecnolgicos aplicados ao


melhoramento gentico do maracuj
Maria Lucia Carneiro Vieira
Eder Jorge de Oliveira
Frederico de Pina Matta
Juliano Gomes Pdua
Mariza Monteiro

Introduo
A Biotecnologia, no sentido mais amplo do conceito, tem sido aplicada
para melhorar espcies de plantas desde os primrdios da atividade agrcola
h 10.000 anos. Esta melhoria no se restringe produo, qualidade e
rusticidade das lavouras (em termos de resistncia s pestes), mas se estende
ao desenvolvimento de processos, sobretudo, de fermentao, tais como
aqueles envolvidos na panificao e na produo de bebidas alcolicas. A
moderna Biotecnologia, desenvolvida no final do sculo XX, incorpora vrias
tcnicas moleculares e se apresenta como tecnologia revolucionria,
ganhando crditos na comunidade cientfica, no setor produtivo e na mdia.
Neste captulo, pretende-se listar e discutir as abordagens da nova
biotecnologia que vm sendo usadas ou guardam potencial para assistir o
melhoramento gentico de espcies frutferas, em especial, cultura do
maracuj-amarelo (Passiflora edulis f. flavicarpa) e do maracuj-doce
(Passiflora alata).
Os objetivos do melhoramento gentico das espcies de Passiflora so,
nomeadamente, (i) maior produtividade e melhor qualidade dos frutos, (ii)
resistncia a doenas fngicas que afetam a copa ou o porta-enxerto, quando
usado, (iii) resistncia Xanthomonas axonopodis pv. passiflorae e ao Passion
fruit woodiness virus (PWV). A caracterizao da diversidade gentica presente
entre e dentro das espcies cultivadas e silvestres de Passiflora essencial

411

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

para se atingir tais objetivos e pode-se adiantar que todos esses aspectos
podem ser beneficiados pela incorporao de tecnologias moleculares. Para
facilitar o entendimento, este captulo ser apresentado em subttulos.

Micropropagao
Estudos sobre cultivo in vitro tm sido relatados por vrios autores e
foram revisados por Vieira & Carneiro (2004). A micropropagao, a partir de
meristemas preexistentes - brotos axilares ou segmentos nodais - tem sido
aplicada para propagao clonal (Drew, 1997), limpeza viral (Huang et al.,
1997) e como fonte de clulas e tecidos (Tabela 1). No que tange
conservao de germoplasma, os protocolos foram estabelecidos (Dornelas &
Vieira, 1994, Figura 1), mas a tecnologia no tem sido utilizada em bancos
oficiais, embora promissora para compor colees de acessos silvestres.
Os tecidos de Passiflora so bastante responsivos ao da citocinina
BA (6-benzylaminopurine) que induz a formao de meristemides e gemas
por organognese direta ou indireta (Appezzato-da-Gloria et al., 2005) em
concentraes <10 M. A formao de razes nos brotos individualizados
induzida
mediante
tratamento
com
auxinas,
como
o
NAA
(1-Napthaleneacetic acid) (Tabela 1) e, tambm, na ausncia de fitorreguladores
em meio com baixa concentrao de sais e compostos orgnicos.
Na Austrlia, outras prticas de micropropagao so adotadas: a
cultivar E23, um hbrido entre P. edulis e P. edulis f. flavicarpa, propagada por
microestaquia. Brotos apicais de plantas adultas so enxertados em seces
de caule e mantidos, no escuro, em MS basal (Murashige & Skoog, 1962)
suplementado com 150 M 2iP (N6-[2-Isopentenyl]adenine), 200 M de sulfato
de adenina e 17,1 M IAA (Indole-3-acetic acid), desenvolvendo-se em
plntulas em MS + 4,9 M 2iP e 5,7 M IAA. pices juvenis de E23 e as
espcies P. edulis f. flavicarpa, P. edulis, P. alata, P. caerulea, P. mollissima, P.
coccinea, P. herbertiana e P. suberosa crescem rapidamente em MS + 10 M de
cinetina (6-Furfurylaminopurine) + 5 M IAA. Rpida multiplicao foi
igualmente obtida em MS suplementado com 20 M BA, 10 M cinetina e 5 M
IAA enquanto o enraizamento se deu em MS + 5 M IAA (Drew, 1991).

412

Mtodos biotecnolgicos aplicados ao melhoramento gentico do maracuj

Dornelas & Vieira (1994) relataram a proliferao de brotos a partir de


pices caulinares (5 cm) desinfetados em soluo de NaOCl (1% a 2%) de P.
edulis f. flavicarpa, P. mollissima, P. giberti, P. maliformis e de P. amethystina em
MS livre de fitorreguladores. Passiflora mollissima, que nativa da regio
andina, mostrou-se bem adaptada in vitro, com o maior nmero de folhas
expandidas. A formao de razes se deu nas mesmas condies(26 2C,
16 h sob 23 m m-2 s-1 de radiao luminosa), aos 28 dias, quando se procedeu
a transferncia para a casa de vegetao. Essa prtica pode ser usada para a
conservao de colees de germoplasma, procedendo-se subcultivos a
cada 45 dias ou sob temperatura mais baixa (16C) e dois subcultivos anuais. A
formao de mltiplos brotos tambm foi relatada para P. edulis f. flavicarpa a
partir de pices excisados de plntulas axnicas e cultivados em MS + BA
(Faria & Segura, 1997a). Os benefcios dessa citocinina tambm foram
utilizados para estabelecer culturas de pices de Passiflora nitida, uma espcie
tpica da Amaznia cujas sementes tm taxas de germinao muito baixas
(Passos, 1999).
A microenxertia uma prtica que tem sido usada para a eliminao de
viroses de cultivares asiticas de maracujs (Huang et al., 1997). Em certas
regies do Brasil, entretanto, onde a incidncia de PWV generalizada, a
limpeza clonal ter efeito passageiro.

Figura 1. Exemplares de passifloras silvestres


conservados em MS, na ausncia de fitorreguladores.

413

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Tabela 1. Estudos sobre cultura in vitro de Passiflora, divulgados em peridicos


cientficos de 1990 a 2004, de acordo com a espcie, fonte de explante, tipo e
concentrao (em M) do fitorregulador usado para induzir a regenerao em meio
MS (Murashige e Skoog, 1962)*.
Espcie

Fonte de
explante

Tipo e concentrao de
fitorregulador

Referncia

P. edulis f. flavicarpa

Disco foliar

P.
P.
P.
P.

Disco foliar
pices
caulinares
pices
caulinares
Entren
Disco foliar
Cotildone

0,0; 2,2; 4,4; 6,6 BA ou 0,0;


1,1; 2,2; 3,4 Thidiazuron
4,44 BA + 2,32 cinetina
22,2 BA
22,2 BA + 11,6 GA3
Inibidores (STS e AVG) da
ao do etileno
4,4-17,7 BA
0,0-5,3 BA
10,0 BA + 10% gua de
coco; transferncia para
10,0 NAA
0,0; 2,2 ou 4,4 BA

Trevisan e Mendes
(2005)
Becerra et al., (2004)
Isutsa (2004)

edulis f. flavicarpa
edulis var. edulis
edulis var. flavicarpa
edulis f. flavicarpa

P. edulis f. flavicarpa
P. edulis f. flavicarpa
P. edulis x P. edulis
flavicarpa
P. suberosa

Disco foliar

P. edulis f. flavicarpa

Segmento
nodal
Folha

P. caerulea
P.
P.
P.
P.

mollissima
edulis flavicarpa
giberti
edulis f. flavicarpa

P. edulis f. flavicarpa
P. foetida
P. edulis f. flavicarpa
P. edulis flavicarpa
P. mollissima
P. giberti
P. maliformis
P. amethystina
P. edulis x P. edulis
flavicarpa
P. edulis

Segmento
nodal
Hipoctilo
Folha
pices
caulinares
Endosperma
triplide
Primrdios de
brotos
Cotildone
Hipoctilo
Folha

pices
adultos e
juvenis
Segmento
nodal

MS ou MSM + 13,3 BA
10,0 BA + 0,1 IAA
Vrias concentraes e
combinaes de BA e
cinetina
5,0 BA + 2 IAA
2,0 a 20,0 BA + 2,0 IAA
8,8 BA
1,0 BA + 1 IBA;
transferncia para 10,0 BA
8,88 BA + 10% gua
de coco

Biasi et al. (2000)


Otahola (2000)
Hall et al., (2000)

Monteiro et al.
(2000a)
Monteiro et al.
(2000b)
Jasrai e Mudgil
(1999)
Cancino et al.
(1998)
Faria e Segura
(1997a)
Faria e Segura
(1997b)
Mohamed et al.
(1996)
Kawata et al., (1995)
Dornelas e Vieira
(1994)

10,0 cinetina + 5,0 IAA

Drew (1991)

8,8 BA

Kantharajah e Dodd
(1990)

*Fonte: Vieira & Carneiro (2004), modificada.

414

Reis et al. (2003)

Mtodos biotecnolgicos aplicados ao melhoramento gentico do maracuj

Gerao de variabilidade gentica


Via hibridao sexual
As estratgias aplicadas para expandir a variabilidade gentica a partir
da explorao do germoplasma silvestre so: a hibridao sexual
(interespecfica), a hibridao somtica e a engenharia gentica, por meio da
tecnologia do DNA recombinante e dos mtodos de transformao de
plantas.
A hibridao interespecfica tem sido extensivamente utilizada, mas seu
sucesso depende do relacionamento filogentico entre as espcies envolvidas
no cruzamento. Essa afinidade vai determinar a fertilidade dos hbridos F1 e,
conseqentemente, seu potencial para utilizao em programas de
melhoramento. Sucessivas geraes de retrocruzamento com o genitor
cultivado so conduzidas com a finalidade de introduzir o(s) gene(s) do
genitor silvestre e recuperar o desempenho da espcie comercial. Entretanto,
esse mtodo limitado a certas espcies por barreiras de incompatibilidade:
os cruzamentos so incompatveis ou ocorre a formao do zigoto, porm ele
abortivo. Uma alternativa usada para contornar esse problema implica na
exciso do embrio imaturo e o seu posterior desenvolvimento in vitro. Esse
resgate tem facilitado, por exemplo, a incorporao de genes exticos na
cultura da batata e do tomate.
A sntese de hbridos F1 entre Passiflora edulis flavicarpa e espcies
silvestres uma estratgia importante e deve ser adotada para promover a
introgresso de genes. No entanto, representa apenas o primeiro passo, pois
o pareamento entre cromossomos homelogos essencial para a fertilidade
do F1 e, no menos importante para propiciar a recombinao gnica via
crossing over. H relatos em trigo, por exemplo, cujo pareamento entre
homelogos pode ser suprimido pela ao de genes especficos (Jauhar &
Chibbar, 1999). Tambm, as sucessivas geraes de cruzamento com o
genitor recorrente devem ser acompanhadas por estudos meiticos e
moleculares. Estes, por sua vez, prestam-se para identificar alelos especficos

415

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

de cada genitor e, por conseguinte, o nmero de geraes para a


recuperao do genoma recorrente poder ser abreviado. Cabe lembrar que o
nmero de plantas a ser analisado a cada gerao deve ser grande o suficiente
para contemplar todas as combinaes allicas favorveis, possibilitando ao
melhorista, a oportunidade de escolha.

Via hibridao somtica


As duas outras estratgias anteriormente mencionadas (transgenia e
fuso celular) incluem procedimentos biotecnolgicos. Os avanos na
pesquisa sobre cultura de tecidos vegetais, especialmente sobre a
regenerao de brotos a partir de protoplastos (clulas isoladas, desprovidas
de parede celular), possibilitaram a gerao de hbridos por fuso somtica
(Figura 2), inclusive, de Passiflora (Dornelas et al., 1995; Otoni et al., 1995;
Vieira & Dornelas, 1996).
Contudo, esse um procedimento laborioso, e os ganhos em termos
de introgresso se restringem a poucos exemplos, como ocorre em Solanum.
O desenvolvimento da fuso assimtrica de protoplastos (o ncleo da espcie
silvestre fragmentado antes da fuso) representa certo avano no uso da
tecnologia de fuso para fins de introgresso.
A hibridao somtica oferece tambm a oportunidade de se combinar
dois citoplasmas, o que no ocorre na hibridao sexual, pois o citoplasma
materno preferencialmente herdado. Associada a essa vantagem, cabe
advertir que os produtos de fuso so poliplides artificiais e por isso, em
geral, apresentam bom crescimento vegetativo se prestando como portaenxertos. No caso de Passiflora, esta seria, atualmente, a nica justificativa
para a produo desses hbridos, visando ao convvio dos pomares
enxertados com doenas de solo.
A avaliao da compatibilidade dos hbridos de fuso de protoplastos
com o acesso comercial usado como copa, bem como a sua produo, vai
delinear seu real potencial de aproveitamento como porta- enxertos. Tambm,
por razes de natureza citolgica, os hbridos somticos tendem a produzir

416

Mtodos biotecnolgicos aplicados ao melhoramento gentico do maracuj

plen, mas no frutos, mesmo quando submetidos a cruzamentos artificiais, o


que impossibilita sua multiplicao via semente. Como a pesquisa para sua
produo no de custo alto, os hbridos somticos de Passiflora podero ser
usados desde que sejam de fcil propagao, via estaquia, compatveis com
o enxerto, alm de se mostrarem resistentes a doenas de solo.

Figura 2. Enxertia de P. edulis flavicarpa acesso FB-100 no hbrido somtico


Passiflora edulis flavicarpa + Passiflora cincinnata.

A instabilidade cromossmica que peculiar aos poliplides artificiais,


inclusive, aos hbridos somticos de Passiflora (Barbosa & Vieira, 1997; Cuco
et al., 2005) restringe a sua utilizao prtica. Some-se a isto o vasto campo de
estudos que se abriu pelo desenvolvimento das tcnicas de transformao.
Em que pese a restrio ao uso da agricultura transgnica em Passiflora devido
(i) a alogamia das espcies cultivadas, (ii) ao Brasil ser o centro de diversidade
gentica do gnero e (iii) a outras consideraes relativas biossegurana,
mormente por se tratar de uma fruteira, a pesquisa na rea deve fornecer
solues para a cultura do maracuj, principalmente, no que tange
resistncia a vrus. Caber comunidade interessada decidir sobre a sua
liberao ou no.

417

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Via transformao de plantas


Desde que a primeira planta transgnica foi liberada, em 1996, para
consumo humano o tomate Flavr Savr, modificado para reduzir seus nveis de
poligalacturonase e, por isso, resistir mais ao tempo nas prateleiras
registra-se massiva expanso de culturas transgnicas no campo (Dunwell,
2000, James, 2004).
A agricultura transgnica teve como alvo imediato o produtor agrcola. Os
caracteres mais freqentemente incorporados tm sido aqueles que reduzem o
custo da produo de uma cultivar, como a resistncia a herbicidas e a pragas. O
exemplo mais divulgado (e comercializado em vrios pases) a soja transgnica
que expressa o gene de resistncia ao glifosato, princpio ativo do herbicida
Roundup, produzida pela empresa Monsanto (Quecini & Vieira, 2001).
Quanto resistncia a pragas, os transgenes foram isolados de Bacillus
thuringiensis (Bt) e codificam endotoxinas (Frutos et al., 1999). Existem
variedades comerciais resistentes a insetos, produzidas pela insero de
genes Bt no seu genoma, entre elas, o tomate (Fischoff et al., 1987), algodo
(Perlak et al., 1990), tabaco (Willians et al., 1993), milho (Koziel et al., 1993) e
canola (Stewart et al., 1996). Genes codificadores de peptdeos que atuam
como inibidores de proteinases (IPs) tambm tm sido usados para induzir
resistncia a lagartas em plantas transgnicas (Silva-Filho & Falco, 2001).
A rea global cultivada com plantas transgnicas em 2005 foi de 81,0
milhes de hectares, sendo os principais pases produtores: os Estados
Unidos, com 47,6 milhes de hectares; a Argentina, com 16,2 o Canad, com
5,4; o Brasil, com 5,0; a China, com 3,7; o Paraguai, com 1,2 milho de
hectare, alm da ndia e da frica do Sul, cada um com 0,5 milho de hectare
de transgnicos (http://www.isaaa.org).
H vrios estudos sobre transformao gentica em espcies frutferas,
por exemplo, Malus pumila (James et al., 1989; Lambert & Tepfer, 1992); Vitis
vinifera e V. rupestris (Mullins et al., 1990); Actinidia deliciosa (Rugini et al.,
1991); Prunus persica (Smigocki & Hammerschlag, 1991), P. domestica (Mante
et al., 1991) e P. armeniaca (Machado et al., 1992); Citrus auratifolia (Moore et

418

Mtodos biotecnolgicos aplicados ao melhoramento gentico do maracuj

al., 1992; Prez-Molphe-Balch & Ochoa-Alejo, 1998), C. sinensis (Pea et al.,


1995a, 1995b) e C. sinensis cv. Halmlin (Boscariol, 2004); Poncirus trifoliata
(Kaneyoshi et al., 1994); Diospyrus kaki (Nakamura et al., 1998); Persea
americana (Cruz-Hernndez et al., 1998) e Passiflora edulis (Manders et al.,
1994; Silva, 1998; Hall et al., 2000; Takahashi, 2002; Alfenas et al., 2005; Castro,
2005; Monteiro, 2005; Trevisan, 2005).
No caso especfico de maracujs e de vrias outras fruteiras, a
transgenia se aplica, mormente, para a produo de plantas resistentes a
patgenos. Para resistncia a vrus, so utilizados genes que expressam
protenas virais, sendo os mais usados os genes da capa protica. A presena
dessas protenas na clula hospedeira interrompe a transcrio, replicao ou
mesmo a disseminao do vrus (Silva-Filho & Falco, 2001). Em Passiflora, o
primeiro trabalho de transformao visando resistncia a vrus foi o de Braz
(1999) que introduziu, via Agrobacterium tumefaciens, uma seqncia que inibe
a traduo do RNA do vrus responsvel pela doena que causa o
endurecimento dos frutos. O autor isolou um fragmento do genoma do vrus
contendo a regio 3 do gene da replicase e a regio 5 da protena capsidial
e inseriu no vetor de clonagem. Apesar de no ter observado amplificao do
gene de interesse nas plantas regeneradas, os genes uidA e o nptII foram
detectados por reao em cadeia da polimerase (PCR). Recentemente, o
mesmo grupo publicou a obteno de uma planta resistente ao vrus, aqui
reconhecido como Cowpea aphid-borne mosaic virus (Alfenas et al., 2005).
Com esse mesmo objetivo, Trevisan (2005) introduziu o gene completo
da protena capsidial, tambm via A. tumefaciens, em maracuj-amarelo.
Neste trabalho, o autor transformou discos foliares excisados de plntulas das
cultivares IAC-275 e IAC-277, as quais regeneraram 119 e 109 plantas
respectivamente. A integrao do transgene foi confirmada em 7 das 8 plantas
analisadas pela tcnica de Southern blot, com diferentes nmeros de cpias do
transgene. Dessas, trs plantas expressaram o RNA viral e uma delas foi imune
ao PWV depois de sucessivas inoculaes.
Outras abordagens que podem ser usadas para a obteno de plantas
tolerantes a vrus so: (i) pela expresso da replicase viral (Hellwald et al.,

419

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

1995), (ii) pela expresso de protenas envolvidas no movimento do vrus na


planta (Lapidot et al., 1993), (iii) uso de RNA anti-senso (antisense RNA), que
complementar a uma das fitas do genoma viral (Bejarano & Lichtenstein,
1994), (iv) uso de RNA satlite, que tem a propriedade de reduzir a replicao
do vrus e atenuar o sintoma (McGarvey & Kaper, 1993) e (v) uso de RNA
defectivo interferente, estratgia freqentemente associada diminuio dos
sintomas da doena (Stenger, 1994).
A explorao das defesas naturais das plantas tambm pode ser
aplicada e baseia-se na (a) produo de elicitores (Wegener et al., 1996), (b)
introduo de genes de origem vegetal, semelhante ao em arroz pela insero
do gene Xa21 para obter resistncia Xanthomonas oryza pv. oryza (Wang et al.,
1996) ou (c) superexpresso de genes de defesa pela produo de
fitoalexinas, como as tioninas (Carmona et al., 1993).
Quanto gerao de plantas transgnicas resistentes a doenas
bacterianas, as estratgias aplicadas envolvem, mormente, a introduo de
genes que codificam protenas bactericidas. Os peptdeos antimicrobianos
(AMPs) so de ocorrncia generalizada nos organismos multicelulares, sendo
responsveis pelas respostas imunes ou de defesa. Como dito, em plantas, os
peptdeos lticos, isolados de insetos, como as cecropinas e anlogos, as
lisozimas e as atacinas tm sido usados para induzir resistncia a patgenos.
Particularmente, as atacinas tm ao contra bactrias Gram-negativas,
interferindo na transcrio de genes omp que, por sua vez, esto envolvidos na
sntese de porinas, protenas constituintes dos poros da membrana
plasmtica. Isto resulta em um desarranjo na membrana externa bacteriana e
na drstica reduo no seu crescimento (Imler & Bulet, 2005).
Reynoird et al. (1999) transformaram plantas de pra com o gene da
atacina E (attE), isolado de Hyalophora cecropia, via A. tumefaciens, visando
controlar Erwinia amylovora. A expresso e a presena da protena foram
confirmadas por tcnicas moleculares, e a anlise de resistncia dos
transformantes foi conduzida in vitro, inoculando-se a estirpe do patgeno. Os
transformantes mostraram-se resistentes enquanto os no-transformantes
foram suscetveis.

420

Mtodos biotecnolgicos aplicados ao melhoramento gentico do maracuj

Em Passiflora edulis f. flavicarpa, o gene que codifica a atacina A (attA),


isolado de Trichoplusia ni (Kang et al., 1996), foi introduzido via biobalstica
(Takahashi, 2002; Castro, 2005) e A. tumefaciens (Monteiro, 2005) com o
objetivo de gerar plantas resistentes bacteriose causada por Xanthomonas
axonopodis pv. passiflorae. As plantas, oriundas da biobalstica, foram
analisadas quanto presena do gene exgeno via PCR e Southern blot,
resistncia ao herbicida Finale, usado como agente seletivo e resistncia
bacteriose e oito delas se mostraram resistentes doena (Tabela 2). As taxas
de transformao foram da ordem de 0,13%.
Tabela 2. Resposta de plantas transgnicas (T) e de suas matrizes (M) infeco por
X. axonopodis pv. passiflorae, avaliada aps 18 dias. Dados (em %) da rea foliar
lesionada.
Cdigo1

rea de leso T2

rea de leso2 M

M/T

3,68

10,60

2,88

11

7,00

22,04

3,15

16

8,85

17,14

1,94

18

2,17

32,86

15,14

20

11,11

19,68

1,77

32

14,33

25,13

1,75

33

1,89

36,44

19,28

43

5,97

25,94

4,34

1
Cdigos designados pelo autor; 2 Mdia de quatro repeties.
Fonte: Castro, 2005;

Plantas de Citrus, tambm, foram transformadas com o gene attA via


A. tumefaciens para induzir resistncia bacteriose causada por X. axonopodis
pv. citri (Boscariol, 2004). Posteriormente, as plantas transgnicas (Southern+)
foram infectadas com a bactria. Os resultados mostraram que a expresso do
peptdeo antimicrobiano proveu tolerncia bactria, em um perodo de
incubao maior e leses com dimetros menores do que aquelas das
plantas-controle.
A eficincia das plantas transgnicas em manifestar resistncia a um
patgeno depende do nvel de expresso (Florack et al., 1995), da
estabilidade e da localizao do peptdeo heterlogo na clula hospedeira

421

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

(Dring, 1996). Segundo Silva-Filho (2003), a localizao especfica das


protenas dentro da clula condio essencial para seu funcionamento,
assim como o direcionamento dos peptdeos um processo bem controlado
e eficiente. Grande parte das protenas endgenas relacionadas defesa, alm
das fitoalexinas e ligninas, est localizada no espao intercelular (apoplasto)
onde a bactria fitopatognica se multiplica antes de penetrar na clula
vegetal (Bogs et al., 1998). Duas seqncias de direcionamento relacionadas
ao processo de secreo foram identificadas: os peptdeos sinais (PS), que
so aqueles clivados a partir de uma cadeia nascente e as ncoras sinais (AS),
que no so clivadas, liberando as protenas na membrana do retculo
endoplasmtico. As atacinas nativas encontram-se na hemolinfa dos insetos e
possuem um peptdeo sinal que as direciona para uma via secretria. Monteiro
(2005) confirmou que a atacina A direcionada para o meio extracelular em
clulas vegetais. Para isto, o gene attA foi fusionado aos genes reprteres gfp
e uidA cuja expresso facilmente visualizada, e clulas do bulbo da cebola
foram transformadas com essa construo gentica. A expresso de ambos os
genes reprteres foi detectada no aploplasto, indicando que o produto da
fuso foi secretado. Isso explicaria a menor rea de leso observada nas
plantas transgnicas de maracuj transformadas com o gene attA,
comparativamente quela presente nas plantas matrizes (Tabela 2).

Melhoramento molecular: a construo de mapas


genticos e suas aplicaes
Os marcadores moleculares ou de DNA tm contribudo substancialmente
para dar suporte aos estudos de gentica de populaes de diversas espcies e
tendem, pouco a pouco, a ser usados para assistir os procedimentos de seleo
e melhoramento. Por intermdio deles, possvel analisar a variabilidade
gentica, identificar gentipos ou genes especficos e detectar possveis
associaes entre os marcadores e caractersticas fenotpicas.
Considerando os caracteres qualitativos, a simples ligao entre a
marca e a caracterstica j permite ao melhorista proceder seleo com
base no marcador, sem instalar ensaios no campo e esperar o trmino do

422

Mtodos biotecnolgicos aplicados ao melhoramento gentico do maracuj

ciclo produtivo para sua confirmao. Esse o fundamento da estratgia


denominada por seleo assistida por marcadores moleculares (SAM), desde
que essa ligao seja forte. A estratgia deve ser adotada, sobretudo, nos
casos em que a caracterstica de interesse de avaliao difcil e em espcies
perenes de ciclo longo, possibilitando a reduo no tempo e no custo do
programa de melhoramento.
Levando-se em considerao os caracteres quantitativos, ou seja,
aqueles controlados por grande nmero de genes que, em geral, mostram
baixa herdabilidade, o uso de marcadores moleculares para assistir a seleo
no imediato. H necessidade de se mapear os locos (via construo de
mapas genticos ou no) e da estimar o efeito desses locos responsveis
pela expresso do fentipo quantitativo (QTL) na populao em estudo. Mais
importante ao melhorista perceber que a associao detectada prpria
do cruzamento sob avaliao e que a vantagem da SAM em relao seleo
fenotpica vai depender da herdabilidade do carter. Ressalte-se que outros
alelos de efeito igual ou at maior provavelmente existam podendo se
manifestar (ou no) em outros ambientes.
A construo de mapas de ligao, com base em marcadores
genticos, advm da teoria proposta por Sturtevant, em 1913, a qual faz uso
da freqncia de recombinantes como medida da distncia entre dois genes.
Assim, as bases tericas da construo de mapas genticos foram
estabelecidas na primeira metade do sculo passado, porm, com o advento
das tcnicas de DNA, novos delineamentos genticos e um maior nmero de
marcas e de indivduos passaram a ser usados exigindo novas ferramentas
estatsticas para a construo de mapas.
Entre as principais aplicaes dos mapas genticos podem-se
destacar: (a) o mapeamento de genes que controlam caractersticas
agronmicas, tanto de herana qualitativa como quantitativa, sendo esse
atributo a base para a SAM (Tanksley, 1993; Liu, 1998); (b) o mapeamento
comparativo (Ahn & Tanksley, 1993; Jones et al., 2002); (c) a clonagem
posicional de genes (positional cloning), que permite a clonagem sem a
necessidade de se conhecer a priori o gene e seus produtos, mas apenas sua

423

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

posio no genoma (Collins, 1992; Martin et al., 1993); (d) a atribuio de


marcas aos cromossomos da espcie por diferentes estratgias, como FISH
(Fluorescent In Situ Hybridization); (e) a integrao com mapas fsicos, isto ,
mapas derivados das tcnicas de seqenciamento.
A construo de um mapa gentico exige a gerao de uma populao
segregante e sua anlise com algum tipo de marcador gentico, a separao das
marcas em grupos de ligao, a determinao da ordem dos locos dentro dos
grupos e as estimativas das distncias entre as marcas (Staub et al., 1996).
H mapas genticos desenvolvidos para vrias espcies frutferas, entre
elas: abacaxi (Carlier et al., 2004), cacau (Risterucci et al., 2000), kiwi (Testolin
et al., 2001), ma (Kenis & Keulemans, 2005), mamo (Ma et al., 2004), pra
(Oliveira et al., 2004) e uva (Doucleff et al., 2004; Riaz et al., 2004).
Para a cultura do maracujazeiro, j foram desenvolvidos quatro
trabalhos visando construo de mapas genticos. O primeiro deles foi
elaborado por Carneiro et al., (2002), utilizando marcadores do tipo RAPD
(Random Amplified Polymorphic DNA). Neste trabalho, foi possvel revelar,
claramente, o potencial das tcnicas de mapeamento para o melhoramento
da cultura do maracuj-amarelo. Assim, um segundo mapa foi desenvolvido
por Lopes (2003), com base em marcadores AFLP (Amplified Fragment
Length Polymorphism) (Figura 3). No estudo de Lopes (2003), foi identificado
o primeiro loco quantitativo no genoma de Passiflora associado resposta da
populao infeco por X. axonopodis pv. passiflorae.
O terceiro mapa de ligao foi obtido por Matta (2005) em
complemento ao estudo anterior, porm, adicionando marcadores de
segregao 3:1 e incluindo outras estratgias de anlise estatstica,
possibilitando, assim, a integrao dos mapas dos dois genitores usados no
cruzamento. Um exemplo desse procedimento ilustrado na Figura 4. De
forma similar, Moraes (2005) utilizou ambos os tipos de marcadores (1:1 e 3:1)
para estabelecer um mapa de referncia de AFLP para P. edulis f. flavicarpa.
Esse autor realizou um trabalho indito e respeitvel, pois mapeou vrios QTL
associados produo e qualidade de frutos de maracuj. Parmetros
gentico-estatsticos foram avaliados na populao de mapeamento que
mostra potencial para seleo via seleo recorrente (Moraes et al., 2005).

424

Mtodos biotecnolgicos aplicados ao melhoramento gentico do maracuj

GRUPO 1
4.6
6.9
6.7
2.9

EM10121a
EM16354r
EM2193r
EM21243a
EM02110a

EM011623a_26.2
EM091573a_3.1
EM24324r_4.8
EM161588r_4.3
EM19226r_3.1
EM02256r_3.5
EM13405a_3.1

30.6

GRUPO 2
10.5
3.6
3.7
6.2
16.0

PM02179r

8.4
10.1
5.8

EM18363a

3.6
3.5
11.8
8.4

EM03174r

PM09188a

10.6

EM19154a
EM16575r
EM0774a
EM07236a
EM02337a

PM02262a_48.5

EM24378a_3.7
EM03288a_3.4
EM06175r_1.8
EM24180a_1.8
EM22123a_1.8
EM15234a_1.4

PM041708a

21.1
11.9
EM01290a

44.6

27.3

EM06119r_3.0

29.1

33.1

4.4
5.0
5.0

EM11321a
EM15237r

EM04647r
EM01395a

6.4
2.6
2.7

GRUPO 3

EM12182a
EM08348a

EM2161r
EM20201a
EM08114r
EM05232a
EM14405a
EM1478a
EM24605r

EM18489r_2.1
EM18506r_1.4
EM09121r_1.5
EM21179a_1.4
EM22265r_1.6
EM13226r_1.3
EM13275r_1.3
EM23198r_2.2
EM20107r_1.6

EM1387r
EM0463r

PM09144r_33.0

EM11278a_2.6
EM17360r_2.8
EM20172a_1.6

4.4

EM08581r
EM18305r

21.2

29.9

PM10161r
EM01236a

46.0

EM21161a

EM161447r_0.0
EM0799a_24.0

EM1892r_11.7

EM17104r
25.4
PM0 4531r

EM03424r_13.9

GRUPO 4
EM01234a
4.6
13.2
9.8
3.6
3.5
1.8

EM16512r
EM09177a
EM20326a
EM23317a
PM06237r
EM22307r

28.4

GRUPO 5
EM131388a_7.3
EM13100a_2.4
EM22151r_2.9

5.6

21.1
5.8
12.4

EM24264a

3.9
8.4

EM22394a

20.9

14.7

EM02369a
EM09155a
EM20135r

EM18116a
19.7

EM2484a
39.2

PM10186r
18.6
EM07189a

PM01332a

GRUPO 6

EM01161a

13.9

PM02134r_7.9
EM04171r_8.1

PM06161r

PM08161r_0.0

EM16188r
14.8
EM07328r

EM01130r
EM081066r

GRUPO 7
5.6
11.5
5.8
8.0

EM19112a
EM06717a
EM18124r

GRUPO 8
2.7
10.7

GRUPO 9

EM021560a

5.5

EM17224a

PM06337a

6.4

PM03242a
EM16397r

EM23215a

EM22110r
EM22560a

Figura 3. Mapa gentico do acesso IAPAR-06 de Passiflora edulis flavicarpa (2n=18)


com marcadores AFLP alocados em nove grupos de ligao.

425

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

0,0

PM10267_{-0}

8,8

EM 062644_{01}

GRUPO 6 IAPAR-06

GRUPO 8 IAPAR-123
EM04114a

PM10267a_7,9

1,7

EM09146a

EM24217a_0,0
EM22433a_0,0

3,7

EM06684a

EM17240a_2,9

9,4

EM10236a

12,0

EM06684_{-0}

23,6
25,1
26,0
26,4
26,7
27,3

EM02369_{0-}
EM22433_{-0}
EM10233_{00}
EM10236_{-0}
EM17240_{-0}

27,7
28,4
30,7
33,7
35 ,7

EM24217_{0}
EM09155_{0-}
EM09146_{-0}
EM22272_{10}
EM20135_{1-}
EM04114_{-0}

45,0

EM19162_{00}

47,8

EM2484_{0-}

91,8

PM06161_{1-}

91,9

PM08161_{1-}

3,9
8,4
14,7

EM02369a
EM09155a
EM20135r
EM2484a

39,2
PM06161r

PM08161r_0,0

Marcadores 3:1

Distncia em cM (Haldane, 1919)

Figura 4. Integrao dos mapas genticos dos acessos IAPAR-123 (Grupo 8) e


IAPAR-06 (Grupo 6) de Passiflora edulis flavicarpa.
Fonte: Matta, 2005.

A populao de mapeamento utilizada nesses quatro trabalhos foi


obtida do cruzamento entre duas plantas pertencentes ao Lote de Introduo e
Seleo de Materiais do Instituto Agronmico do Paran (IAPAR), Londrina, PR.
O acesso IAPAR-123 foi usado como genitor feminino e apresenta boas
caractersticas agronmicas, alm de ser resistente a certos isolados de
Xanthomonas axonopodis pv. passiflorae. O IAPAR-06, que uma introduo
de Marrocos, foi usado como genitor masculino, mostra-se inferior ao acesso
IAPAR-123 e tido como suscetvel molstia.

426

Mtodos biotecnolgicos aplicados ao melhoramento gentico do maracuj

No caso do maracujazeiro, a auto-incompatibilidade dificulta a


obteno de linhas puras e leva a elevada depresso causada pela
endogamia. Sendo assim, os delineamentos genticos recomendados para a
construo de mapas (populaes F2 ou de retrocruzamento, ou NILs e RILs)
no podem ser usados, devendo-se lanar mo de outra estratgia. Uma
alternativa para essa situao, usada em Eucalyptus (Grattapaglia & Sederoff,
1994), a two-way pseudo-testcross. Nessa estratgia, a fase de ligao no
conhecida a priori, mas sim inferida a posteriori, pela anlise da segregao
das marcas em uma populao F1. Feita a genotipagem de vrias dezenas de
indivduos F1 para marcadores que segreguem 1:1, dois conjuntos de marcas
so gerados, sendo um para cada genitor do cruzamento, resultando em dois
mapas de ligao, indivduos-especficos (Ferreira & Grattapaglia, 1996).
Os marcadores j alocados nos mapas de maracuj-amarelo (RAPD e
AFLP) so do tipo dominante, pois apenas um alelo detectado no gel
(presena da banda) e todos os demais so tidos como nulos (ausncia da
banda). Os polimorfismos, portanto, so decorrentes de duas situaes: (1) o
loco heterozigtico para a marca em um dos pais e nulo no outro,
segregando na proporo 1:1 para a presena e ausncia da banda,
respectivamente ou (2) o loco heterozigtico em ambos os genitores,
segregando 3:1 (presena: ausncia da banda). Quando se usam os
polimorfismos com segregao 1:1, dois mapas so gerados, um para cada
genitor.
A anlise de ligao realizada por Lopes et al. (2006) abrigou 250
marcadores AFLP do tipo 1:1, sendo que 112 e 138 marcas foram alocadas
em nove grupos de ligao do genitor IAPAR-06 e IAPAR-123
respectivamente. Como dito, um QTL responsvel pelo controle de 15,8% da
variao fenotpica apresentada pela prognie em resposta inoculao com
um isolado de X. axonopodis pv. passiflorae foi descrito.
Embora o fato de se gerar mapas individuais (por genitor) no
impossibilite o mapeamento de QTL, o melhor proceder ao mapeamento
de locos quantitativos com base em um nico mapa, usando uma abordagem
biomtrica que possa integrar todos os marcadores, inclusive, aqueles

427

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

comuns a ambos os genitores. Na verdade, o mapa do cruzamento e deve


representar todos os gentipos da populao segregante (Maliepaard et al.,
1998). No trabalho realizado por Matta (2005), foram utilizadas 114 (30,9%)
marcas informativas no genitor IAPAR-06, 139 (37,7%) marcas informativas no
genitor IAPAR-123 e 116 (31,4%) marcas biparentais que mostraram
segregao 3:1. Todos os grupos de ligao foram integrados, ou seja, os
homlogos de cada genitor formaram um s grupo. Quanto ao mapeamento
de QTL, os resultados obtidos corroboraram os de Lopes (2003),
contribuindo para o entendimento do controle gentico da resistncia
bactria.

Genmica
Genmica o estudo da estrutura, funo e evoluo de genomas
completos e de seqncias expressas (genes) usando tecnologias de alto
desempenho para anlise de cidos nuclicos tais como seqenciamento,
mapeamento gentico e fsico e expresso gnica diferencial (Mir, 2004). Nos
ltimos anos, com o avano das plataformas de seqenciamento, o
conhecimento dos genomas de diversos organismos tornou-se uma realidade,
gerando imensa quantidade de dados que tem sido utilizada para o
entendimento da organizao e do funcionamento dos genomas.
O uso de ferramentas computacionais tornou-se imprescindvel para o
avano dos projetos genoma, criando uma nova rea do conhecimento, a
bioinformtica. Tal ferramenta usada para armazenar, disponibilizar e analisar
dados genmicos. A bioinformtica tambm permite a comparao das
seqncias disponveis nos bancos de dados, dando suporte genmica
comparativa. Novas seqncias so depositadas a todo o minuto,
literalmente, assim como mtodos para a sua anlise tm sido propostos,
permitindo a formulao de novas teorias e o avano do conhecimento sobre
genmica.
Do ponto de vista aplicado, as informaes depositadas nos bancos
(databank) permitem especular sobre qual a poro funcional dos genomas,

428

Mtodos biotecnolgicos aplicados ao melhoramento gentico do maracuj

gerar mapas fsicos, identificar genes envolvidos na expresso de


caractersticas importantes e desenvolver mtodos e tecnologias visando a
sua utilizao no melhoramento de plantas e animais.
Haver um momento na histria da cincia que vrias espcies
cultivadas tero seus genomas, ou parte deles, seqenciados. Contudo,
atualmente, os projetos de seqenciamento de genomas completos
restringem-se s espcies-modelo como Arabidopsis thaliana e quelas de
grande importncia econmica, como o arroz. Para outras espcies, entre elas
milho, soja, trigo, alfafa, Populus, h grande volume de informaes sobre
seqenciamento, completo ou parcial, de cromossomos especficos e
grandes bibliotecas de seqncias expressas j esto disponveis.
A construo de bibliotecas de seqncias expressas (EST), a
clonagem de regies cromossmicas em BAC, isto , em cromossomos
artificiais de bactrias e a manuteno de microarranjos de DNA so
tecnologias importantes que tm sido adotadas na genmica vegetal. de
fundamental importncia que as descobertas derivadas dos projetos genoma
sejam integradas aos esforos despendidos para o melhoramento. O
desenvolvimento de marcadores moleculares, por exemplo, constitui uma das
aplicaes da genmica em curtssimo prazo, contribuindo para a anlise da
variao gentica entre indivduos e espcies, para estudos sobre a arquitetura
gentica de caracteres complexos e para os trabalhos de gentica de
populaes e evoluo molecular.
Os principais tipos de marcadores moleculares desenvolvidos pelas
estratgias de seqenciamento so os microssatlites, conhecidos como
Simple Sequence Repeats, e os polimorfismos de um nico nucleotdeo ou
SNPs (do ingls, Single Nucleotide Polymorphisms). Tais marcadores so
bastante abundantes em plantas, permitindo a construo de mapas
genticos de alta preciso; tambm, se prestam como ferramentas para
mapear e seqenciar genes, investigar famlias de genes, identificar elementos
transponveis e rearranjos do genoma.
No caso de Passiflora, trabalhos de seqenciamento so restritos s
regies ITS (Internal Trancribed Spacer) dos genes ribossomais e espaadores

429

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

dos genes plastidiais trnL-trnF e psbA-trnH (Muschner et al., 2003; LorenzLemke et al., 2005; Pdua et al., 2005) que tm sido usados em estudos de
filogenia molecular. Recentemente, no Departamento de Gentica da Esalq/
Usp bibliotecas genmicas enriquecidas com microssatlites foram
construdas e seqenciadas, constituindo pequeno banco de dados de
P. edulis flavicarpa, P. alata e P. pohlii.
A construo de bibliotecas genmicas enriquecidas envolve a
fragmentao do DNA em pequenos segmentos que so ligados a
adaptadores especficos para promover o aumento do nmero de seqncias
via PCR. Em seguida, feita uma hibridizao seletiva para as seqncias de
interesse, com o uso de uma sonda 5 biotinilada que tem afinidade pela
estreptavidina, por sua vez, ligada a contas magnticas (Kijas et al., 1994).
Assim, o DNA hibridizado com as repeties do microssatlite pode ser
seletivamente removido. Depois da hibridizao e muitas etapas de lavagem
para remover o DNA no ligado, o DNA eludo e amplificado por PCR. Em
seguida, o DNA enriquecido clonado em um vetor adequado. Dependendo
da eficincia do procedimento, os clones podem ser seqenciados
diretamente ou sofrer um screening por Southern blot ou por PCR.
Os microssatlites possuem uma srie de vantagens em relao a outros
marcadores, pois so codominantes, multiallicos, altamente reprodutveis, alm
de ser derivados da PCR. Contudo, apresentam uma vantagem especial para a
cultura do maracuj, que prover alelos-ponte para a integrao de mapas
genticos construdos at ento, separadamente, para cada genitor do
cruzamento. Alm disso, a amplificao de locos de SSR a partir de diferentes
pedigrees deve facilitar a comparao dos dados de QTL j identificados em
maracuj-amarelo (Moraes, 2005; Lopes et al., 2006). Tambm, a busca de novos
alelos de QTL em populaes de maracuj-amarelo ou em espcies afins, deve
contribuir para assistir a introgresso de genes importantes.
Apesar das dificuldades, o desenvolvimento de microssatlites tem-se
tornado cada vez mais acessvel, principalmente, devido s novas estratgias
de enriquecimento de bibliotecas genmicas e a tecnologias rpidas de
seqenciamento automtico baseadas em fluorescncia (Rafalski et al., 1996).

430

Mtodos biotecnolgicos aplicados ao melhoramento gentico do maracuj

Em maracuj-amarelo, foram construdas duas bibliotecas genmicas


enriquecidas com repeties GT e CT gerando 947 seqncias, sendo 501
para o acesso IAPAR 06 e 446 para o IAPAR 123 (Oliveira et al., 2005b). Do
total de seqncias, 134 (14,15%) foram consideradas redundantes por
apresentarem similaridade de at 90% no nmero de bases. Tal redundncia
pode ser atribuda presena de clones duplicados durante as etapas de
enriquecimento, existncia de diferentes alelos, uma vez que os genitores
utilizados na construo da biblioteca so no endogmicos, e presena de
locos duplicados no genoma de Passiflora. Seqncias com mais de 90% de
similaridade foram consideradas redundantes, sendo que muitas delas
apresentar variaes na composio de nucleotdeos. A redundncia das
seqncias diminui a eficincia da biblioteca, exigindo a construo de novas
bibliotecas com nmero maior de seqncias para, conseqentemente, prover
um nmero maior de locos de microssatlites.
Nessa experincia pioneira de desenvolvimento de microssatlites em
maracuj-amarelo, foram encontradas 127 seqncias contendo microssatlites
no redundantes, indicando eficincia de enriquecimento de 13,41%. Para 20
dessas seqncias, no foi possvel promover o desenho de primers,
reduzindo esse valor para 11,30%.
De acordo com Weber (1990), os microssatlites podem ser
classificados em: (i) perfeitos, quando a seqncia repetida no interrompida
por qualquer base atpica, por exemplo, TATATATATATATATA; (ii) imperfeitos,
quando existe entre os motivos um par de bases atpico, tal como em
TATATATAcTATATA e (iii) compostos, quando h duas seqncias repetidas
distintas adjacentes, tal como em TATATATAGTGTGTGTGTGT.
Foram encontrados 66 microssatlites perfeitos, 55 imperfeitos e 6
compostos em P. edulis flavicarpa. Do total de microssatlites, 3,94% foram de
mononucleotdeos, 78,74% de dinucleotdeos, 3,94% de trinucleotdeos,
7,09% de tetranucleotdeos, 2,36% de pentanucleotdeos, 3,15% de
hexanucleotdeos e 0,79% de heptanucleotdeos. Como esperado, a classe de
dinucleotdeos foi a mais freqente em virtude das sondas utilizadas (CT e GT).
Nessa classe, microssatlites com repeties AC/GT e CA/TG foram mais
freqentes (52,7%) do que aqueles com repeties AG/CT e GA/TC (25,2%).

431

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Observou-se que, quanto maior o tamanho do motivo, menor o


nmero de repeties. Os hexa, penta e tetranucleotdeos apresentaram, em
mdia, 3,75 0,95; 5,0 2,0 e 5,88 2,8 repeties respectivamente. J os
trinucleotdeos apresentaram, em mdia, 6,4 2,79 repeties. O nmero
mdio de repeties foi de 14,75 8,9, no caso dos dinucleotdeos, mdia
esta associada a uma elevada varincia, j que os valores variaram de 6 a 42.
J para os mononucleotdeos e microssatlites compostos, as mdias foram
de 23,6 7,0 e 24,0 11,3 repeties, com amplitudes elevadas.
Segundo Wang et al. (1994), a freqncia das classes de microssatlites
bastante varivel em plantas. Em reviso feita por Powell et al. (1996), os
autores relataram que as repeties AG so mais abundantes no genoma de
plantas do que as repeties AC, diferentemente do que ocorre no genoma de
mamferos (Weissenbach et al., 1992). Nossos dados apontam para uma maior
freqncia de repeties GT no genoma de P. edulis flavicarpa, embora seja
recomendvel analisar mais seqncias. possvel afirmar que a presena dos
microssatlites em maracuj-amarelo to abundante quanto em outras
espcies frutferas, como mamo (Santos et al., 2003), melo (Ritschel et al.,
2004) e abacate (Ashworth et al., 2004).
Nossos prximos passos visam caracterizao gentica dos locos de
microssatlites em um conjunto de acessos de P. edulis flavicarpa, o depsito
das seqncias no banco de dados, e a completa genotipagem da populao
segregante IAPAR-06 x IAPAR-123 para a construo de mapas de ligao
altamente saturados (Figura 5). Nosso propsito identificar, com maior
exatido, regies genmicas associadas a caractersticas agronmicas.

Figura 5. Loco de microssatlite com segregao 1: 1: 1: 1 em populao de maracujamarelo derivado do cruzamento IAPAR-06 x IAPAR-123.
Fonte: Oliveira et al. (2005b).

432

Mtodos biotecnolgicos aplicados ao melhoramento gentico do maracuj

Diversidade

gentica

A classificao taxonmica das passifloras tem sido objeto de estudo e


controvrsia, porm a descrio clssica das espcies americanas da famlia
Passifloraceae, elaborada por Ellsworth Killip, em 1938, e divulgada em
Publications of the Field Museum of Natural History, tem sido a principal
referncia. A classificao de Killip um tanto complexa, sendo o gnero
Passiflora dividido em 22 subgneros e alguns destes em sries e sees.
Outro estudioso importante John Vanderplank cuja obra Passion
Flowers, em 3 edio, foi publicada em 2000. A ampla variao na forma das
folhas, frutos e flores, caracterstica marcante das passifloras, muito bem
ilustrada na obra que discute vrios aspectos horticulturais.
Mais recentemente, em 2004, o grupo liderado por John MacDougal
publicou PASSIFLORA Passionflowers of the world, propondo nova estruturao
para o gnero Passiflora baseada em evidncias morfolgicas e citolgicas e
reduzindo-o a apenas quatro subgneros: Astrophea (DC) Mast., com 57
espcies; Deidamioides (Harms) Killip, com 13 espcies; Decaloba (DC.)
Rchb., com 214 espcies e Passiflora, com 236 espcies, entre as quais esto
vrias das passifloras tpicas, cultivadas como ornamentais ou para o consumo
da fruta ( Killip, 1938; Vanderplank, 1996; Ulmer & MacDougal, 2004).
Na Tabela 3, ilustra-se a correspondncia entre as classificaes de Killip
(1938) e de Feuillet e MacDougal (2004).
Tabela 3. Correspondncia entre as classificaes propostas por Feuillet e MacDougal
(2004) e a de Killip (1938) para o gnero Passiflora.
Feuillet e Mac
Dougal (2004)

Killip (1938)

Decaloba

Apodogyne, Astephia, Plectostemma (exceto seo


Mayapathanthus),
Chloropathanthus, Murucuja, Pseudomurucuja e Psilanthus
Astrophea
Tryphostemmatoides, Deidamioides, Seco Mayapathanthus
(subgnero Plectostemma) e Polyanthea
Adenosepala, Tacsoniopsis, Rathea, Tacsonia, Granadillastrum,
Distephana, Calopathanthus, Tacsonioides, Granadilla, Dysosmia,
Dysosmioides

Astrophea
Deidamioides
Passiflora

433

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Melo et al. (2001) realizaram estudos de citogentica que sugerem a


reorganizao taxonmica da famlia. Esses autores, mesmo no tendo como
objetivo principal apresentar uma nova organizao sistemtica para o
gnero, obtiveram resultados que contriburam para a elucidao das relaes
genticas entre as espcies de Passiflora. Os resultados de Melo et al. (2001)
apresentam-se bem prximos queles que embasam a nova organizao
taxonmica proposta por Ulmer & MacDougal (2004). Melo & Guerra (2003)
sugerem que o nmero e a localizao de stios de rDNA 5S e 45S rDNA so
consistentes com a hiptese de que espcies com x = 6 seriam mais
primitivas, enquanto as espcies com x = 9, x =10 e x = 12 teriam origem
tetraplide por disploidia (12!10!9) e diminuio de stios redundantes
como os de rDNA 5S. Igualmente, Cuco et al. (2005) mapearam stios de rDNA
45S e 5S em P. edulis flavicarpa (E), P. amethystina (A) e P. cincinnata (C) e nos
respectivos hbridos somticos (E + A) e (E + C). Estabeleceram, tambm, o
caritipo standard para o gnero o qual servir de base aos programas de
melhoramento, mormente, aqueles que usam a hibridao interespecfica
como estratgia de introgresso de genes. A definio do caritipo de P.
edulis flavicarpa ainda particularmente importante para a alocao de
grupos de ligao em mapas fsicos e, obviamente, para estudos de evoluo
cariotpica.
Em complemento a esses estudos, o gnero tem sido contemplado
com trabalhos de filogenia molecular (Muschner et al., 2003; Yockteng &
Nadot, 2004; Pdua, 2004) e de morfometria (Plotze et al., 2005). So
apresentados, aqui, alguns dados de Pdua (2004) resultantes da anlise
filogentica baseada na comparao de seqncias dos genes do
cloroplasto, trnT-trnL-trnF em combinao com dados morfomtricos de folhas
de Passiflora.
O subgnero mais heterogneo, isto , o que abriga maior variabilidade
Astrophea, com uma distncia mdia de 0,052. J o grupo de menor
distncia o que compe o subgnero Deidamioides, com um valor de
0,0036. Na Tabela 4, mostram-se os demais valores, incluindo as distncias
entre as espcies dentro de subgneros, apresentadas na diagonal.

434

Mtodos biotecnolgicos aplicados ao melhoramento gentico do maracuj

Foi possvel verificar, de forma clara, o agrupamento das espcies em


quatro grandes grupos, com altos valores de bootstrap. Num primeiro, foram
agrupadas todas as espcies do subgnero Decaloba, alm de P. tulae, do
subgnero Murucuja. A incluso do subgnero Murucuja dentro do grado
Decaloba coincide com a reorganizao proposta por Feuillet e MacDougal
(2004). Algumas caractersticas morfolgicas so comuns a esses dois
subgneros, conforme descrito por Killip (1938).
O subgnero Deidamioides caracteriza-se por ser o nico do gnero
que apresenta folhas compostas, trifoliadas. A caracterstica que o aproxima
de Decaloba seria o oprculo plissado. No entanto, a distncia entre as
espcies P. microstipula e P. deidamioides comparativamente quela entre as
espcies de Decaloba e a caracterstica foliar que lhe peculiar (folhas
compostas, trifoliadas) indicam que este pode constituir um subgnero
distinto tal como propem Feuillet & MacDougal (2004). Em nosso estudo,
fica evidente que as distncias entre os grupos so bem superiores s
distncias dentro dos grupos, dando destaque homogeneidade intragrupo e
a perfeita distino entre grupos. A distncia entre Decaloba e Deidamioides
praticamente a mesma existente entre Decaloba e Astrophea que,
definitivamente, so subgneros distintos. Portanto, a disposio de
Deidamioides como um dos quatro subgneros propostos por Feuillet &
MacDougal recebe suporte do presente trabalho.

Tabela 4. Distncia patrstica entre os subgneros de Passiflora estudados por Pdua


(2004)
Txon
Tacsonioides
Passiflora
Dysosmia
Distephana
Astrophea
Deidamioides
Decaloba

Tacsonioides

Passiflora

Dysosmia

Distephana

Astrophea

Deidamioides

Decaloba

0,0158
0,0224
0,0180
0,0113
0,0563
0,0508
0,0889

0,02725
0,0267
0,0192
0,0641
0,0576
0,0892

0,01505
0,0165
0,0609
0,0536
0,0877

0,00717
0,0707
0,0456
0,0803

0,05200
0,0640
0,0910

0,00362
0,0562

0,04326

Outro grande grupo formado foi o que alocou as espcies do


subgnero Passiflora. Alm destas, foram includas espcies dos subgneros
Dysosmia (P. foetida e P. palmeri), Distephana (P. speciosa e P. coccinea),

435

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Granadillatrum (P. manicata), Dysosmioides (P. villosa, P. campanulata e P.


setulosa) e Tacsonioides (P. reflexiflora e P. mendoncaei). Esse agrupamento,
apesar de no acolher qualquer caracterstica morfolgica compartilhada por
esses subgneros, tambm foi estabelecido nas filogenias anteriormente
publicadas para Passiflora. Agrupando-se ao grado Decaloba, alm das
espcies que pertencem a este subgnero, esto as espcies: P. manicata
(Granadillastrum) e P. tulae (Murucuja). Assim como no caso do subgnero
Decaloba, a reunio desses subgneros em um nico est de acordo com a
idia de Feuillet e MacDougal. Nesse grupo, incluem-se as espcies de
Dysosmia que, em outras filogenias, aparecem alocadas em grupo-irmo do
subgnero Passiflora.
A provvel incluso desses subgneros junto a Passiflora pode ser
devida ao fato de a divergncia de Decaloba ser mais antiga que a divergncia
dos demais subgneros. Por Passiflora e os demais subgneros serem mais
recentes, no houve tempo hbil e suficiente para sua completa separao. Tal
fato corroborado, por exemplo, pela disperso da srie Lobatae ao longo de
vrios subgrupos de Passiflora.
A proximidade observada entre P. edulis f. flavicarpa (maracuj-amarelo)
e P. edulis (maracuj-roxo) corrobora a hiptese de que a forma amarela deva
ter surgido de forma roxa por mutaes (Degener, 1933). A facilidade de
cruzamento entre essas duas formas tambm fortalece a teoria de origem por
mutao. Todavia, analisando as distncias patrsticas das vrias espcies em
relao forma amarela de P. edulis, verifica-se que a menor distncia est
associada P. incarnata, o que traz dvidas quanto hiptese de origem por
mutao. Esse resultado um tanto quanto inesperado, uma vez que essas
duas espcies no so simptricas. Enquanto P. edulis um txon nativo das
regies do Brasil e da Argentina, P. incarnata restrito aos Estados Unidos
(Martin & Nakasone, 1970). No entanto, a proximidade das duas formas de P.
edulis, detectada tanto por marcadores de cloroplasto (presente trabalho)
quanto por marcadores nucleares (Yockteng & Nadot, 2004), mostra que a
hiptese de origem de P. edulis f. flavicarpa por hibridao (Pope, 1935)
menos provvel.

436

Mtodos biotecnolgicos aplicados ao melhoramento gentico do maracuj

O terceiro grupo, com altos valores de bootstrap (mdia de 94)


formado exclusivamente por espcies do subgnero Astrophea. Entretanto, o
grupo no pode ser considerado monofiltico, pois a espcie P. alliacea no
se agrupou neste clado. Isto tambm foi observado na filogenia proposta por
Yockteng & Nadot (2004) que observaram o agrupamento de P. candida
(seco Pseudoastrophea) com espcies de Decaloba. A posio basal de
Decaloba confirma a hiptese de Benson et al. (1975) de que este grupo seria
o ancestral das passifloras.
Ressalte-se que os valores de bootstrap para os ns situados dentro
dos quatro grandes clados so baixos, evidenciando a proximidade gentica
existente entre as espcies dentro dos subgneros, corroborando,
novamente, a reduo do nmero de subgneros proposta por Feuillet &
MacDougal (2004).
Para a anlise morfomtrica (Plotze et al., 2005; Figura 6), amostras de
folhas de quatro indivduos de 10 espcies de Passiflora foram utilizadas
visando englobar a grande variabilidade foliar do gnero. Os caracteres
morfomtricos foram capazes de distinguir as 10 espcies, enquanto o
dendrograma (Figura 7) mostra, claramente, a segregao das espcies em
dois grupos, Passiflora e Decaloba que correspondem aos subgneros
Passiflora e Plectostemma, respectivamente, segundo a classificao de Killip
(1938).
A nica exceo foi P. miersii, uma espcie que pertence ao subgnero
Passiflora, mas que foi agrupada juntamente com o grado que contm as
espcies do subgnero Decaloba. Esse agrupamento pode ser explicado por
aspectos morfolgicos que aproximam a srie Kermesinae (P. miersii) do
subgnero Decaloba, como a presena de oprculo plissado.
P. foetida foi agrupada com as espcies do subgnero Decaloba,
porm esta pertence ao subgnero Dysosmia. Alm da filogenia aqui
apresentada, duas outras recentemente publicadas para Passiflora (Muschner
et al., 2003; Yockteng & Nadot, 2004) mostraram que esse subgnero parece
ser filogeneticamente mais relacionado s espcies do subgnero Passiflora
que Decabola. Contudo, a presena de flores pequenas salienta a proximidade

437

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

da Decaloba. Outro fato que revela essa proximidade o nmero


cromossmico 2n = 20 ou 18, tambm caracterstico de P. gracilis, uma
espcie de Decaloba seo Cieca (Bowden, 1945; Soares-Scott, 1998).
B

C
D

J
I

Figura 6. Espcies de Passiflora utilizadas no ensaio morfomtrico: (a) P. coriacea,


(b) P. foetida, (c) P. miersii, (d) P. organensis, (e) P. pohlii, (f) P. suberosa, (g) P. amethystina,
(h) P. caerulea, (i) P. gibertii e (j) P. maliformis.
Fonte: Modificado de Plotze et al. (2005).

Esses resultados mostram que o subgnero Dysosmia (P. foetida,


P. chlatrata e P. palmeri) parece ser intermedirio entre Decaloba e Passiflora,
mesmo apresentando um conjunto de caractersticas morfolgicas nicas
(Yockteng & Nadot, 2004) e nmero cromossmico igual a 2n = 20, 18 ou 22
(Melo et al., 2001; Soares-Scott, 1998). Essa posio intermediria tambm
suportada pelos resultados de Melo & Guerra (2003) que mostram que
P. foetida (2n = 20) apresenta quatro stios 5S, enquanto em Passiflora so
detectados apenas 2 desses stios e em Decaloba 2, 4 ou 6 stios. Neste
mesmo trabalho, os 6 stios 45S esto posicionados na regio proximal dos
cromossomos de P. foetida. No subgnero Passiflora, os stios 4 ou 6,
dependendo da espcie, esto situados em regies subterminais, enquanto
em algumas espcies de Decaloba, esses stios esto situados na regio
proximal dos cromossomos.

438

Mtodos biotecnolgicos aplicados ao melhoramento gentico do maracuj

O segundo grupo foi composto de espcies que pertencem


exclusivamente ao subgnero Passiflora. interessante notar que as espcies
da srie Lobatae (P. amethystina, P. caerulea e P. gibertii) formaram um
agrupamento consistente dentro do grupo Passiflora no qual h grande
variabilidade infra-especfica, com nfase para P. caerulea.
A despeito da variabilidade presente, as espcies formaram grupos
altamente consistentes: as quatro amostras de cada espcie sempre se
agruparam entre si, mostrando a eficcia do mtodo em segreg-las
corretamente (Figura 7).
2,5

Distncia

2,0

1,5

Passiflora

Decaloba
Lobatae

1,0
Dysosmia

0,5

0,0

P. maliformis P. caeculea

P. gibentii P. amethystina P. suberosa

P. foetida

Passiflora

P. pohlii

P. miensii P. organensis P. coriacea

Figura 7. Agrupamento de 10 espcies de Passiflora segundo a sua morfometria foliar


Fonte: Plotze et al. (2005.

O dendrograma gerado dos dados morfomtricos apresenta alta


similaridade com a classificao botnica atualmente aceita para o gnero
Passiflora. Esse aspecto mostra a eficcia do mtodo e revela a presena de
um conceito cladstico e filogentico, uma vez que a forma das folhas muito
bem descrita pela curva de dimenso fractal multiescala. Como a classificao
botnica mostra-se correlacionada caracterizao das espcies por
dimenso fractal multiescala, podem-se estimar distncias genticas entre as
espcies analisadas e conseqentemente correlacion-las quelas obtidas
pelas diferenas encontradas entre as seqncias de DNA cloroplastidial. As
anlises mostraram que a correlao entre as topologias do dendrograma e

439

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

das rvores filogenticas bastante alta: 0,777 (p-valor = 0,004). Essa


semelhana reflete-se tambm nas distncias entre as espcies geradas de
diferentes enfoques. Mesmo esta sendo apenas igual a 0,38, mostra-se
significativa, com um p-valor de 0,018.
A eficincia do mtodo pode ser facilmente verificada pela distino
entre duas espcies muito aparentadas e com formato de folha similar: P.
amethystina e P. gibertii. A despeito da distino, a proximidade filogentica
entre elas fica igualmente evidenciada, pois o dendrograma mostra que elas
so mais prximas entre si do que, individualmente, em relao P. caerulea
que, tambm, pertence srie Lobatae.
Algumas concluses acerca do gnero Passiflora so destacadas a seguir:

Os altos nveis de transferibilidade indicam uma distncia gentica no


muito grande entre as espcies, mostrando que a diversificao do gnero
ocorreu num passado recente;

A atual classificao botnica, considerando-se os taxa supra-especficos,


parece no refletir grupos monofilticos;

O subgnero Dysosmia abriga um conjunto de espcies com caractersticas


nicas dentro do gnero, alm de caractersticas intermedirias entre os dois
principais subgneros de Passiflora: Decaloba e Passiflora;

A proposta de diviso do gnero em apenas quatro subgneros


respaldada por observaes filogenticas, com fortes evidncias de
Deidamioides ser um desses subgneros.
O dendrograma gerado da anlise morfomtrica revelou forte
similaridade com a atual classificao botnica aceita para o gnero,
demonstrando a eficincia do mtodo, alm de mostrar o apelo cladstico,
uma vez que a forma das folhas e seu padro de nervao foram eficazmente
descritos pela curva de dimenso fractal multiescala;
Por refletir o relacionamento filogentico entre as espcies, as
caractersticas foliares (formato e padro de nervao) podem ser usadas em

440

Mtodos biotecnolgicos aplicados ao melhoramento gentico do maracuj

estudos que utilizem informaes sobre a ancestralidade de espcies, bem


como em sistemtica e ecologia.
Finalizando o item, cabe dizer que estudos de variabilidade
populacional ou infra-especfica so de extrema valia. Em Passiflora, do ponto
de vista molecular, esse tipo de estudo tem sido realizado utilizando-se RAPD
(Fajardo et al., 1998), padro de stios de restrio do cpDNA (Snchez et al.,
1999), isoenzimas (Segura et al., 2003) e AFLP (Segura et al., 2002).
Marcadores microssatlites foram desenvolvidos por Oliveira et al. (2005) e
Pdua et al. (2005) e tendem contribuir na caracterizao da variabilidade
gentica disponvel no gnero, pois essa classe de marcadores apresenta
caractersticas muito favorveis para estudos de diversidade.

Concluses
So incontestes os ganhos na produo agrcola devido adoo de
prticas de seleo e hibridao. A inteno dos autores deste texto foi
mostrar um conjunto de dados obtidos mais recentemente com tecnologias
moleculares relacionados gerao (via transgenia e fuso celular) e
explorao da variabilidade gentica, mormente, de Passiflora.
A eficincia de um programa de melhoramento de maracuj (amarelo ou
doce) ser tanto maior quanto mais adequado for o mtodo escolhido, como
a seleo recorrente, por exemplo, e vai depender da escolha da populaoalvo da seleo. A adoo de tcnicas moleculares dever acelerar o
processo. Ns aqui recomendamos investimentos intelectuais (e financeiros)
em gentica aplicada ao melhoramento, em genmica e mapeamento de
genes, pois so estratgias fundamentais no processo de gerao de
variedades melhoradas, em tempos modernos.

Agradecimentos
Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de So Paulo e s
agencias federais, CAPES e CNPq, pelo auxlio financeiro. Ao tcnico de
laboratrio, Carlos Alberto de Oliveira, pelo inestimvel apoio.

441

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

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WEISSENBACH, J.; GYAPAY, G.; DIB, C.; VIGNAL, A.; MORISETTE, J.; MILLASEAU, P.;
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WILLIANS, S.; FRIEDRICH, L.; DINCHER, S.; CAROZZI, N.; KESSMAN, E.; RYALS, J.
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YOCKTENG, R.; NADOT, S. Phylogenetic relationships among Passiflora species based
on the glutamine synthetase nuclear gene expressed in chloroplast (ncpGS). Molecular
Phylogenetics and Evolution, v. 31, p. 379-396, 2004.

453

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

454

E assim to de repente a noite se fez dia.


A vida acordou muito alegre e humorada
nesta manh festiva e to ensolarada,
De um maracuj mimosa flor se abria.
No cu espessas nuvens soberbas flutuavam
Como quem embala a jovem flor mais bela.
Da terra as palmeiras suas folhas balanavam
Declarando amor to fraternal a ela.
Geovane Alves de Andrade

Problemas e perspectivas do maracuj


ornamental
Mauro Peixoto

Introduo

gnero Passiflora, apesar de seu imenso potencial


ornamental, com dezenas de espcies se prestando a esse
fim, praticamente ignorado pelos nossos paisagistas e
tambm pelo pblico em geral. Pases do Hemisfrio Norte, com o clima bem
menos favorvel que o nosso, perceberam h mais de um sculo que
poderiam fazer dele um elemento de decorao e tambm de renda para os
seus produtores. Hoje em dia, comum se avistar, nas sees de jardinagem
de supermercados europeus e norte-americanos, diversas variedades de
maracuj ornamental, tanto espcies, notadamente clones selecionados de
Passiflora caerulea L. e P. incarnata L., quanto numerosos hbridos artificiais.

Breve histrico do uso do maracuj como planta


ornamental
O cultivo como planta ornamental em casas de vegetao remonta ao
sculo XVII, na Europa, por volta de 1625, com as Passiflora caerulea L. e
P. incarnata L. A planta foi enviada para o novo mundo envolvida na aura
mstica criada pelos jesutas que a usavam para auxiliar na catequizao dos
ndios como smbolo da Paixo de Cristo. Toda a planta era usada para esse
fim, desde as folhas trilobadas que representariam as lanas dos soldados at
as cinco anteras que simbolizavam as chagas de Cristo.

457

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Por quase 200 anos, o cultivo ficou restrito s espcies, mas em 1819
Thomas Milne, da Inglaterra, conseguiu o primeiro hbrido artificial: Ele cruzou
P. racemosa. Brot com Passiflora caerulea L. obtendo, assim Passiflora
Violacea, ainda hoje em cultivo.
Os dias de glria declinaram com o advento das duas guerras mundiais,
principalmente, devido ao alto custo de manuteno das casas de vegetao
durante o inverno, e muitas espcies e hbridos foram perdidos, somente
sendo reintroduzidos no cultivo, apenas recentemente como o caso da
Passiflora kermesina Link & Otto que foi perdida na segunda guerra mundial e
devolvida ao cultivo no final dos anos 90.

Situao atual no Brasil e no mundo


Pode-se dizer, com pequena margem de erro, que virtualmente
inexistente o uso, no Brasil, do maracuj com a finalidade exclusiva de
ornamentao. O que vemos esporadicamente no Sudeste o uso misto do
maracuj-doce - Passiflora alata Dryand. e mais raramente do maracuj-azedo
Passiflora edulis Sims em prgulas ou cercas para aproveitar os frutos e ter
como bnus uma bela e perfumada flor.

Foto: Mauro Peixoto

Na Regio Norte, a Passiflora coccinea Aubl. substitui a Passiflora alata.


Dryand e, no Nordeste, usa-se a Passiflora cincinatta Mast.

458

Passiflora coccinea
Aubl.

Problemas e perspectivas do maracuj ornamental

No Hemisfrio Norte, a situao se inverte. L, o maracuj ornamental


por definio e no existe a preocupao com os frutos que, por sua vez, so
raros devido ao cultivo de um nico clone de cada espcie ou variedade
hbrida.

Foto: Dr. Roland Fischer

Desde a Passiflora Violacea, j se produziram e registraram mais de 400


hbridos com a finalidade de gerar flores para todos os gostos e ambientes.
Atualmente, um dos maiores plos de produo de hbridos fica na Alemanha,
e o Dr. Roland Fischer um dos expoentes, fazendo melhoramento gentico e
induzindo plantas tetraploidia, conseguindo, assim, flores maiores e mais
vistosas em plantas adaptadas ao cultivo em vasos.

Passiflora Jara

Perspectivas
Devido ao nosso clima extremamente favorvel, grande parte das mais
de 500 espcies e 400 hbridos registrados se prestam ao cultivo ornamental,
seja como solues paisagsticas para reas grandes e mdias, seja como
plantas para vaso que so usadas em varandas ou dentro de casa.

459

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Foto: Mauro Peixoto

Em lugares que necessitam de grande massa foliar, como para a


cobertura de um barranco exposto ao sol, poder-se- usar a P. malacophylla
Mast, P. Cordelia (P. coccinea Aubl. x P. vitifolia H.B. & K.), P. Lady Margret
(P. coccinea Albl. x P. incarnata Linn). Se o lugar for sombreado, possvel usar
P. amethystina Mikan para esse fim.

Passiflora Lady Margret

Foto: Mauro Peixoto

Para uma prgula ao sol, as P. seemannii Griseb., P. actinia Hook,


P. sidaefolia M. Roem, P. serrulata Jacq., P. triloba, Ruiz & Pav. Ex DC so
timas escolhas, pois todas tm flores pendentes, vistosas e perfumadas.

P. triloba, Ruiz & Pav. Ex DC


Passiflora seemanni Griseb

460

Problemas e perspectivas do maracuj ornamental

Foto: Mauro Peixoto

Caso ela esteja situada em lugar meia-sombra, a P. racemosa Brot.


imbatvel, com seus lindos cachos de flores que se abrem sucessivamente por
um longo perodo de tempo.

Passiflora racemosa Brot.

Foto: Mauro Peixoto

Se a inteno for uma cerca viva separando ambientes, podem-se usar


P. sanguinolenta Mast & Linden, P. tulae Urb., P. auriculata H.B. & K. que
possuem folhas pequenas e apresentam grande quantidade de flores abertas
simultaneamente.

P. auriculata H.B. & K.

Passiflora sanguinolenta Mast & Linden.

461

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Vasos: perfeitamente possvel cultivar praticamente todas as


passifloras em vasos grandes ou mdios, desde que a planta tenha um suporte
adequado e se faa uma poda criteriosa para mant-la dentro dos limites
desejados. Para varandas ou lugares meia-sombra, pode-se usar P.
racemosa Brot., ou P. kermesina Link & Otto., pois, alm de a flor ser
ornamental, tem tambm o verso das folhas avermelhado, o que a torna
atrativa mesmo sem as flores.
Alis, algumas passifloras so cultivadas exatamente por causa das
folhas decorativas e variegadas, como P. coriacea A. Rich. ou P. tricuspis Mast.
Para o cultivo dentro de casa, prximo de uma janela bem iluminada,
existem plantas muito compactas, porm, com flores belssimas como P.
murucuja Linn. ou com folhas variegadas, como P. organensis Gardn.

Autoria da foto

Passiflora murucuja

462

P. kermesina Link & Otto

Problemas e perspectivas do maracuj ornamental

Problemas
Os problemas so basicamente dois:
1. Cultural: O maracuj visto, de maneira geral, como fruto e no como flor.
Esse um paradigma enraizado em nossa cultura e apesar de no ser difcil
sua erradicao, necessrio que se faa um trabalho de conscientizao
sistemtica pelas vias competentes.
2. De cultivo: O maior empecilho para o cultivo do maracuj como planta
ornamental sua facilidade para atrair borboletas e, conseqentemente,
suas larvas que podem desfolhar uma planta em pouco tempo. O controle
deve ser feito pela retirada manual das larvas ou pulverizao com inseticidas
no caso de infestaes graves.

Concluses
O cultivo do maracuj como planta ornamental vivel tanto do ponto
de vista econmico como paisagstico, necessitando apenas de divulgao
que poderia ser feita por meio de revistas especializadas em jardinagem e
paisagismo possibilitando, assim, a quebra do paradigma e constatando que
o maracuj pode ser usado tambm para fruto e no apenas para fruto.

Referncias

bibliogrficas

CERVI, A. C. Passifloraceae do Brasil: estudo do gnero Passiflora L., subgnero


Passiflora. Madrid: Fontqueria XLV, 1977.
FISCHER, R. Hybrids and Hybridization. In: ULMER, T.; MacDOUGAL, J. M. Passiflora:
passionflowers of the world. Portland: Timberpress, 2004. p. 362-376.
VANDERPLANK, J. Passionflowers. 2th ed. London: Cassel, 1996.

463

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

464

Dicen que la planta maracuy pertenece


A la grande familia de las granadillas
Su pulpa aromtica a nosotros ofrece
Nutrimentos comparables a los de las frutillas.
Crece en clima tropical y algo lluvioso
Tendido a las ramas como verde corbata.
As teje un mantel inmenso y armonioso
Mezclndose a otros vegetales de la mata.
Lleva algo de niacn y betacarotina
Que ahuyenta el insomnio y la ansiedad.
Contiene tambin altas dosis de protena
Y mejora la salud de nuestra sociedad.
Adems de los frutos dulce y comestibles
Hay especies de uso muy medicinales.
Sin decir que sus flores bellas e increbles
Embrujan la selva como diosas terrenales.
Geovane Alves de Andrade

Utilizao das Passifloraceae na


criao de borboletas
Fernando Correa Campos Neto

Intr
oduo
Introduo
A famlia Passifloraceae abriga as plantas hospedeiras das borboletas
da tribo Heliconiini. Ambos, as Passifloraceae e os Heliconiini, so tpicos
das Amricas, mas tambm ocorrem na frica e na sia, so
aproximadamente 500 espcies de maracujs e quase uma centena de
borboletas dessa tribo. Algumas com distribuio ampla, como a borboleta
Dryas iulia, sendo uma de suas plantas hospedeiras Passiflora suberosa,
outras com ocorrncia relativamente restrita, como Heliconius nattereri e a
Passifloraceae Tetrastyles ovalis. Essa estreita relao entre plantas e
borboletas, mais precisamente entre plantas e lagartas, pois estas se
alimentam de suas folhas, criando significativa interface que torna o estudo
das Passifloraceae imprescindvel para o conhecimento dessas borboletas.
Uma nova atividade que envolve a produo de Passifloraceae para a
criao de borboletas em fase de expanso so os borboletrios
considerados como espao de lazer contemplativo de pesquisa, de
conservao e como uma multifuncional ferramenta de Educao
Ambiental.

467

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

O borboletrio
Trata-se de um espao voltado para a apresentao do mundo dos
Lepidpteros, principalmente, das borboletas de hbitos diurnos e mais
coloridas que as mariposas. No borboletrio, o visitante, ao contrrio do
que ocorre na maioria dos recintos, entra no viveiro e divide o espao com
esses insetos. uma vivncia de imerso, o contato direto e interativo. As
borboletas pousam no colorido da roupa do visitante e at mesmo chegam
a sugar o suor de sua pele. Esse contato to ntimo, com esses seres, que
so representantes da mais pura beleza, delicadeza, vida, renovao e
liberdade, cria uma condio muito especial na qual o pblico torna-se mais
aberto abordagem de outras questes ambientais.
Os borboletrios surgiram na dcada de 1970 na Europa e, nos anos 80,
no Japo; espalharam-se, tambm, pela Amrica do Norte. No Brasil, apesar
da riqueza da fauna da flora e do clima favorvel, surgiram mais tarde. No final
de 1996, foi inaugurado um borboletrio na Fundao Zoobotnica de Belo
Horizonte e alguns outros o seguiram. Nos ltimos dois anos, o nmero tem
aumentado mais rapidamente. Ao que parece, finalmente, essa idia est
sendo difundida por todo o Pas. A efmera vida das borboletas, em mdia,
um ms na fase adulta, faz do borboletrio um criadouro dinmico e
produtivo, longe da maioria dos recintos de um jardim zoolgico que,
normalmente, mantm animais de grande longevidade. A criao de milhares
de lagartas todos os meses demanda uma produo de grande quantidade de
plantas hospedeiras, entre elas diversas Passifloraceae. Existe, agora, uma
nova tica para o estudo dos maracujs, voltada para a produo de plantas
hospedeiras para lagartas dos Heliconiini que envolve levantamento,
identificao, reproduo, cultivo, hibridizao e at a produo de dietas
artificiais.

468

Utilizao das Passifloraceae na criao de borboletas

A escolha de borboletas e de plantas


No borboletrio, o mundo das borboletas deve ser apresentado com
toda a sua diversidade, dessa forma, importante que se tenham
borboletas de tamanhos, cores, formas e comportamentos variados e que
representem as principais famlias. O ideal seria criar espcies da regio,
evitando que a fuga de espcies exticas viesse a se tornar um problema.
No Brasil isto ocorre, pois a riqueza de nossa fauna e flora permite a
escolha de grande nmero de borboletas em todas as regies do Pas.
Algumas

caractersticas

so

especialmente

interessantes

como:

longevidade como adulto, ciclo rpido como lagarta, adaptao ao


cativeiro, nvel de atividade, beleza, delicadeza e cores vivas e na maioria
dos Heliconiini possvel observar essas caractersticas, estando entre as
mais recomendadas para borboletrios, principalmente, as do gnero
Heliconius, que chegam a viver at seis meses como adulto. Algumas
espcies so muito polfagas, como Agraulis vanillae e Dione juno, outras
muito seletivas, como H. nattereri, certas espcies so bastante resistentes
a doenas, outras so mais suscetveis a viroses. Estes so critrios que se
deve levar em conta na escolha das espcies que devem ser criadas.
Quanto s plantas, o primeiro passo o levantamento e a
identificao das espcies de borboletas e das plantas hospedeiras usadas
por elas. Precisa-se de espcies bem-aceitas pelas lagartas cuja
reproduo seja fcil e sejam muito produtivas, no em frutos, mas em
folhas, que os galhos cortados tenham durabilidade em vasos com gua e
produzam brotos mais tenros e que produzam menos toxinas e mais
nutrientes. Tambm interessante cultivar diferentes espcies de plantas
de modo a atender s diversas espcies de borboletas, aproveitar as
diferentes pocas de brotao e no ficar sujeito ocorrncia de doenas
que, afetando uma nica espcie, comprometam toda a produo.
Conseguir hbridos mais produtivos ou mais bem-aceitos tambm um

469

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

bom caminho. O desenvolvimento de dietas artificiais com baixa concentrao


de folhas desidratadas da planta hospedeira pode ser til para criao de
grandes quantidades de lagartas principalmente para regies mais frias onde
necessrio o uso de estufas aclimatadas para a produo das plantas no
inverno.

O cultivo
Podemos nos valer das informaes geradas sobre o cultivo de
Passiflora edulis ou P. alata, no entanto, ainda precisamos fazer algumas
adaptaes tendo em conta que cultivaremos outras espcies e que o
objetivo a produo de folhas e no de frutos. Muitas vezes semearemos
um nmero excessivo de sementes num vaso inadequado ao pleno
desenvolvimento de uma nica planta, mas, se o objetivo for o fornecimento
de brotos tenros para criao de lagartas, uma opo interessante para a
concentrao da planta hospedeira em um vaso pequeno e leve. Em alguns
casos, em que se cria grande quantidade de lagartas com uma planta
hospedeira que dura bem em vaso com gua, como Passiflora misera,
mais prtico plantar diretamente no solo em longos canteiros e oferecer a
planta em vasos com ramos cortados. Para a criao de algumas espcies,
mais recomendvel que a planta esteja em vaso, especificamente, para a
coleta de ovos. O melhor que seja um vaso bem pequeno, com um
volume inferior a meio litro, nesse caso, um substrato mais leve e rico
deixaria o vaso ainda mais leve. Este vaso ficar pendurado no interior do
viveiro para que as borboletas depositem seus ovos, isto porque algumas
borboletas tm como estratgia a postura de ovos fora da planta
hospedeira, evitando o encontro entre ovos e lagartas canibais. Tal
comportamento torna necessria a instalao de fibras de sisal em volta do
vaso onde sero depositados os ovos e o distanciamento do vaso em relao
ao solo e a outras plantas, de modo que os ovos, bem como sejam
depositados exclusivamente nas fibras, tornando sua coleta mais rpida e
eficiente. Conseguir uma seleo de plantas de forma que cada uma delas seja
aceita por apenas uma nica espcie de borboleta facilitaria a separao de

470

Utilizao das Passifloraceae na criao de borboletas

ovos, que muito difcil quando temos diversas espcies no viveiro, pois
todos eles so depositados numa mesma planta.

Conservao
Outro aspecto que demanda pesquisa e valorizao a incluso das
plantas hospedeiras dos Lepidpteros nos planos de recomposio de
reas degradadas. Normalmente, so plantadas rvores de grande porte e
so valorizadas as plantas que fornecem frutos para animais de grande e
mdio portes, raramente os insetos so lembrados. Nesse sentido, as
Passifloraceae no fogem regra, so negligenciadas como fornecedoras
de frutos para os animais e como planta hospedeira dos Heliconiini. H
muitas espcies raras de Passifloraceae que precisam ser mantidas e
acompanhadas em reas de preservao e tambm de borboletas, como
Heliconius nattereri, que demandam cuidados. Uma das aes nesse
sentido seria a produo e o repovoamento de sua planta hospedeira, no
caso Tetrastyles ovalis, nas reas em recuperao dentro da sua rea de
ocorrncia. Essas aes demandam trabalhos de levantamento,
taxonomia, reproduo e cultivo, estudos conjuntos que no dissociem os
Heliconiini das Passifloraceae.

Concluso
A produo de Passifloraceae para a criao de borboletas uma
nova demanda que requer pesquisas mais especficas quanto
identificao, distribuio ou ocorrncia, s tcnicas de reproduo e aos
cuidados relativos ao cultivo dos maracujs para os borboletrios.

Referncia

bibliogrfica

BROWN JR., K. S.; MIELKE, O. H. H. The heliconians of Brazil (Lepidoptera:


Nymphalidae). Part II. Introduction and general comments, with a supplementary revision
of the tribe. Zoologica, New York, v. 57, p. 1-40, 1972.

471

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

A- Lagartas de Heliconius Wallacei em P. vitifolia; B- Lagartas de Dione juno em P.


serrato-digitata; C- Adulto de Agraulis vanillae; D- Adulto de Dryas iulia; E- Adulto
Macho de Dryadula phaetusa; F- Adulto de Agraulis vanillae em flor de P. alata.

472

E o vento entoava a msica do tempo


Sem presa, surpresa ou rima repetida.
Porque muito tranqila, a me natureza
Criava passo a passo o milagre da vida.
E o Brasil que outrora era Pindorama,
O torro sagrado dos Tupiniquins,
o bero desta flor que frutifica, enrama,
E hoje encontrada em todos seus confins.
Geovane Alves de Andrade

O maracuj e suas propriedades


medicinais - estado da arte
Ana Maria Costa
Daiva Domenech Tupinamb

Introduo

a Amrica tropical, originou a maioria das espcies de


maracuj que compe a famlia Passifloraceae (Souza &
Meletti, 1997), Ordem Violares, Classe Magnoliopsida e Filo
Magnoliophyta. Estima-se que somente o gnero Passiflora possua em torno
de 500 espcies, muitas cultivadas pelas propriedades medicinais, sendo que no
Brasil existem cerca de 120 espcies nativas. Apesar do nome popular aplicado a
todas as espcies, apenas duas so cultivadas comercialmente para a produo
dos frutos: Passiflora alata (maracuj-doce) e Passiflora edulis (maracuj-azedo).
Embora todas as espcies produzam frutos, nem todos podem ser consumidos,
havendo at alguns que so txicos. Pelo desenho de seus componentes florais,
principalmente dos rgos masculinos (estames) e femininos (carpelos) em forma
de cruz, so tambm denominados de flor-da-paixo. A beleza de suas flores
no est somente na forma de seus componentes florais, mas, principalmente, na
variedade de cores (virtualmente todas).
A utilizao do maracuj como planta medicinal faz parte da cultura de
povos americanos, europeus e asiticos. Espcies comerciais e silvestres
integram o repertrio etnofarmacolgico que recomenda folhas, flores, razes
e frutos para combater as mais diferentes enfermidades, do controle de
verminoses ao tratamento de tumores gstricos. Contudo, a fama do maracuj
vem da ao benfica sobre o sistema nervoso, sendo indicado,

475

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

principalmente, no combate ansiedade, depresso e insnia (Matos,


2002; Dhawan et al., 2004).
Apesar de as propriedades medicinais do maracuj serem conhecidas
mundialmente, ainda pequena a informao cientfica sobre o assunto.
Pouco se sabe, ainda, a respeito da composio bioqumica, princpios ativos
e efeitos sobre a sade humana da maioria das espcies usadas como
medicinais. Os estudos se concentram basicamente nas espcies comerciais:
Passiflora edulis, Passiflora caerulea e Passiflora incarnata.
Em termos nutricionais, os maracujs comerciais apresentam
excelentes qualidades nutritivas, so ricos em minerais e vitaminas,
principalmente A e C, alcalides, flavonides e carotenides, substncias
que, em geral, atuam na preveno de doenas. (Suntornsuk et al., 2002;
Casimir et al., 1981).
Dhawan et al. (2004) organizaram grande parte das informaes
apresentadas neste captulo.

Etnofarmacologia
A medicina popular atribui ao maracuj vrias propriedades benficas
sade que variam de acordo com a espcie e cultura local.
O Brasil agrega poro significativa da diversidade gentica de
maracujs com uso medicinal. Espalhados por grande parte do territrio,
diferentes espcies so utilizadas como sedativos, diurticos, analgsicos, no
controle da ansiedade, combate insnia, erisipela e doenas inflamatrias
da pele, entre outras aplicaes (Oga et al., 1984; Matos, 2002; Dhawan et al.,
2004). Dentre as nativas mais populares esto a Passiflora caerulea, Passiflora
edulis, Passiflora foetida e Passiflora incarnata.
No sculo XVII, a espcie brasileira Passiflora caerulea foi introduzida na
Inglaterra para ser usada como sedativo e no controle da ansiedade. Hoje
um dos maracujs medicinais mais difundidos na Europa e sia juntamente
com o espcime peruano de Passiflora incarnata. Em geral, o efeito medicinal

476

O maracuj e suas propriedades medicinais ...

calmante obtido da infuso de folhas e flores e da polpa dos frutos. As razes


da P. caerulea tambm so usadas nos Pases Baixos, ndia, Amrica do Sul e
Mxico como vermfugo. Na Itlia, utiliza-se a planta tambm como
antiespasmdico. Nas Ilhas Maurcio, recomendam-se tinturas e extratos desse
maracuj para controle da insnia e vrios distrbios do sistema nervoso,
enquanto as razes so empregadas como diurtico. Na Argentina, a medicina
popular recomenda as partes areas de P. caerulea como antimicrobiano no
tratamento da pneumonia e tosse com catarro (Anesini & Perez, 1993).
Menos difundida, mas tambm presente na cultura de vrios povos est
a Passiflora edulis. Nas Amricas, a planta utilizada como sedativo, calmante,
diurtico, anti-helmntico, antidiarrico, tnico e no tratamento da hipertenso,
sintomas da menopausa, clicas infantis e insnia (Matos, 2002; Dhawan et al.,
2004). O fruto, na Ilha da Madeira, considerado estimulante gstrico e
usado como auxiliar no tratamento de carcinomas gstricos (Watt & BreyerBrandwijk, 1962 revisto em Dhawan et al., 2004). Em Nagalan (ndia), folhas
frescas de P. edulis so fervidas em um litro de gua e o extrato bebido para o
tratamento da diarria e hipertenso (Jamir et al., 1999). Os frutos so
ingeridos frescos para constipao.
Infuso de folhas de Passiflora foetida controla a histeria e insnia
segundo a tradio nigeriana (Nwosu, 1999). Essa planta muito cultivada na
ndia. As folhas so utilizadas para dores de cabea, distrbios biliares e asma.
Os frutos so utilizados para prevenir vmitos. No Brasil, pomadas e loes
contendo extratos da folha so recomendados para erisipela e inflamaes
(Dhawan et al., 2004).
Um trabalho publicado em latim, no ano de 1787, na Matria Mdica
Americana, na Alemanha, menciona o uso de Passiflora incarnata tambm
para tratamento da erisipela da idade (Dhawan et al., 2004). Trabalhos antigos
descrevem o uso dessa espcie no tratamento de espasmos e insnia de
crianas e idosos (Bratram, 1995 e CSIR 1965a, b, revisto por Dhawan et al.,
2004). Trata-se de uma planta tradicionalmente usada na Europa (Handler,
1962 revisto por Dhawan et al., 2004) e na homeopatia (Rawat, 1987 revisto por
Dhawan et al., 2004 ). Na Amrica do Norte, recomendada para insnia,

477

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

ansiedade e como sedativo (Bergner, 1995 revisto por Dhawan et al., 2004). No
Brasil, essa espcie usada como analgsico, antiespasmdico, no controle
da asma, como vermicida e sedativo. No Iraque, como sedativo e narctico.
Na Turquia, no tratamento da dismenorria, epilepsia, insnia, neuroses e
neuralgia. Na Polnia, na cura da histeria e neurastenia. Na Amrica, no
tratamento da diarria, dismenorria, neuralgia, queimaduras, hemorridas e
insnia (Taylor, 1996 revisto por Dhawan et al., 2004). A espcie tambm
empregada na ndia sendo usada no tratamento de dependentes de morfina
pela medicina tradicional daquele pas (Lad 2000 e Vasudev, 1955 revisto em
Dhawan et al., 2004).
Passiflora laurifolia Linn. usada em Trinidad para tratamento das
palpitaes cardacas, distrbios nervosos (Rainntree Nutrition, 1999 revisto
em Dhawan et al., 2004).
Suco do maracuj Passiflora maliforms Linn usado para controlar febre
no Brasil (Dhawan et al., 2004). Passiflora quadrangularis Linn (maracujgigante) usado em todo o Caribe como sedativo para dores de cabea. Ch
das folhas bebido para controle da presso arterial e diabetes (Seaforth et
al., 1983 revisto em Dhawan et al., 2004). Nas Ilhas Maurcio e Rodrigues,
banhos com folhas cozidas de Passiflora suberosa so usados o tratamento de
doenas de pele. Razes cozidas so usadas para induzir a menstruao e
controlar histeria (Fakim et al., 1993). Na Amrica Central, brotos de Passiflora
pedunculata Mast., partes areas de Passiflora sexflora Juss e Passiflora vitifolia
HBK vm sendo usadas contra picadas de cobra (Morton, 1981 revisto em
Dhawan et al., 2004).
O uso popular difundido e suas vrias aplicaes sugerem o potencial
desse gnero para a pesquisa de princpios medicamentosos interessantes.

Fitoconstituintes
A maior parte das informaes sobre a constituio bioqumica do
gnero Passiflora provm das espcies Passiflora incarnata e Passiflora edulis
seguido da Passiflora alata. Ainda pequeno o conhecimento para as demais

478

O maracuj e suas propriedades medicinais ...

espcies (Pereira et al., 2000; Dhawan et al., 2004). Em geral, as espcies


estudadas so ricas em alcalides indlicos (passiflorina, harmina, harmanol,
harmalina), flavonides (vitexina, isovitexina, neohesperidina, saponarina,
crisina, BZF), esteris (estigmasterol, sitosterol), lignanos (cido cafico e
ferrlico), cianoglicosdeos, entre outros, havendo diferenas quantitativas de
espcie para espcie (Pereira et al., 2000).
Em termos de funo, atribui-se principalmente aos flavonides crisina e
BZF o efeito contra ansiedade da Passiflora e aos cianoglicosdeos, o efeito
hipotensor por vasodilatao perifrica.
Segue-se o resumo dessas informaes para as trs espcies mais
conhecidas e demais espcies.

Fitoconstituintes da Passiflora incarnata


Flavanides
Os flavanides compem a principal categoria presente na espcie
Passiflora incarnata. Segundo levantamento realizado por Dhawan et al., 2004,
esto presentes na planta: apigenina (1), luteolina (2), quercetina (3),
caempferol (4) (Gavasheli et al., 1974a), 6--d-alopiranosil-8--xilopiranosilapigenina (Grandolini et al., 1997); flavonides C-glucosil vitexina (5)
isovitexina (6) (Lutomski et al., 1981), orientina (7), isoorientina (8),
escaftosdeo

(9),

isoscaftosdeo,

isovitexina-2-O-glicopiranosdeo,

isoorientina-2-O-glico-piranosdeo, 2-glicosilapigenina, isoscoparina-2-Oglucoside, 2-O-glucosil-6-C-glucosilapigenina, 6--d-glucopiranosil-8--dribopiranosil apigenina e suertisina (Chimichi et al., 1998; Congora et al., 1986;
Geiger & Markham, 1986; Li et al., 1991; Proliac & Raynaud, 1988; Rahman
et al., 1997).
Dentre as Passifloras estudadas, a P. incarnata a que apresenta maior
concentrao do flavanide isovitexina. (Menghini et al., 1993). Esse
componente mais concentrado nas folhas, estando em maior quantidade na
poca de pr-florao e florao (Menghini et al., 1993).

479

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Flavan ide
(1) apigenina

R8

R7

R6

R3

(2) luteolina

OH

(3) quercetina

OH

OH

OH

(4) caempferol
(5) vitexina

C-glucosil

(6) Iso-vitexina
(7) orientina

H
C-glucosil

(8) Iso-orientina

C-glucosil

H
C-glucosil

OH

OH
R3

(9) R3= H R6=? -D-glucopiranosil, R8 =


? -L-arabinoanosillapigenina

OH

R8

R8
O

R7O

OH
R3

R6
OH

HO

R6

OH

Frmula geral dos flavanides.

Alcalides
Passiflora incarnata contm alcalides indlicos baseados em anis de
-carbonila, como a harmana (10), harmol (11) harmina (12) harmalol (13) e
harmalina (14) (Poetheke et al., 1970). O contedo de harmana e harmina nos
extratos medicinais de P. incarnata de 10 a 20 g/100 ml (Bennati, 1971).
Tsushiya e colaboradores em 1999 determinaram os teores de todos os
alcalides do tipo -carbonila por HPLC pela deteco fluoromtrica seletiva.

R
N
H

R
N

CH3

(10) R= H
= Harmana
(11) R= OH
= Harmol
(12) R= OCH3 = Harmina

(13) R= OH
= Harmalol
(14) R= OCH3
= Harmalina

Frmula estrutural dos alcalides encontrados no gnero Passiflora.

480

CH3

O maracuj e suas propriedades medicinais ...

Fitoconstituintes

diversos

Esto presentes em P. incarnata tambm -benzo-pirona derivados de


maltol (Aoyagi et al., 1974a), carboidratos como a rafinose, sacarose, D-glicose e
D-frutose (Gavasheli et al., 1975); leos essenciais contendo hexanol, lcool
benzlico, linalol, lcool 2-feniletil, cido 2-hidroxibenzico-metil-ster, carvona,
trans-anethol, eugenol, isoeugenol, -ionona, -bergamotol, fitol (Buchbauer
et al., 1992), vinte e um aminocidos (Gavasheli et al., 1974b) e um glicosdeo
cianognico ginocardinina (Spencer & Seigler, 1984).

Fitoconstituintes da Passiflora edulis


Glicosdeos
A partir de extratos metanlicos de folhas secas ao ar extrai-se um
ciclopropano triterpeno glicosdeo denominado de Passiflorina.

OH
H

OH

OH

HO

CO2- -D-glucose

Frmula estrutural da Passiflorina extrada de Passiflora edulis.

P. edulis rica em glicosdeos incluindo os flavanides glicosdeos,


luteolina-6-C-chinovosdeo, luteolina-6-C-fucosdeo (Mareck et al., 1991);

481

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

ciclopentenide cianohidrina glicosdeos passicapsina e passibiflorina


(Olafsdottir et al., 1989a, b); glicosdeos cianognicos passicoriacina,
epipassicoriacina e epitetrafillina B (Seigler & Spencer, 1989) rutinosdeo-cianognico {(R)mandelonitrile--L-rhamnopiranosil--D-glicopiranosdeo}
(Chassagne & Crouzet, 1998), amigdalina, prunasina, mandelonitrila
ramnopiranosil-D-glicopiranosdeo, sambunigrina (Chassagne et al., 1996);
6-O--L-arabinopiranosil--D-glicopiranosdeos de linalool, lcool benzlico e 3
metil-but-2en-1-ol (Chassagne et al., 1996); b-D-glicopiranosdeo e 6-O--Lramnopiranosil--D-glicopiranosdeo de metil salicilato e -D-glicopiranosdeo
de eugenol (Chassagne et al.,1997).

Fenis
Foram encontrados at o momento os seguintes compostos fenlicos
em P. edulis:
4-Hidroxi--ionol, 4-oxo--ionol, 4-hidroxi-7,8-dihidro--ionol, 4-oxo-7,8dihidro--ionol, 3-oxo--ionol, 3-oxo retro--ionis isomricos, 3-oxo-7,8dihidro--ionol,3-hidroxi-1,1,6-trimethil-1,2,3,4-tetrahidronaphthalenevomifoliol e
dehidroiomifoliol (Winterhalter, 1990), lcoois terpnicos linalool e a-terpeneol
(Challier et al., 1990), terpeno diis (E) e (Z)-2,6-dimetil-octa-2,7-dieno-1,6diol, 2,6-dimetil-octa-3,7-dien-2,6-diol, 2,6-dimetil-1,8-octanediol, 2,6-dimetilocta-1,7-dieno-3,6-diol e ionol foram identificados derivados oxigenados na
posio 3, e 2,5-dimetil-4-hidroxi-3-(2H)-furanona (furaneol) (Chassagne et al.,
1999). Foram isoladas duas novas iononas I e II (23, 24) (Naf et al., 1977) pela
primeira vez em P. edulis.

Alcalides
Os alcalides descritos para P. edulis so as harmana (10), harmina (11),
harmalina (13) e o harmalol (14). Concentrao elevada de harmana est
presente nas folhas (0,12 mg %) (Lutomski & Malek, 1975; Lutomski et al.,
1975).

482

O maracuj e suas propriedades medicinais ...

Outros

fitoconstituintes

Alm dos glicosdeos, fenol e alcalides esto presentes vrios outros


compostos na espcie P. edulis: Carotenides: fitoeno, fitoflueno, caroteide, licopeno, prolicopeno, monoepoxi--caroteno, -criptoxantina,
-citraurina, anteraxantina, violaxantina, neoxantina (Mercadente et al., 1998),
-caroteno, -caroteno, -criptoxantina, -apocarotenol (Goday &
Rodriguez, 1994). cido l-ascrbico (Wekesa et al., 1996). Antocianinas:
cianidina-3-O--glicopiranosdeo e cianidina-3-O--galactopiranosdeo
(Chang & Su, 1998), cianidina-3-glicosdeo, cianidina-3-6-malonil
glicosdeo, pelargonidina-3-glicosdeo (Kidoey et al., 1997). -Lactonas:
-hexa, -deca e -docecalacetona; -hepta, -octa e -nona lactona (Nitz et
al., 1990), quatro alquilados -lactonas (Bernreuther et al., 1989). Foram
identificados 66 compostos responsveis pelo aroma, dentre eles: steres
(Yamaguchi et al., 1983 revisto por Dhawan et al., 2004), 3-metil-tiohexano-1ol, 2-metil-4-propil-1, 3-oxationa enantimeros (Mosandl & Heusinger, 1983),
edulantes I e II (25, 26) (Whitfield et al., 1974 revisto por Dhawan et al., 2004).
3-metil-2 butanona, etil lactato, dietilmalonato e 3-penten-2-ol, estes ltimos
presentes somente em P. edulis (Jordan et al., 2002). leos volteis: hexil
caproato e butirato e etil caproato e butirato (95%) (Dawes & Paul, 1961),
limoneno (Kuhlmann, 1984), 2-tridecanona (62.9%), cido (9Z)octadecenico (16.6%), 2-pentadecanona (6.2%), cido hexadecanico
(3.2%), 2-tridecanol (2.1%), cido octadecanico (2%) e xido cariofileno
(2%) (Arriaza et al., 1997). Aminocidos: prolina, cido asprtico, cido
glutmico, serina, alanina (Fang & Ling, 1984 revisto por Dhawan et al., 2004).
Carboidratos: frutose, glicose, sacarose, maltose, lactose (Fang & Chang,
1981 revisto por Dhawan et al., 2004) e pectina (Simpson et al., 1984).
Minerais: Na, K, Mg, Ca, Zn, Al, Mn, Fe (Nogueira et al., 1998). Enzimas
citoplsmicas: piruvato quinase (Guo & Li, 1993). Outros compostos:
triterpenos cicloartano, cido ciclopassiflicos AD, saponinas,
ciclopassiflosdeos IVI (Yoshikawa et al., 2000a). Verificou-se na purificao
por cromatografia em slica-gel de folhas e brotos de Passiflora edulis a
presena de cido ciclopassiflico EG, saponinas, ciclopassiflosdeos
VIIXI (Yoshikawa et al., 2000b).

483

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Fitoconstituintes da Passiflora alata


Cinco glicosdeos foram isolados das folhas de P. alata: 3-O--Dglicopiranosil-estigmasterol, o cido 3-O--D-glicopiranosil-oleanlico, o
cido 3-O--D-glicopiranosil-(13)--D-glicopiranosil-oleanlico, o cido 3-O-D-glicopiranosil-(12)--D-glicopiranosil-oleanlico e o 9,19-ciclolanost24Z-en-3b-21,26-di-O-gentiobiose (Reginatto et al., 2001).
A partir da Passiflora alata Dryand foram identificados: C-glicosil
flavonoides 2-xilosilvitexina e pequenas quantidades de vitexina (5),
isovitexina (6) e orientina (7) (Ulubelen et al., 1982a). Contudo, Mller et al.,
2005 no conseguiram identificar na Passiflora alata coletada em Santa Catarina,
Brasil (2001) o flavanide orientina. Da mesma forma, os autores relatam que
no encontraram suitersinina, um flavanide caracterstico de P. incarnata,
hiperosdeos, rutina, hesperidina e cido clorognico.

Fitoconstituintes presentes em outras espcies de


Passiflora
Na Tabela 1, organizada por Dhawan et al. (2004) atualizada, esto
relacionados os fitoconstituintes j identificados para as diferentes espcies do
gnero.
Tabela 1. Fitoconstituintes das vrias espcies do gnero Passiflora.
Espcie

Fitoconstituinte

Passifora actinia Hooker

Isovitexina (Santos et al., 2003)

Passiflora adenopoda Moc. &

Glicosdeos cianognicos linamarina e lotaustraliana

Sesse

(Spencer et al., 1986).

Passiflora ambigua Linn.

Flavonide saponarina (Ulubelen et al., 1982b).

Passiflora apetala Linn.

Glicosdeo cianognico passibiflorina (Olafsdottir

Passiflora biflora Domb.

et al., 1997).
O- e C-glicosilflavonas; 4-O-rhamnosilswertisina,
luteolina-7- O-neohesperidosdeo juntamente com

Continua...

484

O maracuj e suas propriedades medicinais ...

Tabela 1. Continuao.
Espcie

Fitoconstituinte
suertisina, suertiajaponina, 4-O-rhamnosilsuertiajaponina, 2-Orhamnosilisoorientina e 2-O-ramnosilisovitexina
(McCormick& Mabry, 1983); glicosdeos cianognicos
passibiflorina e epipassibiflorina (Spencer & Seigler,
1985a).

Passiflora bryonioides H.B.K

Derivados flavona saponaretina, vitexina, apigenina-7monoglicosdeo e dois kaempferol-3-biosdeos


(Poethke et al., 1970). Alcalide harman (Poethke et
al., 1970).

Passiflora caerulea Linn.

Uma flavona chrisina (Speroni et al., 1996), glicosdeos


cianognico sulfato tetrafillina B-4-sulfato e
epitetrafillina B-4-sulfato (Seigler et al., 1982)

Passiflora calcarata Mast.

Passiflorina (Bombardelli et al., 1975)

Passiflora capsularis Lam.

Passicapsina; biglicosdeo cianognico 4-bi-

Passiflora coactilis Linn.

C-glicosil flavonas 4-O-glicosil-2-O-rhamnosil orientina,

vinosiltetrafillina B (Fischer et al., 1982)


4- O-glicosil-2-O-rhamnosil-vitexina, vitexina, 4-Oglicosilvitexina, isovitexina, isoorientina, 4-O-glicosil
orientina, 2-O-rhamnosil orientina, scoparina, 2-Orhamnosil scoparina e 8-C-glicosil-diosmetina (Escobar
et al., 1983)
Passiflora coccinea Aubl.

Glicosdeo cianognico passicoccina (Spencer &


Seigler, 1985b)

Passiflora cochinchinensis

Flavonides naringina e apigenina-7-O-glicosdeo;

Spreng.

Aminocidos; carboidratos (Ma et al., 1982)

Passiflora colinvauxii Linn.

Glicosdeo cianognico passibiflorina (Adsersen et al.,


1993)

Passiflora coriacea Fuss.

Glicosdeo cianognico barterina (Olafsdottir et al.,


1989 a b)

Passiflora cyanea Mast.

C-glicosil flavonide 2-xylosilvitexina e coumarina


esculetina (Ulubelen et al., 1981)

Passiflora foetida Linn.

Flavonides pachipodol, 7,4-dimetoxiapigenina,


ermanina, 4,7-O-dimetil-naringenina, 3,5-dihidroxi-4,7-

Continua...

485

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Tabela 1. Continuao.
Espcie

Fitoconstituinte
& Suarez, 1989). C-glicosil flavonides chrisoeriol,
apigenina, isovitexina, vitexina , 2-xilosilvitexina,
luteolina-7--D-glicosdeo, kaempferol (Ulubelen et al.,
1982c); cianohidrina glicosdeos tetrafillina A, tetrafillina
B, tetrafillina B sulfato,
deidaclina, volkenina (Andersen et al., 1993); cidos
graxos cido linolico e cido linolnico (Hasan et al.,
1980); alpha-pirones chamadas passifloricinas
(Echeverri et al., 2001)

Passiflora hybrida Nees.

Um ster de sulfato de tetrafillina B (Jaroszewski &


Fog, 1989)

Passiflora indecora H.B.K

Glicosdeo cianognico passibiflorina (Olafsdottir et al.,


1997)

Passiflora laurifolia Linn.

cido Pantotnico, cido ascrbico (CSIR, 1966b)


Vitamina C (Suntornsik et al., 2002)

Passiflora lechenaultii DC

Passiflorina (Bombardelli et al., 1975)

Passiflora lutea Linn.

Glicosdeos cianognicos linamarina, lotaustralina e


passibiflorina (Spencer & Seigler, 1985a)

Passiflora menispermifolia

Flavonides vitexina, orientina, 6-hidroxi luteolina 6,7-

H.B.K

dimetil ter e luteolina-7--D-glicosdeo; coumarina


esculetina (Ulubelen et al., 1981)

Passiflora molliseria DC

cido ascrbico (Uzcategui, 1985)

Passiflora mollissima Bayley

Passiflorina; constituintes volteis: 30 hidrocarbonetos


alcanos, alcenos, aromticos e terpenos; 4 aldedos; 11
cetonas; 36 alcois; 4 lactonas, 5 cidos graxos; 47
sters (Froehlich et al., 1989)

Passiflora morifolia Mast.

Glicosdeo cianohidrina linamarina (Olafsdottir et al.,

Passiflora oerstedii Mast.

Flavonide C-glicosil 2-xilosilvitexina; Esteris -

1992)
sitosterol e seu 3--D-glicosdeo; acares glicose,
frutose, galactose (Ulubelen et al., 1981)
Passiflora palmeri Linn.

Flavonides quercetina-7, 3-dimetil ter, isoscoparina,


isovitexina, apigenina-7-glicosdeo, vitexina, chrisoeriol,
isoscutellareina-8-metil ter, quercetina, isorhamnetina,

Continua...

486

O maracuj e suas propriedades medicinais ...

Tabela 1. Continuao.
Espcie

Fitoconstituinte
dimetoxiflavanona (Echeverri & Suarez, 1985; echeverri
luteolina, isoorientina, luteolina-7-glcosdeo, selagina, 6metoxi kaempferol, vicenina-2, 2-O-glicosil vitexina, 2O-rhamnosil vitexina e uma flavona tricetina 4-metil ter
(Ulubelen et al., 1984)

Passiflora pavonis Mast.

Flavonas C-glicosil isovitexina, isoorientina, isoorientina4-- D-glicosdeo, luteolina-7--D-glicosdeo


(McCormick & Mabry, 1981)

Passiflora pendens Linn.

Linamarina, lotaustraliana, linustatina e neolinustatina


(Spencer et al., 1986)

Passiflora pittier

Flavonides C-glicosil isovitexina, 2"-xilosil vitexina, uma


mistura de vicenina-2, schaftosdeo e isoschaftosdeo,
luteolina-7-O-glicosdeo e cido clorgnico (Ulubelen et
al., 1982a)

Passiflora platyloba Fuss.

C-glicosdeos vitexina, isovitexina, isomollupentina (6-Carabinosil-apigenina), isovitexina-7-rhamnosilglicosdeo


e isomollupentina-7-rhamnosilglicosdeo (Ayanoglu et
al., 1982)

Passiflora quadrangularis

Passiflorina (Bombardelli et al., 1975); triterpeno

Linn.

glicosdeo quadrangulosdeo (Orsini et al., 1986), cido


oleanlico 3-sophorosdeo (Orsini et al., 1987)
Monoterpenides: (2E)-2,6-dimetil-2,5 cido
heptadienico, (2E)-2,6 dimetil-2,5 hepta
cido dienico--D-glicopiranosil ster, (5E)-2,6dimetil-5,7-octadieno-2,3-diol e (3E)-3,7 dimetil-3octeno-1,2,6,7-tetrol (Osorio et al., 2000)

Passiflora racemosa Brot.

ster de sulfato de tetrafillina B (Jaroszewski & Fog,


1989)

Passiflora sanguinolenta

Flavonides isovitexina, luteolina-7-O-glicosdeo e 7-O-

Mast & Linden

galactosdeo, xilosil vitexina, apigenina, apigenina-7-Oglicosdeo e luteolina (Ulubelen & Mabry, 1983)

Passiflora serratifolia Linn.

Flavonides C-glicosil vitexina, isovitexina, orientina, 2xilosil vitexina e 2-xilosil isovitexina (Ulubelen & Mabry,
1980)

Continua...

487

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Tabela 1. Continuao.
Espcie

Fitoconstituinte

Passiflora serratodigitata Linn.

Serratina I (40) e suas 7--glicosdeo; C-glicosilflavona


2- xilosilvitexina, 2-xilosilisovitexina, vitexina,
isoorientina, vicenina e orientina (Ulubelen et al., 1982b)

Passiflora sexflora Fuss.

Flavonides 6-di-C-glicosilflavonas, 6-mono-Cglicosilflavonas, luteolina-7-O-glicosdeo, luteolina


(McCormick & Mabry, 1982)

Passiflora suberosa Linn.

Glicosdeo cianognico passisuberosina,


epipassisuberosina (Spencer & Seigler, 1987);
Antocianinas cyanidina-3-(6-malonilglicosdeo), 3glicosdeo de cianidina, delphinidina,
petunidina, pelargonidina e antocianina acetilada com
cido malnico (Kidoey et al., 1997)

Passiflora subpeltata Orteg.

Glicosdeo cianognico barterina (Olafsdottir et al.,


1989 a, b)

Passiflora talamansis

Glicosdeo cianognico passibiflorina e epipassibiflorina


(Spencer & Seigler, 1985a)

Passiflora tetrandra Banks &


Soland.
Passiflora trifasciata Lem.
Passiflora trinervia Poir.
Passiflora vespertilio KerGawl
Passiflora violacea Vell.
Passiflora warmingii Mast.

Propriedades

4-Hidroxi-2-ciclopentenona (Perry et al., 1991)


Glicosdeo cianognico passitrifasciatina (Olafsdottir et
al., 1991, Spencer & Seigler, 1985a)
Flavonides vitexina, isovitexina, luteolina-7-Ogalactosdeo,
esculetina, isoorientina (Ulubelen & Mabry, 1983)
Glicosdeo cianohidrina passibiflorina (Olafsdottir et al.,
1997)
Glicosdeo cianohidrina linamarina (Olafsdottir et al.,
1988)
Glicosdeos cianognico linamarina, linustatina (Fischer
et al., 1982, Spencer et al., 1986); glicosdeo
cianohidrina barterina (Olafsdottir et al., 1989 a, b)

Farmacolgicas

As propriedades farmacolgicas das diversas espcies do gnero


Passiflora ainda so pouco conhecidas, e os estudos enfocam principalmente
as espcies comerciais.

488

O maracuj e suas propriedades medicinais ...

Verificou-se o efeito dos extratos de maracuj das espcies Passiflora


alata, P. caerulea, P. edulis e P. incarnata sobre o Sistema Nervoso Central
(SNC), confirmando em grande parte o conhecimento tradicional que indica
plantas desse gnero para controle de alteraes nervosas. Da mesma forma,
constatou-se o efeito antibitico de P. edulis.
Atribui-se principalmente aos flavonides crisina e BZF o efeito contra
ansiedade da Passiflora. Muitos trabalhos mostraram que o mecanismo de
ao seria por afinidade com os receptores GABA-A. Portanto, o efeito dos
princpios ativos do maracuj seria similar ao diazepam, porm dez vezes
menor, sem apresentar efeito miorrelaxante. Contudo, existem controvrsias
quanto ao mecanismo de ao, j que Soulimani et al. (1997) no
conseguiram bloquear o efeito contra ansiedade e sedativo de extratos de P.
incarnata pelo uso de flumazenil, um conhecido agonista de receptores de
benzodiazepnicos, indicando que o efeito poderia no ser mediado por
receptores GABA.
A Passiflora promove um sono similar ao fisiolgico, acompanhado de
rpido despertar sem embotamento matinal. A crisina apresentou tambm
atividade anticonvulsivante relacionada com os receptores cerebrais
benzodiazepnicos.

Passiflora alata, PPassiflora


assiflora caer
ulera, PPassiflora
assiflora edulis e
caerulera,
Passiflora actinia
Um grupo de pesquisadores brasileiros realizou estudos com folhas de
Passiflora alata em camundongos (Oga et al., 1984). O extrato das folhas foi
extrado de acordo com o procedimento descrito na Farmacopia Francesa,
VIII edio (Pharmacopee Francaise, 1965) foi evaporado sob presso
reduzida a 50C. O extrato seco foi ressuspenso em gua para os estudos
farmacolgicos. Administrao intraperitonial de 150 mg/kg do extrato reduziu
a induo espontnea da atividade dos nervos motores, mediada pela
anfetamina, prolongou o sono induzido por pentabarbital 150 mg/kg i.p. e
aumentou o on set time e o tempo de sobrevida no tratamento com o
convulsivo pentilenotetrazol. A dosagem 75 e de 150 mg/kg apresentou

489

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

potente efeito analgsico equivalente ao analgsico-padro indoprofeno.


Todos os efeitos farmacolgicos observados foram doses dependentes. A LD
50 desse extrato foi de 456 mg/kg. Foi demonstrado, recentemente, o efeito
contra a ansiedade de extratos de folha em lcool hidratado de Passiflora
alata e Passiflora edulis, confirmando o conhecimento popular sobre o
assunto.
O efeito da crisina um dos monoflavanides presentes na Passiflora
caerulea foi examinado em camundongos (Wolfman et al., 1994). Crisina na
dosagem de 1 mg/kg reduziu significativamente a ansiedade nos
camundongos. Comparada ao diazepam (6 mg/kg), observou-se que a
crisina mostra efeito anti-ansioltico, mas no o de miorrelaxante nas doses de
0,6

30

mg/kg.

crisina

foi

encontrada

ligando

receptores

benzodiazepnicos do Sistema Nervoso Central e Perifrico (Medina et al.,


1990). Quando administrado na rota cerebrovascular, a crisina previne a
expresso da crise induzida pelo convulsivo pentilenetetrazol, confirmando a
presena de compostos do tipo benzodiazepnicos no maracuj P. caerulea.
Maluf et al. (1991) e Dhawan et al.( 2004) demonstraram que algumas
amostras de extratos aquosos de Passiflora edulis apresentaram efeito de
depresso do Sistema Nervoso Central no especfico em camundongos,
ratos e voluntrios humanos saudveis. Do et al. (1983) notaram que extratos
aquosos de P. edulis prolongam o efeito de barbitricos e o sono induzido
pela morfina em camundongos, mesmo quando existe bloqueio parcial
induzido por estimulantes anfetamnicos.
A Passiflora actinia, nativa do Brasil, apresenta composio semelhante
da Passiflora incarnata (Santos et al., 2003). Injees intraperitoniais de
extratos hidroalcolico, metanlico e aquoso-metanlico proporcionaram
efeito sedativo e catalptico em camundongos (Santos et al., 2005).
Fora do contexto voltado para o SNC, verificou-se o efeito antifngico
de extratos P. edulis contra Microsporum gypseum, Chrysosporium tropicum e
Trichophyton terrestre (Qureshi et al., 1997), validando o conhecimento
popular.

490

O maracuj e suas propriedades medicinais ...

Passiflora

incarnata

Passiflora incarnata a espcie mais conhecida pela medicina popular


por seu efeito sedativo e controlador da ansiedade. Analisando os
componentes que possivelmente seriam responsveis por essas propriedades,
verificou-se a presena de maltol, um derivado -benzo proprinico e o etilmaltol. Testes realizados com camundongos mostraram que esses
compostos, isolados de P. incarnata, potencializaram a induo do sono por
hexobarbital, apresentaram efeito inibidor da convulso induzida pelo
pentilenetetrazol e tambm promoveram o decrscimo da hiperatividade
induzida por anfetamina (Aoyagi et al., 1974). Etil-maltol foi descrito como
sendo um anticonvulsivo mais potente que o maltol. Contudo, em relao ao
decrscimo da atividade motora, o maltol apresentou-se mais potente.
O efeito neurofarmacolgico de fluidos extrados de Passiflora incarnata
foram avaliados em ratos (Speroni & Minghetti, 1988). Para tanto, fez-se a
extrao etanlica de folhas e brotos de P. incarnata em aproximadamente
50% de gua. O extrato liofilizado foi ressuspenso em soluo salina para as
avaliaes farmacolgicas. Injees intraperitoniais de 80 a 160 mg/ kg desse
extrato prolongaram significativamente o tempo de sono dos camundongos e
tambm protegeu os animais do efeito convulsivo causado pelo
pentilenetetrazol, aumentando o on set time e a sobrevida do animal tratado
com PTZ. O tratamento com o extrato resultou no decrscimo da atividade
locomotora induzida por anfetamina na forma de dose dependente e tambm
aumentou a latncia tail-flick nos ratos dose de 160 mg/kg.
Zanoli et al. (2000) atriburam o efeito biolgico contra ansiedade e o
efeito sedativo principalmente ao flavanide crisina. Entretanto, os autores no
descartaram a possibilidade de outros compostos presentes no extrato estarem
contribuindo para o efeito observado. No estudo, a administrao de crisina nos
ratos, na dosagem de 50 mg/kg via intraperitonial, no influenciou o tempo de
sono induzido pelo pentobarbital. Contudo, observou-se decrscimo da
atividade motora com a dosagem de 25 mg/kg e tambm manifestao do efeito

491

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

contra ansiedade no teste que avalia o aumento do tempo de latncia


compartimento claro/escuro quando administrada a dosagem de 1mg/kg.
De acordo com Dhawan et al. (2004), as discrepncias dos resultados
de trabalhos constantes na literatura, quanto aos efeitos farmacolgicos e
princpios ativos presentes na espcie P. incarnata, poderiam ser conseqncia
da dificuldade de se classificar a espcie corretamente. Segundo esses
autores, a grande semelhana entre a Passiflora incarnata e a Passiflora edulis
justificaria a confuso. Estudos realizados por Dhawan et al. (2001b) com
espcimes de P. incarnata e P. edulis certificadas mostraram que somente os
extratos de P. incarnata induziram os efeitos farmacolgicos contra ansiedade
em camundongos. Esses autores obtiveram extratos por diferentes protocolos
e testaram o efeito anti-ansioltico nos modelos animais: camundongos, ratos
e cobaias. Extrato metanlico de P. incarnata mostrou efeito anti-ansioltico a
125 mg/kg enquanto P. edulis no apresentou efeito significativo independente
do tipo de extrato ou modelo animal.
Dhawan et al. (2001b) tambm verificaram que nas folhas de P. incarnata
que se concentra maior quantidade dos princpios ativos responsvel pelo efeito
contra ansiedade. A extrao das folhas realizada com metanol apresentou maior
atividade anti-ansiollica em camundongo (100 mg/kg), seguida das preparaes
de meristema (125 mg/kg), flores (200 mg/kg) e razes (300 mg/ kg). A
administrao durante sete dias do extrato de folhas preparado com metanol
mostrou significativa propriedade antiespasmdica induzida pela acetilcolina
clorada em cobaia. Dhawan et al. (2003b) postularam que, por causa da
influncia que extratos das folhas de P. incarnata teriam sobre os receptores adrenrgicos, possivelmente, o extrato teria ao antiasmtica.
Extratos das folhas de P. incarnata obtidos com metanol tambm
apresentaram efeito afrodisaco em camundongos machos, conforme observado
pelo elevado nmero de monta, na presena de fmeas, fora do perodo de
reproduo, em relao ao grupo controle (Dhawan et al., 2002a).

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O maracuj e suas propriedades medicinais ...

Variaes no efeito contra ansiedade tambm foram observados entre


os extratos obtidos da parte area e diversas tinturas-me de P. incarnata
adquiridas no mercado homeoptico indiano (Dhawan et al., 2001a). Os
autores atriburam essas diferenas s variaes genticas das plantas usadas
nas preparaes e nas metodologias utilizadas para obteno dos extratos.
O fracionamento de extratos metanlicos de folhas de P. incarnata
mostrou a presena de benzoflavanide (BZF) que em camundongos
apresentou acentuada atividade contra ansiedade (10 mg/kg) (Dhawan et al.,
2001d, e, f; Dhawan, 2002). Esse composto, no descrito anteriormente para
P. incarnata, apresentou outras propriedades importantes alm do efeito antiansioltico. Os autores mostraram que a administrao do BZF juntamente
com morfina retardou o desenvolvimento de tolerncia aos efeitos analgsicos
da morfina, (Dhawan et al., 2004). O uso concomitante do BZF em
camundongos, submetidos a tratamentos com nicotina, canabinide, lcool e
diazepan, mostrou a no-dependncia qumica dos animais (Dhawan et al.,
2002d, Dhawan et al., 2004). O BZF tambm foi til para prevenir o declnio da
libido, fertilidade e virilidade de ratos machos induzido pelo uso de drogas
(Dhawan et al., 2002f; Dhawan et al. 2003a).
A administrao de crisina de P. caerulea (1 mg/kg) e BZF de P.
incarnata, (10 mg/kg) proporcionou efeito andrognico e testosterognico em
ratos de dois anos de idade. Observou-se o aumento da libido nos animais,
elevao do nmero de espermatozides e capacidade de fertilizao.
Portanto, os flavanides do maracuj agem como um potente fitoestrgeno
apresentando potencial para ser aplicado contra os efeitos negativos da idade
(Dhawan et al., 2002b).

Toxicologia
Maracujs e derivados so, em geral, considerados seguros, apesar da
presena de compostos cianognicos nas espcies de Passiflora (Jones, 1998).

493

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

A FDA americana, responsvel pelo controle de medicamentos nos


Estados Unidos, relatou 15 casos de intoxicao decorrente do consumo de
medicamentos em que espcies de Passiflora figuravam como um dos
constituintes (USFDA, 2000 revisto por Dhawan et al., 2004). Nos registros,
descrevem-se ocorrncia de taquicardias e palpitao, dores de cabea,
embolia pulmonar, hepatite, diarria, pneumonia, hemorragia intracerebral,
hemorragia com dificuldade na fala entre outras alteraes. Contudo, no h
evidncias de que os desconfortos tenham sido causados pela Passiflora. Da
mesma forma, a passiflora figurou na composio de um medicamento que
ocasionou bito de um paciente automedicado. Gow et al. (2003) relataram
que o bito foi ocasionado pelo componente Piper methysticum e no pela
Passiflora incarnata presente na formulao.
Passiflora adenopoda apresenta HCN no pericarpo; arilo, nas frutas
verdes; e, no meristema primrio, pecolo, brcteas (Saenz & Nassar, 1972).
Alguns indivduos que trabalham manuseando frutos de maracuj
apresentaram

alergia

ocupacional

induzida

por

Passiflora

alata,

desenvolvendo quadro de rinite e asma (Giavina et al., 1997).


Maluf et al., 1991 mostraram que Passiflora edulis pode gerar distrbios
hepticos e toxidade pancretica em animais e humanos.
P. incarnata listada como planta medicinal segura pela FDA
americana no existindo informes de toxicidade registrados para essa espcie
ou qualquer contra indicao (Dhawan et al., 2004). Contudo, Fischer et al.
(2000) relatam o caso de uma paciente de 34 anos que desenvolveu um
quadro com severas nuseas, taquicardia ventricular aps automedicar-se
com P. incarnata. A revista American Magazine US Pharmacist desencoraja o
uso de P. incarnata em lactantes (US Pharmacist, 2001 revisto por Dhawan et
al., 2004). Devido presena dos alcalides passiflorina e harmina, a planta
foi classificada como txica pela publicao da Environmental Toxicological
Newsletter (1983) da Universidade da Califrnia. O consumo prolongado de
extratos de P. incarnata foi proibido na Austrlia em 1998 por causa dos efeitos

494

O maracuj e suas propriedades medicinais ...

colaterais potenciais que alcalides do tipo harmana apresentariam a longo


prazo (Dhawan et al., 2004).

Propriedades do Maracuj como alimento funcional


Entende-se por alimento funcional aqueles que trazem um benefcio a
mais para a sade quando consumidos. No so considerados
medicamentos, pois os princpios responsveis pelos efeitos benficos no
so extrados do alimento.
Para que um alimento seja considerado funcional, segundo as
Diretrizes Bsicas para Avaliao de Risco e Segurana dos Alimentos,
necessrio: comprovar as propriedades benficas em humanos, segurana
de uso na dosagem recomendada, rotulagem com a forma de utilizao e
dosagem de ingesto para obter os efeitos desejados (Araujo & Lopes, 2005).
No Brasil, o fruto fresco e o suco da polpa do maracuj P. edulis so
consumidos tradicionalmente pelo efeito tranqilizante, contudo, essa
informao carece de comprovao cientfica. Todavia, estudos com animais
de laboratrio demonstraram o potencial do maracuj como alimento
funcional para outras finalidades. Verificaram-se os benefcios da farinha de
casca de maracuj no tratamento complementar da obesidade e diabetes em
dietas suplementadas (Araujo & Lopes, 2005). Chau & Huang (2005)
mostraram que hamsteres alimentados com fibras obtidas de sementes de
Passiflora edulis apresentaram reduo significativa de triglicerdeos,
colesterol total e colesterol no fgado, tiveram aumento de lipdeos e cidos
biliares nas fezes, indicando que as fibras do maracuj podem ser um
potencial ingrediente rico em fibras com propriedade hipocolesterolmicas
para a alimentao humana.
As variedades comerciais de maracuj so ricas em alcalides,
flavonides e carotenides, minerais e vitaminas A e C, substncias
responsveis pelo efeito funcional em outros alimentos (Casimir et al., 1981;
Suntornsuk et al., 2002; Dhawan et al., 2004). Apesar do grande potencial do
maracuj como alimento, ainda so poucos os estudos existentes, o que
impede que o fruto seja comercializado como tal.

495

Maracuj: germoplasma e melhoramento gentico

Concluses
Espcies de maracujs so conhecidas no mundo inteiro por diversas
propriedades medicinais. Atualmente, os estudos

concentram-se na

determinao da composio fitoqumica das diferentes espcies e


farmacologia voltada para validao do conhecimento popular.
Variaes qualitativas e quantitativas nos alcalides e flavanides,
fenis, cianoglicosdeos justificam as propriedades medicinais diferenciadas.
Entre as espcies tradicionalmente usadas para controlar alteraes do
sistema nervoso, a Passiflora incarnata mostrou-se a mais eficiente contra a
ansiedade. J a Passiflora edulis apresentou efeito antifngico e a Passiflora
tetrandra propriedades bactericidas.
Como alimento funcional, as espcies comerciais mostraram-se ricas
em vitaminas, principalmente A e C, alcalides e flavanides que so
princpios funcionais importantes em outros alimentos. As fibras do maracuj
apresentam potencial no controle da obesidade, diabetes e controle de taxas
de colesterol.
Contudo, a grande maioria das espcies do gnero Passiflora ainda no
foi estudada quanto s propriedades medicinais e funcionais. Mesmo para as
espcies mais conhecidas, faltam estudos que comprovem os efeitos
medicinais e funcionais em humanos.
O gnero Passiflora, portanto, apresenta imenso potencial para a
gerao de novos frmacos e produtos benficos sade. A pesquisa nessa
rea certamente contribuir para a melhoria da qualidade de vida da
populao mundial.

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