Para cualquier métode colorimético es mecesario realizar una curva patron que fa de apeya en la determination de la concentracién de la proteina de una 9 varias uestras problema. La curva se elabora con una disolucion de proteina cuya ncentracion es conacids. come la albimina de suero bovine. mUETIVOS ‘Conocer la técnica de Biuret para la determinacién de la cantidad de proteina en una muestra biotégica. Determinar el rendimiento y pureza de una proteina purificada: la caseina. Apreciar ef uso de las téenicas especirafotomerricas para cuanuficar productos bioldgicos. MATERIAL EQUIPO: 1 graditia Balanza analitica 1S tubos de ensaye Espectrofotémetro y celaas 2 vasos de precipitados de 100 mt Micropipetas de 1000, 250 y 20 pL REACTIVOS: Puntas para micropipetas NaCl 156 I piceta Reactivo de Biutet* J matraz de $0 mL Agua destitaca 1 prabeta de 50 mt NaOH 1 N [diluir deta disolucin 10) Lespatuta Albamina bovina 10: mg/mL. 2 vidrias de relo) {preparar 50 mL en el memento} 2 pipetas serolsgicas de 1 mt 2 pipetas serotagicas de § mb tOCEDIMIENTO sterminacién cuantitative de ts casein Pesar 200 mg dee la caseina obtenida en la préctica anterior y colocaria en un vaso de Preciptados de 100 ml. Anadir 30 mL de disolucion de NaC! al 1%, agregar gota a gota fa disolucion concentrada de NaOH IN hasta completar la disolucién dé la proteinaar la digotucién anterior a un matraz aforado Ge SO mi y aforar. Esta es tolucién problema y de ella se tomaran alicuotas, cender cl espectrofotometro. eterminar proteinas en las siguientes fracciones de ta practica 2.1: um mL d brenadante obtenide en el paso 6, un mL de leche diluida 1:4 del paso 3 y unm Ja disolucién problema. parary etiquetar 10 tubos de ensaye de acuerdo ala siguiente tabla: aaren de Oo 025 050 O75 100 1.25 . - - - wbamina fm} | Wal (mt) |6.00 $75 $50 525 500 475 S50 500 5.00 5.00 Disohucian | 1 | j ] ] woblema de taseina | obtersicta [ml] Jisolucion iobrenadante | - = . 2 = 7 7 7 1000 - mL] weche diluida 4 [mp teactive de 3iuret (mL) ee wbar 1S minutes. { jramos de proteinal como variable independiente (en el eje de las X) y la afl bencia como variable dependiente (en el eje de tas ¥). rizar la. curva usando minimas cluddrados. oe?LUANTIFICACION DE PROTEINAS NTRODUCCION ‘ara el estudio de la estructura de una proteina, de ja actividad de una enzima o ontenido proteinica de un alimento, es necesario conocer cuantitativamente oncentracién de las proteinas. Se han desarroliado diferentes técnicas que se basan en la formacion de comple): oloridos entre las proteinas y reactivos especificos. METODO VENTAJAS: APLICACIONES im detec Tao | aaa Bradford ee GEMIES | Muestras que contienen agentes reductores, Mayormente usado Lowry Util para cuantificar pro- teinas de membrana P. tre juenas Espectrofotomeétrico are MBER ae: Pee ¥ No hay pérdicta de muestra | vatlosas Otra de estas téonicas es la cuantificacién de proteinas con ef reactivo de Biurt jue al formar el complejo colorido tiene un maximo de absorcién a 540 nm, La cuantificacién de proteinas usando el reactivo dé Biuret es un métode mi itlizado por ser sencilla, rapido y econdmico. El reactivo de Biuret es una solucié Kalina de cobre que forma un complejo de color azul purpura, con tos enact veptidicos de las proteinas. ee