PG-20/F1, V.

INSTITUTUL NATIONAL DE CERCETARE-DEZVOLTARE

IN DOMENIUL PATOLOGIEI SI STIINTELOR BIOMEDICALE
VICTOR BABE
www.ivb.ro
Splaiul Independenei 99-101, Sector 5,
050096 Bucuresti, ROMANIA
Tel. +4021.319.27.32/218.; +4021.319.27.33/218;
Fax.: +4021.319.45.28;
E-mail: genetica@ivb.ro

MANUAL DE RECOLTARE

Page 1

PG-20/F1, V.2

INTRODUCERE
Manualul de recoltare este un ghid care cuprinde descrierea tehnicilor de
recoltare si receptie a probelor biologice, ca si a materialelor necesare fiecarui tip de
recoltare.
Acest ghid este utilizat in Laboratorul Genetica Medicala al Institutului
National de Cercetare-Dezvoltare in Domeniul Patologiei si Stiintelor Biomedicale
Victor Babes de catre personalul implicat in activitatea de recoltare si receptie a
probelor, pentru a asigura obtinerea unor probe biologice care sa permita efectuarea
unor analiza de calitate.
Laboratorul Genetica Medicala al Institutului National de CercetareDezvoltare in Domeniul Patologiei si Stiintelor Biomedicale Victor Babes
efectueaza urmatoarele tipuri de analize:
Lista de analize (PG-03/F5):

Denumire analiza

Diagnostic

Proba biologica

Termen de
eliberare
rezultate

Analiza cariotip
din maduva
osoasa

Leucemie acuta
mieloblastica
Leucemie acuta
limfoblastica
Sindrom
mielodisplazic
Leucemie mieloida
cronica
Alte neoplasme
hematologice
Leucemie acuta
mieloblastica
Leucemie acuta
limfoblastica
Leucemie mieloida
cronica
Alte neoplasme
hematologice
Leucemie acuta
limfoblastica
Leucemie mieloida
cronica
Leucemie acuta
promielocitara

maduva osoasa

6 saptamani2

sange periferic1

6 saptamani2

maduva osoasa
sau
sange periferic1

3 saptamani

maduva osoasa
sau

3 saptamani

Analiza cariotip
din sange periferic
leucemic1

Test FISH
translocatie
BCR/ABL1
Test FISH
translocatie

Page 2

PG-20/F1, V.2
PML/RARA
Test FISH
translocatie
AML1/ETO
Test FISH
translocatie
CBFB/MYH11
Test FISH
translocatii MLL

Leucemie acuta
mieloblastica
Leucemie acuta
mieloblastica

Test FISH deletie

5q

Leucemie acuta
mieloblastica
Leucemie acuta
limfoblastica
Neoplasme
hematologice

Test FISH deletie

7q

Neoplasme
hematologice

sange periferic1
maduva osoasa
sau
sange periferic1
maduva osoasa
sau
sange periferic1
maduva osoasa
sau
sange periferic1
maduva osoasa
sau
sange periferic1
maduva osoasa
sau
sange periferic1

3 saptamani
3 saptamani
3 saptamani

3 saptamani
3 saptamani

Analiza poate fi efectuata doar in conditiile in care numarul de leucocite este > 10 x 109 /L si
procentul de celule imature este > 20%
2 Acest test necesita cultivarea celulelor. In consecinta, timpul de raspuns reprezinta o valoare
medie care poate fi influentata de numerosi factori
1

TIPURI DE PROBE PRIMARE

In Laboratorul Genetica Medicala se efectueaza analize din urmatoarele tipuri
de probe:
o sange pe anticoagulant (heparina de sodium sau litiu);
o maduva osoasa pe anticoagulant (heparina de sodium sau litiu).
CEREREA DE ANALIZE
Primirea probelor se face in zilele de luni, marti si miercuri pentru maduva
osoasa si sangele periferic leucemic, intre orele 9:00 14:30. In caz de urgenta, se
pot primi probe in afara zilelor mentionate. Se considera urgente urmatoarele:
leucemiile acute, alte hemopatii maligne la care este necesara inceperea imediata a
terapiei citostatice.
Solicitarea analizelor de catre medicii solicitanti/alti clienti se face pe
formulare de Bilet de trimitere (PG-03/F4), postate pe site-ul Institutului.
Cererile de analize (indiferent de tipul si provenienta lor) includ, dupa caz:
o numele si prenumele pacientului, sexul, varsta, data nasterii, adresa,
numarul de telefon;
Page 3

PG-20/F1, V.2
datele de identificare ale medicului solicitant: nume, unitatea care trimite, etc
tipul probei: sange, maduva osoasa;
analizele solicitate;
informatii clinice despre pacient (daca evaluarea se realizeaza la diagnostic
sau pentru supravegherea bolii - pentru neoplasmele hematologice -,
antecedente personale patologice si/sau heredo-colaterale relevante in functie
de indicatia clinica etc);
o data si ora recoltarii probei primare.
o
o
o
o

Pacientul va semna ca este de acord cu efectuarea analizelor solicitate pe

cererea de analize (biletul de trimitere).
Cererile de analize se prezinta registratorului medical care le inregistreaza in
Registrul de pacienti. Probele recoltate, inscriptionate de catre asistentul care
efectueaza recoltarea cu datele de identificare ale pacientului (numele si prenumele
pacientului etc), vor fi etichetate si de catre registratorul medical cu codul de
laborator al pacientului.
RECOLTAREA PROBELOR BIOLOGICE
In Laboratorul Genetica Medicala al Institutului National de CercetareDezvoltare in Domeniul Patologiei si Stiintelor Biomedicale Victor Babes sunt
primite probe biologice recoltate in alte unitati sanitare. Instructiunile referitoare la
conditiile de recoltare, transport si receptie a probelor biologice se gasesc postate pe
site-ul Institutului.
Institutul National de Cercetare-Dezvoltare in Domeniul Patologiei si Stiintelor
Biomedicale Victor Babes este dotat cu camera de recoltare cu compartiment
pentru recoltarea probelor de sange. Camera de recoltare este dotata cu instalatii de
incalzire si ventilatie corespunzatoare pentru a se asigura confortul termic si
aerisirea. Se asigura intimitatea pacientilor la recoltare prin inchiderea usilor in
timpul recoltarii si limitarea accesului altor persoane (pacienti sau personal) la
prezenta asistentei care recolteaza.
Reguli generale
Recoltarea sangelui
Sangele se recolteaza in laborator de catre un cadru medical cu competenta
pe acest domeniu. Analizele genetice nu sunt influentate de alimentatie; din acest
motiv recoltarea sangelui se poate face independent de alimentatie.
Tehnica recoltarii probelor de sange:
Tuburile de recolta sunt vidate, sterile, de unica folosinta, cu anticoagulant;
in laborator se utilizeaza tuburi cu heparina, cu capac verde.
Tehnica este urmatoarea :
o se abordeaza venele accesibile la plica cotului (cefalica, bazilica), radiala,
venele de pe fata dorsala a mainii;
Page 4

PG-20/F1, V.2
o se face staza venoasa prin aplicarea garoului;
o se repereaza vena care trebuie abordata;
o se aseptizeaza tegumentul cu tamponul cu solutie alcoolica asteptand pana
la evaporarea alcoolului;
o se aplica vacutainerele pentru recoltarea probelor de sange recomandate;
o se desface garoul;
o se recolteaza sange in cantitatea dorita;
o dupa terminarea recoltei, se aplica peste punctie un tampon de vata cu
alcool si se extrage rapid acul;
o dupa cateva minute (5 minute) se indeparteaza tamponul;
o se face securizarea locului punctiei prin aplicarea unui plasture.
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o

Etapele recoltarii pe vacutainere sunt:

identificarea pacientului si a probelor ce trebuie recoltate conform cererii de
analiza;
in prezenta pacientului, sunt trecute cu un marker permanent datele de
identificare pe vacutainerele in care i se va recolta sange;
pacientul este indrumat sa se aseze pe scaunul de recoltare si este informat
asupra procedurii de recoltare;
se aseaza la indemana materialele necesare pentru recoltare (materiale
dezinfectante, garou, ace, vacutainerele cu datele de identificare ale
pacientului);
se inspecteaza zona pentru selectarea venei de recoltare;
se aplica garoul pentru evidentierea venei de punctionare;
se dezinfecteaza zona;
se efectueaza punctia venoasa si recoltarea in vacutainer care aspira
cantitatea de sange necesara, in functie de capacitatea vacutainerului;
se indeparteaza garoul, se scoate acul si se aplica tamponul la locul punctiei,
se aplica un plasture pentru securizarea locului punctiei;
se mixeaza sangele cu anticoagulantul din tub (daca este cazul) prin
rasturnarea lenta de 6-8 ori a tubului de recolta.

Tehnica recoltarii probelor de maduva osoasa

Maduva osoasa este utila pentru diagnosticul, stadializarea si monitorizarea
hemopatiilor maligne si, de asemenea, si pentru alte indicatii in afara domeniului
hemato-oncologiei.
Maduva osoasa poate fi obtinuta prin aspirare medulara sau biopsie osoasa
cu aspirare medulara. Procedura se efectueaza de obicei la patul pacientului sub
anestezie locala. Recoltarea se realizeaza in conditii de asepsie si antisepsie, cu
tehnici sterile (ace/trocare specializate, seringi sterile, de unica folosinta etc).
Recoltarea se realizeaza din cavitatea medulara, dupa penetrarea periostului si a
corticalei osoase. Biopsia maduvei osoase consta in indepartarea unui miez
cilindric in care se conserva structura medulara, celularitatea globala (cantitatea
relativa de celule medulare raportat la celulele grase) si raporturile dintre celule.
Aspirarea maduvei osoase indeparteaza doar maduva. Aspirarea maduvei osoase
permite colectarea unui esantion de lichid cu celule din maduva osoasa cu ajutorul
Page 5

PG-20/F1, V.2
unui ac. Acest esantion se studiaza apoi la microscop pentru a detecta orice
problema cu celulele de sange produse in maduva. De asemenea, esantionul poate fi
studiat pentru a identifica defectele cromozomiale, dar si eventuale infectii etc.
Biopsia indeparteaza o portiune de os care inca mai contine maduva osoasa pentru
a fi studiata la microscop. Mai intai se efectueaza biopsia, iar apoi aspirarea.
Maduva osoasa anticoagulata (pe heparina de sodiu sau litiu) este trimisa la
Laborator pentru studii de citogenetica.
In cazul probelor coagulate se repeta recoltarea deoarece acest lucru
poate influenta rezultatele analizelor. In cazul in care se lucreaza totusi
probele partial sau total coagulate (cum ar fi de pilda probele de maduva
osoasa care se obtin cu dificultate), aceasta informatie este semnalata
medicului solicitant la rubrica Observatii din Buletinul de Analiza.
In situatia respingerii comenzii din motiv ca probele sunt coagulate, se
anunta medicul sau pacientul asupra acestui aspect si se solicita repetarea
recoltarii.
Pacientii/apartinatorii/curierii intra in spatiul de primire probe al
Laboratorului prezentand registratorului medical cererea de analize (biletul de
trimitere) si probele biologice. Datele cererii de analize se trec in Registrul de
pacienti.
Probele biologice sunt apoi transportate spre compartimentul in care vor fi
analizate.
Probele biologice se recolteaza pentru :
- analize de cariotip;
- teste de hibridizare in situ fluorescenta (FISH).
Recoltarea se face prin:
- punctie venoasa;
- punctie aspirativa de maduva osoasa sau biopsie osoasa.
CRITERII DE ACCEPTARE/RESPINGERE A PROBELOR BIOLOGICE:
La intrarea in lucru se verifica daca proba primara este corect identificata.
Se resping si nu se lucreaza urmatoarele:
CRITERII DE RESPINGERE COMENZI
o comenzi ce nu sunt insotite de bilet de trimitere/consimtamant informat
semnat,
o probe recoltate in recipiente neadecvate (recipiente fara anticoagulant sau cu
orice alt anticoagulant in afara heparinei),
Page 6

PG-20/F1, V.2
o probe insuficiente cantitativ (doar pentru probele la care recoltarea poate fi
repetata),
o probe de sange coagulate (doar pentru probele la care recoltarea poate fi
repetata),
o orice tip de probe care nu sunt corect identificate/etichetate,
o specimen transportat/stocat inadecvat (congelat, refrigerat sau incalzit).
CRITERII DE RESPINGERE PROBE
o toate probele la care nu se obtin celule in diviziune pentru analiza
citogenetica.
In cazul in care se lucreaza totusi probele coagulate sau in cantitate
insuficienta (cum ar fi de pilda probele care se obtin cu dificultate), aceasta
informatie este semnalata medicului solicitant la rubrica Observatii din
Buletinul de Analiza.
INSTRUCTIUNI PENTRU ETICHETAREA PROBELOR PRIMARE IN LABORATOR:
Probele primare se eticheteaza cu codul pacientului din Registrul de pacienti
din ziua respectiva. Acest lucru se face in prezenta pacientului/apartinatorului,
verificandu-se ca toate datele de identificare sa fie corecte.
Probele de analizat se introduc in stative si se repartizeaza pe masa de lucru.
INSTRUCTIUNI PRIVIND TRANSPORTUL PROBELOR
Transportul probelor recoltate se face in cutii de transport care se pot curata
si dezinfecta usor, cu monitorizarea timpului de transport, conform procedurii
Recoltarea, transportul si receptia probelor biologice.
Probele se primesc in Laborator doar cu programare. Inaintea recoltarii vor fi
citite, de catre medicii solicitanti, cerintele pe care trebuie sa le indeplineasca
probele biologice, conditiile de transport si manipulare (documentele de pe site:
BILETUL DE TRIMITERE, MANUALUL DE RECOLTARE etc)
Cerinte legate de proba primara
Sange: recoltat pe vacutainer cu heparina de sodiu sau litiu (capac verde).
Cantitatea de sange: 5-10 ml.
Dupa recoltare vacutainerele se agita prin rasturnare de cateva ori.
Maduva osoasa: recoltata pe vacutainer cu heparina de sodiu sau litiu (capac
verde).
Cantitatea de aspirat medular: 2-3 ml.

Page 7

PG-20/F1, V.2
Cerinte pentru transport si manipulare:
o se completeaza si se ataseaza Biletul de trimitere completat si acordul
pacientului semnate. Biletul de trimitere completat si acordul pacientului nu
vor fi plasate alaturi de proba biologica in cutia de transport, ci separat de
aceasta;
o transportul probelor se realizeaza dupa impachetarea corespunzatoare a
probelor intr-un container rigid, avand eticheta biohazard, pentru a evita
spargerea recipientelor transportate.
o transportul catre Laborator se realizeaza la temperatura camerei, in cel mai
scurt timp posibil, dar nu mai mult de 24 h de la recoltare. Probele nu se
refrigereaza, nu se incalzesc si nu se congeleaza.
Declaratia privind politica de laborator pentru protectia informatiilor
Procedurile Laboratorului stabilesc regulile pe care le urmeaza personalul in ceea ce
priveste respectarea si mentinerea confidentialitatii informatiilor primite si
procesate de catre laborator.
Astfel:
o se definesc clauze contractuale intre Laborator si celelalte parti contractuale in
vederea respectarii confidentialitatii informatiilor;
o au fost elaborate si implementate proceduri documentate care descriu un sistem
de clasificare a informatiilor si conditiile in care documentele si inregistrarile pot
fi scoase in afara Laboratorului;
o s-a elaborat si implementat un sistem de protectie a datelor inregistrate
electronic si de creare a unor copii electronice de siguranta cu scopul prevenirii
pierderii sau distrugerii datelor inregistrate;
o exista o politica de identificare a personalului propriu care are acces la
informatiile confidentiale. In declaratia de confidentialitate si in Regulamentul de
organizare si functionare se stipuleaza obligativitatea respectarii confidentialitatii
datelor referitoare la clientii Laboratorului.

Page 8

PG-20/F1, V.2
Diagrama de flux a procedurii Laboratorului privind rezolvarea reclamatiilor
Diagrama de flux pentru rezolvarea reclamatiilor

Start

Inregistrare reclamatie

Se anunta DL

Personal desemnat

Personal desemnat

SL, RC, personal

desemnat

Analiza reclamatie

Este fondata ?

DA

Stabilire si implementare
actiuni corective

SL / RC, personal
desemnat

NU

Data: 30.01.2015

Urmarire rezolvare
reclamatie

RC

Anunt client

SL

Stop

Intocmit: SL, Dr Aurora Arghir

Page 9