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UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARAN

ANA CAROLINA SCHRADER


DOUGLAS BACH DE ANDRADE
FABIANO RATAICZYK

RELATRIO DE AULA PRTICA:


CROMATOGRAFIA DE CAMADA DELGADA PREPARATIVA
REALIZADA NO DIA 02 DE OUTUBRO DE 2013

TURMA A

CURITIBA
2013

1 INTRODUO

Segundo (EWING,1914), o termo cromatografia em camada delgada


(CCD) costuma ser reservado para as separaes que ocorrem em um
revestimento de uma substncia em p aderente a um suporte liso tal como
uma placa de vidro. Qualquer um dos slidos usados na cromatografia em
coluna pode se adaptar a CCD desde que se encontre um aglutinante
conveniente para garantir aderncia ao vidro. Ainda segundo o autor, o
revestimento deve ser to uniforme quanto possvel para se realizar
separaes limpas e reproduzveis.
A amostra colocada em uma extremidade da placa e desenvolvida
pela tcnica ascendente, logo se pode secar a placa e pulverizar com o
reagente. A CCD largamente utilizada para seguir uma sntese de laboratrio,
estabelecer evidncias de pureza, justamente em funo de ser mais rpida e
geralmente mais aplicvel que as outras tcnicas cromatogrficas lquidas
(EWING, 1914).
Dependendo do emprego posterior do material separado pela CCD, a
mesma pode ser dividida em analtica ou preparativa.
A Cromatografia de Camada Delgada Preparativa (CCDP) aquela na
qual o interesse maior , alm da separao e/ou quantificao dos compostos,
coletar as fraes contendo os compostos de interesse para posterior uso. Este
uso poder ser a confirmao da identidade de um composto, determinao da
atividade biolgica de um ou mais constituintes da frao, verificao da
utilizao de uma frao isolada, purificao de um frmaco atravs do
isolamento das impurezas e outras. No caso, da aula prtica realizada no
laboratrio ela foi utilizada para separar pigmentos vegetais (MEDEIROS,
2012).
A CCDP executada em placas de comprimento, largura e espessura
maiores que a normal, o que permite separar amostras de diversos tamanhos:
de gramas at miligramas.
Na CCDP, as amostras geralmente, so aplicadas como uma banda ao
longo de toda a largura da placa. Para isolar a substncia por extrao, podese simplesmente remover a mancha escolhida da placa (MERK, 2013).

2 OBJETIVO

Separar pigmentos vegetais usando a tcnica de CCDP.

3 MATERIAIS E MTODOS
3.1 MATERIAIS
3.1.1. Amostra

Extrato vegetal de espinafre

3.1.2 Vidraria

Pipeta de Pasteur

Bqueres de 25 mL (2)

Basto de vidro

Funil simples

Papel de filtro

Placa de aquecimento,

Capilares

Esptula

Cubas cromatogrficas de diferentes tamanhos

Cromatoplacas de 20 x 5 cm e de 5 x 3 cm

3.1.3 Solventes

Mistura de ciclohexano e acetato de etila (2:1, v/v)

Mistura de ciclohexano e acetato de etila (1:1, v/v)

3.1.4 Fase estacionria para CCD e CCDP

Slica-gel G 60.

3.2 MTODO
3.2.1 Primeira Etapa
A primeira etapa refere-se execuo da CCDP.
Foi selecionada uma cromatoplaca com aproximadamente 20 x 5 cm.
Em uma folha foi marcado a frente de progresso do solvente e a linha de
aplicao da amostra.
Com o auxlio de um capilar, aplicou-se a amostra concentrada sobre a
linha de aplicao da cromatoplaca, formando uma faixa contnua.
Depois disto, transferiu-se a cromatoplaca j preparada para a cuba
cromatogrfica, a qual ficou fechada durante todo o processo, que durou
aproximadamente 30 min.
Ao longo do tempo da separao, foi observado na cuba como as
bandas progrediam na superfcie da slica.
Quando a fase mvel atingiu a demarcao superior, retirou-se a
cromatoplaca da cuba cromatofrfica, e foi colocada sobre uma placa de
aquecimento, para secagem, atentando-se para eliminar o mximo de solvente
possvel.
3.3 SEGUNDA ETAPA
A segunda etapa refere-se remoo de um componente da superfcie
da cromatoplaca.
Aps a completa secagem, selecionou-se uma banda que obteve melhor
separao, na imagem 2 em anexo corresponde mancha cinza (segunda de
cima para baixo), foi removida, por raspagem com o auxlio de uma esptula.

A slica raspada contendo o pigmento foi colocada em um bquer de 50


25 mL, com uma mistura de hexano e acetato de etila (1:1, v/v) e deixando-se
em contato por alguns minutos sob agitao.
Aps a extrao do pigmento pelo solvente, foi filtrado a suspenso
atravs de algodo em um funil de vidro. O produto da filtrao foi concentrado
em placa aquecedora.
Por fim, com o componente extrado j concentrado, foi aplicado em uma
cromatoplaca de 5 x 3 cm, e procedeu-se a CCD, utilizando cuba de vidro
apropriada.
4 RESULTADOS E DISCUSSO
Ordem da mancha

Cor

ds

da

Rf

Amarelo
Cinza
Verde
Verde
Verde
Amarelo-

16,5
16,5
16,5
16,5
16,5
16,5

10
6,5
5,2
4,0
2,5
2,0

0,6
0,39
0,32
0,24
0,15
0,12

esverdeado
7
verde
16,5
1,5
8
amarelo
16,5
0,5
0
verde
16,5
0
O tempo de corrida foi de aproximadamente 30 minutos.

0,09
0,03
0

(de cima para


baixo)
1
2
3
4
5
6

Os principais pigmentos da fotossntese so as clorofilas a e b, que so


pigmentos verdes que contm um anel porfirnico e um tomo de magnsio no
centro deste anel, e quatro estruturas modificadas de pirrol, favorecendo assim
interaes polares. O eluente utilizado uma mistura de solventes, acetato de
etila e hexano, possui polaridade mediana e provoca desvantagem na
competico pelo stio de ativaco do adsorvente slica, ou seja, os
componentes do grupo interagiram mais com a fase estacionria que o eluente,
sendo pouco deslocado pelo mesmo.
Outros pigmentos presentes nas folhas so os carotenos, pigmentos
amarelos, ao analisar as estruturas desses dois pigmentos constatamos que
eles so bastante apolares. O eluente utilizado permitiu uma forte interao dos
carotenos com a fase mvel de mdia polaridade, que foram deslocados at a
extremidade superior da cromatoplaca e, consequentemente, interagindo
pouco com a fase estacionria.

O pigmento escolhido para extrao cromatogrfica foi o cinza, na


etapa de separao obteve-se um Rf=0,39, indicando que a separao foi
satisfatria e permitindo assim a posterior anlise separada deste pigmento.
Nesta etapa de anlise (Imagem 3) o Rf foi de 0,5 , este aumento no Rf pode
indicar duas consequncias: que o pigmento foi separado e que no h, ou h
pouca, impureza. Se o aumento fosse mais incrementado isso poderia indicar
que h contaminao de outros pigmentos.
5 CONCLUSO
Foi possvel separar os componentes do extrato de espinafre e retirar
um dos pigmentos desse extrato. Atravs da comparao dos resultados
obtidos para o extrato puro e o pigmento retirado, possvel concluir que este
pigmento contm relativo grau de pureza, devido o valor de Rf=0,5 calculado
pela cromatografia de camada delgada.
Conclui-se tambm que alm da identificao dos pigmentos, a CCDP
tambm til na separao de pigmentos de folhas vegetais.

REFERENCIAS
EWING, W. G. Mtodos instrumentais de anlise qumica. E. Blucher, 1972,
So Paulo.
SOLOMONS, T.w. Graham; FRYHLE, Craig B.. Qumica Orgnica. 9. ed. Rio
de Janeiro: Ltc, 2009.
MERK.
Placas
de
Camada
Preparativa.
Disponvel
http://www.merckmillipore.com.br/chemicals/preparative-layer-platesplc/c_6WSb.s1L87cAAAEWueAfVhTl. Acesso em: 16/10/2013

em:

MEDEIROS, R.U. Cromatografia. Faculdade Unio de Goyazes. Goinia, GO.


2011. Disponvel em: https://www.google.com.br/url?
sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=4&cad=rja&ved=0CFIQFjAD&url=http
%3A%2F%2Fwww.fug.edu.br%2Fadm%2Fsite_professor%2Farq_download
%2Farq_671.doc&ei=nP5mUoKVGo3MkQfN8YDAYD&usg=AFQjCNG0e_7ffkp
TTsct8ToGc1GXrqU_lA&sig2=ypkm15br3vN0IMA4gg1nLQ&bvm=bv.55123115,
d.eW0. Acesso em: 16/10/2013

ANEXO

Imagem 1. Aplicao do extrato na cromatoplaca de 5x20.

Imagem 2.Separao dos pigmentos aplicados em linha.

Imagem 3: Anlise separada do pigmento cinza.

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