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  • Fundamentos Psicobiología - Laboratorio

    Enviado por

    Carlos Javier Nogales Fuentes
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    ESTE ES EL CUADERNO DEL LABORATORIO DE LA ASIGNATURA DE PSICOBIOLOGIA. DEL GRADO.

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    a J.P. VARGAS e C. © Editorial Kronos © Fernando Rodriguez, Fernindez Juan Carlos L6pez Garcia Juan Pedro Vargas Romero Cosme Salas Gaeta LS.B.N.: 84-85101-07-3 Depésito legal: SE-2606.98 Maquetacién: Yolanda Gémez Gordillo Imprime y Distribuye: Editorial KRONOS, sa Conde de Cifuentes, 6. 41004 Sevilla Telf.: 95.441 19 12 - Fax: 95 441 1759 INDICE PROLOGO. VI AGRADECIMIENTOS: x CAPITULO 1 EL MICROSCOPIO OPTICO. USO DEL MICROSCOPIO Juan Pedro Vargas, Juan Carlos Lépec, Cosme Salas, Yolanda Gémee, Emilio Duréi, Fernando Rodriguez Introduccién, 1. Componentes mecdnicos del microscopio, 1. Componentes Spticos del microscopio, 2. Caracteristicas épticas del microscopio, 4. Uso del microscopio, 5. Procedimiento de enfoque, 6. Enfoque con el objetivo de inmersién, 7. Otras actividades, 9, Uso de las escalas graduadas de la platina, 9. Fotomicrografia y dibujo a c4mara clara, 10, Bibliografia recomendada, 11. CAPITULO 2 TECNICAS NEUROHISTOLOGICAS GENERALES. LAS TINCIONES DE NISSL ¥ DE KLUVER-BARRERA 3 Fernando Rodriguez, Cosme Salas, Juan Carlos Lépez, Juan Pedro Vargas, Yolanda ‘Gémez, Manuel Portavella Introduccién, 13. Fijacién del tejido nervioso, 13. Preparacién del fijador, 14. Perfusion y extraccién del cerebro, 15. Obtencién de secciones de tejido. Procedimientos de corte, 15. Corte con microtomo de congelacién, 15. Corte con microtomo de parafina, 17. Tincién de Nissl, 19. Procedimiento, 19. Resultado, 22, Tincidn de Kltiver-Barrera, 23. Procedimiento, 23. Resultado, 23. Bibliografia recomendada, 25. CAPITULO 3 LA TINCION DE GOLGI 27 Juan Carlos Lépez, Juan Pedro Vargas, Fernando Rodriguez, Cristina Broglio, Cosme Salas Introduccién, 27. Procedimiento, 28. Procedimiento ripido de Golgi, 28. Procedimiento de triple impregnacién de Golgi, 31. Procedimiento de Golg hidrato de cloral, 31. Resultado, 32. Bibliografia tecomendada, 33, CAPITULO 4. MICROESTRUCTURA DEL SISTEMA NERVIOSO. TIPOS CELULARES 35 Cristina Broglio, Fernando Rodriguez, Juan Carlos Lipez, Cosme Salas, Juan Pedro Vargas, Manuel Portavella Introduccién, 35. Actividades, 37. Bibliografia recomendada, 39, CAPITULO 5. MICROESTRUCTURA DE LA CORTEZA DEL CEREBELO 41 Juan Pedro Vargas, Femando Rodrigues, Juan Carlos Lépez, Yolanda Gémes, Emilio Durén, Cosme Salas Introduccién, 41. Capas, tipos celulares y fibras, 41. Estudio de las reparaciones al microscopio, 54. Bibliografia recomendada, 57, CAPITULO 6. MICROESTRUCTURA DE LA CORTEZA CEREBRAL 59 Fernando Rodriguez, Cosme Salas, Juan Carlos Lépez, Juan Pedro Vargas Introduccién, 59. Tipos cetulares corticales, 59. Capas de la corteza cerebral, 63. Variaciones regionales en la morfologia de la corteza cerebral, 70. Estudio de las preparaciones al microscopio, 80. Bibliografia recomendada, 80, CAPITULO 7. ELECTROFISIOLOGIA DE LA MEMBRANA NEURONAL. POTEN( DE REPOSO Y POTENCIAL DE MEMBRANA Manuel Portavella, Fernando Rodriguez, Juan Pedro Vargas, Cosme Salas Introduccién, 83. El potencial de reposo, 85. Bases iénicas del potenci Tepos0, 86, Actividades a realizar, 92. El potencial de accién, 95. Activid a realizar, 98. Algunos programas informaticos para la realizacién actividades propuestas en este capitulo, 104, Bibliografia recomendada, 1 CAPITULO 8. POTENCIALES SINAPTICOS E INTEGRACION SINAPTICA Manuel Portavella, Juan Pedro Vargas, Juan Carlos Lépez Introduccién, 107, Potenciales locales o graduales. Propiedades, 109. Const de tiempo. Suma temporal, 110. Constante de espacio, Suma temporal, Sinapsis eléctrica, 112. Sinapsis quimica, 112. Actividades a realizar, Bibliografia recomendada, 121. CAPITULO 9. MACROANATOMIA DEL SISTEMA NERVIOSO. DISECCION CEREBRO DE LA VACA Cosme Salas, Fernando Rodriguez. Juan Pedra Vargas, Juan Carlos Lipes Introduccién, 123. Actividades a realizar, 124. Preparacién de los cerebros, 1 Examen superficial, 125. Meninges cerebrales, 126. Hemisferios cerebea 126. Visién basal superficial del diencéfalo y del tronco cerebral. Pe craneales, 130. Diseccién intema, 132, Plano sagital medio, 132. Estudio algunos tractos y vias, 134, Diseccién interna de los hemisferios cerebrales, 1 EI hipocampo, 146. El tronco cerebral, 147, Estructura y conexiones cerebelo, 147. Estudio de los cortes seriados de tejido, 151. Obtencién de cories seriados, 151, Tincién de los cortes mediante la tincién de Mulligan (a dePrusia), 151, Estudio de los cortes seriados, 153. Atlas de secciones sagital horizontales y coronales del cerebro de la vaca, 153. Bibliografia recomendac 165. CAPITULO 10. ESTUDIO DE LA ANATOMIA DEL CEREBRO DE LA RATA MEDIANTE CORTES SERIADOS 167 Juan Carlos Lépez, wan Pedro Vargas, Fernando Rodriguez, Cristina Broglio, Yolanda Gomez, Cosme Salas Introduccién, 167. Estudio de los cortes seriados, 169. Preparacién y tincién de las secciones, 169. Actividades realizar, 169. Atlas del cerebro de la rata, 170. Relacién de estructuras seftaladas en el atlas del cerebro de la rata, 182. Bibliografia recomendada, 184. CAPITULO 11. EVOLUCION DEL TELENCEFALO DE LOS VERTEBRADOS 185 Cosme Salas, Fernando Rodriguez, Juan Carlos Lépez, Juan Pedro Vargas, Cristina Broglio Introduccién, 185. Filogenia de los vertebrados, 186, La evolucién del telencéfalo de los vertebrados, 192, Anatomia comparada del telencéfalo de los vertebrados, 201. Agnatos. Bl telencéfalo de la lamprea Ichtyomizon unicuspis, 202. Condrictios. El telencéfalo del elasmobranquio Squalus acanthias, 204, Actinopterigios. El telencéfalo del pez cladistio Polipterus palma, 206. Actinopterigios. El telencéfalo del pez teledsteo Carassius auratus, 208. Anfibios. El telencéfalo del anuro Rana catesbeiana, 210. Reptiles. El telencéfalo de la tortuga Chrysemyss picta, 212. Aves. El telencéfalo de la paloma Columba livia, 213. Bibliograffa recomendada, 217. w A todos cuantos embelesa el hechizo de lo infinitamente pequeiio, agu sseno de los seres vivos millones de células palpitantes que sélo & entregar su secreto, y con él la aureola de la fama,una inteligen« obstinada que las contemple, las admire y las ¢ Santiago Ramén y C PROLOGO En los iltimos afios hemos presenciado un incremento considerable del interés en clestudio de la estructura y el funcionamiento del sistema nervioso. Tal interés es, sin duds, justificado. Todo aquello que percibimos, sentimos y comprendemos es fruto del funcionamiento de nuestro sistema nervioso. La tiltima frontera del conacimiento no se haya por tanto en otros mundos o en regiones alejadas del universo, sino en nuestro propio cerebro. El estudio de las bases neurobioldgicas de la conducta y de los procesos psiquicos supone desvelar los secretos de los mecanismos que hacen que percibamas, sintamos y comprendamos, La presente obra propone un acercamiento al estudio de la estructura y funcionamiento del sistema nervioso desde un punto de vista algo diferente del que siguen otros libros o manuales, Este libro propone acercarse directamente al sistema nervioso de forma préctica 0 empirica, mediante la realizacién de un conjunto de actividades de laboratorio, Estas actividades précticas tratan de abarcar los aspects ‘més importantes de Ia organizacién y funcionamiento del sistema nervioso: desde su estructura microscépica, los mecanismos fisiol6gicos de produccién de seiiales nerviosas y de comunicacién intemneuronal, la macroestructura anatémica del cerebro ‘delos mamiferos, hasta los fendmenos de evoluciény especiacién del sistema nervioso. Este manual he sido concebido para faciltar la introduccién al estudio de la rmicroestructura, anatomia y fisiologia del sistema nervioso de los estudiantes de asignaturas y cursos universitarios iniciales de psicologia, biologia, ciencias de Ia educacién, medicina y otras disciptinas relacionadas con el Ambito de las ciencias de Ia salud. Esta obra puede servir también de guia a profesores de ensefianzas medias y bisicas para, una vez simplificadas al nivel adecuado, ensayar algunas de estas pricticas en los laboratorios docentes de nuestros insttutos y colegios. Creemos que la experiencia puede llegar a ser fascinante, tanto para los j6venes alumnos, como para los profesores que se embarquen en tal aventura, ‘Las actividades prcticas que aqui se proponen han sido diseftadas para que puedan realizarse sin necesidad de medios técnicos complicados. Pueden realizarse en su totalidad contando tan sélo con un microscopio de rutina, un sencillo laboratorio hhistologico compuesto de materiales ficilmente asequibles y un ordenador PC. Estos ‘medios estén disponibles en los laboratorios docentes de muchas facultades miversitarias e incluso en institutes de ensefianza secundaria y en colegios de ensefianza primaria. Seha pretendido tratar cada uno de los temas con rigor y profundidad, pero sin caer ‘enun excesivo detalle 0 entrar en disquisiciones que interesarian a los investigadores y profesionales de la psicobiologia o neurobiologia, pero no a un estudiante que se jnicia en la materia, Por razones andlogas sc ha optado porno hacer referencia detallada a los autores y fuentes de cada uno de los descubrimientos ¢ interpretaciones que figuran en el texto. El lector interesado en conocer tals autorias puede remitirse ala bibliografia recomendada en cada capitulo, Por tanto el presente libro tiene un caracter ceminentemente préctico, docentee inttoductorio y no se ha pretendido en ningtin caso ‘laborar un manual de laboratorio para investigadores, expertos y profesionales de la neurabiologia y la psicobiologia. Cada capitulo consta de una introduccién tebrica en la que se ha pretendido recoger tos conceptos esenciales de cada tema, necesarios para cl aprovechamiento minimo de la actividad prictica. Estas introducciones son ricas en figuras y esquemas que facilitan Ja comprensién y sirven de guia para el estudio de os materiales reales. Cada capitulo consta de un protocolo detallado de realizacién de cada una de las actividades précticas 4 desarrollar. Las actividades se proponen en cl orden en que nuestra experiencia nos indica como més adecuado para cl progreso del aprendizaje de los estudiantes. En dicho protocolo se realizan las aclaraciones que consideramos necesarias para una mejor Compresién de las actividades. Cuando la extensién de estas necesarias aclaraciones y aftadidos podria distrer la atencién en lo esencial del discurso, han sido inefuidas en forma de cuadros y anexos. No se ha puesto reparo en ilustrar cada capitulo con figuras, fotografias y fotomicrografias que sirvan de ayuda al estudiante para facilitar el reconocimiento y estudio prictico sobre las preparaciones reales, sobre todo en los Capitulos en los que se estudia Ia microestructura y macroanatomia del sistema nervioso. En cada capitulo se recomienda también una bibliografia basica seleccionada porsu interés y pertinencia en relaciéna la temtica propuesta. Los autores presuponen. {gue normalmente el usuario de esie manual hia estudiado con anterioridad © simulténeamente un curso de fundamentos de psicobiologia o de cloneta ou hu esidado los rpc ris eo ms wands en alge fe los excelentes manuales disponibles en la actuatidad (muchos de Tos cuales se indican en ef apartado de Bibliografia Recomendada de cada capitulo). El presente libro es fruto coletivo de la experiencia docente de los autores, que se hn enfentadodarnte fs coma difel tren de inredusiraovenes extudianes cn materias tan fascinates, pero a la vez tan exigentes de rigor y esfuerzo intelectual, como son el estudio de la anatomia, histologia y fisiologia del sistema nervioso. La elaboracién del presente manual responde al deseo de fcilitar Ia labor a nuestros estudiantes y a otros profesores con obligaciones semejantes. El trabajo de los autores auedaria recompensado con creces si este libro sirviera para Silitar a los jévenes estudiantes una puerta de entrada sl apasionante mundo de la otgenizacién y funcionamiento dela estructura mas compeja que existe en el universo conocido: el sistema nervioso de los vertebrados. CAPITULO 1 El microscopio éptico. Uso del microscopio INTRODUCCION Elmicroscopio éptico convencional es un instrumento compuesto de al menos una lente objetivo y otra ocular, que produce imigenes ampliadas. Normalmente, los microscopios épticos poseen, ademas del sistema éptico de lentes, un sistema de iluminacién y un sistema mecénico de ajustes. Los microscopios més corrientemente ‘empleados son del tipo compuesto, que se basan fundamentalmente en el poder de amplificacién de dos juegos de lentes convergentes que se encuentran situados en los ‘extremos de un tubo. Por un lado el objetivo, situado junto a la muestra, y pot el otto ef ocular, cerca del ojo del observador. La imagen obtenida con este aparato puede umentar hasta 1.000 veces con respecto al tamaiio real del objeto y se muestra de forma invertida. En la Figura 1.1 puede observarse la trayectoria de la radiacién uminosa en un mieroscopio, ‘Componentes mecénicos del microscopio El microscopio (Figura 1.2) consta de: Pie Sirve como base al microscopio y le proporciona estabilidad. Columna ‘La columna es perpendicular al pie en su parte inferior que se curva en su parte superior para sujetar el tubo y la platina. Platina Una platina donde se sitia la preparacién. Es paralela al pie y perpendicular ala ccolumna y tiene una perforacién central. La preparacién puede enfocarse haciendo subir y bajar la platina merced a una serie de tornillos con un sistema de cremallera que Capitulo 1. El microscopio éptico. Uso del microscopio omenvo ide la radiacién luminosa en un microscopic iin: Figura 1. Trayeet Ja hacen avanzar de una manera répida (fornillo macroméirico) 0 lenta (tornillo ‘microméirico). Ademés, pueden explorarse con comodidad diferentes zonas de la preparacién desplazando ésta por la platina en el plano horizontal con la ayuda de los ‘omillos del portaobjetos mecinico. Los tornillos del portaobjetas mecénico suelen estar dotados de unas escalas graduadas (escalas de Vernier) que facilitan la operacién de realizar mediciones 0 de sefialar de forma precisa localizaciones en las preparaciones. Tubo Un tubo que consiste en una camara oscura donde se sit ‘componentes épticos del aparato, ‘gran parte de los Revilver portaobjetivos EL revélver consiste en una pieza circular situada en la parte inferior del tubo y en la que se acoplan varios objetivos intercambiables. Los objetivos pueden cambiarse durante la observacién microscépica girando el revélver. Componentes épticas del mieroseopio Los microscopios convencionsles se componen de un sistema de lentes yuna fuente de luz. A continuacién se describen los principales elementos épticos que componen 1 microscopio. Fuente de iluminacién La fuente de iluminacién se sitia en el pie del microscopio y es la que ilumina la —— Fundamentos de Psicobiologia: Manual de Laboratorio Wifes = 7 eis areas we ae objetivo. aproeinaey oe i (nog tne vondensador ataome Conceradee soporte para fo ere de —— = irae Intervptor Figura 1.2. Elementos que componen el mieroscopio éptico Copitulo I. El mieroscoplo épico. Uso del microscopic inci + de un contol de intended y aracién, La fuente de sminacién sule depos de masa y rae pntes gos par nlecionst ls lngitues de onde més adecadss cada caso. siete deat mn ey tn Cie se eimai cre soe ee Se re cece Se eR sere eh aie oe undningha come ‘eminent enh objeto. el sit clinterior "los objetivos consisten en un juego deletes convergentes situadas ene intior de un tubo metlico, Los objetivos se encuentran enre el condensador 1s ocslates, envoscados en el revélver. Hay muchos tipos diferentes dependiendo, de sie Caractersicas Spiess. Sus caractersticsténicas se indica en ls eras impreies elexterior del llindro.Arsiba pueden encontarse dos cf es separadas por una barr Taprimera dels cuales indica la longitu del boy la segunda el grosor recomend {cP eareejeos que debe emplearc con ee obivo, Debio de ets ies hay mpresas otras dos separadas por una barra, que indican, la primera, los aumnen objetivo, y la segunda su apertura numérica. ot ean on limo componente pico del microtcopio. Se enstetan en. va pig deen oon y Pusdenampliiea ia imagen desde hasta 25 veces. Caraeteristicas épticas del microseopio ide resolcién Aumentos oe vim te Gtancls nima a Ta que pueden ctr dos puntos para que sos sve cons sepraon, El aumento a gue se obsrva a preaacn ee olen vpsson Pu 2. Prepararencampana de gascs una soci indurante de osm y deromato pos: 12 gs de deromatopotisicn CLOsK, 1g. de tetrdrdo de osmio 0:0, 500 mi. de agua destlada 3. Manner as bogus dejo en hascos de vrotopscoen solu indurated os dieromato potisico (de varias Hors a varios Sach wes 4. Layarligeramente los bloques de tejido en agua correnteo mejor en solucién de nitrato de plate al 0.73% 0 ote A ido en es i: 5. Mantener los bloques detejido en solucidn de nitrato de plata al 0.75% en fascos de vidrio topacio proegios de Ia uz ya temperatura ambrene (18-28%) dorante varias horas 6, Seccionar ls bloques en secciones gruesas de 150 a 250 jim de espesor 7, Deshidratar las seociones en alcohol absoluto un mxime de 15 minutos 8, Bahar las secciones en terpinol durante 15 minutos 9. Aclarar las seeciones en xilol durante 15 minutos 1 Nate ele Py Orel hk Denia (eae Seat a ce ¢ 30 Fundamentos de Psicobiologia, Manual de Laboratoria Finalmente las secciones se montan en portaobjetos de vidrio y se cubren con resina Damar, Permount Balsamo de Canad. Noes necesario poner cubreabjetos. Dear que sequela resina en un lugar fresco y protegido del polvo. La resina debe cubrt toda el corte de tejido, pero no debe aplicarse en exceso, En el cuadro 3.1 se incluye el protocolo resumido del procedimiento répido de Golgi. Procedimiento de triple impregnacién de Golgi En algunos casos se consigue la tincién de células y sus procesos, que no habian resultado teidas, mediante una segunda exposicidnalasolucién de dieromatopotisico y osmio, seguida de una nueva impregnacion argéntca. Normalmente este rocedimiento tifle un gran nimero de neuronas, pero no tile completamente las arborizaciones terminales y otras estructurasdelicadas del neuropil Laimpregnacin de esas estructuras puede conseguirse sometiendo cl tejido a un tereer proceso somejante a los anteriores. En el Cuadro 3.2 se describe el protocolo de este procedimiento de tiple impregnacién argéntia Cuadro 3.2. Protocolo del Procedimiento de triple impregnacién de Golgi 1. Babar los blogues de tj durante 5-6 dias en una solucin de dicromato potisico 12 gr tetr6xido de osmio 0.1 gr aguadestlada 50m 2. Bafar los blaques en una solucién de ntato de plata al 0.75% durante un dia 53 Baar de nuevo en la misma slucién del punto I durante 4-5 dias (puede usarse la misma solucino preparat una nueva) 4. Batar los blogues en una solucién de nitato de pat al 0.75% rec preparada 5. Bafar los boques en la solocién del punto | 6. Baiar durante tes dias los bloques en una soluci6n de nitrato de plata al 0.75% recién ta ido on, bogus de partina 0 eli : 1 7 Wrocedimiste rigido deColgt” onary irato de cloral Procedimiento de Golgi tra de las mailtiples variantes de la téenica de Golgi es el procedimiento de Golgi- hidrato de cloral. Esta variante presenta la ventaja de que no emplea el tetréxido de osmio, sustancia costosa y altamente t6xica. El protocolo de este procedimiento se describe en el Cuadro 3.3, Capitulo 3. La tinetin de Golgi Cuadro 3.3. Protocolo del procedimiento de Golgi 1, Realizar la prfusién con solucién tamponada de formal al 10% Una vez extaid el ‘Cerebro puede bats duane varios Gon amma solulon. Cora bloques Geto 2. Mantener los bloges de tejdo durante I-3 dis en rascos de vivo color topacio en lt ‘oscurtdad con una slucign reign preparada de" rato de cloral hidrato de cloral Ser ddieromato potisieo LS gr formol al 40% Simi agua destlada 50mi 4. Lavar ligeramente los bioques en agua detain afar los bloques de ted en una solcion de nitrat de plata al 1% (100ml de soucién 5 Boor logue) durante da el asc una tempera 1-05 6, Eneasar Ios bloques dered en elon o parain y obtener cores guess (100 um) 7. Pasar las sezcones de jo por alcoho de 70 &.Tranferirfas seciones alcohol de 96" 5. Tranaferira alcoho bsohto-cloroformo (3:1) | 10. Lavar con xilol 11 Cubrir con bilsamo de Canadé RESULTADO 3. Preparar de nuevo la solucién del paso 2 baftar los bloques en ella durante 1-3 dias | La tincién de Golgi tite, aparentemente al azar, una proporcién muy reducida de las células del tejido nervioso (menos de un 10%). Esta es la razén por la que este método posee un gran valor. Si todas las neuronas del tejido nervioso resultaran igualmentetefidas, un corte histolégico apareceria totalmente ennegrecido, Aiin nohay tuna explicacién segura de esta especificidad inconstante. Este procedimiento tifle las células completas, incluso hasta sus ramificaciones mis finas. La plata metélica negra se deposita por la célula, cubriéndola con una capa opaca, por lo que es posible estudiarla en volumen, tridimensionalmente. En la Figura 3.1 puede apreciarse una neurona tefida mediante esta técnica Pueden realizarse observaciones sobre la ‘morfologia de lasneuronas, sus pautas de distribucién y organizacién, e incluso obtener luna idea aproximada de sus conexiones con otras eéluls, La obtencién de resultados satisfactorios mediante el método de Golgi requiere una buena dosis de perseverancia, La aplicacién de la técnica de Golgi proporciona Pequefios atisbos y visiones fragmentarias del plan estructural de una determinada regién del sistema nervioso. Sélo tras el estudio concienzudo y perseverante de hnumerosas preparaciones teflidas por el método de Golgi puede obtenerse una econstruccién completa de la estructura de una determinada regién del sistema nervioso, 2 Fundamentas de Psicobiologia. Manual de Laboratorio Figura 3.1. Célula de Purkinje de cerebelo de un mamifero teida mediante la tenica de Golgi BIBLIOGRAFIA RECOMENDADA. ‘MARIN-PADILLA,M. (1987). The Golgi method. En: of Neuroscience. Birkhauser, pp. 470-471 NAUTA, JH. ¥ FEIRTAG, M. (1987). Fundamentos de neuroanatomi Barcelona. delman, G. (Ed.). Encyclopedia fa. Labor. 3 Capitulo 3. La tncién de Golgi RAMON Y CAJAL. S, (1992). Textura del sistema Nervioso del hombre y los vertebrados. Instituto de Neurociencia, Alicante RAMON ¥ CAIAL, S. (1984). Recuerdos de mi vida: historia de mi labor cientifica Alianza. Madrid, RAMON Y CAJAL, S..Y TELLO-Munoz, LF. (1950). Elementos de hstologia normal y enica microgrifica, Diana Artes Grificas. Madrid \VALVERDE,F. (1970). The Golgi method. A tool for comparative structural analysis, En: Nauta W.LH. y Ebbesson, S..E, (Eds). Contemporary research methoas in neuroanatomy. Springer-Verlag. Nueva York, pp. 12-31. M4 CAPITULO 4 Microestructura del sistema nervioso. Tipos celulares INTRODUCCION Las neuronas, o células nerviosas, constituyen las unidades funcionales basicas del sistema nervioso, Las neuronas presentan una enorme vatiedad morfolégica. Podemos ‘encontrar neuronas con formas muy diferentes no ya entre sistemas nerviosos de diferentes especies, o en diferentes regiones del sistema nervioso, sino incluso en na ‘misma regién del sistema nervioso de una misma especie. A pesar de ello podemos distinguir de forma general un patrén morfoldgico comiin a todas las neuronas (Figura 4.1), Las neuronas presentan tres regiones especializadas morfoldgica funcionalmente: el soma 0 cuerpo celular, que contiene el nicleo y otros orgénulos celulares as dendritas, ramificaciones que consttuyen el elemento de la neurona que, junto con el soma, recibe la informacién procedente de otras neuronas, y el axin, ‘expansién fina y larga, especializada en la conduecién de la informacién. El axén ‘arranca del soma. partir del lamado cono axénico y puede estar on0 recubierto de una aina de mielina, El axén puede emitir a lo largo de su recorrido colaterales axénicas y suele dividirse en su extremo més distal en finas ramificaciones que terminan en. otones terminales © terminales presindpticos. Los terminales sindpticos de una neurona establecen sinapsis sobre las dendritas o el soma de otras neuronas en cstructuras especializadas. Existen diversas clasificaciones de los tipos de neuronas. En base al niimero de pProcesos que parten del sonta las neuronas pueden clasificarse en unipolares, bipolares y multipolares (Figura 4.2) Las neuronas unipotares presentan un tinico proceso que uede ramificarse secundatiamente. Una de esas ramificaciones posteriores es elaxén, ‘mientras que las otras son ramificaciones dendriticas receptoras de informacién, Este tipo celular es abundante en los ganglios periféricos y en el sistema nervioso de los. invertebrados. En las neuronas bipolares parten del soma dos procesos, el axén y un ‘ronco dendritico, que puede ramificarse posteriormente. Las neuronas bipolares son Capitulo 4. Microestructra del sistema nervioso. Tipos celulares dendritas axénico axon botones terminales nuicleo. vairia de mielina presinaptico Figura 4.1. Diversas regiones en las que puede dividire una neurona prototipiea «especialmente abundantes en los sistemas sensoriales. Un caso especial lo constituyen as neuronas pseudounipolares. Algunas células, especialmente algunas neuronas sensoriales, inician su desarrollo como células bipolares, pero més tarde, sus dos Procesos se unen formando un tinico proceso que parte del soma y que tras un corto trayecto se ramifica en dos (Figura 4.2C). Por iltimo, las neuronas multipolares presentan miltiples procesos que parten del soma, uno de los cuales ¢s el axén. En la Figura 4.34- aparecen diversos ejemplos de cada uno de estos tipos celulares tras claificaciones tienen en cuenta la morfologia del soma y la estructura del ‘xbol dendritico y del axén de las neuronas. En base a estos criterios de clasificacién pueden distinguirse diversos tipos celulares en una regién determinada del sistema nervioso, Por ejemplo, en la corteza cerebral pueden distinguirse eélulas piramidales, células estrelladas, células fusiformes, etc. (véase Capitulo 6), 0 en la corteza del cerebelo se diferencian células de Purkinje, eélulas de Golgi, células de los granos, cedlulas en cesta, etc, (véase Capitulo 5). En base a sus conexiones y su papel y posicién en los circuitos nerviosos, las neutonas pueden ser clasificadas en newronas sensoriales primarias, que son los elementos que transducen la energia externa (p.e. sonido, luz, etc.) en informacién nerviosa, inferneuronas, © neuronas que forman parte de 10s circuitos locales 0 Ssegmentos interns de los circuitos nerviosos, y mofoneuronas, neuronas efectoras, ‘que controlan los miisculos y sistemas de respuesta del organismo. De forma similar, 36 Fundamentos de Psicobiologia. Manual de Laboratorio A. B cq Aen D tt a 4.2 A. Neurona unipolar, B. Neurons bipolar. C. Neurona pseudounipolar. D. Neurona multipolar cen base ala longitud del axén las neuronas pueden ser clasficadas en células tipo Ide Golgi, que presentan axones largos que envian informaciéna través de largas distancias enel sistema nervioso, y células tipo 11 de Golgi, que presentan axones cortos y forman parte de circutos locales dentro de una regién determinada del sistema nervioso. Ademis de por neuronas, el sistema nervioso esti formado, por células gliales Cigura 4.35,K). La neuroglia (astrocitos, oligodendroglia, eélulas de Schwann, microglia) no interviene ditectamente en el procesamiento y transmisién de la informacién en el sistema nervioso. Sus fimciones comprenden desde proporcionar sostén estructural a las neuronas, hasta proporcionarles los nutrientes necesarios. ACTIVIDADES Estudie al microscopio las preparaciones histolégicas que obtuvo al realizar las, actividades de los Capitulos 2 y 3. Analice, tanto en las preparaciones teiidas por el 7 Capitulo 4. Microestructura del sistema nervioso, Tipos celulares Figura 4.3. Ejemplos de diversos ti Elsug. 4.3. Elcrplos de divers tips neuronals. A. Celulas unipolar. B. Célula bipoares. jlas multipolares. J. Microglia. K. Astrocito 38 Fundamentos de Psicobiologia. Manual de Laboratorio método de Nissl como por el método de Golgi la estructura y disposicién de diversos tipos celulares. Si dispone de preparaciones de una misma regién cerebral teiida ‘mediante las dos técnicas, compare la apariencia de los diferentes tipos celulares en las dos thenicas. Determine en cada tno de €50s tipos celulares qué ramificaciones son las [K] (K]>[K] Figura 7.3. Equilibrio electroguimico a través de una membrana semipermeable. A. No Hijo neto de"K"-actaves do una membrand pemeable inicapehe a RY cain cotlentraciones de KCI son iguales en ambos compartimenios. Nose genera, por tanto, diferencia de potencial. B. Si se incrementa lp concentracion de KCIen ano’ de lot ‘ompartimentos se produce in pequefo flujo de K"a raves dela membrana. C-El movimients heto'de ones de K’ que se injeo en B genera una fuerza eleciromot que actus sobre ee, Gentranesando ol gradiente de concetacion hasta que se produce un equilib cnr ag irzas quimices y elétricas La ecuacién de Nernst predice el valor de diferencia de potencial que consttuye del otencial de equilibrio para wna determinada especie iénica en funcién de las concentraciones que alcanza ese ion en dos medios separadas por una membrana RT lion, ‘In E) mF Lion}, Siendo: fj Potecial de eqilibio par el potasio lon, : conceateacién iénica extema ion concentacin inica interna de poasio ‘Rees a consante e los gases nobles, = esa valencia del on Tes a temperatura absolute on grades Kelvin F laconstante de Faraday. E, tiene un valor negative cuando la concentracién de K, y Ki: comesponden a las concentraciones fisiolégicas (concentracién interna mayor que la externa). Asi mismo cuando las concentraciones son iguales, el valor del potencial es cero. Capito 7. Elecroisilogia de ta membrana neuronal. Poencal de repos ypotencial de ecién Los valores que resultan de la aplicacién de la ecuacién de Nemst estén muy préximos a los potenciales de reposo que se registran empiricamente a través de la ‘membrana de una célula nerviosa para diferentes concentraciones del ion K* Concentraciones iénicas en las células nerviosas El citoplasma de las células nerviosas esté formada por agua, proteinas y sales ‘minerales. Las sales minerales disocian en el medio acuoso del citoplasma en aniones y cationes. Muchas de las proteinas son moléculas con grupos terminales que estén ‘isociados en el medio acuoso del citoplasms y que por tanto tienen una carga neta que hhace que puedan ser considerados jones. El fiuido extracelular es rico en Na* y Cr. En la Tabla 7.1 se muestran las concentraciones intracelulares y extracelulares de las principales especies iénicas en el caso del axén gigante del calamar: Interna(mM) —Externa(mMil) —E(mV) e070 Nav 50 460 455 ar 150 560 Cat 04. 10 “1 ‘Aniones 345 meas = orginicos Var 0 mv ‘Tabla 7.1-Concentraionesibnicasypoteciles de equlibriresltantesenel xn gigante del La diferencia de potencial existente se explica no tanto por Ia diferencia de concentracién de los iones inorgénicos como por la existencia de aniones orgdnicos ppara los cuales la membrana es impermeable, y que por lo tanto crean un desbalance de concentracién de cargas eléctricas negativas en el interior dela célula con respecto alexterior. Flujo de iones a través de la membrana en situacién de reposo En situacién de reposo el K* tiene una tendencia neta a salir por tener mis peso el aradiente quimico que el potencial eléctrico, En el caso del Na’, ste tiene tendencia a entrar tanto por gradiente de concentracién como por diferencia de potencial. El CI tiene una ligera tendencia a entrar por gradiente de concentracién pero en reposo esta tendencia es précticamente mula (Figura 7.4), 88 Fundamentos de Psicobiologia’ Manual de Laboratorio Cuadro 7.1 La ecuacién de Nernst {Por lnccuacion de Nernst determina el pencil de uli de una espe nie. respuesta es relatvamente simple ot ‘ Las entanees fnices on suttmcas quimices, en cat Gago Morins ca gidcicament pr lo fant poderos decir que tenen una dob naturales, 0a ‘aanas Sspenien de di crunstancas anda etn ulin en dostedoe pearson as ‘isumentbranasemipermesble pr un ado adferencia dcsanemsteseceinie eco coma) yp oes cea de ovens cna cee Grade 5 Laditerencia de concentra cui, hase gue un ra mueva sos ones dese cli de mayor constractn al de enor cncentucion sa foro Sno auinicg. Se ban deseo mud de ceuaiones ue tos deserter aes al Movimiento (Fyjo) de una sustancia quimica dada, y entre ellas una ccuacion que nos Adeseribe el trabajo que hay que oponeral movimiento de lasusiancia, Dicha ecuacibn es K, WHR Tein (62) En este caso, par diferencia de concentracién, eK" tiene tendencia a salir de a Ella Bn stwcién de reposo, exist una mayor concentacion de K"en el interior, y ademis taeda ier de la rcmbrafa celular tiene tn mayor concentrecion de cargas east, on fo cual el balance seria ques intrior esta cargago:negativamente 9 e Exero? Positivamente. Otras carateistias de as susancias carga electriarmente cel hecho de Se laseagasopuesta se aan lsd gual sign e repelen. poo nfo en ea stuaron cTiComo carga eleeticatendriatendenciau entrar en fa célla: El abajo que heb ‘poner sa era eléctrca se represents com Was FE (63) 4. Cuando se habla de una stuaciin de equilibria no se estéhablando necesariamente de ‘una situacion en lacual las concentracioes tema externasean gutless de gue fifo rete de ones a aves de a membrana sea cro. dcr que a stuacion sea eae Se uti, «Sila situacién es de equilbro, la fuerza guia y la fuerza elétrca han de ser ‘equipotenciales y porto tanto las eeuationes dey W Habrin dese autos We= W (4) BP Bg = RToIn K es) _Despejando B, para los valores de concentracién del K°, se obtiene el valor del potencal ecg ara cba ferencia de coneentracion, dicho de ata manera a ecucion de Nerit RT ion), Be ln =F fionk ep Seha tomado como ejemplo esta ecuacién del potenial de equilbri para el K’, pero todo fo uc agu sera expgento os vido para cualguier ion qu pueda moverbea aves de membrana Nat Ch, Cesta) ne mia onus Capitulo 7. Electroisologia de la membrana neuronal. Potencial de reposo y potencial de accion Na tec yy nr ee erin cee ae a i « —}. > enna ecm Catt} pat + - Figura 7.4, Tendencia de fujo de distintos iones « través de la membrana neuronal en funcién elas gradienteselectico y quimico. Factores implicados en el mantenimiento del potencial de reposo Qué hace que se mantengan estables esas diferencias de concentracién de las diferentes especies iGnicas a través de la membrana, y por tanto del potencial de reposo?. Se puede responder de forma genérica, que son la permeabilidad selectiva de Ia membrana al paso de los iones, ms el transporte activo del Na’ y del K" los que ‘mantienen este equilibrio estable. En cuanto al primer factor, la permeabilidad selectiva de la membrana, esta se debe ‘aque al ser los jones sustancia cargadas no pueden atravesar la capa bilipidica de la ‘membrana, sino que solo pueden cruzarla a través de unos poros constituidos por proteinas, lamados canales tSnicos (Figura 7.5). Estos canales, que son selectivos para cada ion no se encuentran distribuidos en igual concentracién, ¢ incluso pueden distribuirse regionalmente de forma diferente. En el caso del mantenimiento del ppotencial de reposo, de los tres tipos de canales presentes en la membrana (pasivos, dependientes de voltaje y dependientes de ligando) s6lo se hallan implicados los ppasivos. Ademas, dentro de los canales pasivos, los canales de K’ son los que juegan ‘un papel més importante, dado que la célula es en reposo mucho mis permeabie al K* que al Na (permeabilidades relativas: Py : Py: Poy = 1.0 : 0.04: 0.45). En base a las diferencias de concentracién de cada una estas especies iénicas, la ecuacién de Netnst predice que el Na” se encuentra muy alejado de su potencial de cequilibrio, por lo que tiene una alta tendéncia a entrar en la eétula. Asi mismo, existe Fundamentos de Psicobiologia. Manual de Laboratorio ‘una comriente positiva de K* hacia el exterior de la célula, dado que su potencial de ‘equilibrio ¢s algo mas negativo que Vim. En el caso del CI, s6lo se produciré una cortiente negativa muy leve de cloro hacia el interior, ya que pricticamente esta en ‘equilibrio. Estos flujos pasivos terminarian alterando ias concentraciones iénicas a través de la membrana y por tanto del potencial de reposo, Este efecto se impide por la presencia de mecanismos de transporte activo en la membrana. Uno de estos ‘mecanismos de transporte activo es la Bomba de Na‘/K" (Figura 7.6). Este mecanismo cexpulsa Na’ e introduce K” en contra de sus gradientes de concentracién mediante un {gasto energético para Ia eélula (en una relacién aproximada de 3 Na‘ por cada 2 K’). La bomba de Na’/K* compensa mediante gasto de energia los flujos pasivos de iones recon git aprons oO Q. Q 2. o Jif ss Sey se oO oO oO oO oO oO Congo de ncvia INTERIOR Canal Pasivo Canal dependiente-V Canal dependiente -ligando Figura 7.5, Representacién esquemitica de tres tipos de canales iénicos de Na* La ecuacién de Goldman En los puntos anteriores se ha realizado una aproximacién a los factores que ssubyacen al potencial de membrana de reposo de las células nerviosas. La ecuacién de Goldman permite caleular el potencial de membrana en funcién de Ia variacién de cconcentracién de tres especies iénicas y su permeabilidad, quea través de esta ccuacién cs posible calcular (como un caso particular), el valor del potencial de reposo Pe K+ PysfNAT]+PoCH, Pe) + Py Na", + Pe CH, 6) 9 Capitulo 7. Electrofisiologia de la membrana neuronal. Polencial de repose y potencal de accién ‘MEDIO EXTRACELULAR MEDIO INTRACELULAR K+ ATP 2K+ Pi 3.Na+ Nat Figura 7.6, Representacién esquemitica del funcionamiento de la bomba de Na’/K". La bomba ‘pact dor expecis dic conn sr padre eerie medians de Tal como se observa en la Figura 5, la diferencia de potencial que se establece a ‘ambos lados de la membrana en situacién de reposo es el fruto de las conductancias relativas (I/fg,) de los iones y los potenciales de equilibrio de los iones En sitacién de reposo se considera que la conductanciaidnica sélo esta relacionada con los canales pasives. Por lo tanto se considera que en reposo lacorriente capacitativa €s cero, ya que esta depende de la variacién de voltaje (ecuacién E.4), y durante la situacién de reposo se considera que no varia, Actividades a realizar 1. Modificacién de las conductancias para las distintas especies iénicas Entre en las pantallas correspondientes al potencial de reposo 0 de potenciales pasivos (dependiendo del programa informatico que se esté usando) y modifique las conductancias del K*, del Na” y del CT. ;Qué cambios se producen en el potencial de reposo?. {A qué se deben esos cambios?, {Qué ocurre con el potencial de reposo ‘cuando sélo existe conductancia para una especie iénica en particular? 92 Fundamentos de Psicobiologia: Manual de Laboratorio ‘Cuadro 7.2. Circuito eléctrico equivalente de la membrana neuronal | _ tamembrana plastica pues descr camo uncut eric (Figur 7), de rant gue cuandshablanoc dee ditscnca ds pone ced sae Sta ge | ited este pede ser epreseiado porn ey de Ohms P< 1 Sense Insure se fovercal de nambrana Vin f Investec os de membrana al ce de eseateones Tinta, ia stenstdad tos de exe covet, de manera que cl pete de entree mde muvottos, le nensdad de coment en tse avesencsten shan Vn=Bn' ly 7) Asi mismo en verde usar el trmino resistencia nica se puede utilizar el érmino ‘oriductancia tonica (g),cuyaunided de medida ese Siemens ‘ =1/R ay siemems= 1/1 Ohimo Dicha conductanco, por ejemplo, ‘un canal mullipicada poe numero de Burt N 9) Lamination por tm rater ie comduco (anates Ses) ypc Ino so ae Pa apn coe cocina ward teears acs inte Sectoral ees espana Seca caiman nme yp py eirnlpu ewe peceenes A B 41 Ederor canal de sodio serial conductancia parcial de TT interior ura 7.7. A. Circuito eldetrico equivalente elétrco de las propiedades de la membrana. Imi lt dela conibueigh de los factors impicadas en el potential de Fepass Capitulo 7. Eletrofisiologia de la membrana neuronal. Potencial de reposo y potenial de acc 2, Modificacién de las concentraciones iénicas Calcule mediante la ecuacién de Nernst el potencial de equilibrio para el K* con los valores concentracién intema y externa que aparecen por defecto en Ia ventana de valores del programa (véase la Figura 7.8). Compare el resultado obtenido con el potencial de reposo observado. Incremente ahora la concentracién externa de K+ hasta 20mM. Caleule de nuevo E,,. {Qué cambios experimenta el potencial de reposo?. A Potencial de membrana (mV) mV o jamane oo na “ol K -20| -20| Ey +20] 0 ‘Goncentracén tern de Ki) . Figura 7.8. A. Cambios en el ptencial de reposo en funcign de la eoncentracién extema de K* orc cbservatos en el potencil de reposo en funcion de la concentecion externa de K* alo blanco) ent aos valores tericos prdichos por a ecuscion de Nerst inca ret) Maicado de Hodgkin y Horovitz 1971) Fundamentas de Psicobiologia. Manual de Laboratorio EL POTENCIAL DE ACCION El potencial de accién o impulso nervioso es una corriente biocléctrica con unas caracteristicas especiales: a) no es muy veloz (como méximo en células miclinicas 380 Kuh), b) no se suman, son eventos independientes, c) ¢s un fendmeno todo o nada, se ‘produce siempre con las mismas caracteristicas si se supera el umbral de activacién, en ceuyo caso contrariono se produce, y d) siempre son corrientes despolarizadoras, esto es: aumentan la concentracién de cargas positivas en Ia cara interna de la membrana; son asu vez autorregenerativos,y las conductancias fundamentales implicadas no son las correspondientes a los canales inicos pasivos, sino las de eanales dependientes de voltaje (véase Figura 7.5): canales de Na* que se abren (compuerta de activacién) y ‘vuelven a cerrase (compuerta de inactivacién) al paso de una corriente despolarizadora, y canales de potasio que se abren al paso ese mismo tipo de corriente y se cierran pasivamente al paso de estas en el caso del modelo del axén gigante del calamar que ‘nos ocupa. El potencial de accién se produce debido a que una serie de canales iénicos dependientes de voltaje dejan fuir durante algunos milisegundos alos jones en funcién de su gradiente electroquimico. Y ademés es un proceso que no implica gasto de energia para lacélula, ya que no se hallan implicados mecanismos de transporte activo. Cuando se produce un potencial de accién se da un aumento de la conductancia para el sodio que ocurre muy répidamente y disminuye posteriormente también muy ‘pido, a su vez se produce un aumento de la conductancia para el potasio, que ocurre de una forma mAs gradual. Estos canales especiales se abren cuando se produce un ‘determinado nivel de despolarizacién tal que provogue un cambio entre las interacciones eléetricas de las proteinas constituyentes de los canales idnicos, esto provoca un cambio conformacional y pueden abrir la abertura del canal que en situacién de reposo estaria cerrado por la propia disposicién de las proteinas de canal Elpotencial de acciénes provocado por una corriente despolarizadora, un potencial gradual o local (que puede ser fruto de un potencial simple o dela suma normalmente, de potenciales de receptor, potenciales postsinépticos, 0 de los. inducidos experimentalmente.) Estos potenciales graduales tienen lo que se denomina ropiedades de cable eléctrico, Io que no comparten con el potencial de accién. La condicién que ha de cumplir es superar un valor de umbral. El umbral de actividad es ‘una cantidad minima de corriente despolarizadora que induce un cambio conformacional en los canales dependientes de voltaje, que una vez abiertos dejan fuir ‘los iones movidos exclusivamente por la diferencia de potencial entre el potencial de membrana y sus respectivos potenciales de equilirio. ‘Cuando se produce un potencial de accién, (véase la Figura 7.9), este se produce siempre con las mismas caracteristia, el limite para la despolarizacién es el potencial de equilibrio para el sodio, sin embargo munca lo alcanza, debido al cierte de la compuerta de inaetivacién del canal de sodio. 95 Capito 7. Bletrofsologiade a membrana neuronal. Potencial de reposo ypotencial de acién 1ra7.9. Cambios elétricos en la membrana durante la produccién de un potencial de aceién fn), Se representan también las variaciones en las conduetancias de Na* (By) y K" (Be) Sean el modelo de Hodgkin y Huxley, Modificad de Hille, 1981 Los potenciales de accién no se suman, ya que cuando ya que existen dos periodos refractarios que impiden esta circunstancia (wer figura 7.9). El periodo refractario absoluto se corresponde con el cierre de Ia puerta de inactivacién del canal de Na’. Durante este periodo no es posible inducir otro potencial. El periodo refractario relativo se corresponde con una fase de hiperpolarizacién de la célula. Durante este periodo se puede inducir otro potencial, pero con un estimulo supraumbral. Corrientes que participan en la produccién del potencial de accién El potencial de membrana va a variar en funcién del tiempo durante el transcurso el potencial de accién as{ mismo se van a producir cortientes a un lado y otro de ‘condensador (corrientes capacitativas, 1), y el resto de Tos jones (cloro y otros) van & fluir al principio y al final del potencial de accién (corrientes de pérdida, I.) como 96 Fundamentos de Psicobiologia’ Manual de Laboratorio Cuadro 73. Técnica de fijacién de voltaje La téenica de facién de volte (fig. 1) ideada por K.S. Cole y sus colaboradores desarollada por A.C Hodgkin, A.F- Hutleyy B. Kale (1982) consite onan gutena que permite vara y manienersonsane, fa manera de un tetmostat, i ciferenca de potengal {iia membrana y facia! manypblacion de las corienessonieasy de nanera Gus pacer ‘obtenerse Tos efactos parciles de la despolarizacion o hperpolarzacion de la membrang Sobre iyo de oes. Yases or alain ce a conenfacton evi Je Nat sis cling en el medio extracelular ara mantener la diferencia de potenctal (Hodgion y nie, 1982) 0 la uiizacion de agentes bloqueantes de los canals sdnicos(venenos) tle como la terodovorina TO "fo ea, Sonmiewne C POTENCAL DE MENERANA Figura 7.10, Esquema de la técnica de Bjacién de volte on estan loge desentraar uel peso el de as corient ines hy | tga fo Senfaroduccon caacterstcas el pons de scan ens son igang efecto de la variacidn de la diferencia de potencial producida por el potencial de accién, ‘de manera que la corziente total seria la Ke+ he the +h, (19) Representacién matemtica de las corrientes iénicas durante el potencial de accién T= ga(max)-m!-h-(V-E,,) (E11) o CCopitulo 7. Electrfisologia de a membrana neuronal. Potencial de reposo y potenial de acciin (12) (13) T= Cy * (dV/t) (14) Ltheth+h (£15) rn: variable actvacin dela compuesta de potasio depeadiente de vole. a an dea Pongal de scien de soo Ir variable de inactvacion dela compuera de inactivacin del sdio. Curiosamente el factorl ques elevan en las ecuaciones cada una de estas variable, parece corresponderse con 4 unidades proteicas globulares par el canal de potasio (n) 5 para la compuerta de activacin (m) del sodio y una para la de inactivacion(h). ‘Actividades a realizar Ja, Fijacién de voltaje. Determinacién de las corrientes iénicas implicadas en la produccién de un potencial de accién Tal. Determine el valor minimo de duracién y voltaje de un pulso despolarizador ‘que provoque la produccién de un potencial de accién. Se recomienda que comience con una duracién de 0.1 ms y varie la intensidad del potencial desde 10 ma, incrementando el voltaje de 10 en 10, Realice diversas combinaciones y traslade los resultados ala tabla 7.2. Coloque una cruz en aquellas combinaciones que provoquen, un potencial de accién. mA] 10 | 20 | 30 | 40 | so | 60 | 70 | g0 | 90 | 100 | 110 | 120 ou 02 03 04 0s 06 o7 F Fundamentos de Psicobslopla: Manual de Laboratorio 08 09 XY 10 Ll 12. “ante 2 Las Fiat representa urcin del pls nscolunnasrepresentan ninensidad (may , ° {.Qué conclusién extrae de estos resultados?, Grafiquelos en un eje de coordenadas representando en abscisas la duracién y en ordenadas la intensidad {Qué relacién observa’. {Existe alguna variacién en ia amplitud del potencial de accién una vez producido?. ;A que cree que es debido?. Discuta sobre la naturaleza de los factores que inducen la produecién del potencial de accién. (mA) eussssaseses 04020204 0508 07 800 4044 12 t (ms) a2. Una vez conocido el valor final de su serie que provoca un potencial de accién. Sitiese en la pantalla de variacién de potencial de membrana. Despolarice ‘gradualmente la célula desde el valor de potencal 26 V y auméntelo de 13 en 13 Yoltios. Deje que se superpongan los sucesivos trazos. Considere estos sus primeros datos experimentales e imprimalos. 99 Capitulo 7. Eletrfisilogia de la membrana neuronal, Ptencal de rposo ypotencial de accién Baja en pasos sucesivos la concentracién externa de Na" y aplique un pulso ant en anise Islas laconcentracién externa de Na’ y sustitiyala por colina sil programa tiene esa opcién. ‘Tiene usted ahora una célula en potencial de reposo pero sin concentracién extemma de “Na” Despolarice la célula de 13 en 13 voltio a partir de los valores del punto anterior. Estos son sus segundos datos experimentales. Imprimalos. {Qué diferencias observa con los datos del punto 27. ,Qué corrientes se hallan representadas?. ;Qué es y @ que se debe la corrente de pérdida?. Qué es y a que se debe la corriente capacitativa’ Expliquelo y discuta sobre ello. A Potencial de membrana (iV) 8&8 o BS T SBbORS g ; Potencial de Membrana (mV) ah ae ae ‘Concentracién externa de Nal (mM) atl. A- Amplitude poten de secin on fn dela conenracn xtra dN a oa AI etciehis de Nat exo B. Dependenca del potencal de reposo sr gemcenn eraconagin eter de Nar odiono de Hodgkin y Kate (949) Fundamentos de Pslcobiologia. Manual de Laboratorio Tad, Hasta aqui nos encontrariamos con unos resultados semejantes a los cexperimentos de Hodgkin y Huxley (Figura 7.12). Pero ain tenemos que determinar ‘una de las corrientes implicadas en el potencial de accién, {Cémo determinaria el valor de la corriente que falta?, Represéntelo y discuta sobre sus resultados. mv joa ce vote ey leet ‘membrana (mAVern') ce ‘re Corriente de - heheh) 4 hela Tiempo (ms) Figura 7.12. Respuesta de la membrana en condiciones de fijacién de voltaje a un pulso epolerador de 0S mV espns dbl la caricte dk ta habers ream el eager eling Tenet ea" eau surrayendo fy hay Moiiade de Hodginy iuxley a5. Pase a ta pantalla de voltaje y a la de corrientes iGnicas y compruebe si sus resultados del punto anterior se ajustan a los del potencial provocado por el pulso ‘6ptimo determinado por usted. 1b, Fijacién de voltaje. Control farmacolégico de un potencial de accién Siguiendo el mismo procedimiento de fijacién de voltaje, Otra serie investigadores ‘pudieron bloquear tanto la corriente de sodio como la de potasio (Figura 7.13): 161. Active la ventana de potencial de membrana, Afiada diversas concentraciones a ritmo creciente de cantidades de TEA (tetretilamonio), TTX (tetrodotoxina) 0 Pronasa (este iltimo si el programa lo contempla), a la vez que aplica su estimulo _ ‘Nat Elemento presinéptico Elemento postsinéptico Figura 84, Bsquema de una sinapsseléstrica donde se halla representada una unin estecha {ok ls eanalestoncosenfentados que perme fo ionico Fases de ta transmisién sindptica. ‘Una sinapsis quimica emplea més tiempo en la transmisiOn sindptica que las sinapsis eléctricas, ya que en las sinapsis eléctricas hay comunicacién directa entre los citoplasmas, de manera que fluyen los iones directamente, propagandose el potencial de accién, En el caso de las sinapsis quimicas no se produce esa transmision fisica y ‘temporalmente continuada del impulso nervioso, sino que se produce un fendmeno de ‘ransduccién arriba mencionado. Los pasos esenciales de la transmisién sindptica son los siguientes: Llegada de un potencial de accién al elemento postsindptico y aumento de Ia conductancia para el Ca”. ‘Al llegar el potencial de accién produce la apertura de canales dependientes de voltaje que permiten Ia entrada de Ca" (este tiene una gran tendencia a entrar como ya se indic6 en el capitulo anterior, existiendo una bomba de Ca”’ especifica que lo cexpulsa al exterior), este calcio al entrar y estar cargado positivamente contribuye muy parcialmente a la despolarizacién del elemento presinéptico, pero no es este su efecto principal ni su funcién. BI Ca'* induce 1a movilizacién de las vesiculas sindpticas y Ia expulsion de su contenido de neurotransmisores al espacio sindptico. Los microtibulos presentes en el elemento presinéptico estén compuestos de una protcina globular (neurina), estas proteinas pueden interactuar con la estenina, una 3 Capitulo 8. Potenciales sinépticos¢ integracién sindptica protcina que recubre las vesiculas sindpticas. Cuando el Ca'* aparece se produce un mecanismo muy similar a la que se da entre las miosinas y actinas de una fibra muscular, Este proceso de destizamiento lleva a hacer que ias vesiculas sindpticas fundan sus membranas con el elemento postsindptico y viertan su contenido de neurotransmisores a la hendidura sindptica. En esta membrana presinéptica también cxisten proteinas (sinapsinas) que son fosforiladas con In mediacién del Ca” y participan en el reconocimiento de membranas. Segin estudios de diversos autores esta cantidad de neurotransmisores por vesicula es considerada un “quantum”, dicho de otra ‘manera una cantidad discreta de neurotransmisores. Reconocimiento de los neurotransmisores por parte del receptor postsindptico.. Tos neurotransmisores se unen al receptor y producen un cambio de permeabilidad ‘énica directamente(sinapsis onotrépicas) y de forma poco duradera, 0 actian sobre proteinas de receptor que inducen la sintesis de un segundo mensajero en el interior del clemento postsindptico provocando y amplificando el cambio de permeabilidad, haciendolo durar desde minutos a horas (sinapsis metabotrépicas) Tanto las metabotrépicas como las ionotrépicas pueden set excitadoras 0 inhibidoras. Las sinapsis inhibidoras implican la apertura de canales de CI'o de K" las primeras s6lo producen un efecto hiperpolarizador si el elemento postsiniptico est previamente despolarizado, ya que el ién CI en potencial de reposo estépricticamente en equilibrio (receptores de GABA,). Las de K* sin embargo tienen un efecto hhiperpolarizador mayor, puesto que en situacién de reposo el K" se halla mas alejado de su potencial de equilibrio que cl Cr, y por Io tanto sale al exterior produciendo un aumento de la concentacién de eargas negativas en el interiot de la célula (hiperpolarizacién). En las sinapsis excitatorias se produce la apertura de canales que producen un aumento de la conductancia del Na+ y del K" (en los receptores, nicotinicos de acetilcolina es el mismo canal el que permite ambos flujos); siendo el ‘efecto neto un aumento de las concentracién de cargas positivas en el interior de la célula (despolarizacién). Realmente el efecto final de tas conexiones sinépticas quimicas es inducir un cambio de permeabilidad, dicho cambio puede obtenerse tanto por apertura de canales como por cierre de éstos (mecanismos utilizado por ejemplo por los receptores gustativos para las sustancias dulees, que se despolarizan, mediante la accién de un segundo mensajero que induce la fosforilacién de canales de K", produciendo sus cierre, y despolarizando por tanto la eélula por acimulo de cargas postivas en forma deK’ Recaptacién y fo degradacién de los neurotransmisores. ‘Unmecanismo de tegulacién de la accién sinéptica se relaciona con la Ilamada tasa de recaptacién. Esto hace referencia a larelacién entre la cantidad de neurotransmisor que se expulsa y la que es recaptadg por el elemento postsinéptico. No todos los neurotransmisores estin bajo el mismo sistema de control. Por ejemplo, las Fundamentos de Psicobiologia: Manual de Laboratorio catecolaminas son recaptadas y posteriormente reutilizadas como neurotransmisores © degradadas (MAO, COMT) para entrar en otras rutas metabélicas, sin embargo la aceticotina es degradada en el espacio sinéptico (aceticolinesterasa),y los productos reabsorbidos (colina). Mecanismos metaborrépicos. Existen muchas variaciones pero en esencia tienen determinadas earacteristicas en comin: 2) La accién del neurotransmisor no es directa, ) El neurotransmisor actia sobre la proteina de receptor, cuyo cambio ‘conformacional fruto de su unidn con el neurotransmisor induce la activacién de un transductor (proteina G, denominada asi por depender su accién de GTP) que activaa efectores primarios tales como adenil-cielasa,fosfolipasa C,fosfolipasa A», que sintetizan los segundos mensajeros ° ©) Sintesis de un segundo mensajero (AMPe por parte de la Adenil ciclasa, inositol- trfosfatoy diac glicerolporfesfolipasaCo deldo araquidénico porlafosfolpase 4) dicho segundo mensajero induce la activacién de un efector secundario (proteinas kinasas dependientes de AMP, proteinas quinasas C, Ca"*, etc). ©) Y estos finalmente inducen el cambio de permeabilidad en la célula mediante ‘modificacién de la conformacién de las proteinas de canales (p.c. fosforilacién) Las proteinas G pueden inducir sin el resto de los elementos anteriormente citados 1a apertura de canales iénicos en determinadas sinapsis. Otros mecanismos regulatorios. En determinadss sinapsis metabotrépicas como en el caso de las de dcido sglutdmico (glutamatérgicas), existe la posibilidad de producir cambios plasticos en la sinapsis haciendo que esta prolongue su actividad por mucho mas tiempo. Este ‘mecanismo se basa en varias circunstancias: a) existen diferentes receptores con diferentes propiedades para un mismo neurotransmisor. by la posbilidad de sintetizar un mensajero retrégrado que vaya hacia el elemento presindptico a partir de su sintesis en el postsindptico. En estas sinapsis existen tts tipos de receptores para el glutémico: los NMDA (su mejor agonista es el N-metil-D-aspartato), que €3 dependiente de voliaje y esté bloqueado por Mg”, un receptor no-NMDA (quisqualato, kainato 0 AMPA) dependiente de voltaje y un receptor metabotrépico que cuando es activado libera el Ca" del reticulo endoplésmico del elemento postsindptico. El hecho es que la cestimulacién repetida libera el magnesio que bloqueael canal NMDA, produciendo una us Capitulo 8, Potenciales sindptics eintegracion sindptica mayor despolarizacia de la célula que acompafa al aumento de Ca” arooe St te mayor eantidad de Ca” critica para este mecanismo entra través de e=f° canal), el dao no se conoce con totalidad,y son muy importantes proteins tales como a maccarina, la quinasa de la calmodulin, \a proteina Cy la trosina quinasa. Ess sipareee set que induce la sintesis de NO (mnondxido de nittgeno) | CO Rraondxi de earbon0), que podria induc ene elemento pesingptico un sumer de (enon ge glutdmico, mediante Ta activacin de una mayor sintesis de segundos rmensajeros que aumenten Ia liberacién de neurotransmisor. tra serie de sustancias, en gran medida neuropéptidas, van a acter Some neta re oguladores, Esto es, pueden actuar sobre lugares de reconocimiento en /oe neuromodi’otores postsingptices faciitando 0 dificultando la accién de! sino smigor (muchos firmacos emulan la actin de esos neuromoduladores), Fa neo trammromodulatoria no sdlo ha de ser sobre los receptores, por ejemplo una Sinapsis axoaxsnica puede dat lugar a fendmenos de inhibicion presindptica 0 facilitacién presindptica. ACTIVIDADES A REALIZAR. ‘Simulacién de la produceién de PPSEs en un elemento postsinéptico SSimulacién de la produccién de PPSIs en un elemento postsiniptico ‘ntogracign temporal de potenciales PPSE y PSI «To largo de una dendsits 9 soma. ‘Constante de tiempo y espacio. Tetegracién temporal de potenciales PPSE y PPSI en una repidn activa, Constante de tiempo. Recapitulacién de la integracién sindptica, Sinapsis eléctricas, ‘Sinapsis quimicas Tonotr6picas Metabotrépicas. Propiedades de los receptores postsinépticos, neurotransmisores ¥ neuromodulacién ‘Simulacién de Ia produccién de PPSEs en un elemento postsiniptico {LILI Sitie la membrana si el programa lo permite en modo membrana pasiva de vero que nos sitve de modelo de dendrita 0 soma. Tome como puso excitsiono Tutrdn el menor dels stsactrios dela prietca anterior (Lal) »¥ uilislo coma Pgh, Observe asi mismo las conductancias yIascorrentes de la membrana. Qué he earrido?, i Qué naturaleza tienen las corrientes que han participado?, 1.1.2. Uilice et mismo tipo depts per ahora dspare varios potencies (hasta 5) Fundamentos de Psicobiologia: Manual de Laboratorio Senee qnanc ota pt erent eave tr dace manta corrientes de la membrana. ;Podria hacer que la neurona respondiera mejor a retardos SS ee eT ee ma ae ‘modificarse?. Expliquelo y realicelo en su caso. ;Cuéles son los efectos de la suma sobre las diferentes conductancias y corrientes de la membrana?. Simplacién de la produccién de PPSIs en un elemento postsinéptico 1.2.1, Site la membrana si el programa To permite en modo membrana pasiva de ‘manera que nos sirve de modelo de dendrita 0 soma. Tome como pulso inhibitorio el inverso al menor de los satisfactorios 1a.1 de la prictica anterior, y utilicelo com un PSI. Observe asf mismo las conductancias y las cortientes de In membrana. {Qué ha ‘curtido?. ;Qué naturaleza tienen las corrientes que han participado?. 1.2.2. Utilice el mismo tipo de pulso pero ahora dispare varios potenciales (hasta 5). Observe que ocurre Ajuste Is tiempos de retard entre los pulos hasta conseguir que se sumen, Deserta los fetes dela sana ache as diferentes conduclancias corints de membrana, Poa hacer quel neurons responciera mejor eetdoa sgrandes?. En su caso , {qué propiedades pasivas de Ia membrana habrian de ‘modificarse?, Expliquelo y realicelo en su caso. {Cudles son los efectos de la si sobre las diferentes conductancias y corrientes de la membrana’. m 1.23, Compare ests resuliados con os del punto 1.1. Cle sn as diferencns mis destacables entre estos potenciales PPSIs y PPSEs?. {Qué semejanzas existen entre si?. Diseuta sobre elo exliquel basindose ensue propiedades de ranmisin. Compare ‘a su vez con los datos y conclusiones del punto 5 de la practica anterior. mee Integracién temporal de potenciales PPSE y PPS a lola CConrtante de tempo ycontane de espacio. "ge dena denis 1.3.1. Sitte la membrana si el programa | Seren propuestas en la tabla siguiente: * 7 Capitulo 8, Porenciales sindpricos ¢ integracién sindptica ESTIMULOS AMPLITUD DURACION 1 PPSE +I PPSI 1 PPSE +2 PPSI 1 PPSE+3 PPS 1 PPSE +4 PPSI TPPSE +5 PPSI 2 PPSE + | PPS 3 PPSE + 1 PPSI 4 PPSE + 1 PPSI 5 PPSE + | PPSI {:Qué propiedades de pueden extraer de estos datos con respecto alos PPS?. En algiin ‘momento se ha desencadenado un potencial de accién2. Expliquelo, Observe os fujos corriente y conductancia iénica. 1.3.2, Modifique la constante de tiempo o su variable equivalente en el programa hhaciendola mayor y menor que la establecida por defecto. Haga 1o mismo con la cconstante de espacio. Utilice las mismas combinaciones del punto anterior para cstimular Ia célula, Reptesente ls resultados a manera de tabla al igual que en el punto anterior. ESTIMULOS AMPLITUD ‘DURACION TPPSE +1 PPST TPPSE+2 PPS TPPSE+3 PPSI LPPSE+4PPSI TPPSE +5 PST 2 PPSE + 1 PPSI 3 PPSE + | PPSI “4 PPSE +1 PPS 3 PPSE +I PPSI nig Fundamentos de Psicobiologia: Manual de Laboratorio En funcién de estos resultados qué podemos concluir para la integracién neuronal?, ;Las neuronas modifican su constante de tiempo o cada tipo neuronal posee su constante de tiempo?. Expliquelo. ;Qué variables oconstantes celularesdeterminan Ja constante de tiempo en funcién de sus datos?. Compare los flujos de corriente y conductanciaiénica con los datos del punto 1.3.3. {Qué ha ocurrido con la suma espacial y temporal de los potenciales? ;Qué puede usted desentrafiar de esas diferencias?. ;Todas las células realizarin con la misma eficacia la suma temporal de los potenciales?. ;Por qué? Integracién temporal de potenciales PPSE y PPSI en una regién activa, Constante de tiempo. 1.4.1. Sit la membrana si el programa lo permite en modo membrana activa. Con los tmismos pulsos anteriormente utilizados (con pulsos de menor amplitud si no se observan diferencias entre ellos), realice las mismas combinaciones que en el punto 1.3.1. Represente los resultados de igual manera pero seftale en que citcunstancias se producen los potenciaies de accién. ; Qué diferencias principales hay com respecto alos resultados del punto 1.3. Explique en que se basan esas diferencias, Observe todas la s conduetancias y corrientes iénicas. {A qué achaca las diferencias?. 1.4.2, Realice el mismo protocolo pero variando el valor de la constante de tiempo (mayory menor que el valor por defecto) ;Cémo infuyen estas variaciones en la summa temporal de los potenciales?.;Qué nos dice Ia constante de tiempo de una ula desde el punto de vista de procesamiento neuronal? ;Todas las neuronas responderén igual « iguales frecuencias de estimulacin sindptica?. Valore la importancia de la amplitud y Ia frecuencia de estimulacién para la transmnisién sindptica. Recapitulacién de Ia integracién sindptica Para la realizacién de esta cuestién es posible que sea necesario consultar la bibliografia recomendada. 1.5.1. A continuacién se muestran las ecuaciones de Hodgkin y Huxley para la cconstante de tiempo y constante de espacio, Interprételas, AY, () =I, R-(1-e*) “C Cte, de Tiempo Av, (x) = AV, * &*™* 2= (tq/it)” — Cte de Espacio Capitulo 8. Potenciales sindpticns e integracién siniptica Sinapsis eléctricas. 2.1.1. Las sinapss eléctrcas tienen una sere de propiedades que la difereneian de las Sinapsis quimicas. Para estudiarlas entre en el sistema de registro modelizado donde se puede registry estimalar tanto en el elemento possindptio como en cl presinaptico. ‘Aplique un estimulo despolarizador en el elemento presinéptico. ;Qué ha observado sobre la transmisién del potencial?. Exptiquelo, . 2.1.2 Aplique un estimulo despolarizador en el elemento postsinéptico. {Qué ha ‘ocurrido el presinéptico?. Expliquelo. Estos son siempre los resultados en una sinapsis fléctrica, {Por qué?. {Qué diferencias tiene este tipo de sinapsis con respecto a la quimica en cuanto a velocidad de transmisién?. Justifiquelo. ‘Sinapsis quimicas La sinapsis quimica consta de un clemento presiniptico y otro postsinéptico como en cl caso de Ia sinapsis eléctrica. Pero aqui comprobaremos que el mecanismo de transmisidn quimico esunidireccional. Ls sinapsis quimicas pueden se divididas entre ripidas y lentas, las primeras el neurotransmisor se une a un receptor postsinéptico ligado a un canal, su apertura es inmediata(receptores ionotrépicos), pero su efecto es mis corto y menos sujeto a regulacién. Las lentas simplifican la sintesis de segundos ‘mensajeros que enlentecen el proceso, pero amplifican el efecto del neurotransmisor, pueden hacerlo més duradero y también mucho més modulable y duradero. 2.2.1, Tonotrépicas. Entre en la pantalla de transmisién sindptica. (Qué sustancia ‘esencadena el proceso de transmisién?. Existe algin mecanismo de captacién del tlemento presinaptico para el neurotransmisor. Entre ena pantalla de receptores, ent tn el simple. Describa el proceso de apertura del canal de receptor. ,Qué papel ha jiugndo el Ca” en este proceso?. {Cémo se denomina genéricamente esta funcion del ca. 2.2.2. Metabotrépicas. Entie en la pantalla de receptores entre en los. cuatro ‘etabotrépicos. Cudntos segundos mensajeros son necesarios en cada cadena de activacién postsindptica. Qué mecanismo utilizan para excitar 0 inhibir al elemento postsindptico?. De una explicacién de porqué son modulables.. 2.2.3, Entre en la pantalla de la proteina G. Describe el proceso. 12.24, Entre en la pantalla de los terminales presinépticos. Es posible determiner la Fancién del elemento presiniptico por su aspecto. Postule alguna idea sobre ello. Pundamentos de Psicobiologia: Manual de Laboratorio 2.2.5. Entre en la pantalla de la sinapsis de glutimico observe todo el proceso. Qué ‘ocurrira silos canales no-NMDA fueran bloqueados?. 2 si son bloqueados con APS Jos receptores NMDA?. ;Qué funcién tiene la calmodulina?, 2.2.6, Compare las sinapsis eléctrica, quimica ionotrépica y quimic i C 8 ica ionotr6pica y quimica metabotr6pica. Que diferencias y ventajas tienen cada una de ellas con respecto a las om 2.2.7, ,Qué es el retardo sinaptico?. ;Dénde se produce?. {A qué se debe? 2.2.8, Qué ocurtiria si un agente quelante del Ca" se eplicase al medio extracelular en: 4) un elemento presinéptico ») un elemento postsiniptico de una sinapsis de glutémico ©) En una sindpsis excitatoriay en una inhibitoria, Expliqueto en todo los casos Propiedades de los receptores postsinaptis ipticos, neurotransmisores y 2.3.1, Entre en las pantallas de los neurotransmisores. Describa como es proceso de transmisin sindptica. Observe las similitudes y diferencias en los mecanismos de ‘ransmisién entre neurotransmisotes de la mismia familia (catecolaminas: dopamin soradrenaliny renal idols: eotnina yelaton om azine cuntraris, acetil-colina, aminoicidos: GABA, glutémico, histidina, glicina yn i encefalinas , endorfinas, vasopresina, etc... giens y newopipsies: 2.3.2. ;Bxisten neurotransmisores que siempre produzcan una 5 : una misma respuesta de despolarizacion o hiperpolarizacién?, Siexisten cuales son, ;Cudntos estén implicados, ‘en sinapsis metabotrépicas y cuantos en ionottépicas?. 2.3.3. Bxisten diferentes receptores para cada neurotransmisor. ;Qué utilidad crees 3.35 Sieg para; . {Qué utilidad crees que 2.3.4 ,Qué es un neuromodulador?. {Ticne una naturaleza quimica diferente a la de Jos neurotransmisores? BIBLIOGRAFIA RECOMENDADA. BRIDGEMAN. B.(1989). Biologia del comportamiento y de la mente. Alianza editorial Madrid, pp. 41-89. on Capitulo 8. Potenclales sindpticas integraciin sinéptica anne LR SCHWARTZ, LY ISSEL, TM. (1952) Prins of Neal Science, Kann Sev ak, LHL AND JESSELL TM. (1997). Newoeloniay Conduct, SR NtenLLe 1G I98D)- Del netona al cerebro. Eitri Reve suse Ge (1994) Neurobiology. Thi edtin. Oxford Univers Press Now Yoik, Oxford CAPITULO 9 Macroanatomia del Sistema Nervioso. Diseccién del cerebro de la vaca INTRODUCCION El objetivo del presente capitulo es el estudio macroanatémico de las estructuras més sobresalientes del cerebro de un mamifero. La adquisicién de un conocimiento prictico de la morfologia y relaciones espaciales de las principales estructuras del cerebro de los mamiferos facilita enormemente cl estudio de la mayoria de los temas esarrollados en cursos de Psicologia Fisiolégica, Psicofisiologia, Introduccién a las Neurociencias,et., que requieren una base de conocimientos neuroanatdmicos El estudio de la macroanatomia sobre un cerebro real facilita Ia obtencién de una imagen tridimensional de las estructuras estudiadas, la mejor comprensién de las relaciones espaciales existentes entre ellas y la puesta a prueba de los conocimientos adquiridos te6ricamente, asenténdolos y permitiendo corregir posibles conceptos y relaciones erréneas que se hayan podido formar durante el estudio teérico de los mismos. Por supuesto, antes de la realizacién de estas actividades pricticas es recomendable haber estudiado la anatomia del sistema nervioso central en alguno de los excelentes manuales existentes (algunos de ellos aparecen en Ia seccién de Bibliografia Recomendada). Los cerebros de vaca, oveja y cerdo son utilizados frecuentemente en los laboratorios de pricticas debido a que presentan la morfologia tipica de mam{fero, son fciles de conseguir y poseen un gran tamafio, lo que facilita su manipulacién y su estudio macroscépico. En la presente prictica se examinara la morfologia superficial del cerebro de la vaca y se realizaré la diseccién gruesa de sus estructuras més prominentes. Esas mismas estructuras serin estudiadas mediante secciones sagitales, horizontales y coronales. my Capitulo 9, Diseccién del cerebro dela vaca ACTIVIDADES A REALIZAR ‘A.continuacién se sumarian el conjunto de actividades que componen la presente ‘prictica con objeto de presentar de forma concisa el esquema completo de trabajo. Se recomienda realizar las actividades en el orden propuesto y seguir cada uno de los siguientes pasos: ‘Actividad 1. Preparacién de los cerebros. Fijacién en formaldehido Actividad 2, Examen superficial del cerebro de la vaca Examen de las meninges cerebrales studio de los hemisferios cerebrales. Corteza cerebral y cercbelosa Examen de la vision basal del diencéfalo y tronco cerebral. Pares craneales Actividad 3. Diseccién intema Estudio del plano sagital medio. Delimitacién de ventriculos y grandes regiones cerebrales Estudio de tractos y vias Discccién de las estructuras internas de los hemisferios cerebrales Diseccién del hipocampo Examen del tronco cerebral Estructura y conexiones del cerebelo Actividad 4. Estudio de cortes seriados de tejido . ‘Obtencién de cortes seriados y tincin del tejido mediante la tincién de Mulligan Estudio de los cortes en planos coronales Estudio de los cortes en planos sagitales Estudio de los cortes en planos horizontales PREPARACION DE LOS CEREBROS Los cerebros deben ser fijados durante un periodo de 10 a 15 dias en un bafio de formaldehido al 4 - 10% (p.e., si se emplea formalina al 40% para hacer la disolucién, poner una parte de formalina y tres de agua). Es conveniente emplear contenedores © ‘cubetas suficientemente grandes como para que los cerebros quepan holgadamente y permanezcan sumergidos por completo en la solucién fijadora. Si se deforman por fapretarse contra las paredes © unos contra otros conservarin definitivamente esas

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