TRABAJO DE ANALISIS METODO KJELDAHL

1. VENTAJAS, DESVENTAJAS Y RETOS EN EL MTODO KJELDAHL.

VENTAJAS

Un gran punto a favor que tiene este mtodo es su gran aplicabilidad en los
diferentes medios o sustancias a los cuales puede ser empleado, es decir,
como es posible notar en el texto especialmente en el mbito de los alimentos
tiene un campo de accin muy amplio (semillas, leche, cereales, quesos,
aceites, huevos, etc), as como por ejemplo con los minerales como carbn y
en el estudio de suelos con los fertilizantes, entre otros.
La gran cantidad de variaciones que posee este mtodo para su desarrollo, es
decir, cmo dependiendo de la determinacin que se quiera realizar, por
algunas sustancias existen por ejemplo proporciones directas de sustancias
catalizadoras, reduccin de los tiempos de digestin usando otros compuestos,
los efectos de la temperatura, los indicadores para la titulacin, la digestin por
microondas, entre otros.
Permite el anlisis de muestras insolubles y casi completas, es decir que
dichas muestras pueden estar en su forma original, cuando pasan por el
proceso de digestin, el acido sulfrico concentrado y las altas temperaturas se
encargan de descomponer la sustancia.

DESVENTAJAS

Para la determinacin de protenas el mtodo tiene un principal problema y es

la interferencia causada por los nitrgenos no proteicos (NPN), esto genera un
inconveniente ya que estos se deben separar para determinar el contenido
proteico real. As que se deben usar otras tcnicas para determinar la fraccin
de los NPN en la muestra.
Para algunas muestras no se obtendr el 100% del nitrgeno, en el caso de las
especies aromticas, el nitrgeno heterocclico es difcil de separar por lo que
se debe hacer un proceso de predigestion.
Algunos de los reactivos catalizadores son contaminantes e incluso txicos
para el ser humano, por ejemplo el oxido mercrico (HgO) y en algunos casos
otros producen concentraciones de gases que pueden ser dainos para el
medio ambiente.
RETOS

Durante el proceso de destilacin, la prdida del amoniaco puede ser un

problema, ya que si no se tiene la precaucin correcta pueden existir perdidas
por fuga e incluso durante la refrigeracin en el condensador puede quedar
parte del amoniaco condensado en las paredes.
La degradacin completa de la muestra puede complicarse para ciertos
aminocidos ya que en algunos solo una fraccin estequiometrica se disuelve
con el acido sulfrico, es por esto que se usa un segundo compuesto (perxido
de hidrogeno) para realizar la separacin completa del nitrgeno de la muestra.
El cambio de los compuestos txicos por compuestos de menor impacto
ambiental y que no alteren la salud de las personas. Algunas sustancias
usadas en el mtodo Kjeldahl han sido reemplazadas con el tiempo, aunque la
eficiencia es menor, el riesgo de enfermar por el uso de estas sustancias
disminuye.

2. POR QU EL MTODO KJELDAHL SE USA HOY EN DA EN TODO EL

MUNDO?
El mtodo Kjeldahl es usado fundamentalmente porque permite hacer la determinacin
del nitrgeno en una gran cantidad de especies o sustancias diferentes, lo cual para el
mbito industrial tiene un gran recibimiento y empresas de todo el mundo lo usan. Esto
llevo a que con el tiempo se fueran realizando mejoras especificas para cada tipo de
uso y as mismo las reacciones involucradas y los materiales usados fueran
mejorndose para la exacta medicin del nitrgeno. Con esto se ha llegado al punto
en que el mtodo Kjeldahl sea relativamente fcil de llevar a cabo en un laboratorio.
3. DESCRIBA LA EVOLUCIN HISTRICA DEL MTODO KJEHLDAL.
El primer mtodo para determinar nitrgeno en una muestra orgnica fue el mtodo de
Dumas postulado en 1831, pero su uso se limitaba por la gran cantidad de tiempo
requerido, las complicaciones en el manejo de los gases de combustin, algunos de
ellos contaminantes, adems del uso de mercurio (sustancia toxica) para hacer la
volumetra que permita medir la cantidad de nitrgeno de la muestra, entre otros
problemas. Aun as describen otros autores que esta era la tcnica ms factible para la
poca.
Esto llevo a buscar un mtodo que en lugar de la liberacin de gases se realizara en
un medio acuoso. Es por esto que se pens en medir las cantidades de nitrgeno no
como sustancia libre (gas N2) sino en forma de amoniaco.
En 1841 se uso el mtodo de Will y Varrentrapp el cual reemplazo al mtodo de
Dumas. En este mtodo el nitrgeno producido por la combustin, transformado en
amoniaco, es llevado a un tubo con exceso de hidrxido de bario y acido clorhdrico,
formando una mezcla de clorhidrato de amonio el cual se precipitaba con cloruro de
platino, formando cloroplatinato el cual era pesado y a partir de l se calculaba la
cantidad de nitrgeno. As mismo aunque se resolvan algunos problemas tambin se
presentaban otros, principalmente ya que en el tubo de combustin exista la
presencia de aire lo cual generaba que parte del nitrgeno pudiese escapar y por lo
tanto no ser medido.
Para 1847, Eugene Pligot, altero el mtodo de Will y Varrentrapp, cambiando el tubo
de combustin por un frasco o matraz y el hidrxido de bario por cal sodada (agua de
cal). Pero aun as segua existiendo el problema de la perdida de nitrgeno. Meulen,
en 1924, realizo una modificacin al proceso de la cal sodada obteniendo mejores
resultados: la hidrogenacin cataltica a 350C con nquel.
Wanklyn en 1868 hizo una mejora al mtodo de Will y Varrentrap. En su variacin
aadi permanganato de potasio para incrementar el efecto oxidativo de la cal sodada.
Para 1837 Berzelius propuso por primera vez el uso del acido sulfrico para
descomponer las mezclas orgnicas pero fue hasta 1845 que dicho acido se uso como
mtodo de digestin antes de usar la precipitacin a cloroplatinato para determinacin
de urea.
Todos estos cambios en los mtodos de determinacin de nitrgeno llevaron llevaron a
que en 1883 Johan Kjeldahl creara el mtodo que lleva su nombre.

4. COMPARE EL MTODO KJELDAHL CONTRA OTROS MTODOS PARA

DETERMINACIN DE PROTENAS

Mtodos diferentes al mtodo kjeldahl tienen ciertas ventajas ligadas a el tiempo de

aplicacin o a reactividad con respecto a muchos otros tipos de sustancias
especialmente a su cuan especficos son para estudios de tipo medico o de tipo ms
prctico y no tan preciso. Muchos mtodos basados en el anlisis espectrofotomtrico
que se lleva a cabo con la absorvancia de sustancia analizada dependen en su gran
mayora de la concentracin de la muestra as como de las reacciones que se llevaron
a cabo para lograr encontrar las especies nitrogenadas. Algunos de los mtodos ms
usados o destacados para determinar protenas, diferentes al mtodo Kjeldahl, son:

MTODO DE BIURET
Esta tcnica se basa en la reaccin de una protena con una molcula de cobre
(II) (Cu+2) produciendo un color purpura que es cuantificable a travs de
espectrofotometra.
VENTAJAS
Este mtodo no depende de la composicin de los aminocidos, es decir que
reaccionara igual para todas las pruebas que se realicen a muestras diferentes.
Ligado al mtodo esta la reaccin del Biuret (reaccin de dos molculas de
urea para formar el compuesto Biuret) se aplica a todos los pptidos y
protenas. As mismo, debido a su fcil realizacin es posible hacer varias
repeticiones de determinacin.
DESVENTAJAS
La sensibilidad del mtodo es muy baja (entre 1000-10000 microgramos de
protena en la muestra), por lo que se usa solo para muestras con una alta
concentracin y no en la cual la turbidez de la muestra no altere la medida, ya
que para la espectrofotometra la cuantificacin tendr algunos problemas

MTODO DE LOWRY
Esta tcnica mezcla bsicamente el mtodo de Biuret con el Reactivo de FolinCiocalteu, caracterstico de grupos -OH reductores que, junto con los
complejos cuproproteicos de la reaccin del Biuret, reducen el reactivo de
Folin, el cual vira a color azul oscuro.
VENTAJAS
Al ir un paso ms all del mtodo de Biuret hace que la sensibilidad aumente
(entre 25-100 microgramos) y permita hacer determinaciones ms exactas.
Paralelo a esto esta su tiempo de duracin, entre 1 y 1.5 horas, el cual es
relativamente corto con respecto al mtodo de Kjeldahl que puede tomar ms
tiempo con respecto a la muestra analizada ya que la digestin alarga el tiempo
de anlisis.
DESVENTAJAS
La sacarosa, lpidos, buffers fosfato, sulfato de amonio, compuestos con
sulfidrilo, monosacridos y hexoaminas interfieren en la reaccin. As mismo
este mtodo no es aplicado a un gran campo ya que se trabaja con muestras
acuosas que no necesariamente han sido tratadas anteriormente como en la
digestin de Kjeldahl, esto reduce su uso especficamente a anlisis mdicos,
por ejemplo la cuantificacin de nitrgeno proteico en la orina.
Otra complicacin es que el color vara con diferentes protenas, lo cual genera
que deban estandarizarse las muestras con patrones blanco, as como con la
concentracin, el color tampoco depende de esta. Esto puede complicar el
anlisis ya que para especies diferentes en una misma muestra el estudio debe

realizarse ms a fondo para estandarizar y caracterizar especficamente las

especies presentes.
5. REACCIONES INVOLUCRADAS EN EL MTODO KJELDAHL

DIGESTION

(protena) NH2(CH2)(p)COOH + (q+1)H2SO4 (p+1)CO2 + NH4HSO4 + (q)SO2 +

(p)H2O

DESTILACIN
(NH4)2SO4 + NaOH Na2SO4 + 2NH3 + 2H2O

RECOLECCIN
NH3 + H3BO3

NH4+ + H2BO3-

TITULACIN
NH4H2BO3 + HCl

NH4Cl + H3BO3

REACCIONES IMPLICITAS EN LA TITULACION

(1)

NH4H2BO3

NH4+ + HCL

(2)

H2BO3- + H+

(3)

CONSTANTES DE EQUILIBRIO

+
H

H 2 BO 3

H
[ 3 BO3 ]
K e=

NH4+ + H2BO3-

NH4Cl + H+

H3BO3

+
NH 4

H 2 BO 3

+
H

+
H

[ NH 3 ][ H 3 BO 3 ]

+
NH 4

H 2 BO 3

K e =
CONSTANTE DE TITULACION

+
NH 4

H
[ 3 BO3 ]

+
H

[ NH 4 H 2 BO 3 ]

+
NH 4

[ H 3 BO3 ]

+
NH 4

H 2 BO 3

+
H

H 2 BO 3

K T =
La reaccin anterior no tiene el ion espectador cloro (Cl-), adems la especie que se
titula es el acido brico (H3BO3).

6. POR QU SE PREFIERE USAR CIDO BRICO EN EL MTODO

KJELDAHL? POR QU SE TITULA CON CIDO Y NO CON BASE?
El acido brico (H3BO3) es usado para titular el amoniaco debido a que con este solo
se necesita una solucin estandarizada, mientras que si se usa un acido fuerte como
el HCl o H2SO4 se necesitan dos soluciones estndar, el hidrxido de sodio y el acido
fuerte. No solo por ahorro de reactivos, sino porque los clculos son obtenidos
directamente usando acido brico y se tiene un menor error asociado a la cantidad de
nitrgeno de la muestra.
A travs de las graficas proporcionadas por el texto se puede distinguir que la titulacin
con acido es ms eficiente ya que a pesar de la concentracin el ph en el punto de
equivalencia tiende a tener una tendencia central que es aproximadamente 5,2-5,3; as
mismo con los compuestos cidos como titulantes se tiene que el error asociado a la

titulacin es menor cercano a cero. De esta forma, teniendo el acido brico como
receptor del amoniaco se tiene la ventaja que no acta como un buffer cuando se
encuentra cerca al pH en el punto de equivalencia y debido a esto la reactividad de la
reaccin aumenta y es ms fcil la titulacin, aunque segn el texto esto puede
suponer tambin un problema, referente a la retencin del amoniaco en la muestra.