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MICROBIOLOGIA

BSICA

autor

CAMILO DEL CISTIA

1 edio
SESES
rio de janeiro 2015

Conselho editorial sergio augusto cabral; roberto paes; gladis linhares


Autor do original camilo del cistia
Projeto editorial roberto paes
Coordenao de produo gladis linhares
Projeto grfico paulo vitor bastos
Diagramao bfs media
Reviso lingustica jssyca rozangela de andrade
Reviso de contedo cleide rezende
Imagem de capa absente | dreamstime.com

Todos os direitos reservados. Nenhuma parte desta obra pode ser reproduzida ou transmitida
por quaisquer meios (eletrnico ou mecnico, incluindo fotocpia e gravao) ou arquivada em
qualquer sistema ou banco de dados sem permisso escrita da Editora. Copyright seses, 2015.
Dados Internacionais de Catalogao na Publicao (cip)
C579m Del Cistia, Camilo

Microbiologia bsica / Camilo Del Cistia

Rio de Janeiro : SESES, 2015.

156 p. : il.

isbn: 978-85-5548-119-2

1. Microbiologia. 2. Biologia molecular. 3. Antibioticoterapia.

I. SESES. II. Estcio.


cdd 576

Diretoria de Ensino Fbrica de Conhecimento


Rua do Bispo, 83, bloco F, Campus Joo Ucha
Rio Comprido Rio de Janeiro rj cep 20261-063

Sumrio
1. Evoluo da Microbiologia

Objetivos 10
1.1 Histria da evoluo da Microbiologia
11
1.1.1 As primeiras observaes
11
1.1.2 A importncia da Microbiologia
15
1.1.3 Quem descobriu os microrganismos?
15
1.1.4 O que biognese e abiognese ou gerao espontnea?
16
1.2 Classificao dos microrganismos
17
1.3Clula
18
1.4 Classificao dos 5 reinos
20
1.5 Principais caractersticas dos grupos de microrganismos
20
1.6 Caractersticas das bactrias
23
1.6.1 Caractersticas gerais das bactrias
23
1.6.1.1Tamanho
24
1.6.1.2Morfologia
24
1.6.1.3 Estruturas bacterianas
25
1.6.1.4 Parede celular
26
1.6.1.5 Membrana citoplasmtica
26
1.6.1.6 Estruturas externas a parede celular
27
1.7 Diviso das bactrias
30
1.7.1 Fungos e virus
31
1.7.2 Caractersticas dos fungos em relao s bactrias
31
1.7.3 Modo de vida dos fungos de acordo com o tipo de alimentao 32
1.7.4 Tipos de reproduo
33
1.7.5 Diversidade morfolgica dos fungos
33
Reflexo 36
Referncias bibliogrficas
37

2. Fisiologia Bacteriana e
Metabolismo Bacteriano

39

Objetivos 40
2.1 Fisiologia Bacteriana e Metabolismo Bacteriano
41
2.1.1 Elementos da nutrio microbiana, ecologia e crescimento.
41
2.1.2 Fontes dos nutrientes essncias
41
2.1.2.1Macronutrientes:
41
2.1.2.2Micronutrientes:
42
2.1.3 Estudo do crescimento microbiano
43
2.1.4 Meios de Cultura
43
2.1.5 Fatores de crescimento
44
2.1.5.1 Classificao dos meios de cultura:
44
2.1.6 Influncia de fatores ambientais
45
2.2 Estudo do crescimento microbiano
47
2.2.1 Reproduo bacteriana
47
2.2.2 Modo de reproduo
47
2.2.3 Curva de crescimento bacteriano
47
2.3 Metabolismo Bacteriano
49
2.3.1 Obteno de energia
49
2.3.2Fermentao
49
2.3.3Putrefao
50
2.3.4 Respirao celular
50
2.4 Reaes catablicas para obteno de energia
53
2.4.1Gliclise
2.4.2 A Via Pentose Fosfato
2.4.3 A Via Entner-doudoroff
2.5 Reaes anablicas para formao de macromolculas
2.5.1 Biossntese de Purinas e Pirimidinas
2.5.2 Vias intermedirias ou anfiblicas
2.6 Diversidade metablica microbiana
2.7 Princpios de Biologia Molecular Microbiana
2.7.1 Viso geral sobre genes
2.7.2 A estrutura e funo do DNA

54
56
56
57
57
57
57
58
59
60

2.7.3 A estrutura do DNA fornece um mecanismo


para Hereditariedade
2.7.4 DNA replicao, reparo e recombinao.
2.7.5 Replicao do DNA
2.7.6 Sntese e processamento do RNA
2.7.7 Sntese de protenas
Referncias bibliogrficas

62
63
63
66
68
70

3. Gentica
Bacteriana 73
Objetivos 74
3.1 Gentica bacteriana
75
3.1.1Mutaes
76
3.1.2Recombinao
76
3.1.3 Controle da expresso gnica em procariotos
80
3.1.4 Por que regular a expresso gnica?
81
3.1.5 Como os procariotos regulam a expresso gnica?
81
3.1.6 Regulao negativa e positiva
82
3.1.7 Regulao da atividade enzimtica
83
3.1.7.1 Operon Lac
84
3.1.7.2 Operon ARA
87
3.1.7.3 Operon TRP
90
Referncias bibliogrficas

4. Histrico da Antibiticoterapia

92

93

Objetivos 94
4.1 Histrico da antibiticoterapia
95
4.2 Origem dos Antibiticos
96
4.2.1 Classificao Qumica
98
4.2.2 Classificao segundo o espectro de ao
100
4.2.3 Classificao segundo seu mecanismo.
101

4.2.3.1 Antibiticos que Interferem na Sntese da Parede Celular:


4.2.3.2 Antibiticos que Interferem na Sntese das Protenas :
4.2.3.3 Parede celular, ao do antibitico:
4.2.3.4 Mecanismo de ao:
4.2.3.5 Antibiticos que interferem na funo da
membrana citoplasmtica:
4.2.3.6 Antibiticos que interferem na sntese dos cidos nuclicos:
4.2.3.7 Antibiticos que interferem na sntese das protenas:
4.2.3.8 Antibiticos que interferem na Sntese de cidos Nuclicos.
4.2.3.9 Mecanismo de ao:
4.2.3.10 Antibiticos que inibem a sntese de protenas.
4.2.3.11 Antibiticos que atuam determinando
a sntese de protenas anmalas.
4.2.4 Caractersticas de um antibitico.
4.2.5 Sugesto de Aula prtica
4.2.5.1 Suscetibilidade e resistncia dos microrganismos.
4.2.5.2 Indicaes do antibiograma
4.2.5.3 Mtodos utilizados nas provas de sensibilidade
Referncias bibliogrficas

5. Mtodos de Controle de
Crescimento Microbiano

101
101
101
102
102
103
103
103
105
105
107
108
110
111
111
112
114

115

Objetivos 116
5.1 Mtodos de controle de crescimento microbiano
117
5.1.1 Mtodos Fsicos de controle:
117
5.1.2 Mtodos Qumicos de controle
118
5.1.3Terminologias
120
5.1.4 A microbiota humana: generalidades.
121
5.1.5 Microbiota da pele
122
5.1.6 Microbiota da conjuntiva
123
5.1.7 Microbiota do esfago
124
5.1.8 Microbiota do estmago
124
5.1.9 Microbiota do trato intestinal
125

5.1.10 Efeito protetor da microbiota intestinal


127
5.1.11 Microbiota do trato urinrio
128
5.1.12 Microbiota vaginal
128
5.1.13 Efeito protetor da microbiota vaginal
129
5.1.14 Microbiota da nasofaringe
130
5.1.15 Microbiota da cavidade oral
131
5.1.16 Placa bacteriana
132
5.1.17 Efeito protetor da microbiota bucal
133
5.2Probiticos
133
5.3Prebiticos
136
5.3.1Disbiose
137
5.3.2 Efeitos atribudos aos probiticos e prebiticos
137
5.3.3Simbiticos
138
5.3.4 Efeitos fisiolgicos dos probiticos e prebiticos
138
5.3.5Nutrio
139
5.4 Principais doenas causadas por bactrias:
140
5.4.1 Tuberculose: Agente: Mycobacterium tuberculosis,
bacilo de Koch.
140
5.4.2 Hansenase: Agente: Mycobacterium leprae. 140
5.4.3 Ttano: Agente: Clostridium tetani. 140
5.4.4 Clera: Agente: Vibrio cholerae.
141
5.4.5 Difteria: Agente: Corynebacterium diphteriae , ou
bacilo de Klebs Lfler.
141
5.4.6 Coqueluche: Agente: Bordetella pertussis.
142
5.4.7 Botulismo: Agente: Clostridium tetani.
142
5.4.8 Febre tifide: Agente: Salmonella typhi. 142
5.4.9 Escarlatina: Agente: Streptococcus pyogenes. 142
5.4.10 Sfilis: Agente: Treponema pallidum. 143
5.4.11 Processos supurativos: Agente: Estafilococos, e estreptococos. 143
5.5 Doenas causadas por fungos
144
5.5.1Diagnstico
146
5.5.2Preveno
146
5.5.3Tratamento
147
5.6 Infeco hospitalar e sua relao com a microbiota normal
148
5.6.1 Fatores de Virulncia Bacteriana
150

5.6.2 Colonizao, Adeso e Invaso


5.6.3 Aes Patognicas das Bactrias
5.6.4 Mecanismos de Escape
5.6.5 Engenharia Gentica e Biotecnologia
5.6.6 Grandes reas da biotecnologia
Referncias bibliogrficas

151
151
151
152
153
155

1
Evoluo da
Microbiologia

OBJETIVOS
1.

Reconhecer a importncia da descoberta do microscpio para a Microbiologia.

2.

Diferenciar a abiognese da biognese.

3.

Identificar a importncia de Louis Pasteur para a abiognese.

4.

Identificar o incio da Microbiologia e a sua importncia para a nossa vida.

5.

Identificar a clula como unidade comum a todos os seres vivos, bem como sua estrutura.

6.

Reconhecer os reinos Monera, Protista, Plantae, Animalia e Fungi.

7.

Identificar as caractersticas dos reinos Monera, Protista, Plantae, Animalia e Fungi.

8.

Identificar as caractersticas das bactrias com relao ao tamanho, a morfologia e as

estruturas da sua clula.


9.

Identificar e listar as caractersticas das clulas dos fungos.

10. Diferenciar os fungos unicelulares dos multicelulares.


11. Compreender a diferena entre um fungo perfeito e um fungo imperfeito.
12. Identificar os fungos quanto a sua forma de vida e como eles obtm alimentos.
13. Listar as caractersticas e estruturas morfolgicas dos fungos.

10

captulo 1

1.1 Histria da evoluo da Microbiologia


Para compreender o atual estgio da Microbiologia, precisamos conhecer como
ela chegou at onde estamos atualmente. Os primeiros cientistas que optaram
por estudar Microbiologia foram motivados, no decorrer de suas descobertas,
por competio, inspirao e sorte. Houve conceitos errneos que levaram a
verdade e verdades que no foram inicialmente reconhecidas.

1.1.1 As primeiras observaes


WIKIPEDIA

Robert Hooke (Figura 1.1): o Ingls Robert


Hooke descreveu em 1665, a estrutura celular da cortia e publicou Micrographia, sobre
suas descobertas em tica e iniciando suas
anlises dos efeitos do prisma, esferas e lminas, com a utilizao do microscpio. Com
o microscpio tambm deu importante contribuio ao estudo da estrutura das clulas,
devendo-se a ele a origem deste termo. Hooke
foi capaz de visualizar as clulas individualmente. A descoberta de Hooke marcou o in- Figura 1.1 Robert Hooke
cio da teoria celular - todos os seres vivos so (1635-1703)
compostos de clulas. Investigaes posteriores sobre a estrutura e funcionamento das clulas teve esta teoria como base.

captulo 1

11

WIKIPEDIA

Anton van Leeuwenhoek (Figura 1.2): o


holands Leeuwenhoek foi, provavelmente,
o primeiro a realmente observar os microrganismos vivos atravs de lentes de aumento.
Entre 1673 e 1723, ele escreveu uma srie de
cartas (mais de 300) Sociedade Real Inglesa
descrevendo o que ele chamou de animlculos que ele via atravs de seu modesto microscpio de uma nica lente. Os desenhos
detalhados sobre os animlculos de guas Figura 1.2 Anton-van-Leeuwenhoek
de rios, saliva, fezes, lquido no qual gros de (1673-1723)

pimenta forma submersos e no material removido de seus dentes, foram identificados com representaes de bactrias e protozorios. Essas cartas alertaram o mundo para a existncia de formas microscpicas de vida e originaram
a microbiologia.

12

captulo 1

WIKIPEDIA

Louis Pasteur (Figura 1.4) era um qumico francs bastante respeitado na poca por seus inmeros
trabalhos cientfico, dedicou seus considerveis talentos ao estudo dos microrganismos. Interessouse pela indstria de vinhos franceses e pela funo
dos microrganismos na produo de lcool. Este
interesse incentivou-o a continuar o debate sobre a
origem dos microrganismos, uma vez que ainda persistia alguns defensores da gerao espontnea ou
abiognese, a exemplo do naturalista francs Flix Figura 1.4 Louis Pasteur
Archimde Pouchet (1800 - 1872). Pasteur fez uma (1822 - 1895)

WIKIPEDIA

Edward Jenner (Figura 1.3) contribuiu de


forma revolucionria para a Medicina com o
desenvolvimento inicial da vacinao. Contase que uma senhora que trabalhava em uma
fazenda ordenhando vacas chamada, Sarah
Nelmes gabava-se que no pegava varola (doena muito disseminada na Europa na poca)
porque j tinha contrado antes a menos sria
varola bovina das vacas que ela ordenhava.
Um surto de varola em 1788 provou que ela
estava certa. Todos os pacientes de Jenner
Figura 1.3 Edward Jenner
que j tinham tido varola bovina no contraram varola. No ano de 1796, Jenner provou sua teoria infectando um garoto
primeiro com varola bovina e depois com varola. Ele descobriu que o garoto
estava imune doena. Jenner chamou seu tratamento de vacinao (palavra
derivada da palavra latina para varola bovina - vaccina).
Os cientistas britnicos Edward Jenner e Alexander Fleming realizaram descobertas revolucionrias no campo da Medicina e Fisiologia, marcando o incio
de uma revoluo na rea mdica e biolgica.

srie de experimentos definitivos. Um dos principais processos foi o uso de


frascos de colo longo e curvado, semelhante ao pescoo de cisnes, que foram
preenchidos com caldo nutritivo e aquecidos. O ar podia passar livremente
atravs dos frascos abertos, mas nenhum microrganismo surgiu na soluo.
A poeira e os microrganismos depositavam-se na rea sinuosa em forma de V
do tubo e, portanto, no atingiam o caldo. Seus resultados foram comunicados
com entusiasmo na Universidade de Sorbonna, em Paris, em 7 de abril de 1864.
Pasteur deu um grande impulso na tecnologia de alimentos. O processo de preservao dos alimentos pela pasteurizao foi criado por esse ilustre cientista, e o nome do processo de pasteurizao foi dado em sua homenagem. Voc
ter a oportunidade de saber como funciona a pasteurizao na disciplina de
Microbiologia dos alimentos.
Os argumentos sobre a gerao espontnea continuaram at 1861, quando
a questo foi resolvida pelo cientista francs Louis Pasteur.

WIKIPEDIA

Robert Koch (Figura 5) foi um dos fundadores da microbiologia, o alemo


foi o primeiro a descobrir o agente do carbnculo e o bacilo da tuberculose. O mdico e cientista
Robert Koch, um dos precursores da moderna bacteriologia, dedicou-se a pesquisas acerca das relaes entre agentes bacterianos e a transmisso de
doenas, bem como ao estudo da higiene e de epidemias. Suas teses no aumentaram a expectativa
de vida e melhoraram a sade da populao apenas

na Alemanha, mas continuam, at hoje, sendo consideradas verdadeiros fundamentos da microbiologia moderna. Durante a Guerra Franco-Prussiana,
Figura 1.5 Robert Koch
de 1870 a 1871, Koch trabalhou como cirurgio.
Aps seu regresso ao pas, assumiu a funo de mdico oficial da cidade na
antiga provncia alem de Posen (Poznan). Ali comeou a estudar a biologia
das bactrias. Naquela poca, no havia ainda microscpios eletrnicos e, desta forma, as bactrias eram os menores agentes que podiam ser examinados
atravs do microscpio. Koch descobriu o agente bacteriano causador do carbnculo e descreveu, pela primeira vez, como a transmisso da doena se d
atravs dos esporos este foi seu primeiro grande trabalho cientfico, publicado em 1876. Mais tarde, Koch foi chamado a Berlim para assumir a direo de

captulo 1

13

WIKIMEDIA

um laboratrio bacteriolgico recm-criado, onde conseguiu detectar o agente causador da tuberculose. Com a etiologia da Tuberculose, Koch conseguiu,
pela primeira vez na histria, identificar um microrganismo patognico. Por
este trabalho sobre a bactria da tuberculose, ele recebeu o Prmio Nobel de
Medicina em 1905.
(http://www.sbmicrobiologia.org.br/PDF/Koch.pdf).
Joseph Lister (Figura 1.6) considerado
pai da cirurgia moderna, pois foi o primeiro a utilizar uma soluo de fenol como um
eficiente agente antissptico substncias
que destroem ou impedem o crescimento de
microrganismos em tecido vivo- isso reduziu
o nmero de mortes por infeces ps-operatrias. Lister comunicou os mtodos para
esterilizao de bandagens, compressas cirrgicas, instrumental cirrgico e assepsia de
feridas. Com isso ele introduziu a cirurgia assptica. Antes da descoberta, pelo mdico inFigura 1.6 Joseph Lister
gls Joseph Lister, em 1865, que o fenol podia
ser usado para esterilizar os instrumentos cirrgicos, campo operatrio e mos
dos cirurgies, os hospitais eram campos de massacres, onde, a maioria dos pacientes que no morriam do trauma cirrgico perecia de infeces. Juntamente
com a anestesia e os antibiticos, a antissepsia foi responsvel pelo grande
avano da cirurgia como mtodo cientfico de tratamento de inmeras doenas, ao longo do sculo XX (http://www.sciencemuseum.org.uk/broughttolife/
people/josephlister.aspx).
Sir Alexander Fleming (Figura 1.7) nasceu em 1881 na Esccia, formando-se
em Bacteriologia. Fleming trabalhou no St. Mary's Hospital, em Londres, e serviu no Corpo Mdico durante a Primeira Guerra Mundial. Ele se tornou interessado no problema de controlar infeces causadas por bactrias e continuou
suas pesquisas depois da guerra. Fleming descobriu a penicilina, o primeiro
antibitico, o que marcou uma revoluo na Medicina. Os Antibiticos so drogas que matam bactrias, eles, atualmente, so usados para o tratamento de
doenas. Conta-se que, em uma manh de 1928, Fleming estava preparando

14

captulo 1

WIKIPEDIA

sua rotineira amostra de culturas de bactrias quando notou que algo estava matando
as bactrias. Ao investigar, descobriu que
era um bolor de po chamado penicilina.
Dois outros excelentes cientistas, Howard
Walter Florey (1898-1968) e Ernst Boris Chain
(1906-1979), ajudaram a aperfeioar a manufatura de penicilina, e eles dividiram em
1945 o Prmio Nobel de Medicina em com
Fleming (http://www.biography.com/people/
alexander-fleming-9296894#synopsis).
Figura 1.7 Alexander Fleming

1.1.2 A importncia da Microbiologia


A Microbiologia uma cincia que foi impulsionada com a descoberta do microscpio por Leuwenhoek (1632 1723). A partir da descoberta do microscpio e a constatao da existncia dos microrganismos, os cientistas comearam
a indagar sua origem, surgindo ento, as teorias da abiognese ou gerao espontnea e a biognese. Aps os experimentos de Lazzaro Spallanzani (1729
1799) que provaram que infuses quando aquecidas, esterilizadas e fechadas
hermeticamente para evitar recontaminao impediam o aparecimento de microrganismos, a abiognese foi descartada.
Acredita-se que os microrganismos (organismos pequenos s visveis com o
auxlio de lentes) apareceram na terra h bilhes de anos a partir de um material complexo de guas ocenicas ou de nuvens que circulavam a terra. Os microrganismos so antigos, porm a microbiologia como cincia jovem, uma
vez que os microrganismos foram evidenciados h 300 anos e s foram estudados e compreendidos 200 anos depois.

1.1.3 Quem descobriu os microrganismos?


Anton Van Leuwenhoek (1632 1723) era um homem comum que possua um
armazm, era zelador da prefeitura e servia como provador oficial de vinhos
para a cidade de Delft na Holanda. Tinha como hobby polir lentes de vidro, as
montava entre finas placas de bronze ou prata para inspecionar fibras e tecelagem de roupas, flores, folhas e pingos dgua. Na poca, era comum o interesse

captulo 1

15

pelo mundo natural, mas Leuwenhoek tinha o cuidado de descrever, detalhadamente, tudo o que fazia e o que observava com suas lentes.
Usando seu precrio microscpio, observava guas de rios, infuses de pimenta, saliva, fezes, etc.; at que verificou nesses materiais, a presena de um
grande nmero de pequenssimos objetos mveis e de formas diferentes, que
no poderiam ser vistos sem a ajuda das lentes, e os chamou de animculos
por acreditar que seriam pequeninos animais vivos.
Leuwenhoek fez observaes magnficas sobre a estrutura microscpica
das sementes e embries de vegetais, animais invertebrados, espermatozoides,
sangue, circulao sangunea etc. Uma dimenso inteiramente nova enriqueceu a biologia (bio = vida, logia = estudo). Todos os tipos principais de microrganismos que hoje conhecemos protozorios, algas, fungos e bactrias foram
primeiramente descritos por Leuwenhoek (Trabulsi, 1991).

1.1.4 O que biognese e abiognese ou gerao espontnea?


Aps a revelao ao mundo da presena dos microrganismos, os cientistas comearam a indagar a origem desses seres e se dividiram em duas correntes de
pensamento as quais veremos a seguir.
Biognese Alguns cientistas acreditavam inclusive Leuwenhoek, que as
sementes destas criaturas microscpicas esto sempre presentes no ar, de
onde ganham acesso aos materiais e ali crescem desde que as condies sejam
adequadas ao seu desenvolvimento. A essa forma de multiplicao dos microrganismos chamou-se biognese.
Abiognese Outros cientistas acreditavam que os microrganismos se formavam espontaneamente a partir da matria orgnica em decomposio ou
putrefao, essa forma de multiplicao chamou-se abiognese.

CONEXO
A abiognese tambm ficou conhecida como gerao espontnea.
Video complementar
https://www.youtube.com/watch?v=EjyH5MkGdPY

16

captulo 1

A crena na gerao espontnea de seres vivos teve uma longa existncia.


A ideia da gerao espontnea teve origem na Grcia Antiga, que acreditava
que rs e minhocas surgiam, espontaneamente, de um pequeno lago ou lama.
Outros acreditavam que larvas de insetos e moscas eram produzidas a partir
de carne em decomposio. Pouco a pouco, essas ideias foram perdendo fora, por demonstraes cientficas como a do mdico italiano Francesco Redi
(1626 1697), que demonstrou que as larvas encontradas na carne em putrefao eram larvas de ovos de insetos e no um produto da gerao espontnea.
Convencer os que apoiavam a abiognese de que um ser no poderia surgir
apenas da matria orgnica, tornou-se bem mais difcil, principalmente, a partir do experimento de Heedham em 1749, que demonstrou que, de muitos tipos
diferentes de infuses, invariavelmente, emergiam criaturas microscpicas
(microrganismos), independentemente do tratamento que receberam protegidas ou no, fervidas ou no. Hoje, sabe-se que os experimentos de Heedham
foram falhos, pois este no tomava precaues higinicas para proteger seus
experimentos do ar circundante, permitindo dessa forma a contaminao de
suas infuses.
Cinquenta anos aps os experimentos de Heedham, Spallanzani evidenciou em centenas de experincias, que o aquecimento das infuses at esterilizao, pode impedir a contaminao por microrganismos. Posteriormente,
Spallazani concluiu que poder haver recontaminao das infuses por conduo dos microrganismos pelo ar, desde que o frasco que a contenha no esteja
hermeticamente fechado ou apresente rachadura, propiciando na infuso, o
aparecimento de colnias de microrganismos.
A tarefa dos microrganismos na natureza algo sensacional, especialmente, quando se lembra de seu papel como regulador do equilbrio entre seres vivos e mortos.

1.2 Classificao dos microrganismos


Os seres vivos so constitudos de unidades microscpicas chamadas de clulas que formam, em conjunto, estruturas organizadas. As clulas so compostas de ncleo e citoplasma. Quando o ncleo celular circundado por uma
membrana nuclear ou carioteca, os organismos que as possuem so chamados

captulo 1

17

de eucariticos, os que no possuem clulas com carioteca so os procariticos


a exemplo das bactrias.
Baseado na maneira pela qual os organismos obtm alimentos, Robert H.
Whittaker classificou os organismos vivos em 5 reinos: reino Monera, reino
Protista, reino Plantae, reino Animalia e reino Fungi.
Prokaryota

Monera
Protista
Fungi

Eukaryota
Animalia
Plantae
Figura 1.8 Robert H. Whittaker. Fonte: https://earthlingnature.files.wordpress.
com/2011/12/whittaker.jpg

CONEXO
Video complementar: https://www.youtube.com/watch?v=t63pCUzey3E

Os microrganismos pertencem a trs dos cinco reinos: as bactrias so do


reino Monera, os protozorios e algas microscpicas so Protistas e os fungos
microscpicos como leveduras e bolores pertencem ao reino Fungi .

1.3 Clula
A clula uma estrutura tpica microscpica comum a todos os seres vivos.
Com os avanos da microscopia eletrnica na dcada de 1940, foi possvel a
visualizao de muitas estruturas da clula que seria impossvel no microscpio tico.

18

captulo 1

Todas as clulas se compem de duas regies internas principais conhecidas como ncleo e citoplasma. O ncleo, que circundado pelo citoplasma,
contm todas as informaes genticas do organismo, sendo responsvel pela
hereditariedade. O citoplasma a sede primria dos processos de sntese e o
centro das atividades funcionais em geral.
Em algumas clulas, o ncleo circundado por uma membrana denominada de membrana nuclear ou carioteca. Compreende o grupo das eucariticas,
os protozorios, os fungos, a maior parte das algas. Estas clulas se assemelham as dos animais e plantas. Em contraste, as bactrias e o pequeno grupo
de algas azul-verdes se caracterizam por clulas menores procariticas por no
apresentarem membrana nuclear.

Microtbulos

Microfilamentos

Carioteca
Nucleoplasma + DNA
Nuclolo

Ncleo

Vacolo alimentar
Lisossomo

Retculo
endoplasmtico rugoso
Membrana
plasmtica

Retculo
endoplasmtico liso
Complexo de Golgi
Centrolos

Mitocndria

Vescula de secreo

Figura 1.9 Organizao Celular. Fonte:http://www.vestibulandoweb.com.br/biologia/teoria/celula-eucarionte-1-2.jpg

Nas plantas e microrganismos, a parede celular a nica estrutura limitante. Seu nico papel parece ser o de proteo contra injrias mecnicas e impedem, principalmente, a ruptura osmtica quando a clula colocada em ambiente com alto teor de gua.

captulo 1

19

1.4 Classificao dos 5 reinos


A classificao dos organismos, mais recente, proposta por Robert H. Whittaker em 1969 foi baseada a partir da maneira pela qual o organismo obtm
nutrientes de sua alimentao. Veja:
1. Fotossntese processo pelo qual a luz fornece energia para converter o
dixido de carbono em gua e acares.
2. Absoro a captao de nutrientes qumicos dissolvidos em gua.
3. Ingesto entrada de partculas de alimentos no dissolvidas.
Nesse esquema de classificao, os procariotos que normalmente obtm
alimentos s por absoro constituem o reino Monera. O reino Protista inclui
os microrganismos eucariticos unicelulares, que representam os trs tipos
nutricionais: as algas so fotossintticas, os protozorios podem ingerir seu
alimento e os fungos limosos somente absorvem os nutrientes. Os organismos
eucariticos superiores so colocados no reino Plantae (plantas verdes fotossintticas e algas superiores), Animalia (animais que ingerem alimentos) e
Fungi, organismos que tm parede celular, mas no apresentam o pigmento
clorofila encontrado em outras plantas para promover a fotossntese, portanto
eles absorvem os nutrientes. Como pode se observar, os microrganismos pertencem a trs dos cinco reinos.

1.5 Principais caractersticas dos grupos de


microrganismos
Protozorios so microrganismos eucariticos unicelulares. Como os animais ingerem partculas alimentares, no apresentam parede celular rgida
e no contm clorofila. Movem-se atravs de clios, flagelos ou pseudpode. Estes microrganismos so estudados na cincia da Parasitologia (estudo
dos parasitas). So amplamente distribudos na natureza, principalmen-

20

captulo 1

te, em ambientes aquticos. Muitos so nocivos ao homem como a ameba


e a girdia.

Figura 1.10 Protozorio. http://1.bp.blogspot.com/-We-8wiRGnvY/T_QyJbHRFaI/AAAAAAAAA3Y/We9BtKc55pM/s640/Protozo%C3%A1rio+flagelado.jpg

Algas so semelhantes s plantas por possurem clorofila que participa


do processo de fotossntese e apresentam uma parede celular rgida. So eucariotos e podem ser unicelulares ou multicelulares com vrios metros de comprimento. Podem ser nocivas por produzirem toxinas, obstruir caixas dgua
ou crescerem em piscinas. Entretanto, algumas espcies so usadas nas indstrias de alimentos, farmacuticas, cosmticos e para o uso em laboratrio. As
algas no so estudadas na Microbiologia de alimentos.

Figura 1.11 Alga. http://www.pensamentoverde.com.br/wp-content/uploads/2014/04/


img160.jpg

captulo 1

21

Fungos podem ser unicelulares ou multicelulares. So eucariotos e possuem parede celular rgida. Os fungos no ingerem alimentos e obtm os nutrientes do ambiente atravs de absoro.

Figura 1.12 Fungos. http://i369.photobucket.com/albums/oo139/Dimitri1985/fungos/


flammulina-velutipes.jpg

Bactrias so procariotos, carecem de membrana nuclear e outras estruturas celulares organizadas observadas em eucariotos.

Figura 1.13 Bactrias. http://www.responsibletechnology.org/posts/wp-content/uploads/2013/02/gut-bacteria.jpg

22

captulo 1

Vrus representam o limite entre as formas vivas e as sem vida. No so clulas como as descritas anteriormente, contm somente um tipo de cido nucleico,
RNA ou DNA que circundado por um envelope proteico ou capa. Devido ausncia de componentes celulares necessrios para o metabolismo ou reproduo
independente, o vrus pode multiplicar-se somente dentro de clulas vivas, por
isso no so considerados seres vivos por no possurem vida prpria.

Figura 1.14 Vrus. http://hypescience.com/wp-content/uploads/2009/02/capa-virusgrande.jpg

1.6 Caractersticas das bactrias


1.6.1 Caractersticas gerais das bactrias
So seres unicelulares, aparentemente simples, sem carioteca, ou seja,
sem membrana nclear. H um nico compartimento, o citoplasma.
O material hereditrio, uma longa molcula de DNA, est enovelado na regio, aproximadamente central, sem qualquer separao do resto do contedo
citoplasmtico. Suas paredes celulares, quase sempre, contm o polissacardeo
complexo peptideoglicano.

captulo 1

23

Usualmente se dividem por fisso binria. Durante este processo, o DNA


duplicado e a clula se divide em duas. A seguir, voc ir estudar mais detalhadamente as caractersticas de maior importncia para o entendimento das
aulas seguintes.
1.6.1.1 Tamanho
Invisveis a olho nu, s podendo ser visualizada com o auxlio do microscpio,
as bactrias so normalmente medidas em micrmetros (m), que so equivalentes a 1/1000mm (10-3mm). As clulas bacterianas variam de tamanho dependendo da espcie, mas a maioria tem aproximadamente de 0,5 a 1m de
dimetro ou largura.
1.6.1.2 Morfologia
H uma grande variedade de tipos de bactrias e suas formas variam, dependendo do gnero da bactria e das condies em que elas se encontram. Apresentam uma das trs formas bsicas: cocos, bacilos e espirilos.
Cocos so clulas geralmente arredondadas, mas podem ser ovoides ou
achatadas em um dos lados quando esto aderidas a outras clulas. Os cocos
quando se dividem para se reproduzir, podem permanecer unidos uns aos outros, o que os classificam em:
Diplococos so os que permanecem em pares aps a diviso.
Estreptococos - so aqueles que se dividem e permanecem ligados em forma de cadeia.
Ttrades so aqueles que se dividem em dois planos e permanecem em
grupos de quatro.
Estafilococos - so aqueles que se dividem em mltiplos planos e formam
cachos (forma de arranjo).
Sarcinas so os que se dividem em trs planos, permanecendo unidos em
forma de cubo com oito bactrias.
Bacilos so clulas cilndricas ou em forma de basto. Existem diferenas
considerveis em comprimento e largura entre as vrias espcies de bacilos.
As pores terminais de alguns bacilos so quadradas, outras arredondadas e,
ainda, outras so afiladas ou pontiagudas.

24

captulo 1

Cocos
Coco

Otros

Diplococo
encapsulado
Pneumococo

Diplococo

Estafilococo

Barra alargada
Fusobacterium

Estreptococo
Sarcina

Ttrada

Vibrio

Coma
Bdellovibrio

Bacilos

Bacilo

Cocobacilo

Empalizada

Diplobacilo

Bastn
Hlice
Corynebacteriaceae Helicobacter pylori

Sacacorchos
Borrelia bugdorferi
Estreptobacilo

Apndices bacterianos

Tallo

Hifa

Filamento

Espiroqueta

Figura 1.15 http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/a/a2/Morfolog%C3%ADa_bacteriana.jpg

I15

1.6.1.3 Estruturas bacterianas


Com a ajuda do microscpio, podemos observar uma diversidade de estruturas, funcionando juntas numa clula bacteriana. Algumas dessas estruturas
so encontradas externamente fixadas parede celular, enquanto outras so
internas. A parede celular e a membrana citoplasmtica so comuns a todas as
clulas bacterianas.

captulo 1

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Fmbrias

Cpsula
Camada externa
Camada de
peptidoglucano

Parede celular

Membrana plasmtica
DNA em nucleide

Flagelo
Figura 1.16 http://s2.glbimg.com/Gna8vkd8Diesm1iyUkE-rltjfUw=/0x0:1274x932/
620x454/s.glbimg.com/po/ek/f/original/2013/11/21/modulo_20_-_bacterias_2_
reescrita.png

1.6.1.4 Parede celular


A parede celular uma estrutura rgida que mantm a forma caracterstica de
cada clula bacteriana. A estrutura to rgida que mesmo altas presses ou
condies fsicas adversas raramente mudam a forma das clulas bacterianas.
essencial para o crescimento e diviso da clula. As paredes celulares das clulas bacterianas no so estruturas homogneas, apresentam camadas de diferentes substncias que variam de acordo com o tipo de bactria. Elas diferem
em espessura e em composio. Alm de dar forma bactria, a parede celular
serve como barreira para algumas substncias, previne a evaso de certas enzimas, assim como a entrada de certas substncias qumicas e enzimas indesejveis, que poderiam causar danos clula. Nutrientes lquidos necessrios
clula tm passagem permitida.
1.6.1.5 Membrana citoplasmtica
Localiza-se imediatamente abaixo da parede celular. A membrana citoplasmtica o local onde ocorre a atividade enzimtica e do transporte de molculas
para dentro e para fora da clula. muito mais seletiva passagem de substncias externas que a parede celular.

26

captulo 1

1.6.1.6 Estruturas externas a parede celular


Glicoclice
Significa revestimento de acar um envoltrio externo membrana plasmtica que ajuda a proteger a superfcie celular contra leses mecnicas e
qumicas. composto de molculas de acar associadas aos fosfolipdios e
s protenas dessa membrana. O glicoclice bacteriano um polmero viscoso
e gelatinoso que est situado externamente parede celular. Na maioria dos
casos, ele produzido dentro da clula e excretado para a superfcie celular. O
glicoclice descrito como uma cpsula.
Em certas espcies, as cpsulas so importantes no potencial de produo
de doenas da bactria. As cpsulas, frequentemente, protegem as bactrias
patognicas da fagocitose pelas clulas do hospedeiro.
Flagelos e clios
Flagelo significa chicote longo apndice filamentoso que serve para locomoo. Se as projees so poucas e longas em relao ao tamanho da clula, so
denominados flagelos. Se as projees so numerosas e curtas lembrando pelos, so denominados clios.
Existem quatro tipos de arranjos de flagelos, que so:
Monotrquio (um nico flagelo polar).
Anfitrquio (um nico flagelo em cada extremidade da clula).
Lofotrquio (dois ou mais flagelos em cada extremidade da clula).
Peritrquio (flagelos distribudos por toda clula).
As bactrias mveis contm receptores em vrias localizaes, como dentro
ou logo abaixo da parede celular. Estes receptores captam os estmulos qumicos, como o oxignio, a ribose e a galactose. Em resposta aos estmulos, a informao passada para os flagelos. Se um sinal quimiottico (estmulo qumico)
positivo, denominado atraente, as bactrias se movem em direo ao estmulo com muitas corridas e poucos desvios. Se um sinal negativo, denominado
repelente, a frequncia de desvios aumenta medida que a bactria se move
para longe do estmulo.

captulo 1

27

Filamentos axiais
So feixes de fibrilas que se originam nas extremidades das clulas e fazem
uma espiral em torno destas. A rotao dos filamentos produz um movimento que propele as espiroquetas (bactrias que possuem estrutura e motilidade
exclusiva) como a Treponema pallidum, o agente causador da sfilis, em um
movimento espiral. Este movimento semelhante ao modo como o saca-rolha
se move, permitindo que as bactrias se movam efetivamente atravs dos tecidos corporais.
Fimbrias e pili
So apndices semelhantes a pelos mais curtos, mais retos e mais finos que os
flagelos, so usados para fixao em vez de motilidade. Essas estruturas, que
distribudas de modo helicoidal em torno de um eixo central, so divididas em
fimbrias e pili, possuindo funes diversas. As fimbrias permitem as clulas
aderir s superfcies, incluindo as de outras clulas. As fimbrias de bactrias
Neisseria gonorhoeae, o agente causador da gonorreia, auxiliam o micrbio a
colonizar as membranas mucosas e uma vez que a colonizao ocorre, as bactrias podem causar doenas.
Os pili (singular pilus), normalmente, so mais longos que as fimbrias, havendo apenas um ou dois por clula. Os pili unem-se as clulas.
rea nuclear ou nucleoide
Contm uma nica molcula circular longa de DNA de dupla fita, o cromossomo bacteriano. a formao gentica da clula que transporta toda informao
necessria para as estruturas e as funes celulares bacterianas na preparao
para transferncia de DNA de uma clula para outra.
Ribossomos
Servem como locais de sntese proteica. So compostos de duas subunidades,
cada qual consistindo de protenas e de um tipo de RNA denominado ribossmico (RNAr). Os ribossomos procariticos diferem dos eucariticos no nmero
de protenas e de molculas de RNA. Devido a essa diferena, a clula microbiana pode ser morta pelo antibitico, enquanto a clula do hospedeiro eucaritico permanece intacta.

28

captulo 1

Esporos
Os esporos se formam dentro da clula bacteriana, chamada de endsporos,
so exclusivos de bactrias. So clulas desidratadas altamente durveis, com
paredes espessas e camadas adicionais.
Os gneros Bacillus e Clostridium podem apresentar esporos, estruturas
que constituem formas de defesa e no devem ser confundidas com unidades
reprodutivas. Na forma de esporos, essas bactrias tm a capacidade de resistir
ao de agentes qumicos diversos, s temperaturas inadequadas, aos meios
de radiao, cidos e outras condies desfavorveis.
Plasmdeos
So molculas de DNA de dupla fita pequenas e circulares. No esto conectados ao cromossomo bacteriano principal e replicam-se, independentemente,
do DNA cromossmico. Podem ser ganhos ou perdidos sem lesar a celular e
transferidos de uma bactria para outra. Podem transportar genes para atividades como a resistncia aos antibiticos, tolerncia aos metais txicos, produo de toxinas e sntese de enzimas. Quanto mais alto o peso molecular maior
ser sua importncia. Cada plasmdeo tem uma funo prpria, os que no tm
funo so crpticos e apresentam baixo peso molecular.
Reproduo
Quando os microrganismos esto em um meio apropriado (alimentos, meios
de cultura, tecidos de animais ou plantas) e em condies timas para o crescimento, um grande aumento no nmero de clulas ocorre em um perodo de
tempo relativamente curto. A reproduo das bactrias se d, principalmente,
de forma assexuada, em que novas clulas iguais a que deu origem so produzidas. As bactrias se reproduzem assexuadamente por fisso binria, na qual
uma nica clula parental simplesmente se divide em duas clulas filhas idnticas. Anteriormente diviso celular, os contedos celulares se duplicam e o
ncleo replicado. O tempo de gerao, ou seja, o intervalo de tempo requerido
para que cada microrganismo se divida ou para que a populao de uma cultura
duplique em nmero diferente para cada espcie e fortemente influenciado
pela composio nutricional do meio em que o microrganismo se encontra.

captulo 1

29

CONEXO
https://www.youtube.com/watch?v=fQBt3U189Ik

Alguns procariotos se reproduzem assexuadamente por modelos de diviso


celular diferentes da fisso binria, tais como:
Brotamento a clula-me expele, de forma lenta, uma clula-filha que
brota de maneira a originar uma nova bactria. As clulas-filhas podem se
manter agregadas s clulas-mes, aps sucessivos brotamentos forma-se uma
colnia.
Fragmentao formao de filamentos, cada um deles inicia o crescimento de uma nova clula. Ex. Nocardia sp
Formao de esporos produo de cadeias de esporos externos.

1.7 Diviso das bactrias


As bactrias so divididas em dois grandes grupos: as eubactrias e as arqueobactrias. As eubactrias apresentam composio da parede celular diferente
das arqueobactrias, frequentemente aparecem aos pares, em cadeias, formando ttrades ou agrupadas. Algumas apresentam flagelos, favorecendo seu deslocamento rapidamente em lquidos. So de grande importncia na natureza
e na indstria, sendo essenciais na reciclagem de lixo orgnico e na produo
de antibitico como a streptomicina. As infeces causadas pelas eubactrias
incluem as estreptoccica de garganta, ttano, peste, clera e tuberculose.
As arqueobactrias assemelham-se as eubactrias quando observadas por
meio de um microscpio, mas existem diferenas importantes quanto a sua
composio qumica, atividade e ao meio ambiente em que se desenvolvem
tais como em elevada concentrao de salina ou acidez elevada e altas temperaturas a exemplo de piscinas trmicas e lagoas salinas.

30

captulo 1

1.7.1 Fungos e virus


Fungos
Os fungos so organismos eucariticos, heterotrficos e, geralmente, multicelulares. So encontrados na superfcie de alimentos, formando colnias algodonosas e coloridas.
Os mais conhecidos so os bolores, os cogumelos, as orelhas-de-pau e as leveduras (fermentos). Os fungos, em sua maioria, so constitudos por filamentos
microscpicos e ramificados, as hifas. O conjunto de hifas de um fungo constitui
o miclio. Os fungos tm nutrio heterotrfica porque necessitam de matria
orgnica, provenientes dos alimentos, para obteno de seus nutrientes.
A maioria vive no solo, alimentando-se de cadveres de animais, de plantas
e de outros seres vivos. Esse modo de vida dos fungos causa o apodrecimento de
diversos materiais e por isso so chamados de saprofgicos. Certas espcies de
fungos so parasitas e outras vivem em associaes harmoniosas com outros
organismos, trocando benefcios.

CONEXO
https://www.youtube.com/watch?v=qjg6nbS7CFg

1.7.2 Caractersticas dos fungos em relao s bactrias


Os fungos so geralmente adaptados a ambientes que poderiam ser hostis s bactrias. So encontrados na superfcie de alimentos formando colnias algodonosas e coloridas. Todavia, diferem das bactrias em determinadas necessidades
ambientais e nas caractersticas estruturais e nutricionais apresentadas a seguir:
Apresentam a parede celular com presena de substncias quitinosas e clulas com organelas membranosas (mitocndrias, complexo de golgi, vacolo).
No possuem clulas mveis em todos os estgios do ciclo de vida.
Reserva de energia na forma de glicognio.

captulo 1

31

Os fungos normalmente crescem melhores em ambientes em que o pH


muito cido, o qual so desfavorveis para o crescimento da maioria das bactrias comuns.
Quase todos possuem forma aerbica. Algumas leveduras so anaerbicas facultativas.
A maioria dos fungos mais resistente presso osmtica que as bactrias; muitos, consequentemente, podem crescer em altas concentraes de
acar ou sal.
Podem crescer sobre substncias com baixo grau de umidade, geralmente to baixo que impede o crescimento de bactrias.
Necessitam de menos nitrognio para um crescimento equivalente ao das
bactrias.
So capazes de metabolizar a carboidratos complexos, tais como lignina
(madeira), que as bactrias no podem utilizar como nutriente.
As caractersticas citadas, anteriormente, nos mostram que os fungos se desenvolvem em substratos diversos como paredes de banheiro, couro de sapatos
e jornais velhos.

1.7.3 Modo de vida dos fungos de acordo com o tipo de


alimentao
Os fungos apresentam grande variedade em relao aos modos de vida, mas
sempre obtm alimento por absoro de nutrientes do meio.
Decompositores os fungos decompositores obtm seus alimentos pela
decomposio de matria orgnica. Eles podem atuar como saprfagos, degradando a matria orgnica presente no corpo de organismos mortos.
Parasitas so parasitas os fungos que se alimentam de substncias retiradas do corpo de organismos vivos, nos quais se instalam, prejudicando-os. Esses
fungos provocam doenas em plantas e em animais, inclusive no ser humano.
Mutualsticos certas espcies de fungos estabelecem relaes mutualsticas com outros organismos, nos quais ambos se beneficiam. Dentre os fungos
mutualsticos, alguns vivem associados a razes de plantas formando as micorrizas (razes que contm fungos). Nesses casos, elas absorvem gua do solo, degradam a matria orgnica e absorvem os nutrientes liberados, transferindo

32

captulo 1

parte deles para a planta, que cresce mais sadia. Esta, por sua vez, cede ao fungo
certos acares e aminocidos de que ele necessita como alimento.
Predadores entre os fungos mais especializados esto os predadores,
que desenvolvem vrios mecanismos para capturar pequenos organismos, especialmente nematdeos, utilizando-os como alimento.

1.7.4 Tipos de reproduo


Assexuada
Ocorre pela fragmentao do miclio, brotamento, cissiparidade ou produo de esporos assexuais.
No ocorre fuso de ncleos, apenas mitoses sucessivas.
Mitose - diviso celular na qual os cromossomos das clulas so duplicados e as clulas formadas apresentam a mesma constituio gentica.
Este tipo de reproduo corresponde fase imperfeita, tambm chamada
de anamrfica dos fungos.
Sexuada
Aumenta a variabilidade gentica, pois os indivduos formados podem
apresentar constituio gentica diferente.
Corresponde fase perfeita ou teleomrfica dos fungos.
Envolve a ocorrncia de trs processos:
Plasmogamia: Fuso de protoplasmas, resultante da anastomose de duas
clulas
Cariogamia: Fuso de dois ncleos haploides (n) e compatveis formando
um ncleo diploide (2n)
Meiose: Ncleo diploide (2n) sofre diviso reducional aps a cariogamia
para formar dois ncleos haploides (n)

1.7.5 Diversidade morfolgica dos fungos


Fungos unicelulares (leveduras)
Clulas ovais ou esfricas 1 a 10m.
Reproduo por brotamento ou cissiparidade.
Crescimento geralmente rpido formando colnias cremosas ou membranosas e ausncia de hifas areas.

captulo 1

33

Em determinadas condies, clulas em reproduo permanecem ligadas


clula-me, formando pseudo-hifas.
Fungos filamentosos (bolores)
Multicelulares formados por estruturas tubulares (hifas 2 a 10 m) o
conjunto dessas estruturas constitui o miclio.
As hifas podem ser contnuas (cenocticas ou asseptadas) ou apresentar
divises transversais (hifas septadas).
Fungos dimrficos
Apresentam em determinadas condies a fase leveduriforme (37 C, alta
tenso de CO2) e em outras a fase filamentosa.
A fase de levedura se reproduz por brotamento, enquanto que a fase filamentosa produz hifas areas e vegetativas.
O dimorfismo nos fungos dependente da temperatura de crescimento.
Crescido a 37 C, o fungo apresenta forma de levedura. Crescido a 25 C, ele
apresenta a forma filamentosa.
Observe em alimentos com colnias de fungos (pes, extrato de tomate,
tomates, queijo e outros), as hifas que em conjunto formam o miclio, e as diversas coloraes.
Vrus
Os vrus no so considerados organismos vivos porque so inertes fora das
clulas hospedeiras. Diferem dos demais seres vivos pela ausncia de organizao celular, por no possurem metabolismo prprio e por necessitarem de
uma clula hospedeira. No entanto, quando penetram em uma clula hospedeira, o cido nucleico viral torna-se ativo ocorrendo a multiplicao.
Caractersticas dos vrus
Possuem um nico tipo de cido nucleico, DNA ou RNA.
Possuem uma cobertura proteica, envolvendo o cido nucleico.
Multiplicam-se dentro de clulas vivas, usando a maquinaria de sntese
das clulas.
Induzem a sntese de estruturas especializadas, capazes de transferir o
cido nucleico viral para outras clulas.

34

captulo 1

Parasitas obrigatrios apresentando incapacidade de crescer e se dividir


autonomamente.
Replicao somente a partir de seu prprio material gentico.
Estrutura viral
Um vrion uma partcula viral completa, composta por um meio cido nucleico, envolto por uma cobertura proteica que protege do meio ambiente e serve
como veculo na transmisso de um hospedeiro para o outro. Os vrus so classificados de acordo com as diferenas na estrutura desses envoltrios.
Capsdeo e envelope
O cido nucleico dos vrus envolvido por uma cobertura proteica chamada
de capsdeo. A estrutura deste denominada pelo genoma viral e constitui a
maior parte da massa viral. O capsdeo formado por subunidades proticas
chamadas de capsmeros. Em alguns vrus, o capsdeo coberto por um envelope que, consiste de uma combinao de lipdios, protenas e carboidratos.
Alguns vrus animais saem do hospedeiro por um processo de extruso, no qual
a partcula envolvida por uma camada de membrana plasmtica celular que
vai constituir o envelope viral. Os vrus cujos capsdeos no esto cobertos por
um envelope so conhecidos como vrus no-envelopados.
Classificao morfolgica
Podem ser classificados com base na arquitetura do capsdeo.
Vrus helicoidais O genoma viral est no interior de um capsdeo cilndrico oco com estrutura helicoidal.
Vrus polidricos O capsdeo da maioria deles tem a forma de um icosaedro. So exemplos o adenovrus e o poliovrus.
Vrus envelopados o capsdeo coberto por um envelope.
Vrus complexos alguns vrus, especialmente os bacterianos, possuem
estruturas complicadas e por isso so denominados complexos. Um bacterifago ou gagos (vrus que atacam bactrias) um exemplo de vrus complexo. Um
fago capaz de aderir parede celular de uma bactria hospedeira, perfurando-a e nela injetando seu DNA. O capsdeo proteico do fago, formado por uma
cabea e uma cauda, permanece fora da bactria.

captulo 1

35

CONEXO
https://www.youtube.com/watch?v=N8zaIonz8C4

Multiplicao de bacterifagos
O ciclo de vida viral mais conhecido o dos bacterifagos, que podem se multiplicar por dois mecanismos alternativos: o ciclo ltico (termina com a morte da
clula hospedeira) ou ciclo lisognico (a clula permanece viva).

CONEXO
https://www.youtube.com/watch?v=DU2CXTjsgXQ

REFLEXO
A Microbiologia como cincia
Muitos curiosos e cientistas contriburam para o estudo da Microbiologia como cincia. Seu
incio se deu na segunda metade do sculo XIX, quando os cientistas provaram que os microrganismos originaram-se de pais iguais a eles prprios e no de causas sobrenaturais ou
de plantas e animais em putrefao, como na teoria de gerao espontnea. A Microbiologia
preocupa-se com o estudo dos microrganismos e de suas atividades. Estuda a forma, a estrutura, a reproduo, a fisiologia, o metabolismo e a identificao dos seres microscpicos.
Estuda sua distribuio natural, suas relaes recprocas e com outros seres vivos, seus
efeitos benficos e prejudiciais sobre os homens e as alteraes fsicas e qumicas que
provocam em seu meio ambiente. Em sua maior parte, a Microbiologia trata com organismos
microscpicos unicelulares. Nos indivduos unicelulares todos os processos vitais so realizados numa nica clula. Independentemente da complexidade de um organismo, a clula , na
verdade, a unidade bsica da vida. No processo de reproduo, os organismos vivos mantm
uma identidade de espcie, possuindo potencialidades de alteraes, buscando encontrar
um modo especial de sobreviver.

36

captulo 1

LEITURA
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1200696/pdf/bumc0018-0021.pdf
http://pt.wikipedia.org/wiki/Louis_Pasteur
https://www.youtube.com/watch?v=EnlBK8WjMwk

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
ILDEU DE CASTRO MOREIRA. Robert Hooke 1635-1703, (Fsico, professor do Instituto de Fsica da
UFRJ e Jornalista da Folha de SP), 2003.
RIEDEL S. Edward Jenner and the history of smallpox and vaccination. Proc (Bayl Univ Med Cent).
Jan;18(1):21-5, 2005.
TRABULSI, ALTERTHUM. Microbiologia. 5 Ed. So Paulo: Atheneu, 2008.
PELCZAR, CHAN, KRIEG. Microbiologia: conceitos e aplicacoes. 2 Ed. So Paulo: Makron, 1997.
MIMIS. Microbiologia Mdica. 3a Ed. Rio de Janeiro: Elsevier. 2005.

captulo 1

37

38

captulo 1

2
Fisiologia
Bacteriana e
Metabolismo
Bacteriano

OBJETIVOS
1.

Reconhecer elementos da nutrio microbiana, ecologia e crescimento;

2.

Estudar o crescimento microbiano (Curva de crescimento);

3.

Conhecer o Metabolismo microbiano;

4.

Conhecer os princpios da Biologia Molecular Microbiana.

40

captulo 2

2.1 Fisiologia Bacteriana e Metabolismo


Bacteriano
2.1.1 Elementos da nutrio microbiana, ecologia e crescimento.
O crescimento e diviso celulares necessitam de um ambiente propcio com todos os constituintes qumicos e fsicos necessrios para o seu metabolismo. Essas necessidades especficas so dependentes de informaes genticas para
cada espcie bacteriana. Algumas espcies com vasta flexibilidade nutricional,
como as Pseudomonas, so capazes de sintetizar muitos de seus metablitos
a partir de precursores simples, enquanto outras espcies so mais exigentes,
como as Porphyromonas e Treponemas, que necessitam de nutrientes complexos para o crescimento e reproduo.

2.1.2 Fontes dos nutrientes essncias


A anlise das estruturas bacterianas revela que sua arquitetura formada por
diferentes macromolculas, em particular, protenas e cidos nucleicos. Os
precursores das macromolculas podem ser retirados do meio ambiente ou ser
sintetizados pelas bactrias a partir de compostos mais simples. A alternativa
escolhida vai depender da disponibilidade do composto no meio e da capacidade de sntese do microrganismo. As substncias ou elementos retirados do
ambiente e usados para construir novos componentes celulares ou para obter
energia so chamados nutrientes. Os nutrientes podem ser divididos em duas
classes, macronutrientes e micronutrientes.
Macronutrientes e Micronutrientes. Ambos os tipos so imprescindveis,
mas os primeiros so requeridos em grandes quantidades por serem os principais constituintes dos compostos orgnicos celulares e / ou serem utilizados
como combustvel.
2.1.2.1 Macronutrientes:
Carbono: est presente na maioria das substncias que compem as clulas. As bactrias podem utilizar o carbono inorgnico existente no ambiente, na forma de carbonatos ou de CO2 como nica fonte de carbono. So neste

captulo 2

41

caso chamadas de autotrficas. Os microrganismos que obrigatoriamente requerem uma fonte orgnica de carbono so denominados heterotrficos e as
principais fontes, so os carboidratos.
Oxignio: requerido na forma molecular como aceptor final na cadeia
de transporte de eltrons aerbia. Tambm elemento importante em vrias
molculas orgnicas e inorgnicas.
Hidrognio: como componente muito frequente da matria orgnica e
inorgnica, tambm constitui um elemento comum de todo material celular.
Nitrognio: componente de protenas e cidos nuclicos, alm de vitaminas e outros compostos celulares. Est disponvel na natureza sob a forma de
gs (N2) ou na forma combinada. Sua utilizao como N2 restrita a um grupo
de bactrias cujo principal habitat o solo. Na forma combinada, o nitrognio
encontrado como matria inorgnica (NH3, NO3, etc.) ou matria orgnica:
aminocidos, purinas e pirimidinas.
Enxofre: faz parte de aminocidos (cistena e metionina), de vitaminas e
grupos prostticos de vrias protenas importantes em reaes de xido-reduo.
Da mesma forma que o nitrognio, o enxofre pode ser encontrado no ambiente
nas formas elementar, oxidada e reduzida; estas duas ltimas aparecem como
compostos orgnicos e inorgnicos. Todas as alternativas citadas podem ser utilizadas pelas bactrias, porm so os sulfatos (SO42) inorgnicos ou os aminocidos as formas preferencialmente assimiladas. Na forma oxidada, tambm pode
ser aceptor final de eltrons das cadeias de transporte de eltrons anaerbias.
Fsforo: encontrado na clula na forma combinada a molculas importantes como os nucleotdeos (ATP, CTP, GTP, UTP, TTP) e como fosfato inorgnico; nesta ltima forma incorporado atravs de poucas reaes metablicas,
embora uma delas seja de fundamental importncia: a sntese de ATP a partir
de ADP e fosfato. As substncias fosforiladas podem estar envolvidas com o armazenamento de energia ( como o ATP) ou atuar como reguladoras de processos metablicos: muitas enzimas tornam-se ativas ao serem fosforiladas.
2.1.2.2 Micronutrientes:
Os elementos ferro, magnsio, mangans, clcio, zinco, potssio, sdio, cobre,
cloro, cobalto, molibdnio, selnio e outros so encontrados sempre na forma
inorgnica, fazendo parte de minerais. So necessrios ao desenvolvimento

42

captulo 2

microbiano, mas em quantidades variveis, dependendo do elemento e do microrganismo considerados.


Os micronutrientes podem atuar de diferentes maneiras, incluindo as seguintes funes principais:
Componentes de protenas, como o ferro que participa da composio de
vrias protenas enzimticas ou no, de citocromos, etc.;
Cofatores de enzimas, como o magnsio, potssio, molibdnio, etc;
Componentes de estruturas, como o clcio, presente em um dos envoltrios dos esporos;
Osmorreguladores.

2.1.3 Estudo do crescimento microbiano


Para se cultivar microrganismos deve-se obedecer a requisitos bsicos obrigatrios, quais sejam incub-los em meios de cultura adequados e incub-los em
condies ambientais igualmente adequadas.
Um inculo uma amostra de material contendo geralmente uma pequena
quantidade de microrganismos; obedecidas as condies citadas, os microrganismos contidos no inculo multiplicam-se, aumentando em nmero e massa
e, com isto, atingindo o objetivo desejado.

2.1.4 Meios de Cultura


Meio de cultura uma mistura de nutrientes necessrios ao crescimento microbiano. Basicamente deve conter a fonte de energia e de todos os elementos
imprescindveis vida das clulas. A formulao de um meio de cultura deve
levar em conta o tipo nutritivo no qual o microrganismo pertence, considerando-se a fonte de energia (luz ou substncia qumica), o substrato doador de
eltrons (orgnico ou inorgnico) e a fonte de carbono (orgnica ou inorgnica). Estabelecidas as condies gerais, o meio de cultura deve ainda atender as
necessidades especficas do grupo, da famlia, do gnero ou da espcie que se
deseja cultivar. Assim, imprescindvel acrescentar ao meio vitaminas, cofatores, aminocidos, etc., quando estes compostos no so sintetizados pelos
microrganismos que se deseja cultivar.

captulo 2

43

2.1.5 Fatores de crescimento


Entre as bactrias heterotrficas h uma imensa variedade de exigncias nutritivas. Algumas so capazes de crescer em meio muito simples, constitudo de uma
soluo de glicose, sal de amnio e alguns sais minerais. A partir desses compostos, sintetizam todos os componentes do protoplasma: protenas, polissacardeos, cidos nuclicos, coenzimas, etc. Outras, todavia, so incapazes de sintetizar
determinados compostos orgnicos essenciais para o seu metabolismo. Para
que estes microrganismos possam crescer, tais compostos devem ser obtidos
do meio natural ou artificial em que vivem. Essas substncias so denominadas
fatores de crescimento. Muitos desses fatores so componentes de coenzimas,
que, para o homem, so vitaminas. Na realidade, certas vitaminas, como o cido
flico, foram descobertas por serem necessrias ao crescimento de determinadas bactrias. As composies dos meios de cultura, portanto, podem ser muito
variadas. Um meio pode ter uma composio simples, contendo um nico carboidrato como fonte de energia e carbono e alguns sais minerais; em outro extremo esto os meios requeridos por microrganismos mais exigentes, apresentando
composio complexa, contendo vrias fontes de carbono e energia, vitaminas e
aminocidos, podendo ainda ser acrescidos de sangue ou soro de animais.
Alm da composio qualitativa, o meio de cultura deve obedecer aos limites de quantidade de cada componente suportveis pelos microrganismos.
Muitas vezes o meio de cultura deve conter substncias para neutralizar a ao
de produtos txicos lanados pelos prprios microrganismos, que sofrem os efeitos
de seu acmulo. Um exemplo rotineiro adio de tampes para impedir a queda
de pH provocada pelos cidos orgnicos produzidos por fermentao bacteriana.
2.1.5.1 Classificao dos meios de cultura:
4. Quanto a composio
Meio quimicamente definido
Meio complexo
5. Quanto a consistncia
Os meios podem ser lquidos, quando so uma soluo aquosa de nutrientes, semisslidos, ou slidos, quando a soluo aquosa gelificada por um polissacardeo extrado de algas, o gar.

44

captulo 2

O meio slido obrigatoriamente usado quando se pretende separar clulas. Cada clula individualizada ou agrupamento isolado d origem, por multiplicao, a um aglomerado que constitui uma colnia. Colnias de diferentes
espcies geralmente apresentam caractersticas morfolgicas diferentes.
6. Quanto a funo
Enriquecidos ou de enriquecimento
Seletivos
Os meios de cultura podem ser seletivos, quando contm uma substncia
que inibe o crescimento de um determinado grupo de microrganismos, mas
permite o desenvolvimento de outros.
Diferenciais

2.1.6 Influncia de fatores ambientais


A tomada de nutriente e posterior metabolismo influenciada por fatores fsicos e qumicos do meio ambiente. Os principais fatores so: temperatura, pH,
presena de oxignio, presso osmtica e luz.
Temperatura
Cada tipo de bactria apresenta uma temperatura tima de crescimento, em
torno desta temperatura observa-se um intervalo dentro do qual o desenvolvimento tambm ocorre, sem, no entanto, atingir o seu mximo. Ultrapassado o
limite superior, rapidamente ocorre desnaturao do material celular e, conseqentemente, a morte da clula. As temperaturas inferiores tima levam a
uma desacelerao das reaes metablicas, com diminuio da velocidade de
multiplicao celular, que em caso extremo, fica impedida.
As variaes quanto ao requerimento trmico permite classificar as bactrias segundo a temperatura tima para o seu crescimento, em:
psicrotrfilas
psicrfilas: entre 12 e 17 C
mesfilas: entre 28 e 37 C
termfilas: 57 e 87 C
hipertermfilas
termfilos extremos

captulo 2

45

Embora grupos excntricos, que necessitam de altas temperaturas para o


seu crescimento, a maioria concentra-se no grupo de mesfilas, principalmente as de interesse mdico, veterinrio e agronmico.
pH
Os valores de pH em torno da neutralidade so os mais adequados para absoro de alimentos para a grande maioria das bactrias. Existem, no entanto, grupos adaptados a viver em ambientes cidos e alcalinos.
Oxignio
O oxignio pode ser indispensvel, letal ou incuo para as bactrias, o que permite classific-las em:
Aerbias estritas: exigem a presena de oxignio, como as do gnero
Acinetobacter.
Microaerfilas: necessitam de baixos teores de oxignio, como o
Campylobacter jejuni.
Facultativas: apresentam mecanismos que as capacitam a utilizar o
oxignio quando disponvel, mas desenvolver-se tambm em sua ausncia.
Escherichia coli e vrias bactrias entricas tem esta caracterstica.
Anaerbias estritas: no toleram o oxignio. Ex.: Clostridium tetani, bactria produtora de potente toxina que s se desenvolve em tecidos necrosados
carentes de oxignio.
Aerotolerantes: suportam a presena de oxignio, sem utiliz-lo em seu
metabolismo. Por exemplo, a bactria Lactobacillus acidophillus.
Exoenzimas
A seletividade da membrana citoplasmtica impede que macromolculas como
protenas, amido, celulose e lipdeos sejam transportadas para o interior da clula. Para essas molculas serem utilizadas pelos microrganismos, necessrio
cindidas, dando origem a compostos menores, aos quais as membranas so
permeveis.
A quebra das molculas promovida por enzimas hidrolticas, denominadas exoenzimas por atuarem fora da membrana citoplasmtica. As exoenzimas apresentam especificidade pelo substrato, atuando sobre protenas ou
amidos, ou determinados lipdeos, e constituem um fator de virulncia, uma

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captulo 2

vez que podem hidrolisar componentes estruturais de tecidos, conferindo ao


microrganismo capacidade invasora e de permanncia em outros organismos vivos.
Alm de estarem associadas nutrio dos microrganismos, as exoenzimas
podem contribuir para a sua sobrevivncia, uma vez que catalisam a hidrlise
de substncias que lhes so txicas ou mesmo letais.

CONEXO
https://www.youtube.com/watch?v=fq6Psf-cQME

2.2 Estudo do crescimento microbiano


2.2.1 Reproduo bacteriana
Crescimento: aumento do protoplasma celular pela sntese de cidos nuclicos, protenas, polissacardeos e lipdeos; e, absoro de gua e eletrlitos.
Termina na diviso celular.
Multiplicao: resposta necessria presso de crescimento.

2.2.2 Modo de reproduo


Cissiparidade: formao de um septo equatorial na regio do mesossomo
e diviso da clula-me, em duas clulas filhas. "Cocos" em qualquer direo,
"bacilos e espirilos", no sentido transversal.

2.2.3 Curva de crescimento bacteriano


Embora as bactrias desenvolvam-se bem em meios de cultura slidos , os estudos de crescimento so feitos essencialmente em meios lquidos e as consideraes que seguem so vlidas para essas condies.
Quando uma determinada bactria semeada num meio lquido de composio apropriada e incubada em temperatura adequada, o seu crescimento
segue uma curva definida e caracterstica.

captulo 2

47

Fase lag (A): esta fase de crescimento ocorre quando as clulas so transferidas de um meio para outro ou de um ambiente para outro. Esta a fase de
ajuste e representa o perodo necessrio para adaptao das clulas ao novo
ambiente. As clulas nesta fase aumentam no volume total em quase duas ou
quatro vezes, mas no se dividem pois as Clulas esto sintetizando DNA, novas
protenas e enzimas, que so um pr-requisito para diviso.
Fase exponencial ou log (B): nesta fase, as clulas esto se dividindo a uma
taxa geomtrica constante at atingir um mximo de crescimento. Os componentes celulares como RNA, protenas, peso seco e polmeros da parede celular
esto tambm aumentando a uma taxa constante. Como as clulas na fase exponencial esto se dividindo a uma taxa mxima, elas so muito menores em
dimetro que as clulas na fase Lag. A fase de crescimento exponencial normalmente chega ao final devido depleo de nutrientes essenciais, diminuio de
oxignio em cultura aerbia ou acmulo de produtos txicos.
Fase estacionria (C): durante esta fase, h rpido decrscimo na taxa de diviso celular. Eventualmente, o nmero total de clulas em diviso ser igual ao
nmero de clulas mortas, resultando na verdadeira populao celular estacionria. A energia necessria para manter as clulas na fase estacionria denominada energia de manuteno e obtida a partir da degradao de produtos
de armazenamento celular, ou seja, glicognio, amido e lipdeos.
Fase de morte ou declnio (D): quando as condies se tornam fortemente
imprprias para o crescimento, as clulas se reproduzem mais lentamente e
as clulas mortas aumentam em nmeros elevados. Nesta fase o meio se encontra deficiente em nutrientes e ricos em toxinas produzidas pelos prprios
microrganismos.
N de bactrias (log)
estacionria
log

morte

lag
Tempo
Figura 2.1 http://www.oocities.org/capecanaveral/lab/6969/grafico.gif

48

captulo 2

CONEXO
https://www.youtube.com/watch?v=wDFMtsPFBrQ

2.3 Metabolismo Bacteriano


Uma vez garantidos pelo ambiente os nutrientes e as condies adequadas para
assimil-los, as bactrias vo absorv-los e transform-los para que cumpram
suas funes bsicas, quais sejam, o suprimento de energia e de matria prima.
Como matria-prima, os nutrientes vo ser transformados em estruturas celulares ou em molculas acessrias sua sntese e funcionamento.

2.3.1 Obteno de energia


As substncias com alto valor energtico so sempre aquelas com elevado grau
de reduo, e grande parte das bactrias (exceo s fotossintetizantes) vai obter toda energia de que necessita por oxidao desses substratos. As substncias preferencialmente oxidadas por microrganismos so os acares, seguidos de protenas, peptdeos e, mais raramente, as gorduras.
As bactrias utilizam energia para o transporte de nutrientes, o movimento
dos flagelos, mas, sobretudo para as biossnteses. Wieland (1912) reconheceu
que a maioria das reaes biolgicas, ocorre na ausncia de oxignio, por desidrogenao. Em biologia, pode-se dizer que a perda de um eltron equivale a
perda de um hidrognio. Pode-se, ento, definir oxidao como o ganho de um
hidrognio e reduo como a perda de um hidrognio.

2.3.2 Fermentao
Metabolismo no qual os compostos orgnicos servem como doadores e receptores de eltrons (hidrognio). A fermentao conduz, geralmente, ciso parcial de molculas de glicose (gliclise).
Conceito antigo (clssico): decomposio microbiana de carboidratos na
ausncia de oxignio.

captulo 2

49

Dentre os vrios tipos de fermentao, pode-se citar:


Fermentao homoltica: produo de cido ltico como produto final;
Fermentao alcolica: produo de lcool como produto final;
Fermentao mista: produo de lcool, cido e gs;
Fermentao butileno-gliclica: produo do butileno glicol (no cido)
como produto final.

2.3.3 Putrefao
Decomposio de compostos nitrogenados (protenas), utilizando-se de substncia orgnica como aceptor-doador de eltrons. um tipo de fermentao que
produz produtos finais de odor desagradvel: indol, escatol, cido sulfdrico.

2.3.4 Respirao celular


A respirao celular o principal processo de gerao de ATP em que molculas
so oxidadas e o aceptor final de eltrons quase sempre uma molcula inorgnica. Ela pode ser de dois tipos: respirao aerbia, quando o aceptor final de
eltrons o O2, e anaerbia, quando o aceptor final de eltrons uma molcula
inorgnica que no o oxignio molecular ou, raramente, uma molcula orgnica.
Respirao aerbia: Na respirao aerbia o cido pirvico produto da gliclise, convertido a CO2 e H2O, com um grande saldo energtico de 36 ATP em
eucariotos e 38 ATP em procariotos. Aps a gliclise, o composto formado passa
por uma srie de reaes bioqumicas, chamada de ciclo de Krebs, no qual libera
CO2 na atmosfera. Aps essa fase, compostos altamente energticos (coenzimas
reduzidas a NADH e FADH2) sofrem uma srie de redues em processos de reaes, chamados de cadeia transportadora de eltrons, no quais as molculas de H+
so entregues ao oxignio, resultando na formao de gua e liberao de energia.
Para que o cido pirvico entre no ciclo de Krebs, ele precisa perder uma molcula
de CO2 e se tornar um composto de dois carbonos, chamado de grupo acetil, em
um processo de descarboxilao. Esse grupo acetil se liga coenzima A, formando

50

captulo 2

o complexo acetil coenzima A (acetil CoA). Nesse processo, o cido pirvico tambm oxidado e NAD+ reduzido a NADH. Quando o acetil CoA entra no ciclo de
Krebs, o CoA se desliga do grupo acetil, ligando-se ao cido oxalactico (de quatro
carbonos), para formar o cido ctrico, que o primeiro passo do ciclo de Krebs.

H 3C C

O
SCoA

NADH + H

NAD+

H2O
HS-CoA

Oxaloacetato
COO

C O
Malato
CH2
desidrogenase

COO

Citrato
COO
CH2

HO C COO

O
Citrato
sintase

CH2

O
Aconitase

COO

COO

COO Malato
HO CH

H C COO

CH2

HO CH

COO
H2O

Isocitrato

CH2

COO
NAD+
NADH + H+

isocitrato
desidrogenase O

O Fumarase

CO2
COO

COO Fumarato

CH2

CH

CH2

HC

C O

COO

Succinil-CoA
sintetase

Succinato
desidrogenase

-cetogluterato
desidrogenase

COO

FADH2

O
FAD

-CetoGlutarato

CH2
COO
Succinato

CoA

COO
O

CH2

COO

HS-CoA NTP

CH2
NDP + P1

CH2
C O

CO2

NAD+
NADH + H+

SCoA
Succcinil-CoA

Figura 2.2 Reao global: 2 cidos pirvicos 6 CO2 + 2 FADH2 + 8 NADH2 + 2 ATP

captulo 2

51

As reaes qumicas no ciclo de Krebs ocorrem em muitas categorias gerais,


como a descarboxilao do cido isoctrico (6C) a cido -cetoglutrico (5C).
Outra categoria geral de reao qumica a oxidao-reduo, como a oxidao
do cido isoctrico, do cido -cetoglutrico, do cido succnico e do cido mlico. Ou seja, tomos de hidrognio so liberados no ciclo de Krebs e capturados pelas coenzimas NAD+ e FAD. Na cadeia transportadora de eltrons h uma
gradual liberao da energia armazenada no NADH e no FADH2, que ser utilizada na gerao quimiosmtica de ATP. Nessa cadeia as molculas transportadoras podem ser de trs classes: flavoprotenas (uma importante coenzima
flavina a flavina mononucleotdeo FMN), citocromos (protena contendo
um grupo ferro) e ubiquinonas ou coenzima Q (transportadoras no-proticas). Essa etapa da respirao aerbia conduzida nos organismos eucariotos
nas mitocndrias e nos procariotos ocorre na membrana celular. O primeiro
passo na cadeia transportadora de eltrons a transferncia dos eltrons do
NADH ao FMN, sendo este reduzido a FMNH2. Os dois H+ do FMNH2 atravessam para o outro lado da membrana por transporte ativo (bombeamento) e
dois eltrons so transferidos para a coenzima Q. O segundo passo a transferncia dos eltrons da coenzima Q aos citocromos, sucessivamente nesta ordem: citb, citc1, citc, cita e cita3. O ltimo citocromo transfere eltrons para o
O2, que, ao se tornar negativo, absorve prtons (H+) do meio intracelular para
formar H2O.
Respirao anaerbia: Na respirao anaerbia o aceptor final de eltrons
diferente do O2. Em Pseudomonas e Bacillus, por exemplo, o aceptor final
um on nitrato (NO3). Outras bactrias, como Desulfovibrio, utilizam sulfato (SO42) e outras, carbonato (CO32). O rendimento energtico na respirao
anaerbia menor em relao respirao aerbia, consequentemente, organismos anaerbicos tendem a crescer mais lentamente que os aerbios. Uma
vantagem do uso de aceptores finais de eltrons diferentes de O2 permitir aos
microrganismos respirarem em ambientes com escassez de oxignio, como
nos sedimentos ou prximo de nascentes hidrotermais submarinas, o que
importante do ponto de vista ecolgico.

52

captulo 2

Diante da utilizao ou no do O2 como aceptor final de eltrons, os microrganismos podem ser classificados como oxibiontes (utilzam o O2) ou anoxibiontes (o aceptor final de eltrons no o O2). Uma importante aplicao
dos processos anaerbicos no tratamento de efluentes industriais. O lodo,
matria orgnica no estado slido, produzido nas estaes de tratamento de
esgoto deve ser adequadamente disposto no ambiente, diminuindo os impactos na natureza, e uma alternativa ao tratamento do lodo o processo de
digesto anaerbia que se baseia na decomposio biolgica utilizando microrganismos, em anaerobiose, para a degradao de matria orgnica. Os
produtos finais desse processo so o dixido de carbono, a amnia e o metano, sendo este ltimo utilizado como fonte alternativa de gerao de energia.
Uma vantagem desse processo comparado com o aerbio a sua baixa produo de lodo biolgico.

2.4 Reaes catablicas para obteno de


energia
A maioria dos microrganismos oxida carboidratos como fonte primria de
energia celular, porque essas biomolculas as mais abundantes na natureza e a
glicose mais importante delas utilizada como fonte de energia pelas clulas.
Os microrganismos degradam a glicose em dois processos distintos para permitir que a energia seja captada em forma aproveitveis, que so a respirao
celular e a fermentao.
Geralmente, tanto a respirao celular quanto a fermentao iniciam-se
pela gliclise, seguindo, posteriormente, vias diferentes. A gliclise a oxidao da glicose em cido pirvico com produo de ATP e NADH. A partir
do cido pirvico a clula poder seguir a via da respirao ou da fermentao. Na respirao, de modo geral, ocorrem mais duas etapas aps a gliclise, que so o ciclo de Krebs e a cadeia respiratria, enquanto na fermentao, o cido pirvico e os eltrons transportados pelo NADH na gliclise

captulo 2

53

so incorporados nos produtos finais da fermentao, que incluem lcool


(etanol) e cido ltico.

2.4.1 Gliclise
Geralmente, a gliclise a primeira etapa no catabolismo dos carboidratos,
sendo essa via utilizada pela maioria dos microrganismos. A gliclise tambm
chamada de via de EmbdenMeyerhofParnas (EMP) e uma via que acontece
em uma sequncia de reaes enzimticas.
Cada molcula de glicose oxidada em duas molculas de piruvato, contendo cada uma 3 tomos de carbono e a energia liberada conservada na forma
de duas molculas de ATP, pela fosforilao ao nvel do substrato, e na forma
de NADH (reduo do NAD+).
A gliclise pode ser dividida em dois estgios:
No estgio primrio (ou etapa preparatria) a glicose fosforilada por dois
ATP e convertida em duas molculas de gliceraldedo3fosfato.
No segundo estgio (ou etapa de conservao de energia) as duas molculas
de gliceraldedo3fosfato so oxidadas por duas molculas de NAD+ e fosforiladas em reao que emprega o fosfato inorgnico, formando quatro ATP, at
formar duas molculas de cido pirvico. A equao geral da gliclise :
Glicose + 2 ADP + 2 Pi + 2 NAD+ 2 piruvato + 2 NADH + 2 H+ + 2 ATP + 2 H2O
A gliclise pode ocorrer tanto na presena quando na ausncia de O2. Em
condies de baixo suprimento de oxignio (hipxia) ou em clulas sem mitocndrias, o produto final da gliclise o lactato e no o piruvato, em um processo denominado gliclise anaerbica:
Glicose + 2 ADP + 2 Pi 2 lactato + 2 ATP + 2 H2O
Muitas bactrias possuem vias alternativas gliclise para oxidar a glicose.
As mais comuns so:

54

captulo 2

Via da pentose fosfato;


Via Entner-Doudoroff.
Glicose
A T P
A DP

Glicose
6-fosfato

Glicose
6-fosfato

Frutose
1-6-difosfato

A T P
A DP
P

Gliceraldedo
3-fosfato
NAD

NAD

NADH2

Gliceraldedo
1,3-difosfato

Gliceraldedo
3-fosfato

P
P

NADH2
P

Gliceraldedo
1,3-difosfato

A DP

P
A DP

A T P

A T P

Glicerato
2-fosfato

Glicerato
2-fosfato

Glicerato
2-fosfato

Glicerato
2-fosfato

H2O

H2O

Fosfoenol-piruvato

Fosfoenol-piruvato

A DP

A DP

A T P

A T P

Piruvato

Piruvato

Figura 2.3 https://alimentacaosaudavel.files.wordpress.com/2009/04/glicolise-12.jpg

captulo 2

55

2.4.2 A Via Pentose Fosfato


Essa via tambm chamada de desvio hexosemonofosfato ou via oxidativa do
fosfogliconato acontece simultaneamente gliclise; no requer e no produz
ATP; e realizada em condies anaerbias.
Seus principais produtos so o NADPH (nicotinamida adenina dinucleotdo fosfato reduzido), que um agente redutor empregado para os processos
anablicos, e a Ribose5fosfato, componente estrutural de nucleotdeos e de
cidos nuclicos. Caracterstica importante dessa via a produo de importantes pentoses intermedirias utilizada na sntese de cidos nuclicos; glicose a partir de dixido de carbono na fotossntese; e certos aminocidos. As
bactrias que utilizam a via pentose fosfato incluem: Bacillus subtilis, E. coli,
Leuconostoc mesenteroides e Enterococcus faecales.

2.4.3 A Via Entner-doudoroff


Essa via utiliza enzimas diferentes daquelas presentes na gliclise, podendo as bactrias que as possuem, metabolizar glicose sem a gliclise ou a via
pentose fosfato. O piruvato formado diretamente na via Entner-doudoroff.
Portanto, assim como as bactrias lcticas, os organismos que utilizam a via
Entner-doudoroff utilizam uma variante da via glicoltica. Essa via gera apenas metade do ATP gerado pela via glicoltica. A via Entner-doudoroff exclusiva de algumas baterias gram-negativas, como Rhizobium, Pseudomonas e
Agrobacteruim.

CONEXO
https://www.youtube.com/watch?v=2wih8fPG7Ik

56

captulo 2

2.5 Reaes anablicas para formao de


macromolculas
Microrganismos podem sintetizar aminocidos direta ou indiretamente a partir
de intermedirios do ciclo de Krebs, outros necessitam que o ambiente fornea
alguns aminocidos pr-formados. Na sntese de aminocidos um grupo amina
adicionado ao cido pirvico, num processo chamado de aminao, quando o grupo amina provm de um aminocido preexistente, chamado de transaminao. A
maioria dos aminocidos formados destinada sntese de protenas, que so essenciais como enzimas, componentes estruturais e toxinas, dentre outros papis.

2.5.1 Biossntese de Purinas e Pirimidinas


Aminocidos, como cido asprtico, glicina e glutamina, sintetizadas a partir
de intermedirios da gliclise e do ciclo de Krebs so utilizados para a produo de purinas e pirimidinas, que so constituintes dos nucleotdeos.

2.5.2 Vias intermedirias ou anfiblicas


As vias anablicas e catablicas no acontecem separadas nas clulas, sendo
integradas por um grupo de intermedirios comuns e tambm dividindo certas
vias metablicas, como o ciclo de Krebs. Essas vias que unem anabolismos e
catabolismo so chamadas de vias intermedirias ou anfiblicas, e permitem
que um composto usado em uma reao de degradao seja usado em outra de
sntese, e vice-versa.

2.6 Diversidade metablica microbiana


A classificao das estratgias metablicas dos microrganismos inclui termos
para as fontes de carbono, para as fontes de energia e para as fontes de eltrons. Em
relao s fontes de carbono, os microrganismos podem ser autotrficos, se utilizam molculas inorgnicas, ou heterotrficas, se utilizam molculas orgnicas.

captulo 2

57

Em relao s fontes de energia, podem ser quimiotrficos, se obtm energia a partir das reaes de oxirreduo dos compostos qumicos orgnicos ou
inorgnicos ou fototrficos, se utilizam a luz como fonte de energia.
Em relao s fontes de eltrons, podem ser litotrficos, se obtm eltrons
a partir de compostos inorgnicos e organotrficos, se obtm eltrons a partir
de compostos orgnicos.

2.7 Princpios de Biologia Molecular


Microbiana
A aplicao da biologia molecular em microbiologia muito vasta, passando
pela rea da sistemtica microbiana com base molecular, pelo estudo da evoluo dos microrganismos e tambm pela sua aplicao na biotecnologia atravs
da engenharia gentica, que permite ao homem a produo de vrias substncias teis, em que a insulina e antibiticos so bons exemplos.
Os microrganismos apresentam uma grande diversidade e, muitos deles
so ainda desconhecidos do homem. Mas como surgiu toda essa diversidade?
Atualmente claro que uma to grande variedade das caractersticas morfolgicas, fisiolgicas e ecolgicas dos diversos grupos de microrganismos
controlada pela sua constituio gentica dos organismos em interao com o
ambiente do qual fazem parte. Esta diversidade microbiana surge como o resultado da evoluo: mutaes e recombinao gentica que ocorrem nos microrganismos que so capazes de viver em vrios habitat. Quando um novo habitat
surge, fica sujeito colonizao quer pelos organismos pr-existentes quer por
novos microrganismos que tenham surgido por mutao gentica. Os microrganismos mais aptos para crescer e proliferar e, ainda, competir com os outros
de forma vantajosa estabelecem-se nesse novo habitat. Assim, o ambiente est
constantemente a selecionar os indivduos mais adaptados. A grande variedade
fsico-qumica dos habitat existentes na Terra permite a grande diversidade de
microrganismos atualmente conhecidos.
Com o conhecimento atual possvel escolher a composio gentica das
clulas com o objetivo de produzir novas substncias. Este processo chamado
de engenharia gentica ou tecnologia do DNA recombinante. Os pesquisadores
podem combinar desta forma caractersticas nicas de clulas to diferentes

58

captulo 2

como uma clula bacteriana e uma clula humana. Assim, com estas tcnicas,
microrganismos foram transformados para a produo industrial de vrias
substncias como a hormnio do crescimento, o agente anticancergeno interferon, vacinas, etc...
Os avanos cientficos que tornaram possvel a engenharia gentica tm
grandes implicaes para o futuro de cientistas e das pessoas em geral. Pela
introduo de genes em microrganismos possvel desenvolver variedades de
micro-organismos que apresentam solues para problemas to diversos como
a poluio, a falta de alimento ou de energia, e ainda para o controlo de doenas. Pelo fato dos cientistas poderem agora produzir novos e microrganismos,
nicos e extremamente teis, uma nova indstria se desenvolve com base na
engenharia gentica - a Biotecnologia.

CONEXO
https://www.youtube.com/watch?v=OEtRVt3Kl3k

2.7.1 Viso geral sobre genes

CONEXO
https://www.youtube.com/watch?v=4R4Q1dcxQVI

Os cidos nucleicos so macromolculas que contm a informao para a determinao da sequncia de aminocidos e, portanto, da estrutura e funo de
todas as protenas de uma clula. O cido desoxirribonucleico (DNA) contm
todas as informaes necessrias para construir as clulas e tecidos de um organismo. A rplica exata desta informao em qualquer espcie garante a sua
continuidade gentica de gerao em gerao e crtico para o desenvolvimento normal de um indivduo. A informao armazenada no DNA arranjado em
unidades hereditrias, agora conhecido como genes, que controlam caractersticas identificveis de um organismo. No processo de transcrio, a informao

captulo 2

59

armazenada no DNA copiada para o cido ribonucleico (RNA), que tem trs
papis distintos na sntese de uma protena.
O RNA mensageiro (RNAm) transporta toda a informao de DNA que especifica a ordem correta dos aminocidos durante a sntese de protenas. Neste
processo, as informaes do RNAm interpretada por um segundo tipo de RNA
o RNA tranportador (RNAt) com o auxlio de um terceiro tipo de RNA, o RNA
ribossomal (RNAr), e suas protenas associadas. A ordem correta de aminocidos montada em sequncia pelo RNAt, ligados por ligaes peptdicas para
compor as protenas.
Descoberta da estrutura do DNA em 1953 e a posterior elucidao de como
este dirige a sntese de RNA, que, em seguida, dirige-montagem de protenas do
chamado dogma central, foram realizaes monumentais que marcam o incio da Biologia Molecular. No entanto, a representao simplificada do dogma
central como DNA-RNA-Proteina no reflete o papel das protenas na sntese de
cidos nucleicos. Alm disso, as protenas so junto de outros componentes,
responsveis pela regulao da expresso gnica, processo pelo qual a informao codificada no DNA descodificada para a sntese das protenas que caracterizam vrios tipos de clulas.

2.7.2 A estrutura e funo do DNA


Os bilogos na dcada de 1940 tinham dificuldade em aceitar o DNA como o
material gentico por causa da simplicidade aparente de sua qumica. O DNA
era conhecido por ser um longo polmero composto por apenas quatro tipos de
subunidades, que se assemelham entre si quimicamente. No incio dos anos
1950, o DNA foi analisado em primeiro lugar por meio de anlise de difrao de
raios-x, uma tcnica para a determinao da estrutura atmica tridimensional
de uma molcula. Os resultados de difrao de raios-X iniciais indicaram que
o DNA era composto de duas cadeias do polmero numa dupla hlice. A observao de que o DNA de cadeia dupla foi de fundamental importncia e uma
das principais pistas que conduziram estrutura de DNA de Watson&Crick. Somente quando este modelo foi proposto o potencial do DNA para a replicao e
informaes de codificao se tornou claras.
Uma molcula de DNA que consiste de duas longas cadeias polinucleotdicas constitudas por quatro tipos de subunidades de nucleotdeos. As ligaes de hidrognio entre as pores de base dos nucleotdeos mantem as duas

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captulo 2

cadeias em conjunto. Os nucleotdeos so compostos de um acar de cinco


carbonos ao qual esto ligados um ou mais grupos de fosfato e uma base contendo nitrognio. No caso dos nucleotdeos no DNA, o acar desoxirribose
est ligado a um grupo fosfato simples (da o nome de cido desoxirribonucleico), e a base pode ser adenina (A), citosina (C), guanina (G), ou timina (T). Os
nucleotdeos esto covalentemente ligados entre si atravs de uma cadeia de
acar e de fosfatos. Uma vez que apenas difere da base em cada um dos quatro
tipos de subunidades, cada cadeia de polinucletido no DNA anloga a um
colar (espinha dorsal) enfiado com quatro tipos de grnulos (os quatro bases A,
C, G e T). Estes mesmos smbolos (A, C, G, e T) so tambm vulgarmente utilizados para designar os quatro nucleotdeos diferentes, isto , as bases com os
seus grupos de acar e fosfato ligados.
A forma na qual as subunidades de nucleotdeos esto alinhados em conjunto numa cadeia de DNA d uma polaridade qumica. Pensando em cada acar como um bloco com um boto saliente (o fosfato 5) de um lado e um furo (a
hidroxila 3), por outro, cada cadeia completa, formado pelo encaixe com furos
puxadores, tero todas as suas subunidades alinhada com a mesma orientao.
Alm disso, as duas extremidades da cadeia ser facilmente distinguveis,
como um tem um buraco (a hidroxila 3) e o outro um boto (o fosfato 5) no
seu terminal. Esta polaridade de uma cadeia de DNA indicada por referncia
a uma extremidade como a extremidade 3 e a outra como fim 5.
A estrutura tridimensional da dupla hlice de DNA decorre da caractersticas
estruturais das suas duas cadeias polinucleotdicas e qumica. Uma vez que estas duas cadeias so mantidas juntas por ligaes de hidrognio entre as bases
sobre as diferentes vertentes, todas as bases esto no interior da dupla hlice, e
os esqueletos de acar-fosfato so do lado de fora. Em cada caso, uma base de
dois anis mais volumosa (a purina) combinada com uma base de anel simples
(uma pirimidina). A sempre faz par com T e G com C. Este emparelhamento de bases complementares permite que os pares de bases para ser embalado no arranjo
energeticamente mais favorvel no interior da dupla hlice. Neste arranjo, cada
par de bases de tamanho semelhante, mantendo assim a estrutura acar-fosfato numa distncia igual entre si ao longo da molcula de DNA. Para maximizar a
eficincia do empacotamento de pares de bases, o acar-fosfato forma em torno
de si para uma dupla hlice, com uma volta completa a cada dez pares de bases.
Cada par de bases pode se encaixar dentro da dupla hlice se as duas cadeias da hlice so antiparalelo, ou seja, apenas se a polaridade de uma cadeia

captulo 2

61

orientada oposta ao da outra cadeia. Uma consequncia destes requisitos de


emparelhamento de bases que cada cadeia de uma molcula de DNA contm
uma sequncia de nucleotdeos que exatamente complementar sequncia
de nucleotdeos do seu parceiro de cadeia.

2.7.3 A estrutura do DNA fornece um mecanismo para


Hereditariedade
Genes transportam informao biolgica que deve ser copiada com preciso
para a transmisso para a prxima gerao de cada vez que uma clula se divide para formar duas clulas filhas. Duas questes biolgicas centrais surgem a
partir desses requisitos: como pode a informao para especificar um organismo ser realizadas sob a forma qumica, e como ele copiado com preciso? A
descoberta da estrutura de dupla hlice do DNA foi um marco em biologia do
sculo XX, pois imediatamente sugeriram respostas para ambas as perguntas,
resolvendo, assim, ao nvel molecular o problema da hereditariedade.
DNA codifica a informao atravs da ordem, ou sequencia, dos nucleotdeos ao longo de cada vertente. Cada base de A, C, T ou G pode ser considerada como uma letra de um alfabeto de quatro letras que explicita as mensagens
biolgicas na estrutura qumica do DNA. O conjunto completo de informaes
no DNA de um organismo chamado de genoma, e carrega as informaes de
todas as protenas que o organismo vai sintetizar. A quantidade de informao
contida nos genomas surpreendente: por exemplo, uma clula humana tpica
contm 2 metros de DNA.
Escrito com quatro letras do alfabeto de nucleotdeos, a sequncia de nucleotdeos de um gene humano muito pequeno ocupa um quarto de uma pgina, enquanto que a sequncia completa de nucleotdeos no genoma humano
iria encher mais do que mil livros e carrega as instrues para formar cerca de
30.000 protenas.

CONEXO
https://www.youtube.com/watch?v=zI0eppS8QH0

62

captulo 2

2.7.4 DNA replicao, reparo e recombinao.


A capacidade das clulas para manter um elevado grau de ordem num universo
catico depende da duplicao exata de grandes quantidades de informao
gentica realizada sob a forma qumica de DNA. Este processo, chamado de replicao de DNA, tem de ocorrer antes de uma clula pode produzir duas clulas filhas geneticamente idnticos. Manter a ordem tambm requer a vigilncia
contnua e reparao desta informao gentica, porque o DNA no interior das
clulas repetidamente danificado por produtos qumicos e radiao do ambiente, assim como por acidentes trmicos e molculas reativas.
Embora a sobrevivncia em curto prazo de uma clula pode depender de
evitar alteraes no seu DNA, a sobrevivncia em longo prazo de uma espcie
exige que as sequncias de DNA poder ser alterados ao longo de muitas geraes. Apesar dos grandes esforos que as clulas fazem para proteger o seu
DNA, alteraes pontuais nas sequncias de DNA ocorrem. Ao longo do tempo,
essas mudanas fornecer a variao gentica em que presses de seleo agir
durante a evoluo dos organismos.

2.7.5 Replicao do DNA


Todos os organismos devem duplicar o seu DNA com extrema preciso e em
altas taxas (at mil nucleotdeos por segundo), antes de cada diviso celular. O
DNA que existe na natureza pode se apresentar de diversas formas, tais como:
fitas simples e duplas, e os dois podem existir tanto na forma linear como na
circular. Como muitos DNAs se apresentam como dupla hlice pode-se apresentar algumas das caractersticas gerais da replicao que se aplicam para
DNA lineares e circulares. Descreveremos o processo de replicao em procariontes e, mais especificamente, em Escherichia coli, organismo no qual ele foi
mais bem estudado.
Todas as vezes que uma clula se divide para produzir clulas filhas, o DNA
precisa se duplicar ou replicar dando origem a uma nova molcula de DNA com
a mesma sequncia de bases existente na original, assegurando, assim, que as
funes que executam sero perpetuadas na sua descendncia.
A replicao do DNA envolve a separao das duas fitas parentais e a produo de duas novas fitas, tendo as parentais como molde. Cada nova molcula de

captulo 2

63

DNA contm uma fita parental e uma fita recm-sintetizada, caracterizando a


replicao semiconservativa.
O processo de replicao complexo e envolve a participao de vrias protenas e enzimas que atuam de forma coordenada para garantir uma fidelidade
considervel.
As regies de fita simples so estabilizadas pelas protenas de ligao de fita
simples (SSB) que protegem essas regies de sofrer hidrlise pelas nucleases.
De modo a aliviar a tenso provocada pela toro da cadeia dupla durante o seu
desenrolar pela helicase, a enzima DNA topoisomerase I se associa com a cadeia parental a montante da helicase. Esta enzima cataliza quebras transitrias
das ligaes fosfodister em um dos filamentos fornecendo um eixo de rotao
que permite que os segmentos de DNA em lados opostos da quebra girem independentemente, com o filamento intacto servindo como eixo. As topoisomerases I so extremamente eficientes pois armazenam a energia resultante da
clivagem das ligaes fosfodister para serem reaproveitadas para recompor o
filamento.
J foram descritas 5 DNA polimerases de E. coli, as DNA polimerases II, IV e
V no so necessrias para a replicao e esto envolvidas em mecanismos de
reparo de danos ao DNA.
As DNA polimerases catalisam a adio de nucleotdeos ao filamento em
crescimento da extremidade 5 para a 3. No terminal 5 do acar h um grupo
fosfato e no 3 existe uma hidroxila livre onde se estabelece a ligao fosfodister com o nucleotdeo que esta sendo incorporado.
Observou-se que as DNA polimerases no so capazes de catalizar a sntese desde o incio, elas necessitam de um pequeno filamento de nucleotdeos,
um oligonucleotdeo iniciador, ao qual ela adiciona os nucleotdeos seguintes.
Esse oligonucleotdeo iniciador de RNA, copiado de forma complementar
fita molde de DNA pela RNA primase. As DNA polimerases, para realizarem o
processo de polimerizao, necessitam tambm dos quatro desoxirribonucleotdeos trifosfato (dTTP, dATP, dGTP e dCTP) e de Mg2+.
A DNA polimerase III um complexo enzimtico com 10 subunidades responsvel pela polimerizao 5 3 da fita de DNA recm-formada. Esta holoenzima apresenta, ainda, a atividade 3 5 exonuclesica que permite que
nucleotdeos incorretos adicionados sejam prontamente removidos, um por
vez, durante a replicao e substitudos por nucleotdeos corretos, mecanismo
de reviso e reparo.

64

captulo 2

A DNA polimerase I tem a funo de reparar e remendar o DNA danificado e


para tanto apresenta as atividades; polimersica 5 3 e exonuclesica 3 5
e 5 3, esta ltima permite que vrios nucleotdeos sejam removidos durante
o reparo.
Durante o processo de replicao do DNA, uma das fitas novas formada
continuamente na direo 5 3 (fita lder) e a outra de maneira descontnua
e no sentido inverso para manter a mesma direo 5 3 (fita retardatria).
A fita descontnua replicada atravs de fragmentos de Okasaki (1000 a 2000
nucleotdeos). Cada um desses fragmentos apresenta, alm do DNA recm sintetizado, um RNA iniciador que ser substitudo por desoxirribonucleotdeos
pela DNA polimerase I e a DNA ligase reconstituir a nova fita. O filamento lder
possui apenas um RNA iniciador que tambm ser substitudo pela DNA polimerase I.
A replicao do DNA se inicia em um ponto especfico da dupla hlice denominado de origem de replicao e prossegue em direes opostas gerando a
formao de duas forquilhas de replicao. A medida que a replicao avana
as forquilhas se distanciam e ocorre a formao de uma bolha de replicao. No
DNA circular dos procariontes existe apenas uma origem de replicao e se forma uma nica bolha enquanto que nos eucariontes existem vrias origens de
replicao e, portanto, se formam vrias bolhas. A nica origem de replicao
presente em E. coli, chamada de OriC, apresenta 245 nucleotdeos e contem
duas sequncias diferentes repetidas conservadas, uma delas rica em A:T o
que facilita a separao dos filamentos e a outra possui stios de ligao para
uma protena importante para a formao da bolha de replicao.
A compreenso do mecanismo de replicao em eucariontes no to extensa em razo de sua maior complexidade. Embora muitos princpios sejam
os mesmos, a replicao eucaritica mais complicada em trs aspectos bsicos: existem vrias origens de replicao, o tempo deve ser controlado de acordo com o tempo de diviso celular e h mais protenas e enzimas envolvidas.

CONEXO
https://www.youtube.com/watch?v=pin3569QfgI

captulo 2

65

2.7.6 Sntese e processamento do RNA


Embora a maioria dos genes codifique protenas, os produtos finais de alguns
genes so molculas de RNA. Vrias destas molculas de RNA tm papis essenciais na sntese de protenas. Uma vez que os genes controlam as estruturas
dos RNAs e das protenas, nos questionamos como as sequncias de pares de
nucleotdeos nas molculas de DNA especificam as sequncias de nucleotdeos
no RNA e aminocidos em molculas proteicas.
A transcrio a sntese de uma molcula de cido ribonucleico (RNA) complementar a um filamento molde de cido desoxirribonucleico (DNA). Os RNAs
produzidos nas clulas procariticas e eucariticas so molculas de uma nica fita composta de nucleotdeos de adenina, guanina, citosina e uracila unida
por ligaes fosfodister que apresentam estruturas secundrias, incluindo
regies de dupla fita intramoleculares que so importantes para suas funes.
As enzimas responsveis pela sntese dos RNAs so denominadas de RNA
polimerases.
Todos os RNAs so sintetizados na direo 5 para 3 e todas as RNA polimerases so capazes de iniciar a sntese de RNA. Nas clulas procariticas existe
apenas um tipo de RNA polimerase e a mais estudada a de E. coli que composta de duas subunidades , uma subunidade e outra , que interagem entre si para formar um complexo. Quando o fator (sigma) se junta ao complexo,
a polimerase ganha especificidade e capaz de se ligar aos stios corretos de
iniciao no DNA e comear a transcrio. As clulas eucariticas possuem trs
RNA polimerases: I (sintetiza os RNAr), II (sintetizam os RNAm) e a III (sintetizam pequenos RNAs incluindo os RNAt).
As trs classes de molculas de RNA so encontradas em clulas procariticas e eucariticas: RNA ribossmico (RNAr), RNA de transferncia (RNAt) e
RNA mensageiro (RNAm).
Os RNAm representam a classe mais heterognea de RNAs encontrada nas
clulas, variando em tamanho de 500 a mais de 6000 nucleotdeos, eles carregam a informao gentica, definindo a sequncia de todas as protenas da clula. Aps a sua sntese, as extremidades dos RNAm eucariticos so modificadas de maneira especfica. Todos os RNAm eucariticos possuem um cap de
nucleotdeo guanina metilada na sua extremidade 5, unido por uma ligao
trifosfato 5- 5. Na extremidade 3 ocorre a adio de vrios (30-100) resduos de
timina formando uma cauda de poli A.

66

captulo 2

Nos eucariontes os RNAm so sintetizados como grandes precursores, composto de xons (sequncias codificadoras) e ntrons (sequncias intervenientes
ou no codificadoras) que precisam ser processados (splicing) antes de se tornarem funcionais. Esse processamento normalmente envolve a remoo dos
ntrons e a ligao dos xons. Atualmente, sabemos que os ntrons interrompem a maioria, mas no todos, os genes eucariticos, raros genes de alguns vrus de procariontes e de uma arquibactria, porm o seu significado biolgico
ainda incerto.
Especula-se que eles possam regular a expresso de genes uma vez que a
presena de grandes ntrons diminui a taxa de acmulo de transcritos em uma
clula. O fato de que os ntrons acumulam mutaes novas muito mais rapidamente que os xons indica que sua sequncia de nucleotdeos no muito
importante. Especula-se que a estrutura xon-ntron dos genes eucariticos
resultado da evoluo de novos genes atravs da fuso de genes ancestrais com
um nico xon e se assim for os ntrons podem ser apenas vestgios do processo
evolutivo. De maneira alternativa os ntrons podem conferir uma vantagem seletiva aumentando a taxa com a qual as sequncias codificantes em xons diferentes de um gene podem se reassociar por recombinao, acelerando assim o
processo de evoluo. Portanto, diferentes ntrons podem ter diferentes papis
e muitos ntrons podem no ter nenhum significado biolgico. Como muitos
genes eucariticos no contm ntrons, acredita-se que essas regies no sejam
necessrias para a expresso gnica normal.
Os RNAt procariticos e eucariticos so semelhantes em tamanho e em
estrutura. Eles apresentam estruturas secundrias, extensas e vrios ribonucleotdeos modificados. Todos os RNAt se apresentam como uma estrutura dobrada com quatro alas distintas, denominada de trevo de quatro folhas, onde
a ala do anticdon a estrutura responsvel pelo reconhecimento do cdon
complementar de uma molcula de RNAm. Outra estrutura proeminente encontrada em todas as molculas de RNAt, o eixo aceptor, formado pelo pareamento de bases encontradas no final de suas extremidade 5 e 3. As trs ltimas bases encontradas no final da extremidade 3 se mantm no pareadas
e possuem sempre a mesma sequncia: 5-CCA- na qual se liga o aminocido.
Essas molculas funcionam como adaptadores que levam os aminocidos para
o local de sntese de protenas.
As molculas de RNAr dos procariontes so de trs tamanhos diferentes
(16S, 23S e 5S) e a dos eucariontes so de quatro tipos (18S, 28S, 5,8S e 5S) que

captulo 2

67

realiza a sntese de protenas. Os RNAr eucariticos so sintetizados como um


nico transcrito com tamanho de 45 S que processado em RNAr 28S, 18S, 5,8S
e 5S. Os RNAs 28S, 5,8S e 5S se associam a protenas ribossmicas para formar a
subunidade maior do ribossomo e o RNAr 18S se associa com outras protenas
especficas para formar a subunidade menor do ribossomo e estas subunidades interagem para formar um ribossomo funcional.
O processo de transcrio dos RNAs pode ser dividido em trs fases: iniciao, alongamento e terminao (Figura 13). Durante a iniciao ocorre a ligao
de uma RNA polimerase a regio no DNA que determina que aquele gene especificamente ser transcrito, a regio do promotor. As sequncias do promotor
reconhecidas pela RNA polimerase so: na posio -10 a Caixa de Pribnow e a
sequncia -35 (procariontes) e na posio -25 a Caixa de Hogness e a Caixa CAAT
(eucariontes) (Figura 14). Durante o alongamento, a RNA polimerase comea a
sintetizar um RNA complementar ao molde de DNA e o fator sigma liberado.
Quando um sinal de terminao atingido ocorre liberao do RNA e da enzima que poder catalizar outros processos de transcrio. Alternativamente
uma protena adicional, o fator r pode ser necessrio para a liberao do RNA
transcrito.

CONEXO
https://www.youtube.com/watch?v=9OPegOKIR8Y

2.7.7 Sntese de protenas


A sntese de protenas ou traduo corresponde etapa final da transferncia
de informao gentica, armazenada no DNA, para as molculas de protenas,
que so os principais componentes estruturais e funcionais das clulas vivas.
Durante a traduo essa informao, expressa em um RNA, utilizada para comandar a sntese de uma protena. O processo de traduo envolve trs componentes principais: o RNA mensageiro (RNAm) que contm a informao necessria para direcionar a sntese de protenas, o RNA de transferncia (RNAt) que
carregam os aminocidos que sero incorporados protena e os ribossomos
que renem o RNAm e o RNAt, de modo a permitir que o aminocido correto

68

captulo 2

seja incorporado protena. A traduo comea prximo extremidade 5, que


corresponde ao terminal amino da protena e prossegue em direo extremidade 3 do RNA, que corresponde ao terminal carboxila da protena.
A mensagem gentica est contida em um cdigo triplo, no sobreposto,
sem vrgulas, degenerado e universal (Figura 15). Somente uma combinao
das quatro bases existentes no RNA (A, T, C e U) trs a trs pode gerar o nmero de combinaes ou cdons (64) necessrios para codificar cada um dos 20
aminocidos que podem ocorrer nas protenas. Nenhuma base compartilhada entre cdons consecutivos. O ribossomo move-se ao longo de trs bases por
vez e como no existe qualquer base interveniente entre os cdons, o cdigo
denominado sem vrgulas. O cdigo degenerado, porque mais de um cdon
podem codificar o mesmo aminocido e universal, porque o mesmo seja em
bactrias ou no homem. Trs cdons (UAA, UAG e UGA) no especificam aminocido e so utilizados como sinais para interromper a sntese de uma protena. O cdon AUG, que especifica somente a metionina, tem um duplo papel:
ele codifica a metionina em qualquer lugar em que ele se encontre no RNA e
tambm marca o incio da sntese proteica.
A traduo um processo dinmico que envolve a interao de enzimas,
RNAt, ribossomos e RNAm de maneiras especficas para produzir uma molcula de protena capaz de desempenhar uma funo celular especfica. Esse
processo normalmente dividido em trs etapas: iniciao, alongamento e
terminao.
A iniciao da sntese de protenas ocorre quando um ribossomo (ambas as
subunidades) acoplado ao RNAm e o stio P ocupado por uma molcula de
metionina RNAt. Este complexo formado pela ao de protenas conhecidas
como fatores de iniciao. Em procariontes trs fatores de iniciao (IF-1, IF-2
e IF-3) participam do processo e em eucariontes existem pelo menos 12 fatores
de iniciao diferentes. O complexo de iniciao se forma justaposto extremidade 5 da regio codificadora do RNAm e a N-formil metionina (fmet) o
primeiro aminocido incorporado em todas as protenas bacterianas. A montagem do complexo de iniciao dirigida pela hidrlise de GTP eo movimento
deste complexo ao longo do RNAm dirigido pela hidrlise de ATP.
O alongamento comea com a ligao de um RNAt, carregado com um aminocido, ao stio A do ribossomo. Em seguida, a peptidiltransferase cataliza a
formao de uma ligao peptdica entre o aminocido do stio A e o aminocido do final da cadeia peptdica crescente no stio P. Participam deste processo

captulo 2

69

dois fatores de alongamento (Tu e FE-G) e ocorre a hidrlise de GTP. A cadeia


peptdica est agora transitoriamente ligada ao stio A. o ribossomo ento
movido um cdon abaixo no RNAm e a cadeia peptidca nascente no stio A se
move para o stio P. Todo o processo recomea para a adio do prximo aminocido. Esta fase idntica tanto em clulas procariticas e eucariticas mas
os fatores de alongamento so diferentes.
A terminao da traduo se d quando o stio A do ribossomo atinge um
dos cdons de terminao do RNAm. Trs fatores proticos denominados de
fatores de liberao (R1, R2 e R3) reconhecem estes e fazem com que a protena
que est unida ltima molcula do RNAt, no stio P, seja liberada. Este processo uma reao dependente de energia obtida pela hidrlise de GTP. Aps a
liberao da protena recm-sintetizada, as subunidades ribossmicas, o RNAt
e o RNAm, se dissociam umas das outras.

CONEXO
https://www.youtube.com/watch?v=rD9sDfvOxy8

CONEXO
https://www.youtube.com/watch?v=bNE8CyYF0q0

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
ALBERTS, B.; BRAY, D.; HOPKIN, K.; JOHNSON, A.; LEWIS, J.; RAFF, M.; ROBERTS, K.; WALTER, P.
2011. Fundamentos da Biologia Celular. 3 Edio. Editora Artmed.
ALBERTS, B.; JOHNSON, A.; LEWIS, J.; RAFF, M.; ROBERTS, K.; WALTER, P. 2010. Biologia
Molecular da Clula. 5 Edio. Editora Artmed.
FALCONE, Carolina Oliveira. Avaliao de lpase bacteriana visando sua utilizao na gerao
de biodiesel a parti r de resduos oleosos do saneamento. 2009. Disponvel em: htt p://www.
prh29.ufes.br/downloads/PGs%202009.1/PG_Carolina%20Falcone.pdf.
JAWETZ; MELNICK; ADELBERG. Microbiologia mdica. 24 ed. Rio de Janeiro. Editora McGraw-Hill
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70

captulo 2

MADIGAN, Michael T.; MARTNKO, John M.; PARKER, Jack. Microbiologia de Brock. 12 ed. Editora:
Artmed. So Paulo. 2010.
MURRAY, Patrick R; ROSENTHAL, Ken S; PFALLER, Michael A. Microbiologia mdica. 6. ed. Rio de
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TORTORA, Gerard J.; FUNKE, Berdell R.; CASE, Christi ne L. Microbiologia. 8 ed. Editora Artmed.
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TRABULSI, ALTERTHUM. Microbiologia. 5 Ed. So Paulo: Atheneu, 2008.

captulo 2

71

72

captulo 2

3
Gentica
Bacteriana

OBJETIVOS
1.

Conhecer a Gentica Bacteriana;

2.

Aprender sobre Mutao e Recombinao;

3.

Estudar a Recombinao gentica e os Principais mecanismos de regulao gnica.

74

captulo 3

3.1 Gentica bacteriana


A Gentica bacteriana, se comparado ao genoma eucarioto, o genoma bacteriano relativamente pequeno e se encontra em contato direto com o citoplasma
(ausncia de carioteca). As informaes genticas das bactrias esto contidas
em um nico cromossomo. Outras informaes tambm so encontradas em
plasmdios, DNA frgil e transposons.
O cromossomo bacteriano uma organela geralmente circular associada a
protenas, que quando se condensa, forma uma massa chamada de nucleide,
encontrando-se aderido membrana celular em vrios pontos. composto por
DNA de cadeia dupla e tem forma envelopada e compacta, por ter somente uma
cpia de cada gene, as bactrias so geneticamente haplides. A replicao semiconservativa, os genes esto organizados em operons, no apresenta ntrons,
tem alto contedo G + C e possui baixa frequncia de sequncias repetidas.
Pequenas quantidades de DNA extracromossomial tambm so encontradas nos procariotos na forma de plasmdio, uma estrutura circular e com genes que conferem propriedades especiais s clulas, como fator de resistncia
a antimicrobianos (Fator - R), fatores sexuais (Fator - F) e produo de enzimas
e toxinas, mas no so essenciais para a sobrevivncia da bactria, embora possa proporcionar vantagens seletivas. Os plasmdios podem ser transferidos de
uma bactria para outra por conjugao e a maioria carrega de um a mais tipos.
Eles so capazes de autoduplicao independente da replicao cromossmica.
Os transposons, tambm chamados de genes saltadores ou sequncias de
insero, so pequenos segmentos lineares de DNA que podem se mover de
uma posio para outra, cromossomo-plasmdio, plasmdio-cromossomo ou
plasmdio-plasmdio, deixando cpias no stio de insero. Eles no se autoduplicam. O DNA frgil so vrus bacterianos basicamente constitudos de DNA
envoltos por uma capa protica. Esses bacterifagos injetam seu material gentico na clula bacteriana, a qual pode passar a transcrever essa nova informao se ela for inserida no genoma.
As bactrias podem apresentar variaes genticas que resultam em clones
com propriedades distintas da linhagem selvagem original. A variabilidade
gentica se d atravs de mutao ou recombinao.

captulo 3

75

3.1.1 Mutaes
Mutaes so alteraes na sequencia de bases do DNA contidas no genoma de
um organismo, produzindo uma linhagem mutante. Algumas vezes, essas alteraes das bases de um gene causam mudanas na protena codificada por ele,
sendo uma fonte de variabilidade gentica, permitindo o processo de adaptao. Elas podem ser detectadas por variaes fenotpicas ou variaes em processo bioqumico e biofsico.
De acordo o agente, as mutaes podem ser espontneas ou induzidas. As
mutaes espontneas ocorrem devido a erros durante a replicao do DNA ou
pela exposio radiao ou agentes qumicos, sendo raras de acontecer, com
frequncia de 1x109 a 1x1012 por gerao para cada gene. As induzidas so geradas pela exposio do organismo ao de agentes genotxicos. As mutaes
podem ser neutras, desvantajosas, letais e at mesmo benficas.
Quando as mutaes se tornam estveis, elas podem ser passadas de uma
gerao para outra. E entre as principais variaes fenotpicas resultantes dessas alteraes, so conhecidas linhagens de mutantes auxotrficas (incapazes
de sintetizar um ou mais fatores de crescimento as linhagens selvagens so
prototrficas), resistentes a drogas (diferenas na tolerncia a drogas), morfolgicas (incapacidade de produzir flagelo, pili, cpsula, ou variaes na forma),
temperatura-sensveis (incapazes de produzir um metablito ou uma funo
a temperaturas normal) e supressor-sensvel (incapaz de funcionar, a menos
que ocorra outra mutao ou fator, ou outro supressor esteja presente).

3.1.2 Recombinao
A recombinao gentica a troca de material gentico entre duas clulas, formando novas combinaes gnicas, por um conjunto de processo que produzem rearranjos entre genes ou parte desses. Ela contribui para a diversidade
gentica da populao, mas um evento raro e no parte essencial do ciclo de
vida dos organismos procariotros. Os mecanismos evolutivos que permitem a
recombinao so: transformao, transduo e conjugao.
1. Transformao
Processo pelo qual o DNA livre no meio liberado de uma clula doadora
incorporado por uma clula receptora, podendo est apresentar alteraes

76

captulo 3

genticas. A clula bacteriana para receber o DNA, deve estar no estado de competncia, apresentando alteraes fisiolgicas que tornam a membrana celular
permevel a molculas grandes de DNA. Apenas algumas linhagens so competentes, indicando que essa capacidade seja determinada geneticamente.
Somente os fragmentos de DNA de fita simples so incorporados ao genoma
por recombinao.
Na integrao do DNA transformante ao genoma bacteriano, o fragmento
se liga superfcie celular atravs de uma protena de ligao. Aps a captao,
o DNA se liga a uma protena especfica de competncia e permanece ligada a
ela at chegar ao cromossomo. Na replicao desses DNA heteroduplex, so formados duas molculas de DNA, uma parental e outra recombinante. Durante
a diviso celular, o DNA recombinante estar na clula transformada, que ser
geneticamente diferente da clula parental. Estas clulas transformadas so
chamadas de recombinantes ou hbridas.
2. Transduo
Processo pelo qual o DNA bacteriano poder ser transferido de uma clula a
outra atravs da ao de um vrus. Aps a penetrao do DNA do fago, inicia-se
o processo de replicao viral, quando protenas so sintetizadas e o cromossomo bacteriano destitudo. Eventualmente, fragmentos de DNA so empacotados dentro do capsdio do fago no processo de montagem da partcula. A clula
doadora sofre lise e libera partculas virais contendo o DNA bacteriano, at que
estas infectem outras clulas e ocorra a recombinao, gerando gentipos diferentes nas clulas receptoras.

CONEXO
https://www.youtube.com/watch?v=HyrKRW4N-Dw

3. Conjugao
Processo de transferncia de genes envolvendo o contato entre duas clulas.
Esse mecanismo codificado por plasmdios, mas pode haver a transferncia
de outros elementos genticos. A clula doadora possui o plasmdio, designada de clula macho, e a receptora, denominada de fmea, no possui esse
elemento.

captulo 3

77

A transferncia do plasmdio ocorre em quatro etapas. A primeira a formao de uma unio especfica doador-receptor (contato efetivo) atravs de pili
sexual presente na clula doadora que se liga clula receptora por um receptor presente nesta. Aps esse pareamento, ocorre uma retrao do pili, aproximando as clulas. A segunda a preparao para transferncia do DNA, chamada de mobilizao, que comea quando uma protena corta o DNA no stio
de transferncia e inicia uma replicao do tipo crculo rolante, que a terceira
etapa, a de transferncia do DNA. A sntese de DNA acontece nas duas clulas,
na doadora, para repor a fita transferida, e na receptora, para duplicar o DNA
recebido. A ltima etapa a formao de um plasmdio funcional replicativo na
clula receptora, que se torna doadora.
Esse processo tem grande importncia ecolgica, dada a sua natureza infecciosa. J houve muitos problemas nos tratamentos de doenas infecciosas
devido a fentipos de resistncia a drogas decorrente a presena de plasmdios
conjugativos em populaes de clulas bacterianas.

CONEXO
https://www.youtube.com/watch?v=dhhTZXtwfL4

4. Transposio
A transposio o processo pelo qual genes ao longo do cromossomo bacteriano saltam de um local para outro do genoma, sendo um evento raro. Esse
mecanismo realizado por elementos genticos, chamados de elementos de
transposio, que so as sequncias de insero, os transposons e alguns vrus especiais. Os dois primeiros elementos possuem um gene que codifica uma
trasnposase, que catalisa a clivagem e remontagem do DNA, e pequenas repeties terminais invertidas nas extremidades do DNA que se inserem devido essas extremidades serem contnuas.
As sequncias de insero so elementos mais simples, carreando apenas informaes genticas para a sua insero em novos locais. Os transposons so maiores que as sequncias de insero e tambm possuem outros

78

captulo 3

genes, que com frequncia incluem marcadores de resistncia a drogas. H


tambm os transposons conjugativos, que possuem genes que permitem
sua mobilizao para outro stio e permite sua transferncia de uma bactria
para outra.
Alm dos genes de resistncia e a capacidade de se transportarem para plamdios conjugativos, os transposons podem ter outros elementos, os integrons,
que capturam e expressam genes de outras fontes. Estes possuem um gene que
catalisam a integrase, catalizando outro tipo de recombinao stio-especfica. O integron tambm contm uma sequncia de DNA especfica, a integrase
integra cassetes gnicos, uma estrutura formada por um gene de resistncia a
antibitico e uma pequena regio para recombinao, a um promotor. Mais de
40 diferentes genes de resistncia a antibiticos e outros genes relacionados
virulncia foram identificados nos cassetes.
Os mecanismos de transposio conhecidos so o conservativo e o
replicativo.
Na transposio conservativa, no h replicao, e o elemento transponvel
apenas realocado de um local para outro, sendo que a quantidade de transposons sempre permanece a mesma. No caso dos transposons replicativos, eles se
duplicam e inserem uma nova cpia em outro local, permanecendo o transposon original sempre no seu stio de origem.
As bactrias podem possuir uma resistncia inata a antibiticos.
Organismos que no possuem um stio de reao compatvel com o antibitico possuem uma membrana impermevel a drogas ou a genes que garantem
resistncia, por exemplo, modificando ou inativando a droga com uma enzima. A resistncia tambm pode ser adquirida por uma populao de bactrias
atravs de uma mutao e seleo ou por troca de genes entre linhagens e
espcies.
A resistncia a drogas pode ser cromossmica ou plasmidial. A resistncia
cromossmica quase sempre dirigida a uma s droga, dependendo da ocorrncia de mutaes espontneas, e a transferncia de genes tem uma frequncia
relativamente baixa. Na plasmidial, pode ocorrer resistncia mltipla, os plasmdios podem ser transferidos por conjugao e transferidos a outros gneros
e espcies.

captulo 3

79

3.1.3 Controle da expresso gnica em procariotos


As necessidades de um microrganismo como a bactria Staphylococcus
aureus, por exemplo so muito variadas e mudam constantemente. Para cada
situao a bactria precisa lanar mo de uma bateria de enzimas e protenas
que no estavam disponveis momentos antes e que provavelmente no sero
mais necessria minutos depois.
Como o organismo consegue ligar e desligar genes? A esse processo chamamos controle da expresso gnica.
Existem muitos tipos de RNA na clula: os mRNAs (RNAs mensageiros), os
rRNAs (RNAs ribossomais) e os tRNAs (RNAs transportadores). Quando pensamos em expresso gnica, ou seja, na ativao de um gene para produzir uma
molcula biologicamente ativa, no podemos nos esquecer dos RNAs, que
participam do mecanismo de sntese protica. Sua presena e funcionalidade
influenciam diretamente a produo de uma protena. Portanto, o termo expresso gnica refere-se ao processo em que a informao codificada por um
determinado gene decodificada em uma protena. Teoricamente, a regulao
em qualquer uma das etapas desse processo pode levar a uma expresso gnica
diferencial dos genes que codificam protenas e dos genes que codificam RNAs
funcionais. A partir de um DNA molde at a produo de uma protena funcional, existem vrios pontos que podem influenciar a expresso gnica.
Transcrio
Replicao

RNA

DNA

Traduo
Protena

Figura 3.1

CONEXO
https://www.youtube.com/watch?v=kY8QCoGTBQw

80

captulo 3

3.1.4 Por que regular a expresso gnica?


Alguns produtos gnicos, como as molculas de tRNA, rRNA, protenas ribossomais, RNA polimerase e enzimas que participam de processos metablicos
essenciais, so chamados molculas de manuteno, pois so componentes essenciais de quase todas as clulas de qualquer organismo vivo. Os genes
responsveis pela produo dessas molculas de manuteno so expressos
continuamente e so, por isso, chamados genes constitutivos. Em contrapartida, a quantidade de genes em uma determinada clula, ou tipo celular, muito maior do que o nmero de protenas necessrio para o funcionamento daquela clula. A expresso desnecessria de genes e a consequente produo de
protenas resultariam em um gasto energtico muito grande. Ento podemos
concluir que vantajoso regular a transcrio, modulando assim os nveis de
RNAs que so produzidos em um determinado momento da vida daquela clula. Se pensarmos em termos evolutivos, a existncia de um mecanismo de regulao provavelmente ofereceu aos organismos uma vantagem seletiva sobre
os organismos que no o possuam, e por isso muitos dos organismos como
bactrias ancestrais e vrus apresentam mecanismos fantsticos e altamente
elaborados de regulao da expresso de seus genes.

3.1.5 Como os procariotos regulam a expresso gnica?


Os procariotos sofrem com pequenas variaes do meio ambiente, o que leva
necessidade de um ajuste no seu metabolismo que permita melhor adaptao s
variaes do meio externo. Surge ento a primeira pergunta: De que maneira algumas protenas podem variar sua quantidade na clula em resposta ao meio no
qual o organismo se encontra?. A regulao pode ocorrer durante a transcrio
e a consequente produo do RNA e aps a transcrio atravs do processamento. A estabilidade do transcrito influencia a sntese da protena. Outro ponto de
regulao ocorre durante a traduo (ou sntese proteica) e por modificaes na
protena que estaro intimamente relacionadas sua funcionalidade.
De modo geral, a regulao durante a transcrio a mais comum de
ocorrer, principalmente em procariotos. fcil compreender o porqu disso:

captulo 3

81

energeticamente falando, mais barato para a clula evitar que a transcrio


ocorra quando a protena no necessria.
Existem dois tipos possveis de regulao da transcrio; em ambos existe a
participao de um gene regulador:
1. Controle positivo: o produto do gene regulador necessrio para ativar
a expresso de um ou mais genes estruturais. Nesse caso, o produto do gene
regulador chamado ativador.
2. Controle negativo: o produto do gene regulador necessrio para desativar a expresso de genes estruturais. Aqui o produto do gene regulador
chamado repressor.

3.1.6 Regulao negativa e positiva


A expresso de um gene ou transcrio iniciada quando a RNA polimerase se
liga ao promotor em uma sequncia especfica. O produto do gene regulador
(ativador ou repressor) se liga a uma sequncia localizada prxima ao promotor. Algumas vezes, o produto do gene regulador no consegue se ligar sozinho
ao gene e precisa de uma molcula efetora. As molculas efetoras so pequenas
molculas, como aminocidos, acares e outros metablitos semelhantes.
Quando participam em conjunto com um ativador, so chamadas molculas
indutoras (ou simplesmente indutores); quando participam em conjunto com
um repressor, so chamadas molculas co-repressoras (ou simplesmente co
-repressores). O mecanismo de ao das molculas efetoras (indutoras ou corepressoras) consiste na sua ligao ao produto do gene regulador, promovendo
uma mudana na sua conformao, alterando sua capacidade de se ligar na regio do DNA prxima ao promotor do gene que ele controla.
Durante a regulao negativa, o repressor est ligado ao operador na ausncia da molcula efetora (co-repressor). A molcula efetora provoca a dissociao do repressor para permitir a transcrio. No outro caso, o repressor
est ligado na presena da molcula efetora. Quando esta removida, o repressor libera o operador e permite a transcrio. Na regulao positiva, o ativador se liga ao operador na ausncia da molcula efetora (indutor), ativando
a transcrio. Na presena desta, o ativador desligado e para a transcrio.

82

captulo 3

No outro exemplo, o ativador est ligado na presena da molcula efetora.


Quando esta removida, o ativador desligado e pra a transcrio. Com estes exemplos, voc pode observar que existe mais de um tipo de regulao
positiva e negativa.
Vamos utilizar alguns exemplos de regulao em Escherichia coli que
utilizam um ou mais de um dos sistemas citados. As bactrias possuem um
mecanismo geral para a regulao coordenada de genes que codificam produtos relacionados ao funcionamento de um determinado processo bioqumico, como a rota de biossntese de aminocidos. Os genes que codificam
os produtos envolvidos nos diferentes passos de uma rota esto agrupados
em uma regio particular do cromossomo e geralmente so transcritos como
uma nica molcula de RNA. A maioria dos mRNAs de procariotos policistrnica ou polignica um mesmo transcrito codifica mais de uma protena.
A produo do transcrito policistrnico dirigida por um nico promotor, o
qual possui sequncias que so responsveis pela sua regulao. O conjunto
formado pelos genes, pelo promotor e pelas sequncias regulatrias recebe o
nome Operon.

3.1.7 Regulao da atividade enzimtica


Bactria tambm tem maneiras de regular as atividades de suas enzimas.
Inibio por feedback (inibio por retroalimentao)
A atividade de enzimas bacterianas frequentemente sujeita a inibio por
feedback. Normalmente o produto final de uma via que o inibidor e a primeira enzima da via a etapa que regulada.
Modificao epigentica
As atividades de enzimas bacterianas podem tambm ser reguladas por
modificaes covalentes de enzimas. Tais modificaes so chamadas de
MODIFICAES EPIGENTICAS.
Ex. Adenilao da glutamina-sintetase; Fosforilao da glicognio-sintetase
Normalmente essas modificaes so reversveis, de forma que as atividades das enzimas podem ser ligadas e desligadas.

captulo 3

83

3.1.7.1 Operon Lac


Em 1961, os pesquisadores Franois Jacob e Jacques Monod apresentaram
pela primeira vez um modelo de regulao da transcrio em E. coli ao estudar o mecanismo de utilizao da lactose como fonte de carbono por essa
bactria. Esse trabalho, de extrema importncia para a compreenso das interaes entre diferentes produtos gnicos, rendeu a eles o Prmio Nobel de
Medicina em 1965. Jacob e Monod propuseram que a transcrio de dois ou
mais genes contguos regulada por dois elementos. Um desses elementos, o
gene repressor, codifica uma protena que em certas circunstncias se liga a
um segundo elemento, o operador. O operador est sempre prximo ao gene,
ou aos genes, cuja expresso regulada por ele. Na poca em que os dois pesquisadores fizeram seus experimentos, a funo dos promotores (que vimos
anteriormente) ainda era desconhecida. Quando o repressor est ligado ao
operador, ele inibe a atividade da RNA polimerase. Os operadores esto geralmente localizados entre o promotor e a regio codificadora do gene. Surgiu,
ento, o conceito de Operon, sendo formado pelo promotor, operador e unidade transcricional.
O Operon Lac contm um promotor (P), um operador principal (O1), dois
operadores secundrios (O2 e O3) e trs genes estruturais (lacZ, lacY e lacA) que
codificam as enzimas -galactosidase, permease e transacetilase. Alm disso,
apresentam o gene que codifica o repressor (gene I), que possui seu prprio
promotor.

CONEXO
https://www.youtube.com/watch?v=iPQZXMKZEfw

O operador ao qual ele se liga mais fortemente (chamado O1) encontra-se ao


lado do stio de incio da transcrio. O gene I transcrito a partir do seu prprio promotor (P1) e independente dos genes do Operon Lac. O Operon Lac
possui, ainda, outros dois operadores secundrios, aos quais se liga o repressor
lac. O operador O2 est localizado prximo posio +410 (dentro do gene que

84

captulo 3

codifica para a -galactosidase). J o operador O3 est localizado prximo posio 90 (dentro do gene I, que codifica o repressor). O repressor Lac se liga ao
operador principal O1 e a um dos operadores secundrios (O2 ou O3). Como
consequncia, ocorre a formao de uma ala formada pelo DNA presente nos
dois stios de ligao. A formao da ala bloqueia o incio da transcrio, pois
esconde o promotor dos genes Z, Y e A.
Quando a lactose est disponvel, o Operon Lac induzido. Uma molcula
indutora (sinal) se liga a um stio especfico do repressor Lac, causando uma
mudana conformacional que leva dissociao entre o repressor e o operador. O indutor do sistema do Operon Lac no a prpria lactose, mas sim um
ismero da lactose chamado alolactose. Depois de entrar na clula, a lactose
convertida em alolactose por uma das poucas molculas de -galactosidase
existentes. A liberao do repressor Lac causada pela alolactose permite que os
genes do Operon Lac sejam expressos e leva a um aumento de 1.000 vezes na
concentrao da -galactosidase.
A enzima -galactosidase capaz de clivar a lactose em glicose e galactose, que serviro como fonte de carbono para a clula. uma enzima induzvel,
uma vez que sua produo varia de acordo com as necessidades celulares. Sua
expresso ser alta, se a bactria estiver crescendo em meio rico em lactose, e
ser baixa, caso exista outro carboidrato como fonte de carbono. Alm de clivar
a lactose em galactose e glicose, a -galactosidase promove a formao de uma
molcula chamada alolactose. Mais adiante voltaremos a falar sobre o papel
dessa molcula na regulao do Operon Lac.
A galactosdeo permease a protena responsvel pelo transporte de lactose
do meio extracelular para o meio intracelular atravs da membrana bacteriana.
A lactose, como a maioria dos carboidratos, no capaz de atravessar a bicamada lipdica sem uma protena carreadora. A funo da transacetilase in vivo
incerta, mas in vitro capaz de transferir uma acetila, do acetil-CoA, para a
hidroxila do carbono seis de um tiogalactosdeo.
A ligao do repressor Lac reduz em cerca de 1.000 vezes a velocidade de
iniciao da transcrio. Se os stios O2 e O3 forem eliminados por deleo ou
mutao, a ligao do repressor stio O1 reduz a transcrio em cerca de 100
vezes. Apesar desse elaborado complexo de ligao, a represso no absoluta. Mesmo no estado reprimido, cada clula possui algumas molculas de

captulo 3

85

-galactosidase e da galactosdeo permease, presumivelmente sintetizadas nas


raras ocasies em que o repressor dissocia-se temporariamente dos operadores. Esse nvel de transcrio basal essencial para a regulao do Operon.
A lactose no a principal fonte de carbono utilizada pela bactria E. coli.
No entanto, na falta de glicose, ela pode ser metabolizada. Para evitar desperdcio de energia durante a produo das protenas envolvidas no metabolismo
da lactose, elas somente sero produzidas quando a lactose estiver presente
no ambiente. Ento, na ausncia de lactose, existe uma protena repressora
chamada Lac que se liga ao operador do Operon e faz com que ele fique inativo. Na presena de lactose, a enzima -galactosidase produz alolactose, que
funciona como um agente indutor, uma vez que se liga ao repressor Lac e faz
com que ele se desligue do operador. Pois bem, essa uma das formas de
regulao.
A segunda forma de regulao modulada pela presena da glicose. A presena da glicose inibe a induo do Operon Lac, bem como de outros Operons que
controlam a sntese de enzimas envolvidas com o catabolismo de carboidratos.
Esse fenmeno, chamado represso catablica, assegura que, quando presente,
a glicose ser preferencialmente utilizada, em vez de outra fonte de carbono.
A represso catablica mediada por uma protena regulatria conhecida
como CRP (do ingls cAMP receptor protein, que significa protena receptora
de cAMP) ou CAP (do ingls catabolite activator protein) e por uma molcula
efetora pequena chamada cAMP (AMP cclico adenosina 3, 5- monofosfato). A protena CRP um homodmero (cada subunidade possui massa de
22kDa) que possui stios de ligao para o DNA e o cAMP.
Sabe-se que o promotor Lac contm dois stios de ligao separados, um
deles para a ligao da RNA polimerase e outro para a ligao do complexo
CRP-cAMP.
Resumindo a regulao do Operon Lac: na ausncia de glicose e presena de
lactose, o complexo CRP-cAMP se liga ao promotor, estimulando a transcrio,
ao mesmo tempo que o repressor Lac ser desligado do operador pela ao da
alolactose. Na presena de glicose, o complexo CRP-cAMP no se forma e, consequentemente, no ocorre a transcrio. Mas para que a transcrio ocorra
tambm necessria a presena da lactose, que, atravs de seu derivado alolactose, ir deslocar o repressor Lac do operador. O complexo CRP-cAMP precisa

86

captulo 3

estar presente no seu stio de ligao para que o promotor do Operon Lac seja
ativado. O complexo exerce um controle positivo na transcrio do Operon Lac,
oposto ao efeito observado para a protena repressora. Somente o complexo se
liga ao promotor. Na ausncia de cAMP, a protena CRP no se liga.
No inteno deste tpico, saturar este assunto, mas importante que se
saiba que a concentrao intracelular de cAMP sensvel presena de glicose.
A glicose inibe a atividade da enzima adenilato-ciclase, responsvel pela sntese de cAMP, de modo que, na presena de glicose, os nveis de cAMP sero
baixos e com isso no haver formao do complexo com a protena CRP e a
consequente ligao ao promotor, mantendo o Operon Lac inativo.
Desse modo, podemos concluir que, quando existir lactose e glicose, a glicose ser utilizada primeiro, e a lactose s ser utilizada quando os nveis de
glicose baixarem e houver produo de cAMP. Em adio, a presena da lactose
necessria para produzir a alolactose, que a molcula que permitir o desligamento do repressor Lac do operador.
3.1.7.2 Operon ARA
Um esquema regulador mais complexo encontrado no Operon arabinose
(ara) de E. coli. A E. coli pode usar a arabinose como uma fonte de carbono, convertendo-a em xilulose-5-fosfato, um intermedirio na via da pentose fosfato.
Essa converso requer as enzimas ribulose cinase, arabinose isomerase e ribulose-5-fosfato epimerase codificadas pelos genes araB, araA e araD, respectivamente. Os trs genes esto presentes no Operon Ara. Este Operon possui dois
operadores (araO1 e araO2), o stio araI (I de indutor), ao qual se liga a protena
reguladora AraC e um promotor adjacente ao araI, responsvel pela transcrio
dos genes araB, araA e araD (PBAD). O promotor araO2 possui um nico stio
de ligao para a protena AraC, enquanto araI e araO1 possuem dois stios de
ligao na mesma orientao. O gene araC est localizado prximo a essa regio e transcrito a partir do seu prprio promotor (PC), mas sua orientao
oposta aos genes araB, A e D. O stio de ligao da CRP est localizado prximo
ao promotor PBAD, que modula a sua ativao de forma diferente da que vimos
para o Operon ARA (Figura 3.2).

captulo 3

87

Ativador

Repressor

araO2

araC mRNA

araC

araB

L-Ribulose kinase

CH

O P O

D-Xylulose5-fosfato

H C OH

HO C H

C O

CH2OH

L-Ribulose-5-P
epimerase

Genes estruturais
araA

L-Arabinose
isomerase
CH OH
C O

C O

CH OH
2

PBAD araBAD mRNA

CAP local de ligao


araI
araO1

H
H C OH

PC
Local regulador

Sistema
permease

H C OH
HO C H
CH

O P O

H C OH
HO C H

HO C H
HO C H

CH2OH
L-Ribulose

O
L-Ribulose-5-fosfato

captulo 3

88

L-Arabinose

DNA

L-Arabinose
(extracelular)

CH2OH
L-Arabinose
(intracelular)

Figura 3.2 Operon ARA. http://www.bioinfo.org.cn/book/biochemistry/chapt27/957.jpg

No Operon Ara, a protena reguladora AraC exerce um controle positivo e


tambm um controle negativo. De que maneira isso possvel? Pois bem, a

protena reguladora se liga a uma molcula sinal (arabinose) que promove uma
mudana conformacional na sua estrutura, fazendo com que a protena mude
de uma forma repressora para uma forma ativadora da transcrio. Essa mudana tem consequncias drsticas no seu efeito final. Alm disso, a protena
repressora, AraC, regula sua prpria sntese atravs da inibio da transcrio
do prprio gene. Esse mecanismo chamado autoregulao. Por ltimo, os
efeitos de algumas sequncias reguladoras podem ser exercidos a distncia, ou
seja, essas sequncias nem sempre esto localizadas prximas aos promotores.
As sequncias de DNA distantes podem ser aproximadas pela formao de uma
ala de DNA. Essa aproximao ocorre atravs de interaes especficas protenaprotena e protena-DNA.
O papel da protena AraC na regulao do Operon Ara complexo. Veja
como isso funciona! Quando a concentrao de AraC excede 40 cpias por clula, ela regula sua prpria sntese, ligando-se ao araO1 e reprimindo a transcrio do gene araC. Ela age tanto como um regulador positivo quanto como regulador negativo dos genes araB, A e D, ligando-se tanto ao araO2 quanto ao araI.
Quando ligada ao araO2, ela se liga simultaneamente ao araI e inibe a transcrio a partir do PBAD. Quando a arabinose est ausente, no necessrio expressar os genes estruturais que participam do seu metabolismo. A AraC se liga
simultaneamente ao araO2 e ao araI e, como resultado, promove a formao de
uma ala que compreende o DNA localizado entre os dois stios. A formao da
ala impede o acesso da RNA polimerase ao promotor.
Quando a arabinose est presente, ela se liga protena AraC e provoca
uma alterao conformacional, que faz com que a AraC assuma sua funo
como ativadora da transcrio. AraC se liga ao araI, que funciona tambm
como um stio ativador. Se a glicose estiver ausente, ocorre a formao do
complexo CRP-cAMP, o qual se ligar a seu stio de ligao localizado entre o
araO2 e o araI. Essa ligao faz com que a ala de DNA (formada pela protena
ligada ao araO2 e araI) se rompa e auxilia na ligao da AraC ao araI. Nesse
caso, o complexo CRP-cAMP no exerce a funo de auxiliar ligao da RNA
polimerase ao promotor.
Quando a arabinose e a glicose esto abundantes, ou ambas esto ausentes,
o Operon Ara permanece reprimido. Todavia, no se sabe ao certo a situao
em que se encontram as protenas reguladoras e seus stios de ligao nessas
condies. A regulao do Operon Ara rpida e reversvel.

captulo 3

89

CONEXO
https://www.youtube.com/watch?v=7qkb1q7NZ3U

3.1.7.3 Operon TRP


Os vinte aminocidos-padro so requeridos em grandes quantidades para a
sntese de protenas, e a E. coli capaz de sintetizar todos eles. Os genes das
enzimas necessrias para sintetizar um determinado aminocido esto geralmente agrupados num Operon e so expressos todas as vezes que os suprimentos do aminocido esto inadequados para atender s necessidades celulares.
Quando o aminocido estiver abundante, as enzimas biossintetizantes no so
mais necessrias e o Operon reprimido. O Operon triptofano (trp) (figura 2) da
E. coli inclui cinco genes estruturais que codificam as trs enzimas utilizadas
na converso de corismato em triptofano.
trp repressor Trp

high [Trp]: ocorre represso


Lder
Atenuador
trpR

trpL

trpE

Regio reguladora
high[Trp]

trpD

trpC

trpB

trpA

Os genes estruturais
low[Trp]

Atenuada mRNA
trp mRNA
Figura 3.3 Operon TRP. http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/9/95/
Trpoperon.svg/2000p

90

captulo 3

x-Trpoperon.svg.png
O gene trpE codifica o componente I da antranilato sintase, enquanto
o componente II produzido pelo gene trpD. O gene trpC codifica a N-(5fosforribosil antranilato isomerase/indol3glicerol fostato sintase. O gene
trpB codifica a subunidade da triptofano sintase, enquanto o gene trpA codifica a subunidade . A expresso do Operon regulada pela protena repressora
TrpR, que produzida a partir do gene trpR. O gene trpR est localizado a uma
longa distncia do Operon. O repressor Trp um homodmero, com cada subunidade contendo 107 resduos de aminocidos. Quando o triptofano for abundante, ele se liga ao repressor Trp, provocando uma alterao conformacional
que permite ao repressor se ligar ao operador trp e inibir a expresso do Operon
Trp. O stio do operador trp se sobrepe ao promotor, de forma que a ligao
ao repressor pode bloquear a ligao da RNA polimerase. Novamente, esse circuito simples ligar/desligar mediado pelo repressor no conta toda a histria
regulatria. Um mecanismo muito mais intrigante foi descoberto no Operon
Trp. Quando foi descoberta a regulao negativa do Operon Trp modulada pelos nveis de triptofano e sua ligao TrpR, acreditava-se que um mutante para
o gene trpR deveria ser insensvel ao triptofano.
Imagine a surpresa quando descobriram que tal mutante continuava no
expressando os genes estruturais aps a adio de triptofano! A partir dessa
observao, estabeleceu-se um segundo nvel de controle pelo triptofano que
envolvia dois componentes: o tRNA para o triptofano, tRNAtrp e o gene trpL.
O gene trpL codifica um peptdeo que possui 14 aminocidos. Na sua sequncia, ele contm dois cdons para o triptofano e, dessa forma, serve como um
termmetro que sinaliza o suprimento de trp na clula. Se o triptofano estiver
abundante, o tRNAtrp carregado com triptofano tambm estar disponvel e,
com isso, o peptdeo ser traduzido. Se o triptofano estiver ausente, a traduo
pra no ponto em que os ribossomos encontram os cdons trp.
Voc deve estar se perguntando: E da? O que isso tem a ver com a transcrio do Operon?
A resposta para essa pergunta foi dada a partir da observao de que o
mRNA do trpL pode assumir diferentes conformaes devido presena de
vrias regies complementares que podem formar estruturas do tipo grampo
de cabelo. Uma das conformaes semelhante ao terminador da transcrio tpico de bactrias e resulta do pareamento entre as regies 3 e 4. Na outra

captulo 3

91

conformao, o terminador no formado porque a regio 3 est agora pareada


com a regio 2. Essas estruturas so chamadas respectivamente terminador e
antiterminador.
O que leva formao de uma ou de outra estrutura? Em procariotos, a
transcrio e a traduo podem ocorrer simultaneamente, diferentemente dos
eucariotos como veremos na Aula 2 deste mdulo. Ento os ribossomos esto
ligados ao mRNA e podem influenciar a formao dessas estruturas no RNA.
Se houver triptofano, o ribossomo segue logo atrs da RNA polimerase at o
ponto em que interrompido por um cdon de parada, localizado na regio 2
do transcrito. Nessa situao, ocorre a formao da ala atravs do pareamento
entre as regies 3 e 4. Se no houver triptofano, o tRNAtrp no estar carregado
com triptofano e o ribossomo ficar detido na regio 1, esperando a chegada
de um tRNA apropriado. Com isso, a regio 2 est livre e pode se parear com a
regio 3. Essa estrutura no impede o avano da RNA polimerase, e o transcrito
dos genes estruturais produzido normalmente.
A sequncia regulatria 1 crucial para o mecanismo sensvel ao triptofano
que determina se a sequncia 3 pareia com a sequncia 2 (permitindo que a
transcrio continue) ou com a sequncia 4 (transcrio atenuada).

CONEXO
https://www.youtube.com/watch?v=J65z1bKf88o

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
BRUCE et al. Compensatory Mutations, Antibiotic Resistance and the Population Genetics of
Adaptive Evolution in Bacteria Genetics, Vol. 154, 985-997, March 2000.
GRIFFITHS, Anthony J.F.; GELBART, William M.; MILLER, Jeffrey H.; Lewontin, Richard C. Modern
Genetic Analysis. Science, 283 (5407): 1544-1548. 1999. [Verso eletrnica].
MADIGAN, Michael T.; MARTNKO, John M.; PARKER, Jack. Microbiologia de Brock. 12 ed. Editora:
Artmed. So Paulo. 2010.
TRABULSI, Luiz Rachid; ALTERTHUM, Flvio. Microbiologia. 5 ed. So Paulo. Editora: Atheneu. 2008.
TORTORA, Gerard J.; FUNKE, Berdell R.; CASE, Christine L. Microbiologia. 8 ed. Editora Artmed.
Porto Alegre. 2009.

92

captulo 3

4
Histrico da
Antibiticoterapia

OBJETIVOS
1.

Conhecer o Histrico da antibioticoterapia e identificar os Mecanismos de ao dos

principais agentes antimicrobianos.


2.

Aprender sobre a Origem da resistncia aos frmacos e os Mecanismos bioqumicos

de resistncia.

94

captulo 4

4.1 Histrico da antibiticoterapia


Alexander Fleming, bacteriologista, publicou em 1929, em Londres,um trabalho
relatando as propriedades estudadas em meios de culturas de Staphylococcus
aureus, contaminadas por um fungo existente no ar, pertencente ao gnero
Penicillium notatun inibindo o crescimento. A substncia produzida pelo fungo,
depois de isolado, foi denominada de penicilina reconhecida por Fleming,
como de possvel utilizao nos tratamentos das infeces, descoberta esta,
que no foi de imediato valorizado na sua extenso teraputica, permanecendo
como uma curiosidade. Em 1939 foi descoberta a tirotricina por Dubos, obtida a
partir de Bacillus brevis, isolados do solo, entretanto esta substncia mostrouse ser extremamente txica em uso sistmico.
Tendo emprego clnico, e um grande desenvolvimento em 1940, com a
redescoberta por Florey, Chain e colaboradores, dos trabalhos efetuados por
Fleming, aprimorados os estudos, obtendo a penicilina amorfa em estado slido, ainda que impura, demonstrava que a ao da droga tinha efeitos nos curativos em infeces de animais de laboratrio e do homem.
Experincias realizadas por Waksman em 1942, com antibiticos, demonstravam que alguns vegetais superiores apresentavam devidos ao seu metabolismo, substncias similares, denominadas fitoncidas. O uso clnico da penicilina
deu-se durante a Segunda Guerra Mundial, e a sua importncia ento estabelecida, resultando no aparecimento da estreptomicina, em 1944 por Shatz e col.
Em 1945, sendo os trabalhos pioneiros de Fleming, reconhecidos fazendo por
merecer o prmio Nobel de Medicina, com as descobertas de novos antibiticos, as doenas infecciosas sofreram radical transformao, permitindo o controle com mais segurana, razo pelo qual a antibioticoterapia se constitui em
conquista mdica , para se ter um conceito deste poder, do antibitico, basta
analisar os resultados obtidos em 1945 no Hospital Emlio Ribas, em So Paulo,
quando o indice de mortalidade por infeces era de 14,1%, com uso de antibiticos em 1950, a mortalidade em 1962, caiu para 0,7.
A antibioticoterapia, que em nosso meio representa 30 a 40% do receiturio
mdico, hoje um dos ramos mais importantes da Farmacodinmica, apesar
dos problemas que ela envolve. Tendo uma relao completa dos antibiticos
descobertos, com ou sem aplicao clnica, publicado nos boletins de informao do Centro Internacional de informaes Sobre Antibiticos, localizado na
cidade de Liege, na Blgica.

captulo 4

95

O diagnstico suspeito, a facilidade do uso, da compra, falta de controle farmacutico, a medicina popular, as dificuldades para estabelecer-se a etiologia
do processo infeccioso so fatores que levam a usos inigualados, surgindo cada
vez mais agentes patognicos ultra resistentes.
Segundo o conceito estabelecido por Waksman, em 1942, dava-se o nome
de antibitico s substncias elaboradas por seres vivos, geralmente microscpicos, dotados de atividades antimicrobiana, atuando como txicos seletivos,
em pequenas quantidades, presumindo quase sempre "atividade biolgica",
ao contrario de quimioterpico, que so produtos de sntese ou de natureza
vegetal, utilizadas com vrias finalidades teraputicas, eventualmente como
antimicrobiano. As madeiras de lei do Brasil tambm produzem substncias
antibiticas, a exemplo do que ocorre com o jacarand (Dalbergia nigra), o
"Pau-d'Arco" (Tabelina sp), a casuarina, o guarant e outras . Florey e colaboradores resaltaram em 1949 que as plantas e seus produtos, foram utilizados no
tratamento das infeces, em pocas muito remotas, mesmo antes das descobertas microbianas, atualmente tem despertado a ateno dos pesquisadores
as possibilidades e investigaes sobre o papel de tais substncias naturais.
Os novos mtodos, naturais e artificiais, para obteno de medicamentos
como atividade antimicrobiana, somados ao aperfeioamento dos processos
antigos, tornam necessrio a reviso do conceito primitivo de antibitico,algumas destas substncias puderam ser sintetizadas; verificou-se que outras
possuam ao antiblstica, passou-se tambm a utiliza-las com finalidades
industriais, em conservao de alimentos e em desinfeco, em indstrias de
fermentao, seu emprego nos meios de cultura, impedindo a contaminao
bacteriana, permitindo progressos virologia.

4.2 Origem dos Antibiticos


Os antibiticos eram inicialmente obtidos somente a partir de determinados
microrganismos e em seguida de vegetais superiores. Posteriormente, com o
conhecimento da sua estrutura qumica, alguns passaram a ser sintetizados
em laboratrios, enquanto, outros foram obtidos derivados semissintticos
que podem apresentar propriedades diferentes da substncia inicial.
Grande maioria dos antibiticos originada de fungos pertencentes ao
gnero -Penicillium-, -Cephalosporium- e -Streptomyces-, e de bactrias do

96

captulo 4

gnero -Bacillus-. Os microrganismos so conservados em meios adequados


e dependendo da constituio deste meio podem produzir substncias diferentes, obteno dos antibiticos conseguida aps vrias fases bioindustriais,
onde aps incubao, inicia-se a fermentao em meios apropriados, o caldo
fermentado filtrado e o antibitico separado, alguns deles em forma de sais,
destacando-se a penicilina G, que apresentada em forma de sal sdico ou
potssio. No processo, vrias outras substncias so produzidas com propriedades antibiticas, porm com atividade bem menor que a droga principal ou
apresentando efeitos txicos que impedem o seu uso.
Por outro lado, estas substncias podem provocar manifestaes de natureza alrgica quando presente, como impureza, na apresentao comercial do
antibitico. Estudos bioqumicos dos antibiticos naturais permitem o conhecimento de suas formulas estruturais e possibilitam a obteno de alguns por
sntese laboratorial, exemplo o cloranfenicol, estudo este mais recente. H novas perspectivas no campo da antibioticoterapia com o desenvolvimento dos
antibiticos semissintticos, tais substncias so obtidas por modificaes estruturais do prprio antibitico natural, seja por adio de diferentes radicais
ao seu ncleo bsico, o qual pode ser obtido por degradao da droga formada
ou por interrupo do processo fermentativo.
Os antibiticos semissintticos atualmente mais desenvolvidos so os derivados da penicilina, da cefalosporina e das tetraciclinas. As penicilinas semisintticas so obtidas pela adio de diferentes radicais ao ncleo bsico da
penicilina G, que o cido 6-amino-penicilnico, com as cefalosporinas que
resultam do cido 7-amino-cefalospornico. J com as tetracilinas, os derivados semissintticos so obtidos por modificaes na tetraciclina natural ou na
oxitetraciclina.
Os derivados semissintticos podem apresentar propriedades bastante
diferentes da substncia natural. Assim a oxacilina, um dos derivados penicilnicos, apresenta maior resistncia ao do pH cido e da penicilinase do
que a penicilina G, a ampicilina, outra das penicilinas semissintticas, tem boa
atividade sobre vrios bacilos Gram negativos, efeito no observvel com a penicilina G. Com respeito s tetraciclinas sem-sintticas, as modificaes nas
propriedades dizem respeito absoro e concentrao das drogas, no havendo diferenas importantes quanto atividade antimicrobiana, em relao s
tetraciclinas naturais.

captulo 4

97

4.2.1 Classificao Qumica


Segundo a estrutura qumica, os antibiticos so divididos em quatro grupos,
de acordo com a constituio qumica tendo importncia pelo fato das substncias do mesmo grupo apresentar, em geral o mesmo mecanismo de ao e
espectro de ao semelhante, assim os aminoglicosdeos agem de modo idntico, tendo efeito bactericida; todas as penicilinas apresentam o mesmo mecanismo de ao, tendo efeito bactericida; os antibiticos polinicos agem sobre
fungos com efeito fungicida; as tetraciclinas e rifocinas agem na sntese proteica; os macroldeos tm o mesmo efeito bacteriosttico, as que fogem a esta
regra so as polimixinas , que tm mecanismo de ao diferente da bacitracina
e vancomicina.
Derivados de Aminocidos
a) Derivados monopeptdicos - cicloserina.
b) Derivados
poliptdicos
-polimixinas,tirotricina,
bacitracina,
vancomicina.
c) Derivados do aminopropanodiol -tianfenicol, cloranfenicol.
d) Derivados do cido 6-amino-penicilnico-penicilinas.
e) Derivados do cido 7-amino-cefalospornico, cefalosporinas.
Derivados de Aucares
a) Heterosdeos macroldicos-espiramicina, eritromicina, pristinamicina, oleandomicina.
b) Aminoglicosdeos-gentamicina,neomicina, canamicina, estreptomicina, paromomicina, gabromicima, soframicina.
c) Outro heterosdeos- novobiocina, lincomicina.
Derivados de acetatos
a) Polinicos - nistatina, anfotericina B.
b) Aromticos - tetraciclinas, rifocinas.
c) Outros- Griseofulvina e Fosfomicina.
A importncia no agrupamento dos antibiticos segundo a constituio
qumica refere-se a que, em alguns grupos, existe resistncia cruzada entre
os seus constituintes, fato ocorre entre os macroldeos; as tetraciclinas; as

98

captulo 4

cefalosporinas; o cloanfenicol e tianfenicol. Em relao a outros antibiticos,


isto no ocorre, porque as substncias de um mesmo grupo podem apresentar
determinados radicais na frmula estrutural que modificam o ponto de ao
do mecanismo de resistncia bacteriana, principalmente quando de natureza
enzimtica. Pode-se citar a penicilina G e a oxacilina, frente ao estafilococo produtor de penicilinase. Este agente resistente ao da penicilina G porque
a enzima por ele produzida age sobre o anel beta-lactmico, transformando a
penicilina no cido penicilico, desprovido de ao antimicrobiana, enquanto
a oxacilina apresenta ao bactericida sobre o mesmo germe porque a penicilinase no capaz de romper o anel, neste caso protegido por um radical mais
complexo e ligado mais solidamente.
O conhecimento da resistncia cruzada entre antibiticos de importncia
para que se evite a teraputica de duas drogas do mesmo grupo ou a substituio, em caso de resistncia, de um antibitico por outro que sofrer o mesmo
mecanismo de resistncia; no caso de ocorrer resistncia sulfadiazina no
adianta sbstitu-la por outra sulfa, ainda que de eliminao lenta, mesmo fato
ocorrer entre as tetraciclinas, onde a resistncia a uma delas representa, geralmente, resistncia a todo grupo.
Outra consequncia do conhecimento da sensibilidade ou resistncia dos
agentes antibiticos de um mesmo grupo est na avaliao de fidedignidade de
um antibiograma, neste, a sensibildade mostrada para o cloranfenicol deve se
a mesma para o tianfenicol; idem ocorre entre os macroldeos; as tetraciclinas;
as cefalosporinas; as polimixinas.
ANTIBITICO
Ampicilina Anfotericina Bacitracina Canamicina *
Cefalosporinas -.
Cloranfenicol *
Clortetraciclina *
Colistina Eritromicina *
Estreptomicina *
Framicetina *
Gentamicina *
Griseofulvina *

AGENTES PRODUTORES DE ANTIBITICOS:


MICRORGANISMO PRODUTOR
Penicillium notatum, chysogenum
Streptomyces nodosus
Bacillus subtilis
Streptomyces kanamyceticus
Cephalosporium sp
Streptomyces venezuelae
Streptomyces aureofaciens
Bacillus polymyxa
Streptomyces erythreus
Streptomyces griseus
Streptomyces lavendulae
Micromonospora purpurea
Penicillium griseofulvum

captulo 4

99

ANTIBITICO
Lincomicina *
Neomicina *
Nistatina Novobiocina Oleandomicina *
Polimixina B Tirotricina Vancomicina -

AGENTES PRODUTORES DE ANTIBITICOS:


MICRORGANISMO PRODUTOR
Streptomyces lincolnensis
Streptomyces fradiae
Streptomyces noursei
Streptomyces niveus, spheroides
Streptomyces antibioticus
Bacillus polymyxa
Bacillus brevis
Streptomyces orientalis

Tabela 4.1
- Inibidores da sntese da parede celular ou de ao lesiva sobre a membrana celular.
* Inibidores da sntese protica, com/sem bloqueio da formao de cidos nuclicos.

4.2.2 Classificao segundo o espectro de ao


Os agentes infecciosos sobre os quais atuam os antibiticos so as bactrias,
protozorios e fungos, sendo que as bactrias dividem-se em sete grupos, sendo; bactrias Gram negativas, Gram positivas, Riqutsias, Microbactrias, Micoplasmas, Espiroquetas e Bedsnias (antigo grupo dos "grandes virus").
Os antibiticos podem ser classificados de acordo com a ao predominante sobre cada um destes grupos:
a) Ativos sobre protozorios - paromomicina, gabromicina, cabimicina,
tetraciclina, anfotericina B.
b) Ativos sobre fungos - nistatina, anfotericina B, griseofulvina
c) Ativos sobre bactrias Gram positivas - penicilinas, macroldeos,
bacitracina.
d) Ativos sobre bactrias Gram negativas - polimixinas, aminoglicosdeos.
e) Ativos sobre bactrias Gam positivas e Gram (amplo espectro) - cloranfenicol, tetraciclinas, ampicilina, betacilina, cefalosporinas, rifampicina.
f) Ativos sobre Micobactrias - estreptomicina, rifampicina, cicloserina,
canamicina.
g) Ativos sobre Riqutsias, Micoplasmas e Bedsnias - tetraciclinas,
cloranfenicol.
h) Ativos sobre Espiroquetas - penicilinas, eritromicina, tetraciclinas,
cefalosporinas.

100

captulo 4

Esta classificao bastante artificial, pois verifica-se antibiticos ativos em varias classificaes, sendo que estes no so de "largo espectro" , e estes nem sempre
se mostram eficazes, tendo o seu efeito limitado, devido a resistncia bacteriana.
Com base em estudos "in vitro" tambm possvel determinar-se as menores concentraes de um antibitico capazes de, ou impedirem o crescimento,
(concentrao inibitria mnima = CIM), ou causarem a morte do agente infeccioso considerado. Terapeuticamente considera-se a CIM como a capacidade
de indicar se o agente antimicrobiano ou no eficaz, ligando o seu valor com
a concentrao atingida no sangue, tecidos, ou onde se localiza o antibitico
devem avaliar-se as condies do organismo, na possibilidade de se modificar
ou dificultar a atuao prevista.

4.2.3 Classificao segundo seu mecanismo.

4.2.3.1 Antibiticos que Interferem na Sntese da Parede Celular:


Penicilinas, cefalosporinas, vancomicina, bacitracina.
Antibiticos que interferem na funo da membrana citoplasmtica:
Anfotericina B, nistatina, polimixinas.
Antibiticos que interferem na sntese dos cidos nuclicos:
Rifamicinas, griseofulvina.
4.2.3.2 Antibiticos que Interferem na Sntese das Protenas :
a) Inibindo a sntese protica:

Cloranfenicol, tetraciclinas, eritromicina, lincomicina, clindamicina.
b) Determinando sntese de protenas anmalas:

Aminoglicosdeos:

Neomicina, estreptomicina, canamicina, gentamicina, amicacina,
sisomicina, tobramicina.
4.2.3.3 Parede celular, ao do antibitico:
As clulas bacterianas so dotadas de envoltrio semi-rgido, denominado parede celular, responsvel pela conservao da forma do microrganismo; sem

captulo 4

101

a parede celular, a bactria - dotada de elevada presso osmtica interna - no


conseguiria manter sua arquitetura. Em meio isotnico, inibindo-se a formao da parede celular, as bactrias adquirem forma esfrica, passando a receber o nome de esferoplastos, protoplastos ou formas L. Em meio hipotnico
- provido de frgil membrana citoplasmtica - o protoplasto "explode".
A parede celular possui diversos componentes: sua "camada basal" constituda por muco peptideo, um polmero complexo de caractersticas variveis
segundo a espcie considerada, da estrutura da parede celular, esse muco peptdeo da parede celular bacteriana tem como componentes dois amino-acares (cido N-acetilmurmico e N-acetilglucosamina) e quatro peptdeos
(1-alanina, cido d-glutmico, 1-lisina ou cido diaminopimlico). Os amino-aucares alternam-se na formao de mltiplas cadeias lineares, sendo os quatro peptdeos ligados ao cido N-acetilmurmico. Essas cadeias so solidrias
entre si atravs de pontes cruzadas, responsvel, por conseguinte pela estrutura supermolecular do muco peptdeo esse enlace cruzado, conhecido como
transpeptitao, estabelece-se com a participao enzimtica da transpeptidase. A sntese da parede celular efetiva-se em quatro estgios distintos, de incio,
os precursores da parede celular (amino-acares e peptdeos) so sintetizados
e agrupados no citoplasma; a seguir, esses fragmentos do muco peptdeo atravessam a membrana citoplasmtica s custas de mecanismo transportador de
natureza lipdica; depois, j no exterior, estes precursores sofrem polimerizao, formando cadeias lineares; finalmente, por transpeptidao, configura-se
a estrutura final do muco peptdeo.
4.2.3.4 Mecanismo de ao:
A formao da parede celular pode ser inibida por qualquer antibitico
que seja capaz de interferir na sntese do muco peptdeo. Como decorrncia
segue-se formao insuficiente de parede celular, ruptura e morte.
4.2.3.5 Antibiticos que interferem na funo da membrana citoplasmtica:
Anfotericina B, nistatina, polimixinas.

102

captulo 4

4.2.3.6 Antibiticos que interferem na sntese dos cidos nuclicos:


Rifamicinas, griseofulvina.
4.2.3.7 Antibiticos que interferem na sntese das protenas:
a) Inibindo a sntese protica:
Cloranfenicol, tetraciclinas, eritromicina, lincomicina, clindamicina.
b) Determinando sntese de protenas anmalas:
Aminoglicosdeos:
Neomicina, estreptomicina, canamicina, gentamicina, amicacina, sisomicina, tobramicina.
Os antibiticos, anfotericina B e da nistatina, atuam contra grande variedade de fungos e d-se atravs de sua conjugao com esteroides existentes na
membrana citoplasmtica dos microrganismos sensveis. Modifica-se como
consequncia, a permeabilidade dessa membrana, ocorrendo a sada do interior da clula de ons potssio e acares, sendo mais eficaz por inibio do
crescimento. O fato de a membrana citoplasmtica bacteriana no possuir esteroides em sua estrutura explica a toxicidade seletiva desses antibiticos; para
que a anfotericina B e a nistatina atuem efetivamente, exige-se a presena de
esteroide na constituio da membrana do microrganismo, este fato permite
tambm explicar alguns efeitos adversos desses antibiticos.
As polimixinas ligam-se membrana citoplasmtica das bactrias sensveis, determinando alteraes funcionais desta estrutura, segue-se a perda do
contedo celular e morte da bactria. As polimixinas atuam como detergente,
com afinidade por radicais fosfato existentes na membrana citoplasmtica.
4.2.3.8 Antibiticos que interferem na Sntese de cidos Nuclicos.
Os cidos ribonucleico (RNA) e cido desoxirribonucleico (DNA) -so macromolculas de cuja constituio participam um acar (ribose ou desoxirribose)
e quarto pptides (adenina, guanina, timina ou uracil e citosina). Da unio de

captulo 4

103

uma molcula de acar com uma das molculas dos peptdeos tem origem um
nucleotdeo:ribonucleotdeo ou desoxirribonucleotdeo.
A molcula de DNA contm milhes de desoxirribonucleotdeos, dispostos
em sequncia de quatro em quatro, sendo encontrada exclusivamente no ncleo
celular. A molcula de RNA contm, dependendo de sua funo, de 70 a 3000 ribonucleotdeos e encontrada tanto no ncleo como no citoplasma celular.
A informao gentica, necessria para a vida da clula, mantida pelo
DNA, sendo todo o patrimnio gentico conservado e preservado em cada diviso celular. Uma enzima, a DNA polimerase, permite seja produzida uma rplica da molcula de DNA, dando origem a uma cpia da precedente (replicao
da informao gentica).
As duas cpias de DNA separam-se e, a partir da molcula filha, sob ao de
RNA polimerase, tm origem molculas de RNA de trs espcies:
RNAr - RNA-ribosmico
RNAm - RNA-mensageiro
RNAt RNA transportador
Os RNAm dispem-se em fila e contm a informao para a biossntese de
protenas,na forma de uma sequncia de trip de nucleotdeos, sendo responsvel cada trip (cdon) pela codificao para um aminocido particular.
Os RNAr associam-se com partes iguais de protena para constituir os ribossomos, partculas intracitoplasmticas esfricas de que participam duas
fraes, uma 30 S e outra 50 S, os quais se separam por ultracentrifugao. Os
ribossomos so visveis microscopia ptica, tendo um dimetro de aproximadamente 200 A.
Os RNAt fixam-se especialmente aos aminocidos e estes se transformam
em amino-cidos ativados; apresentam tambm, como os RNAm, uma sequncia complementar de trip de nucleotdeos (anticdon), que codifica para um
aminocido particular.
Para efetivar-se a sntese de protenas, tudo se passa segundo uma "programao". Os ribossomos fixam-se sobre os RNAm, a que se ligam pela unidade
30 S; a partir desse momento o ribossomo se transforma numa mquina programada para fabricao de protenas.
Os RNAt, responsveis pelo transporte dos aminocidos colocam-se em
posio sobre o ribossomo por intermdio da complementao "codon-anticodon", os aminocidos, ento, so liberados ao nivel da subunidade 50 S,

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exatamente no endereo preciso fixado por esse cdigo (traduo da informao gentica).
Na sntese da protena, o ribosomo move-se ao longo do rRNA-mensageiro,
fazendo uma leitura do cdigo; aminocidos ativados so, nessa oportunidade,
posto em posio pelo RNAt e, medida que o ribossomo percorre cada trip de
RNAm, outro aminocido adicionado cadeia peptdica crescente.
4.2.3.9 Mecanismo de ao:
Os antibiticos desse grupo inibem a sntese de DNA ou de RNA, ou de ambos,
simultaneamente, vrios antibiticos antineo-plsticos possuem esse mecanismo de ao, atuando como antimicrobianos, a exemplo de:
Rifamicinas
Constituem um grupo de antibiticos com estrutura complexa; interferem com
a RNA-polimerase, isto , no fenmeno de transcrio da informao gentica.
A RNA polimerase das bactrias sensveis forma complexos estveis com as rifamicinas, sendo a inibio da atividade enzimtica proporcional quantidade
de complexo formado. Em presena de bactrias resistentes esses complexos
no so formados, deixado, portanto de ocorrer inibio enzimtica.
Griseofulvina
A griseofulvina bloqueia a sntese de DNA dos microrganismos sensveis, representados por vrias espcies de fungos, sendo, porm desconhecido o local
exato onde ocorre esse bloqueio. Sua relao estrutural com os nucleotdeos
purnicos sugere, no entanto, que esse antibitico possa inibir a sntese de DNA
ao nvel da participao das purinas.
4.2.3.10 Antibiticos que inibem a sntese de protenas.
Como decorrncia da inibio da sntese proteica os microrganismo deixam
de crescer e tornam-se incapazes de multiplicar-se. Esses antibiticos so
bacteriostticos.
Cloranfenicol.
Embora haja muitos estudos a esse respeito, o exato mecanismo de ao do
cloranfenicol ainda no conhecido; sabe-se com certeza que atua inibindo a

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sntese proteica e que se fixa sobre ribossomos. A inibio da sntese protica


pode operar-se tanto em relao ao microrganismo como sobre o paciente que
recebe a droga, tendo, entretanto diferenas quanto s caractersticas de toxicidade que se manifesta em um e em outro caso. Nas bactrias sensveis, supese que o cloranfenicol bloqueie a sntese de protenas em nveis ribossmico,
subunidades 50 S, depois da conjugao do RNAm e durante a condensao de
aminocido (que propiciam a formao de cadeias longas), induzindo a formao preferencial de dipeptdeos e tripeptdeos em vez de cadeias polipeptdicas.
Nas clulas dos mamferos, considera-se que o cloranfenicol inibe a sntese
de protenas, bloqueando a unio dos RNAm aos ribossomos ; o cloranfenicol
no pode, pois, atuar sobre os ribossomos que j se tenham unido aos RNAm,
indo manifestar sua atividade sobretudo nos tecidos de proliferao rpida,
nos sistemas hematopoitico e linforeticular. A sntese de protenas nas clulas eucariticas no est confinada apenas aos ribossomos citoplasmticos, as
mitocndrias so tambm capazes de efetivar a sntese de protenas, o sistema
ribossmico e o mitocondrial apresentam caractersticas fisioqumicas e funcionais diferentes.
Tetraciclinas
So muito numerosas as evidncias que indicam que o modo de ao das tetraciclinas relaciona-se com a inibio da sntese de protenas, parece que o momento mais importante dessa atividade refere-se inibio da unio do RNAt,
j ligado ao aminocido, com a subunidade 30 S do ribossomo; as tetraciclinas
seriam inibidoras da interao "cdon-anticdon".
Eritromicina e outros macroldeos.
A eritromicina e outros antibiticos do grupo dos macroldeos atuam inibindo
seletivamente a sntese proteica, estudos "in vitro" tm demonstrado que essa
atividade se desenvolve por mecanismo de inibio da translocao do RNAt,
j ligado ao aminocido, do doador at o receptor, ou seja, do local onde tm
origem os aminocidos at o ribossomo.
Lincomicina e clindamicina
Esses atuam, ao que tudo indica, se ligado subunidade 50 S do ribossomo,
impedindo, a essa altura, a formao da ligao peptdica.

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captulo 4

4.2.3.11 Antibiticos que atuam determinando a sntese de protenas anmalas.


A formao de protenas anmalas, por atuao de alguns antibiticos, acaba levando a um bloqueio do metabolismo celular; por esse motivo so bactericidas.
Aminoglicosdeos
So muito rigorosas as condies necessrias para que os cdigos do RNAm e
do RNAt se reconheam. Os antibiticos aminoglicosdeos (estreptomicina, canamicina, paromomicina, gentamicina, amicacina, neomicina, tobramicina e
sisomicina) fixam-se aos ribossomos ao nvel da subunidade 30 S, provocando
uma burla do cdigo gentico, com leitura incorreta, que induz incorporao
de um ou mais aminocidos equivocados. Essas protenas defeituosas exercem
efeito letal para a clula ou, pelo menos, determinam para a clula, na ausncia
de protena normal, uma deficincia de funes vitais.
Permeabilidade Reduzida.
Resistncia natural encontrada em determinadas bactrias cuja parede celular tem a propriedade de no permitir a penetrao do antibitico, assim a
droga no tem ao. Por determinarem a inibio da sntese da parede celular,
favorecem a penetrao dos aminoglicosdeos, o tornado apto a exercer sua atividade antimicrobiana. Resistncia adquirida, pode ocorrer em determinadas
bactrias que passam a apresentar, em certo momento, uma reduo da permeabilidade a antibiticos definidos, (que esta em utilizao).
Recursos para combater a resistncia aos antibiticos.
Com o decorrer do tempo, ocorre aumento progressivo do numero de bactrias
resistentes, no processo infeccioso, com objetivo de impedir a progresso do
aparecimento de cepas bacterianas resistentes, prope-se a utilizao de vrios
mtodos:
a) Reduo do consumo e aprimoramento na prescrio de antibiticos,
exigncia de prescrio para compra nas farmcias, fazendo-se a maior restrio possvel ao uso de antibiticos de largo espectro, eliminao do uso de antibiticos como preservativos em raes de animais e em alimentos perecveis,
adoo de rodzio no emprego de antibitico em hospitais.

captulo 4

107

b) Modificao na estrutura qumica dos antibiticos em uso, promovendo-se a substituio de ligaes ou radicais passveis de serem inativados ou
destrudos por enzimas produzidas, pela bactria resistente.
c) Interveno nos mecanismos qumicos da resistncia, atuando no sentido de alterar-se a permeabilidade da clula bacteriana resistente (possibilidade apenas terica).
d) Interveno nos mecanismos genticos de resistncia, atuando-se de
modo a eliminar os fatores R e os plasmdeos, mtodo que tambm constitui
apenas em teoria.

4.2.4 Caractersticas de um antibitico.


Um antibitico ideal deve preencher as seguintes condies:
a) Ter ao antimicrobiana seletiva e potente, sobre ampla srie de
microrganismos;
b) Exercer sua atividade antibacteriana em presena dos lquidos dos organismos, sem se destruir pelas enzimas;
c) No perturbar as defesas do organismo;
d) No lesar os leuccitos, nem lesar os tecidos do hospedeiro;
e) No ter efeitos colaterais;
f) Baixo custo.
Quimioterapia antibacteriana.
Paul Ehrlich introduziu o conceito de ndice quimioterpico, relao entre a
dose tolerada e a dose mnima curativa, o que propriamente caracteriza a quimioterapia o emprego de substncias dotadas de alto parasitotropismo e baixo organotropismo, portanto de ndice quimioterpico elevado, procurando
caracterizar as transformaes da estrutura qumica que podem exercer influncia quer sobre o organotropismo, quer sobre o parasitotropismo e estabeleceu desta maneira, as bases cientficas da investigao quimioterpica, que
tomou ento incremento notvel.
Os progressos realizados diziam respeito, to somente ao tratamento
das doenas causadas por espiroquetas e por protozorios. No que concerne s bactrias propriamente ditas, restringiam-se apenas s observaes
de Morgenroth & Levy (1911), que conseguiram proteger camundongos da

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infeco pneumoccica com a optoquina, um azoderivado da hidroquinina


(metil-hidrocuprena), cuja toxidez, sobretudo em relao ao aparelho visual
(ambliopia), impediu o seu emprego teraputico no homem.
Sulfanilamida e seus derivados.
A sufamidocrisoidina, conhecida como, -Prontosil rubrum-, era capaz de curar
a infeco estreptoccica do camundongo e, quando aplicada teraputica humana, deu resultados positivos, sobretudo em infeces causadas por estreptococos hemolticos.
As observaes de Gerhard Domagk (1914), foram rapidamente confirmadas por outros pesquisadores, que mostraram que a sulfamidocrisoidina se
desdobrava no organismo, pela ruptura da ponte de N = N, libertando um corpo
mais simples, no-corado, ao qual se devia, na realidade, o efeito quimioterpico; a p-aminobenzeno-sulfanamida ou, simplesmente, sulfanilamida (amida
do cido sulfanlico). Com objetivo de se encontrarem preparaes cada vez
menos txicas e com uma margem de ao antibacteriana mais extensa surgiram os derivados N 1-substituindo-os em que a funo amida se encontra ligada a um ncleo heterocclico, tais como a sulfapiridina, sulfatiazol, sulfamerazina e sulfametazina.
Com o objetivo de se obter sulfas apropriadas desinfeco do trato intestinal, procuraram-se compostos que apesar de solveis na gua, fossem
escassamente absorvidos pelo intestino. A sulfaguanidina foi o primeiro destes derivados, seguido da sulfasuxidina e a sulfatalidina, a sulfabenzamina
no tratamento local das feridas, largamente utilizada na 2 Guerra Mundial.
Caracterstica deste composto a de no sofrer antagonismo pelo cido apraminobenzico (PABA), ao contrario do que acontece com a sulfanilamida devido a ao competitiva C6H4NH2, comum s sulfas e ao PABA, atravs da qual se
d a reao entre PABA e pteridina na sntese do cido flico.
A sulfanilamida, portadora da estrutura C6H4NH2, capaz de inibir a formao do cido pterico, mas no a homossulfanilamida, na qual um grupamento CH2 se interpe entre o grupo amnico e o carbono 4.
Derivados sulfnicos e outros.
No tratamento das infeces produzidas por bactrias bons resultados so
obtidos com derivados sulfnicos, sais do cido p-aminossaliclico (PAS) e a
hidrazida do cido isonicotnico. As sulfonas, propostas inicialmente como

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tuberculostticos, so hoje empregadas quase que exclusivamente no tratamento da lepra (dapsona, "Diasona" e "Promin"), o PAS e a isoniazida, em associao com a estreptomicina, integram o esquema trplice no tratamento da
tuberculose.

4.2.5 Sugesto de Aula prtica


Avaliao "in vitro" da sensibilidade bacteriana a antibiticos - Antibiograma
Segundo os princpios gerais que regulamentam a indicao do uso de antimicrobianos e considerando-se a possibilidade de aquisio de resistncia por
parte dos microrganismos, a seleo adequada de um antibitico para o tratamento de determinada doena infecciosa devem levar-se em considerao:
a) O conhecimento da sensibilidade do agente etiolgico, "In vitro", ao
antibitico.
b) A suscetibilidade do microrganismo isolado em relao a outras cepas
da mesma espcie.
c) As propriedades farmacolgicas, incluindo distribuio, excreo,
meia-vida, ndice de ligao com protenas plasmticas e toxicidade, tanto em
indivduos normais quantos em pacientes com insuficincia renal ou insuficincia heptica.
d) A experincia clnica previamente acumulada sobre o emprego do antibitico no tratamento da doena infecciosa em questo.
e) A natureza do processo patolgico subjacente, e sua possibilidade de
interferncia no tratamento.
Dentre esses fatores, a concentrao do antibitico necessrio para inibir o
crescimento ou destruir o microrganismo "in vitro" e as concentraes sricas
do antibitico, alcanadas e mantidas durante o tratamento podem ser avaliadas diretamente no laboratrio clnico.
Cabe ao mdico a responsabilidade da escolha do antibitico mais apropriado para o tratamento de determinada infeco, tendo em conta cada antibitico, a doena diagnosticada e as condies do hospedeiro.
A responsabilidade do laboratrio clnico a de fornecer informaes sobre
a atividade dos antibiticos em relao ao microrganismo isolado, obtidas "in
vitro", atravs de tcnicas padronizadas.

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captulo 4

4.2.5.1 Suscetibilidade e resistncia dos microrganismos.


Considera-se sensvel a um antimicrobiano o microrganismo que morre ou
cujo crescimento inibido, "in vitro", por determinada concentrao do antimicrobiano facilmente atingido, "in vitro", no local onde se encontra o agente
da infeco. O microrganismo considerado resistente se consegue tolerar a
concentrao srica mxima atingida com as doses teraputicas. Admite-se que
as bactrias resistentes podem tolerar concentraes do antimicrobiano duas a
quatro vezes maior que a necessria para inibir o crescimento ou matar as bactrias sensveis da mesma espcie, apesar disso, os termos suscetvel e resistente, tm significado relativo. As concentraes alcanadas por um antibitico
no sangue, no lquido cefalorraquidiano e qualquer tecido ou lquido orgnico
so muito variveis, sofrendo influncia das doses usadas, dos intervalos com
que so administradas e outras propriedades farmacodinmicas do antibitico
relacionadas com absoro, metabolismo e excreo. O conceito de "sensvel e
resistente" deve sempre ser submetido a anlise crtica, a informao do laboratrio clnico fudamenta-se em avaliao feita de acordo com normas padronizadas, segundo as quais determinam a concentrao do antimicrobiano que
colocado em confronto, em condies artificiais, com o microrganismo estudado. Essa inteirao sempre mais complexa "in vitro", havendo necessidade
de aplicar-se a informao do laboratrio clnico com cautela e perspiccia.
4.2.5.2 Indicaes do antibiograma
A avaliao da sensibilidade, ou resistncia, de um microrganismo a antimicrobianos feita por intermdio de testes "in vitro" designados genericamente por
antibiograma.
A realizao de antibiograma para um determinado microrganismo, isolado de material clnico, sempre indicada quando o agente da infeco no
apresenta, habitualmente, comportamento caracterstico em relao aos antimicrobianos, esto includos nessa classe de microrganismos:
-staphylococcus aureus-, enterobactrias, -Hemophilus influenzae-,
-Streptococcus-faecalis- (enterococo), -Pseudomonas- sp., determinadas bactrias anaerbias no esporuladas e algumas bactrias raramente causadoras
de doena humana, geralmente associadas com infeco oportunista. A realizao do antibiograma pode ser indicada para fins epidemiolgicos, pois o

captulo 4

111

comportamento de um agente infeccioso nos testes de sensibilidade pode colaborar decisivamente para a caracterizao de um surto, permitindo, eventualmente, definir a fonte da infeco, sua aplicao pode tambm ser de agente
utilizado no estudo de infeces cruzadas em doentes hospitalizados.
Desaconselha-se a realizao de antibiograma para bactria "saprfitas",
componentes da flora normal.
4.2.5.3 Mtodos utilizados nas provas de sensibilidade
Prova de difuso
A tcnica para realizao do antibiograma ainda mais utilizada a de difuso
em disco. A tcnica adotada essencialmente qualitativa, segundo a qual o
microrganismo testado classificado como sensvel ou suscetvel, intermedirio
ou resistente. O antimicrobiano a ser utilizado nessa prova de livre escolha,
porm deve-se ter cautela nos detalhes tcnicos, usando-se a prova de difuso,
aplicada aos microrganismos que apresentam, velocidade de crescimento
similar das enterobactrias e de -Staphylococcus-aureus -, prova essa tambm
adaptada bactrias mais exigentes, como -Hemophilus influenzae-, -Neisseria
- gonorrhoeae - produtora de betalactamase e Streptococcus-pneumoniae(pneumococos) que desenvolveram resistncia benzilpenicilina e a outros
antibiticos.
Em caso de emergncia clnica, pode-se fazer o inculo direto do material
biolgico, obtido de locais no contaminados com microrganismos da flora
normal, para a execuo do antibiograma, nessa eventualidade, torna-se obrigatria a confirmao do resultado depois do isolamento do microrganismo
em questo. Apesar de ser a mais difundida, a prova de difuso com disco ressente-se de algumas falhas:
a) No possibilita a obteno de resultados quantitativos,
b) No aplicvel microrganismos de crescimento lento (bactrias
anaerbias, por exemplo),
c) Os resultados so imprecisos quanto avaliao da sensibilidade ou
resistncia a determinados antimicrobianos, tais como as polimixinas, em decorrncia da fraca difuso desses antibiticos no meio de gar.

112

captulo 4

Trata-se, no entanto, de prova muito til para ser utilizada na rotina, quando h necessidade de dispor de resultados quantitativos, torna-se necessrio a
realizao de provas suplementares, tais como a prova de diluio.
Prova de diluio.
Esse mtodo fornece resultados quantitativos diretos, baseados na velocidade de crescimento dos microrganismos, ficando excludos alguns problemas
complexos relacionados com a difusibilidade dos antimicrobianos no meio. A
prova de diluio em caldo no tem a mesma versatilidade da prova de difuso,
no possibilitando testar diretamente o material biolgico, por causa da dificuldade de deteco de contaminantes.
Tambm necessrio, em relao prova de diluio em caldo, que o clnico esteja preparado para interpretar adequadamente os resultados apresentados em termos quantitativos. A prova de diluio em caldo indicada
principalmente para o controle teraputico apropriado dos antimicrobianos
em uso. Os dados qualitativos so quase sempre suficientes para orientar a antibioticoterapia da maior parte das infeces; entretanto, a determinao da
sensibilidade dos microrganismos aos antimicrobianos torna-se indispensvel
no controle rigoroso do tratamento de determinados pacientes. A informao
quantitava da sensibilidade til tambm para a confirmao de resultados
duvidosos fornecidos pela prova de difuso com discos, esses resultados ocorrem principalmente nas seguintes eventualidades:
a) Quando se trata de microrganismo de crescimento lento;
b) Quando estiverem sendo utilizados antimicrobianos (as polimixinas,
por exemplo) com baixo poder de difuso no gar;
c) Quando for indicado antimicrobiano potencialmente txico, com indicao eletiva para o tratamento da doena causada por agente infeccioso, cuja
sensibilidade, avaliada pelo mtodo da difuso, tenha sido intermediria. 0
mtodo de diluio tambm indicado para a avaliao da sensibilidade de
bactrias anaerbias, para a determinao da atividade bactericida do antimicrobiano e para a verificao da existncia de sinergismo ou antagonismo de
associaes de antibiticos contra determinado microrganismo.

captulo 4

113

A prova de diluio demonstrou-se ser prtica e econmica para ser aplicada na rotina do laboratrio.
Provas Automatizadas
A automatizao tornou mais fcil a realizao das provas de sensibilidade de
microrganismos a antimicrobianos, a realizao, a leitura e a interpretao das
provas. Teve como principal objetivo substituir com vantagens as provas tradicionais, possibilitando a obteno dos resultados no mesmo dia, com alto grau
de qualidade.
1. Antimicrobianos de primeira escolha.
2. Antimicrobianos de escolha secundria.
Fontes e erros comuns do antibiograma.
Erros tcnicos podem comprometer a preciso e a exatido dos resultados. Um
erro pode ser neutralizado pelo efeito de outro, ou somar-se a ele. Os mais comuns so:
a)
b)
c)
d)
e)

A no utilizao do meio de cultura adequado, e o pH durante o preparo,


O uso de meios de culturas com prazo de validade vencida,
Contaminao dos equipamentos, e do meio de cultura.
Demora na inoculao,
Aparelhagem desregulada, e inadequada.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
AMATO NETO, Vicente , LEVI, Guido Carlos, LOPES, Hlio Vasconcellos, [et al]. Antibiticos na
prtica mdica. 4.ed., rev. e ampl. So Paulo : Roca, 1994. 283p.
JAWETZ; MELNICK; ADELBERG. Microbiologia mdica. 24 ed. Rio de Janeiro. Editora McGraw-Hill
Interamericana do Brasil Ltda. 2009.
MADIGAN, Michael T.; MARTNKO, John M.; PARKER, Jack. Microbiologia de Brock. 12 ed. Editora:
Artmed. So Paulo. 2010.
MURRAY, Patrick R; ROSENTHAL, Ken S; PFALLER, Michael A. Microbiologia mdica. 6. ed. Rio de
Janeiro. Edoti ra Elsevier. 2008.
TRABULSI, ALTERTHUM. Microbiologia. 5 Ed. So Paulo: Atheneu, 2008.

114

captulo 4

5
Mtodos de
Controle de
Crescimento
Microbiano

OBJETIVOS
1.

Conhecer os Mtodos de controle de crescimento microbiano;

2.

Estudar a microbiota humana e as Principais doenas causadas por bactrias e fungos;

3.

Aprender sobre Infeco hospitalar e sua relao com a microbiota normal;

4.

Estudar conceitos de Engenharia gentica e biotecnologia.

116

captulo 5

5.1 Mtodos de controle de crescimento


microbiano
O controle dos microrganismos um assunto abrangente e de inmeras aplicaes prticas envolvendo toda a microbiologia e no s aquela aplicada
medicina.
A Esterilizao o processo que promove completa eliminao ou destruio
de todas as formas de micro-organismos presentes em um determinado local: vrus, bactrias, fungos, protozorios, esporos, para um aceitvel nvel de segurana. O processo de esterilizao pode ser fsico, qumico, fsico- qumico.

5.1.1 Mtodos Fsicos de controle:


O mtodo mais empregado para matar microrganismos o calor, por ser eficaz, barato e prtico. Os microrganismos so considerados mortos quando perdem a capacidade de multiplicar.
Calor mido: A esterilizao empregando calor mido requer temperaturas
acima da de fervura da gua (120). Estas so conseguidas nas autoclaves, e este
o mtodo preferencial de esterilizao desde que o material ou substncia
a ser esterilizado no sofra mudanas pelo calor ou umidade. A esterilizao
mais facilmente alcanada quando os organismos esto em contato direto
como vapor, nestas condies o calor mido matar todos os organismos.
Calor seco: A forma mais simples de esterilizao empregando o calor seco
a flambagem. A incinerao tambm uma forma de esterilizar, empregando
o calor seco. Outra forma de esterilizao empregando o calor seco feita em
fornos, e este binmio tempo e temperatura deve ser observado atentamente.
A maior parte da vidraria empregada em laboratrio esterilizada deste modo.
Pasteurizao: consiste em aquecer o produto a uma dada temperatura,
num dado tempo e a seguir, resfria-lo bruscamente. A pasteurizao reduz o
numero de microrganismos presentes, porm no assegura uma esterilizao.

captulo 5

117

Radiaes: As radiaes tm seus efeitos dependentes do comprimento de


onda, da intensidade, da durao e da distncia da fonte. H pelo menos dois
tipos de radiaes empregadas no controle dos microrganismos: ionizantes e
no ionizantes.
Indicadores biolgicos: So suspenses-padro de esporos bacterianos
submetidos a esterilizao juntamente com os materiais a serem processados
em autoclave, estufas e cmera de radiao. Terminado o ciclo, so colocados
em meio de cultura adequada para o crescimento de esporos, se no houver
crescimento, significa que o processo est validado.
Micro-ondas: Os fornos de micro-ondas so cada vez mais utilizados em laboratrios e as radiaes emitidas no afetam o microrganismo, mas geram
calor. O calor gerado responsvel pela morte dos micro-organismos.
Filtrao: A passagem de solues ou gases atravs de filtros, retm os microrganismos, ento pode ser empregada na remoo de bactrias e fungos,
entretanto, no retm a maioria dos vrus.
Presso Osmtica: A alta concentrao de sais ou acares cria um ambiente hipertnico que provoca a sada de gua do interior da clula microbiana.
Nessas condies os micro-organismos deixam de crescer e isto tem permitido
a preservao de alimentos.
Dessecao: Na falta total de gua, os micro-organismos no so capazes
de crescer, multiplicar, embora possam permanecer viveis por vrios anos.
Quando a gua novamente reposta, os micro-organismos readquirem a capacidade de crescimento. Esta peculiaridade tem sido muito explorada pelos microbiologistas para preservar micro-organismos e o mtodo mais empregado
a liofilizao.

5.1.2 Mtodos Qumicos de controle


Os agentes qumicos so apresentados em grupos que tenham em comum, ou
as funes qumicas, ou elementos qumicos, ou mecanismo de ao.

118

captulo 5

lcoois: A desnaturao de protenas explicao mais aceita para a ao


antimicrobiana. Na ausncia de gua, as protenas no so desnaturadas to
rapidamente quanto na sua presena. Alguns glicis podem ser usados, dependendo das circunstncias, como desinfetante.
Aldedos e derivados: Pode ser facilmente solvel em gua, empregado sob a forma de soluo aquosa em concentraes que variam de 3 a 8%. A
Metenamina um anti-sptico urinrio que deve sua atividade liberao de
aldedo frmico. Em algumas preparaes, a Metenamina misturada ao cido
mandlico, o que aumenta seu poder bactericida.
Fenis e derivados: O fenol um desinfetante fraco, tendo interesse apenas
histrico, pois foi o primeiro agente a ser utilizado como tal na prtica mdica
e cirrgica, os fenis atuam sobre qualquer protena, mesmo aquelas que no
fazem parte da estrutura ou protoplasma do micro-organismo, significando
que, em meio orgnico proteico, os fenis perdem sua eficincia por reduo
da concentrao atuante.
Halognios e derivados: Entre os alognios, o iodo sob forma de tintura
um dos antisspticos mais utilizados nas prticas cirrgicas. O mecanismo de
ao combinao irreversvel com protenas, provavelmente atravs da interao com os aminocidos aromticos, fenilalanina e tirosina.
cidos inorgnicos e orgnicos: Um dos cidos inorgnicos mais populares
o acido brico; porm, em vista dos numerosos casos de intoxicao, seu emprego desaconselhado. Desde h muito tempo tem sido usados alguns cidos
orgnicos, como o cido actico e o cido lctico, no como antissptico, mas
sim na preservao de alimentos hospitalares.
Agentes de superfcie: Embora os sabes se encaixem nessa categoria so
compostos aninicos que possuem limitada ao quando comparada com a
de substncias catinicas. Dentre os detergentes catinicos os derivados de
amnia tem grande utilidade nas desinfeces e antissepsias. O modo preciso de ao dos catinicos no esta totalmente esclarecida, sabendo-se, porm,
que alteram a permeabilidade da membrana, inibe a respirao e a gliclise

captulo 5

119

de formas vegetativas das bactrias, tendo tambm ao sobre fungos, vrus e


esporos bacterianos.
Metais pesados e derivados: O baixo ndice teraputico dos mercuriais e o
perigo de intoxicao por absoro fizeram com que aos poucos deixassem de
serem usados, curiosamente alguns derivados mercuriais tiveram grande aceitao, embora dotados de fraca atividade bactericida e bacteriosttica in vivo,
como o Merbromino.
Agentes oxidantes: A propriedade comum destes agentes a liberao de
oxignio nascente, que extremamente reativo e oxida, entre outras substncias o sistemas enzimticos indispensveis para a sobrevivncia dos
micro-organismos.
Esterilizantes gasosos: Embora tenha atividade esterilizante lenta o xido
de etileno tem sido empregado com sucesso na esterilizao de instrumentos
cirrgicos, fios de agulhas para suturas e plsticos.

5.1.3 Terminologias
Esterilizao: Processo de destruio de todas as formas de vida de um objeto ou material. um processo absoluto, no havendo grau de esterilizao.
Desinfeco: Destruio de microrganismos capazes de transmitir infeco.
So usadas substncias qumicas que so aplicadas em objetos ou materiais.
Reduzem ou inibem o crescimento, mas no esterilizam necessariamente.
Antissepsia: Desinfeco qumica da pele, mucosas e tecidos vivos, um
caso da desinfeco.
Germicida: Agente qumico genrico que mata germes.
Bacteriostase: A condio na qual o crescimento bacteriano est inibido,
mas a bactria no est morta. Se o agente for retirado o crescimento pode
recomear.

120

captulo 5

Assepsia: Ausncia de microrganismos em uma rea. Tcnicas asspticas


previnem a entrada de microrganismos.
Degermao: Remoo de microrganismos da pele por meio de remoo
mecnica ou pelo uso de antisspticos.

5.1.4 A microbiota humana: generalidades.


Todo ser humano nasce sem microrganismos. A aquisio da microbiota bacteriana envolve uma transmisso horizontal, ou seja, pela colonizao por microrganismos. A colonizao de superfcies expostas como a pele, o trato respiratrio superior, o sistema geniturinrio inferior e o trato digestrio, comeam
imediatamente aps o nascimento. Padres de alimentao, hospitalizao e
tratamento com antibiticos so fatores que afetam a composio da microbiota intestinal.
As diversas partes do corpo humano apresentam condies ambientais diversas que oferecem certas vantagens e desvantagens para a vida microbiana.
Diferentes espcies de microrganismos adaptam-se aos distintos ambientes do
corpo.
A microbiota normal humana desenvolve-se por sucesses, desde o nascimento at as diversas fases da vida adulta, resultando em comunidades bacterianas estveis. Os fatores que controlam a composio da microbiota em uma
dada regio do corpo esto relacionados com a natureza do ambiente local, tais
como temperatura, pH, gua, oxigenao, nutrientes e fatores mais complexos
como a ao de componentes do sistema imunolgico.
Estima-se que o corpo humano que contm cerca de 10 trilhes de clulas
seja rotineiramente portador de aproximadamente 100 trilhes de bactrias.
A composio da microbiota bacteriana humana relativamente estvel com
gneros especficos ocupando as diversas regies do corpo durante perodos
particulares na vida de um indivduo. A microbiota humana desempenha funes importantes na sade e na doena.
Os microrganismos membros da microbiota humana podem existir como
mutualistas, quando protegem o hospedeiro competindo por microambientes de forma mais eficiente que patgenos comuns (resistncia colonizao),
produzindo nutrientes importantes e contribuindo para o desenvolvimento

captulo 5

121

do sistema imunolgico; (2) comensais, quando mantm associaes aparentemente neutras sem benefcios ou malefcios detectveis e (3) oportunistas,
quando causam doenas em indivduos imunocomprometidos devido infeco pelo Vrus da Imunodeficincia Humana, terapia imunossupressora de
transplantados, radioterapia, quimioterapia anticncer, queimaduras extensas ou perfuraes das mucosas.
A microbiota humana constitui um dos mecanismos de defesa contra a patognese bacteriana, mas ainda que a maioria dos componentes da microbiota
normal seja inofensiva a indivduos sadios, esta pode constituir um reservatrio de bactrias potencialmente patognicas. Muitas bactrias da microbiota
normal podem agir como oportunistas. Nestas condies a microbiota residente pode ser incapaz de suprimir patgenos transitrios, ou mesmo, alguns
membros da microbiota podem invadir os tecidos do hospedeiro causando doenas muitas vezes graves.
Em indivduos sadios, algumas espcies de bactrias da microbiota oral
causam cries em 80% da populao.
A microbiota normal exerce papel importante na proteo contra agentes
infecciosos por mecanismos ecolgicos e imunolgicos, alm de contribuir
para a nutrio do hospedeiro. Distrbios na microbiota acarretam prejuzos
desses efeitos.
A ingesto de probiticos pode prevenir os efeitos dos distrbios da
microbiota.
Vrios mecanismos de ao, obtidos a partir de estudos experimentais, j
foram propostos para os probiticos: a proteo ecolgica seja pela preveno
da multiplicao dos patgenos ou pela inibio da ao patognica e modulao do sistema imune, por ativao do sistema fagocitrio, produo de imunoglobulinas e citocinas.

5.1.5 Microbiota da pele


A superfcie da pele apresenta diversos tipos de micro-ambientes, em reas
mais secas ou mais midas, que apresentam populaes bacterianas mais esparsas ou mais densas, respectivamente. Nas regies mais midas, como axilas, virilhas, espao entre os dedos dos ps, genitlia e perneo, predominam
organismos Gram-positivos como Staphylococcus aureus e Corynebacterium sp.
Nessas reas, condies como umidade, maior temperatura corporal e maior

122

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concentrao de lipdios cutneos de superfcie favorecem o crescimento bacteriano. Nas reas secas predominam as bactrias Staphylococcus epidermidis
e Propionibacterium acnes. De modo geral, organismos Gram-positivos so os
membros predominantes da superfcie corporal. A bactria Staphylococcus
epidermidis o habitante mais numeroso da pele correspondendo cerca de
90% da microbiota residente em algumas reas.
Em determinadas situaes, as bactrias S. aureus e S. epidermidis podem
causar doenas de pele e afeces nos clios denominadas de blefarites, as
quais podem evoluir para conjuntivites bacterianas. A quantidade de bactrias
vivas na pele de um indivduo relativamente constante. A extenso das reas
colonizadas depende parcialmente da exposio da pele a condies particulares e parcialmente da atividade bactericida da prpria pele. Um alto grau de especificidade est envolvido na aderncia de bactrias nas superfcies epiteliais.
Nem todas as bactrias so capazes de se aderirem pele.

5.1.6 Microbiota da conjuntiva


A conjuntiva (membrana mucosa presente nos olhos dos vertebrados) praticamente estril, mas bactrias pertencentes a diversos gneros podem fazer
parte de uma microbiota transitria da conjuntiva sadia. Os gneros bacterianos mais frequentemente associados conjuntiva so citados a seguir:
Cocos Gram-positivos facultativos Staphylococcus, Streptococcus
CocosGram-positivosanaerbiosestritosPeptococcus,Peptostreptococcus
Cocos Gram-negativos facultativos Neisseria
Bacilos Gram-positivos facultativos Corynebacterium
BacilosGram-positivosanaerbiosestritosClostridium,Propionibacterium
Bacilos Gram-negativos facultativos Haemophilus
Por causa de sua constante exposio ao meio externo, a conjuntiva est sujeita a intensa contaminao microbiana. Contudo, a conjuntiva apresenta um
sistema de proteo bastante eficaz. A ao enxaguatria da lgrima atravs dos
movimentos das plpebras remove a sujeira e os microrganismos que entram
em contato com a conjuntiva e por isto uma microbiota de baixa densidade populacional, consistindo de reduzido nmero de espcies, permanece na superfcie da conjuntiva.

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Em adio ao fato de a lgrima ser um meio de cultura pobre, na sua composio encontram-se imunoglobulinas, lactoferrina e lisozima. As imunoglobulinas (IgG) inativam inmeras bactrias, a lactoferrina atua como sequestrador
de ferro que um nutriente mineral essencial para o metabolismo bacteriano e
a lisozima uma enzima que impede a formao de paredes celulares bacterianas A ao sinergtica destes componentes um fator importante no controle
de controle de bactrias. Quando algum fator rompe o equilbrio entre a microbiota residente e a transitria, pode haver o desenvolvimento de doenas.
Dentre estes fatores encontram-se o desequilbrio imunolgico, o uso indiscriminado de colrios contendo agentes antimicrobianos ou corticoides. Os
corticosteroides, por diminuir a resistncia do hospedeiro podem aumentar a
virulncia de espcies patognicas e pode permitir que microrganismos normalmente comensais comportem-se como patgenos.

5.1.7 Microbiota do esfago


O esfago sadio e anatomicamente normal um rgo praticamente estril e
bactrias, se presentes, so apenas transitrias. Contudo, condies patolgicas podem alterar a anatomia do esfago e predispor o rgo ao estabelecimento de uma microbiota residente, constituda de microrganismos potencialmente patognicos.

5.1.8 Microbiota do estmago


No estmago, os microrganismos so geralmente transitrios e sua densidade
populacional mantida baixa devido s duras condies ambientais. A quantidade de bactrias logo aps as refeies, estimada em cerca de 101 a 102
bactrias por grama de contedo estomacal, sendo praticamente indetectvel
aps a digesto.
A bactria Helicobacter pylori habita o estmago de 50% da populao mundial. Provavelmente evoluiu com seu hospedeiro humano de modo a adaptar se
ao ecossistema gstrico. O relacionamento da bactria H. pylori com seu hospedeiro no pode ser prontamente designado como parastico ou comensal. A
persistncia desta bactria em um ecossistema aberto, revestido por um epitlio em constante renovao e seu potencial patognico , de alguma forma,
anlogo ao relacionamento entre os componentes da microbiota do clon e

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captulo 5

seu hospedeiro. Na maioria dos hospedeiros essa bactria parece comportar-se


como comensal, mas em determinados hospedeiros, a bactria pode provocar
gastrite crnica ativa, lcera pptica e at neoplasias.

5.1.9 Microbiota do trato intestinal


A quantidade de bactrias e o nmero de espcies presentes em dado segmento
do trato gastrintestinal so afetados pelo pH e tempo de reteno de seu contedo. O fluxo rpido de contedo do intestino delgado proximal tende a inibir o
crescimento de muitas bactrias. Por outro lado, o pH relativamente neutro e
a prolongada reteno de contedo no intestino grosso permitem o desenvolvimento de comunidades microbianas complexas compostas por centenas de
distintas espcies de bactrias.
As bactrias residentes do trato gastrintestinal contribuem para salvar parte de energia contida nos carboidratos indigerveis da dieta como a celulose,
hemicelulose e pectina, metabolizando os mesmos em cidos graxos que so
fontes de energia para as clulas do epitlio intestinal e facilitam a absoro de
sdio e gua, alm de sintetizarem protenas e vitaminas do complexo B. Em
indivduos sadios, o duodeno pouco habitado com uma microbiota esparsa
e provavelmente transitria, com em torno de 104 bactrias por grama de contedo. As bactrias que so mais frequentemente encontradas no duodeno so
dos gneros Streptococcus e Lactobacillus. Nveis maiores de bactrias no duodeno (105 a 107 por grama de contedo) pode ser o reflexo de anormalidades
no sistema digestivo (por exemplo, reduo no transito intestinal). A atividade
peristltica e a presena de bile podem explicar a escassez de microrganismos
no trato gastrintestinal superior.
O leo apresenta uma microbiota moderada de cerca de 106 a 108 bactrias por grama de contedo com predomnio dos gneros Enterococcus,
Lactobacillus, Bacteroides e Bifidobacterium. O clon colonizado por uma
densa e complexa comunidade bacteriana com cerca de 110 a 1011 bactrias
por grama de contedo. Cerca de 400 espcies bacterianas j foram identificadas. Mais de 99% dessas bactrias so anaerbias estritas, com predomnio dos
gneros Bacteroides, Bifidobacterium, Eubacterium e Clostridium. Os anaerbios ocupam a maioria dos nichos disponveis e produzem produtos metablicos secundrios como os cidos actico, butrico e propinico. Os produtos
secundrios bacterianos e as condies anaerbicas estritas so fatores que

captulo 5

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inibem o crescimento de outras bactrias. Dos cerca de 1% restantes, a bactria


Escherichia coli representa o anaerbio facultativo mais abundante.
As bactrias do clon sintetizam vitaminas como biotina, cido flico, tiamina, B12 e K e fermentam carboidratos indigerveis (fibras) em cidos graxos
de cadeia curta que constituem fontes de energia para o hospedeiro. Os diversos habitats do trato intestinal so habitados por espcies residentes e um conjunto varivel de espcies transitrias que temporariamente preenchem um
nicho vazio. As bactrias transitrias so provenientes de regies proximais do
trato digestivo ou so organismos ingeridos fortuitamente.
A composio da microbiota normal em uma dada regio do trato intestinal
de difcil definio pela dificuldade de se distinguir entre microrganismos
residentes e transitrios. Muitos desses microrganismos no so cultivveis
em meios de laboratrio, de tal forma que permanecem no detectveis devido s limitaes dos mtodos convencionais de isolamento e identificao.
Modernas tcnicas de ribotipagem in situ podero fornecer um novo panorama
da composio da microbiota gastrintestinal humana.
Inicialmente, quando espao e nutrientes no so fatores limitantes, as
bactrias com as maiores taxas de crescimento predominam. medida que
as populaes bacterianas aumentam e diminui a oferta de nutrientes, o trato
intestinal torna-se habitado por espcies mais especializadas e a complexidade da microbiota aumenta. Em recm-nascidos predominam bactrias como
E. coli e as dos gneros Clostridium, Enterococcus, Lactobacillus, Bacteroides e
Bifidobacterium, que constituem a maior poro da microbiota fecal enquanto
a criana recebe amamentao materna. Crianas de diferentes regies geogrficas apresentam microbiotas fecais distintas refletindo, em parte, o impacto
ambiental (condies sanitrias).
O tipo de dieta liquida fornecido criana o principal fator de controle da
microbiota e imunoglobulinas e outros elementos do leite materno podem ser
tambm importantes.
A estabilidade funcional (em oposio a uma estabilidade meramente numrica ou composicional) das comunidades bacterianas intestinais constantemente desafiada por diversos fatores. O epitlio intestinal e a camada de
muco renovam-se rpida e incessantemente. A atividade peristltica expe os
diversos segmentos do intestino a uma ampla variedade de bactrias alctones,

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macromolculas da dieta e secrees gstricas, pancreticas e biliares. Os fatores que asseguram o estabelecimento e a estabilidade de comunidades bacterianas nos diversos nichos intestinais so praticamente desconhecidos.

5.1.10 Efeito protetor da microbiota intestinal


A microbiota do clon um ecossistema complexo com a importante funo de
controlar populaes de muitos microrganismos patognicos. O trato intestinal protegido de patgenos de vrias formas. O ambiente cido do estmago
e as enzimas proteolticas secretadas pelas clulas gstricas matam muitas das
bactrias que so ingeridas.
Estudos comparando microrganismos convencionais de animais e isentos
mostraram que a microbiota influencia a anatomia, a fisiologia e a longevidade. Nesses estudos, animais sem germes apresentam uma longevidade duas
vezes maior que seus pares convencionais e que as causas de morte eram diferentes nos dois grupos. A Infeco geralmente causava morte entre os animais
convencionais, e a atonia intestinal frequentemente matava os sem germes.
Essas investigaes demonstraram que animais sem germes tm caractersticas anatmicas, fisiolgicas e imunolgicas distintas daquelas dos animais
convencionais. Neles, a membrana mucosa do intestino subdesenvolvida,
pouca ou nenhuma imunoglobulina esta presente no soro ou secrees, a mobilidade intestinal reduzida e a taxa de renovao das clulas da mucosa intestinal era de quatro dias contra dois nos animais convencionais.
A microbiota residente compete com invasores potenciais por nutrientes e
stios de adeso. Estudos com animais tratados com antibiticos demonstraram que a microbiota protege contra a infeco por patgenos. Animais tratados com estreptomicina (para reduzir a microbiota normal) foram infectados
com Salmonella resistente a este antibitico. Nos animais convencionais so
precisos cerca de 106 organismos para estabelecer uma infeco gastrintestinal, mas, nos gnotobiticos cerca de 10 organismos so suficientes. Estudos
posteriores sugeriram que produtos de fermentao (cidos actico e butrico)
produzidos pela microbiota normal inibiam o crescimento de Salmonella no
trato gastrintestinal.

captulo 5

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5.1.11 Microbiota do trato urinrio


O trato urinrio normalmente estril com exceo do primeiro centmetro
distal da uretra que pode conter os microrganismos predominantes na
pele. Bactrias tais como Staphylococcus epidermidis, Enterococcus sp. e
Corynebacterium sp. so isolados frequentemente. Escherichia coli, Proteus
sp. e linhagens no patognicas de Neisseria so achados ocasionalmente (10 a
30% das amostras). Devido presena de uma microbiota residente na primeira
poro da uretra, as anlises clnicas da urina devem ser interpretadas com
cuidado.
A bexiga e os rins so normalmente estreis ou, na maioria das vezes, transitoriamente colonizados por baixas concentraes de bactrias. Estes rgos
so protegidos das bactrias da vagina ou da superfcie do pnis pela ao do
esfncter da abertura da uretra, que representa uma barreira fsica. As bactrias
que penetram na bexiga so removidas pela mico. A importncia dessas duas
defesas exemplificada pelo fato de pacientes com cateteres urinrios (que
mantm aberta a entrada da uretra e drenam a urina constantemente) terem
alta incidncia de infeces do trato urinrio.

5.1.12 Microbiota vaginal


A comunidade bacteriana que coloniza a vagina dominada por bactrias
Gram-positiva do gnero Lactobacillus. Pode ter certa variao de pessoa a pessoa, com a idade, pH to trato vaginal e nveis hormonais. As maiores alteraes
ocorrem nas infeces bacterianas da vagina.
No primeiro ms de vida, bactrias do gnero Lactobacillus predominam,
o que mantm o pH vaginal em torno de 5. A partir do primeiro ms at a puberdade predominam S. epidermidis, Streptococcus sp e E. coli e o pH vaginal
eleva-se em torno de 7. Entre a puberdade e a menopausa, devido ao do
estrognio, ocorre secreo de glicognio no trato reprodutivo feminino e os
membros predominantes da microbiota passam a ser membros dos gneros
Lactobacillus, Corynebacterium, Staphylococcus, Streptococcus e Bacteroides.
Nesse perodo, bactrias do gnero Lactobacillus respondem por 90% da composio da microbiota vaginal, alcanando nveis 107 a 108 bactrias por grama de fluido vaginal. Devido prevalncia das espcies Lactobacillus gasseri, L.
johnsoni e L. jenseni, o pH do trato vaginal decresce e se estabiliza em torno de 5.

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Aps a menopausa, com a diminuio da produo de estrognio, a secreo de glicognio diminui, o pH vaginal se eleva em torno de 7 e a composio
da microbiota volta a ser aquela caracterstica da pr-puberdade. Embora a vagina e o crvix ser pesadamente colonizados por bactrias, o tero e as tubas
uterinas no o so. A questo se o tero completamente esterilizado no foi,
ainda, estabelecida. Se o for, a concentrao de bactrias deve ser normalmente muito baixa. As bactrias so impedidas de ascender do crvix ao tero e s
tubas uterinas pelo tampo de muco na abertura cervical. Atividades que rompem esta barreira (aborto, trabalho de parto prolongado) aumentam a incidncia de infeces do tero e das tubas uterinas. Foi sugerido que o smen, que
pode passar atravs do tampo cervical, pode carregar bactrias vaginais para o
interior do tero, mas sua ao como meio de introduo de bactrias no tero
, ainda, especulativa. Na pele da vulva, a bactria predominante a S. aureus,
correspondendo a cerca de 70% dos espcimes isolados.

5.1.13 Efeito protetor da microbiota vaginal


Existem evidncias de que a microbiota bacteriana do trato vaginal reduz a probabilidade de que patgenos tais como bactrias, protozorios parasitas, leveduras como Candida albicans ou vrus se estabeleam na vagina.
As linhagens de Lactobacillus vaginais parecem evitar a colonizao da vagina por patgenos causadores de doenas sexualmente transmissveis, tais
como Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas vaginalis, Candida albicans e HIV, ou
por patgenos causadores de infeces do trato urinrio, tais como Ureaplasma
urealyticum e linhagens uropatognicas de E. coli. Os lactobacilos vaginais produzem cido ltico que mantm baixo o pH das secrees vaginais, inibindo
o crescimento de muitas bactrias, competem por receptores de aderncia,
no epitlio vaginal, produzem substncias antimicrobianas como perxido de
hidrognio e bacteriocinas, se coagregam com outras bactrias e estimulam o
sistema imune vaginal superficial incrementando os mecanismos de defesa locais contra bactrias no-residentes. Alm disso, estas bactrias formam um
biofilme que evita o acesso de patgenos mucosa vaginal e do crvix.
Uma das propriedades mais importantes das linhagens de lactobacilos
vaginais a sua capacidade de liberar perxido de hidrognio (H2O2) em
quantidades significativas. O H2O2 parte de um sistema antimicrobiano
que pode inibir a propagao de vrus e o crescimento de bactrias e fungos.

captulo 5

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Entre os organismos susceptveis a este sistema encontram-se o vrus HIV, as


bactrias E. coli, Gardnerella vaginalis, Chlamydia trachomatis e Ureaplasma
urealyticum e a levedura Candida albicans. As linhagens de lactobacilos produtoras de H2O2 parecem manter um ecossistema vaginal saudvel e proteger o trato genital feminino de organismos potencialmente patognicos.
Estudos clnicos demonstraram um aumento da incidncia de infeces por
HIV e N. gonorrhoeae em mulheres com ausncia de lactobacilos vaginais.
Contudo, a proteo do trato vaginal pela microbiota residente no pode ser
considerada absoluta e parte de um sistema que inclui o sistema imune do
hospedeiro. Mulheres podem contrair doenas sexualmente transmissveis
em um nico coito a despeito da presena da microbiota vaginal. Contudo,
a importncia da microbiota vaginal normal na proteo contra patgenos
pode ser evidenciada no fato de que a terapia com antibiticos pode predispor mulheres aquisio de infeces geniturinrias, como as causadas por
fungos do gnero Candida. Provavelmente, outros membros da microbiota,
alm dos lactobacilos, tambm contribuem para a proteo do ambiente
da vagina.

5.1.14 Microbiota da nasofaringe


A faringe aprisiona a maioria das bactrias que so inaladas. A faringe e a traquia contm primariamente os mesmos gneros bacterianos encontrados
na microbiota oral, juntamente com anaerbios dos gneros Staphylococcus,
Neisseria e Corynebacterium. Patgenos potenciais como Haemophilus ssp,
micoplasmas e pneumococos podem ser encontrados na faringe. O trato respiratrio superior a porta de entrada para a colonizao inicial por muitos
patgenos, dentre estes, Neisseria meningitidis, Corynebacterium diphtheriae,
Bordetella pertussis e Streptococcus spp. O trato respiratrio inferior (brnquios
e alvolos) normalmente estril porque partculas do tamanho de bactrias
no os atingem prontamente. Se o fazem, encontram-se com a primeira linha
de defesa, os macrfagos alveolares, ausentes na faringe.
As vias areas superiores so protegidas por uma microbiota residente que
evita a colonizao destas reas por patgenos. Cocos Gram-positivos so componentes proeminentes, mas muitos outros tipos de bactrias so tambm encontrados nestes stios.

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captulo 5

5.1.15 Microbiota da cavidade oral


As caractersticas ambientais da cavidade oral, tais como alta umidade, temperatura relativamente constante (34 a 36C), pH prximo da neutralidade e disponibilidade de nutrientes, permitem o estabelecimento de uma microbiota altamente complexa composta por cerca de 700 grupos bacterianos que habitam
as diversas reas da boca. Muitas dessas bactrias esto associadas formao
da placa bacteriana sobre a superfcie dos dentes com consequente formao
de cries e ocorrncia de doenas periodontais tanto em pases em desenvolvimento quanto nos desenvolvidos. A composio da microbiota oral varia com a
idade, hbitos alimentares, hormnios, fluxo salivar, condies imunolgicas e
outros fatores como higienizao e alcoolismo. A colonizao da cavidade oral
por microrganismos tem incio de seis a dez horas aps o nascimento. As espcies pioneiras so as do gnero Streptococcus e provm principalmente da me.
Os gneros bacterianos mais comuns na cavidade oral so citados a seguir:
Cocos Gram-positivos facultativos: Enterococcus, Micrococcus,
Staphylococcus, Streptococcus;
CocosGram-positivosanaerbiosestritos:Peptococcus,Peptostreptococcus;
Cocos Gram-negativos facultativos: Neisseria;
Cocos Gram-negativos anaerbios estritos: Veillonella;
Bacilos Gram-positivos facultativos: Actinomyces, Corynebacterium,
Lactobacillus;
BacilosGram-positivos anaerbios estritos: Bifidobacterium,Eubacterium,
Propionibacterium;
Bacilos Gram-negativos facultativos: Actinobacillus, Campylobacter,
Capnocytophaga, Eikenella, Haemophilus;
Bacilos Gram-negativos anaerbios estritos: Bacteroides, Fusobacterium,
Porphyromonas, Prevotella, Wolinella;
Espiroquetas Gram-negativos anaerbios estritos: Treponema denticola.
A distribuio das bactrias bucais varia qualitativa e quantitativamente
de acordo com o habitat. Bactrias do grupo Streptococcus mutans (S. mutans,
S. sobrinus, S. cricetus e S. rattus) e Streptococcus sanguis so encontrados em
grandes nmeros nos dentes enquanto que Streptococcus salivarius isolado
principalmente da lngua. As espcies S. mutans e S. sanguis aparecem na cavidade oral somente aps a erupo dos dentes.

captulo 5

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Existe pouca informao a respeito da microbiota das mucosas bucais que


so colonizadas por baixos nmeros de bactrias, provavelmente devido alta
descamao de suas clulas superficiais. Os organismos predominantes nas
membranas mucosas parecem ser S. oralis e S. sanguis.
A lngua abriga uma populao bacteriana mais densa e mais diversa com
predomnio de S. salivarius e S. mitis e Veillonella spp. Supe-se que a lngua
atue como um reservatrio de bactrias associadas a doenas periodontais
uma vez que Porphyromonas spp. e Prevotella spp. podem ser isoladas em pequenos nmeros.

5.1.16 Placa bacteriana


Os dentes apresentam uma rea superficial abundante para o crescimento bacteriano. Os microrganismos que colonizam os dentes, notadamente os do gnero
Streptococcus, produzem um polissacardeo de aderncia. Este os capacita a desenvolver um biofilme bacteriano que se adere superfcie dos dentes, formando
comunidades microbianas organizadas em uma matriz complexa, composta de
produtos extracelulares microbianos, constituintes salivares, restos alimentares,
clulas mortas e descamadas da boca. Este biofilme denominado placa bacteriana a causa principal das cries e das doenas periodontais. As doenas periodontais, se no prevenidas ou tratadas podem causar mau hlito, sangramento
nas gengivas, cries, abscessos gengivais, perda dos dentes e perda ssea.
Os organismos predominantes da placa bacteriana so descritos a seguir:
Cocos Gram-positivos facultativos: Streptococcus (S. mutans, S. sobrinus,
S. cricetus);
Bacilos Gram-positivos facultativos: Actinomyces;
Bacilos Gram-negativos anaerbios estritos: Porphyromonas (P. gingivalis, P.
endodontalis),Prevotella(P.melaninogenica,P.intermdia,P.loescheii,P.denticola).
As bactrias Porphyromonas gingivalis, Porphyromonas endodontalis, Prevotella melaninogenica, Prevotella intermedia, Prevotella loescheii e
Prevotella denticola raramente so isoladas de gengivas sadias. A complexidade
das comunidades bacterianas nas placas bacterianas torna difcil a determinao de um agente cariognico especfico. H fortes evidncias de que bactrias
tais como S. mutans, S. sobrinus e L. acidophilus estejam envolvidas na iniciao

132

captulo 5

e progresso das cries, respectivamente. Estes grupos bacterianos so capazes


de metabolizar carboidratos em cidos (primariamente cido ltico) e tolerar
um ambiente com pH baixo. Contudo, grandes quantidades de S. mutans podem ser encontradas em placas bacterianas sem evidncia de cries.
Dietas ricas em sacarose contribuem para a cariao dos dentes porque o
S. mutans produz um polissacardeo de aderncia especificamente a partir
da sacarose que substrato para a produo do cido ltico. Bactrias lticas
como L. acidophilus produzem cido ltico que dissolvem o fosfato de clcio do
esmalte dos dentes. A S. mutans pode, tambm, causar endocardite subaguda.

5.1.17 Efeito protetor da microbiota bucal


As doenas bucais, parecem ser devido a uma transio de uma associao
comensal para uma relao oportunstica com o hospedeiro. As bactrias da
microbiota bucal podem sobreviver na cavidade oral por serem menos susceptveis aos mecanismos imunolgicos ou por serem capazes de sobrepuj-los.
Desta forma, um desequilbrio no ecossistema bucal pode acarretar a emergncia de bactrias potencialmente patognicas. Para a compreenso dos processos envolvidos na cariognese e nas doenas periodontais necessrio um
entendimento da ecologia da cavidade oral e a identificao dos fatores responsveis pela transio da microbiota oral de uma associao comensal para uma
relao patognica com o hospedeiro.
Os microrganismos da microbiota da orofaringe so importantes fontes
potenciais de infeces, especialmente entre alcolicos cujas defesas das vias
areas esto prejudicadas pela ingesto prolongada de lcool. Nestes indivduos existe uma predominncia significativa da presena de enterobactrias e gnerosanaerbicoscomoBacteroides,Prevotella,Veillonela,Peptostreptococcus,
Propionibacterium,BifidobacteriumeClostridiumemrelaoaosno-alcolicos.

5.2 Probiticos
O controle biolgico desenvolvido pelas comunidades microbianas normais
(microbiota normal) que colonizam as superfcies ou mucosas do corpo humano representa um mecanismo ecolgico potente que, junto com os sistemas de
defesas mecnicos, qumicos e imunolgicos, protegem-nos contra as tentati-

captulo 5

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vas de agresso por agentes infecciosos. Uma criana nasce sem nenhum microrganismo associado e, utilizando como doadores a me, o ambiente e outros
seres humanos (mdicos, enfermeiras, parentes), adquirem progressivamente
os componentes dos ecossistemas microbianos superficiais responsveis pelo
efeito protetor citado acima. Considera se que as microbiotas normais resultantes atingem um equilbrio e uma funcionalidade similares aos de um adulto
somente aps um a dois anos de vida.
Este perodo representa uma fase crtica de instabilidade e de menor eficincia protetora dos ecossistemas microbianos normais e, portanto, um momento propcio entrada de microrganismos patognicos. Uma vez instaladas,
as microbitas normais exercem, dependendo do local, efeitos de proteo
ecolgica, imunomodulao e/ou contribuio nutricional extremamente potente, mas tambm sujeitos a perturbaes. A utilizao de substncias antimicrobianas, as mudanas drsticas de alimentao e o estresse esto entre os
fatores mais comuns de interferncias no equilbrio dos ecossistemas microbianos associados e, portanto, nas suas funes benficas para o hospedeiro.
A definio inicial de probitico : suplemento microbiano vivo que quando ingerido afeta beneficamente o hospedeiro animal melhorando o equilbrio
microbiano intestinal. Esta definio hoje muito restritiva e insatisfatria em
vista das considerveis mudanas decorrentes dos estudos e desenvolvimento
dos probiticos. Uma definio talvez mais completa poderia ser: um produto farmacutico ou alimentar contendo um ou mais microrganismos vivos que
melhora as funes (resistncia colonizao, imunomodulao, contribuio
nutricional) da microbiota local normal quando introduzido num ecossistema
superficial (cutneo, respiratrio, urogenital, digestivo) associado ao hospedeiro humano ou animal. Contudo, a definio mais oficial e aceita hoje que foi
proposta pela FAO/WHO:
preparao contendo um microorganismo vivo que quando administrado
em quantidade adequada produz um efeito benfico para o hospedeiro.
O critrio de seleo e avaliao dos microrganismos probiticos foi resultado das pesquisas institucionais e de universidades com as indstrias de alimentos. A linhagem de bactria para se classificar como probitica deve apresentar as seguintes propriedades:

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Possuir identificao taxonmica exata;


Ser de preferncia um habitante normal das espcies alvo;
No ser txica e patognica;
Ser geneticamente estvel;
Ser capaz de sobreviver e estimular a atividade metablica no trato
gastrointestinal;
Possuir caractersticas de aderncia;
Ser capaz de sobreviver durante a preparao, estocagem e consumo;
Conter populao vivel elevada, com em torno de 108 109 bactrias por
grama de produto;
Produzir de substncias antimicrobianas, incluindo bacteriocinas, perxido de hidrognio e cidos orgnicos;
Capaz de competir com a microbiota normal;
Resistir suco gstrico e bile;
Ser imunoestimuladora;
Capaz de exercer outros efeitos benficos sade (documentados e validados clinicamente);
Apresentar caractersticas favorveis ao processo de produo: crescimento adequado, boa recuperao na concentrao, congelamento, desidratao, estocagem e distribuio;
Apresentar qualidades organolpticas desejveis.
Exemplos de microrganismos comumente descritos como possuidores de
caractersticas probiticas so descritos a seguir:
LACTOBACILLUS

BIFIDOBACTERIUM

STREPTOCOCCUS

L. acidophilus
L. casei
L. johnsonii
L. fermentum
L. plantarum
L. lactis
L. rhamnosus
L. gasseri
L. reuteri
L. salivarius

B. longum
B. bifidum
B. lactis
B. breve
B. infantis

S. thermophilus

Tabela 5.1

captulo 5

135

5.3 Prebiticos
O termo prebitico definido como um ingrediente alimentar no digervel
pela maioria dos microrganismos do intestino, e que afeta beneficamente o
hospedeiro, pelo estmulo seletivo do crescimento e/ou atividade de apenas um
ou de um nmero limitado de bactrias no clon. Para um ingrediente alimentar ser classificado como um prebitico necessrio:
No sofrer hidrlise e nem ser absorvido na parte superior do trato
gastrointestinal;
Ser um substrato seletivo para um nmero limitado de bactrias potencialmente benficas do clon, que so estimuladas para crescerem e desenvolverem atividades metablicas;
Ser capaz de promover uma biota intestinal saudvel e, como consequncia, induzir efeitos no lmen que beneficiem o hospedeiro.
Como exemplo de substncias prebiticas pode-se citar alguns oligossacardeos como a lactulose, lactitol, lactosacarose, rafinose, e frutooligossacardeos (FOS), e polissacardeos como a inulina e o amido resistente. Muitos alimentos possuem naturalmente FOS em sua composio, como pode ser observado
a seguir:
Ocorrncia natural de frutooligossacardeos (FOS) em alimentos.
ALIMENTO

OLIGOFRUTOSE (%)

Cebolas

26

26

Chicria (razes)

15 - 20

5 10

Aspargos

1 - 30

1 20

Alho

9 - 16

36

Banana

0,3 - 0,7

0,3 - 0,7

Trigo

1-4

14

Centeio

0,5 - 1,0

0,5 - 1,0

Cevada

0,5 - 1,5

0,5 - 1,5

Alho-por

3 - 10

2,5 - 8,0

Tabela 5.2

136

INULINA (%)

captulo 5

Os prebiticos no somente proporcionam aumento potencial do nmero


de bactrias benficas no intestino grosso de humanos, predominantemente
os lactobacilos e as bifidobactrias, mas tambm aumentam sua atividade metablica pelo fornecimento de substrato especfico fermentvel.

5.3.1 Disbiose
Uma microbiota intestinal saudvel est diretamente relacionada com a imunidade. Uma microbiota intestinal desequilibrada (disbiose intestinal) apresenta
destruio de vitaminas, inativao de enzimas, produo de toxinas cancergenas, destruio da mucosa intestinal - levando a uma menor sntese e absoro
de nutrientes.
So diversos os fatores que desregulam nossa microbiota, variando desde idade, m alimentao, estresse, m digesto, infeces intestinais, at
medicamentos ingeridos (principalmente antibiticos). Para adequar a microbiota intestinal, garantindo uma tima absoro dos nutrientes, o uso de
elementos probiticos e prebiticos vem sendo utilizado na prtica clnica
com excepcional resultado. Eles favorecem a presena de bactrias benficas
ao organismo e diminuem a concentrao de bactrias e micro-organismos
indesejveis.

5.3.2 Efeitos atribudos aos probiticos e prebiticos


Os benefcios sade conferidos pelos probiticos so: controle da microbiota intestinal; estabilizao da microbiota intestinal aps o uso de antibiticos; promoo da resistncia gastrintestinal colonizao por patgenos;
diminuio da populao de patgenos pela produo de cidos actico e ltico, de bacteriocinas e de outros compostos antimicrobianos; promoo da
digesto da lactose em indivduos intolerantes lactose; estimulao do sistema imune; alvio da constipao; aumento da absoro de minerais e produo de vitaminas. Embora ainda no comprovados, outros efeitos atribudos a essas culturas so a diminuio do risco de cncer de clon e de doena
cardiovascular.

captulo 5

137

5.3.3 Simbiticos
O termo simbintico utilizado quando o ingrediente alimentar contm tanto
os probiticos quanto os prebiticos que afetam o hospedeiro de maneira benfica. Bactrias bfidas constituem um problema como culturas probiticas,
pois so difceis de serem isoladas e manipuladas, uma vez que so anaerbias.
Quando isoladas, no toleram bem ambiente cido, sendo, portanto, difceis
de serem carreados em produtos lcteos, fermentados considerados os carreadores universais de bactrias lcteas. Uma alternativa para o aumento de bactrias bfidas no trato gastrointestinal o emprego de prebiticos.
A interao entre o probitico e prebitico in vivo pode ser favorecida por
uma adaptao do probitico ao consumo de prebitico. Isto deve resultar em
uma vantagem competitiva para o probitico se este for consumido juntamente como prebitico.

5.3.4 Efeitos fisiolgicos dos probiticos e prebiticos


O consumo regular de prebiticos e probiticos pode ser empregado na profilaxia e tratamento de uma srie de condies patolgicas, a maior parte na
esfera da gastroenterologia. Existem evidncias de benefcios relacionados ao
consumo de prebiticos e probiticos que esto em fase de estudo por diversos
grupos de pesquisa. So eles:
1. reduo de infeco por Helicobacter pylori, que est associado a gastrites e lceras ppticas;
2. reduo de sintomas de alergias alimentares;
3. regularizao da funo intestinal, combatendo a constipao;
4. atenuao da sndrome do intestino irritvel e doena de Crohn;
5. eliminao dos sintomas da intolerncia lactose;
6. efeitos benficos no metabolismo mineral, particularmente na densidade e a estabilidade ssea;
7. preveno do cncer de clon e outros tipos de cncer;
8. reduo do colesterol e concentrao de triglicerdeos plasmticos;
9. resistncia a infeces do trato e outros.

138

captulo 5

5.3.5 Nutrio
A informao sobre as caractersticas dos alimentos cada vez maior e somos
muitas vezes confrontados com termos de que nunca ouvimos falar. A carncia
de vitaminas e de cidos graxos essenciais pode levar deficincias nutritivas
graves causadas quer pela digesto incompleta de certos grupos de alimentos,
quer por deficiente absoro de nutrientes Disbiose. Da a necessidade de
uma alimentao variada. Mas a alimentao no tudo. A capacidade de absoro dos nutrientes fundamental. A variedade dos alimentos numa mesma
refeio aumenta a possibilidade da sua absoro. A sndrome de m absoro
pode invalidar uma boa dieta.
A disbiose pode levar as deficincias nutritivas graves causadas quer pela digesto incompleta de certos grupos de alimentos, quer por deficiente absoro
de nutrientes (carncia de vitaminas e de cidos gordos essenciais). A preocupao da sociedade em incorporar alimentos saudveis aos seus hbitos nutricionais cotidianos fazem parte da realidade em qualquer poca. Os alimentos
no so somente vistos como uma forma de saciar a fome, prevenir doenas
causadas pela dieta deficiente e de prover ao ser humano os nutrientes necessrios construo, manuteno e reparo de tecidos. Os alimentos tm-se tornado o principal veculo de transporte para uma sade tima e bem-estar. Neste
contexto tem-se verificado um interesse grande por parte dos consumidores
nos efeitos benficos para a sade, de determinados alimentos, contendo componentes com atividade fisiolgica/biolgica para alm dos nutrientes, os chamados alimentos funcionais, alimentos desenhados ou nutracuticos. O grupo
dos probiticos est incorporado de forma muito incisiva nessa nova fase da
dietoterapia. Referendados pelo conceito da medicina baseada em evidncias,
conduzem clara necessidade de inclu-los na prescrio rotineira em sade e
nutrio. A compreenso desta capacidade probitica representa uma oportunidade importante no tratamento de desordens intestinais, cncer, sndrome
metablica, entre outras condies clnicas.
Qualquer alimento ou ingrediente alimentar que possa exercer efeito benfico no organismo pode ser considerado alimento funcional. Dentre as inmeras classes de alimentos funcionais esto os chamados probiticos que so alimentos processados com microrganismos vivos que ingeridos exercem efeito
benfico na flora bacteriana do hospedeiro.

captulo 5

139

5.4 Principais doenas causadas por


bactrias:
5.4.1 Tuberculose: Agente: Mycobacterium tuberculosis, bacilo de
Koch.
Quadro clnico: s vezes s em fase avanada da doena surgem a tosse contnua com catarro, dor torcica, emagrecimento e febre(quase sempre no perodo da tarde), sudorese intensa. Com o esforo da tosse alguns vasos se rompem
e o doente passa a eliminar catarro com sangue(hemoptise). aconselhado que
uma tosse que persista por duas semanas ou mais seja avaliada por um mdico.
Tratamento: Rifampicina, Isoniazida, Pirazinamida.

5.4.2 Hansenase: Agente: Mycobacterium leprae.


Quadro clnico: Uma doena infecto contagiosa que afeta principalmente os
nervos e a pele. Atinge homens, mulheres, e crianas de todas as idades, tem
perodo de incubao de 3 a 5 anos.
Os principais sintomas so o aparecimento, na pele, de pontos com falta de
sensibilidade. Geralmente, aparece apenas um ponto no incio. Antes de tudo
a pessoa perde o tato, depois a sensibilidade trmica e, por ltimo, a sensibilidade dor, de forma que, embora sofra queimaduras e espetadelas naqueles
pontos, o doente no sente absolutamente nada. Os doentes de lepra tambm
podem apresentar leses nervosas com dor, paralisia e atrofia muscular. Em
casos raros e adiantados, ou resistentes ao tratamento, aparecem tambm deformidades no rosto, com ulceraes, queda das sobrancelhas, etc.
Tratamento: Dapsona, Rifampicina, Clofazimina, PQT.

5.4.3 Ttano: Agente: Clostridium tetani.


Quadro clnico: doena infecciosa, no contagiosa, e como o nome diz, caracteriza-se por contraturas musculares. Os sintomas manifestam-se primeiramente nos msculos da regio do ferimento(ttano local). Frequentemente
tambm so atingidos os msculos mastigadores de maneira a tornar difcil a

140

captulo 5

abertura da boca(trismo). Gradualmente, a contratura se estende a outros grupos de msculos, conferindo a doena feies caractersticas. Riso sardnico,
rigidez de nuca, abdmen em tbua. A morte sobrevem com espasmos generalizados. relativamente frequente nos pases subdesenvolvidos o Tetanus neonatorum, resultante da contaminao por sujidades vrias aplicadas no coto
umbilical com o objetivo de acelerar a cicatrizao.
Tratamento: aplicao de S.A.T. (soro antitetnico), e relaxantes musculares.

5.4.4 Clera: Agente: Vibrio cholerae.


Quadro clnico: tem um perodo de incubao de 1 a 4 dias. Incio rpido com
nuseas, vmitos, clicos abdominais e diarria profusa e fezes riziformes (aspecto de gua de arroz). A perda rpida de gua e sais minerais, conduz a um
estado de desidratao, acompanhada de hipotermia, queda de presso arterial, anria, e colapso circulatrio, acidose por perca de bicarbonato e em crianas, hiperkalemia. Mais de 90% das pessoas que contraem clera, permanecem
assintomticas, podendo sofrer apenas uma diarria branda, embora possam
transmitir a doena por cerca de 30 dias.
Tratamento: combate a desidratao e antibioticoterapia.

5.4.5 Difteria: Agente: Corynebacterium diphteriae , ou bacilo de


Klebs Lfler.
Quadro clnico: doena infecto contagiosa aguda que ataca sobretudo crianas
de 1 a 4 anos. Caracteriza-se por febre, inflamao na garganta e manifestaes
toxemicas. As amgdalas, pilares anteriores e vula se recobrem de um exsudato pseudomembranoso, constituda de fibrina, leuccitos e epitlio necrosado,
efeito local da toxina secretada pelo bacilo diftrico. Nos casos graves, o processo se estende laringe, brnquios causando asfixia (crupe).
Esta toxina, lanada na corrente sangunea poder afetar o corao, sistema
nervoso, rins dentre outros rgos. H destruio local do palato mole, provocando deformidades na fala.
Tratamento: soro antidiftrico, e antibitico como: penicilina, tetraciclina
e cloranfenical.

captulo 5

141

5.4.6 Coqueluche: Agente: Bordetella pertussis.


Quadro clnico: doena infecciosa, aguda, altamente contagiosa que lesa o trato
respiratrio, produzindo tosse espasmdica caracterstica. Inicia-se com uma coriza, confundindo-se com um simples resfriado, mais ou menos 10 dias depois,
tem a evoluo caracterstica. Sua gravidade varia com a idade, o estado geral e a
maior ou menor sensibilidade de cada indivduo. Geralmente no grave.
Tratamento: antibiticos de largo espectro, principalmente cloranfenicol e
tetraciclina. Evitar situaes que provoquem acesso de tosse, boa alimentao
em pequenas quantidades, preferencialmente na forma lquida; manter ambientes arejados evitando a poeira.

5.4.7 Botulismo: Agente: Clostridium tetani.


Quadro clnico: o botulismo uma toxicose aguda que aparece em algumas horas (2 a 48hs) aps a ingesto de alimentos contaminados. Caracteriza-se por
vmitos, constipao intestinal, sede, viso dupla, dificuldade de deglutio e
fala, flacidez muscular generalizada, paralisia respiratria. A morte sobrevem
em 20 a 70% dos casos.
Tratamento: antitoxina botulmica polivalente (a, b, e), precocemente em
dose macia.

5.4.8 Febre tifide: Agente: Salmonella typhi.


Quadro clnico: o bacilo ataca principalmente o intestino, apresentando diarria com clicas, febre e muitas vezes presena de sangue nas fezes. As toxinas
produzidas pelas bactrias caem na corrente sangunea e determinam um quadro de erupo cutnea nvel de abdome e um certo torpor pela impregnao
no S.N.C. (sistema nervoso central).
Tratamento: Cloranfenicol.

5.4.9 Escarlatina: Agente: Streptococcus pyogenes.


Quadro clnico: tem um perodo de incubao de 3 a 4 dias. uma infeco aguda, contagiosa caracterizada por febre elevada, inflamao na garganta, exantema, seguida de descamao. Durante o perodo de infeco pode-se verificar

142

captulo 5

uma espcie de halo-claro , plido ao redor da boca, o que constitui o sinal de


Filatov. Alm disso as papilas linguais mostram-se aumentadas de tamanho caracterizando a chamada "lngua de framboesa".
Tratamento: Antibioticoterapia.

5.4.10 Sfilis: Agente: Treponema pallidum.


Quadro clnico: doena venrea endmica, contagiosa e crnica. provocada por
um treponema, gnero pertencente famlia das espiroquetas. Produz leses de
carter inflamatrio e destrutivo em quase todos os rgos. Aps 15 ou 20 dias
do contgio, aparece um ppula ou mancha indolor e dura, chamada cancro sifiltico, que geralmente se localiza nas reas genitais externas, mas tambm pode
apresentar-se em qualquer em qualquer parte do corpo, como por exemplo: a
boca, o nus, e as mos. Quando no feito um tratamento adequado , as leses
da sfilis se espalham por todo o corpo. A parecem manchas rosadas de 5mm
de dimetro, afetando os folculos pilosos, o que provoca a queda dos plos em
forma de placas. Tudo isso acompanhado de dores sseas e musculares, febre
,perda de peso, e inapetncia. Existem casos em que so afetados o corao, rins
e crebro.
Tratamento: Penicilina.

5.4.11 Processos supurativos: Agente: Estafilococos, e


estreptococos.
Quadro clnico: infeces onde ocorrem a formao de pus, como: abcessos(coleo purulenta circunscrita, superficial, ou profunda), furnculos (abcesso
subcutneo. Inicia-se como zona de intensa inflamao, vermelhido e calor
em uma rea circunscrita da pele e que evoluem para o desenvolvimento de
uma bolsa cheia de pus, se abrem para o exterior e drenam seu contedo), antrazes (furnculos que fistulam seu contedo para o exterior atravs de vrias
bocas), feimes (abcessos que se desenvolvem ao longo do tecido subcutneo,
s vezes se alastrando por baixo das aponeuroses). A espcie mais tpica o
Staphilococcus aureus resistente vrios antibiticos, somente sensvel Vancomicina, o temvel M.A.R.S.A. , bactria super resistente, produzida por uso
indiscriminado de antibiticos.
Tratamento: Penicilina, e no caso de infeco por M.A.R.S.A. , Vancomicina.

captulo 5

143

5.5 Doenas causadas por fungos


Os fungos so geralmente reconhecidos, primeiramente, pela sua capacidade
de decompor a matria orgnica.
Relativamente poucos fungos so suficientemente virulentos para serem
considerados patgenos primrios. Estes so capazes de iniciar uma infeco
em um hospedeiro normal, aparentemente imunocompetente. Eles so capazes de colonizar o hospedeiro, encontrar um nicho microambiental com substratos nutricionais suficientes, a fim de evitar ou subverter os mecanismos de
defesa do hospedeiro, e se multiplicar dentro do nicho microambiental.
Entre patgenos fngicos primrios conhecidos se encontram quatro
fungos ascomicetos, os patgenos dimrficos endmicos Blastomyces dermatitidis, Coccidioides immitis (e C. posadasii), Hstoplasma capsulatum e
Paracoccidioides brasiliensis. Cada um destes microrganismos possui fatores
de virulncia que lhes permitem romper ativamente as defesas do hospedeiro e que habitualmente restringem o crescimento invasivo de outros microrganismos. Quando um grande nmero de condios desses quatro fungos
inalado por humanos, mesmo se esses indivduos forem saudveis e imunocompetentes, habitualmente ocorre infeco e colonizao, invaso tecidual e
disseminao sistmica do patgeno. Como ocorre com a maioria dos patgenos microbianos primrios, estes fungos podem tambm agir como patgenos
oportunistas, uma vez que as formas mais severas de cada uma destas micoses
so vistas mais frequentemente em indivduos com comprometimento das defesas imune inata e adquirida.
Geralmente, indivduos saudveis e imunocompetentes apresentam alta resistncia inata infeco fngica, apesar de serem constantemente expostas s
formas infecciosas de diversos fungos presente como parte da microbiota endgena (endgenos) ou no ambiente (exgenos). Os patgenos fngicos oportunistas, como Candida, Cryptococcus spp. e Aspergillus spp., somente causam
infeco quando ocorrem quebras nas barreias protetoras da pele e membranas mucosas ou quando a falhas no sistema imune do hospedeiro. Entretanto,
mesmo nas infeces oportunistas, h fatores associados ao organismo, e no
ao hospedeiro, que contribuem para a capacidade do fungo causar doena.
Alm dessa funo, algumas espcies so capazes de provocar infeces,
tanto em plantas quanto em animais e em humanos.

144

captulo 5

Em humanos, as infeces fngicas no costumam evoluir para quadros


mais srios de complicao. Entretanto, quando se trata de algum com a imunidade comprometida, como portadores do vrus HIV, diabticos, transplantados, etc., podem ser devastadores e, inclusive, provocar a morte em curto espao de tempo.
Muitos fungos vivem, de forma harmoniosa, em nosso corpo. Entretanto,
situaes que propiciam sua superpopulao podem provocar problemas. A
candidase e a pitirase versicolor (pano branco) so alguns exemplos. Ambas
so micoses, que o resultado da proliferao demasiada destes organismos
na pele. Em alguns casos, os mesmos agentes de infeces cutneas, ou outras
espcies, podem colonizar regies diferenciadas, como o aparelho respiratrio, sistema nervoso, genital e gastrointestinal. Para agravar o quadro, algumas
liberam toxinas: as chamadas micotoxinas piorando ainda o quadro.
Pitirase Versicolor - Pano Banco: A pitirase versicolor uma micose de pele
muito comum provocada pelo fungo do gnero Malassezia. A pitirase versicolor tambm conhecida pelos nomes pano baco, micose de praia ou tnea versicolor. O pano branco no uma doena contagiosa, portanto no h transmisso do fungo de uma pessoa para outra.
Candidase: A candidase nos rgos genitais uma infeco muito frequente nas mulheres, mas pode tambm acometer homens, sejam eles crianas ou adultos. A candidase no homem se manifesta como uma balanite, que
a inflamao da glande. Se houver tambm inflamao do prepcio, a infeco
chama-se balanopostite por Candida.
Candidase oral: A candidase oral, chamada popularmente de sapinho,
uma infeco da orofaringe provocada pelo fungo Candida albicans. Ao contrrio do que muita gente pensa, a candidase na boca no uma problema exclusivo de pacientes com HIV. Ela realmente pode ser um dos sinais de AIDS, mas
costuma tambm surgir com frequncia em crianas e idosos.
Candidase Vaginal: A Candidase vaginal, tambm chamada de vulvovaginite por cndida, uma micose provocada pelo fungo da espcie cndida, habitualmente, a Candida albicans. Outras formas de cndida, como a Candida

captulo 5

145

glabrata, tambm podem provocar vulvovaginite, mas so bem menos comuns.


A candidase vaginal uma forma de vaginite extremamente comum.
Micose Na Virilha - Tinea Cruris: A micose na virilha, chamada em medicina
de tinea cruris, uma das infees fngicas da pele mais comuns. A tinea cruris
costuma atingir as regies inguinal (virilhas), coxas e ndegas, causando placas
avermelhadas e intensa coceira.
Frieira - P De Atleta: A dermatofitose dos ps, conhecida tambm como tinea pedis, frieira ou p de atleta, a micose de pele mais comum no mundo.
A frieira uma infeco por fungos, que ataca preferencialmente a sola e os
espaos entre os dedos dos ps.
Micose De Unha Onicomicose: Onicomicose (tinea unguium), conhecida
popularmente como micose de unha, o nome dado infeco da unha causada por fungos. A onicomicose uma infeco comum, acometendo cerca de
10% da populao adulta e 20% dos idosos.

5.5.1 Diagnstico
O diagnstico para doenas causadas por fungos e feito, basicamente, com a
anlise das feridas ou do local atingido pelo problema. Exames de pele e de
sangue tambm ajudam o paciente a conseguir identificar corretamente o tipo
de fungo que o acometeu.
importante o diagnstico imediato para evitar que os fungos formem uma
superpopulao no organismo acarretando para um problema mais difcil de
ser curado.

5.5.2 Preveno
A melhor maneira de se prevenir uma doena fngica fazendo uma boa higiene pessoal. Lavar bem o corpo enquanto se toma banho fundamental par
evitar que os fungos evoluam. Lavar bem e diariamente as regies dos rgos
genitais e partes ntimas pessoais reduz bastante os riscos de se acometer por
uma doena fngica.

146

captulo 5

5.5.3 Tratamento
Apesar de incmodas, por causar feridas, ardor e irritabilidade, as doenas causadas por fungos so bem simples de serem tratadas. O tratamento pode ser feito
com medicamentos antibiticos, para o combate ao fungo, ou at mesmo com
pomadas e remdios que agem como esterilizador da pele e de rgo genitais.
A maioria das infeces fngicas cutneas, excetuando-se as do couro cabeludo e das unhas, so leves. Os ingredientes ativos das medicaes antifngicas
incluem o miconazol, o clotrimazol, o econazol e o cetoconazol.
Quando a aplicao do creme interrompida muito precocemente, a infeco pode no ser erradicada e a erupo retorna. Podem transcorrer vrios dias
at os efeitos dos cremes antifngicos serem observados. Neste perodo, cremes de corticosterides so frequentemente utilizados para aliviar o prurido
e a dor. Para as infeces mais graves ou resistentes, o mdico pode prescrever
vrios meses de tratamento com outros medicamentos, algumas vezes concomitante com cremes antifngicos.
Doenas fngicas dificilmente oferecem risco de morte ao paciente, mas
em casos de imunidade baixa pode levar o acometido ao bito. Por isso, o tratamento muito importante e deve ser seguido risca para evitar que o fungo
permanea no organismo por muito tempo.
Seleo de Fungos Causadores de Doenas
CATEGORIA
Leveduras

Mofo

Fungos

Dimorfos
Outros

GNERO/ESPCIE

DOENA

Estomatite, vaginite, infeco das unhas,


Cndida albicans
infeco sistmica criptococose(infeco
Cryptococcus neoformans
pulmonar, meningite, etc).
Aspergilose (infeco pulmonar, infeco
Espcies de Aspergillus
sistmica)
Espcies de Mucor e Rhizopus e
Mucormicose (infeco pulmonar, infeco
outras espcies de mofo do po
sistmica)
Vrios dermatfitos
Infeces o por tinhas
Blastomicoses (principalmente doena pulBlastomyces dermatitidis
monar e cutnea)
Coccidioides immitis
Coccidioidomicose (infeco pulmonar, infeco sistmica)
Histoplasmose (infeco pulmonar, infeco
Histoplasma capsulatum
sistmica)
Sporothrix shenckii
Esporotricose (doena cutnea)
Pneumocytis jiroveci
Pneumonia por pneumocystis (PCP)

Tabela 5.3

captulo 5

147

5.6 Infeco hospitalar e sua relao com a


microbiota normal
H pouco mais de 150 anos atrs, os hospitais eram considerados insalubres
e ficavam restritos a invlidos e excludos, em uma assistncia mais humanitria que cientfica. As consequncias prticas da microbiologia comprovando
a etiologia microbiana das doenas infecciosas e principalmente o desenvolvimento do controle de infeco hospitalar foram fundamentais para a gnese do Hospital moderno, considerado seguro para o exerccio profissional de
clnicos, cirurgies, enfermeiros entre outros, podendo finalmente congregar
esforos para a recuperao da sade humana.
A maioria das infeces hospitalares tem origem endgena, devido ao desequilbrio da relao que o homem estabelece com sua microbiota, que favorecido pela patologia de base, utilizao de procedimentos invasivos e a presso
seletiva em favor dos germes resistentes, exercida pelos antibiticos. A infeco
exgena limitada pela pequena capacidade que esta microbiota apresenta de
sobrevivncia no meio ambiente, na ausncia de matria orgnica que favorea
sua proliferao, principalmente sangue, secrees e excretas eliminadas pelos
pacientes. Na transmisso cruzada de infeces, as mos da equipe assumem
capital importncia, seguidas pelos artigos, insumos e medicamentos que tero contato com o paciente. Surtos de infeco, que embora sejam dramticos,
despontam o problema na imprensa leiga, representam pouco mais que 5,0%
desses episdios, mas potencialmente evitveis.
A anlise dos principais desafios do controle de infeco, parte de sua ocorrncia: o paciente e sua patologia, os procedimentos invasivos, a microbiota
hospitalar, os profissionais de sade e o atendimento prestado. Desde a promulgao da Lei Federal 6.431 de 1998, todos os hospitais brasileiros so obrigados a terem constitudo uma Comisso de Controle de Infeco Hospitalar
(CCIH), que deve elaborar o Programa de Controle de Infeces, definido como
um conjunto mnimo de aes para reduzir ao mximo possvel incidncia
e gravidade das infeces hospitalares. Assim, quem no tiver constitudo sua
comisso ou se ela no for atuante, elaborando um programa de controle eficaz, j incorre em um delito e pode sofrer as consequncias legais decorrentes
desse erro.

148

captulo 5

Com o envelhecimento populacional, a nossa sociedade torna-se progressivamente menos resistente s infeces. Paradoxalmente, o sucesso da medicina provoca-lhe mais uma armadilha. Pacientes graves, em extremos de idade,
que at a bem pouco tempo atrs no sobreviviam hoje se mantm vivos custa
da alta tecnologia, de cuidados assistenciais de qualidade, mas so extremamente vulnerveis s infeces hospitalares. Pacientes mais graves, suscetveis
s infeces, cada vez mais dependentes dos cuidados assistenciais, com mais
procedimentos invasivos, formam o palco para o enredo dramtico das infeces hospitalares. s vezes a vida artificialmente mantida torna-se um substrato
para a proliferao de germes resistentes, que so disseminados por atarefados
profissionais de sade, que na sua luta por salvar vidas, mal tm tempo para
lavar suas mos e assim transmitem esses selecionados assassinos invisveis.
Os avanos tecnolgicos na rea da sade so impressionantes. Se der vida
s pessoas parece ser o maior bem que a cincia pode prestar humanidade,
seu alto custo, devorando parcelas progressivas da riqueza mundial, tanto em
pases ricos como nos pobres, cobra um alto preo, que compromete recursos
que poderiam ser empregados em outras reas importantes, interferindo com
a qualidade de vida dos sobreviventes. Esta tecnologia pode aprimorar diagnstico e tratamento dos pacientes, sua qualidade de vida, reduzir a incidncia de
complicaes entre as quais as infeces hospitalares. Restries ao emprego
desta tecnologia, podem comprometer o resultado final do atendimento, gerando mais problemas na j atribulada relao dos profissionais e instituies
de sade com a sua clientela. Alm disso, o risco ocupacional ronda a assistncia, principalmente onde ela mais urgente e necessria. Muitos recursos
empregados visam reduzir estes riscos, tornando mais segura a prtica profissional. Com tantas opes, tona-se imprescindvel a orientao dos investimentos, onde a CCIH pode desempenhar um papel fundamental, subsidiando
a definio de investimentos e medindo resultados.
Com os custos crescentes, os atritos entre os prestadores e os financiadores da assistncia so totalmente previsveis. A regulamentao dos planos de
sade, sua cobertura, elaborao de relatrios, detalhamento minucioso de
cada cuidado prestado, qualidade das informaes em pronturios, procedimentos tendo que ser justificados, prejuzos, reclamaes, tudo isso e muito
mais envolve cada atendimento prestado. A soluo passa pela elaborao de

captulo 5

149

protocolos clnicos, que alm de aprimorar a interao multi-profissional e


qualidade assistencial, procura trazer aos pacientes as melhores prticas, baseadas em evidncias. A adequao da tecnologia e da prescrio de antibiticos tem um papel fundamental no sucesso desta estratgia. A CCIH pode
ser o principal aliado, pois conhecem as ferramentas epidemiolgicas, as infeces hospitalares e a flora microbiana da instituio, estando mais apta
para responder a este desafio. Evidentemente, a medicina tradicionalmente
encarada como exerccio liberal, pode se insurgir contra este "cerceamento
profissional", gerando conflitos de ordem tica. Cabe a CCIH conquistar o
corpo clnico, difundindo seus conhecimentos e as vantagens de um trabalho
em equipe.
A grande maioria das doenas que emerge na comunidade consequncia da atividade humana. Possuindo a maior reserva tropical do mundo, progressivamente sendo devastado, o Brasil uma vtima potencial destas novas
pragas. Os pacientes por sua gravidade, dificuldades diagnsticas ou teraputicas, sero fatalmente atendidos em hospitais, necessitando de um eficiente
sistema de sade, para que a doena no se dissemine entre os profissionais e
demais pacientes e ao mesmo tempo, seja notificada, para que as autoridades
sanitrias tomem logo as devidas providncias.
Concomitantemente, dentro de cada hospital as presses seletivas que os
antimicrobianos exercem sobre a flora hospitalar, ao lado de falhas nas medidas bsicas para conter a disseminao microbiana, contribuem para um aumento assustador da resistncia aos antibiticos. Os exemplos so mltiplos
e falam por si s: S aureus resistente a meticilina; S aureus com sensibilidade
intermediria vancomicina; Enterococo resistente a vancomicina; enterobactrias produtoras de beta-lactamases de amplo espectro; bacilos Gram
negativos no fermentadores multi-resistentes; micobactrias multi-resistentes, etc.

5.6.1 Fatores de Virulncia Bacteriana


Algumas bactrias habitam naturalmente certos nichos do corpo humano, outras so sempre patognicas; entretanto todas podem causar doenas quando
instaladas em ambiente estril.

150

captulo 5

5.6.2 Colonizao, Adeso e Invaso


Certas bactrias produzem molculas especficas para aderirem ao tecido do
hospedeiro. Adesinas, fmbrias e o cido lipoteicoico so exemplos de substncias produzidas para auxiliar na colonizao.
Outras bactrias produzem uma espessa e pegajosa matriz de polissacardeos. O biofilme ajuda na fixao/ adeso/ colonizao da populao bacteriana e muitas vezes confere certa resistncia ao de antibiticos no observados em cultura in vitro.

5.6.3 Aes Patognicas das Bactrias


Seres procariontes produzem enzimas, cidos, toxinas e at gases associados
destruio tissular. Exotoxinas so enzimas citolticas que podem ser produzidas tanto por Gram positivas quanto por Gram negativas. A toxina tetnica, a
toxina botulnica e a estreptolisina so exemplos de exotoxinas.
Endotoxina o lipopolissacardeo (LPS) de parede celular exclusivo de bactrias Gram negativas. LPS causa um processo inflamatrio sistmico e severo caracterizado por ativao de complemento, degranulao mastocitria, ativao
plaquetria secreo de citocinas de fase aguda (IL1, IL6 e TNF), podendo causar
CIVD (coagulao intravascular disseminada), caracterstica do choque sptico.
Algumas bactrias funcionam como superantgenos, uma vez que podem
ativar linfcitos sem precisar de processamento antignico. Superantgenos
se ligam ao MHCII (complexo de histocompatibilidade tipo 2) de clulas
apresentadoras de antgeno e ao TCR (receptor de clula T) ao mesmo tempo. Dessa forma, superantgenos ativam linfcitos sem a necessidade de
coestimulao.
Ainda por um mecanismo de mimetismo molecular, antgenos bacterianos
podem ser confundidos com autoantgenos, causando reaes cruzadas com
tecidos do organismo. o caso da febre reumtica psestreptoccica (S. pyogenes).

5.6.4 Mecanismos de Escape


Bactrias desenvolvem diversos mecanismos de escape das defesas do
hospedeiro.

captulo 5

151

Cpsulas so estruturas externas parede celular, de constituio polissacardea ou protica, pouco imunognicas. Bacterias encapsuladas sofrem
menos reatividade do sistema imunolgico. As cpsulas bacterianas das cepas
mais prevalentes podem ser utilizadas para a sntese de vacinas, como ocorre
na imunizao para pneumonia pneumoccia (Streptococcus pneumoniae).
Culturas mistas de bactrias encapsuladas com bactrias desprovidas de cpsula mostram uma converso destas quelas, provavelmente devido troca de
material gentico entre as cepas. A cpsula define a virulncia de muitas bactrias. Sem ela, normalmente no so patognicas.
Para escapar do ataque imunolgico do hospedeiro, bactrias assumem vrias estratgias: Impedir a opsonizao por anticorpos e/ou por complemento:
Inibir fuso do fagossomo com o lisossomo;
Escape do fagolisossomo para o citoplasma;
Resistir s enzimas lisossmicas e multiplicarse no interior da clula (ex:
Mycobacterium leprae).

5.6.5 Engenharia Gentica e Biotecnologia


O uso da biotecnologia teve o seu incio com os processos fermentativos, cuja
utilizao transcende, de muito, o incio da era Crist, confundindo-se com a
prpria histria da humanidade, quando esta se tornou sedentria. Um exemplo simples pode ser observado na obteno e manuteno dos alimentos ou
quando o homem aprendeu a domesticar animais e a desenvolver a agricultura,
deixando assim de depender por completo da caa ou da coleta.
PERODO
6.000 a.C.
2.000 a.C.
1875 d. C.
1880-1910
1922
1910-1940
1940-1950
1953

152

ACONTECIMENTO
Bebidas alcolicas (cerveja e vinho) so produzidas por sumrios e
babilnios
Panificao e bebidas fermentadas so utilizadas por egpcios e gregos
Pasteur mostra que a fermentao causada por microrganismos
Surgimento da fermentao industrial (cido lctico, etanol, vinagre)
Sementes hbridas de milho comeam a ser comercializadas.
Sntese de glicerol, acetona e cido ctrico
Antibiticos so produzidos em larga escala por processos fermentativos
Estabelecida a estrutura do DNA (Wilson e Crick revelam a estrutura do
DNA)

captulo 5

PERODO
1073
1982
1994
2000
2003

ACONTECIMENTO
Incio da engenharia gentica (Cohen e Boyer transferem um gene de um
organismo para outro)
Insulina humana produzida por engenharia gentica
O primeiro alimento geneticamente modificado, o tomate Flavr Savr, chega
aos supermercados dos EUA
O arroz geneticamente modificado criado
O Projeto Genoma, que identificou o mapa gentico humano, concludo

Tabela 5.4 Fonte: www.bioinfo.ufpb.br/difusao.

A Biotecnologia, ou os processos biotecnolgicos, podem ser definidos


como: A nova bio-tecnologia, a utilizao de clulas e molculas biolgicas
para a soluo de problemas ou produo de produtos ou processos teis, com
potencial industrial em diversas reas do conhecimento. Dentre as tecnologias desenvolvidas at o momento, a biotecnologia , de longe, a que apresenta
maior compatibilidade com a sustentabilidade da vida neste planeta.
O seu impacto atinge vrios setores produtivos, oferecendo novas oportunidades de emprego e renda. Dentre os inmeros exemplos, tais como, plantas
resistentes a doenas, plsticos biodegradveis, detergentes mais eficientes,
biocombustveis, processos industriais e agrcolas menos poluentes, mtodos
de biorremediao do meio ambiente e centenas de testes diagnsticos e novos
medicamentos.

5.6.6 Grandes reas da biotecnologia


A contribuio das biotecnologias ao desenvolvimento de produtos e processos
deve ser analisada em funo do impacto causado em cada uma das grandes
reas, com destaque, a Biotecnologia Branca: diz respeito s aplicaes industriais e ambientais; Biotecnologia Vermelha: inclui as aplicaes relativas
sade; Biotecnologia Verde: dedica-se s aplicaes agrcolas e alimentares;
Biotecnologia Azul: dedica-se a aplicaes com origem em organismos aquticos. Contudo, espera-se que o desenvolvimento de novas tecnolgicas possibilite a conservao ou criao de empregos.
A Biotecnologia Branca diz respeito s aplicaes industriais e ambientais:
Inclui os processos industriais que utilizam enzimas e organismos para processar e produzir qumicos, materiais e energia. Segue abaixo as principais reas
de atuao:

captulo 5

153

Biorremediao de vazamentos de petrleo e resduos txicos;


Monitoramento de poluentes (biosensores);
Tratamento de resduos industriais e guas residurias;
Biominerao (recuperao de metais pesados e radioistopos);
Recuperao de reas degradadas (micorrizas e bactrias fixadoras de
nitrognios).
A Biotecnologia Vermelha inclui as aplicaes relativas sade: Esta rea
inclui a utilizao de processos relacionados com a medicina e a farmacologia e
que se baseiam na manipulao gentica de organismos. Segue abaixo as principais reas de atuao:
Compostos farmacologicamente ativos;
Antibiticos, antimicrobianos e antivirais;
Vitaminas e hormnios;
Vacinas e probiticos;
Biopolmeros de aplicao mdica (e.g., pele artificial);
Biotransformaes em qumica fina.
A Biotecnologia Verde dedica-se s aplicaes agrcolas e alimentares: As
aplicaes biotecnolgicas desta rea incluem mtodos de melhoramento de
variedades vegetais e animais, visando a agro-indstria. Segue abaixo as principais reas de atuao:
Aumento de fertilidade do solo;
Fixao biolgica de nitrognio;
Controle biolgico de insetos e patgenos;
Promotores de crescimento de plantas;
Promotores de crescimento animal;
Antiparasiticidas, antibiticos, antimicrobianos, antivirais;
Vitaminas e hormnios;
Vacinas e probiticos.
As aplicaes biotecnolgicas desta rea incluem mtodos de produo e
preservao de alimentos, visando a indstria de alimentos. Segue abaixo as
principais reas de atuao:
Produo e preservao de alimentos;
Produo de bebidas;

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Aromas e essncias;
Aditivos para alimentos (emulsificantes e espessantes);
Alimentos funcionais (nutracuticos).
A Biotecnologia Azul dedica-se a aplicaes com origem em organismos
aquticos: Esta rea envolve a aplicao de mtodos moleculares com base em
organismos marinhos e de gua doce, ou nos seus tecidos, clulas ou componentes celulares. Segue abaixo as principais reas de atuao:
Ambiental;
Indstria de alimentos;
Indstria Qumica;
Indstria farmacutica;
Energia.
A biotecnologia interdisciplinar e por isso muitas aplicaes so classificadas com mais de uma cor. Por exemplo, a produo de energia a partir de
plantas ou de resduos pode ser considerada biotecnologia branca ou verde.
Portanto, a biotecnologia torna-se um instrumento poderoso, podendo substituir vasto nmero de processos industriais atualmente empregados e criando
com isso novas e melhores solues para uma grande gama de problemas.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
ALBERTS, B.; BRAY, D.; HOPKIN, K.; JOHNSON, A.; LEWIS, J.; RAFF, M.; ROBERTS, K.; WALTER, P.
2011. Fundamentos da Biologia Celular. 3 Edio. Editora Artmed.
ALBERTS, B.; JOHNSON, A.; LEWIS, J.; RAFF, M.; ROBERTS, K.; WALTER, P. 2010. Biologia
Molecular da Clula. 5 Edio. Editora Artmed.
MADIGAN, Michael T.; MARTNKO, John M.; PARKER, Jack. Microbiologia de Brock. 12 ed. Editora:
Artmed. So Paulo. 2010.
Makron, 1997.
PELCZAR, CHAN, KRIEG. Microbiologia: conceitos e aplicaes. 2 Ed. So Paulo:
ROBERTS, K.; WALTER, P. 2011. Fundamentos da Biologia Celular. 3 Edio. Editora
TRABULSI, ALTERTHUM. Microbiologia. 5 Ed. So Paulo: Atheneu, 2008.

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ANOTAES

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