Bioquimica Manual

INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL
ESCUELA SUPERIOR DE MEDICINA

Departamento de Formacin Bsica Disciplinaria
Academia de Bioqumica Mdica I
MANUAL DE LABORATORIO
DE
BIOQUMICA MDICA I
SEMESTRE: AGOSTO 2015 - ENERO 2016
M X I C O ,
2 0 1 5
D . F .
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA
ESCUELA SUPERIOR DE MEDICINA, IPN
NOMBRE DEL ALUMNO(A):
GRUPO:
2CM8
EQUIPO:
PROFESORES
LABORATORIO: DR. FELICIANO TAMAY CACH
LABORATORIO: DRA. MNICA ORDORICA MORALES
LABORATORIO: DRA. MNICA YOSEFIT HERNNDEZ HINOJOSA
Vo. Bo.
No. PRCTICA
FECHA
1.
07-SEPTIEMBRE-2015
2.
21-SEPTIEMBRE-2015
3.
28-SEPTIEMBRE-2015
4.
12-OCTUBRE-2015
5.
19-OCTUBRE-2015
6.
26-OCTUBRE-2015
7.
23-NOVIEMBRE-2015
8.
30-NOVIEMBRE-2015
9.
07-DICIEMBRE-2015
PROFESOR (A)
MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I

AGOSTO 2015 - ENERO 2016
PROFESORES DE LA ACADEMIA
Alfredo Montiel Mrquez
Argentina Hernndez Ramos
Arturo Daz Martnez
Carlos Castaeda Gonzlez
Cristina Lpez Gloria
Eunice Dalet Farfn Garca
Feliciano Tamay Cach
Francisco Javier Castaeda Ibarra
Io Stephanie Zamudio Vega
Jessica Elena Mendieta Wejebe
Jos Guadalupe Trujillo Ferrara
Juan Guillermo Ordorica Vargas
Leticia Araceli Ramrez Durn
Luz Mara Chirino Castillo
Mara De La Luz Velzquez Monroy
Miguel Angel Ordorica Vargas
Mnica Ordorica Morales
Mnica Yosefit Hernndez Hinojosa
Reyna Elizabeth Barbosa Cabrera
Sandra Gissela Mrquez Ramrez
PERSONAL TCNICO DE LABORATORIO

Jos Luis Martnez Vsquez
Julio Csar Aguilar Rentera

II
MISIN
La Escuela Superior de Medicina del Instituto Politcnico Nacional es una institucin de educacin mdica,
pblica, laica y gratuita, con un legado histrico identificado con las necesidades de salud de la poblacin
ms desprotegida; cuenta con una planta de destacados profesores, instalaciones fsicas y campos clnicos,
que garantizan una slida formacin mdica. Forma mdicos generales de alta calidad, creativos y eficientes;
con compromiso social, humanitario, de equidad, tico, ecolgico y crtico, tanto en el sector pblico como
en el privado, contribuyendo a mejorar las condiciones de salud y de desarrollo social de la poblacin.
Realiza investigacin cientfica, genera y difunde el conocimiento y fomenta la educacin mdica continua y
el posgrado. Apoya al Sistema Nacional de Salud y participa en el desarrollo cientfico, tecnolgico y social
del pas.
VISIN
La Escuela Superior de Medicina del Instituto Politcnico Nacional, mantendr su carcter de institucin
pblica de educacin mdica con slidas bases en el conocimiento cientfico y tecnolgico, en constante
actualizacin e innovacin, en un marco de calidad, equidad y servicio. Incrementar desarrollo de la
investigacin cientfica, el posgrado y la educacin mdica continua, manteniendo una vinculacin con los
procesos formativos de los profesionales de la salud de alto nivel, para destacar dentro de las Escuelas y
Facultades de Medicina del pas por la formacin de mdicos generales de alta calidad que conforme al
panorama epidemiolgico sean competentes para atender los problemas de salud y la emergencia de nuevas
patologas, bsicamente en el primer nivel de atencin, contribuyendo as a mejorar la salud y el desarrollo
social de la poblacin en constante interaccin con todos los sectores de la sociedad. Continuar participando
en la rectora de la educacin mdica en el pas, en el desarrollo cientfico y reafirmando su compromiso con
la poblacin ms desprotegida, guiada siempre por un desarrollo basado en la calidad humana, la tica y la
excelencia acadmica.

III
CALENDARIO DE ACTIVIDADES
CURSO DE BIOQUMICA MDICA I
PRIMER SEMESTRE 2015-2016
Martes, 1 septiembre de 2015

FECHA DE INICIO:
FECHA DE TERMINACIN: Martes, 19 de enero de 2016
DAS DE SUSPENSIN:
Mircoles, 16 de septiembre de 2015

Lunes, 2 de noviembre de 2015
Lunes, 16 de noviembre de 2015
VACACIONES
Lunes 21 de diciembre de 2015 al mircoles 6 de enero de 2016
EXMENES
Primer Examen Parcial:
Temas de teora:
Prcticas de laboratorio:
Segundo Examen Parcial:

Temas de teora:
Prcticas de Laboratorio:
Tercer Examen Parcial:

Temas de teora:
Prcticas de Laboratorio:
Mircoles, 7 de octubre de 2015

1. Composicin Qumica del Organismo Humano
2. Agua, Soluciones, cidos, Bases, pH y Soluciones Reguladoras
3. Estructura y Funcin de Protenas
1. Introduccin
7 al 11 de septiembre de 2015
2. Soluciones
21 al 25 de septiembre de 2015
3. Protenas
28 de septiembre al 2 de octubre de 2015
Mircoles, 18 de noviembre de 2015
4. Termodinmica, Catlisis y Enzimas
5. Estructura, Funcin y Metabolismo de Glcidos
4. Cintica Qumica
12 al 16 de octubre de 2015
5. Cintica Enzimtica 19 al 23 de octubre de 2015
26 al 30 de octubre de 2015
6. Glcidos
Mircoles, 13 de enero de 2016
6. Bioenergtica y Ciclo del cido Ctrico
7. Estructura Funcin y Metabolismo de Lpidos.
8. Estructura y Funcin de cidos Nucleicos y Gentica Molecular.
7. Oxidaciones Biolgicas 23 al 27 de noviembre de 2015
8. Lpidos
30 de noviembre al 4 de diciembre
9. cidos Nucleicos
7 al 11 de diciembre de 2015
Examen Extraordinario:
Temas:
Lunes, 18 de enero de 2016

Todo el curso
Examen a Ttulo de
Suficiencia:
Temas:
Lunes, 25 de enero de 2016

Todo el curso
IV
Reglamento Interno de la Materia

CAPITULO I. DE LA INSCRIPCIN Y ORGANIZACIN DE
LOS ALUMNOS
Artculo 1. La materia de Bioqumica Mdica I es impartida
por los profesores de la Academia de Bioqumica Mdica I
del Departamento de Formacin Bsica Disciplinaria.
Artculo 2. Para quedar inscritos y tener derecho a asistir al
curso, los alumnos debern:
a) Aparecer en las listas oficiales del Sistema Institucional
de Gestin y Unificacin Escolar del IPN.
b) Llenar y entregar una forma de registro y control interno
que les proporcionarn los profesores de grupo el primer
da de clases.
c) Entregar una fotografa reciente, de tamao infantil.
Artculo 3. Los incisos b y c mencionados en el artculo
anterior, deben cumplirse a ms tardar una semana despus
de iniciado el curso.
Artculo 4. Cada grupo deber elegir en la primera semana
de clases un representante, que ser su vocero oficial, quien
tratar los asuntos acadmicos relacionados con el curso ante
sus profesores o la Academia.
CAPTULO II. DE LA ORGANIZACIN DEL CURSO
Artculo 5. El curso de Bioqumica Mdica I es TericoPrctico y se desarrolla mediante tres tipos de actividades:
a) Clases de Teora. Se imparten en las aulas de la Escuela
Superior de Medicina, asignadas a cada grupo al inicio del
curso.
b) Prcticas de Laboratorio. Que se realizan en los
Laboratorios de enseanza de la Academia de
Bioqumica Mdica I.
c) Actividades complementarias. Las que sean asignadas por los
profesores, y que complementen las actividades acadmicas.
Artculo 6. En las clases de Teora se desarrollan los temas
del programa con la participacin activa de los alumnos.
Artculo 7. En las prcticas de Laboratorio los alumnos
realizan experimentos sobre temas que complementan la
teora, y resuelven problemas aplicativos.
Artculo 8. Las actividades complementarias, versarn sobre
tpicos de inters para la formacin de los alumnos.
CAPITULO III. DE LA ASISTENCIA
Artculo 9. Como se indica en los incisos IV y VI del
artculo 107 del Reglamento Interno del I.P.N., es obligacin
de los alumnos asistir con puntualidad y regularidad a las
clases de teora y prcticas de laboratorio en los horarios que
les sern notificados al inicio del curso.
Artculo 10. Los profesores controlarn la asistencia a clases
de teora y laboratorio, llamando lista de presentes al inicio de
las sesiones, con un periodo de tolerancia de 15 minutos.
No hay retardos. En las sesiones de laboratorio, los alumnos

que lleguen despus del periodo de tolerancia no podrn
permanecer en la sesin.
Artculo 11. Los alumnos (damas y caballeros) asistirn de
manera obligatoria a las clases de teora, prcticas de
laboratorio y exmenes con uniforme blanco que incluye bata,
pantaln, zapato cerrado (no tenis) y sin ningn tipo de
accesorio o prenda as como portando en la solapa izquierda
del uniforme su credencial de alumno vigente, como lo marca
el inciso VII del artculo 107 del Reglamento Interno del
I.P.N. Quien no cumpla con este requisito no podr
permanecer en la sesin, y se har acreedor a la falta
correspondiente.
Artculo 12. Durante las sesiones tanto de Teora como
Laboratorio, los alumnos debern activar el modo silencioso
de sus telfonos celulares, para no interrumpir el trabajo.
Artculo 13. Las inasistencias a teora y laboratorio se podrn
justificar dentro de los tres das hbiles siguientes, con la
documentacin oficial pertinente. Debido a la falta de
recursos, en caso de no asistir al laboratorio, el alumno
podr justificar la falta pero no reponer la prctica.
Artculo 14. Las actividades de otras materias, realizadas en
el horario correspondiente a Bioqumica Mdica I, no se
consideran justificantes de falta.
CAPTULO IV. DEL TRABAJO EN EL LABORATORIO
Artculo 15. Por razones de disciplina y seguridad, ninguna
persona podr trabajar en el laboratorio sin bata larga de
laboratorio blanca. El alumno que no cumpla este requisito deber
abandonar el recinto y se har acreedor a la falta respectiva.
Artculo 16. Queda estrictamente prohibido fumar e ingerir
alimentos o bebidas en el laboratorio. En la misma forma, los alumnos
debern abstenerse de recibir visitas, as como sentarse en las mesas de
trabajo, o realizar cualquier tipo de acciones indisciplinadas.
Artculo 17. Para trabajar en el laboratorio los alumnos
formarn equipos, con base en las instrucciones que reciban
del profesor al inicio del curso.
Artculo 18. Cada equipo de trabajo ser responsable del
material de vidrio, utensilios, reactivos, aparatos, etc. que utilice
durante el desarrollo de la prctica. Antes de iniciar la prctica
debern revisar cuidadosamente dicho material y anotar en el vale
cualquier anomala que observe, ya que de no hacerlo se harn
responsables de los daos que presente el material y debern
reponerlo en un plazo mximo de quince das, con nota de compra.
Artculo 19. Al terminar la prctica, el equipo deber dejar la
mesa de trabajo limpia y en orden, como la recibi.
Artculo 20. Los alumnos no podrn abandonar el laboratorio
hasta que la prctica termine, o cuando sean autorizados por el
maestro. S un alumno abandona el laboratorio sin
autorizacin, se har acreedor a la falta de ese da.

Artculo 21. El alumno deber entregar un reporte escrito de

la prctica, que formar parte de su evaluacin de
laboratorio.
CAPITULO V. DE LA EVALUACIN
Artculo 22. La evaluacin final de la materia, se har con
base en tres Evaluaciones Parciales Ordinarias, y los
Exmenes Extraordinario y a Ttulo de Suficiencia.
Artculo 23. Las calificaciones quedarn registradas en el
acta de examen correspondiente con un nmero entero de
cero a diez. En calificaciones superiores a 6 con fracciones
de cinco dcimas o ms, la calificacin se aumentar al
entero inmediato superior. En calificaciones inferiores a 6,
las fracciones decimales sern consideradas nulas.
Artculo 24. La evaluacin parcial ordinaria de la materia se
har tomando en cuenta los resultados obtenidos en:
a) El examen parcial departamental de los temas revisados
en el aula.
b) La calidad de su trabajo en el laboratorio y de sus
informes de las prcticas.
c) Las actividades acadmicas complementarias.
Artculo 25. Los exmenes departamentales ordinarios,
extraordinario y a ttulo de suficiencia, se realizarn en el
lugar, fecha y hora que se dar a conocer al inicio del curso.
Artculo 26. Todos los grupos debern iniciar los exmenes
departamentales a la hora programada. Los sinodales de
examen controlarn la asistencia, llamando lista de presentes
al inicio del examen, con un periodo de tolerancia de 15
minutos, los alumnos que lleguen despus del periodo de
tolerancia no podrn presentar examen.
Artculo 27. Durante los exmenes, los alumnos no podrn
llevar consigo telfonos celulares.
Artculo 28. Para tener derecho a presentar cada uno de los
exmenes departamentales ordinarios, los alumnos debern
tener un mnimo del 80% de asistencia global (en teora y
laboratorio) en el periodo examinado, siempre y cuando no
hayan acumulado ms del 20% de faltas en el laboratorio
(del total de prcticas del curso).
Artculo 29. Cuando por causa justificada (ver artculo 13
del presente Reglamento) un alumno no pueda asistir a
presentar un examen ordinario, deber proceder segn el
artculo 29 del Reglamento de Estudios Escolarizados.
Artculo 30. Cada evaluacin departamental ordinaria se
integrar por el 50% de la calificacin del examen de teora,
ms 30% de la calificacin de laboratorio, ms 20% de la
calificacin de actividades complementarias del periodo
correspondiente.
Artculo 31. La calificacin final de la materia de
Bioqumica Medica I se obtendr promediando las tres
evaluaciones parciales ordinarias. La calificacin mnima
aprobatoria es de 6 (seis).
Artculo 32.
Cuando un alumno no apruebe o intente
mejorar su calificacin ordinaria, deber presentar el
Examen Extraordinario, presentando el total de los
contenidos de la materia.
Artculo 33.
Para tener derecho a presentar el Examen
Extraordinario de la materia, los alumnos debern contar
con un mnimo de 80% de asistencia a las clases de teora y
tambin 80% de asistencia a las prcticas de laboratorio, del
total de clases del curso.
Artculo 34.
La calificacin mnima aprobatoria del
Examen Extraordinario ser de 6 (seis). Cuando un alumno
presente este examen para mejorar la calificacin ordinaria
obtenida, su calificacin final ser la ms alta.
Artculo 35.
Los alumnos que al trmino del curso
tengan calificacin reprobatoria y como mnimo 50% de
asistencia a las sesiones de teora y prcticas de laboratorio,
tendrn derecho a presentar el Examen a Ttulo de
Suficiencia.
CAPITULO VI. OTROS
Artculo 36.
Cualquier caso no contemplado en este
Reglamento deber someterse por escrito, a la Academia de
Bioqumica Mdica I, para su discusin y resolucin
inapelable.
ACADEMIA DE BIOQUMICA MDICA I

AGOSTO 2015

VI
Normas de Seguridad en el Laboratorio

El manejo inapropiado de sustancias, materiales y equipo que se
encuentran en el laboratorio, representa peligro tanto a la salud de
las personas, como a la integridad de las instalaciones y equipo de
trabajo. Es por ello que se deben obedecer las Reglas de
seguridad que se enlistan a continuacin, clasificadas en los
siguientes grupos:
1. Sustancias qumicas
2. Material biolgico y animales de laboratorio
3. Material de vidrio
4. Equipo elctrico e instalaciones de gas
5. Orden y limpieza
1. Sustancias qumicas.
o Cada sustancia debe tener etiqueta de identificacin, si no es
as, no los utilice.
o Antes de utilizar una sustancia, verifique que se trata del
reactivo correcto y que tiene la concentracin requerida.
o Identifique la naturaleza de la sustancia y el tipo de peligro
que implica su manejo; es veneno?, qu tan txico es?, es
inflamable?, es corrosivo?
o Evite el contacto o exposicin innecesaria con sustancias
qumicas, utilice el equipo de proteccin adecuado y
disponible: bata larga, lentes, guantes, campana extractora, etc.
o No pipetee sustancias qumicas directamente, utilice la prepipeta.
o Evite inhalar productos qumicos y sus vapores.
o Trabaje y mantenga bajo la campana los reactivos corrosivos
o voltiles.
o Los hidrocarburos ligeros y solventes deben manejarse lejos del
fuego u otras fuentes de calor. Emple bao mara para calentarlos.
o Para diluir los cidos, estos deben verterse lentamente en el
agua, agitando cuidadosamente.
o No vierta agua directamente sobre el cido porque provocar
salpicaduras.
o No deje sobre la mesa tapones de frascos de cidos u otras
sustancias corrosivas, porque se pueden contaminar o dejar
residuos corrosivos que podran causar quemaduras.
2. Material biolgico y animales de laboratorio.
o Para el manejo de estos materiales protjase adecuadamente
segn sea el caso. Usando guantes, cubre boca, etc.
o Para la manipulacin y el sacrificio de los animales de
experimentacin siga las indicaciones del Profesor.
o Maneje cuidadosamente las muestras biolgicas (sangre, orina,
saliva, etc.) para evitar contaminaciones de personas y materiales.
o Todo el material biolgico, equipos y de desecho (cadveres,
muestras biolgicas, algodn, gasas, guantes, jeringas, etc.)
debern ser incinerados adecuadamente, para lo cual, deber
usted seguir las instrucciones del Profesor para dejarlos
convenientemente preparados.
3. Material de vidrio.
o Debe examinar todo el material de vidrio antes de utilizarlo,
para detectar la existencia de grietas o roturas. En el caso de
que encuentre material defectuoso, reprtelo de inmediato al
encargado del laboratorio para que se lo cambie.
o No use el material de vidrio con orillas cortantes, con
cuarteadoras, o en general en mal estado.
o Debe transportar, mover o manipular slo la cantidad de
material de vidrio que pueda manejar con seguridad.
o Use pinzas, franela o guantes de asbesto para transportar o
mover recipientes de vidrio calientes.
o Nunca deje material roto para ser lavado, reprtelo y trelo a la basura.
o No deje vidrios rotos sobre la mesa o en cualquier otro lugar
en donde pueda causar accidentes.
o Al calentar recipientes de vidrio, use llama suave al principio
del calentamiento.
o Limpie inmediatamente los materiales que goteen o se
derramen, mediante uso de la franela u otros materiales para
embeber el lquido y evitar que se disperse.
o En caso de lquidos txicos derramados, protjase
adecuadamente y ventile el rea.
4. Equipo elctrico e instalaciones de gas.
o No use equipo elctrico defectuoso.
o Verifique que los enchufes y conexiones estn en buenas
condiciones; en caso de que existan cables desnudos o en mal
estado, reprtelos inmediatamente.
o Maneje el equipo elctrico y sus conexiones con las manos
secas y cercirese que el piso se encuentra seco. Mantenga
seco el espacio alrededor del equipo elctrico.
o Antes de encender el mechero, revise que tanto ste como la
manguera se encuentren en buen estado, verifique que est
adecuadamente conectado a la tubera de gas (tubos de color
amarillo) y retire todo material inflamable cercano.
o En caso de accidente, retrese inmediatamente y cierre la llave
de paso que se encuentra bajo la tarja de cada mesa.
5. Orden y limpieza.
o Una vez verificado el buen estado del material de vidrio,
lvelo para asegurar su limpieza.
o Mantenga siempre limpia y en orden su rea de trabajo.
o No intercambie el contenido de los frascos de reactivo. Use
slo los tapones de los recipientes correspondientes.
o Cuando requiera volver a llenar sus frascos reactivos, transfiera
del frasco de almacenamiento, la cantidad necesaria a travs de
un vaso de precipitados, no devuelva el sobrante al envase
original, busque otro frasco reactivo y vierta el sobrante. Nunca
emplee pipetas para efectuar este procedimiento.
ACADEMIA DE BIOQUMICA MDICA I
AGOSTO 2015

VII
SIMBOLOS DE SEGURIDAD
FLAMABLE
VENENO
EXPLOSIVO
RADIOACTIVO
CORROSIVO
GAS COMPRIMIDO
INFLAMABLE
OXIDANTE
EXPLOSIVO
NIVEL DE RIESGO BAJO
CORROSIVO
IRRITANTE
VENENO
DAO AMBIENTAL

VIII
NDICE
No.
Pginas
1.
INTRODUCCIN
2.
SOLUCIONES
3.
PROTENAS
16
4.
CINTICA QUMICA Y CATLISIS
24
5.
CINTICA ENZIMTICA
33
6.
GLCIDOS..
40
7.
OXIDACIONES BIOLGICAS
46
8.
LPIDOS.
52
9.
CIDOS NUCLEICOS.
56

IX
PRCTICA No. 1
INTRODUCCIN AL LABORATORIO
Se revisarn conceptos y procedimientos de importancia para el trabajo en el laboratorio. El alumno deber
previamente haber ledo y sujetarse al Reglamento de la Academia de Bioqumica I.
Las actividades de laboratorio constituirn una parte importante del aprendizaje de la bioqumica mdica
y complementarn las actividades de la materia impartidas en el aula.
Es obligacin del alumno la asistencia puntual, as como participar de forma activa, obtener resultados de
los experimentos y entregar el reporte del mismo.
Ser de suma importancia cumplir meticulosamente con las medidas de seguridad, comportamiento,
uniforme y accesorios como: guantes, anteojos de proteccin o caretas transparentes, cubre bocas, bata
larga y pre-pipetas.
EJERCICIO 1. DISTRIBUCIN DE LOS ALUMNOS.

a. Antes de entrar al laboratorio, todos los alumnos debern portar, debidamente abotonada la bata de
laboratorio y tener listo su material de trabajo.
b. Cuando el profesor lo indique, los alumnos colocarn su mochila en el lugar que les sea asignado.
c. Siguiendo las instrucciones de su profesor, localizar la mesa de trabajo de su equipo, dirigirse a ella e
inmediatamente antes de realizar cualquier actividad, debern colocarse los gogles y guantes de forma
obligatoria. No podrn permanecer durante la sesin del laboratorio si no cumplen con este requisito.
d. En la mesa de trabajo, localizar la toma de corriente, desages, tuberas y sitios donde puede trabajar.
e. Ubicar cmo se ubica la mesa de trabajo con respecto a la campana de extraccin, regadera, extintores,
zonas de seguridad y rutas de evacuacin.
f. Identificar el uso de cada una de las tuberas que encuentre en la mesa de trabajo y marcarlas con masking
tape. Esperar a que su profesor confirme que el etiquetado es correcto.
g. Localizar la posicin de las vlvulas de apertura de cada tubera.
Evidencia de Aprendizaje:
1. Ilustrar la mesa de trabajo sealando la posicin de las tomas de corriente, desages y vlvulas de flujo.
2. Ilustrar la distribucin del laboratorio e indique las zonas de seguridad, posicin del equipo de seguridad y
la ruta de evacuacin desde la mesa.
3. En el esquema anterior, marcar la posicin de las vlvulas de apertura.

=
EJERCICIO 2. VALE DE RESGUARDO DEL MATERIAL DE LABORATORIO.

a) Localizar en la charola el vale de resguardo del material de laboratorio (documento que enlista el
material para realizar cada prctica) seguidamente revisar cuidadosamente cada una de las piezas,
indicando en el vale cualquier defecto en el material. Bajo ninguna circunstancia se deber desplazar la
charola de la mesa de trabajo a ningn otro sitio.
b) Etiquetar con masking tape cada pieza que lo identifique. Reunir en la charola el material que desconozca y
preguntar a su Profesor. Para esta Prctica y las posteriores, favor avisar al Profesor o Profesores para
para que le revisen el ejercicio o experimento, en caso de no avisar y se desecha el ejercicio o
experimento, no se podr incluir en el Reporte de Laboratorio.
c) Al terminar de revisar todo el material, completar los datos solicitados en el vale, (fecha, grupo, equipo,
responsable, etc.) y entregarlo al personal tcnico de laboratorio. En las siguientes prcticas, el vale se
entregar al inicio de cada sesin con tolerancia de 10 minutos.
d) Al terminar cada prctica el equipo tiene la obligacin de ordenar el material limpio dentro de la charola,
limpiar la mesa y solicitar al personal tcnico que tendr que revisar y levantar el material de su mesa de
trabajo, quienes les tendrn que devolver el vale que se entreg al inicio de la prctica.
Evidencia de aprendizaje:
1. Cul es el uso de cada una de las siguientes piezas de material de laboratorio?
Pipeta
Bureta
Probeta
Matraz Erlenmeyer
Pinza para tubo de ensayo
Reforos
Tubos para centrfuga clnica
Mortero
Tubo de ensayo
Vlvula de Bunsen
Matraz aforado
Vaso de precipitados
Cristalizador
Tubos Falcn
EJERCICIO 3. MANEJO DEL MECHERO.

a) No encender el mechero hasta que su profesor se lo indique.
b) Conectar el tubo de ltex del mechero a la llave de gas, la que debe estar completamente cerrada, con la
manija en posicin transversal respecto de la salida del gas. No olvidar que la tubera de gas es de color
amarillo.
c) Verificar que el tornillo de control de flujo de gas est abierto ms o menos a la mitad de su capacidad
total. El flujo de gas se puede disminuir girando el tornillo en el sentido de las manecillas del reloj y
aumentar en sentido contrario.

=
d) Encender el mechero aproximando la flama de un cerillo o encendedor al borde de la parte superior del
mechero e inmediatamente abrir la llave de gas, lo cual debe hacerse lentamente, avanzndola hasta que
est aproximadamente a 45 grados con el tubo del gas. Tener cuidado de no acercar su rostro, pelo u
objetos inflamables al mechero al momento de encender, ni cuando est encendido. Al usar el mechero no
deber portar guantes clnicos hechos de ltex o polietileno, tener cuidado, ya que son inflamables.
e) Ajustar la cantidad de aire que entra, usando el arillo de control de flujo de aire, hasta que la flama tenga
una zona central de color azul claro rodeada de otra de color azul oscuro o violeta. La parte ms caliente
se encuentra en la punta de la zona interna. Cuando la combustin es incompleta, por falta de oxgeno, la
flama presenta color amarillo.
Evidencia de aprendizaje.
1) En el esquema siguiente, indicar el tipo de mechero, as como las partes que se indican.
1
a
2
C
b
4
2) Ilustrar la forma correcta de encender el mechero.
EJERCICIO 4. COMO CALENTAR UN LQUIDO EN UN TUBO DE ENSAYO.

a) A un tubo de ensayo agregar agua de la llave hasta un 20% de su capacidad y sujetarlo con pinzas para
tubo de ensayo.
b) NO olvidar quitarse los guantes de ltex cuando se emplee el mechero.
c) Colocar el tubo sobre la flama del mechero, inclinarlo aproximadamente a 70oC y cuidar que la flama
caliente la parte superior del lquido. Nunca calentar un tubo de ensayo en el fondo o en posicin vertical
debido a que se puede proyectar su contenido.
d) Mover el tubo cuidadosamente casi sobre la flama de arriba hacia abajo, para que el lquido se caliente de
manera uniforme.
e) Durante el calentamiento dirigir la boca del tubo hacia un lugar donde no se encuentre ninguna persona o
material que se pueda daar.
f) No observar de ninguna manera directamente la boca de un tubo de ensayo que se est calentando, aunque
est fuera de la flama del mechero.
g) Continuar calentando hasta lograr que el agua hierva, sin proyectarse.
=
h) PROHIBIDO calentar tubos de ensayo con solventes orgnicos directamente a la flama del mechero.
Realizar siempre en bao Mara.
i) Al terminar cualquier experimento apague el mechero por precaucin.
1. Describir e ilustrar la forma correcta de manejar la pinza para tubo ensayo
2. Ilustrar la forma correcta de calentar un lquido en un tubo de ensayo.
EJERCICIO 5. INSTALACION DE UN BAO MARA.
a) Identificar y reunir el siguiente material: soporte universal, anillo de hierro, rejilla de asbesto, mechero de
Fischer o Bunsen y un vaso de precipitados de 600 mL.
b) Ensamblar el anillo en el soporte a la altura adecuada para que la parte ms caliente de la flama del
mechero quede a nivel del anillo. Colocar la rejilla de asbesto sobre el anillo.
c) Llenar el vaso con agua de la llave a la mitad y colocarlo sobre la rejilla. Agregar pequeos trozos de
papel en el vaso con agua a modo de cuerpos de ebullicin.
d) Encender el mechero y calentar a la temperatura que le indique su profesor.
1) Ilustrar el montaje del aparato.
2) Por qu no se debe llenar el vaso completamente?
3) Por qu se emplean los cuerpos de ebullicin?
EJERCICIO 6a. MANEJO DE REACTIVOS LQUIDOS: SEGURIDAD.
a) Usar siempre la pre-pipeta, nunca pipetear con la boca para manejar con seguridad los reactivos lquidos.
b) Al abrir un frasco de reactivo, colocar el tapn sobre la mesa en posicin invertida, para evitar
contaminacin. Vertir la cantidad necesaria en un vaso de precipitados y de ah usar el reactivo.
c) Para extraer el lquido utilizar una pipeta o un gotero limpio. Nunca vertir reactivos directamente del
frasco para evitar escurrimiento.
d) Usar una pipeta de 10 mL, para transferir 5 mL de agua de un vaso de precipitados a un tubo de ensayo en
su mesa y en la campana de extraccin. Repetir hasta que pueda realizarlo con seguridad.
1) Describir la forma de uso de la pre-pipeta.
2) Utilizar las tcnicas que se aprendi para medir los volmenes de los utensilios que le solicite su profesor.
EJERCICIO 6b. MANEJO DE REACTIVOS LQUIDOS: PREPARACION DE SERIES.
a) Preparar una serie de 4 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 4.
=
b) Agregar en el tubo 1 la cantidad de 2.5 mL de agua. En el tubo 2 la cantidad de 1.25 mL de agua. En tanto
que en el tubo tres deposite 8 mL de agua y en el tubo 4, deposite 0.6 mL de agua.
c) Utilizar para cada tubo de ensayo una pipeta de capacidad adecuada. Repetir este ejercicio hasta que
pueda realizarlo con seguridad y precisin.
1. Elaborar un esquema que describa este experimento.
2. Describir que pipetas utiliz para cada uno de los volmenes indicados.
3. Cuntos tipos de pipetas existen?
EJERCICIO 6c. MANEJO DE REACTIVOS LQUIDOS: TITULACIN.
a) Reunir el material siguiente: Soporte universal, pinza para bureta (Lincoln), bureta, matraz Erlenmeyer.
b) Instalar la pinza para bureta sobre el soporte a una altura conveniente para colocar adecuadamente la bureta.
c) Armar la bureta colocando la llave del lado derecho de la escala, la cual debe quedar correctamente
orientada (escala de 0 arriba y escala de 25 abajo).
d) Sujetar la bureta con las pinzas teniendo cuidado que quede bien sujeta, con la escala hacia el observador
y a la altura adecuada por arriba del matraz Erlenmeyer.
e) Emplear siempre un vaso de precipitados de 100 mL para llenar la bureta, teniendo cuidado que la llave se
encuentre cerrada. Como precaucin, colocar un vaso de precipitados debajo de la bureta y purgarla.
f) Para purgar la bureta abrir completamente la llave para que el lquido salga rpidamente y pueda
arrastrar las burbujas de aire. Posteriormente, aforar al volumen total y colocar el matraz Erlenmeyer.
g) Manejar con soltura y seguridad la llave de la bureta y el matraz Erlenmeyer. Familiarcese con el
procedimiento dejando gotear el lquido de la bureta, en este caso agua, o dejar salir cantidades fijas como
por ejemplo, de 1 mL cada vez, de 5 mL cada vez, etc. Asimismo, deber aprender a leer con precisin la
escala de la bureta.
1) Ilustrar el dispositivo de titulacin.
2) Identificar el tipo de aforo de la bureta utilizada.
3) Describir la forma correcta de leer el volumen en la bureta.
EJERCICIO 7. MANEJO DE REACTIVOS SLIDOS.
a) Preparar una charola de papel usando una hoja de papel limpio, de preferencia encerado. Esta charola se preparar
doblando el papel aproximadamente a un centmetro de cada borde y colocndolos en ngulo recto para formar una
pared en la periferia del papel. El tamao de la charola depender de la cantidad de reactivo a pesar.
=
b) Encender la balanza y esperar a que se estabilice la lectura. Colocar la charola de papel en el plato de la
balanza. Cuando se estabilice, por medio del botn de tarar, tare a cero la balanza.
c) Abrir el recipiente del reactivo y colocar la tapa sobre la mesa, boca arriba, para evitar la contaminacin.
d) Por medio de una esptula sacar el reactivo del recipiente y colocarlo sobre la charola de papel. Si se
rebasa la cantidad deseada, regresar el exceso de reactivo al respectivo recipiente usando la esptula.
Nunca regresar al recipiente original un reactivo que caiga fuera de la charola de papel o sobre la mesa.
e) Pesar la cantidad de cloruro de sodio que le indique su profesor y colocarlo en el sobre de papel que se le
proporciona. Escribir en el sobre el nombre y cantidad de reactivo, nmero de equipo y grupo. Conservar
para utilizar en la siguiente prctica.
f) Cerrar inmediatamente el frasco de reactivo para evitar que se hidrate o contamine. Asegurarse que la
mesa y la balanza queden limpias.
1) Ilustrar la balanza, sealando la posicin del botn de encendido-apagado y del botn de tara.
2) Pesar las muestras que le solicit su profesor.
EJERCICIO 8. TARAR TUBOS PARA CENTRIFUGAR.
a) Localizar la balanza de dos platillos y la centrfuga refrigerada.
b) Aadir a dos tubos Falcon de capacidad de 15 mL la cantidad de 5 mL de agua de la llave como marca la
escala del propio tubo.
c) Colocar en dos frascos gerber cada tubo y mantenerlos a la mano cuando se requiera en la balanza.
d) Ajustar las pesas de medicin en la posicin de cero en una balanza de dos platillos. Asegurarse de que la
aguja o fiel de la balanza est en posicin cero. Si no lo est, girar cuidadosamente las pesas de ajuste en
el sentido que sea necesario hasta lograr el equilibrio.
e) Retirar los tubos de los frascos gerber, colocar cada frasco en cada platillo, cuidando que el ms pesado
quede del lado izquierdo.
f) Deslizar las pesas de medicin de la balanza hasta lograr que el fiel vuelva a la posicin de equilibrio,
posteriormente colocar los tubos nuevamente en cada frasco y observar que se encuentren balanceados.
g) De no estar en equilibrio, use una pipeta y aadir agua de la llave al tubo ms ligero hasta lograr que el
fiel de la balanza regrese al equilibrio. Al equilibrar los tubos ya puede centrifugar.
1) Ilustrar la balanza de platillos sealando la posicin de las pesas de ajuste y las de medicin.
2) Explicar por escrito el resultado de la centrifugacin.

=
PRCTICA No. 2
SOLUCIONES
Una solucin es un sistema homogneo, formado por dos o ms sustancias qumicas. Est formada por un
solvente en el cual se dispersa uno o ms solutos. Cuando ambos son lquidos miscibles, se acostumbra nombrar
solvente al que se encuentra en mayor cantidad. En las soluciones acuosas siempre se considera el agua como
solvente. La relacin que existe entre las cantidades de soluto y solvente en una solucin se llama concentracin.
Existen varias formas de expresar la concentracin de una solucin. Las de uso ms frecuente son:
MOLARIDAD (M). Nmero de moles de soluto en un litro de solucin. Un mol se define como el peso
molecular en gramos de una sustancia, o sea la masa de una sustancia que contiene el mismo nmero de
tomos o molculas que hay en 12 g de 12C. (6.022 x 1023 o Nmero de Avogadro).
MOLALIDAD (m). Nmero de moles de soluto en 1000 g de solvente.
NORMALIDAD (N). Nmero de equivalentes qumicos de soluto en un litro de solucin. Si dividimos los
gramos de un mol entre la valencia del compuesto se obtiene el peso equivalente qumico.
OSMOLARIDAD (Osm): Nmero de osmoles en un litro de solucin. Un osmol es la cantidad de soluto
en gramos que proporciona el nmero de Avogadro de partculas en solucin.
PORCENTUAL (%). Expresa el porcentaje de soluto en una solucin. Existen diferentes tipos:
Porciento en peso (% p/p). Nmero de gramos de soluto en 100 g de solucin. Esta es la forma como se
expresa la pureza de los reactivos qumicos.
Porciento en volumen (% v/v). Nmero de mililitros de soluto en 100 mL de solucin.
Porciento en peso-volumen (% p/v). Nmero de gramos de soluto en 100 mL de solucin. Si no se indica
expresamente la modalidad de porcentaje, esta es la concentracin porcentual que se debe usar.
FRACCIN MOLAR (xi). Nmero de moles de una sustancia en una solucin entre la suma de los moles
de todos los componentes de la misma.
DILISIS
Ejemplo de membranas dialticas son el celofn y el colodin. La base del tratamiento de pacientes renales
descompensados es la dilisis, la cual es til tambin para eliminar sustancias nitrogenadas, medicamentos en
exceso o exceso de acidez en sangre. Mdicamente se refieren diversos tipos de dilisis de los cuales
mencionaremos la hemodilisis y la dilisis peritoneal.

=
SMOSIS Y PRESIN OSMTICA

Si dos soluciones de diferente concentracin estn separadas por una membrana semipermeable, el solvente
de la solucin menos concentrada difunde a la de mayor concentracin. Esto se explica termodinmicamente
porque la solucin diluida tiene una tendencia de escape o presin de vapor muy grande. Esta tendencia de
escape o presin de vapor es muy baja cuando la solucin est concentrada. Este fenmeno es conocido
como smosis y ejerce una presin osmtica, propiedad coligativa de gran importancia fisiolgica ya que
interviene en la regulacin del volumen de sangre circulante, as como en la formacin o eliminacin de
edemas tisulares, y es la razn por la cual el paciente diabtico elimina frecuentemente grandes cantidades de
orina (poliuria). Esta ltima est ocasionada por la alta concentracin de glucosa en sangre y forma parte de
la triada sintomtica clsica del diabtico: polifagia, polidipsia y poliuria.
La medicin de la presin
osmtica se lleva a cabo mediante el dispositivo llamado OSMMETRO. Este requiere de una membrana
semipermeable y aunque las que ms se acercan a la perfeccin son las de ferrocianuro de cobre y las de
pergamino, por ser ms fcil de conseguir, se utilizar una membrana dialtica de colodin (celulosa) que
proporciona una medida aproximada de la presin osmtica. La columna de sacarosa ejercer finalmente una
presin que se opone al paso del agua (Presin Hidrosttica). Calculando sta, se puede conocer la presin
osmtica ya que ambas son iguales.
= hg
Esto se hace mediante la frmula:
donde,
= presin osmtica
h = altura a la que asciende la solucin de sacarosa (en metros)
= densidad de la solucin de sacarosa (1.088 g/mL), (convertirla a kg/m3)
g = aceleracin debida a la gravedad (9.81 m/s2)
Efectuando esta operacin encontramos la presin osmtica en pascales. Para obtener atmsferas usamos la
siguiente equivalencia: una atmosfera igual a 1.013 x 105 pascales
SOLUCIONES REGULADORAS
A las soluciones reguladoras se les pueden aadir cantidades relativamente grandes de cidos o lcalis sin
alterar de manera significativa su pH. Esta accin amortiguadora se debe a la presencia en la solucin de un
sistema formado por un cido o una base dbil y su sal correspondiente. Si se toma como ejemplo una solucin
que contenga un cido dbil, al que representaremos por HA y su sal, representada por BA los hidrogeniones
existentes en ella procedern nicamente de las molculas cidas, que se disocian como sigue:
HA -- H++ AMANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I
=
El equilibrio de la reaccin est dado por la siguiente ecuacin:

[H+] [A- ]
--------------------- = Ka
[HA]
Donde Ka es la constante de disociacin del cido. De esta ecuacin se deduce que la concentracin de
hidrogeniones es:
Ka [HA]
[H+] = -----------------[A- ]
La relacin entre estas dos constantes es, sin embargo, tan sensiblemente constante en condiciones ordinarias
que podemos afirmar que la concentracin de A- es igual a la concentracin de la SAL. Sustituyendo una
expresin por otra en la ecuacin anterior tenemos:
[cido]
[H+] = Ka --------------[Sal]
Si se toman logaritmos negativos en ambos trminos de la ecuacin, (manipulacin matemtica para manejar
nmeros muy pequeos o muy grandes), queda as:
[cido]
- log [H+] = - log Ka log --------------[Sal]
Ahora bien, si -log [H+] es igual a pH, por analoga podemos decir que log de Ka es igual a pKa por lo que:
[cido]
pH = pKa log --------------[Sal]
Por otra parte por las leyes de los logaritmos, las expresiones log de ([cido]/[Sal]) y + log de
([Sal]/[cido]) son iguales y la segunda puede reemplazar a la primera, de tal modo que hechas todas las
modificaciones la ecuacin queda finalmente como sigue:
[Sal]
pH = pKa + log ---------[cido]

=
Esta ecuacin se conoce con el nombre de Ecuacin de HendersonHasselbalch y nos indica que el pH de
una solucin que contenga un cido dbil y su sal est determinado por el valor de pK a (constante para cada
cido) y por el logaritmo del cociente que resulta de dividir la concentracin de la sal entre la concentracin
del cido. Por ejemplo, el valor de la constante de disociacin Ka del cido actico es de 1.8 x10-5. El valor
de su pKa es por lo tanto igual a 4.74. Si tenemos una solucin reguladora que posea iguales cantidades de
cido actico y acetato de sodio en concentracin 0.1 N, el pH de esa solucin sera de:
0.1 N
pH = 4.74 + log ---------- = 4.74
0.1 N
Adems de servir para la preparacin de soluciones de pH conocido, las soluciones reguladoras tienen dentro
del organismo un papel de importancia capital que es el de evitar que aumente o disminuya de manera
importante la concentracin de iones hidrgeno, ya que la vida humana es posible en lmites muy estrechos
de pH, es decir, para la sangre arterial un pH de 7.40 y para sangre venosa y lquidos intersticiales 7.35. Este
ltimo es menor por tener ms CO2 y por lo tanto ms H2CO3 producido metablicamente. Se sabe que los
lmites mximos de pH en los que por algunos minutos puede permanecer el organismo sin sufrir muchas
alteraciones son de 7.0 a 7.8. En los lquidos donde existen y actan al mismo tiempo varios sistemas
amortiguadores, como sucede en la sangre, el cido o la base que entra es amortiguado por todos los sistemas
presentes de manera proporcional a la eficacia de cada uno de ellos. La regulacin fisicoqumica tiene lugar
en todos los medios que contienen reguladores, constituidos principalmente por cidos o bases dbiles y sus
sales. Por ejemplo el de fosfatos H2PO4-/HPO4= con un pKa2 de 7.2 (o de 6.8 a la temperatura corporal), es el
principal amortiguador intracelular. El principal amortiguador extracelular en la sangre y lquidos
intersticiales es el sistema bicarbonato H2CO3/HCO3- con un pKa de 6.1. En el interior del eritrocito, adems
del bicarbonato, el amortiguador de mayor importancia es el de hemoglobina reducida/oxihemoglobinato
(HHb/HbO2). Otros sistemas son los de protenas y aminocidos. Todos estos sistemas funcionan de manera
inmediata cuando existen excesos de lcali o cido ya que un cambio del pH afecta la estructura y la
actividad de las protenas, la distribucin de otros iones entre las clulas y el lquido extracelular, la actividad
de hormonas y frmacos, etc. Por otro lado, existen sustancias de mucha importancia en bioqumica como los
aminocidos y las protenas los cuales tienen grupos titulables y que actan como anfolitos aceptando iones
H+ o iones OH-. Siendo posible realizar experimentos donde se determinan a travs de curvas de titulacin
del aminocido de glicina con HCl y con NaOH.

=
10
EXPERIMENTO 1. DIALISIS.
a) Humedecer por inmersin en agua destilada durante 10 minutos la seccin del tubo de colodin o celofn
de aproximadamente 6 cm de largo por 2.5 cm de dimetro.
b) En el tiempo de 5 minutos, preparar una solucin de NaCl al 5% que le indique su profesor, considerar la
pureza del reactivo de 100%.
c) Preparar dos tubos de ensayo limpios. Aadir en uno de ellos 2 mL de NaCl al 5% y 5 gotas de AgNO 3
(nitrato de plata). Al otro tubo agregar 2 mL de solucin de almidn al 1% y 2 gotas de solucin de lugol.
Observar la reaccin que ocurre en cada tubo. Etiquetar como testigo de cloruros y testigo de almidn
respectivamente.
d) Pasado los 10 minutos, cerrar un extremo del tubo de colodin atndolo con hilo de algodn para obtener
un saco. Desechar el agua destilada utilizada, enjuagar el vaso y llenar con agua destilada nueva a un
tercio de su volumen.
e) Llenar el saco con una mezcla de 1 mL de solucin de NaCl al 5% y 10 mL de solucin de almidn al 1%.
f) Cerrar cuidadosamente el otro extremo del saco, enjuagar con agua destilada y suspender en un vaso de
precipitados con agua destilada, cuidar de no tocar las paredes.
g) Determinar la presencia de almidn y de cloruros en el lquido que rodea al saco del vaso de precipitados,
a tiempo 0 (inmediatamente despus de sumergir el saco), 15, 30, 45 y 60 minutos.
h) Repetir las dos pruebas del lquido contenido en el saco, cuando se hayan realizad todas las lecturas.
1) Describir detalladamente los clculos que hizo para conocer la cantidad de agua destilada que es necesario
aadir al NaCl del sobre para que la solucin sea al 5%.
2) Calcular las concentraciones siguientes y detalle los clculos correspondientes del NaCl al 5%: Molaridad,
Normalidad, mEq/mL, mg/mL, moles%, Osmolaridad.
3) Ilustrar el montaje del experimento.
4) Explicar los resultados de la dilisis.
EXPERIMENTO 2. MEDIDA DE LA PRESIN OSMTICA POR EL MTODO DIRECTO.

El osmmetro consiste en un recipiente que contiene una solucin de sacarosa 1 M teida con rojo neutro
conectado a un capilar de polietileno por el cual asciende el nivel del lquido (ver esquema de la tabla). El
recipiente es el cuerpo de una jeringa hipodrmica de 5 mL que presenta dos bandas de hule; la del extremo
inferior permite la fijacin de una membrana de celofn humedecido previamente durante 5 minutos en agua
destilada. La banda superior sirve para sellar el orificio de llenado de la cmara. Por la parte correspondiente
=
11
al pivote, se le agrega el trocar metlico de un catter el cual se introduce en el extremo de un capilar de

polietileno. El extremo inferior de la jeringa se sumerge en un vaso de precipitados con agua destilada. El
dispositivo lo instala el personal tcnico del laboratorio. Nota: cualquier error en el montaje del osmmetro
se manifestar por salida de solucin coloreada del dispositivo. Una vez hecho esto se marca el nivel de la
solucin de sacarosa en el tubo capilar, que se toma como el tiempo cero. Medir cada 15 minutos el nivel
ascendido hasta los 90 minutos, registrar sus resultados en la tabla de evidencias.
1. Registrar sus resultados en la tabla siguiente:
Tiempo
min.
Altura
mm
Atm
15
30
45
60
75
90
2. Graficar el tiempo en las abscisas (eje x) y la altura en milmetros en las ordenadas (eje y).
3. Calcular la presin osmtica en atmosferas y complete la tabla.
4. Cundo deber detenerse el proceso osmtico?
5. Depende slo de la altura la presin osmtica? Explique.
6. Influye el radio del capilar en la presin osmtica? Explique.
7. La sacarosa y el colorante dializan? Explique.
8. Identificar en el esquema de la tabla de resultados todas las partes del osmmetro.
=
12
EXPERIMENTO 3. PODER AMORTIGUADOR DE SOLUCIONES.

Preparar 50 mL de las soluciones amortiguadoras con los valores de pH que le indicar su profesor (7.0,
7.2, 7.4 y 8.0), emplear KH2PO4 (fosfato dicido de potasio) 0.01 M y Na2HPO4 (fosfato monocido
disdico) 0.01 M (pKa2 = 7.2).
Preparar 50 mL de las soluciones amortiguadoras con los valores de pH que le indicar su profesor (7.0,
7.2, 7.4 y 8.0), emplear KH2PO4 0.1 M y Na2HPO4 0.1 M (pKa2 = 7.2).
Medir el pH potenciomtrico y colorimtrico de las soluciones anteriores.
Aadir una alcuota de 10 mL de la solucin amortiguadora que prepar en un matraz Erlenmeyer de
250 mL, medir con una pipeta volumtrica de 10 mL. Aadir 5 gotas de azul de timol y titular con HCl
(cido clorhdrico) 0.1 N hasta observar el cambio de color a rojo.
Agregar una alcuota de 10 mL de la solucin amortiguadora que prepar en otro matraz Erlenmeyer de
250 mL, medir con una pipeta volumtrica de 10 mL. Aadir 5 gotas de azul de timol y titular con NaOH
(hidrxido de sodio) 0.1 N hasta observar el cambio de color a azul.
Evidencia de aprendizaje.
1) Describir detalladamente los clculos que realiz para cada uno de los pH solicitados.
2) Con los datos a obtener y las de todo el grupo llenar la tabla siguiente:
pH
terico
Concentracin
7.2
0.01
7.2
0.1
7.4
0.01
7.4
0.1
8.0
0.01
8.0
0.1
pH
Colorimtrico
Potenciomtrico
Gasto de
Gasto de
HCl 0.1 N
NaOH 0.1 N
3) Explicar la coincidencia o no, entre sus resultados y el clculo terico.

4) Explicar los resultados con base en la teora.
EXPERIMENTO 4. CURVAS DE TITULACIN.
Aadir 30 mL de solucin de glicina 0.1 N en un vaso de precipitados de 150 mL, con la ayuda de su
Profesor agregar una barra magntica y colocar sobre una placa de agitacin, medir el pH y sin retirar el
electrodo titular con NaOH 0.1 N como se encuentra indicado en la tabla y registrar sus resultados.

=
13
Aadir 30 mL de solucin de glicina 0.1 N en otro vaso de precipitados de 150 mL, con la ayuda de su
Profesor agregar una barra magntica y colocar sobre el agitador, medir el pH y sin retirar el electrodo
titular con HCl 0.1 N, como se encuentra indicado en la tabla y registrar sus resultados.
Titulacin con
Titulacin con
Glicina 0.1 N
Glicina 0.1 N
HCl 0.1N
NaOH 0.1 N
mL
Acumulativo
pH
mL
Acumulativo
14
14
19
19
24
24
25
25
26
26
27
27
28
28
0.5
28.5
0.5
28.5
0.5
29
0.5
29
pH
Evidencias de aprendizaje:
1) Graficar los valores acumulativos de HCl signo negativo y a los de NaOH signo positivo, en el eje de las
abscisas (X) y el pH en el eje de las ordenadas (Y).
2) Identificar en la grfica los valores de pK1 y pK2.
3) Calcular el punto isoelctrico (pI) sabiendo que:
pK1 + pK2
pI = ---------------2

=
14
PRCTICA No. 3
PROTENAS
Su nombre deriva del griego proteios que significa primordial o fundamental; contienen en su molcula C,
H, O, N y en ocasiones P y S. El nitrgeno constituye en promedio el 16%. Por hidrlisis dan aminocidos,
los cuales varan en nmero, cantidad y posicin en cada protena. La actividad de una protena depende de
su conformacin espacial, por lo que agentes fsicos y qumicos que alteran los diferentes enlaces son
capaces de anularla. Algunos de los agentes desnaturalizantes ms comunes son cidos o bases, detergentes,
metales pesados, solventes orgnicos, alcaloides, calor, radiaciones ultravioleta, rayos x, ondas ultrasnicas,
sales inorgnicas, sustancias orgnicas como urea, guanidina, agentes reductores, agentes oxidantes, etc. Las
protenas desnaturalizadas pierden su actividad, modifican su solubilidad y precipitan. Tal como existen en la
naturaleza se denominan protenas nativas. Las propiedades fisicoqumicas y biolgicas caractersticas de las
protenas se deben a los aminocidos que las constituyen y las reacciones coloridas que se utilizan para su
anlisis en realidad detectan la presencia de un aminocido especfico. Muchas de las propiedades qumicas
de las protenas son comunes a varias especies por que contienen el mismo tipo de aminocidos, por lo que
para caracterizar una protena es necesario estudiar sus propiedades fisicoqumicas las cuales dependen del
peso molecular, de su carga elctrica neta y de la conformacin que adopte la molcula.
REACCIONES QUMICAS.
REACCIN DE MILLN: Es especfica para el grupo fenlico y por lo tanto, la dan positiva todas las
sustancias que poseen esta funcin, como el fenol, cido saliclico, timol, tirosina y todas aquellas
protenas que contengan tirosina.
REACCIN DEL BIURET: Todas las molculas que contengan dos o ms uniones peptdicas, por lo
tanto todas las protenas y pptidos no menores de 3 unidades, dan positiva la reaccin del biuret. El
nombre se debe al compuesto biurea (NH2-CO-NH-CO-NH2) el cual da positiva la prueba. Cuando una
protena o un polipptido se hacen reaccionar con sulfato CuSO4 en solucin alcalina se produce un color
caracterstico prpura o violeta. El color se debe a un complejo que resulta al unirse el cobre con los
tomos de nitrgeno de los enlaces peptdicos. Esta reaccin nos sirve para diferenciar las protenas y
pptidos de los aminocidos y su utilidad principal es la de seguir el proceso de hidrlisis, la reaccin ser
negativa cuando la hidrlisis sea completa.
REACCIN DE AMINOCIDOS AZUFRADOS: Las protenas que contengan los aminocidos cistena
y cistina cuando se tratan con lcalis concentrados, desprenden H2S, el cual se puede reconocer por su olor

=
15
desagradable y caracterstico, o bien, por la formacin de un precipitado negro de PbS al reaccionar con
(CH3COO)2Pb.
REACCIN XANTOPROTICA: Esta reaccin se debe a la formacin de nitroderivados aromticos por
reaccin del cido ntrico sobre grupos aromticos que poseen algunos aminocidos como la fenilalanina,
la tirosina y el triptfano. Por lo tanto, la dan positiva todas aquellas protenas que tengan aminocidos
aromticos en su molcula.
REACCIN DE NINHIDRINA: Es una de las reacciones ms sensibles para identificar aminocidos en
general, ya que detecta una parte de aminocido en 1 500 000 partes de agua. Aminocidos y muchas
aminas primarias dan un color violeta caracterstico. La prolina da coloracin amarilla. Por su sensibilidad
esta reaccin se emplea para valoracin cuantitativa de aminocidos por colorimetra.
PROPIEDADES FISICOQUMICAS.
DESNATURALIZACIN DE PROTENAS: Cuando la estructura altamente ordenada de una protena se
somete a la accin de agentes fisicoqumicos desnaturalizantes, queda reducida al llamado polmero
estadstico o cadena de aminocidos y adems pierde toda actividad biolgica. Algunos de los agentes
desnaturalizantes ms importantes son los metales pesados, los cidos fuertes y el alcohol.
PRECIPITACIN DE PROTENAS POR METALES PESADOS: Las protenas cuando se encuentran en
solucin a pH superiores a su punto isoelctrico son capaces de reaccionar con diferentes metales pesados
formando los correspondientes proteinatos insolubles. Tomaremos como ejemplo dos protenas, la
peptona y la gelatina y observaremos su reaccin, en forma simultnea frente a los metales pesados: Fe,
Ag, Hg, y Pb.
PRECIPITACIN DE PROTENAS POR EFECTO DE CIDOS FUERTES: Los cidos fuertes son
capaces de desnaturalizar a las protenas formando productos de desnaturalizacin insolubles conocidos
como metaprotenas.
PUNTO ISOELCTRICO: Las protenas al igual que los aminocidos son molculas anfteras. Es decir,
pueden reaccionar con cidos o con lcalis. En medio cido las protenas se combinan con los iones hidrgeno
y quedan con carga positiva. En medio alcalino liberan protones y quedan con carga negativa. El pH en el cual
una protena no posee carga elctrica neta se denomina punto isoelctrico, a este pH la protena presenta su
mnima solubilidad y generalmente precipita, teniendo adems una viscosidad mxima.

=
16
EXPERIMENTO 1. REACCIN DE MILLN.

Preparar una serie de 5 tubos de ensayo, etiquetar y enumerar del 1 al 5, colocar en cada tubo 2 mL de las
soluciones siguientes:
Tubo
1
2
3
4
5
Soluciones
Agua
Peptona al 2%
Casena al 2%
Gelatina al 2%
Albmina al 2%
Aadir 5 gotas del reactivo de Milln.

Incubar en bao Mara a ebullicin durante 10 minutos. PRECAUCIN!
La presencia de tirosina se pone de manifiesto por la aparicin de un precipitado blanco el cual por accin del
calor se vuelve rojo. La presencia de sales y soluciones muy alcalinas, pueden interferir en esta reaccin.
Evidencias de aprendizaje
1) Registrar sus resultados en la tabla que se encuentra al final de esta prctica.
2) Ilustrar sus resultados.
3) Escribir la composicin del reactivo de Milln y explicar cul es el mecanismo propuesto para esta reaccin.
EXPERIMENTO 2. REACCIN DEL BIURET.
Preparar una serie de 5 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 5, aadir 1 mL de las siguientes
soluciones:
Tubo
1
2
3
4
5
Soluciones
Agua
Peptona al 2%
Casena al 2%
Gelatina al 2%
Albmina al 2%
Aadir 2 mL de solucin de NaOH al 10% PRECAUCIN!

Agregar de 3 a 5 gotas de solucin de CuSO4 al 1%.
Agitar los tubos y observar la reaccin que se produce en cada caso. La aparicin de una coloracin
violeta o rosa en no ms de 20 minutos debe considerarse como prueba positiva.
=
17
2) Ilustrar sus resultados

3) Se puede considerar la reaccin del Biuret como caracterstica para todas las protenas? Por qu?
4) Escribir la reaccin.
EXPERIMENTO 3. REACCIN XANTOPROTICA.
Preparar una serie de 5 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 5, aadir en cada uno 2 mL de las
Tubo
1
2
3
Soluciones
Agua
Peptona al 2%
Casena al 2%
4
5
Gelatina al 2%
Albmina al 2%
Aadir 1 mL de HNO3 concentrado CON CUIDADO!

Incubar en bao Mara a ebullicin durante 2 minutos. Observar una coloracin amarilla caracterstica.
Enfriar esta solucin y aadir 3 gotas de NH4OH concentrado, hacindolas resbalar cuidadosamente por
las paredes del tubo, para estratificar.
Observar un anillo naranja en la interfase.
2) Ilustrar sus resultados
3) Escribir la reaccin.
4) Se puede considerar esta reaccin general para todas las protenas?
5) Explicar por qu se tie de amarillo la piel al contacto con el HNO3.
EXPERIMENTO 4. REACCIN DE AMINOCIDOS AZUFRADOS.
Preparar una serie de 5 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 5, aadir en cada uno 2 mL de las
Tubo
1
2
Soluciones
Agua
Peptona al 2%
3
4
5
Casena al 2%
Gelatina al 2%
Albmina al 2%

=
18
Agregar 2 mL de NaOH al 10% a cada tubo. PRECAUCIN!

Incubar en bao Mara a ebullicin durante 2 minutos.
Aadir a todos los tubos 0.5 mL de solucin de Pb(CH3COO)2.
Colocar los tubos en bao Mara a ebullicin por 10 min. El oscurecimiento de la solucin o la formacin
de un precipitado negro indica la presencia de aminocidos azufrados.
2) Escribir la reaccin qumica que se ha efectuado.
4) Qu sustancias pueden interferir en esta reaccin?
EXPERIMENTO 5. REACCIN DE NINHIDRINA.
Emplear 6 cuadros de papel filtro Whatman No. 1 de medidas 2 x 2 cm sobre una hoja blanca y numerar
del 1 al 6 sobre la misma hoja.
Agregar 1 gota de las soluciones siguientes:
Papel
1
2
Soluciones
Agua
Prolina al 2%
3
4
5
6
Peptona al 2%
Casena al 2%
Gelatina al 2%
Albmina al 2%
PRECAUCIN! Usar guantes o pinzas para manipular el papel.

Aadir una gota de solucin de Ninhidrina en butanol al 0.1%.
Colocar el papel en el horno a 110 C durante 10 minutos. PRECAUCIN! Avisar a su Profesor.
Registrar sus resultados.
1) Describir el aspecto de la reaccin.
5) Qu sustancias dan positiva la reaccin de la Ninhidrina, adems de las protenas, pptidos y
aminocidos?
=
19
EXPERIMENTO
6.
PRECIPITACIN
DE
PROTENAS
POR
METALES
PESADOS.
(PROPIEDADES FSICOQUMICAS DE LAS PROTENAS)

Preparar una serie de 4 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 4, agregar 1 mL de peptona al 2% a
cada tubo. Rotlelos como P1P4 (P=peptona).
Preparar una serie de 4 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 4, agregar 1 mL de gelatina al 2% a
cada tubo. Rotlelos como G1G4 (G=gelatina).
A los tubos 1 agregar 2 gotas de solucin de FeCl3 al 2%
A los tubos 2 agregar 2 gotas de solucin de AgNO3 al 2%
A los tubos 3 agregar 2 gotas de solucin de HgCl2 al 2%
A los tubos 4 agregar 2 gotas de solucin de Pb(CH3COO) 2 al 2%
Observar y registrar los cambios; posteriormente agregar un exceso de 5 gotas a cada tubo y repita la
observacin.
1) Registrar sus observaciones en la tabla, evaluando por medio de cruces (de x a xxx segn la turbiedad del
precipitado).
2 gotas
5 gotas
Solucin
Serie P
Serie G
Serie P
Serie G
FeCl3
AgNO3
HgCl2
Pb(CH3COO) 2
3) Tiene alguna influencia el pH en el efecto de los metales pesados sobre las protenas?
4) Tienen todos los metales pesados el mismo efecto precipitante sobre las protenas?
EXPERIMENTO 7a. PRECIPITACIN DE PROTENAS POR EFECTO DE CIDOS FUERTES.
Prepare una serie de 4 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 4, al tubo 1 agregue 2 mL de peptona
al 2%, al tubo 2 agregue 2 mL de casena al 2%, al tubo 3 agregue 2 mL de gelatina al 2% y al tubo 4
agregue 2 mL de albmina al 2%. Seguidamente, aada a cada tubo estratificando 2 mL de CCl3COOH al
5%. Observe y registre sus resultados.
=
20
2) Registrar sus resultados valorando la turbidez con cruces (de cero a tres cruces) en la siguiente tabla:
Sustancia
CCl3COOH
Peptona
Gelatina
Casena
Albmina
3) Cmo puede explicar el efecto desnaturalizante del CCl3COOH y en general de cualquier cido?
EXPERIMENTO 7b. PRECIPITACIN DE PROTENAS EN ORINA
Preparar 2 tubos de ensayo, etiquetar y marcar como orina normal y orina de paciente nefrtico, agregar
3 mL de la orina correspondiente a cada tubo.
Aadir 2 mL de la mezcla HNO3-metanol resbalando lentamente por la pared de los 2 tubos, para estratificar.
1) Observar, ilustrar y describir lo que sucede en la interfase.
2) Explicar el fenmeno observado.
EXPERIMENTO 8. PRECIPITACIN DE PROTENAS POR EFECTO DEL ALCOHOL.
Preparar una serie de 4 tubos de ensayo, etiquetar y numerar, al tubo 1 agregue 2 mL de peptona al 2%, al
tubo 2 agregue 2 mL de casena al 2%, al tubo 3 agregue 2 mL de gelatina al 2% y al tubo 4 agregue 2 mL
de albmina al 2%.
Agregar cuidadosamente 3 mL de CH3CH2OH al 96, observar que sucede en la interfase.
1) Observa turbidez en todos los tubos?
2) Registrar los resultados valorando la turbidez con cruces (de cero a tres cruces) en la siguiente tabla:
Sustancia
Peptona
Gelatina
CH3CH2OH
Casena
Albmina
EXPERIMENTO 9. DETERMINACIN DEL PUNTO ISOELCTRICO DE LA CASENA.
Preparar una serie de 9 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 9.
Agregar los reactivos, segn se indica en la tabla siguiente:
=
21
Tubo
Agua destilada
mL 8.4
7.8
8.8
8.5
8.0
7.0
5.0
1.0
7.4
cido actico 1N
mL
1.6
cido actico 0.1N
mL
0.2
0.5
1.0
2.0
4.0
8.0
cido actico 0.01N
mL 0.6
1.2
Casena al 5% en acetato de sodio 0.1N
mL
Agitar los tubos y observe el grado de turbidez o la precipitacin que se produce en el tiempo cero (en el
momento) y despus de 15 y 30.
1) Ilustrar los resultados.
2) Registrar sus observaciones en la tabla valorando con cruces.
3) Calcule el pH terico de cada tubo, aplicando la ecuacin de Henderson-Hasselbalch y registrelo en la tabla.
Tubo
pH terico
Observacin al tiempo cero
Observacin a los 15 minutos
Observacin a los 30 minutos
4) Cul es el punto isoelctrico de la casena? Discuta sus resultados comparando con el terico.
TABLA DE RESULTADOS DE ALGUNAS PROPIEDADES QUMICAS DE LAS PROTENAS

SUSTANCIA
REACCIN
Millon
Biuret
Xantoprotica
Agua
Glicina
Prolina
Peptona
Gelatina
Casena
Albmina

=
22
a.a. azufrados
Ninhidrina
PRCTICA No. 4
CINTICA QUMICA Y CATLISIS
De acuerdo con la Ley de Accin de Masas, la velocidad de una reaccin qumica depende de la
concentracin de las sustancias que intervienen en la reaccin. Esta Ley establece que: La magnitud de
una reaccin es proporcional a la masa activa de las sustancias reaccionantes presentes en ese
momento. El trmino masa activa significa la concentracin molecular o sea, la cantidad presente por
unidad de volumen. Si reaccionan:
V1
A + B C + D
V2
La velocidad V1 con que reaccionan A y B para producir C y D depende de la concentracin de cada reactivo
y de la afinidad que tengan para reaccionar entre s, pero como esto se puede considerar constante, podemos
decir que: V1 = k1[A][B].
La velocidad V2 con que reaccionan C y D para producir A y B depende a su vez, de la concentracin de C y

D y de la afinidad. Por lo tanto podemos decir tambin que: V2 = k2[C][D]. Cuando se alcanza el equilibrio
qumico, las dos velocidades son iguales. Es decir: V1 = V2
Sustituyendo estos valores por sus equivalentes, tenemos:
k1[A][B] = k2[C][D]
k1
[C][D]
---- = --------k2
[A][B]
Como el cociente de dos constantes es siempre igual a una constante podemos decir que:
[C][D]
keq = --------[A][B]
Que es la expresin matemtica de la Ley de Accin de Masas y keq se conoce como Constante de Equilibrio.

=
23
VELOCIDAD DE UNA REACCIN QUMICA

Las reacciones qumicas de acuerdo al nmero de molculas que toman parte de ellas se clasifican en:
Monomoleculares: Cuando participa una sola molcula. Ejemplo: A B
Bimoleculares:
Cuando participan dos molculas. Ejemplo: A + B AB
Trimoleculares:
Cuando participan tres molculas simultneamente. Ejemplo: A + B + C ABC
Las reacciones trimoleculares son muy raras y reacciones de ms de tres reaccionantes no se conocen.
Cuando se estudia la cintica de una reaccin, tiene ms importancia conocer el orden de la reaccin que el
tipo. El orden de una reaccin nos indica la relacin entre la velocidad y la concentracin de los reactivos,
por lo que se clasifican en:
Reacciones de orden cero.
Su velocidad no es afectada por la concentracin. Est determinada por algn

otro factor limitante como absorcin de luz, velocidad de difusin, etc.
Reacciones de primer orden.
Su velocidad de reaccin es directamente proporcional a la concentracin de

una de las sustancias reaccionantes.
Reacciones de segundo orden. Su velocidad de reaccin es proporcional a la concentracin de dos

sustancias reaccionantes.
Reacciones de tercer orden.
Su velocidad de reaccin es proporcional a la concentracin de tres

sustancias reaccionantes.
La mayor parte de las reacciones enzimticas se caracterizan por seguir el modelo correspondiente a las
reacciones de primer orden. Matemticamente la reaccin puede representarse as:
dc
----- = Ke
dt
dt = tiempo, dc = concentracin del material, Ke = constante especfica de velocidad de reaccin
Si representamos por a la concentracin inicial de material y por x la cantidad que ha reaccionado en el

tiempo t, la expresin a-x significa concentracin del material en el tiempo t. La ecuacin anterior puede
expresarse en funcin de a, x y t y al integrarla nos queda:
2.303
Ke =------------ x log -------(a x)
Cuando se ha completado la descomposicin de la mitad del material, la ecuacin se simplifica y queda:

=
24
2.303 (log 2)
Ke =------------------------t1/2
Donde t1/2 es el perodo de vida media, es decir, el tiempo necesario para que se descomponga la mitad de
una cantidad dada de material reaccionante.
Desde hace muchos aos se saba en forma emprica que la velocidad de muchas reacciones aumenta al
aumentar la temperatura. Arrhenius encontr una relacin que expresa matemticamente la forma como la
temperatura afecta la velocidad de una reaccin, la cual est dada por la siguiente ecuacin:
d(ln K)
E
----------- = ---------dt
RT2
La cual indica que el cambio en el logaritmo natural de la constante de velocidad de una reaccin es
inversamente proporcional al cuadrado de la temperatura absoluta multiplicada por la constante de los gases.
E es la energa de activacin. Actualmente se considera que para que las molculas puedan reaccionar deben
ser primero activadas, es decir, requieren una cantidad de energa E. Integrando entre lmites la ecuacin de
Arrhenius:
K2
E (t2 - t1)
log ------- = ------------K1
2.3 (R t1 t2)
K2
E (t2 - t1)
log ------- = ---------------K1
2.3 (1.99) (t1 t2)
K2
0.219E (t2 - t1)
log ------- = ---------------------K1
(t1 t2)
Si consideramos que E = 1200 caloras al aumentar la temperatura de 22C a 32C, tendramos:
K2
0.219 x 1200 x (305 - 295)
log ------- = --------------------------------------- = 0.29
K1
(295 x 305)
K2
antilog log ------- = antilog 0.29
K1

=
25
K2
------- = 2
K1
Esto quiere decir que por cada 10C de aumento la velocidad de la reaccin se duplica. En la mayor parte de
las reacciones se observa este aumento bajo ciertas temperaturas lmites.
Se sabe que muchas reacciones qumicas son afectadas por el pH del medio o el aumento de [H+], sobre todo
aquellas en las que participan cidos. Actualmente se acepta que las molculas deben ser activadas antes de
que puedan reaccionar. Aparentemente el pH cido favorece la ionizacin y el estado inico se puede
considerar como un estado activado.
La velocidad de una reaccin qumica frecuentemente es afectada por la presencia de sustancias extraas
que permanecen inalteradas al terminar la reaccin. Cualquier sustancia que sea capaz de acelerar una
reaccin qumica y que no sea consumida por ellas, se denomina catalizador y el proceso se conoce con el
nombre de catlisis. La funcin de un catalizador es disminuir la energa de activacin, por lo que las
molculas son activadas con menor cantidad de energa producindose reacciones ms rpidas. En un
principio se supuso que los catalizadores actuaban por presencia. Es decir, que no intervenan en los
procesos que catalizaban. Sin embargo, actualmente se acepta que el catalizador se combina con el sustrato
formando un complejo intermediario inestable y altamente reactivo. Supongamos la reaccin: A + B AB.
Esta reaccin en condiciones normales se efecta muy lentamente pero si se aade un catalizador C
apropiado, tenemos: A + B + C (AC) + B AB + C. Estas reacciones son rpidas y el catalizador
puede ser usado una y otra vez. Estas sustancias pueden ser de naturaleza inorgnica o bien sustancias
orgnicas complejas producidas por las clulas y son denominadas enzimas. La sacarosa es un disacrido no
reductor, pero al hidrolizarse, cada molcula libera una molcula de glucosa y una de fructosa, ambas
reductoras. Basndose en esto es posible visualizar y cuantificar la hidrlisis de la sacarosa midiendo la
concentracin de azcares reductores con algn reactivo apropiado. Una de las principales diferencias entre
los catalizadores inorgnicos y las enzimas es que los primeros solo son capaces de acelerar un proceso que
ya est en marcha, mientras que las enzimas son capaces de iniciar una nueva reaccin. Para esta prctica
emplearemos como enzima la sacarasa, tambin conocida como invertasa o fructofuranosidasa la cual es
una de las enzimas mejor conocidas y estudiadas. Acta hidrolizando los azcares que contienen fructosa.
As hidroliza la estaquiosa (tetrasacrido), la rafinosa (trisacrido), y alcanza su mxima velocidad con la
sacarosa (disacrido). Se puede medir la hidrlisis observando el cambio en la rotacin ptica o valorando el
poder reductor de los productos obtenidos.

=
26
EXPERIMENTO 1. COMPROBACIN DE LA LEY DE ACCIN DE MASAS.

Agregar en un vaso de precipitado de 250 mL de capacidad: 100 mL de agua destilada, 1 mL de solucin
de sulfocianuro de amonio (NH4SCN) 0.2 M y 1 mL de solucin de cloruro frrico (FeCl3) 0.2M en HCl
0.1N mezclando hasta lograr la completa homogeneidad. Observar la aparicin de una coloracin roja,
debido a la formacin de sulfocianuro frrico (Fe(SCN)3).
Aadir en cuatro frascos de gerber 25 mL en cada uno la mezcla reaccionante anterior, enseguida agregar
a cada vaso los reactivos descritos en la tabla siguiente.
Frasco
Reactivo
FeCl3 0.2M en HCl 0.1N
NH4SCN 0.2M
NH4Cl
0.5 mL
0.5 mL
--
1.0 mL
1.0 mL
--
--
--
5.0 mL
Testigo
--
Registre sus observaciones para el reporte de laboratorio.

Evidencia de aprendizaje
2) Describir que observ de acuerdo a la intensidad de la coloracin en cada frasco y segn a la Ley de
Accin de Masas y al principio de Le Chatelier, explique el fenmeno.
EXPERIMENTO 2. VELOCIDAD DE DESCOMPOSICIN DEL PERXIDO DE HIDRGENO (H2O2).
Colocar un dispositivo de titulacin. Llenar la bureta de 25 mL con una solucin de permanganato de
potasio (KMnO4) 0.01M.
Depositar en un matraz Erlenmeyer de 250 mL un volumen de 5 mL de una solucin problema de H2O2
(pregunte a su profesor) y 2 mL de H2SO4 (1:6). PRECAUCIN!
Calentar la mezcla en un soporte universal con tela de asbesto hasta casi ebullicin y en caliente titule. El
punto final de la titulacin lo observar cuando persista un ligero color rosa, por exceso de la solucin de
permanganato. El H2SO4 y el calentamiento tienen por objeto impedir la formacin de MnO2. Haga esta
determinacin por duplicado y calcule el promedio de las dos determinaciones (esta ser su concentracin
del problema al tiempo cero).
Preparar una mezcla de 50 mL de sangre desfibrinada al 0.06% y 50 mL de una solucin problema de
perxido de hidrgeno, al momento de realizar la mezcla comienza a contar el tiempo.

=
27
Depositar alcuotas de 10 ml de la mezcla de reaccin en un matraz Erlenmeyer a los 5, 10, 20, 30 y 40

minutos para titular en cada caso, recordando agregar 2 mL de solucin de H2SO4 (1:6), calentar hasta
ebullicin y titular en la forma ya explicada.
1) Registrar sus resultados en la siguiente tabla para el reporte de laboratorio:
Tiempo/seg
(a x) moles/litro
KMnO4 0.01M/mL
log a/(a-x)
Ke
0
300
600
1200
1800
2400
2) Determinar el orden de reaccin grficamente. Para calcular la Ke a cada tiempo se debe utilizar la
ecuacin:
2.303
Ke = ------------ x log ----------------(a x)
t
3) Escribir las reacciones qumicas que se han efectuado.
EXPERIMENTO 3. INFLUENCIA DE LA TEMPERATURA SOBRE LA VELOCIDAD DE UNA

REACCIN QUMICA.
Disponer de baos Mara a diferentes temperaturas (una por equipo) pregunte al Profesor.
Aadir 0.25 g de yoduro de potasio (KI) y agregar 25 mL (medir con PROBETA) de solucin de H2SO4
1:6 en un vaso de precipitado de 100 mL.
Agitar hasta disolucin completa y agregar agua destilada completando a 50 mL (medir con PROBETA).
Esta solucin se denominar Solucin de cido yodhdrico (HI, rotlelo con este nombre). Nota:
Considere que se utilizar en este experimento (25 mL) y en el siguiente (25 mL).
Preparar una serie de 5 tubos de ensaye, etiquetar y numerar del 1 al 5, agregar los reactivos que se
muestra en la tabla siguiente y preincube cada tubo segn corresponda.

=
28
Tubo
Solucin
HI
mL
Na2S2O3 0.02N
(tiosulfito de sodio)
mL
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
Almidn
No. gotas
5 C
25 C
40 C
60 C
90 C
Preincubar 5 minutos a:
Agregar a cada tubo H2O2 al 0.2% como se indica en la tabla, considere realizar cada tubo por separado
con el objetivo de poder medir con mayor precisin posible el tiempo en que aparece sbitamente un color
azul intenso.
Tubo
mL
Solucin
H2O2 al 0.2%
1. Registrar sus resultados en la tabla para el reporte de laboratorio:
Temperatura
(C)
Tiempo de aparicin del color azul

(segundos)
5
25
40
60
90
2. Escribir las reacciones qumicas que se han efectuado.
3. Trazar la grfica de 1/tiempo de reaccin en las ordenadas contra la temperatura en las abscisas.
EXPERIMENTO 4. EFECTO DE LA [H+] SOBRE LA VELOCIDAD DE UNA REACCIN QUMICA.

Prepare una serie de 5 tubos de ensaye, etiqutelos y numrelos del 1 al 5.
Agregue los reactivos segn se indica en la tabla siguiente:

=
29
Frasco
HI
mL
Na2S2O3 0.02N
mL
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
gotas
H2O destilada
mL
HCl
0.01N
mL
HCl
0.1N
mL
HCl
1N
mL
HCl
2N
mL
Solucin
Almidn
5
5
5
5
Agregar a cada tubo H2O2 al 0.2% como se indica en la tabla, considere realizar cada frasco por separado
con el objetivo de poder medir con mayor precisin posible el tiempo en que aparece sbitamente un color
azul intenso.
Frasco
mL
Solucin
H2O2 al 0.2%
1) Registrar sus resultados en la siguiente tabla para el reporte de laboratorio:
Tiempo de reaccin
[H+]
(segundos)
1 x 10-7
1 x 10-2
1 x 10-1
1
2
2) Trazar una grfica con el 1/tiempo en segundos en las ordenadas y la concentracin de H+ en las abscisas
segn los resultados obtenidos.

=
30
EXPERIMENTO 5. EFECTO DE UN CATALIZADOR INORGNICO SOBRE LA VELOCIDAD

DE HIDRLISIS DE LA SACAROSA
Preparar dos tubos de ensayo y aadir en cada uno 2 mL de solucin de sacarosa 0.05M.
Un tubo quedar como testigo (etiquetar con la inicial T) y al otro se agregar 3 gotas de cido sulfrico
1:6 (etiquetar como H2SO4).
Incubar en bao Mara a ebullicin durante 15 minutos.
El tubo que contiene H2SO4 neutralizar con 1 mL de Hidrxido de Sodio al 10%.
Aadir al tubo testigo el reactivo de Fehling, agregando 2 mL de la solucin A ms 2 mL de la
solucin B. Repetir este mismo paso para el tubo que contiene cido sulfrico 1:6.
Incubar ambos tubos en bao Mara a ebullicin por 10 minutos al cabo de los cuales se retiran del
bao, dejndose enfriar. Observar si existe un precipitado rojo de xido cuproso (Cu2O) en ambos tubos y
anote sus resultados.
1) Se puede considerar al H2SO4 como un catalizador? Por qu?
EXPERIMENTO 6. EFECTO DE UN CATALIZADOR BIOLOGICO (ENZIMA) SOBRE LA

VELOCIDAD DE HIDRLISIS DE LA SACAROSA
Preparar dos tubos de ensayo, aadir a un tubo 2 mL de solucin de sacarosa 0.05M y 1 mL de solucin
reguladora o buffer de acetato de sodio 0.05M a pH de 4.7. Repetir este mismo paso para el otro tubo.
Un tubo quedar como testigo (etiquetar con la inicial T) y al otro aadir 0.2 mL de solucin de invertasa
(etiquetar como Invertasa), mezclando bien el contenido del tubo.
Incubar en bao Mara a 40C durante 15 minutos.
Aadir al tubo testigo el reactivo de Fehling, agregando 2 mL de la solucin A ms 2 mL de la
solucin B y agitar hasta que se mezcle bien. Repetir este mismo paso para el tubo que contiene la
invertasa.
Incubar ambos tubos en bao Mara a ebullicin por 10 minutos al cabo de los cuales se retiran del
bao, dejndose enfriar. Observar si existe un precipitado rojo de xido cuproso (Cu2O) en ambos tubos y
anote sus resultados.
1) Comparar este experimento con el anterior y explique qu sucede.

=
31
PRCTICA No. 5
CINTICA ENZIMTICA
FACTORES QUE MODIFICAN LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
La vida depende de una serie de reacciones qumicas cuyo curso y velocidad estn determinados por la presencia
de diversos catalizadores orgnicos denominados enzimas: (del griego en = en, zymo = fermento). La mayor parte
de las reacciones biolgicas seran cinticamente insignificantes si no fuera por las enzimas. Las enzimas desde el
punto de vista qumico son compuestos que pertenecen al grupo de las protenas (aunque algunas solo funcionan
asociadas a un grupo no proteico, grupo prosttico o coenzima). Debido a su carcter protenico, las enzimas son
muy sensibles a cualquier cambio fsico, qumico, o fisicoqumico. As, cualquier cambio en la temperatura, en el
pH, en la fuerza inica, la adicin de sales, la presencia de agentes oxidantes o reductores, la presencia de metales
pesados, etc., producen modificaciones profundas en su actividad. En general, cualquier factor que sea capaz de
desnaturalizar a las protenas ser capaz de alterar su actividad.
NATURALEZA QUMICA DE LAS ENZIMAS
Estructuralmente todas las enzimas son protenas simples o complejas. La parte protenica de las enzimas se
denomina apoenzima, la parte no protenica puede ser coenzima, si se separa fcilmente de la protena. Las
coenzimas pueden ser comunes a varias enzimas y no actan como catalizadores ya que se transforman en la
reaccin que catalizan y requieren de otra enzima para regenerar su actividad. La mayor parte de las
coenzimas estn relacionadas con las vitaminas. Si la parte no protenica se encuentra firmemente unida a la
protena por enlace covalente y no es posible separarla por dilisis, se denomina grupo prosttico. Hay
varios factores que afectan la velocidad de una reaccin catalizada por enzimas. Algunos de ellos son:
temperatura, pH, concentracin de sustrato, concentracin de enzima e inhibidores.
Temperatura. La velocidad de las reacciones qumicas aumenta al incrementar la temperatura, originando
aumento en la energa cintica y en las velocidades medias de las molculas con el resultado de una mayor
probabilidad de colisiones efectivas. Sin embargo, las enzimas se inactivan y desnaturalizan a temperaturas
elevadas. La mayor parte de las enzimas tienen una temperatura ptima, en la cual catalizan con una
velocidad mxima.
pH. La actividad de la mayora de las enzimas depende del pH debido a la participacin de iones [H+] o iones
[OH-] en las reacciones, adems que se afecta la de los grupos funcionales. La mayora de las enzimas tienen
un pH ptimo en el cual su actividad es mxima.

=
32
Concentracin de la enzima. La velocidad de una reaccin aumenta en proporcin directa a la concentracin

de la enzima que la cataliza. La interaccin enzima substrato cumple la Ley de Accin de Masas. Se emplea
con frecuencia la velocidad de una reaccin como medida de concentracin de la enzima manteniendo fija la
concentracin de substrato.
Concentracin de sustrato. Si se trabaja con una concentracin fija de enzima la velocidad inicial de
reaccin aumenta incrementando la concentracin del sustrato. Con el tiempo se alcanza un mximo y la
adicin de ms sustrato ya no influye sobre la velocidad, ya que la enzima se satur.
La velocidad de cualquier reaccin cambia al modificarse la temperatura (T), debido a los cambios de
energa cintica. Generalmente por cada 10 grados centgrados de aumento en la T se duplica la velocidad,
esto se conoce como la relacin de Vant Hoff o coeficiente de temperatura QT10. Sin embargo, debido a la
constitucin protenica de las enzimas, las temperaturas altas pueden producir desnaturalizacin y una
disminucin marcada en la actividad cataltica. Para la gran mayora de enzimas de animales homeotermos,
la T ptima est alrededor de 37C; cerca de los 60C la mayor parte de las enzimas se inactivan, hecho que
se aprovecha en la tcnica de pasteurizacin.
El pH es uno de los factores que ms afecta la actividad de las enzimas, ya que puede afectar la estabilidad
de la molcula por desnaturalizacin o bien afectar su carga elctrica. Muchos de los grupos ionizables
presentes en la molcula de la enzima pueden ser necesarios para la catlisis y los cambios de pH afectan el
grado de ionizacin. Para que se realice la unin en el complejo enzimasustrato (ES) es necesaria una
adecuada distribucin de cargas en ambas molculas. El pH ptimo es aquel en el cual ciertos grupos
funcionales poseen la carga apropiada para asegurar la formacin del complejo ES en las mejores
condiciones. Adems, como ya se mencion, los pH extremos provocan desnaturalizacin de la molcula
enzimtica y por tanto inactivacin de la misma. Cada enzima posee un pH ptimo en el cual su actividad es
mxima, para la mayora de las enzimas la actividad ptima se encuentra entre los valores de pH= 6 a 8. Sin
embargo existen excepciones, por ejemplo, para la pepsina del jugo gstrico es mxima a un pH=1.5 que es
muy cido, o para la fosfatasa alcalina que se encuentra en huesos y otros rganos cuyo pH=9.5.
Actualmente se acepta que la reaccin enzimtica se efecta a travs de la formacin de un complejo enzimasustrato, lo cual puede representarse en forma muy simplificada as:
S + E [ES] P + E
Si [E] es la concentracin total de enzima y [ES] es la enzima combinada, entonces [E ES] es la
concentracin de enzima libre. Recordando la Ley de Accin de Masas, tenemos:
=
33
V1 = K1 [E ES] [ES];
V2 = K2 [ES];
V3 = K3 [ES]
La velocidad de formacin (Vf) del complejo [ES] depende de V1 mientras que la velocidad de degradacin
(Vd) depende de V2 + V3. Por lo tanto en el equilibrio tenemos:
Vf = Vd es decir: V1 = V2 + V3
Sustituyendo sus valores nos queda: K1[E ES] [S] = K2[ES] + K3[ES]. Dividiendo ambos miembros entre
K1 y [ES] nos queda:
K1[E ES] [S]
(K2 + K3)[ES]
---------------------------- = -----------------------------K1[ES]
K1[ES]
Simplificando:
[E ES] [S]
(K2 + K3)
------------------------ = ---------------------- = Km (Constante de Michaelis-Menten)
[ES]
K1
La constante de Michaelis Menten se utiliza como una medida de la afinidad entre la enzima y el sustrato,
aunque no es propiamente la constante de afinidad. La constante de Michaelis Menten (Km) se define como
la concentracin de sustrato cuando la reaccin adquiere la mitad de su velocidad mxima. Cuando esto
sucede: [E ES] = [ES]. Y por lo tanto, sustituyendo: Km = [S]. Si en una reaccin enzimtica se mantiene
constante la concentracin de la enzima y todos los dems factores que pueden modificar la actividad, se
observa experimentalmente que al aumentar la concentracin del sustrato, aumenta progresivamente la
velocidad de la reaccin hasta llegar a un mximo (velocidad mxima) despus del cual ya no se afecta la
velocidad aunque se trabaje a concentraciones ms altas de sustrato. En algunas enzimas se observa incluso
una disminucin en la actividad si se aumenta demasiado la concentracin de sustrato.
Durante mucho tiempo se pens que los catalizadores eran sustancias que actuaban por presencia debido a las
concentraciones tan pequeas y a que podan recuperarse inalterados al final de la reaccin. Sin embargo, se
sabe que la velocidad de reaccin de acuerdo a la Ley de Accin de Masas depende de su concentracin de
tal manera que la velocidad es directamente proporcional a la concentracin de enzima, lo que se expresa
como: V = K[E]. As que la grfica que se obtiene al expresar la velocidad de reaccin en funcin de la
concentracin de enzima es una recta con pendiente positiva.

=
34
EXPERIMENTO 1. EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Preparar una serie de 7 tubos de ensaye, etiquetar y numerar del 1 al 5.
Agregar los reactivos y preincubar, segn se indica en la tabla siguiente:
Tubos
Reactivos
Sustrato almidn 8 mg/mL en Buffer

de fosfatos 0.02M, pH=7
mL
---
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
Buffer de fosfatos 0.02M, pH = 7
mL
---
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
Agua destilada
mL
5.5
25C
5C
25C
40C
50C
60C
90C
Preincubar 5 minutos a
Posterior a este tiempo, agregar la enzima conservada en hielo, como se indica en la tabla siguiente:
Tubos
Reactivos
Enzima (sol. de amilasa)
mL
---
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
Agitar todos los tubos y colocar nuevamente cada tubo en su respectivo bao como se indic en la primera
tabla, incubar durante 15 minutos.
Agregar a todos los tubos, 1 mL del reactivo de cido 3,5 dinitrosaliclico (este reactivo desarrolla un
color rojo caoba en presencia de azcares reductores).
Agitar bien y colocar en bao Mara a ebullicin durante 10 minutos.
Retirar y enfrar en bao de hielo.
Leer en el espectrofotmetro a 540 nm, empleando el tubo 1 como blanco.
1) Registre sus resultados en la siguiente tabla para el reporte de laboratorio.
EFECTO DE LA TEMPERATURA EN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA
Tubo
Temperatura
Absorbancia
25 C
Blanco
5 C
25 C
40 C
50 C
60 C
90 C
2) Trazar una grfica con los datos obtenidos, donde la densidad ptica sern las ordenadas y la To las abscisas.
=
35
EXPERIMENTO 2. EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Tubos
Reactivos
Sustrato (sol. de almidn 8 mg/mL)
mL
Buffer de fosfatos al pH indicado

mL
---
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
Preincubar a 40C por 5 minutos

Agregar la enzima conservada en hielo, como se indica en la tabla siguiente:
Tubos
Reactivos
Enzima (sol. de amilasa)
mL
---
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
Agitar los tubos e incubar nuevamente en el bao Mara a 40oC, durante 15 minutos.
Agregar a todos los tubos, 1 mL del reactivo de cido 3,5 dinitrosaliclico.
Retirar y enfrar en un bao de hielo.
Determinar la densidad ptica en el espectrofotmetro a 540 nm empleando el tubo 1 como blanco.
1) Registrar sus resultados en la tabla siguiente para el reporte de laboratorio.
EFECTO DEL pH EN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA
TUBO
pH
D.O.
Blanco
2) Trazar la grfica correspondiente donde las densidades pticas sern las ordenadas y el pH las abscisas.
3) Basndose en sus resultados diga Cul es el pH ptimo de la amilasa?
4) Cul es el azcar que se libera en la hidrlisis de este polisacrido?

=
36
EXPERIMENTO 3. EFECTO DE LA CONCENTRACIN DEL SUSTRATO SOBRE LA

VELOCIDAD DE REACCIN
Tubo
1
2
3
4
Reactivos
Sustrato almidn 8 mg/mL en Buffer de
mL 0.5 1.0 2.0 3.0
fosfatos 0.02M, pH=7
Buffer de fosfatos 0.02M, pH=7
mL 7.0 6.5 5.5 4.5
Preincubar a 40C por 5 minutos
Tubo
Reactivos
Sol. de enzima (amilasa)
mL
4.0
5.0
7.5
---
3.5
2.5
0.0
8.0
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
---
Agitar todos los tubos e incubar nuevamente en el bao Mara a 40oC, durante 15 minutos.
Retirar y enfriar en un bao de hielo.
EFECTO DE LA CONCENTRACIN DEL SUSTRATO EN LA
ACTIVIDAD ENZIMATICA
Tubo
Concentracin de
Absorbancia
sustrato: mg/mL
1
0.5
2
1
3
2
4
3
5
4
6
5
7
7.5
8
-----Blanco
2) Trazar una grfica con los resultados obtenidos donde las densidades pticas sern las ordenadas y las
concentraciones del sustrato las abscisas.
3) Determinar el valor de KM para el sistema almidn/amilasa en estas condiciones. KM=____ mg de almidn/mL.
=
37
EXPERIMENTO 4. EFECTO DE LA CONCENTRACIN DE LA ENZIMA

Reactivos
Tubos
Sustrato almidn 8 mg/mL en Buffer de fosfatos 0.02M, pH=7 mL
---
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
Buffer de fosfatos 0.02M, pH=7
mL
Agua destilada
mL
4.8
4.6
4.2
3.4
5.5 4.9
Preincubar a 40C durante 5 minutos

Reactivos
Solucin de enzima (amilasa)
Tubos
mL
---
0.1
0.2
0.4
0.8
1.6
Agitar todos los tubos e incubar nuevamente en bao Mara a 40oC, durante 15 minutos.
Retirar y enfrar en un bao de hielo.
1) Registar sus resultados en la tabla siguiente para el reporte de laboratorio.
EFECTO DE LA CONCENTRACIN DE LA ENZIMA EN LA ACTIVIDAD
ENZIMTICA
Tubo
Concentracin de
enzima mg/mL
Absorbancia
-------
Blanco
0.1
0.2
0.4
0.8
1.6
2) Trazar una grfica con base en sus resultados con los valores de Absorbancia en las ordenadas y la
concentracin de enzima expresada en mg/mL en las abscisas e interpretar la grfica obtenida.

=
38
PRCTICA No. 6
GLCIDOS
Los glcidos o carbohidratos se definen como derivados aldehdicos o cetnicos reales o en potencia de
alcoholes polivalentes que poseen en su molcula uno o ms carbonos asimtricos. Estos compuestos se
encuentran presentes en todos los seres vivos, en cantidades variables, desempeando importantes funciones
estructurales y energticas. Debe recordarse que todas las propiedades qumicas de los glcidos dependen
de sus grupos funcionales, o sea, grupos alcohol y grupo carbonilo (aldehdico o cetnico). Los glcidos se
clasifican, segn el nmero de compuestos hidrocarbonados simples que los constituyen, en 3 grupos;
monosacridos, oligosacridos y polisacridos. Los monosacridos no se pueden desdoblar por hidrlisis en
compuestos ms sencillos. A su vez se subdividen, segn el nmero de carbonos que contengan, en: triosas,
tetrosas, pentosas, hexosas, etc. Los oligosacridos, por hidrlisis, dan pocas molculas de monosacridos.
En la naturaleza existen varios disacridos (sacarosa, lactosa, maltosa etc.) y unos cuantos trisacridos,
tetrasacridos y pentasacridos libres. Se pueden obtener por sntesis qumica en el laboratorio o por
degradacin hidroltica de polisacridos. Los oligosacridos poseen propiedades fsicas similares a las de los
monosacridos. Los polisacridos, por hidrlisis dan muchas molculas de monosacridos. Desde el punto
de vista fisiolgico se dividen en dos grupos; polisacridos estructurales y polisacridos de reserva. Entre
los primeros tenemos en vegetales: la celulosa, los cidos pecticos y las hemi celulosas. En animales los ms
importantes son los llamados mucopolisacridos, tales como el cido hialurnico y el condroitin sulfato,
abundantes en varios tejidos y lquidos como el cuerpo vtreo del ojo, el cordn umbilical, el lquido sinovial,
tendones, cartlagos, etc. Entre los polisacridos nutrientes o de reserva los ms importantes son, en
vegetales, los almidones e inulina y en animales, el glucgeno.
Los glcidos reciben este nombre debido a que la mayor parte de ellos se caracterizan por tener sabor dulce.
Sin embargo, esta propiedad la presentan solamente los mono y oligosacridos, ya que los polisacridos son
generalmente inspidos. Otras propiedades que nos permiten diferenciar glcidos de bajo peso molecular
(monosacridos y oligosacridos) de los de elevado peso molecular (polisacridos), son su solubilidad en
agua y su capacidad para cristalizar.
Las propiedades qumicas de los glcidos dependen de sus grupos funcionales. Todos los glcidos poseen en
su molcula grupos alcohol y grupos carbonilo, ya sean aldehdicos o cetnicos. Sin embargo, en algunos
glcidos estos grupos pueden estar bloqueados y por lo tanto, su reactividad qumica estar ausente. Una
caracterstica qumica de los aldehdos y cetonas es su carcter reductor, todos los monosacridos u
oligosacridos que tengan libre el grupo aldehdico o cetnico sern reductores, mientras que los
=
39
polisacridos y oligosacridos que tengan bloqueados estos grupos sern no reductores. Todos los glcidos
formados por varios azcares (oligo o polisacridos) se pueden hidrolizar por accin enzimtica o de cidos
dando como producto final los monosacridos y liberando los grupos reductores bloqueados. Existen varias
reacciones qumicas que se utilizan para la identificacin de los glcidos, algunas son generales y otras son
especficas para determinar tipo o incluso especficas para cada azcar. Entre las ms utilizadas tenemos: la
formacin de osazonas, esta reaccin es una de las de mayor utilidad para la identificacin de azcares por
ser especfica para cada azcar. La dan positiva tanto los monosacridos como los disacridos reductores
sirviendo para identificarlos el tiempo que tardan en formar la osazona correspondiente, la forma cristalina de
ellas, la solubilidad en caliente o en fro y los puntos de fusin.
Existen mtodos para la determinacin de las propiedades de los glcidos. Molish-Udranski es una reaccin
general para todos los glcidos, debido a que el cido sulfrico concentrado que contiene el reactivo hidroliza y
deshidrata a los azcares obtenindose furfural o hidroximetil furfural como producto final y estas sustancias
son capaces de reaccionar con el alfa naftol formando un compuesto colorido (violeta): Esta prueba es una de
las ms sensibles, la dan positiva soluciones de glucosa al 0.001%. Sin embargo, la reaccin no es especfica,
ya que la dan positiva los aldehdos, las cetonas, y algunos cidos orgnicos tales como el frmico, oxlico,
ctrico, etc. La reaccin de Fehling, se emplea para el anlisis cualitativo y cuantitativo de azcares se basan
en su propiedad reductora, aunque esta propiedad no sea especfica de ellos. Se sabe que los azcares
reductores son capaces de reducir diversos iones metlicos como el cobre, bismuto, mercurio, plata, etc.,
cuando se encuentran estos en solucin alcalina. Este tipo de reacciones son muy empleadas porque los
reactivos son estables, existe poca interferencia con otras sustancias, las reacciones son sensibles y puede usarse
la misma reaccin para un anlisis cualitativo o cuantitativo. El mecanismo de reaccin se lleva a cabo debido
a que algunos compuestos orgnicos que contienen uno o ms grupos alcohlicos en su molcula, en este
caso el tartrato de sodio, reaccionan en solucin alcalina con los hidrxidos metlicos, formando un complejo
soluble, el cual se disocia muy poco, pero los iones que deja en libertad son suficientes para que produzcan
las reacciones de coloracin. La formacin de este complejo es esencial para que se produzca un precipitado
con la mayor parte de los metales pesados. El reactivo de Barfoed es una solucin de acetato cprico en cido
actico y una vez ms, se determina la capacidad de los azcares para reducir el in cprico a cuproso (Cu2O).
Esta reaccin sirve para diferenciar un monosacrido de un disacrido, ya que los primeros a los tres minutos
reducen el reactivo y los disacridos necesitan ms tiempo para que se lleve a cabo la reaccin de reduccin,
ms o menos unos 15 minutos. La reaccin de Bial, sirve para diferenciar pentosas de hexosas, el reactivo
consiste en una solucin de orcinol en cido clorhdrico (HCl) concentrado con una pequesima cantidad de
cloruro frrico (FeCl3). El fundamento de esta reaccin, igual que la reaccin de Molisch, Seliwanoff y otras, se
=
40
basa en la produccin de furfural o hidroximetil furfural cuando se calienta con cidos concentrados y la
reaccin de estos con otras sustancias dando productos coloridos, en este caso las pentosas dan color azul y
las hexosas dan color amarillo o caf. La reaccin de Seliwanoff sirve para diferenciar aldosas de cetosas.
Las cetosas reaccionan rpidamente mientras que las aldosas lo hacen lentamente. El reactivo es una
solucin de resorcinol 0.05% en HCl 1:3 recin preparado. Este compuesto es el que se condensa con el
furfural o sus derivados dando productos coloridos. El reactivo de lugol es una solucin de yodo en yoduro
de potasio. Este reactivo reacciona con algunos polisacridos como los almidones, glucgeno y ciertas
dextrinas formando un complejo de inclusin termolbil que se caracteriza por ser colorido, dando un color
diferente segn las ramificaciones que presenta la molcula.
EXPERIMENTO 1. ESTRUCTURA CRISTALINA

Examinar al microscopio los siguientes glcidos: glucosa, sacarosa, almidn y celulosa.
1) Realizar los esquemas respectivos.
2) Registrar los resultados para el reporte de laboratorio.
3) Cules de estos glcidos tienen estructura cristalina? Por qu?
EXPERIMENTO 2. FORMACIN DE OSAZONAS DE ARABINOSA, GLUCOSA, FRUCTOSA,
GALACTOSA, MALTOSA Y LACTOSA (PROPIEDADES DE LOS GLCIDOS).
Agregar en un tubo de ensayo 0.1 g de un carbohidrato (arabinosa, glucosa, fructosa, galactosa, maltosa
o lactosa), 0.2 g de clorhidrato de fenilhidrazina (manejar con guantes debido a que es neurotxica y
cancergena), 0.3 g de acetato sdico y 4 mL de agua.
Agitar y cubrir el tubo con un tapn de papel procurando que no quede muy cerrado.
Colocar en bao Mara a ebullicin, agitando ocasionalmente.
Determinar el tiempo en que tardan en aparecer los precipitados y si lo hacen en fro o en caliente. La
arabinosa, glucosa, fructosa y galactosa precipitan en caliente, pero la maltosa y la lactosa en fro por
lo que despus de 20 minutos de calentamiento se deben retirar del fuego.
Observar al microscopio los cristales de la osazona y de sus compaeros de grupo.
1) Realizar un esquema de los cristales.
2) Por qu la glucosa, la manosa y la fructosa dan la misma osazona?
3) Escribir la reaccin que se efecta.
=
41
EXPERIMENTO 3. REACCIN DE MOLISCH UDRANSKY

Colocar en una gradilla 6 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 6.
Al tubo 1 aadir 3 mL de Formaldehdo, al tubo 2 aadir 3 mL de Glucosa, al tubo 3 aadir 3 mL de
Fructosa, al tubo 4 aadir 3 mL de Arabinosa, al tubo 5 aadir 3 mL de Sacarosa y al tubo 6 aadir 3
mL de Almidn.
Agregar a todos los tubos 2 gotas del reactivo de Molisch-Udransky (solucin de alfa-naftol al 5% en
alcohol) y agitar para mezclar.
Aadir EN LA CAMPANA DE EXTRACCIN a todos los tubos PRECAUCIN! 1 mL de cido
sulfrico concentrado, estratificando (inclinando el tubo y dejando resbalar el cido LENTAMENTE por
las paredes). La reaccin es positiva si aparece en la interfase un anillo de color violeta.
Tubo
Solucin
Formaldehdo
Glucosa
Fructosa
Arabinosa
Sacarosa
Almidn
Clasificacin
Mono, di o polisacrido
Resultado
(positivo o negativo)
2) Diga por qu la solucin de formaldehdo da positiva la reaccin.

3) Se puede considerar como una reaccin til para diferenciar un glcido de otro? Por qu?
4) Qu utilidad puede tener la reaccin de MolischUdransky?
EXPERIMENTO 4. REACCIN DE FEHLING
Al tubo 1 aadir el reactivo de Fehling, agregando 2 mL de la solucin A ms 2 mL de la solucin B
y agitar hasta que se mezcle bien. Repetir este mismo paso para los tubos 2 al 5.
Posteriormente al tubo 1 agregar 3 gotas de solucin de Glucosa, al tubo 2 agregar 3 gotas de solucin de
Fructosa, al tubo 3 agregar 3 gotas de solucin de Arabinosa, al tubo 4 agregar 3 gotas de solucin de
Sacarosa y al tubo 5 agregar 3 gotas de solucin de Almidn.
=
42
Colocar los tubos en bao Mara a ebullicin durante 3 minutos.

Dejar enfriar a temperatura ambiente.
Observar y registrar sus resultados.
Tubo
Solucin
Glucosa
Fructosa
Arabinosa
Sacarosa
Almidn
Clasificacin
(reductor o no reductor)
Resultado
(rojo o azul)
2) Qu azcares dan positiva la reaccin de Fehling?

3) Explicar por qu algunos azcares dan negativa la reaccin.
4) Mencionar 3 sustancias que usted considere puedan dar positiva la reaccin de Fehling y no sean azcares.
EXPERIMENTO 5. REACCIN DE BARFOED
Al tubo 1 aadir 3 mL del reactivo de Barfoed. Repetir este mismo paso para los tubos 2 al 4.
Posteriormente al tubo 1 agregar 1 mL de solucin de Glucosa, al tubo 2 agregar 1 mL de solucin de
Arabinosa, al tubo 3 agregar 1 mL de solucin de Lactosa y al tubo 4 agregar 1 mL de solucin de Maltosa.
Colocar los tubos en bao Mara a ebullicin.
Observar y registrar el tiempo que tarda en aparecer el precipitado rojo de xido cuproso durante la incubacin.
Tubo
Solucin
1
2
3
4
Glucosa
Arabinosa
Lactosa
Maltosa
Clasificacin
(Monosacrido, disacrido, etc.)

=
43
Resultado
(minutos)
EXPERIMENTO 6. REACCIN DE BIAL

Agregar en los 3 tubos de ensayo 3 mL del reactivo de Bial PRECAUCIN!
Al tubo 1 agregar 0.5 mL de solucin de Glucosa, al tubo 2 agregar 0.5 mL de solucin de Arabinosa y al
tubo 3 agregar 0.5 mL de Agua.
Colocar los tubos en bao Mara a ebullicin durante 5 minutos.
Retirar, diluir cada tubo con 5 mL de agua destilada y agregar2 mL de butanol.
Agitar los tubos, dejar reposar durante 5 minutos.
Observar y registrar sus resultados.
Tubo
Solucin
Glucosa
Arabinosa
Agua
Clasificacin
Resultado
(pentosa o hexosa)
(azul o amarillo)
2) Explicar las diferencias observadas.
EXPERIMENTO 7. REACCIN DE SELIWANOFF

Al tubo 1 agregar 1 mL de solucin de Glucosa, al tubo 2 agregar 1 mL de solucin de Fructosa y al tubo 3
agregar 1 mL de Agua.
Aadir en los 3 tubos de ensayo 0.5 mL del reactivo de Seliwanoff. PRECAUCIN!
Colocar los tubos en bao Mara a ebullicin, mida el tiempo exactamente 60 segundos.
En el mismo bao observar los cambios y registrar sus resultados.
Continuar calentando, observar el cambio de color a intervalos de 1 a 5 minutos y registrar sus resultados.
Las cetosas dan una coloracin rojo fuego y las aldosas la dan muy dbil y muy lentamente.

=
44
Tubo
Solucin
Glucosa
Fructosa
Clasificacin
Resultado
(aldosa o cetosa)
(color y minutos)
3
Agua
2) Observar alguna diferencia en las soluciones?
EXPERIMENTO 8. REACCIN DEL LUGOL

Preparar 2 tubos de ensayo y etiquetar.
En un tubo de ensayo aadir 2 mL de solucin de almidn, en otro tubo aadir 2 mL de glucgeno.
Agregar una gota de Lugol y registrar el color producido en cada uno de los tubos.
Colocar el tubo que contiene el almidn en bao Mara a ebullicin durante 5 a 10 minutos.
Dejar enfriar a temperatura ambiente observando lo que sucede con la coloracin.
Registrar sus resultados.
1) Registrar sus resultados para el reporte de laboratorio.
2) Por qu el complejo almidn yodo es termolbil?
3) Se puede considerar la reaccin del lugol caracterstica para cualquier polisacrido?

=
45
PRCTICA No. 7
OXIDACIONES BIOLGICAS
La Bioenergtica es la manera en que el ser vivo, utiliza y transforma la energa del medio ambiente. A estos
procesos qumicos y fsicos se les denominaba respiracin. Sin embargo para evitar ambigedades con el
proceso de la entrada y salida de aire de un compartimiento a otro, se aplica el concepto bioqumico de
bioenergtica, incluyendo
este trmino los procesos fotosintticos. Todos los procesos qumicos que
constituyen la respiracin conducen a la oxidacin de sustancias denominadas metabolitos, hasta CO2 y

H2O. Por regla general todas las reacciones de oxidacin son exergnicas, es decir, liberan energa cuando
se efectan; en ocasiones toda la energa se libera en forma de calor, como cuando se quema u oxida un
pedazo de madera. Sin embargo un organismo viviente no es una mquina trmica y, por tanto, debe poseer
un mecanismo enzimtico que le permita capturar y almacenar la energa liberada en los procesos de
oxidacin. La utilizacin o captura de la energa involucra la participacin de enzimas especficas capaces de
catalizar la conversin del ADP en ATP (reaccin endergnica).
REACCIONES DE OXIDO REDUCCIN

Un compuesto qumico puede oxidarse de diferentes maneras. La oxidacin tpica es aquella en la cual el
oxgeno se une a un compuesto (oxigenacin), por prdida de hidrgeno (deshidrogenacin) y cuando se
oxida un compuesto perdiendo electrones o cuando gana valencias positivas.
Ejemplos de oxidaciones
2Cu + O2 2CuO
Oxigenacin
H2S S0 + H2
Deshidrogenacin
Prdida de electrones o
-1e
Fe++ Fe+++
ganancia de valencia positiva
Siempre que se efecta una oxidacin, simultneamente se efecta una reduccin. Es decir, cuando un
compuesto se oxida, otro forzosamente debe reducirse. Como son fenmenos que ocurren simultneamente
se denominan fenmenos de xido reduccin o reacciones REDOX.

=
46
La accin de una sustancia reductora como el hidrosulfito de sodio (NaHSO3), forma leucobases (incoloras)
cuando acta sobre colorantes oxidados como el azul de metileno (indicador de oxidoreduccin). El
proceso inverso (oxidacin por prdida de hidrgeno) se puede realizar en diferentes condiciones y
determinar el tiempo de reaccin.
La mayor parte de la energa que utilizan los seres vivos deriva de los procesos de oxidacin, y en cada
oxidacin se desprende una determinada cantidad de energa que el organismo aprovecha para realizar las
funciones vitales y para efectuar fenmenos sintticos endergnicos. Todas las oxidaciones biolgicas se
caracterizan por su rapidez y por la suavidad con que se realizan, todas se llevan a cabo en medio acuoso, a
pH generalmente neutro y a bajas temperaturas. Esto hace pensar que todos estos procesos estn catalizados
por enzimas. Warburg fue uno de los primeros investigadores que trat de explicar las oxidaciones
biolgicas suponiendo una activacin del oxgeno. Actualmente se sabe que en los tejidos existe un sistema
de enzimas que contienen hierro, mediante el cual el oxgeno molecular se activa y acta como un agente
oxidante. Wieland Consideraba que el proceso bsico en la oxidacin de los metabolitos es la activacin del
hidrgeno por la accin de enzimas denominadas deshidrogenasas, las cuales transportan el hidrgeno a
diferentes aceptores que pueden ser el oxgeno u otros agentes oxidantes. Szent Gyrgyi concili las dos
teoras al suponer que es necesaria la activacin del hidrgeno y tambin la del oxgeno. Keilin supuso que
interviene como eslabn intermediario el citocromo. Sin embargo, las oxidaciones biolgicas no son tan
sencillas, pues se ha comprobado que en la oxidacin de cada metabolito interviene una gran cantidad de
aceptores de hidrgeno. La glucosa es el ms comn de los metabolitos debido a que es una molcula
altamente reducida. Cuando se oxida y pierde sus hidrgenos, la liberacin de energa de oxidacin no se
realiza en forma brusca, sino que intervienen varios transportadores de hidrgeno y se inicia por la accin de
una deshidrogenasa especfica que no reacciona directamente con el oxgeno sino que requiere de
intermediarios como el NAD+, flavoprotenas y citocromos. La DESHIDROGENASA SUCCNICA
(DHS) cataliza la siguiente reaccin:
Por otro lado para la obtencin de la fraccin mitocondrial del hgado de ratn, se tiene que conocer que
el tejido heptico se dispersa en soluciones isotnicas, el ncleo y las mitocondrias permanecen relativamente
inalterados y pueden separarse con facilidad por centrifugacin diferencial.
La citocromo oxidasa es la ltima enzima de la cadena respiratoria y es la responsable de la activacin del
oxgeno para oxidar a los citocromos. Tanto los citocromos como la citocromo oxidasa son metaloprotenas
(porfirinas). La citocromo oxidasa se caracteriza por su elevada sensibilidad al cianuro (CN) y al monxido de
=
47
carbono (CO). En el ao de 1885 Ehrlich report la reaccin del indofenol. Observ que inyectando alfa naftol y
dimetil-para-fenilendiamina en animales se formaba en los tejidos una sustancia azul llamada azul de indofenol. La
enzima se denomin indofenol-oxidasa, pero posteriormente se ha podido comprobar que esta enzima slo oxida al
citocromo c, el cual a su vez oxida al indofenol; por lo cual ahora se le conoce como citocromo-oxidasa.
EXPERIMENTO 1. OXIDACIN POR PRDIDA DE ELECTRONES
En un matraz provisto de tapn con vlvula de BUNSEN, agregar 0.5g de fibra de hierro (Fe) y 5 mL de
H2SO4 al 10%.
Calentar a ebullicin y observar la disolucin parcial del Fe, formando con el H2SO4 al 10% el producto
sulfato ferroso (FeSO4). Dejar enfriar a temperatura ambiente.
Diluir el FeSO4 obtenido, con 50 mL de agua destilada. La vlvula deja escapar el hidrgeno, pero impide
la entrada de aire evitando as la oxidacin de la sal ferrosa formada mediante la siguiente reaccin:
Fe + H2SO4 FeSO4 + H2 .
Seguidamente, con un plumn divida un mosaico blanco (proporcionado en su charola de material de
laboratorio) en cuadrantes, como se indica en la figura.
Cuadrante
superior
izquierdo
Cuadrante
superior
derecho
Cuadrante
inferior
izquierdo
Cuadrante
inferior
derecho
En el cuadrante superior izquierdo agregar 1 gota de solucin de sulfato ferroso y 1 gota de ferricianuro de
potasio (K3[Fe(CN)6]) con el objetivo de comprobar la presencia de sales ferrosas. La obtencin de una
coloracin o precipitado de color azul indicar la presencia de sales ferrosas.
En el cuadrante superior derecho agregar 1 gota de la solucin de sulfato ferroso y 1 gota de sulfocianuro
de potasio (KSCN) al 0.5%. La aparicin de un color rojo intenso indicar la presencia de sales frricas.
A continuacin se oxidar la sal ferrosa a sal frrica, aadir en un matraz Erlenmeyer 10 mL de la solucin de
sulfato ferroso y 3 mL de H2SO4 al 10%, calentar a ebullicin agregando gota a gota una solucin de
permanganato de potasio (KMnO4) 0.1M hasta que persista un color rosa plido.
Para comprobar el paso de sal ferrosa a sal frrica, repetir las reacciones con ferricianuro de potasio
K3[Fe(CN)6] al 0.5% y sulfocianuro de potasio (KSCN) al 0.5% en los cuadrantes inferiores del
mosaico.
=
48
1) Registrar los resultados (positivo, si observa presencia de sales ferrosas o frricas o negativo si no
observa nada) en la tabla siguiente para el reporte de laboratorio.
Solucin
K3[Fe(CN)6]
KSCN
Sulfato ferroso
Sulfato frrico
2) Escribir las reacciones de identificacin que se han efectuado en cada caso.
3) Si el KMnO4 es capaz de oxidar al sulfato ferroso, Qu compuesto se reduce?
4) Escribir la reaccin de xido-reduccin que se ha efectuado.
EXPERIMENTO 2. OXIDACIN POR DESHIDROGENACIN
Aadir a cada uno 5 mL de una solucin diluida de azul de metileno.
Al tubo 1 aadir gota a gota una solucin recin preparada de hidrosulfito de sodio y cuente el nmero de
gotas necesario para decolorar completamente la solucin de azul de metileno. Repetir este mismo paso
para los tubos 2 al 5.
El tubo No. 1 quedar como testigo en reposo.
El tubo No. 2 colocar en bao mara a ebullicin y se registrar el tiempo necesario para recuperar su
color azul.
El tubo No. 3 se agitar enrgicamente a temperatura ambiente, hasta que recupere su color.
Al tubo No. 4 sin agitarlo y a temperatura ambiente, se le agregarn gotas de perxido de hidrgeno
(H2O2) al 0.4%.
El tubo No. 5 se le agregarn gotas de cloruro frrico (FeCl3) al 1% contando el nmero de stas
necesario para reoxidar al azul de metileno.
Tubo
testigo
calor
temp. amb.
H2O2
FeCl3
Tiempo de reoxidacin del azul de

metileno o nmero de gotas
2) Escribir la reaccin qumica que se ha efectuado en cada caso.

=
49
EXPERIMENTO 3. REACCIONES BIOLGICAS DE OXIDO - REDUCCIN

Sacrificar un ratn, extraer el hgado y depositar en un mortero fro.
Macerar hasta obtener una masa homognea.
Aada gradualmente 7 volmenes de cloruro de potasio (KCl) 0.15M fro.
Pasar el contenido del mortero en un tubo Falcon de 15 mL.
Centrifugar a 500 rpm durante 15 minutos a 4oC.
Separar el sobrenadante a otro tubo Falcon limpio, afore a 7 mL con KCl 0.15M y nuevamente centrifugar a
3000 rpm durante 15 minutos a 4oC.
Durante este tiempo de centrifugacin, preparar un tubo de ensaye con la etiqueta de SOBRENADANTE
DE HGADO y otro tubo de ensaye con la etiqueta de SUSPENSIN DE HGADO y mantenerlos en
fro. Estos sern utilizados ms adelante.
Terminado el centrifugado, separar el sobrenadante en el tubo de ensaye con la etiqueta de
SOBRENADANTE DE HGADO y conservar en fro.
Posteriormente, el residuo o pellet que quede en el Tubo Falcon aadir 7 mL de KCl 0.15M para resuspender
y pasar en el tubo de ensaye con la etiqueta de SUSPENSIN DE HGADO. Conservar en fro.
Agregar los reactivos segn se indica en la tabla siguiente:
Reactivo
Tubo
Azul de metileno 0.002M
mL
0.3
0.3
0.3
0.3
0.3
0.3
Succinato de sodio 0.1M
mL
---
0.5
0.5
---
0.5
0.5
Malonato de sodio 0.1M
mL
---
---
0.5
---
---
0.5
Agua destilada
mL
1.5
1.0
0.5
1.5
1.0
0.5
Suspensin de hgado
mL
0.5
0.5
0.5
---
---
---
Sobrenadante de hgado
mL
---
---
---
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
Mezclar bien el contenido de cada tubo

Vaselina
mL
0.5
0.5
Una vez agregada la vaselina no agitar el contenido de los tubos e incubar en bao Mara de 37-40C.
Realizar lecturas en los tiempos 0, 5, 10 y 15 minutos, registrando el grado de decoloracin con cruces (de
una a tres) para el reporte de laboratorio.
1) Registrar sus resultados en la tabla siguiente:

=
50
Tubo
Tiempo
0 min.
5 min.
10 min.
15 min.
2) En cul de las fracciones de hgado deben encontrarse las mitocondrias y por qu?
3) Describir cmo acta el malonato de sodio en esta reaccin.
4) Explicar sus resultados sobre la base del anlisis del contenido de cada tubo.
EXPERIMENTO 4. LOCALIZACIN Y DEMOSTRACIN DE LA ACTIVIDAD DE LA
CITOCROMO - OXIDASA
Reactivo
Tubo
10
Alfa naftol al 0.15% en etanol al 10%
mL
0.5
---
0.5
0.5
0.5
0.5
---
0.5
0.5
0.5
Dimetil-para-fenilendiamina al 0.15%
mL
0.5
0.5
---
0.5
0.5
0.5
0.5
---
0.5
0.5
Agua destilada
mL
1.0
1.5
1.5
2.0
0.5
1.0
1.5
1.5
2.0
0.5
KCN al 0.01% NO PIPETEAR

0.5 mL = 10 gotas
mL
0.5
---
---
---
---
0.5
Sobrenadante de hgado
mL
1.0
1.0
1.0
---
1.0
---
---
---
---
---
Suspensin de hgado
mL
---
---
---
---
---
1.0
1.0
1.0
---
1.0
---
---
---
---
Agitar los tubos y dejar incubar a temperatura ambiente durante 10 minutos.

Observar y registrar la aparicin del azul de indofenol.
Tubo
Tiempo
0 min.
5 min.
10 min.
15 min.
2) Escribir la reaccin de formacin del azul de indofenol.
3) Explicar por qu no se us vaselina en este experimento.
4) Explicar sus resultados sobre la base del anlisis del contenido de cada tubo.
=
51
10
PRCTICA No. 8
LPIDOS
Este es un conjunto heterogneo de molculas orgnicas cuyas propiedades comunes son su insolubilidad en
agua y solubilidad en solventes no polares como el benceno, cloroformo, ter, etc. Por lo que este grupo
incluye sustancias de muy diversa estructura. Suelen ser molculas de nmero relativamente alto de tomos
de carbono e hidrgeno y bajo en tomos de oxgeno; ciertos lpidos tambin poseen tomos de fsforo,
nitrgeno y azufre en su molcula. Cualquier clasificacin presenta sus limitaciones y la nomenclatura puede
producir falsas interpretaciones ya que idntica terminologa ha sido empleada por diferentes autores para
denominar a distintos grupos de lpidos. Los lpidos son los compuestos ms recientemente estudiados por
ejemplo: prostaglandinas, tromboxanos, leucotrienos, etc., ya que este tipo de sustancias hace poco se
consideraban complejas y de poco inters. Las funciones de los lpidos son muy variadas y las ms aceptadas
actualmente son las siguientes:
a)
b)
c)
d)
e)
Funcin estructural, principalmente en las membranas celulares,

Actan como material energtico y de reserva,
Intervienen en el transporte de compuestos energticamente activos,
Componentes protectores de la pared celular de ciertas bacterias, plantas, insectos y vertebrados,
Sustancias de gran actividad biolgica como vitaminas y hormonas; las cuales se consideran como
verdaderos reguladores metablicos,
f) Actan como aislante trmico y proteccin alrededor de determinados rganos
Una de las formas de identificacin en la prctica es la reaccin de Hanus a travs del grado de insaturacin
de los cidos grasos que forman parte de un lpido es uno de los factores determinantes de sus propiedades
fsicas, qumicas y fisiolgicas. Se ha observado que aparecen ms dobles enlaces en los triacilgliceroles de
almacenamiento y en los lpidos estructurales cuando la temperatura ambiente disminuye. Los dobles
enlaces disminuyen el punto de fusin por lo que se cree que sea un mecanismo del organismo para impedir
la cristalizacin de los lpidos en los tejidos. El reactivo de Hanus es una solucin de yodo y bromo que
nos permite determinar el grado de insaturacin de un lpido midiendo la capacidad que tiene para fijar
halgenos en su molcula. Una de las reacciones ms usadas para la identificacin de acilglicridos es la
formacin de acrolena o aldehdo acrlico, el cual se puede obtener por deshidratacin del glicerol o de
cualquier glicrido y se reconoce fcilmente por su fuerte olor acre caracterstico.
En esta prctica de lpidos no podemos dejar de mencionar a las membranas ya que hacen posible la
existencia de organismos complejos porque separan las clulas en el interior de los tejidos y los organelos
celulares, formando compartimientos con propiedades fisicoqumicas diferentes, lo que permite una diferente
=
52
organizacin; y cada compartimiento se vuelve una parte individual de un conjunto ms complejo. Se ha

comprobado que las membranas son complejos lipoproticos que contienen de 60% a 75% de protena y
de 25% a 40% de lpidos. En este experimento se usarn monocapas lipdicas como modelos de membrana.
Al estratificar butanol sobre agua y agregar un lpido, ste se situar en la interfase, orientandose la parte
polar lipdica a la fase acuosa, y la parte hidrofbica a la fase orgnica. Si ahora se coloca un colorante
se puede observar la difusin pasiva a travs de la membrana.
La reacin de LIEBERMANN BURCHARDS, es a travs de que el anhdrido actico se puede
condensar con los grupos OH en posicin 3 de los esteroles como en el colesterol y dar los correspondientes
steres. Si el esterol tiene un doble enlace en posicin 5, se produce adems una epimerizacin y una
deshidratacin en presencia de cido sulfrico (H2SO4) concentrado, dando como resultado una serie de
compuestos de estructura desconocida que se caracterizan por tener colores que van del rojo al azul y del
azul al verde. Esta reaccin es por lo tanto especfica para todos los esteroles que contengan un OH en
posicin 3 y un doble enlace en posicin 5.
EXPERIMENTO 1. REACCIN DE HANUS
Preparar una serie de 4 tubos de ensayo etiquetar y numerar del 1 al 4.
Al tubo 1 agregar 6 mL de la solucin clorofrmica al 10% de aceite de algodn, al tubo 2 agregar 6 mL
de la solucin clorofrmica al 10% de aceite de crtamo, al tubo 3 agregar 6 mL de la solucin
clorofrmica al 10% de monoestearilglicerol y al tubo 4 agregar 6 mL de la solucin clorofrmica al
10% de aceite de ricino.
Aadir a cada tubo 10 gotas del reactivo de Hanus y agitar vigorosamente. Con una bolsa negra
protegerlo de la luz y colocarlo debajo de la mesa.
Registrar lecturas a tiempos de 20, 40, 60 y 80 minutos, observando el grado de decoloracin de cada
tubo.
Registrar sus resultados en la tabla siguiente para el reporte de laboratorio.
Lpido
Lecturas
20 min.
40 min.
60 min.
80 min.
Aceite de algodn
Aceite de Crtamo
Monoestearilglicerol
Aceite de ricino
Nota: Puede interpretar la decoloracin de la siguiente forma: +++++= Rosa intenso, +++=Rosa plido += decolorado
=
53
EXPERIMENTO 2. EXTRACCIN DE LPIDOS DE CEREBRO

Macerar completamente la muestra de cerebro en un mortero, hasta obtener una consistencia homognea.
En este paso NO AGREGAR NINGN TIPO DE SOLUCIN, hasta obtener la consistencia deseada.
Agregar gradualmente 20 mL de una mezcla 200:100:1 de cloroformo-metanol-cido clorhdrico y con
el pistilo del mortero mezclar perfectamente bien.
Agregar 2 mL de HCl 1N (NO OLVIDAR), mezclar y centrifugar a 2000 rpm durante 10 minutos.
Despus de centrifugado el tubo, separar la fase metanlica, el paquete celular y la clorofrmica.
Desechar el paquete celular. La fase Clorofrmica se usar para la identificacin del colesterol,
(separacin cromatogrfica de fosfolpidos y la formacin de membranas) y la Metanlica servir para la
identificacin de cerebrsidos.
Registrar sus resultados para el reporte de laboratorio.
EXPERIMENTO 3. IDENTIFICACIN DE FOSFOLPIDOS DE CEREBRO POR CROMATOGRAFA
EN CAPA FINA
De la fase clorofrmica obtenida, aplicar una gota con una pipeta Pasteur en una cromatoplaca,
aproximadamente a 2 cm de altura de la base y una gota con una pipeta Pasteur en otra cromatoplaca.
Permitir que el cloroformo se evapore y entonces introducirlo en una cmara de vidrio que contenga como
solvente de elucin, una mezcla de cloroformometanolcido acticoagua (65:25:8:4).
Dejar desarrollar las cromatoplacas hasta el frente del solvente ya marcado; retirar las cromatoplacas y
dejarlas secar.
Una cromatoplaca se revelar con ninhidrina que pondr de manifiesto a los fosfoaminolpidos, la
reacccion se lleva a cabo al calentarse a 100C por 10 minutos.
La otra cromatoplaca ser revelado con Iodo sublimado.
EXPERIMENTO 4. REACCIONES DE IDENTIFICACIN DE LPIDOS Y DE CEREBRSIDOS

Utilizar 1 mL de la fase metanlica obtenido en la extraccin de lpidos de cerebro y comprube la
presencia de cerebrsidos utilizando la reaccin de MolischUdransky cuya tcnica y fundamento ya han
sido descritos anteriormente.

=
54
EXPERIMENTO 5. REACCIN DE LA ACROLENA

Preparar 2 tubos de ensayo y etiqutelos.
Agregar a los dos tubos de ensayo una pequea cantidad de bisulfato de potasio (KHSO4).
A un tubo de ensayo aadir 5 gotas de glicerina.
A otro tubo de ensayo agregar 5 gotas de cualquiera de estas soluciones: aceite de algodn, crtamo o
girasol.
Colocar en Bao Mara ebullicin durante 5-10 minutos, procurando observar el desprendimiento de los
vapores
Retirar del Bao los tubos y percibir los vapores de forma indirecta y tratar de identificarlos.
PRECAUCIN!
1) Se puede considerar esta reaccin general para cualquier lpido? Por qu?
2) Escribir la reaccin que se ha efectuado.
EXPERIMENTO 6. REACCIN DE LIEBERMANN-BURCHARDS

Preparar 2 tubos de ensayo y etiquetar.
En el tubo 1 agregar 3 mL de solucin clorofrmica de colesterol puro.
En el tubo 2, agregar 3 mL de la fase clorofrmica obtenido de la extraccin de lpidos de cerebro en el
experimento 2.
Aadir a ambos tubos, 1 mL de anhdrido actico y mezclar.
Finalmente aadir 1 mL de H2SO4 concentrado de forma lenta, resbalndolo por las paredes del tubo.
1) Describir los cambios de coloracin que se llevaron a cabo.

=
55
EXPERIMENTO 7. PERMEABILIDAD DE LA BICAPA LIPDICA

Agregar los reactivos segn se indica en la siguiente tabla. Al aadir las soluciones, realizar con mucho
cuidado resbalando por las paredes del tubo para estratificar.
Reactivo
Tubo
Agua destilada
mL
Azul de metileno ms monoestearato de glicerilo en butanol
mL
---
---
---
Azul de metileno ms fosfolpidos en butanol *(VER NOTA)
mL
---
---
---
Azul de metileno ms colesterol en butanol
mL
---
---
---
Azul de metileno en butanol
mL
---
---
---
*NOTA: A 2 mL de la fase clorofrmica (exp. 2) evaporar hasta sequedad (cuidando que no se queme), el
residuo disolver con 2 mL de azul de metileno en butanol y agregar este contenido al tubo 2 de la serie.
Dejar los tubos en reposo procurando moverlos lo menos posible y haga observaciones a las 2, 4, y 24 horas.
1) Observ el paso del colorante en todos los tubos? Explique a qu se debe esa diferencia.

=
56
PRCTICA No. 9
CIDOS NUCLEICOS
El control de todos los procesos vitales en la forma tan ordenada que realiza una clula, como son la
transformacin de energa en sus diferentes formas, la sntesis de molculas propias, la degradacin de los
metabolitos, el transporte de diferentes materiales a travs de sus membranas, la formacin de nuevas clulas,
la diferenciacin celular, la creacin de nuevos seres, etc.; se puede explicar debido a la existencia de
protenas especficas, fundamentalmente enzimas. Sin embargo, para la biosntesis de protenas las
molculas que poseen la informacin necesaria son el cido desoxirribonuclico (DNA) y el cido
ribonuclico (RNA). Estas molculas son los llamados cidos nuclicos. Rompiendo la mxima bioqumica
de que todas las enzimas son protenas, se descubri que algunos RNA pueden funcionar como catalizadores.
Los cidos nuclicos reciben este nombre debido a que en el ao de 1871 el qumico suizo Friedrich
Miescher logr aislar del ncleo celular una sustancia que llam nuclena, la cual debido a su carcter cido
se denomin posteriormente cido nucleico.
Sin embargo, existen otros tipos de cidos nuclicos. El cido desoxirribonuclico se encuentra
fundamentalmente en el ncleo y es el que posee la informacin gentica y la transmite al citoplasma y por
ser capaz de replicarse puede transmitir la informacin de padres a hijos. En la clula, fuera del ncleo,
normalmente existen tres tipos de cidos ribonuclicos que son: el cido ribonuclico ribosomal (RNAr), el
cido ribonuclico mensajero (RNAm), y el cido ribonuclico soluble o de transferencia (RNAt). El RNAr
se encuentra en los ribosomas y su peso molecular es de 2 000 000. El RNAm tiene un peso molecular de 300
000, se forma en el ncleo y lleva la informacin al citoplasma. El RNAt tiene un peso molecular de 25 000 a
30 000 y se encuentra disuelto en el citoplasma. El DNA es una de las biomolculas ms grandes que se
conocen hasta ahora y su peso molecular es mayor a un billn.
Tanto el DNA como el RNA se encuentran asociados con protenas fuertemente bsicas (histonas o
protaminas) formando las llamadas nucleoprotenas. La estructura qumica es similar en todos los cidos
nuclicos, todos estn constituidos por bases pricas, bases pirimdicas, pentosa y cido fosfrico. El
DNA tiene como bases pricas adenina y guanina, como bases pirimdicas, citosina y timina, como
pentosa la 2-desoxiribosa y cido fosfrico H3PO4. Los cidos ribonuclicos tienen como bases pricas la
adenina y guanina y como bases pirimdicas uracilo y citosina, como pentosa la Dribosa y H3PO4.
Los cidos nuclicos son macromolculas formadas por la unin de varios nucletidos. Un nucletido se
puede considerar como un ster fosfrico de un nuclesido, que es la unin de una base prica o

=
57
pirimdica con una pentosa. Los mononucletidos se unen entre s por medio de un enlace fosfodiester 35, formando los polinucletidos.
Por otro lado cuando se desea purificar una sustancia se deben seleccionar las clulas o tejidos que se van a
utilizar como materia prima. En el caso del DNA esta seleccin es en especial importante porque el
contenido de DNA es pequeo en la mayor parte de las clulas. La clula ideal ser aquella que tenga una
relacin ncleo/citoplasma alta, como en los linfocitos y clulas del tumor asctico de Ehrlich. Sin
embargo, no es fcil obtener este tipo de clulas por lo que frecuentemente se usan rganos tpicamente
linfoides como el timo y el bazo. El primer paso en la extraccin del DNA es la homogeneizacin del
tejido. Este paso puede degradar en parte la molcula del DNA si no se toman las precauciones necesarias, la
solucin reguladora es de citrato 0.01M y NaCl 0.14M, a pH de 7.2 a 7.4; la fuerza inica de esta solucin
hace insoluble a la desoxirribonucleoprotena. Si se centrifuga este homogeneizado, en el residuo quedarn
los restos celulares y las desoxirribonucleoprotenas insolubles. En el sobrenadante se encuentran
compuestos solubles como la mayor parte de los cidos ribonuclicos.
Al homogeneizar el tejido se liberan las enzimas de los lisosomas, entre ellas la DNAasa, la cual hidroliza el
DNA. Se sabe que el Mg++ es indispensable para la actividad de esta enzima; si en la solucin existe citrato,
ste se une al Mg++ e impide la accin de la DNAasa. Otra forma de evitar la accin hidroltica de la
enzima es trabajar a temperaturas bajas (0C a 2C). El siguiente paso en la purificacin est basado en
que las desoxirribonucleoprotenas y el DNA son solubles en soluciones salinas concentradas, mientras
que la mayor parte de las protenas precipitan en estas condiciones. Si el residuo se suspende en solucin de
NaCl 2.6M y se centrifuga, el residuo insoluble estar formado fundamentalmente por protenas, mientras
que el DNA permanecer en solucin. Este DNA se puede precipitar selectivamente por la adicin selectiva
de 2 volmenes de alcohol etlico al 95% formndose un precipitado blanco fibroso, el cual se puede
recoger por rotacin de un agitador de vidrio con pequeos salientes.
Existen varios mtodos para identificar y cuantificar a los cidos nuclicos. El mtodo ms utilizado es el
espectrofotomtrico, el cual est basado en que tanto el DNA como el RNA absorben a 260 nm. La
absorbancia es proporcional a la concentracin del cido, por lo tanto, el medir la absorbancia es un mtodo
cuantitativo muy sensible y sencillo, pero no distingue entre DNA y RNA. Es de gran utilidad cuando las
muestras estn puras. Una reaccin muy utilizada para identificar y cuantificar DNA es la llamada reaccin
de Dische, la cual est basada en que el reactivo de difenilamina reacciona especficamente con el DNA
dando una coloracin azul cuya intensidad es proporcional a la concentracin de DNA. En realidad, la
especificidad de esta reaccin no es absoluta, ya que la difenilamina es un reactivo especfico para las 2-

=
58
desoxipentosas en general, pero en condiciones normales la cantidad de azcares capaces de interferir es

despreciable.
EXPERIMENTO 1. OBTENCIN DEL DNA DE BAZO.

Agregar 300 mL de solucin reguladora de Citrato 0.01M-NaCl 0.14M, pH=7.2 fra, en un vaso de
licuadora previamente enfriado.
Se hace funcionar la licuadora a baja velocidad y se van aadiendo los trozos de bazo de todos los
equipos, esperando a que se homogeneice completamente el primero antes de aadir el segundo y as
sucesivamente.
Una vez terminada la adicin, continuar homogeneizando por 30-60 segundos ms.
Al obtener el homogenizado, pasar a tubos Falcon de 50 mL teniendo cuidado de tarar perfectamente
los tubos opuestos PRECAUCIN! (CONSULTE A SU MAESTRO).
Centrifugar a 5 000 rpm durante 15 minutos.
Al terminar la centrifugacin, DESECHAR EL SOBRENADANTE, tener cuidado de NO DESECHAR
EL RESIDUO INSOLUBLE O BOTN.
Aadir 15 mL de solucin de NaCl 2.6M fra al residuo insoluble que contiene el DNA y residuos
celulares.
Agitar el tubo hasta obtener un completo homogenizado. El cido desoxirribonuclico es soluble en esta
solucin mientras que la mayor parte de las protenas son insolubles.
Centrifugar a 8 000 rpm durante 30 minutos.
Al terminar la centrifugacin, SEPARAR EL SOBRENADANTE que contiene el DNA en solucin y
DESECHAR EL RESIDUO INSOLUBLE, que contiene restos celulares y protenas insolubles.
Agregar el sobrenadante en un vaso de precipitados de 100 mL y aadir lentamente el doble del volumen
obtenido del sobrenadante de alcohol etlico al 95%, procurando que la fase alcohlica quede en la
parte superior.
Observar la formacin de un precipitado blanco, denso, en la interfase.
1) Explicar por qu se utiliz bazo como materia prima y no otro rgano cualquiera.
2) Sera conveniente utilizar solucin reguladora de fosfatos para la extraccin del DNA? Por qu?
3) Por qu es conveniente trabajar durante toda la extraccin a baja temperatura?

=
59
EXPERIMENTO 2. CARACTERIZACIN Y ANLISIS CUANTITATIVO DEL DNA.

Al tubo 1 agregar 2 mL de la solucin patrn de DNA [1 mg/mL]. Medir el volumen cuidadosamente.
A los tubos 2, 3, 4, 5 agregar 2 mL de agua destilada.
Pipetear 2 mL de la solucin patrn DNA [1 mg/mL] y agregar al tubo 2; mezclar perfectamente.
Transferir 2 mL de la mezcla anterior al tubo 3; mezclar bien el contenido.
Transferir 2 mL de la mezcla anterior al tubo 4. De este tubo pipetear 2 mL y descartarlo.
El tubo 5 emplear como blanco.
En el tubo 6 aadir 2 mL de la solucin de DNA problema.
Aadir a todos los tubos 4 mL de reactivo de Dische y agitar vigorosamente.
Incubar los tubos en bao Mara a ebullicin por 10 minutos.
Despus de 5 minutos colocar los tubos en bao de hielo-agua durante 5 minutos con objeto de
disminuir la temperatura rpidamente.
Determinar la densidad ptica a 600 nm. Utilizar el tubo 5 como blanco.
Evidencias de aprendizajes
1) Registrar los resultados en la tabla siguiente para el reporte de laboratorio.
Tubo
[DNA]
Densidad ptica
mg/mL
Abs
0.5
0.25
0.125
--------
Problema
Blanco
2) Construir la curva tipo con los datos de la tabla, donde la densidad ptica sern las ordenadas y los mg de
DNA las abscisas.
3) Interpolar la absorbancia del tubo No. 6 para encontrar la concentracin de DNA (mg/mL) y calcular la
cantidad total de DNA en su problema.

=
60
EXPERIMENTO 3. CARACTERIZACIN Y ANLISIS CUANTITATIVO DEL RNA

Al tubo 1 aadir 3 mL de la solucin patrn de RNA [0.1 mg/mL].
A los tubos 2, 3, 4 y 5 agregar 3 mL de agua destilada.
Pipetear 3 mL de la solucin patrn de RNA [0.1 mg/mL] y agregar al tubo 2; mezclar perfectamente.
Transferir 3 mL de la mezcla anterior al tubo 3; mezclar bien el contenido.
Transferir 3 mL de la mezcla anterior al tubo 4. De este tubo pipetear 3 mL y descartarlo.
El tubo 5 emplear como blanco.
En el tubo 6 aadir 1 mL de la solucin de RNA problema.
Aadir a todos los tubos 6 mL del reactivo de orcinol cido y 0.4 mL del reactivo de orcinol-alcohol y
agitar vigorosamente.
Incubar los tubos en bao Mara a ebullicin por 20 minutos.
Despus de 5 minutos colocar los tubos en bao de hielo-agua durante 5 minutos con objeto de
disminuir la temperatura rpidamente.
Determinar la densidad ptica a 660 nm. Utilizar el tubo 5 como blanco.
Tubo
[RNA] mg/mL
0.1
0.05
0.025
0.0125
-------
Problema
Densidad ptica
Blanco
2) Construir la curva tipo con los datos de la tabla, donde la densidad ptica sern las ordenadas y los mg de
RNA las abscisas.
3) Interpolar los valores de absorbancia de su problema y determinar la concentracin real en mg/mL.

=
61
EXPERIMENTO 4. DETERMINACIN DE FOSFATO TOTAL

Tubo
Reactivo
Buffer de acetato 0.1M pH 4.0
mL
Reactivo molibdato al 2.5%
mL
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
Solucin de vitamina C al 1% reciente
mL
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
Agua destilada
mL
Solucin tipo 1 M/mL
Solucin tipo 2.5 M/mL
Solucin tipo 5 M/mL
Problema DNA
Problema RNA
Incubar los tubos a temperatura ambiente por 10 minutos.

Leer a una absorbancia de 660 nm tomando como blanco el tubo 1.
Tubo
[FOSFATO]
Densidad ptica
M/mL
1
-------
Blanco
2.5
Problema DNA
Problema RNA
2) Construir la curva tipo para fosfato con los datos de la tabla, donde la densidad ptica sern las ordenadas
y los M/mL de las soluciones tipo las abscisas.
3) Cmo afecta el medio cido al enlace 3-5dister fosfato?
4) Cmo afecta el medio alcalino al enlace 3-5dister fosfato?
=
62

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