EFEITO DO INIBIDOR DE c< - AMILASE DO FEIJO

(Phaseolus vulgaris L.) EM ANIMAIS NORMAIS E

DIABTICOS

ELlZABETE WENZEL DE MENEZES

Dissertao para obtenodo graa d

MESTRE
Orientador:
Pro'. Or. FRANCO M. LAJOlD

So Paulo

1985

AGRAVECIMENTOS

- Ao

P~o6.

d..i..ca~o

V~.

F~anco

M. Lajolo pela e6iciente

com que conduz..i..u no.6.6o.6 e.6tudo.6.

- A CAPES pela bol.6a de e.6tudo conced..i..da

o~ienta~o

du~ante

cU~.60

p.6-g~aduao.

- A OEA e a FINEP pelo.6 auxllio.6

- A todo pe.6.6oal do
mental.

Vepa~tamento

6..i..nance..i..~o.6

a e.6.6e

de Al..i..mento.6 e

t~abalh

Nut~..i..o

A U~.6ula Ma~..i..a Lan6e~ Ma~quez e Flv..i..o F..i..na~di F..i..lho pel

zade e val..i..o.6a.6 .6uge.6te.6.

Angelo Ra6ael Ca~p..i..nell..i.. - Vepa~tamento de

.6..i..olog~a e B..i..o61.6..i..ca IICB-USP) pela colabo~ao na dete~m.
o da ..i..n.6ul..i..na .6~..i..ca.

- Ao

P~o6.

V~.

S U M~ R I O

.. . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . .

INTRODU~O

2 - OBJETIVOS

.............................................

3 - MATERIAL
3.1
3.2
3.3
3.4
3.5

Feijo
Am i 1a s e sal i va r
Reagentes
Animais.........................................
Rao para manuteno de animais diabeticos .....

4 - MtTODOS
(

4.1 - FTsico-QuTmicos e BioquTmicos ..

4.1.1
4.1.2
4.1.3
4.1.4
4.1.5
4.1.6
4.1.7
4 .1 .8
4.1.9
4.1.10

Obteno do inibidor de a-ami1ase

Atividade da a-amilase
Atividade do inibidor de a-ami1ase
Atividade proteo1Ttica no intestino
Atividade do inibidor de tripsina
Determi nao da proteTna
Determinao da glicose
De te rm i na o do a mi do r e s i d ua 1
Determinao da insulina
Determinao dos cidos graxos no ester.,i
ficado no soro

4.2 - Biolgicos: ensaio com animais

4.2.1 - Esquema experimental

4.2.3 - Obteno dos 6rgios

4.2.4 - Preparao dos homogenatos de pncreas,
intestino e est5mago
4.2.5 - Induo da diabetes....................
4.3 - Ani 1 i se es ta tis ti ca

5 - RESULTADOS
5.1 - Ao em animais normais
5.1 .1 - Efei to de doses crescentes do IA

sobre

a glicemia e digesto do amido

5.1 .2. - Efei to do IA sobre os nivei s seri cos de
glicose, insulina, icidos graxos e dige~
to do ami do
5.1 .3 - Efei to do IA, i sento de contaminaio
com
inibidor de tripsina, sobre a glicemia
e di ges to do ami do
5.1.4 - Efei to do IA sobre a secreo e produo
da a-amilase pancretica .. ... ..... .....
a) Na presena de contaminao com inibl
dor de tripsi~a na preparao do IA..
b) Na ausncia de contaminao com inibl
dor de tripsina na preparao do IA..
5.2 - Ao em animais diab~icos: efeito do IA
sobre
os niveis sricos de glicose, insulina,
cidos
graxos e digesto do amido.....................

6 - DISCUSSJX:O
6.1 - Efeito do IA sobre a digesto do amido e outros
parmetros relativos ao metabolismo
da glicose em animais normais
6.2 - IA e controle da a-amilase pancretica
6.3 - Efeito do IA em animais diabticos

7 - CONCLUSOES ..........................
8 - REFERtNCIAS BIBLIOGRJi:FICAS
- SUMMARY ............................
- LISTA DE FIGURAS E TABELAS...........................

1 - INTRODUAO

Dentre os inibidores enzimticos contidos naturalme

nos alimentos, os inibidores de proteases (tripsina e quimotr

sina) so amplamente citados pela literatura cientifica, ta

....
(60) como na sua aao
- b'10 1-'
no aspecto f ~
lSlco-qulmlco
oglca (25) ;
os inibidores de a-amilase (IA),

somente

nos

ultimas

15 a

receberam maior importncia por parte dos pesquisadores.

Os inibidores de a-ami1ase (IA)

comearam a ser ci

dos na literatura por BOWMAN(8), a partir de 1945,

que verif

cou a presena de um inibidor hidrosso1uve1 e termo1bel no f

jo.

Outros autores citam que as primeiras investigaes

so

os inibidores de a-ami1ase foram realizadas por CHRZASZCZ(12

Posteriormente, surgiram informaes sobre a prese

.
.
( 24 ) , tu b-ercu 1 os (2
de IA em outras fontes como: mlcrorganlsmos
.
(20,50) ; bem como es t u dos pre l
. (20,27,63) e 1 egumlnosas
cerealS
nares sobre os mecanismos de ao sobre enzimas

de

vrias

gens(64) .
Sob o aspecto estrutural desses

inibidores

verifi

mos que aqueles provenientes do trigo, j tem suas caracteris

cas fisico-quimicas relativamente elucidadas,
trutura primria estabe1ecida(39),
do feijo (IA), pouco ainda

mas

e sabido.

inclusive com

com relao ao inibi

tabelecidas(51,57,56) sendo tambm, estudados alguns aspectos

mecanismo de complexao entre a a-amilase e o

IA do feijo

melho,,(69).
Segundo LAJOLO e FINARDI(43) o IA do feijo preto
seolus vulgaris) foi isolado e purificado por
precipitao fracionada por etanol seguida

da

extrao

aqu

cromatografia

DEAE-celulose e Sephadex G-100, obtendo-se uma purificao de lS

zes com um rendimento de 32%.

Esses mesmos autores(44), verificaram que uma gli

proteina com peso molecular de 53.000 Daltons, ponto

isoel

co de 4,35 e coeficiente de sedimentao (S~O,w) de 4~35.

residuos de aucares foram encontrados manose, xilose,

gala

se e glicosamina e o IA mostrou-se resistente a protelise.

Tambem, foram realizados estudos sobre parmetros
ticos do IA(67) e sobre o efeito de modificaes quimicas na
-amilase pancretica, na formao do complexo com IA(6S).

Do ponto de vista nutricional existem controvrsias

bre eficincia do inibidor de a-amilase na digesto do amido

PULLS e KEUP(5S) utilizando o IA do trigo verificar

em humanos, ratos e caes diminuio na digesto do amido

lev

do em consequncia a uma hipoglicemia e hipoinsulinemia posdrial.

Tambem FRERICHS e col. (23) utilizando o mesmo

inib

verificaram efeito semelhante em humanos normais, obesos e

sos diabeticos.

Entretanto, devido a labilidade desse

do trigo tripsina e pepsina, acredita-se que seu uso

inib

clin

prolongado no tenha efeito significativo na digesto do amid

to.

A partir dai, sureriram que as modificaes adaptativas

pancreas seriam controladas pelo nivel de a-amilase do intest

GRANUN e ESKELANO(27) verificaram efeitos
aos de MACRI(47)

semelhan

com relao ao crescimento de galinhas, mas

tecidos pancreticos opostamente apresentaram-se com caracter

ticas normais.
J, FOLSCH e cals. (22) utilizando IA de origem
biana, verificaram, em ratos, efeitos contrrios aos

de

. '
.
e co 1 s. (49) o b servaram uma d"lmlnulao
no peso d
os anlmalS

mic

MA
e

conteudo de a-amilase no pncreas, sugerindo que o mecanismo

secreao

da a-amilase no seria regulado por um

mecanismo

feedback negativo, como sugerido por esses autores.

Os inibidores de origem microbiana,

tambm foram

lizados em humanos normais, diabticos e obesos tendo-se evid

ciado que so capazes de causar reduo na glicemia
d 1' a 1(16,21) .

ps-pr

Com relao ao IA do feijo JAFFE e LETTE(36) obtive

i ndi retamente i nformaes sobre sua ao "i n vi tro

11

"i n vi

observando que os animais que receberam variedades de feijo

pouca hemaglutinina, tambm apresentaram uma diminuio no cr

cimento, sugerindo que esse efeito poderia ser decorrente da
sena do IA e de inibidor de tripsina (IT) na amostra.

J, SAVAIANO e cols.(61) afirmaram que o IA do "fei

vermelho"

(~~seolus

vulgaris), no afeta a digesto

do

am

pois em ensaios crnicos com ratos este inibidor no alterou

to do amido e diminuio na glicemia ps-pandrial em

ratos

receberam o IA com amido por sonda gstrica; alem disso

em

saios semi-crnicos e, em condies de restrio calrica,

E oportuno,

diminuio na taxa de crescimento dos animais.

rir que esse

inibidor

isolado

por LAJOLO e cols. e resist

a proteases(19).
Com base na literatura j citada sobre a ao

"in

tro,,(51) e "in vivo,,(36) do IA, nos EUA, foram lanados no

do cerca de 100 diferentes tipos de preparaes base de f
denominadas "starch blockers", as quais, teriam efeito de
ar a digesto do amido e consequentemente causar

emagrecim

Em 1983, vrios autores(7,10,26,32) verificaram q

"starch blockers" comerciais no tinham qualquer efeito sob

digesto e absoro do amido em humanos.

Esses autores sug

que esta ineficincia poderia ser decorrente

de alguns fato

tais como: o pncreas, geralmente, secreta uma quantidade em

cesso de a-amilase para digerir o amido,

ou o tempo de

in

ao do IA e enzima no e suficiente para bloquear a enzima,

bem foi considerada a possibilidade de digesto e inativao

se inibidor pelas proteases pancretice- bem como pela peps

Ent r e ta nto, f o i obs e r va do po r e ns a i os" i n vit ro " (2

que esses "starch blockers" continham baixa concentrao

teores elevados de inibidores de proteases, lectinas e outra

teinas

no permitindo portanto concluses

eficincia ou no.

seguras

sobre

gados ao metabolismo da glicose.

2 - OBJETIVOS

Estudar o efeito do inibidor de a-amilase,

isolado

feijo (Phaseolus vulgaris L.), sobre a digesto do amido e so

parmetros do metabolismo

da

qlicose

em animais normais

diabeticos, bem como verificar seu efeito sobre a secreo e

duo de a-amilase pancretica.

3 - MATERIAL

3.1 - Feijo

Estudamos sementes de feijo

L.~

da variedade brasileira

Rico-23~

preto~

Phaseolus vulg

provenientes do

Insti

Agronmico de Campinas - SP.

3.2 - Amilase salivar

A a-amilase (1
foi obtida de saliva
nada com acetona.

~4-a-D-glucan

humana~

glucanohydrolase EC3.2.1

purificada por precipitao

fra

O precipitado foi dissolvido em tampo

fo

to 0,1 M pH 6,9 e armazenado a -laoc ate o momento do uso.

3.3 - Reagentes

Albumina serica bovina, tripsina, glicose-oxidase,

roxidase, BAPA
cina,

~cido

3,5

(Benzoilarginina-para-Nitroanilida)~

di-Nitrossalicilico~

Streptoz

B-mercaptoetanol foram

tidos da Sigma Chemical Company; DEAE-celulose da Whatman

ted; os demais reagentes utilizados foram de grau analitico.

Foram utilizados ratos machos (Rattus norvegicus, v

albinus), da linhagem "Wistar

ll

obtidos a partir de

colnias

tidas no bioterio da Faculdade de Cincias Farmacuticas -

com raes comerciais.

3.5 - Rao para manuteno de animais diabeticos

A rao utilizada continha:

70),
ca,

8% leo de soja,

4% mistura salina,

1% fibra (microcel),

q.s.p. 100%.

25% proteina (Proteima

1% mistura vitam

3% metionina e farinha

de

mand

As misturas salina e vitaminica foram preparadas

forme as necessidades de ratos( 35).

A composio por anlise foi a seguinte: umidade (1

proteina (24,1%), extrato etereo (8,7%),

cinza

(11,8%) e carboidratos (41,2%) por diferena.

(4,2%),

fi

4 - MtTODOS

4.1 - Fisico-Qu;micos e Bioqu;micos

4.1.1 - Obteno do inibidor de a-amilase

Utilizamos dois tipos de preparaes de IA.

Uma primeira foi obtida essencialmente como .desc

- IIDEAEII-celulose
- para re
por LAJOLO (42) ate- a fraao
Porem
ll

zir o teor de contaminao com o inibidor de tripsina incluiu

uma fase adicional intermediria de purificao com celite: b

tonite segundo HANOVAR(33).
guinte:
ao (pH

O esquema final adotado foi

extrao aquosa (20% de farinha de feijo), acidific

=

5,0) e aquecimento (70 0 e por 15 min.).

Posteriorme

foi adicionada uma mistura de celite :bentonite (1:1), na

pro

ao de 10% do peso inicial da farinha, mantendo-se a mistura

agitao por 4 horas a 6 0 e; seguindo-se de centrifugao a

x g por 20 min, precipitao fracionada com etanol (50-70% de

turao) e separao em DEAE-celulose.

A frao ativa foi c

tada, precipitada com etanol at 70% de saturao, centrifuga

a 10.400 x g por 30 min e o IA assim obtido ressuspenso em

para ser administrado aos animais.

Aps verificar que mesmo teores residuais de

IT

fluiam nos resultados biolgicos, resolvemos introduzir uma segu

ta o perfil eletroforetico do IA, indicando que pontes de dis

- sao
- lmportantes
.
feto nao
na sua estrutura (19) . Esse reagente
rem

e capaz de dissociar pontes de dissulfetos essenciais

a manuteno da atividade do inibidor de tripsina(37).

Nessa segunda fase procedeu-se

da seguinte

a frao coletada ap5s passagem em OEAE-celulose foi

man

tampon

com fosfato O,lM pH=6,9, incubada com 8-mercaptoetanol (1%)

30 min a 37 0 C e posteriormente dialisada por 24 horas contra
destilada.

Na primeira preparao o tratamento com celite: ben

prepara

nite reduziu de mais de 80% a contaminao de IT na

de IA.

Por outro lado, o tratamento adicional com

nol no alterou o rendimento

do

8-mercapto

IA mas reduziu em 99,9% a at

dade do IT.

Na Tabela 1 so mostrados esses resultados indicado

ra uma dose de 80 UIA (que foi a dose comumente usada nas ex

encias com animais).

4.1.2 - Atividade da a-amilase

Foi determinada atravs da reao com cido

3,5 d

trossalicilico e amido como substrato, segundo BERNFELO(6) ad

tado por LAJOLO(42); sendo que uma Unidade Internacional

de

-amilase (UA) equivale a liberao de 1 )Jmol de maltose/min a

Tabela

1 - Efeito do tratamento com celite/b

dor de tripsina.

Inibidor

Protei

mg

mg

40

336

41

42

40

28

Frao

Extrato Bruto Aquoso

DEAE-Celulose**
c/Cel. Bent.

S-mercaptoetanol*
c/Cel. Bent.

* frao utilizada nas experincias de itens

** frao utilizada nas demais experincias.

4.1.3 - Atividade do inibidor de a-amilase

Empregou-se o mtodo adaptado por LAJOLO(42).

Esta

leceu-se que uma unidade inibidora de a-amilase (UIA) corresp

de a inibio total de 10 Unidades Internacionais de a-amilas

(UA), aps 20 minutos de incubao a 37 0 C
0,02M

pH

em

tampo

fosf

6,9.

4.1.4 - Atividade proteolitica no intestino

Foi determinada, usando-se o mtodo de KAKADE (38),

o BAPA como substrato. Uma unidade de tripsina (UT)

corres~o

ao aumento de 0,01 unidades de absorbancia em 410 nm/10 ml

mistura de reao.

A atividade proteolitica no intestino foi

pressa como atividade de tripsina total presente no intestino

gado (UT/intestino).

4.1.5 - Atividade do inibidor de tripsina

Para avaliao da atividade anti-trptica na

de IA, verificamos a reduo da velocidade de ao

da

amo

trips

4.1.6 - Determinao da proteina

Usou-se sempre o metodo
de LOWRY (48) .

O teor de pr

na no pncreas foi expresso por grama de tecido (mg/g pncre

e no intestino como proteina total presente no intestino

de

do (mg/intestino).
4.1.7 - Determinao da glicose
A glicose no soro e urina foi determinada com

glic

oxidase e peroxidase, segundo a tcnica descrita por BERGMEYER

BERNT( 5 ).

4.1.8 - Determinao do amido residual

O amido residual no estmago e intestino foi dosado

la tecnica de BERNFELD(6 ), aps tratamento descrito por
LO(42).

A quantidade de amido foi calculada multiplicando-se

concentrao de gl icose por 0,9: considerando-se % de recupera

da tecnica.

4.1.9 - Determinao da insulina

A insulina serica foi determinada pelo mtodo de ra

imunoensaio, segundo MORGAN e LAZARO~' (52) modificado por PUPO
REIRO( 59).

Foram avaliados pelo metodo colorimetrico descrito

FALHOLT(17) e referidos no texto simplesmente como cidos grax

4.2 - Biolgicos: ensaios com animais

4.2.1 - Esquema experimental

Os ensaios com ratos foram de curta durao (0,5

4 horas) e realizados com animais pesando por volta de 100g (

mais) ou de 300 g (diabeticos).

Antes dos ensaios

os

anim

foram alojados em gaiolas individuais e mantidos em jejum

18 horas, recebendo somente gua "ad libitum".

Ento, amido

zinho (180 mg amido em 2 ml soluo fisiolgica/100g) ou

am

com doses variveis de IA(10 at 80 UIA/100g) foram administradas

sonda gstrica.

Aps tempos variveis de 0,5; 1; 2; 3 at 4

ras, conforme a experiencia, amostras de sangue e rgos

obtidos conforme descrito respectivamente nos itens

fo

4.2.2

4.2.3.
Em todos os experimentos constituiu-se um grupo

"

jum" que recebeu por sonda apenas soluo fisiolgica, os

va

res obtidos com esse grupo foram tomados como tempo "zero".

em aliquotas de 100 ]J1 da veia caudal,

e o soro obtido

apos

precipitao das proteinas com cido perc1rico 0,34N e centri

gado a 278 x g por 15 mino

Para determinao de insulina e cidos graxos - o s

gue foi obtido por puno cardica e
lo

aps a

retrao do coa

foi centrifugado a 495 x g por 20 mino

4.2.3 - Obteno dos orgaos

Com os animais anestesiados por eter,

retirado e limpo de tecido adiposo.
go (esfago - pi10ro) foram

As

o pancreas

extremidades do estm

amarradas e o rgo removido jun

mente com o intestino delgado.

O conteudo do estmago ou do

testino delgado foram coletados atraves de lavagens com

fosfato 0,02M pH

= 6,9 gelado.

tam

Aps a remoo os rgos e te

dos foram congelados em nitrognio liquido e armazenados a -2

ate anlise.

4.2.4 - Preparao dos homogenatos de pncreas, int

tino e estmago

O pncreas foi descongelado, homogeneizado (ultra t

por 1 min) em tampo fosfato 0,02M pH

6,9 gelado, centrifug

do sob refrigerao a 1110 x g por 20 min;

terminou-se a atividade da a-amilase,
proteina e, no precipitado

no sobrenadamente

da tripsina

o amido residual.

e o

teor

O mesmo tratam

to foi realizado no estmago sendo determinado o amido

resid

no precipitado.

4.2.5 - Induo da diabetes

A diabetes foi induzida por Streptozotocina
da pela veia caudal na proporo de

admini

45 mg/Kg peso corporal,

gundo a tecnica descrita por CHORVATHOVA(ll).

mortalidade os animais receberam 4U

Para reduzir

insulina/Kg

peso corp

nos trs primeiros dias aps a injeo.

Ate o momento do experimento

os

animais receberam

dieta descrita no item 3.5.

Aps o 89 dia da induo j apresentavam caracteri

cas do desenvolvimento da diabetes, como se pode ver na Tabe

(valor medio de 20 animais por grupo).
4.3 - Anlise estatstica
A comparao entre medias foi realizada
te IIt

ll

student, segundo FEOERE(18).

Nas tabelas e figuras

resultados esto representados com os respectivos

dro.

usando-se

desvio-p

Tabela 2 - Efeito da Streptozotocina (4,5 rng/100g peso) na in

o de diabetes*

Grupo

Diabticos

Controle

331 :t 46 a

75 :t 5 b

+
1,5-0,6
105 :t 37 a

7 :t 3 b

Ing. Liquido (ml/2 4 hs'

123 :t 44 a

b
31 :t 5

Cons. Rao (g/24hs)

25 :t 7a
+
-28 - 15

16 :t 4 b

Glicemia (mg

%)

Glicose Urina (g/24hs)

Vo

I.

Uri na (ml /24hs)

Aumento de peso ( 9 )
Insulina (IlV/rnl)

"Ac. Graxos (m Mol/l)

Ativ. a-amilase pa ncretica (UA/g pncreas)

* oltavo dia aps a injeo

a f b (P

0,001)

+14 :t 5

42 :t l6 a

70 :t Sb

0,864 :t O,10 a

0,766 :t 0,15

+
a
180 - 29

1625 :t 266 b

5 - RESULTADOS

5.1 - Ao em animais normais

Experincias com animais normais foram realizadas p

meiramente com o IA tratado at DEAE-celulose, contendo 13%
;nibidor de tripsina (IT); aps verificarmos que essa
o interferia no conteudo das proteases presentes

contam

no intest

delgado passamos a utilizar o IA tratado ate s-mercaptoetano

qual continha somente

0,1% de IT.

5.1.1 - Efeito de doses crescentes do IA sobre a gl

mia e digesto do amido

Os resultados dos experimentos,

visando verificar

efeito de doses crescentes do IA sobre a digesto do amido,

to representados nas Tabelas 3 e 4; os animais receberam, at

ves de sonda gstrica quatro doses de inibidor

la;

20;

60 UIA/100g peso corporal,acrescidas de 180 mg amido/100g

40

pe

O sangue foi retirado da veia caudal aps O; 1/2, 1,2 e 3 hora

administrao e na 3a. hora os animais foram sacrificados.
trato de inibidor administrado corresponde frao

DEAE~cel

se (Tabela 1) contendo respectivamente 5,2; 10,3; 21,0 e 31,0

IA nas doses de la; 20; 40 e 60 UIA.
ma i s .

Cada grupo continha

Tabela 3

Grupo

- Efeito de doses crescentes

Amido
Admin.
(mg)

Peso
(g)

0,

233

89 -

ElO

123 ~

221

68

E20

124 ~

223

52 ~

E40

138 ~

248

57 ~

E60

131 ~

235

55 ~

Controle
a

130 ~ 10

Controle

(Amido)

b f c f d

(P

E
~

Experimental

0,05)

O grupo jejum apresentou um valor medi

Tabela 4 - Efeito de doses crescentes de inibi

t r a t o ga s t ro - i nt e s t i na 1 .
Amido
Ingerido
(mg)

Peso
Grupo
(g)
Jejum

116

:!:

Controle

130

:!:

ElO

123

E20

Tempo
(h)

10

233

:!:

221

124

:!:

223

E40

138

:!:

248

E60

131

235

Controle
a f b

(Amido)

(p: 0,001)

* % do ingerido

Experimental

(10,

Neste experimento, foram utilizadas 80 UIA

acrescid

de amido (180 mg/100g peso corporal), sendo os animais sacrifi

cados em diferentes tempos aps a administrao
4 horas).

(O; 1/2; 1; 2

O extrato de inibidor administrado corresponde fr

ao DEAE-ce1u10se (Tabela 1) contendo 41 mg IA na dose de 80 U

As Figuras 1, 2, 3 e a Tabela 5 demonstram os

efeit

do impendimento da digesto do amido, proporcionados pelo IA,

bre o metabolismo da glicose.

Cada grupo continha 6 animais.

5.1.3 - Efeito do IA, isento de contaminao com ini

dor de tripsina, sobre a glicemia

digest

do amido

Neste experimento foram utilizados 80 UIA

acrescid

de amido (180 mg/l00g peso corporal), sendo os animais

sacrifi

dos em tempos diferentes aps a admi ni strao (O, 1, 2 e 4 horas

O extrato de inibidor administrado corresponde frao

s-merc

toetano1 (Tabela 1) conteudo 40 mg de IA na dose de 80 UIA.

Nas Tabelas 6 e 7 verificamos o efeito do inibidor s

bre a glicemia e a digesto do amido.
mais.

~ada

grupo continha 6 an

....
o

o.

120 I-

....

O
O

""
100r
~
C'l

....

.-

. Controle
Experimental

VI

CL

o'
VI

CL

'"'
a

-.u...

ao

'11)
li')
11)

'"o

<)

60

40

Tempo Choras)

Controle (Amido)

Experimental (80 UIA com Amido)

Os resultados esto representados com os respectivos desvio-padro.

rica, aps a

administrao de amido

por sonda gs

trica.

.-

50~

o
o.
O

-""

E
::::>
::J

o
'::

o
o.

.-

VI
o...

.... Controle

O
T

VI

.0.

40, /1

'~

Experimental

.
!

V')

c:
--

::J

'"c:
20

Tempo <horas)

Controle (Amido)

Experimental (80 UIA com Amido)

Os resultados esto representados com os respectivos desvio-padro.

de cidos graxos, aps

a administrao de amido po

sonda gstrica.

1.400~

1.200

,..

VI

Controle
Experimental

,-..

CT

UJ
:J

'-'

lOOO

'"
o
c
)(

t:>

0.600

Tempo (horas)

Controle (Amido)

Experimental (80 UIA com Amido)

Os resultados esto representados com os respectl

vos desvio-padro.

Tabela 5 - Efeito do inibidor de

na 1 .

a-amilase sob

-------------

Peso

Amido
Ingerido
(mg)

Grupo
(g)

Tempo

(h)

101

Cl / 2

93

11

167

1/2

El / 2
Cl

95 :!: 15

171

1/2

93

14

167

El
C2

100

15

180

101 :!: 14

182

E2
C4

101 +-

182

90 :t 17

162

94 :t 14

169

Jejum

E4

2
1

._--_._-

Controle
a

t-

(Amido)
(P

:~

* % do ingerido

0,001)

Experimental

(80 U

Tabela 6 - Efeito do inibidor de a-am

a glicemia.

G r u p o
Oh
Controle

47 ~ 7

E(com amido)

47 ~ 7

E(sem amido)

47 ~ 7

Controle

(Amido)

a f b

(P

0,001)

Experiment

Tabela 7 - Efeito do inibidQr de a-amilase,

to do amido no trato gastro -intes

Peso

Grupo

( g)

Jejum

94

AmidQ
Ingerido
(mg)

Tempo
(h)

Es

Cl
El

88 ! 5

158

90

162

10

C2
E2

87

2
5

157

160

88 ! 4

158

160

89

C4
E4

c=

89

Controle

a ; b

(P

(Amido)

E = Experimental

0,001)

* % do i ngeri do

Os grupos experimental com 80 UIA sem amido ap

a) Na presena de contaminao com inibidor de tripsina

preparao do IA

As determinaes da atividade

a-pancretica,

tena por grama de pncreas (Tabela 8); da

da pro

atividade da a-amil

se, protena total e atividade da tripsina presente no intestino

(Tabela 9 e 10) foram realizadas nos grupos de animais que rece

beram 80 UIA (item 5.1.2), sendo que o extrato de IA administra

do correspondeu frao

DEAE- celulose (Tabela 1).

b) Na ausncia de contaminao com inibidor de tripsina

preparao do IA

As determinaes da atividade

a-amilase

pancre~ti

ca, da pr ote; na por gr a ma de p nc r e as (T a bel a 11); da a t i vi da de

a-ami1ase, protena total e atividade da tripsina presente no i

testino (Tabela 12 e 13) foram real izadas nos grupos de

animai

que receberam 80 UIA (item 5.1.3), sendo que o extrato de IA ad

ministrado correspondeu frao s-mercaptoetano1 (Tabela 1).

Tabela 8 - Efeito do inibidor de a-amilase so

na no pancreas.
At i v. a - a mil a se (U A/ 9 pnc re as)
Grupo
Oh

1h

2h

Controle

224 51

164 43 ~

204 43

216

Experimental

224 51

190 56 b

205 68

195

Controle
a f b (P

(Amido)
,<

0,05)

Experimental
G f- d (P ~ 0,01)

(80 UIA c

Tabela 9 - Efetto do inibidor de a-amilase p

intestino.

Ativ. a-amilase total (UA/in

Grupo

Oh

1h

2h

Controle

265 ! 7

390! 73 a

413! 24 a

Experimenta1

265 ! 7

75"!: 7 b

538:!: 83 c

Controle
a f b (P

Experimental

(Amido)
~

0,001)

I- c (P

0,02)

(80 UIA

Tabela 10 - Efeito do inibidor de a-am

intestino.
Ativ.

Tripsina

Grupo
Oh

Controle

2002 ! 671

Experimental

2002 :t 671

Controle

(Amido)

a f b

(P

0,001)

1951

240

Experimental

Tabela 11 - Efeito do inibidor de a-amilase

da a-amilase e teor de protelna n
Ativ. a-amilase (UA/g Pncreas)
Grupo

Oh

1h

2h

Controle

224 ! 51

164

-t 43 a

204 ~ 43 a

E{com amido)

224 ! 51

197 ! 65 b

178 ~ 46 b

E{sem amido)

224 ! 51

198 ~ 23 b

188 ~ 20 b

Controle
a f b (P

(Amido)
~

0,04)

E = Experimental

(80

Tabela 12 - Efeito do inibidor de a-amilase, i

a-amilase pancretica e sobre pro

Ativ. a-amilase Total (UA/lntest

Grupo
Oh

1h

2h

Controle

265 ~ 7

390 ~ 73 a-

413 ~ 24 a

291

E(com amido)

265 ~ 7

51 ~ 9 b

165 ~ 47 b

322

E(sem amido)

265 ~ 7

87 ~ 23 b

102 ~ 31 b

226

Controle
a f b (P

(Amido)
,<

0,001)

Experimental

(80

J~be1a

13 - Efeito do inibidor de a-amila

vidade da tripsina no intesti

Ativ

Grupo
Oh

Controle

2002 ::t 671

1951

ECcom amido)

2002 ::t 671

1978

E(sem amido)

2002 ::t 671

2080

Controle

(Amido)

a f b

(P

0,04)

Experimental

5.2 - Ao em animais diabticos: efeito do IA sobre os

veis sricos de glicose, insulina, cidos graxos e d

gesto do amido

diabet~foi

induzida com Streptozotocina,

com

um

eficcia de 80% no mtodo, sendo que aps o 89 dia da induo

animais apresentavam alteraes decorrentes ao desenvolvimento
diabetes: hiperglicemia, hipoinsu1inemia, glicosuria, po1iuria
polidpsia, polifagia e diminuio no peso corporal (Tabela 2).
Os animais com cerca de 300-350 mg%

de glicemia fora

agrupados, permanecendo 16 horas em jejum ate a administrao

inibidor, 80 UIA acrescidos de amido (180 mg/lOOg peso corpora
e a ps 1 e 4 ho r a s f o r am:s ac r i f i cados .

O e xt r a t o de i ni bi do r a

ministrado corresponde a frao DEAE-ce1u10se (Tabela 1).

Na Figura 4 e nas Tabelas 14 e 15

demonstramos

efeitos do impedimento da digesto do amido, proporcionados pe

IA, sobre o metabolismo

da

glicose

Cada grupo continha 8 animais.

em animais diabticos

sonda gstrica.

"O~

.
Q

400

I
360~

Ao

Contrate
Experimental

o
o

....

c:i

o
o

V,

a.

~
(,,)

--

VI
a.

-. 320
cn

GJ
(/)

o(,,)

- 280

'-

240

Te-po l horas1

Controle (Amido)
Os resultados
pectivos

Experi menta 1 (80 UIA com Amido)

esto representados com os

des~;u ;~dro.

res-

T0bela 14 - Efeito do inibidor de a-ami1ase s

Peso
(g)

( ru po

Amido
Ingerido
(mg)

Tempo
( h)

221 :t 15

C1

214:t 12

385

E1

211 :t 19

380

C/I

199 :t 13

358

L4

202 :t 16

364

-----

C = Controle
a f b

(P

_.

(Amido)
0,001)

* % do i ngeri do

E = Experimental

~ 1

Controle

26

Experimental

26 "!: 10

Controle

a! b

24

Experimental (80

(Amido)

(P ~ 0,01)

29

! d

(P

0,001

6 -

DISCUSS~O

6.1

- Efeito do

IA sobre a digesto do amido

metros relativos ao metabolismo' da

e outros par
glicose

em an

mais normais

Numa primeira experiencia avaliamos

efeito de

do

ses crescentes do IA sobre a digesto do amido. Pudemos verifica

(Tabela 3 e Figura 5) que qualquer uma das quatro doses uti 1 i zadas,
um periodo de 30 minutos, ap6s a administrao, tem
valente de retardar o aumento da glicemia serica,
proporcional dose administrada.

o efeito equ
retardo

Deve-se ressaltar

aumento, de qualquer forma, nunca atinge o nvel

po

que

esse
ess

elevado obtido

aps 1 hora para o grupo controle que recebeu somente amido. Es

ses fatos mostram que h uma reduo na quantidade total de gli
cose que atinge o compartimento plasmtico.
Por outro lado (vide Tabela 4 e Figura 6),

a nivel d

intestino observou-se, aps 3 horas, um aumento na percentagem d

amido presente, tambem proporcional quantidade de

IA adminis

trada, mostrando a sua eficincia no bloqueio da digesto

e ex

plicando a reduo da glicemia.

Como mesmo a dose mais alta de 60 UIA no

foi suficien

para impedir totalmente o aumento da glicemia (Tabela 3 e Figura 5

realizamos experincia adicional com uma dose maior, de 80 UIA, e

nesse caso, conseguimos uma reduo na glicemia eficaz at o fi

120

~ 100
Clt

...
~

'

uo

C'

Q.5

2
Tempo (horas)

A Controle (Amido)

10 UIA;

*20 UIA;

Experimental

A 40 UI.t\

ou

(Amido

com

.60 UIA)

aps 3 horas da

administrao do amido por sonda

trica.

50

lo
,.. 40

til

.~

30 ~

lIJ

ta

.--

11:

'a

20 ~
~

10I

nc

E 10

E20

E 40

E 60

Concentraco de I ni b idor CUIA)

c = Controle
20 UIA;

(Amido)

40 UIA ou

E = Experimental (Amido com 10 UIA;

60 UIA).

mento plasmtico.

Efeitos semelhantes sobre o alisamento da curva gli

mica foram encontrados por
relao efeito x dose.
este autor obteve,

LAJOLO(42), que

porem, no estudo

Utilizando IA da mesma variedade de fei

com 11,5 mg de IA,

55%, o que corresponde

uma rea diferencial

nossa dose de 20 UIA

(cerca de 10,3

IA), a qual causou uma reduo de 61% na glicose serica.

A relao dose x efeito foi estudada tambm por PULLS

KEUP(58) utilizando, porem, inibidor de 'triqo. Elesverificaram efeitos

reduo da glicemia com 9, 36 e 144 mg IA/250 mg de amido,

mesmo a maior dose no foi to efetiva como a nossa de 80 UIA

que contem apenas 40 mg IA/180 mg amido.

Assim, parece que o

do trigo menos eficaz no bloqueio da digesto do amido pelo

nos "i n v i vo

11

Quando se administrou apenas amido (grupo controle)

rificamos que, aps uma hora (Tabela 5), o amido residual no
to digestivo era apenas de cerca de 9% sendo,
que totalmente digerido nesse perodo.

portanto,

Porem,

qu

na presena

80 UIA encontramos ap6s 1 e 4 horas, respectivamente, cerca

40

24%

0~

sa um retardo

amido

residual,

indicando

que

significativo na digesto desse carboidrato

IA

(Fi

ra 7).

Verificamos tambem, por outro lado, um retardo na velo

dade de esvaziamento gstrico, sugerido pelo teor de amido

resid

no estmago que, no grupo experimental, foi bastante superior ao do

~Controle

100

Experimental

80
"....

C'

E
'J

-C

::::l

\J

60

."

Q.l

IX

<I(

40l

20

o'
O

....

o
o.
o
VI

\
!

'T
3
Tempo

C:ontrole (Amido)

(horas)

Experimental

(80UIA com Amido)

teina no estmago consequente

42 mg de protena) (Tabela 1).

administrao do IA
Essa

hiptese

parte confirmada pelos dados obtidos quando

os

(cerca

pelo menos

animais rece

ram o IA tratado com s-mercaptoetanol; pois nesse caso o teor de

teina foi menor (de 28 mg) (Tabela 1) e o

retardo foi pratic

mente inexistente (Tabela 7).

A segunda explicao pode estar relacionada
a da contaminao, na preparao do IA, com inibidor
na que no caso da segunda experincia foi eliminado
tratada com s-mercaptoetanol)

pre

de

tri

(prepara

(Tabela 1).

Nos inclinamos mais pela segunda hiptese pensando

refratariedade digesto do inibidor de tripsina, ainda mais que a di

rena no teor de protena presente no estmago dos animais
duas experincias foi de apenas 20 mg.
LAJOLO(42) sugeriu que a

reduo da glicemia

caus

pela ingesto de IA com amido devida realmente a um impedim

to na digesto do amido e no a um efeito inespeclfico, ou
duo na absoro de glicose;

mas a possibilidade do IA alte

a velocidade do trnsito qastro-intestinal no deve ser totalm

te descartada.
Assim, parece confirmado que o IA de feijo

quando

sente na luz intestinal diminui a velocidade da digesto do a

do,

atrav~s

do impedimento da sua hidr5lise enzimitica, causa

em consequncia, uma reduo na glicemia p5s-prandial e que e

efeito proporcional dose de inibidor administrada para

residuos de NH 2 e da atividade inibidora da a-amilase em p

sena de proteases (tripsina, quimotripsina, pepsina e pronas
embora ANDRIOLO(3) tenha verificado inativao do IA

do

fei

em pH inferiores a 3.
Pudemos observar que o IA do feijo no digerido
vivo", uma vez que, obtivemos significativa recuperao

do

pr es e nte no conteu do i nt e s ti na 1 de a ni ma i s que r e ce be r am i ni b

com ou sem

ami do.

o tratamento consistiu na incubao

de

tratos intestinais com EDTA (10 mg) e tripsina (0,04 mg) a

por 30 mino e posterior adio de clcio (1,1 mg), centrifuga

3020 x 9 por 20 min e dilise por 16 horas contra gua,segu

do-se o doseamento do IA.
A ao "in vivo" do IA foi confirmada tambem, atravs de
tros parmetros relacionados com o metabolismo da glicose.

Em nossos experimentos pudemos observar que o IA in

indiretamente na liberao de insulina (Figura 2) sendo esse e

to, mais uma vez, decorrente do comprometimento da

digesto

amido e reduo da glicemia ps-prandial (resultados obtidos

animais diabeticos sero discutidos adiante).

Por outro lado, verificamos altos nlveis sanguineos

cidos graxos (Figura 3)

nos animais que receberam o IA

dec

rentes da baixa glicemia levando consequentemente a uma maior

bilizao de lipides do tecido adiposo.
Esses efeitos do IA sobre

tais

parmetros so de

teresse no caso de individuos obesos, uma vez que, esses

poss

Assim, a reduo da digesto do amido e da hipoglic

mia ps-prandial, causada pelo IA, so
manter baixos niveis de insulina e para

suficientes

ainda

mobilizao dos

graxos do tecido adiposo fazendo pensar em possiveis

ci

aplica

dessa substncia.

6.2 - IA e controle da a-amilase pancretica

Com os resultados expostos ate o momento,

que o IA interfere na digesto do amido e que tal

verificam

efeito par

ser decorrente do comprometimento da a-amilase com o IA a

ni

intestinal.
Sabe-se tambem, h vrios anos, que diferentes

ti

de dietas proporcionam uma adaptao das enzimas pancreticas

lativas ao seu componente predominante.

Porem, no se tem ai

conhecimento preciso de qual o mecanismo envolvido capaz de

iir mudanas na sintese e ou secreo dessas enzimas, havendo

respeito algumas teorias(13).

Em vista disso, nos propusemos a explorar nossos re

tados com o inibidor de a-amilase, luz dessas teorias.

Na primeira experiencia, quando administramos aos a

mais a preparao de IA ainda contaminado com inibidor de tri

na (IT) (Tabela 9), os resultados referentes secreo da alase nos induziram a pensar em algum controle semelhante ao

presena de IA ou de amido residual no digerido.

Essa idia foi abandonada ao verificarmos que a qua

dade de tripsina presente na luz intestinal estava substancia

mente reduzida (Tabela 10), possivelmente devido
com o IT.

complexa

Com o abaixamento do nivel de tripsina ocorre, com

sabido a liberao de Colecistoquimina-Pancreozimina que

no pncreas causa a liberao inespecifica de enzimas

agi

pancre

cas contidas nos grnulos de zimognios(40) e, estimula tambm

sintese de proteases(30)(62).
Apesar de comprometidos pela presena

de IT na pre

raao de IA, esses resultados foram apresentados para

aler

com relao a necessidade de eliminao completa desse

inibi

nas experincias que procuram estudar mecanismos digestivos

proteinas vegetais.

Quando utilizamos o IA tratado com s-mercaptoetanol

tratamento que resultou na eliminao de 99,9% do IT (Tabela
verificamos que, contrariamente aos resultados anteriores, o

or de tripsina no intestino era elevado indicando a no inter

rncia pela contaminao de IT (Tabela 13).
contrariamente aos resultados da

experinci~

Nesse caso

tamb

anterior o teor

a-amilase intestinal no se modificou (Tabela 12).

Justific

do as suspeistas discutidas anteriormente.

O grupo que recebeu s IA e o grupo que recebeu IA

amido tambem apresentaram semelhantes teores de a-amilase int

tinal (Tabela 12).

Como o teor de glicose sanguinea (Tabela

do e no no outro (4,3 mg) aps 4 horas,

pode-se concluir

pelo menos em ensaios de curta durao no parece haver

le de secreo-produo da amilase a nvel intestinal.

cont
Se

vesse, o teor de a-amilase no grupo que tinha amido residual

intestino deveria ser maior (Tabela 7).

Aparentemente como

rido por NAIN e KARE(54) a secreo da a-amilase poderia ser

corrente de um estimulo inespecfico causado pela presena
alimento no trato gastro-intestinal.

Se de um lado a liberao parece ser devida a estim

inespecifico, pelo menos a sintese parece ser controlada

pe
~
, d e g l'lcose serlca
-o (1,15,31,46) e lnsu
,
l'lna (55,65,66) sr
nlvelS
ou pela glicose que atinge o pncreas(2,9) decorrentes da

di

to do amido ao atingir o intestino; resultados obtidos com o

parecem confirmar parte dessas teorias.

De fato, analisando

(Tabela 8) vemos que a nivel do pncreas houve no grupo

cont

le um aumento na atividade de a- amilase no tempo de 2 horas e

lelamente aumento da glicose e insulina serica desses mesmos anim

(1 hora)(Figura 1 e 2).
No grupo onde a digesto foi bloqueada pelo IA, e
houve absoro de glicose a atividade da amilase

permaneceu c

tante.

Os baixos teores de protena no pancreas apos

da ingesto do IA (Tabela 8) podem ser explicados atravs da
taminao com IT na amostra de IA, essa liberao

de

prote

seria estimulada pela complexao da tripsina com o IT, fato

tese de proteases, uma vez que a atividade da a-amilase perma

ceu constante.

J no experimento sem contaminao com

inibi

de tripsina no IA no se verificou qualquer alterao na libe

o de proteinas pelo pncreas (Tabela 11).

Verificamos ate o momento, atravs de ensaios de cu

durao, que o IA do feijo interfere na hidrlise do amido
afetar a secreo da a-amilase nem a slntese dessa enzima.
nossos dados porm, no podem ser comparados com os

de

auto

que baseados em ensaios crnicos sugeriram outros mecanismos

bre a modulao da secreo e sintese da a-amilase no pncrea

t o caso dos resultados obtidos por :vlACRI e cols.(49) que ao

ministrarem IA do trigo, por 28 dias,em galinhas, verificaram

mento na atividade da a-amilase pancretica e hipertrofia no

creas, sugerindo que o nivel da a-amilase no intestino contro

ria sua sintese e secreo de forma semelhante ao mecanismo
proteases.

No entanto, FOL5H e cols. (22) alimentando ratos

IA de origem microbiana, aps 20 ou 60 dias, observaram dimin

o no conteudo da a-amilase pancretica sem qualquer

altera

histolgica no pncreas, acreditando que a secreo e a

sTn

da a-amilase seriam controladas por um mecanismo diferente

tripsina~ o mesmo foi concluido por IHSE & LILJA(34) estudando

secreao da a-amilase em porcos com fstula pancretica.
Portanto, com o uso do IA a curto prazo foi
verifir~r

que o mecanismo que

da a-amilase

pancre~tica

control~

a liberao

e diferente do da tripsina.

possi

produ

Sugeri

6.3 - Efeito do IA em animais diabticos

Em animais diabticos pudemos verificar um

alisamen

na curva glicmica (Figura 4), onde a rea diferencial

entre

curvas do grupo controle e experimental foi de praticamente 10

Portanto,: eomo decorrncia do impedimento- da digesto do

ami

nenhuma glicose atingiu o compartimento plasmtico.

~

t oportuno comentar que o teor de amilase

em ratos diabeticos

e cerca

pancreti

de 10 vezes menor do que ~em

normais(4), fato tambm observado por ns (Tabela 2).

rat

Aparen

mente, por isso, a eficincia do IA em diabeticos pode ser

ain

maior do que aquela obtida em organismos normais.

Observamos tambem, como nos animais normais,

retar

na digesto do amido (Tabela 14) restando aps 1 hora 88% do i

gerido no trato gastro-intestinal

e 39% no controle em diabtic

nos animais normais os valores correspondentes foram de 40%

amido residual na presena de IA e 9% no grupo controle apos
mesmo tempo (Tabela 5).

Essa diferena est de acordo

com a j discutida menor produo de

~-amilase.

Esses

portan

result

dos merecero estudos adicionais.

Efeitos semelhantes aos nossos, relacionados com a r

duo da glicemia, foram encontrados por outros autores

util

zando respectivamente IA do trigo ou de mi-Cr:'-or-ganismos em hum

BIBlIOHca
faculdade de Cincias farmaculcas
Universidade de So Paulo

Decorrente do impedimento da digesto do amido

IA, pudemos observar tambm

aumento nos nlveis de cidos

xos (Tabela 15) de maneira semelhante verificada

normais (Figura 3),

pe

nos

apesar de no haver diferenas

gra

anima

marcante

nos teores de insulina.

Dessa forma, o IA tem efeito sobre a digesto do am

do em animais diabticos como em normais, ressaltando

novame

te que, devido a deficincia da a-amilase nesses animais acred

tamos que menores doses de IA poderiam ter os mesmos efeitos.

7 - CONCLUSOES

7.1 - O IA impede a digesto do amido em animais normais c

sando hipoglicemia e consequentemente

alterando out

parmetros ligado ao metabolismo da glicose (insulin

cidos graxos no esterificados).

7.2 - Esse impedimento da digesto do amido e

decorrente

bloqueio enzimtico da a-amilase na luz intestinal.

7.3 - Existe uma relao dose x efeito.

Sendo

40 mg IA/180 mg amido em animais normais a

a dose
que

ca

um alisamento total da curva glicmica.

7.4 - Em ensaios de curta durao a reduo da

disponibil

de da a-amilase no intestino, causada por sua compl

o com o IA, no controla a secreo e produo da
-amilase pancretica.

Parece tambem, no haver

co

le desses parmetros pela presena de amido residual

trato gastro-intestinal.

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S U M M A R Y

An a-amylase inhibitor purified from black beans (Pha

seolus vulgaris Lo) prevents the utilization of starch either
normal or diabetic rats during short-time starch loading
It causes hypoglycaemia and alters accordingly the serum
and non esterified fatty acids levelso

These effects

test
insu

are

do

dependent and doses higher than 31 mg of the inhibitor can

prom

the complete smoothing on serum glucose levelo

The existence

starch in the presence of the inhibitor in the intestine

does

alter the secretion or production of a-amylase by the pancreaso

TABELAS

pag
1 - Efeito do tratamento com celite/bentonite e s-mercaptoetanol na remoo do inibidor de tripsina

2 - Efeito da Streptozotocina (4,5 mg/100g peso) na induo de diabetes

3 - Efeito de doses crescentes de inibidor de

bre a glicemia

(X-

amilase so

4 - Efei to de doses crescentes de i ni bidor de I.- amilase so

bre a digesto do amido no trato gastro-intestinal ...
5 - Efeito do inibidor de a-amilase sobre a digesto
amido no trato gastro-intestinal

do

6 - Efeito do inibidor de a-amilase,isento de inibidor de

tripsina, sobre a glicemia
7 - Efeito do inibidor de a-amilase, isento de inibidor de
tripsina, sobre a digesto do amido no trato gastro -intestinal..........................................
8 - Efeito do inibidor de a-amilase sobre a atividade
a-amilase e teor de proteina no pncreas...

da

9 - Efeito do inibidor de a-amilase sobre a atividade da

a-amilase pancretica e sobre proteina total presen tes no intestino...................................

11 - Efeito do inibidor de a-amilase, isento de inibidor de

tripsina, sobre a atividade da a-amilase e teor de pr.Q.
terna no pncreas
12 -

Efeito do inibidor de a-amilase, isento de inibidor de

tripsina, sobre a atividade da a-amilase pancretica
e sobre proteina total presentes no intestino.......

13 - Efeito do inibidor de a-amilase, isento

de inibidor
de tripsina, sobre a atividade da tripsina no intesti
no

14 - Efeito do inibidor de a-amilase sobre a digesto

amido em animais diabticos

do

15 - Efeito do inibidor de a-amilase sobre os n;veis sricos de insulina e cidos graxos em animais diabticos

FIGURAS

p
1 - Efeito do inibidor de a-amilase sobre a glicemia, aps
a administrao de amido por sonda gstrica
.
2 - Efeito do inibidor de a-amilase sobre a insulina serica, aps a administrao de amido por sonda gstrica ..
3 - Efeito do inibidor de a-amilase sobre o nlvel
serico
de cidos graxos, aps a administrao de amido
por
.
son d a gastrl ca
.
4 - Efeito do inibidor de a-amilase sobre a glicemia
animais diabticos, aps a administrao de amido
.
son d a gastrlca

de
por
.

5 - Efeito de doses crescentes de inibidor de a-amilase so

bre a glicemia ..
6 - Efeito de doses crescentes de inibidor de a-amilase so
bre a digesto do amido no gastro-intestinal, aps 3
horas da administrao :_ amido por sonda gstrica....
7 - Efeito do inibidor de a-amilase sobre a digesto
amido no trato gastro-intestinal

do