1 Grado de Ciencias del Mar

Laboratorio de Biologa
PRCTICA 4

EXTRACCIN Y SEPARACIN DE PIGMENTOS VEGETALES

OBJETIVO
El propsito de este trabajo es el de extraer los pigmentos fotosintticos y separarlos
mediante una tcnica compleja de cromatografa.
INTRODUCCIN
La fotosntesis (proceso que permite a los vegetales a adquirir la materia y la energa
que necesitan para desarrollar sus funciones vitales) se lleva a cabo por el aspecto en las
hojas y en los tallos jvenes de pigmentos, capaces de captar la energa lumnica.
Entre los distintos mtodos que existen para separar y adquirir esos pigmentos se
encuentra el de la cromatografa; una tcnica que accede a la separacin de las
sustancias de una mezcla, teniendo una afinidad diferente por el disolvente en el que se
encuentran; al introducir una tira de papel en esa mezcla, el disolvente arrastra con
distinta velocidad a los pigmentos segn la solubilidad que tengan y los separa,
permitiendo identificarlos perfectamente segn su color.
Los cloroplastos poseen una mezcla de pigmentos con diferentes tonalidades: clorofila
A (verde intenso), clorofila B (verde claro), caroteno (naranja) y xantofila (amarillo).
MATERIAL
- Mortero completo
- Gradilla
- Tubos de ensayo
- Tubos de recogida
- Embudo de cristal

- Alcohol 96
- Agua destilada
- Benceno o tolueno (o gasolina)
- Papel de filtro
- Hojas verdes (geranio, espinaca...)

TCNICA DE PREPARACIN
1. Picar trozos pequeos de hojas limpias en el mortero (triturar sin golpear).
2. Aadir poco a poco alcohol y machacar hasta alcanzar un extracto de color verde ms
o menos intenso, con una cantidad casi a llenar el mortero.
3. Preparar un tubo de ensayo con un embudo dentro y poner sobre la gradilla.
4. Colocar dentro del embudo un trozo cuadrado de papel de filtro ajustndolo al
embudo (doblndolo cuanto sea necesario)
5. Verter el extracto de alcohol sobre el embudo para filtrar y eliminar los restos de
hojas. Llenar o ms del tubo. Si es mucha cantidad verter en otro tubo y dejar
filtrando para guardar extracto sobrante.
6. Derramar tolueno en otro tubo midiendo ms o menos de tubo o menos.
7. Verter ahora el tolueno, despacito y resbalando la pared, en el tubo con extracto de
alcohol (no llenarlo porque an hay que aadir producto).
8. Preparar un trozo de papel de secar para tapar el tubo con tu dedo gordo.

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9. Voltear varias veces el tubo disolviendo ambos productos (no agitar) hasta conseguir
una mezcla homognea.
10. Aadir de tubo de agua destilada, resbalando la pared de tubo y observar.
11. Si no se obtiene una separacin, girar despacio nuevamente el tubo.
12. Analizar lo observado y explicar el resultado.
12. Percibir el papel filtrado e interpretarlo.
ANLISIS DE LOS RESULTADOS
El resultado de esta prctica es obtener dos bandas de pigmentos en el tubo de ensayo.
Una verde (arriba) y una amarilla (debajo) por la diferente solubilidad de los pigmentos
en los productos, y la diferente solubilidad y densidad de los tres productos.
o En el tubo de ensayo, con las sustancias ya mezcladas y reposadas en la
gradilla durante unos minutos, se contemplar una separacin de colores. Empezando
desde arriba, nos encontraremos con la clorofila y el tolueno de color verde. En segundo
lugar, en medio, la xantofila y el alcohol con un aspecto amarillento. Y por ltimo, en la
base del tubo, hallaremos el agua emulsionada de color blanco.
Posteriormente, se observar las capas de pigmento sobre el papel de filtro, nombrando
los colores.
o En el papel del filtro, lo que se advierte son diferentes capas de pigmento.
Desde fuera hacia dentro, distinguiremos el color anaranjado del caroteno, el amarillo
de la xantofila y los verdes de la clorofila A y B (en este ltimo, depende del ensayo de
cada uno. A ciertas personas le aparecern el verde intenso antes y a otros el verde
claro).
Esta tcnica de separacin se basa en la diferente solubilidad de los pigmentos en el
alcohol. En primer lugar, al romper las clulas en el mortero, los pigmentos que se
hallaban encerrados en los cloroplastos dentro de ellas pasan al alcohol. En numerosas
ocasiones, uno de los pigmentos es ms abundante, ocultando al resto. La separacin se
produce en la hoja de papel de filtro, ya que el pigmento ms soluble en el alcohol ser
el que forme una banda coloreada en la parte superior del papel y el menos soluble en
alcohol ser el ltimo en ascender a travs del papel.