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FUNDAMENTO DE UN PAPANICOLAOU

1. FUNDAMENTO TERICO:
La tincin de Papanicolaou es un mtodo de tincin muy
importante en citologa.
La fijacin se realiza al momento de la toma de muestra del
Papanicolaou aplicndole alcohol por Spray evitando una fijacin
inadecuada por exeso o falta de esta.
Adems, es fundamental que el tiempo entre la toma de muestra y
fijacin sea el mnimo posible (menos de 5 segundos).
La coloracin nuclear se realiza mediante la aplicacin de
hematoxilina de Harris como antes ya mencionado, es un
colorantes alcohlico basfilo.
La

tincin

citoplasmtica

se

realiza

mediante

colorantes

alcohlicos de los cuales tien de forma diferencial cada tipo


celular de la muestra debido a la existencia de una diferencia en
la afinidad electroesttica

por las protenas que tiene cada

colorante. Adems, la diferencia en los tamaos moleculares de los


colorantes determina la tincin diferencial de citoplasma segn el
grado de diferenciacin celular. El orange G, tie citoplasmas de
clulas maduras bien diferenciadas con hiperqueratosis las que
poseen

queratinas

de

alto peso

molecular

generando

una

coloracin orangeoflica.
El colorante EA-50 es una mezcla de colorantes que tien
citoplasma y est compuesto por eosina, verde luz

y pardo

Bismarck como antes ya mencionado.


La eosina posee mayor afinidad electrosttica desplazando al
orange G, por lo que tie los citoplasmas de todas las clulas pero
finalmente son las superficiales e intermedias las que poseen
coloracin eosinofila o acidofila. El verde luz tie el citoplasma de

las clulas menos diferenciadas ya que poseen una matriz


permeable quedando finalmente las clulas basales y parabasales
Teidas de azul. El pardo Bismarck tiene afinidad por la tincin de
la

mucina,

por

lo

que

es

el

citoplasma

de

las

clulas

endocervicales las que se tien con este colorante.


El aclaramiento es el paso final de la tincin donde se produce la
transparencia celular, para lo cual, se utiliza Xilol como solucin
aclaradora.
Finalmente las muestras se montan por medio de la unin del
portaobjetos con resina o balsamo la cual es un medio de montaje
soluble en el agente aclarante y debe tener un ndice de
refraccin que coincida con ambos.
1. Lavado en agua corriente: es utilizado para hidratar y limpiar las
muestras y darle un cierto carcter acuoso. Es importantes estilar
bien las muestras para evitar la dilucin y prdida de capacidad
de tincin del colorante utilizado.
2. Hematoxilina de Harris: utilizado para realizar la tincin nuclear
de las clulas del frotis.
3. lavado en agua corriente: utilizado para eliminar los exesos de
colorante que queden en la muestra. Es importante estilar bien las
muestras

para

evitar

diluir

por

lo

tanto,

disminuir

la

concentracin del reactivo del paso siguiente.


4. agua acida: utilizado para realizar una diferenciacin de la
coloracin nuclear por la hematoxilina, proceso llamado coloracin
regresivo. Es importante que las inmersiones sean rpidas para
evitar una disminucin exesiva de la tincin nuclear.

5. alcohol 95%: utilizado para darle carcter alcohlico a las


muestras para que reaccionen con el colorante del siguiente paso.
Es importante estilar bien las muestras para evitar la dilucin de
los alcoholes y la prdida de capacidad de tincin del colorante
utilizado en el paso siguiente.
6. Orange G: colorante alcohlico que tie el citoplasma de color
anaranjado, el cual tiene afinidad electrosttica con las protenas,
de todas las clulas en una primera instancia. Finalmente son las
clulas escamosas superficiales queratinisadas alas que obtienen
una tincin orangeolica.
7. alcohol 95%: utilizado para eliminar el exceso de colorante de
las muestras. Es importante estilar bien las muestras para evitar la
dilucin de los alcoholes y la prdida de capacidad de tincin del
colorante utilizado en paso siguiente.
8. EA-50: es una mescla de colorantes que tienen afinidad por el
citoplasma de las clulas.
9. alcohol 95%: Es importante estilar bien las muestras para evitar
la dilucin de los alcoholes, alteracin del xilol y su prdida de
capacidad como mordiente. Las inmersiones no deben ser por
mucho

tiempo

ya

que

puede

disminuir

la

coloracin

citoplasmtica.
10. Xilol: utilizado para el aclaramiento de la muestra, se tiene tres
depsitos para una inmersin en cada recipiente, esto es para la
mejor aclaracin con la importancia que tiene el oxgeno de
ayudar al aclaramiento de las clulas, para cada inmersin de
xilol.