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Biotecnologia 2012 PDF
Biotecnologia 2012 PDF
BIOTECNOLOGIA 2011
MARIA ANTONIA MALAJOVICH
www.bteduc.bio.br
AO LEITOR
Biotecnologia 2011 a ltima atualizao do livro publicado em 2004 por
Axcell Books do Brasil, em 2006 pela Universidad de Quilmes Editorial (em
espanhol) e divulgado na Internet, a partir de 2009, no site Biotecnologia:
ensino e divulgao (www.bteduc.bio.br). Agradeo a Elizabeth Lissovsky
pela reviso do portugus.
Inicia-se o texto com uma apresentao sobre o que Biotecnologia
(Captulo 1). A seguir, apresentam-se os fundamentos da Biotecnologia,
isto os agentes biolgicos (Captulos 2 a 5) e as ferramentas bsicas
(Captulos 6 a 9). A ltima parte, O impacto na sociedade analisa o
impacto das novas tecnologias biolgicas em setores to diversos como
indstria, energia, meio ambiente, biodiversidade, agricultura, pecuria,
alimentos e sade. Alm de um sumrio detalhado, uma lista das 92
figuras e das 30 tabelas, o livro conta com uma lista da bibliografia
consultada e um ndice remissivo.
Nascida em universidades e centros de pesquisa, onde perdura at hoje, a
biotecnologia objetiva principalmente o desenvolvimento local ou regional,
o progresso da agricultura e a melhora dos tratamentos de sade.
Empresas pblicas e privadas de diferentes portes utilizam as tecnologias
com base biolgica para obter produtos diversos e, tambm, para
assegurar servios.
O perfil da biotecnologia varia de um pas para outro, em funo dos
recursos naturais, econmicos e polticos, das caractersticas das
empresas envolvidas e do papel assumido pelos setores pblico e privado.
A incluso de exemplos do Brasil e de outros pases latino-americanos
tenta mostrar um pouco dessa diversidade.
A expanso da biotecnologia introduz mudanas na sociedade. Por ser
uma rea ainda pouco conhecida, a percepo pblica costuma oscilar
entre a aceitao e a hostilidade, em funo das presses de lobbies e
grupos de opinio. Alguns temas so polmicos, seja porque despertam
apreenses em relao segurana dos procedimentos, seja porque nos
exigem uma reflexo tica cuidadosa.
No espere o leitor encontrar respostas dogmticas: as tecnologias no
so nem boas nem ruins, so o que fazemos com elas.
BIOTECNOLOGIA 2011
SUMRIO
INTRODUO
CAPTULO
1. O QUE BIOTECNOLOGIA?
PGINA
1
A BIOTECNOLOGIA TRADICIONAL
A BIOTECNOLOGIA MODERNA
AS DEFINIES DE BIOTECNOLOGIA
O IMPACTO DA BIOTECNOLOGIA
BIOTECNOLOGIA E DESENVOLVIMENTO
A HISTRIA DA BIOTECNOLOGIA
OS AGENTES BIOLGICOS
CAPTULO
2. AS CLULAS E OS CROMOSSOMOS
PGINA
9
TCNICAS LABORATORIAIS
TODA CLULA DERIVA DE OUTRA PREEXISTENTE
OS CROMOSSOMOS
A TEORIA CROMOSSMICA DA HEREDITARIEDADE
CLULAS E CROMOSSOMOS COMO AGENTES BIOLGICOS
3. OS MICRORGANISMOS
21
A DIVERSIDADE MICROBIANA
As eubactrias
As arqueas
Os protistas
Os fungos
Os vrus, na fronteira do vivo e do no vivo
AS TCNICAS MICROBIOLGICAS
BIOSSEGURANA E BIOSSEGURIDADE
OS MICRORGANISMOS COMO AGENTES BIOLGICOS
4. AS ENZIMAS E OS ANTICORPOS
33
AS PROTENAS
Estrutura
As bases de algumas tcnicas laboratoriais
AS ENZIMAS
A catlise enzimtica
Os diversos tipos de enzimas
Importncia econmica
OS ANTICORPOS
A molcula de anticorpo
A unio antgeno-anticorpo
A produo de anticorpos no organismo
A produo de anticorpos no laboratrio
A utilizao dos anticorpos
CAPTULO
5. OS CIDOS NUCLEICOS E OS GENES
PGINA
47
OS CIDOS NUCLEICOS
A dupla hlice
O cdigo gentico
A EXPRESSO GNICA
O fluxo da informao gentica
Clulas procariticas
Clulas eucariticas
6. OS BIOPROCESSOS
59
DO LABORATRIO INDSTRIA
A mudana de escala
A conduo do processo
A recuperao do produto
AS FERRAMENTAS BSICAS
CAPTULO
7. A CULTURA DE CLULAS E TECIDOS
PGINA
69
8. A TECNOLOGIA DO DNA
AS FERRAMENTAS DISPONVEIS
As nucleases ou enzimas de restrio
A eletroforese do DNA
Hibridizao e sondas gnicas
A tcnica de Southern
O fingerprint
A sntese e amplificao de DNA
O sequenciamento do DNA
Os arrays
A BIOLOGIA SINTTICA
ii
81
CAPTULO
9. A ENGENHARIA GENTICA
PGINA
93
AS BIBLIOTECAS DE GENES
A CONSTRUO DE UM MICRORGANISMO RECOMBINANTE
Encontrar o gene
Inserir o gene
Identificar os microrganismos recombinantes
O IMPACTO NA SOCIEDADE
CAPTULO
10. BIOTECNOLOGIA E INDSTRIA
PGINA
109
O PROCESSO WEIZMANN
A INDSTRIA QUMICA
A via qumica
A via biotecnolgica
OS PRODUTOS BIOTECNOLGICOS
Metablitos de interesse comercial
Enzimas
Biopolmeros e bioplsticos
OS BIOCOMBUSTVEIS
Etanol
Biogs
Biodiesel
Perspectivas
125
O DESENVOLVIMENTO SUSTENTVEL
AS TECNOLOGIAS LIMPAS
A substituio de processos industriais
A substituio de insumos agrcolas
A BIORREMEDIAO
Os contaminantes
Os tratamentos
Um exemplo: os vazamentos de petrleo
iii
CAPTULO
12. BIOTECNOLOGIA E BIODIVERSIDADE
PGINA
139
A BIODIVERSIDADE AMEAADA
A eroso gentica
A expanso do agronegcio
A transgnese
A PROTEO DA BIODIVERSIDADE
Os centros de diversificao
A conservao da biodiversidade
O CGIAR e o centro internacional da batata
O protocolo de Cartagena de biossegurana
151
O PRINCPIO DE PRECAUO
AS PLANTAS BIOTECNOLGICAS ATUAIS
Modificao das propriedades agronmicas
Plantas com qualidades nutricionais melhoradas
Plantas com propriedades novas
O AGRONEGCIO
A adoo dos cultivos biotecnolgicos no mundo
O mercado de sementes
A Unio Europeia e a moratria
Os pases de Amrica Latina
A COEXISTNCIA POSSVEL?
OS ANIMAIS DE ESTIMAO
iv
165
CAPTULO
15. BIOTECNOLOGIA E ALIMENTOS
PGINA
179
OS ALIMENTOS FERMENTADOS
O po
O vinho
A cerveja
Queijos e iogurtes
OS ALIMENTOS BIOFORTIFICADOS
191
FAVOR OU CONTRA?
O QUE O CONSUMIDOR PRECISA SABER
A noo de segurana
A ingesto de DNA
Os marcadores de resistncia a antibiticos
A composio qumica
A produo de toxinas
A produo de alrgenos
A utilizao de um promotor viral (CamMV)
Outros efeitos
COMO GARANTIR A SEGURANA ALIMENTAR?
O princpio de equivalncia substancial
A avaliao de riscos
A rotulagem dos alimentos
Rotulo e informao
O rastreamento de um transgene
199
17. BIOTECNOLOGIA E SADE AS VACINAS
AS DOENAS INFECCIOSAS
A AQUISIO DE IMUNIDADE
OS DIFERENTES TIPOS DE VACINAS
A primeira gerao
A segunda gerao
A terceira gerao
A PRODUO DE VACINAS
Pesquisa e desenvolvimento
Aspectos tecnolgicos
Aspectos econmicos
Um setor estratgico para a sociedade
CAPTULO
18. BIOTECNOLOGIA E SADE - TESTES DIAGNSTICOS
PGINA
215
OS TESTES DIAGNSTICOS
AS TENDNCIAS ATUAIS
O que um bom teste
As tcnicas com base bioqumica
As tcnicas com base imunolgica
As tcnicas com base gentica
A PRTICA FORENSE
O DIAGNSTICO DE DOENAS DE ORIGEM GENTICA
As limitaes dos testes
As estratgias seguidas
Diagnstico preventivo e preditivo
229
A INDSTRIA DE MEDICAMENTOS
OS PRINCPIOS ATIVOS DAS PLANTAS
O caso da aspirina
Os fitoterpicos
As novas tecnologias
A importncia de um marco legal
AS SUBSTNCIAS ANTIBITICAS
Os limites ao uso de antibiticos
A necessidade de inovao
OS MEDICAMENTOS PERSONALIZADOS
A farmacogenmica
O custo dos novos medicamentos
PATENTES E GENRICOS
247
AS TERAPIAS GNICAS
Terapias somticas e germinais
Os altos e baixos de uma tecnologia
O estado da arte
As promessas do silenciamento gnico
A MEDICINA REGENERATIVA
Os transplantes de rgos
A engenharia de tecidos
As terapias celulares
CONSIDERAES FINAIS
261
BIBLIOGRAFIA
263
NDICE REMISSIVO
293
vi
OS AGENTES BIOLGICOS
CAPTULO 2. AS CLULAS E OS CROMOSSOMOS
FIGURA 2.1. Representaes esquemticas da estrutura celular (bacteriana, eucaritica animal e vegetal).
FIGURA 2.2. As clulas-tronco embrionrias.
FIGURA 2.3. Mitose e meiose.
FIGURA 2.4. Monoibridismo.
FIGURA 2.5. Diibridismo.
FIGURA 2.6. Representao dos cromossomos humanos.
TABELA 2.1. A funo e a distribuio das estruturas celulares.
TABELA 2.2. As clulas como agentes biolgicos.
CAPTULO 3. OS MICRORGANISMOS
FIGURA 3.1. Bactrias e clones.
FIGURA 3.2. Alguns tipos de vrus.
FIGURA 3.3. A multiplicao de um bacterifago.
FIGURA 3.4. Alguns logotipos utilizados como indicao de risco biolgico.
TABELA 3.1. Os microrganismos dentro do marco da uma classificao biolgica atual.
TABELA 3.2. As bactrias (Eubactrias e Arqueas) como agentes biolgicos.
TABELA 3.3. As algas como agentes biolgicos.
TABELA 3.4. Os fungos como agentes biolgicos.
TABELA 3.5. Principais destaques entre os agentes biolgicos microbianos.
AS FERRAMENTAS BSICAS
CAPTULO 6. OS PROCESSOS FERMENTATIVOS
FIGURA 6.1. O processo fermentativo genrico
FIGURA 6.2. Respirao e fermentao.
FIGURA 6.3. As diversas fases do crescimento de uma populao microbiana e a produo de metablitos
(As fases de crescimento de uma populao; a produo de metablitos primrios e secundrios).
FIGURA 6.4. Biorreator para fermentaes em fase slida
FIGURA 6.5. Um processo tradicional, a produo de vinagre (Mtodo de Orlans)
FIGURA 6.6. Modelo de biorreator utilizado em fermentaes submersas.
FIGURA 6.7. Fermentaes, agentes biolgicos e biorreatores.
FIGURA 6.8. A mudana de escala, do laboratrio indstria.
viii
O IMPACTO NA SOCIEDADE
CAPTULO 10. BIOTECNOLOGIA E INDSTRIA
FIGURA 10.1. As etapas necessrias para a produo de etanol a partir de diferentes matrias-primas.
FIGURA 10.2. A produo de etanol a partir da cana-de-acar.
FIGURA 10.3. A biodigesto em condies aerbias e anaerbias.
FIGURA 10.4. As complexas etapas da produo de biogs dentro do biodigestor.
FIGURA 10.5. As utilizaes do biogs.
FIGURA 10.6. A reao de transesterificao.
TABELA 10.1. Diversidade de produtos derivados de algumas matrias-primas renovveis.
TABELA 10.2. Metablitos primrios e secundrios obtidos por fermentao e/ou bioconverso
enzimtica.
TABELA 10.3. O poder calorfico de vrios combustveis.
ix
1. O QUE BIOTECNOLOGIA?
A BIOTECNOLOGIA TRADICIONAL
Cultivar vegetais, domesticar animais, transformar os alimentos ou aproveitar as propriedades
curativas de algumas plantas so atividades que remontam alvorada da humanidade e se
desenvolveram com base no conhecimento emprico, ignorando a existncia dos microrganismos ou
das leis da hereditariedade.
No incio do sculo XIX, a demanda de mo de obra por uma indstria incipiente estimula a
migrao da populao do campo para a cidade. Em condies sanitrias cada vez mais degradadas,
as doenas e a fome acompanham o homem. Ao mesmo tempo, o progresso exige processos
industriais mais eficientes. A compreenso dos fenmenos naturais torna-se indispensvel para
responder s necessidades da sociedade.
A partir de 1850 surgem novas reas do conhecimento. Nasce a Microbiologia, a Imunologia, a
Bioqumica e a Gentica. A Qumica Industrial se desenvolve aceleradamente e, tambm, aumenta a
interveno da Engenharia Agrcola e da Pecuria no gerenciamento do campo.
Em 1914, Karl Ereky, um engenheiro agrcola hngaro, desenvolve um gigantesco plano de
criao de sunos visando substituir as prticas tradicionais por uma indstria agrcola capitalista
baseada no conhecimento cientfico. Deve-se a Ereky (1919) a primeira definio de biotecnologia,
como a cincia e os mtodos que permitem a obteno de produtos a partir de matria-prima,
mediante a interveno de organismos vivos. Para ele, a era bioqumica substituiria a era da pedra e
do ferro.
O sculo XX assiste a um desenvolvimento extraordinrio da cincia e da tecnologia (eletrnica,
informtica). Da convergncia entre ambas resultam logros extraordinrios em vrios setores
produtivos, onde os seres vivos constituem a base de itens to diversos como a produo de
variedades vegetais mais produtivas, a fabricao de novos alimentos, o tratamento do lixo, a
produo de enzimas e os antibiticos.
A BIOTECNOLOGIA MODERNA
A proposta de J. D. Watson e F. Crick (1953) de um modelo helicoidal para a molcula de DNA
representa, sem dvida, um marco fundamental na histria da Biologia Molecular. Mas a divisria
entre a Biotecnologia clssica e a Biotecnologia moderna uma srie de experincias realizadas por
H. Boyer e S. Cohen que culmina em 1973 com a transferncia de um gene de sapo a uma bactria. A
partir desse momento possvel mudar o programa gentico de um organismo transferindo-lhe
genes de outra espcie.
A importncia e os riscos inerentes nova tecnologia no passaram despercebidos para as
pessoas envolvidas. Fato indito na histria, em 1975 os cientistas reunidos em Asilomar (USA)
estabeleceram uma moratria em seus trabalhos at serem definidas as condies de segurana
adequadas, o que aconteceu pouco tempo mais tarde.
Na passagem de uma biotecnologia de laboratrio a uma biotecnologia industrial, a Engenharia
Gentica ocupa um lugar de destaque como tecnologia inovadora. Em alguns casos, como os da
insulina e do hormnio do crescimento, a inovao consiste em substituir os mtodos de obteno
tradicionais. Em outros casos, como o dos anticorpos monoclonais ou do Golden Rice, um arroz com
vitamina A, trata-se de produtos inteiramente novos.
Copyright Maria Antonia Malajovich
Biotecnologia: ensino e divulgao (www.bteduc.bio.br)
O IMPACTO DA BIOTECNOLOGIA
J no se trata de promessas ou de perspectivas futuras; os produtos e processos biotecnolgicos
fazem parte de nosso dia a dia, trazendo oportunidades de emprego e investimentos. Trata-se de
plantas resistentes a doenas, plsticos biodegradveis, detergentes mais eficientes,
biocombustveis, e tambm processos industriais menos poluentes, menor necessidade de
pesticidas, biorremediao de poluentes, centenas de testes de diagnstico e de medicamentos
novos (Tabela 1.1).
Agentes biolgicos
Cincia e tecnologia
Resolver problemas
Energia
Indstria
Butanol, acetona, glicerol, cidos, vitaminas etc. Numerosas enzimas para outras
indstrias (txtil, de detergentes etc.).
Meio ambiente
Agricultura
Pecuria
Alimentao
Sade
BIOTECNOLOGIA E DESENVOLVIMENTO
Por se tratar de uma coleo de tecnologias diversas, o uso das biotecnologias no se restringe
necessariamente aos pases desenvolvidos. Existe um espao que os pases emergentes podem
ocupar, em funo de suas riquezas naturais, desde que existam prioridades econmicas e polticas
definidas claramente. A condio fundamental contar com instituies competentes que formem
uma massa crtica de pesquisadores e pessoal tcnico treinado.
A China e a ndia contam hoje com uma indstria biotecnolgica avanada e diversificada. Assim
como a Amrica Latina, onde esta se concentra principalmente na Argentina, no Brasil, no Chile, na
Colmbia, em Cuba e no Mxico. Pases como Uruguai e Venezuela tambm tm atividade em
algumas reas, assim como, em menor escala, Equador, Costa Rica, Paraguai, Peru e Bolvia. Na
regio, umas 500 empresas incidem em vrios setores: meio ambiente e indstria, agroalimentos e
pecuria, sade animal e humana.
No entanto, a Biotecnologia suscita ainda opinies e sentimentos controversos. Enquanto
alguns setores a percebem como uma tecnologia baseada em um slido conhecimento cientfico,
para outros se trata de uma atividade antinatural e perigosa. O enfrentamento de partidrios e
opositores ocorre com menos frequncia no terreno das razes que no das paixes, sejam elas
polticas, religiosas ou ideolgicas. Ao discutir se a biotecnologia progressista ou reacionria, boa
ou ruim, se esquece que o que caracteriza uma tecnologia o uso que fazemos dela.
Produtos e processos inimaginveis trinta anos atrs entram em nosso cotidiano antes que os
alicerces cientficos e tecnolgicos correspondentes se insiram em nossa cultura, atravs de uma
divulgao ampla que atinja tambm o sistema educativo em todos os seus nveis. No existe
possibilidade alguma de construir uma sociedade moderna se os seus integrantes ignorarem os
aspectos mais gerais de cincia e tecnologia. O desconhecimento aumenta o risco de rejeitar
tecnologias promissoras, capazes de abrir perspectivas novas, com vistas a um desenvolvimento
sustentvel em reas to crticas como a sade, a produo de alimentos, a energia e o meio
ambiente.
A proposta deste livro revisar os fundamentos das biotecnologias e mostrar como esses se
aplicam em diversos setores produtivos da sociedade, destacando como exemplos alguns
empreendimentos latino-americanos bem sucedidos. Esperamos que ele seja de ajuda para todos os
que nos preocupamos com os alcances desta fascinante (r)evoluo tecnolgica.
A HISTRIA DA BIOTECNOLOGIA
DATA
ACONTECIMENTOS FUNDAMENTAIS
ANTIGUIDADE
IDADE MDIA
Sculo XII
Destilao do lcool.
IDADE MODERNA
Sculo XVI
Sculo XVII
Cronistas registram a colheita de algas para alimentao, nos lagos de Mxico, pelos
astecas.
Incio da produo comercial de cerveja; extrao de metais por ao microbiana na
Espanha; cultivo de fungos na Frana; Hooke descobre a existncia de clulas (1665).
IDADE CONTEMPORNEA
1797
1809
1835 a 1855
1863 a 1886
1887
1892
1897
1899
1900
1905
1906
1910
1912 a 1914
1915
1916
1918
1919
1927
1928
1933
1936
1938
1940 a 1950
1944
1951
1953
1959
Jenner inocula uma criana com um vrus que o protege contra a varola.
Appert utiliza o calor para esterilizar e conservar comida, processo que ser utilizado nas
campanhas napolenicas.
Schleiden, Schwann e Virchow enunciam a teoria celular.
Pasteur inventa um processo para conservar alimentos sem alterar suas propriedades
organolpticas (Pasteurizao, 1863), derruba a teoria da abiognese (1864), investiga as
doenas do bicho-da-seda (1865), identifica a levedura como o agente responsvel pela
fermentao alcolica (1876), usa microrganismos atenuados para obter vacinas contra o
antraz e a clera (1881), faz os primeiros testes de uma vacina contra a raiva (1881).
Paralelamente, Koch inicia o desenvolvimento de tcnicas fundamentais para o estudo dos
microrganismos (1876), e enuncia quatro postulados sobre os agentes infecciosos como
causa de doenas. Em 1865 Mendel apresenta o seu trabalho Experincias de
hibridizao em plantas.
Inaugurao em Paris do Instituto Pasteur.
Descoberta do vrus do mosaico do tabaco; introduo do trator na agricultura.
Bchner mostra que enzimas extradas da levedura podem transformar acar em lcool.
Primeiro transplante de um rgo: o rim de um cachorro a outro cachorro.
Redescobrimento das leis da hereditariedade, j enunciadas por Mendel em 1865, porm
esquecidas.
O primeiro transplante de crnea se realiza com sucesso; isto porque a crnea no tem
antgenos.
Ehrlich descobre o primeiro agente quimioterpico, chamado Salvarsan, que ser utilizado
contra sfilis.
Em Manchester, na Inglaterra, comeam a ser introduzidos os sistemas de purificao de
esgoto baseados na atividade microbiana.
Rhm obtm a patente de uma preparao enzimtica para a lavagem de roupas;
Weizmann consegue a produo de acetona e butanol por microrganismos.
Morgan publica Mechanism of Mendelian Heredity.
Imobilizam-se as enzimas, uma tcnica que facilita sua utilizao em processos industriais.
Morrem de gripe espanhola mais de vinte milhes de pessoas, um nmero de vtimas
superior ao da Primeira Guerra Mundial. Constroem-se biodigestores para a produo de
metano (China e ndia).
O engenheiro agrcola hngaro Ereky utiliza pela primeira vez a palavra biotecnologia.
Muller descobre que os raios X causam mutaes.
F. Griffith descobre a transformao, isto a transferncia de informao gentica de uma
linhagem bacteriana a outra.
Comercializao do milho hbrido, isto de sementes de um milho mais produtivo.
Obteno de cido ctrico por fermentao.
Na Frana, produo comercial de um biopesticida (Bacillus thuringiensis).
Avanos na mecanizao do trabalho agrcola.
Produo em grande escala da penicilina (descoberta por Fleming em 1928, desenvolvida
por Florey e Chain).
Inseminao artificial de gado utilizando smen congelado. Descoberta da presena de
genes saltatrios no milho por Brbara Mc Clintock.
J. D. Watson e F. Crick propem um modelo da estrutura do DNA.
Reinart regenera plantas de cenoura a partir de uma cultura de clulas (calo).
1975
1975
1976
1978
1979
1980
1981
1982
1983
1984
1986
Aumento da produo de cido lctico, cido ctrico, acetona e butanol por via
fermentativa.
Descoberta do cdigo gentico. Desenvolvimento de uma protease alcalina para uso em
sabes para a lavagem de roupas pela empresa dinamarquesa Novo.
Plantio de novas variedades de trigo mais produtivas, no Mxico, dando incio ao que ser
chamado de Revoluo Verde.
Primeiro transplante de corao, na frica do Sul. O paciente sobrevive 18 dias.
Produo industrial de aminocidos utilizando enzimas imobilizadas.
Havendo desenvolvido tcnicas de corte e reunio do DNA, Cohen e Boyer transferem um
gene a um organismo de outra espcie. Lanado no Brasil o programa de produo de
lcool a partir de biomassa (Pr-lcool)
G. J. F. Khler e C. Milstein desenvolvem a tecnologia de hibridomas e obtm anticorpos
monoclonais. A empresa Novo produz xarope com alto contedo de frutose por via
enzimtica como adoante alternativo sacarose.
A Conferncia de Asilomar pede ao National Institute of Health (NIH) que sejam
estabelecidas normas para a regulao dos experimentos com DNA-recombinante, o que
acontecer meses mais tarde.
Utilizao da tcnica de hibridizao molecular no diagnstico pr-natal da alfa
talassemia.
Genentech, Inc., a primeira empresa biotecnolgica, fundada um ano antes por Boyer e
Swanson, obtm a protena somatotropina (hormnio de crescimento) mediante a
tecnologia do DNA-recombinante.
Nasce na Inglaterra Louise Brown, o primeiro beb de proveta.
Produo do hormnio de crescimento humano, utilizando a tecnologia do DNArecombinante.
A Suprema Corte de Justia dos Estados Unidos aprova o princpio de patentes para as
formas de vida de origem recombinante. As primeiras patentes so de A. N. Chakrabarty,
para um microrganismo para biorremediao de petrleo, e de H. Cohen e S.Boyer, pelo
processo de 1973. K. Mullis inventa a tcnica da Reao em Cadeia de Polimerase (PCR)
cuja patente ser obtida por Cetus, Inc. em 1985 e vendida em 1991 a Hoffman-La Roche,
Inc. por 300 milhes de dlares.
Obteno da primeira planta geneticamente modificada. Obteno da primeira linhagem
de clulas-tronco de camundongo.
A insulina humana de origem recombinante da Genentech, Inc. comercializada. Uma
licena ser obtida mais tarde pela empresa Eli Lilly, que a vender com o nome de
Humulina. A primeira vacina de DNA-recombinante para o gado comercializada na
Europa.
Realizam-se as primeiras experincias de Engenharia Gentica em plantas (petnia).
Syntex Corporation recebe a aprovao da Food and Drug Administration (FDA) de um
teste para Chlamydia trachomatis baseado na utilizao de anticorpos monoclonais.
Isolado o vrus HIV no Instituto Pasteur (Frana) e no NIH (National Institute of Health,
Estados Unidos).
A. Jeffreys introduz a tcnica do Fingerprint (impresses digitais), que, um ano depois,
ser utilizada pelos tribunais para a identificao de suspeitos. Clonagem e
sequenciamento do genoma do HIV pela empresa Chiron Corp.
A Environmental Protection Agency (EPA) dos Estados Unidos aprova a liberao de
plantas de tabaco transgnicas. Um grupo de especialistas em segurana em Biotecnologia
da Organizao para a Cooperao Econmica e o Desenvolvimento (OECD) declara que a
previsibilidade das mudanas genticas obtidas por Engenharia Gentica
frequentemente maior que a correspondente s tcnicas tradicionais, e que os riscos
associados com organismos transgnicos podem ser avaliados do mesmo modo que os
riscos associados aos outros organismos. Aprovada a primeira vacina biotecnolgica para
uso humano, trata-se de Recombivax-HB, contra a hepatite B.
1988
1989
1990
1992
1993
1994
1995
1996
1997
1998
1999
2000
2001
2002
2004
2006
2007
2008
2010
2. AS CLULAS E OS CROMOSSOMOS
UNIDADE ESTRUTURAL
A clula a unidade estrutural dos seres vivos. Trate-se de bactrias, amebas, espermatozoides ou
neurnios, todas as clulas so formadas por gua, ons inorgnicos e molculas orgnicas
(protenas, carboidratos, lipdios e cidos nucleicos). E todas elas apresentam uma membrana
plasmtica que separa o citoplasma do meio externo e permite o intercmbio de molculas entre
ambos.
As clulas procariticas se encontram exclusivamente no Reino Monera. Pequenas (0,001 a
0,005 mm) e com requerimentos nutricionais simples, estas clulas se multiplicam rapidamente. A
informao gentica se encontra em um cromossomo circular formado por uma molcula de DNA e
associado a uma invaginao da membrana plasmtica (mesossomo). Pequenas molculas circulares
adicionais (plasmdeos) podem tambm estar presentes. Numerosos ribossomos asseguram a sntese
proteica (Figura 2.1).
Bem mais complexa a estrutura das clulas eucariticas, presentes nos quatro Reinos
restantes (Protista, Fungo, Planta e Animal). Com um tamanho variando entre 0,01 e 0,10 mm, estas
clulas so dez vezes maiores que as procariticas. A presena de compartimentos diferenciados, ou
organelas, que cumprem atividades especficas, resulta em uma subdiviso do trabalho que garante
a eficincia do funcionamento celular (Figura 2.2).
O citoplasma percorrido por um sistema de membranas, o retculo endoplasmtico, que est
associado aos ribossomos e, por conseguinte, sntese de protenas. Processados no aparelho de
Golgi, os produtos celulares so secretados ou distribudos em outras estruturas (lisossomos,
membrana celular).
O metabolismo energtico est associado a organelas citoplasmticas, complexas e rodeadas de
membranas (mitocndrias, cloroplastos e peroxissomos). Um citoesqueleto, formado por tbulos e
filamentos proteicos, mantm a forma da clula, alm de assegurar o transporte interno das
organelas e os movimentos celulares. A informao gentica est distribuda em cromossomos, cada
um deles formado por uma molcula linear de DNA associada a protenas. Os cromossomos e o
nuclolo se encontram no ncleo, que funciona como um centro de controle celular. A membrana
nuclear, um envoltrio com poros que separa o ncleo do citoplasma, permite o intercmbio de
substncias entre ambos.
Apesar de ter uma organizao muito parecida, as clulas animais diferem das clulas vegetais
em alguns aspectos. Nas clulas vegetais encontramos uma parede celular ao redor da membrana
plasmtica; o citoplasma contm cloroplastos, onde ocorre a fotossntese, e grandes vacolos, onde
se armazenam substncias e degradam macromolculas. Nenhuma dessas estruturas se observa nas
clulas animais; estas tm um centrolo que falta nas clulas vegetais (Tabela 2.1).
10
FUNO
CLULA BACTERIANA
CLULA
ANIMAL
CLULA
VEGETAL
Parede celular
Manuteno da forma e
proteo da clula.
Presente ou ausente
Ausente
Presente
Membrana plasmtica
Manuteno da
estabilidade do meio
intracelular; controle das
trocas entre a clula e o
meio extracelular.
Carioteca ou
membrana nuclear
Controle do fluxo de
substncias entre o ncleo
e o citoplasma.
Cromossomo(s)
Presente
Ausente
Presente
Controle da estrutura e do
funcionamento celular.
Nuclolo(s)
Formao de ribossomos.
Ausente
Presente
Centrolos
Formao de clios e
flagelos; participao na
diviso celular.
Ribossomos
Sntese de protenas.
Sntese de protenas.
Sntese de lipdios;
armazenamento e
inativao de substncias.
Complexo de golgi
Secreo celular.
Mitocndrias
Vacolo central
Equilbrio osmtico e
armazenamento.
Lisossomos
Digesto intracelular.
Cloroplastos
Fotossntese.
Citoesqueleto
Manuteno da forma
celular; contrao;
ancoragem de organelas.
Ausente
Presente
Ausente
Presente
Ausente
Presente
Presente
Ausente
Ausente
Ausente
Presente
Ausente
Ausente
Presente
Presente
11
UNIDADE FUNCIONAL
A clula tambm a unidade funcional de um organismo O citoplasma uma soluo viscosa onde
continuamente ocorrem reaes de sntese e degradao de substncias, consumindo ou liberando
energia. Estas reaes constituem o que denominamos metabolismo.
As reaes metablicas so facilitadas por protenas com atividade cataltica, denominadas
enzimas. Assim como as protenas estruturais, as enzimas se sintetizam nos ribossomos, que so
pequenos componentes citoplasmticos, no membranosos. A estrutura das protenas depende da
informao gentica codificada no cido desoxirribonucleico (DNA) e transcrita no cido ribonucleico
(RNA), que a leva do ncleo at o citoplasma.
As semelhanas de estrutura e funcionamento celulares decorrem de uma origem evolutiva
comum, aproximadamente 3,8 milhes de anos atrs. Os dois tipos celulares que reconhecemos
hoje, as clulas procariticas e as eucariticas, apareceram entre um e um milho e meio de anos
mais tarde.
TCNICAS LABORATORIAIS
O estudo das clulas se v facilitado por um conjunto de tcnicas laboratoriais, tais como:
o Tcnicas microscpicas que permitem uma visualizao detalhada da clula:
-
Microscopia ptica, que se utiliza para observar os cortes de tecidos. Geralmente, estes so fixados
(lcool, cido actico, formaldedo) e tingidos com corantes que reagem com as protenas ou com os
cidos nucleicos, aumentando o contraste da imagem.
Microscopia fluorescente, que associa anticorpos especficos a um reagente como o PVF (protena
verde fluorescente de medusa), de forma a marcar as molculas e visualizar sua distribuio nas
clulas.
Microscopia confocal, que combina a microscopia fluorescente com a anlise eletrnica da imagem,
fornecendo uma imagem tridimensional.
Microscopia eletrnica, que permite a observao em um plano de cortes tingidos com sais de metais
pesados (microscopia de transmisso) e a observao tridimensional de clulas (microscopia de
varredura).
Microscopia de tunelamento, com os diversos tipos de microscpios de varredura por sonda (SPM, do
ingls scanning probe microscope) que, alm de fornecer uma imagem de molculas e tomos,
permitem medies e a manipulao de molculas e tomos.
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19
Como agentes biolgicos, as clulas encontram outras aplicaes (Tabela 2.2). Clulas vegetais
cultivadas in vitro produzem substncias de alto valor agregado, importantes para as indstrias
alimentar, cosmtica e farmacutica. Tambm se utilizam para regenerar plantas. A multiplicao de
vrus em cultivos de clulas de insetos permite a comercializao de prticas de controle biolgico.
A sntese de algumas substncias importantes para a indstria farmacutica, como o fator
ativador de plasminognio, depende do cultivo in vitro de clulas animais. Estas tambm substituem
os animais nos testes toxicolgicos e so utilizadas na multiplicao de vrus para a preparao de
vacinas. Tambm possibilitam a produo de anticorpos.
Combinando as tcnicas de cultivo celular com o desenvolvimento de materiais biolgicos
semelhantes ao colgeno, uma rea nova de engenharia de tecidos visa a reparao ou substituio
de tecidos lesionados. Os enxertos de pele artificial, cultivada in vitro, saram ferimentos e/ou
queimaduras em seres humanos.
TABELA 2.2. As clulas como agentes biolgicos.
Vegetais
CLULAS
Estudos toxicolgicos.
Animais
e/ou
humanas
20
3. OS MICRORGANISMOS
A DIVERSIDADE MICROBIANA
O termo microrganismos se aplica a um grupo heterogneo de seres que vivem como clulas
independentes ou como agregados celulares: bactrias, arqueas, protozorios, algas e fungos e,
tambm, vrus (Tabela 3.1). Salvo estes ltimos, que esto na fronteira entre o vivo e o no vivo, os
encontramos dentro dos trs domnios em que se classificam os seres vivos: Bacteria, Archaea e
Eukarya.
TABELA 3.1: Os microrganismos dentro do marco da uma classificao biolgica atual.
DOMNIO
BACTERIA
ARCHAEA
EUKARYA
REINO
EUBACTERIA
ARCHAEBACTERIA
PROTISTA
FUNGI
PLANTAE
ANIMALIA
TIPO DE
CLULA
Procaritica
Procaritica
Eucaritica
Eucaritica
Eucaritica
Eucaritica
ESTRUTURA
CELULAR
Parede celular
com
peptidoglicano
Parede celular
sem
peptidoglicano
Parede celular
de celulose, em
alguns.
Presena de
cloroplastos,
em alguns.
Uni ou
pluricelular
Uni ou
pluricelular
Pluricelular
Pluricelular
ORGANIZAO Unicelular
Unicelular
Presencia de
cloroplastos.
NUTRIO (*)
Autotrfica ou Autotrfica
Heterotrfica
ou
Heterotrfica
Autotrfica ou
Heterotrfica
Heterotrfica
(absoro)
Autotrfica
Heterotrfica
(ingesto)
EXEMPLOS
Eubactrias
Protozorios e
Algas
Leveduras,
Mofos,
Bolores e
Cogumelos.
Brifitas
(musgos),
Pteridfitas
(samambaias),
Gimnospermas e
Angiospermas.
Invertebrados
e Cordados
Arqueas
* Nutrio
Nutrio autotrfica: o organismo produz seu prprio alimento a partir de substncias inorgnicas e de uma
fonte de energia. Os seres autotrficos podem realizar fotossntese (para a qual a fonte de energia a luz solar)
ou quimiossntese (para a qual a fonte de energia uma reao qumica exotrmica).
Nutrio heterotrfica: o organismo se alimenta de molculas orgnicas elaboradas por outros seres vivos por
absoro (captao de nutrientes dissolvidos na gua), ou ingesto (entrada de partculas de alimentos no
dissolvidas).
22
Estima-se que as bactrias sejam responsveis por aproximadamente metade das doenas
humanas. As Gram-negativas resultam mais difceis de tratar que as Gram-positivas, devido a uma
camada adicional na parede celular que as protege e dificulta a entrada de antibiticos. Assim como
o homem, os animais e as plantas tambm so afetados por patgenos bacterianos. O dano decorre
da invaso dos tecidos do hospedeiro ou da liberao de substncias txicas (exo e endotoxinas).
Mas nem todas so patognicas.
A participao das bactrias na reciclagem dos elementos fundamental do ponto de vista
ecolgico, possibilitando o tratamento de resduos e de guas servidas e, tambm, a eliminao de
compostos recalcitrantes (biorremediao) e a extrao de minrios (biolixvia). Por outro lado, a
fixao de nitrognio e a produo de toxinas pesticidas contribuem para melhorar as prticas
agrcolas.
Devido a suas propriedades metablicas, muitas eubactrias so utilizadas na produo de
alimentos (laticnios, vinagre, picles e azeitonas) e de aditivos (vitaminas, aminocidos, gomas
emulsificantes e estabilizantes), na indstria qumica (acetona, butanol e plsticos biodegradveis) e
na indstria farmacutica (vacinas, toxinas e antibiticos). Tambm se utilizam na produo de
enzimas para uso industrial e mdico (Tabela 3.2).
AS ARQUEAS
As arqueobactrias, ou arqueas, diferem das eubactrias pela estrutura da parede celular e, tambm,
por alguns aspectos metablicos relacionados com a sntese de protenas que as aproximam dos
eucariontes. Algumas vivem em habitats inspitos, como as solfataras dos vulces ou giseres, a
temperaturas superiores a 60-800C (Islndia, Costa Rica). Outras prosperam em lagos onde a
concentrao salina altssima, como o Grande Lago Salgado (Estados Unidos) ou o Mar Morto
(Israel). Entre as arqueas existem tambm gneros com vias metablicas peculiares que as tornam
dependentes de enxofre ou produtoras de metano. Devido a estas propriedades, nos ltimos anos
tem-se acelerado a prospeco de arqueas com propriedades potencialmente interessantes, para
serem utilizadas em processos industriais que exijam condies ambientais extremas. No entanto,
estudos recentes de ecologia molecular mostram que as arqueas no se limitam a ambientes
extremos, sendo sua diversidade bem maior do imaginado previamente.
FIGURA 3.1. Bactrias e clones.
Por diviso binria de uma bactria gera-se um clone de bactrias semelhantes
23
APLICAES
Tratamento de resduos e de guas servidas.
Produo de energia (metano).
Biorremediao, extrao de minrio.
Indstria qumica (acetona, butanol, cido lctico, cido actico).
Bactrias
Enzimas industriais.
Agricultura (rizbios, biopesticidas).
Alimentos (laticnios, vinagres, picles, azeitonas, silagem).
Indstria de alimentos (vitaminas B12 e -caroteno, aminocidos lisina e cido
glutmico; polissacardeos xantana e dextrana*).
Indstria farmacutica (enzimas de uso mdico, antibiticos, vacinas e toxinas).
(*) A dextrana tambm tem usos mdicos
APLICAES
Tratamento de efluentes, biomonitoramento de poluio, obteno de energia.
Biomassa
Agricultura (adubo).
Produo de alimentos (alimentao humana, rao para avicultura e aquicultura).
Algas
APLICAES
Agricultura (controle biolgico de insetos e nematoides, micorrizos).
Produtos de fermentao (etanol, glicerol, cido ctrico).
Fungos
Enzimas industriais.
Biomassa (fermento de padaria, micoprotena).
Indstria de alimentos (panificao, queijaria).
Indstria de bebidas (cervejas e vinhos, destilados).
Produtos metablicos (extrato de levedura, hormnios de crescimento vegetal).
Indstria farmacutica (antibiticos, vitaminas, vacinas, esteroides).
24
OS PROTISTAS
Os Protozorios se classificam no reino Protista, um grupo mal definido de seres eucariticos
unicelulares ou pluricelulares, auttrofos ou hetertrofos, de reproduo sexuada ou assexuada.
Trata-se de organismos unicelulares heterotrficos, cujo tamanho varia entre 0,002 e 1mm.
Alguns vivem livres em ambientes marinhos, de gua doce, ou simplesmente muito midos.
Outros parasitam outras espcies, nas quais causam doenas: Girdia, Amoeba, Trichomonas,
Plasmodium, Toxoplasma, Leischmania etc. De importncia fundamental para o ser humano do
ponto de vista mdico, sua caracterizao molecular pode dar origem a testes diagnsticos e vacinas.
Classificadas junto com os protozorios no reino Protista, as algas so organismos uni ou
pluricelulares, autotrficos e aquticos. Situadas na base das cadeias alimentcias aquticas, as algas
cumprem um papel fundamental na biosfera por serem capazes de fixar gs carbnico e produzir
oxignio. Algumas participam na formao de solos e na fixao de nitrognio.
Apesar de no ter rgos diferenciados, as macroalgas marinhas (algas pardas, algas vermelhas
e parte das algas verdes) formam filamentos e talos que podem chegar a medir mais de trinta
metros. So utilizadas como adubo e, tambm, na alimentao humana (Porphyra ou nori e
Laminaria, como o kombu, no Oriente; cochayuyo no Chile). Devido a sua capacidade de formar gis
e emulses, os ficocoloides extrados dessas algas (agar, carragenina, alginato) so empregados em
anlises clnicas (preparao de meios de cultivo para cultivo de bactrias e fungos) e em vrias
indstrias, tais como a alimentcia (sorvetes, cremes, geleias etc.), a farmacutica (laxantes, cpsulas
de remdios) e a cosmtica (cremes, sabonetes, xampus, dentifrcios etc).
As microalgas representam um grupo extremamente diversificado de umas 25.000 espcies das
quais s um pequeno grupo est bem estudado. Este compreende aproximadamente cinquenta
espcies de microrganismos fotossintticos, tanto eucariontes (diatomceas, dinoflagelados,
euglenoides e outras algas verdes) como procariontes (cianobactrias, antigamente algas azulesverdeadas).
A proliferao de microalgas como floraes na natureza (mars vermelhas) ou em
reservatrios, geralmente devido eutrofizao das guas, causa a morte de outros organismos,
sendo muito perigosa se estiver acompanhada pela liberao de toxinas. Porm, em alguns sistemas
de tratamento de efluentes as microalgas so incorporadas nos tanques para remover nutrientes
inorgnicos e adicionar oxignio. Tambm so usadas como indicadores de poluio.
O metano um gs combustvel que resulta da degradao de biomassa de algas por
microrganismos anaerbios. Por outro lado, a produo de hidrognio por algas representa uma
alternativa energtica promissora.
As microalgas so aproveitadas na alimentao animal como rao para a avicultura e a
aquicultura. Algumas das substncias que elas sintetizam so includas na alimentao humana como
complementos nutricionais e substitutos proteicos; trata-se de aminocidos, cidos graxos e
vitaminas (B12, -caroteno ou provitamina A). Tambm so utilizadas na formulao de cosmticos e
na indstria farmacutica (Tabela 3.3).
OS FUNGOS
O Reino Fungi comporta mais de 100.000 espcies. Os fungos so organismos eucariticos, uni ou
pluricelulares, com uma parede celular formada por quitina. Todos eles so hetertrofos e podem se
reproduzir sexuada ou assexuadamente.
As leveduras so fungos unicelulares que se desenvolvem em lugares midos e se reproduzem
por brotamento.
25
Vrias doenas humanas so causadas por vrus, tais como o poliovrus, o HIV, o coronavrus
responsvel pela SAR (sndrome aguda respiratria) etc. Ao infectar as clulas animais normais,
alguns vrus as transformam em clulas cancerosas.
Os vrus que infectam insetos podem ser utilizados no controle de pragas. Na luta contra a
lagarta da soja, o Baculovrus evita a aplicao de 1,2 milho de litros de inseticidas por ano nas
lavouras brasileiras.
FIGURA 3.2. Alguns tipos de vrus.
Os adenovrus e o HIV parasitam
clulas humanas; o bacterifago, bactrias.
HIV
Adenovrus
Bacterifago
27
AS TCNICAS MICROBIOLGICAS
Diversos tipos de tcnicas, muitas das quais datam do sculo XIX, facilitam o trabalho laboratorial. A
identificao de um microrganismo demanda a observao microscpica e a utilizao de alguns
mtodos especficos de colorao, complementados por testes bioqumicos e eventualmente
genticos e imunolgicos. Encontrar e manter um microrganismo no laboratrio demanda a
aplicao de tcnicas bacteriolgicas aplicveis tambm, com algumas variaes, a fungos e algas.
Cultivar microrganismos exige, alm do desenho de um meio nutriente que satisfaa suas
necessidades metablicas, um cuidado especial com as condies de temperatura e iluminao em
que este ser incubado. Os meios nutrientes se empregam lquidos ou solidificados com gar, uma
substncia que lhes confere uma consistncia gelatinosa. Os recipientes mais comuns so tubos de
ensaio e placas circulares de vidro com tampa (Placas de Petri); e, para inocular os meios, se utilizam
alas de platina e pipetas de diferentes tipos.
A grande dificuldade do laboratrio microbiolgico est em conseguir a multiplicao do
microrganismo desejado evitando as contaminaes, isto a multiplicao de outros
microrganismos.
Trabalha-se em condies asspticas, o que demanda a esterilizao prvia do material de
vidro, dos meios nutrientes e dos instrumentos (alas, pipetas) que sero utilizados. E na
transferncia do material biolgico, evita-se cuidadosamente toda contaminao com os
microrganismos do ar. Equipamentos especialmente desenhados para trabalhar sob um fluxo de ar
esterilizado ajudam o profissional. Tambm se evitam as contaminaes na hora de eliminar o
material utilizado, a fim de no liberar microrganismos prejudiciais no ambiente.
Os microrganismos so isolados a partir de amostras de solo, gua, ar ou fluidos corporais. As
linhagens obtidas se conservam como culturas puras. Microrganismos com caractersticas diferentes
so obtidos induzindo mutaes e selecionando as linhagens mutantes. Cada laboratrio mantm os
estoques microbianos necessrios, que tambm podem ser solicitados a centros especializados
(Colees de cultura).
O nmero de microrganismos em uma amostra pode ser estimado por diversos mtodos:
contagem microscpica, contagem eletrnica, contagem em placa, turvao do meio, massa seca,
contedo de nitrognio ou medidas indiretas da atividade microbiolgica.
Em geral, as tcnicas clssicas so trabalhosas e muito demoradas para o diagnstico clnico,
por isso esto sendo substitudas por tcnicas miniaturizadas mais rpidas que identificam os
microrganismos com base em algumas reaes bioqumicas em kits padronizados. A tendncia geral
de automatizao do laboratrio microbiolgico.
Em outra linha de ao, a partir do incio do sculo XX surge a Microbiologia Ambiental,
trazendo uma nova viso em relao s populaes microbianas presentes na natureza. No entanto,
nossa ignorncia em relao aos microrganismos ainda enorme. O nmero de espcies que
conseguimos cultivar no laboratrio no representa ainda mais do que 1 a 5 % da totalidade
existente; dependemos dos avanos na rea da genmica para ampliar nosso conhecimento das
comunidades microbianas do ambiente.
BIOSSEGURANA E BIOSSEGURIDADE
De acordo com a Organizao Mundial da Sade, o termo biossegurana abrange os princpios,
tcnicas e prticas necessrias para evitar a exposio acidental a patgenos e toxinas assim como
sua liberao acidental (Figura 3.4).
28
Biossegurana
Biosseguridade
29
UTILIZAO
Spirulina
O seu alto teor proteico, que corresponde a 60% do peso seco, lhe confere um
elevado valor nutritivo; as protenas representam aproximadamente 2% do
peso seco da batata e 6-10% do trigo. Quando da chegada dos espanhis, os
astecas j preparavam umas bolachas (tecuitlatl) com a Spirulina coletada no
lago Texcoco. Na frica, no lago Tchad, ainda hoje ela coletada e consumida
como alimento. Spirulina, assim como Chlorella, so vendidas em tabletes
como complemento nutritivo.
Acumula glicerol em condies de alta salinidade, com o qual consegue evitar a
desidratao. Pode crescer no Mar Morto, sendo tambm cultivada em
tanques ou lagoas, perto do Mar Vermelho, para a extrao de outros produtos
metablicos (glicerol e -caroteno).
Dunaliella
FUNGOS
UTILIZAO
Saccharomyces cerevisiae
Aspergillus
Penicillium
ARQUEOBACTRIAS
UTILIZAO
Thermus aquaticus
Bactrias metanognicas
30
EUBACTRIAS
UTILIZAO
Bactrias lcticas
Bacillus thuringiensis
Streptomyces
Pseudomonas
Agrobacterium tumefaciens
Bactrias butricas
Escherichia coli
31
32
4. AS ENZIMAS E OS ANTICORPOS
AS PROTENAS
Todos os organismos esto formados por gua e molculas de diversos tipos, inorgnicas e orgnicas
(Figura 4.1). Entre estas ltimas, se encontra um grupo de macromolculas, as protenas, que
participam em numerosas atividades, cumprindo um papel fundamental para os seres vivos (Tabela
4.1). Pertencem a este grupo as enzimas, molculas de ao cataltica, e os anticorpos, molculas
que participam na defesa do organismo.
ESTRUTURA
As protenas so macromolculas formadas por 20 aminocidos diferentes. Estes se caracterizam por
ter, unidos ao tomo de carbono, um grupo amino (bsico), um grupo carboxila (cido) e um radical
varivel (Figura 4.2 A). A presena de um carbono assimtrico resulta em duas formas moleculares
(L) e (D) que diferem por suas propriedades pticas. Os aminocidos que compem as protenas
correspondem forma (L).
A reao de condensao entre o grupo carboxila de um aminocido e o grupo amina de outro
cria uma ligao peptdica (Figura 4.2 B). A unio de vrios aminocidos forma uma cadeia peptdica
que se caracteriza no s pelo nmero e tipo de aminocidos que a compem, como pela sequncia
em que estes se encontram, denominada estrutura primria.
Ao se estabelecerem ligaes entre os grupos que formam os enlaces peptdicos, a cadeia adota
uma estrutura regular ou estrutura secundria, geralmente em forma de hlice ou de folha. As
interaes entre as cadeias laterais dos aminocidos causam o dobramento da protena, resultando
uma configurao espacial que chamada de estrutura terciria. A forma final de uma protena
depender ainda da associao entre vrios polipeptdios, no que se denomina de estrutura
quaternria (Figura 4.2 C).
Quando sintetizada dentro da clula, uma protena adotar espontaneamente a configurao
espacial que decorre de sua estrutura primria. Entretanto, fatores ambientais como o pH, a
concentrao salina ou a temperatura podem causar alteraes momentneas ou definitivas na
forma da molcula.
TABELA 4.1. As funes das protenas no organismo.
FUNO
EXEMPLOS
Componentes estruturais
Substncias de reserva
Ao cataltica
Outras
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Espectrometria de massa
Esta tcnica analtica mede a massa molecular a partir da razo entre a massa e a carga de molculas
ionizadas, medida que permite a identificao de uma substncia. Com a descoberta de mtodos de
ionizao adaptados s molculas biolgicas como o MALDI (do ingls, Matrix Assisted Laser
Desorption/Ionization), a espectrometria de massa se tornou nos ltimos anos uma ferramenta
indispensvel na identificao de protenas, acares, cidos nucleicos, lipdios e outros compostos
orgnicos.
35
36
AS ENZIMAS
A CATLISE ENZIMTICA
As reaes qumicas que ocorrem nos seres vivos dependem da atividade cataltica das enzimas.
Estas molculas agem diminuindo a energia de ativao necessria de uma reao qumica, sendo
capazes de promov-las e aceler-las, sem ser alteradas ou destrudas.
A molcula de enzima reconhece um substrato especfico (S), formando com ele um complexo
molecular ou estado de transio (SE). O encaixe no stio ativo da molcula facilita a transformao
do substrato no(s) produto(s) da reao (P). A enzima recuperada no fim da reao, podendo atuar
inmeras vezes (Figura 4.5).
A reao pode ser representada como a seguir:
S+E
SE
P+E
A primeira caracterstica das enzimas a especificidade; uma enzima como a lactase, que opera
sobre a lactose, no agir sobre a sacarose; duas enzimas que hidrolisem o amido podero faz-lo
cortando a molcula de maneira diferente, como a -amilase e a -amilase. A segunda que, em
funo de sua origem biolgica, as enzimas so biodegradveis e agem em condies brandas de
temperatura e pH.
A ao enzimtica depende do pH, da temperatura, da presena de cofatores inorgnicos (zinco,
ferro, cobre) e/ou orgnicos (coenzimas, muitas das quais so vitaminas). Os metais pesados alteram
a estrutura molecular da enzima de maneira irreversvel impedindo sua ao cataltica
(desnaturao).
Uma inibio da atividade enzimtica ocorre quando molculas muito parecidas com o
substrato competem com este para ocupar o stio ativo da enzima (inibio competitiva). Ou quando
outras molculas se ligam a determinadas partes da enzima, alterando a estrutura espacial e
dificultando o encaixe com o substrato (inibio no competitiva).
37
EXEMPLOS
Oxirredutases
Desidrogenases, oxidases.
Transferases
Transaminases, fosforilases.
Hidrolases
Liases
Isomerases
Isomerases, mutases.
Ligases
Sintetases.
APLICAES
Indstria de alimentos e bebidas (clarificao de vinhos e sucos de frutas,
substituio da maltagem pelo tratamento do amido na elaborao de cervejas,
fabricao de po, biscoitos e bolachas, produo de adoantes, fabricao de
laticnios, suplementao de raes animais).
Produtos de limpeza (detergentes e lava-roupas para a remoo de manchas difceis,
produtos para limpar dentaduras e lentes de contato).
ENZIMAS
38
IMPORTNCIA ECONMICA
As enzimas apresentam numerosas vantagens quando utilizadas como agentes biolgicos em
processos tecnolgicos: especificidade, operao em condies facilmente controlveis e
biodegradabilidade. De um modo geral, os tratamentos enzimticos diminuem a carga poluidora dos
efluentes industriais.
Das 25.000 enzimas que, segundo as estimativas, existiriam na natureza, at o momento s foram
classificadas umas 2.800, sendo comercializadas 400. O mercado se distribui fundamentalmente
entre as proteases (59%), as carboidrases (28%) e as lipases (3%), trs grandes conjuntos de enzimas
que so utilizadas por diversas indstrias; os 10% restantes do mercado correspondem s enzimas
analticas e farmacuticas (Tabela 4.3).
Nos sabes lava-roupas, as enzimas prometem ao consumidor roupas limpas e com aparncia de
novas. Um exrcito constitudo por proteases, amilases e lipases digere as manchas difceis (sangue,
leite, molho de tomate, capim, chocolate, batom etc.), enquanto que as celulases removem as
microfibrilas de celulose das roupas. No sendo mais necessrio esfregar as manchas, a limpeza se
realiza com pouco esforo e sem desgaste do tecido; como estas molculas trabalham a
temperaturas baixas, o consumo de energia menor. Com mais uma vantagem para o fabricante: as
enzimas no representam mais que uma frao muito pequena do sabo (0,4-0,8%), correspondente
a 1% do seu custo.
As enzimas so empregadas tambm no acabamento de roupas. Para conseguir o aspecto usado,
os jeans eram lavados com pedras (stone washed), um processo que tinha o inconveniente de causar
a abraso da maquinaria e o desgaste do tecido. Nos ltimos anos, as pedras foram substitudas por
celulases, com resultados satisfatrios.
Os curtumes, em vez de excrementos de cachorro ou de pombo, se valem hoje de enzimas
pancreticas para amaciar e desengordurar as peles.
Na indstria de alimentos e bebidas, as enzimas participam na produo de adoantes, de po,
biscoitos e bolachas, de queijos. Na extrao de sucos de frutas, as pectinases aumentam
substancialmente o rendimento do processo, ao liberar o suco retido na pectina das paredes
celulares vegetais. Tambm facilitam a clarificao de vinhos e cervejas.
As enzimas entram na composio de vrios produtos cosmticos, tais como depilatrios,
desodorantes e artigos para a higiene bucal. Em dermatologia, algumas das aplicaes mais
frequentes esto no combate ao envelhecimento e no tratamento de acne e de caspa.
Como medicamentos, as enzimas se utilizam em vrios contextos, especialmente em
quimioterapia e nas terapias trombolticas. E muitos entre os mais corriqueiros testes de diagnstico
dependem de reagentes enzimticos. As enzimas permitem a resoluo de misturas de molculas
racmicas, nas que h duas formas isomricas, tipo mo direita e mo esquerda, com diferente
atividade biolgica. Desse modo, podero ser evitados problemas como o da talidomida, um
medicamento que causou o nascimento de numerosos bebs com deformaes congnitas, na
dcada de 1960. A tragdia teria sido consequncia da presena no produto comercial da forma
molecular tipo mo direita, de ao teratognica, junto ao tipo mo esquerda, de ao calmante.
Atualmente, esto sendo estudados mtodos enzimticos para eliminar os prons responsveis
pela denominada doena da vaca louca. Tambm se cogita a utilizao de enzimas para limpar
reas contaminadas com agentes qumicos como o gs sarin.
39
40
OS ANTICORPOS
Dentro da estratgia de defesa de um organismo, os anticorpos so elementos importantes no
reconhecimento do eu e na eliminao do no eu (antgeno). Uma parte importante da resposta
imune envolve a produo de anticorpos que reconhecem o antgeno, desencadeano os mecanismos
de destruio adequados.
Em condies experimentais de laboratrio, a reao antgeno-anticorpo ocorre quando os
reagentes se encontram em meio lquido e nas concentraes adequadas, sendo visualizada como:
o Uma precipitao, se os antgenos estiverem dissolvidos em um meio lquido ou em um gel
(poliacrilamida).
o Uma aglutinao, se os antgenos estiverem localizados sobre partculas (hemcias ou bactrias).
A MOLCULA DE ANTICORPO
A molcula de anticorpo denominada IgG (Imunoglobulina G) formada por duas cadeias
polipeptdicas leves e duas pesadas em forma de Y, ao qual se associa um pequeno nmero de
grupos carboidrato. Uma parte da molcula constante; as regies variveis localizadas nas
extremidades dos braos do Y respondem pelo reconhecimento do antgeno (Figura 4.6). Este tipo de
anticorpo se encontra no soro sanguneo, na frao proteica caracterizada por eletroforese como globulina.
A UNIO ANTGENO-ANTICORPO
A unio antgeno-anticorpo ocorre quando um anticorpo encontra no antgeno uma forma
complementar, geralmente parte de uma molcula livre ou ancorada na membrana celular. Um
antgeno pode ter vrias destas formas (eptopos ou determinantes antignicos) e ser reconhecido
por anticorpos diferentes (Figura 4.7).
41
42
43
44
APLICAES
Purificao de molculas.
Reagentes de laboratrio.
Anticorpos
45
46
OS CIDOS NUCLEICOS
Embora descobertos em 1869, por Miescher, no pus das bandagens de ferimentos, o papel dos
cidos nucleicos na hereditariedade e no controle da atividade celular comeou a ser esclarecido
apenas em meados do sculo XX.
O cido desoxirribonucleico (DNA) carrega em sua estrutura as instrues necessrias para a
construo de um organismo. Estas direcionam o desenvolvimento de suas caractersticas
bioqumicas, fisiolgicas, anatmicas e inclusive de algumas das comportamentais.
Nas clulas procariticas, uma molcula grande e circular de DNA forma o cromossomo,
havendo tambm uma ou duas molculas de DNA extracromossmico, formando estruturas
circulares, denominadas plasmdeos. Nas clulas eucariticas, vrias molculas lineares de DNA
associadas a protenas formam os cromossomos, localizados dentro do ncleo celular. Tambm h
DNA em algumas organelas, como os cloroplastos e as mitocndrias. O cido ribonucleico (RNA) se
encontra no ncleo e no citoplasma celular.
Do ponto de vista qumico, os cidos nucleicos (cido ribonucleico e desoxirribonucleico) so
macromolculas formadas a partir de unidades chamadas nucleotdeos (Figura 5.1). Um nucleotdeo
resulta da associao mediante ligaes qumicas covalentes de trs tipos de elementos: uma
molcula de cido fosfrico, um acar de cinco carbonos (pentose: ribose ou desoxirribose) e uma
base cclica nitrogenada: adenina, citosina, guanina, timina ou uracila. Da unio dos nucleotdeos
mediante unies covalentes entre as extremidades 5' e 3', formam-se cadeias.
A DUPLA HLICE
J na dcada de 1940, vrios trabalhos indicavam claramente que o material responsvel pela
hereditariedade era o DNA. Porm, o modo como esta molcula poderia assegurar essa funo s
comeou a se vislumbrar em 1953, quando J. D. Watson e F. Crick formularam um modelo da
estrutura tridimensional do DNA que, segundo suas prprias palavras, poderia ter um considervel
interesse biolgico.
No modelo de Watson e Crick, duas cadeias de nucleotdeos formam uma figura parecida com
uma escada de corda torcida, a dupla hlice. Nessa escada, o cido fosfrico e o acar so as partes
verticais (corrimos) e as bases nitrogenadas so os degraus (Figura 5.1). As cadeias so
antiparalelas, isto , se uma corre na direo 5' 3' a outra corre na direo 3' 5. Ambas as
cadeias esto unidas entre si por pontes de hidrognio entre as bases, sendo que as ligaes ocorrem
sempre entre adenina e timina (2 pontes) e entre citosina e guanina (3 pontes).
De acordo com o modelo, quando em um filamento a sequncia de bases AGTACG, no outro
filamento ela ser TCATGC. Como as sequncias so complementares, cada filamento pode servir
como molde para a sntese de uma nova molcula. E, no momento da diviso celular, cada clulafilha poder receber uma molcula semelhante da clula-me.
2. A molcula de DNA.
A. O pareamento das bases ocorre sempre entre uma purina e uma pirimidina: adenina e timina ou uracila;
guanina e citosina.
B. A duplicao do DNA d origem a duas molculas semelhantes ( direita). Observe-se que o processo de
duplicao envolve numerosas enzimas, sendo bem mais complexo do que est representado.
A. A dupla hlice
48
B. A duplicao do DNA
O CDIGO GENTICO
A autoduplicao do DNA permite que cada clula receba uma cpia do material gentico, com as
instrues necessrias para a construo e funcionamento do indivduo.
O funcionamento de uma clula depende, fundamentalmente, de dois tipos de molculas: os
cidos nucleicos e as protenas. Ambos esto relacionados, sendo que a estrutura primria de um
polipeptdeo codificada por um gene, isto , um segmento de DNA. O cdigo simples,
correspondendo um aminocido a cada trinca de bases.
A tabela 5.1 nos mostra quais os aminocidos correspondentes aos diferentes cdons ou trincas
de bases do mRNA. Alguns so codificados por uma nica trinca, como o triptfano (UGG) ou a
metionina (AUG); outros admitem vrios cdons que geram sinonmia como, por exemplo, a prolina
(CCU, CCC, CCA, CCG). O incio da sequncia sinalizado por AUG, o cdon correspondente a
metionina, sendo este aminocido removido posteriormente; o fim da sequncia sinalizado por
UAA, UAG ou UGA, trs cdons que significam stop.
Mudanas na sequncia de bases do DNA podem ter como consequncia a substituio de um
aminocido por outro. No exemplo da figura 5.3, se GUG for substitudo por CGU, no peptdeo
correspondente a valina ser substitudo por leucina. Mas, em funo da sinonmia do cdigo, se a
trinca GUG for substituda por GUA ou GUC, o aminocido codificado continuar sendo a valina.
Perdas ou adies de uma base modificam o resto da sequncia do peptdeo.
As pequenas mudanas ou mutaes de ponto se devem a erros na duplicao do DNA; sua
frequncia aumenta em presena de alguns agentes qumicos e fsicos como a luz ultravioleta e os
raios X.
TABELA 5.1: O cdigo gentico
PRIMEIRA BASE
URACILA (U)
CITOSINA (C)
ADENINA (A)
GUANINA (G)
URACILA (U)
Phe
Phe
Leu
Leu
Leu
Leu
Leu
Leu
Ile
Ile
Ile
Met
Val
Val
Val
Val
SEGUNDA BASE
CITOSINA (C)
ADENINA (A)
Ser
Ser
Ser
Ser
Pro
Pro
Pro
Pro
Thr
Thr
Thr
Thr
Ala
Ala
Ala
Ala
Tyr
Tyr
Stop
Stop
His
His
Gln
Gln
Asn
Asn
Lys
Lys
Asp
Asp
Glu
Glu
GUANINA (G)
TERCEIRA BASE
Cys
Cys
Stop
Trp
Arg
Arg
Arg
Arg
Ser
Ser
Arg
Arg
Gly
Gly
Gly
Gly
(U)
(C)
(A)
(G)
(U)
(C)
(A)
(G)
(U)
(C)
(A)
(G)
(U)
(C)
(A)
(G)
Abreviaturas: Asp = cido Asprtico; Glu = cido Glutmico; Ala = Alanina; Arg = Arginina; Asn = Asparagina;
Cys = Cistena; Phe = Fenilalanina; Gly = Glicina; Gln = Glutamina; His = Histidina; Ile = Isoleucina; Leu = Leucina;
Lys = Lisina; Met = Metionina; Pro = Prolina; Ser = Serina; Tyr = Tirosina; Thr = Treonina; Trp = Triptfano;
Val = Valina.
49
Filamento codificador
Filamento molde
TRANSCRIO
mRNA
r RNA
tRNA
+ aminocidos
TRADUO
Transporta os aminocidos
e os coloca no lugar adequado
Peptdeo
DNA
Traduo
mRNA
Modificaes
posteriores
Protena
Alterao da
atividade da
protena
B. Clulas eucariticas
Transcrio
DNA
Processamento
do RNA
RNA transcrito
Ncleo
Traduo
mRNA
Poro
Membrana nuclear
50
mRNA
Modificaes
posteriores
Protena
Alterao da
atividade da
protena
A EXPRESSO GNICA
O FLUXO DA INFORMAO GENTICA
A informao codificada no DNA transcrita em uma molcula mensageira que a leva at os
ribossomos, onde as indicaes sero traduzidas da linguagem dos cidos nucleicos linguagem das
protenas, sendo montado o peptdeo correspondente. Deste modo, se estabelece na clula um fluxo
da informao gentica que segue em uma direo nica: do DNA ao RNA, do RNA ao peptdeo
(Figura 5.2).
Uma exceo a esta regra a dos retrovrus, cujo material hereditrio RNA e que contam com
uma enzima (transcriptase reversa) que lhes permite transcrever a informao no sentido
RNADNA.
Na sntese de protenas intervm, basicamente, trs tipos de RNA: mRNA, rRNA e tRNA.
O cido ribonucleico mensageiro, ou mRNA, de tamanho varivel e filamento nico. A
molcula de mRNA leva at os ribossomos a informao gentica transcrita em trincas de bases
(cdons) complementares a algum segmento de uma das cadeias do DNA.
Associado a protenas, o cido ribonucleico ribossmico ou rRNA forma as duas subunidades
dos ribossomos, que so as estruturas celulares onde ocorre a sntese proteica.
O cido ribonucleico de transferncia tRNA capaz de reconhecer simultaneamente um
aminocido e um cdon de mRNA. Existem 61 tipos moleculares diferentes de tRNA.
Segundo o denominado Dogma Central da Biologia Molecular, a informao gentica codificada
no DNA transcrita no mRNA e traduzida no ribossomo com a participao dos tRNAs. O produto
final um peptdeo.
As clulas procariticas e eucariticas apresentam algumas diferenas em relao s etapas da
sntese de protenas e aos mecanismos de regulao correspondentes (Figura 5.3).
CLULAS PROCARITICAS
Uma bactria pode contar com aproximadamente 2.500 genes; nem todos funcionando
simultaneamente. Se houver lactose no meio (e faltar glicose), as bactrias sintetizaro aquelas
enzimas que possibilitem sua utilizao. E se faltar o aminocido triptfano no meio, produziro os
vrios tipos de enzimas necessrias para sintetiz-lo. Isto se v facilitado pela agrupao dos genes
correspondentes em baterias (perons), que so ligadas ou desligadas em conjunto.
Neste processo de ligar e desligar esto envolvidas trs regies anteriores sequncia
codificadora: o promotor, o operador e o regulador. A enzima RNA-polimerase encaixa no promotor,
desde onde comear a se deslocar ao longo do gene. Protenas sintetizadas pelo gene regulador
agem no operador, abrindo ou bloqueando a passagem da RNA-polimerase. Este mecanismo
possibilita a induo ou represso da transcrio da sequncia codificadora (Figura 5.4).
A organizao dos genes de uma mesma via metablica em perons permite que a clula se
adapte rapidamente s condies ambientais, com certa economia de recursos. O funcionamento do
peron depende da funo exercida pelos genes (degradao ou sntese). Por isso, a presena de
lactose induz a transcrio do peron lac, sendo sintetizadas vrias enzimas necessrias para
degrad-la; em ausncia de lactose, o peron deixa de funcionar. J no peron Trp, a presena de
triptfano reprime a transcrio das enzimas necessrias para sintetizar esse aminocido.
Na clula procaritica, alm dos genes funcionarem em bloco, a sntese proteica comea
quando o mRNA est ainda sendo transcrito, de maneira que a transcrio e a traduo so
simultneas. Uma sequncia especfica que no traduzida indica o stio de unio ao ribossomo.
51
CLULAS EUCARITICAS
A transcrio
As bactrias no so as nicas que ligam e desligam os seus genes. Uma clula humana com 30.000 a
35.000 genes no expressa mais que 3 a 5% destes, que no sero necessariamente os mesmos ao
longo da vida embrionria ou em diferentes tipos celulares. Entretanto, salvo em nematdeos, no
foram achados perons nas clulas eucariticas; os genes responsveis por uma sequncia de
reaes metablicas se encontram dispersos em um ou em vrios cromossomos.
O controle da transcrio comea na compactao do cromossomo e na metilao de algumas
bases, podendo dificultar o acesso da maquinaria de transcrio ao DNA. Esta inclui fatores de
ativao, fatores de transcrio e protenas reguladoras, algumas das quais dependem de outras
sequncias, estimuladoras e inibidoras, distantes do gene em at vrios milhares de bases (Figura
5.5).
Ao reconhecer a presena dos fatores e protenas reguladoras na regio anterior ao gene, a
RNA-polimerase encaixa nas sequencias promotoras da transcrio. Associada a outros fatores
adicionais, a enzima se desloca abrindo a dupla hlice e transcrevendo a sequencia codificadora de
um ou outro filamento no RNA. A enzima avana na direo 5- 3, sendo que vrias molculas de
RNA-polimerase podem estar transcrevendo o mesmo gene simultaneamente em algo parecido com
uma fila indiana. A sntese acaba quando a RNA-polimerase encontra uma sequencia finalizadora.
Uma vez cumprida sua tarefa, a molcula de RNA-polimerase ser liberada.
Regies denominadas UTR (do ingls untranslated regions), portadoras de sequncias
sinalizadoras que no sero traduzidas, se localizam a montante e a jusante da unidade de
transcrio. As sequncias reguladoras levam, alm do stio de unio ao ribossomo, outras que
podem determinar quando, por quanto tempo e em que clulas o gene ser transcrito.
52
Gene
Gene
promotor operador
Genes estruturais
Gene 1
Gene 2
Gene 3
DNA
Sequncia transcrita
Fim da transcrio
Em alguns perons, o produto de gene regulador
bloqueia a entrada da RNA-polimerase no operador;
em outros a desbloqueia
Gene
Sequncias reguladoras
promotoras da transcrio
UTR
Sequncias reguladoras
finalizadoras da transcrio
UTR
DNA
Unidade de transcrio.
Inclui as sequncias iniciais e finais, os xons e os ntrons
Incio da transcrio
Incio da transcrio
Fim da transcrio
Fim da transcrio
53
B) Clula procaritica
Citoplasma
DNA
DNA
ntrons
xons
mRNA
Gene
Protenas
TRANSCRIO
mRNA
Ncleo
RNA cap
B
B: Mecanismos de corte e reunio
mRNA
TRADUO
Protena
54
A GENMICA
O GENOMA HUMANO
O termo genoma designa o conjunto completo de cromossomos haploides que contm toda a
informao gentica de um indivduo. O genoma nuclear da espcie humana est representado em
24 cromossomos diferentes (22 autossmicos, X e Y) em cada um dos quais h uma molcula de
DNA. Devido presena de DNA nas mitocndrias, de herana exclusivamente materna, existe
tambm de um genoma mitocondrial.
Em 1990, teve incio o Projeto Genoma Humano (HGP, do ingls Human Genome Project), um
dos projetos cientficos mais ambiciosos j realizados, envolvendo pesquisadores de mais de 18
pases na tarefa de mapear e sequenciar o DNA humano e tambm o de outros organismos.
Em Junho do ano 2000, o International Human Genome Sequencing Consortium e a Celera
Genomics, uma empresa privada norte-americana, anunciaram simultaneamente ter completado o
rascunho do genoma humano. Os resultados foram publicados em fevereiro de 2001, nas revistas
Nature e Science.
Em abril de 2003, cinquenta anos depois da descoberta da dupla hlice, o Consrcio anunciou
ter completado 99% do mapeamento. Os seus resultados esto armazenados em bancos de dados
pblicos que podem ser acessados via Internet.
Entre as principais concluses:
o
o
O nmero de bases no genoma humano chega a 3,2 bilhes, e o nmero de genes a um valor
compreendido entre 30.000 e 40.000; s 2% do genoma codificaria protenas.
O nmero de genes em organismos como a mosca Drosophila melanogaster ou o verme
Caenorrabditis elegans trs vezes menor. Compartilhamos com estes organismos alguns genes
e contamos com outros que so caractersticos dos vertebrados como, por exemplo, vrios dos
genes referentes ao sistema imune.
55
o
o
A densidade dos genes em diversos cromossomos e em diferentes partes deles varia. Existem
grandes espaos entre os genes, s vezes chamados de DNA-lixo. Sequncias repetidas, no
codificadoras, cuja funo direta ainda no bem conhecida, ocupam pelo menos 50% do
genoma.
O tamanho dos genes varivel, sendo na mdia de 3.000 bases. Na realidade, o tamanho no
parece ter muita importncia. Como boa parte dos genes poderia ser lida de diversos modos, o
nmero de protenas poderia ser bem maior.
Independentemente de nossa origem tnica, compartimos com os outros seres humanos 99,9%
da sequncia gnica.
As diferenas entre os seres humanos se devem a variaes de uma base em 3.000.000 de
pontos dentro e fora dos genes. Estas variaes se denominam polimorfismos de um nucleotdeo
nico ou SNPs (do ingls, single nucleotide polymorphisms). Os SNPs podem dar informaes
sobre a base gentica da susceptibilidade a uma srie de doenas ou servir como marcadores das
mesmas (doena cardiovascular, diabetes, artrite e cnceres).
Em vrios genes foram encontradas sequncias associadas a doenas (cncer de mama, cegueira,
surdez, doenas musculares).
APLICAES
Identificao de microrganismos patognicos
Controle da qualidade dos alimentos
Medicina molecular (diagnsticos, tratamentos personalizados, terapias gnicas)
DNA e genmica
56
A genmica tem aplicaes imediatas no campo mdico e farmacolgico, atravs dos testes
genticos e dos novos medicamentos (Tabela 5.2). Estima-se que, entre os 30.000 a 40.000 genes
humanos recentemente descobertos, 5.000 a 10.000 poderiam ser o alvo de novos produtos
farmacolgicos. Se forem consideradas as protenas, o nmero de alvos pode ser multiplicado por
dez.
Paralelamente ao mapeamento do genoma humano, mais de 900 outros organismos foram
sequenciados (microrganismos, plantas, animais). Em 2009, os mais de 4.500 projetos em
andamento abrangem organismos eucariontes (22%), bactrias (53%), arqueas (22%) e
metagenomas (3%). Em curto ou mdio prazo, esta informao reverter tambm no
desenvolvimento da agricultura, da pecuria e da indstria qumica.
A GENMICA EM AMRICA LATINA
Vrios pases de Amrica Latina contam com projetos em andamento (Argentina, Brasil, Chile e
Mxico). De um modo geral, estes envolvem parcerias entre instituies pblicas e privadas, sendo
beneficiados por acordos internacionais com pases desenvolvidos (Estados Unidos, Frana,
Alemanha) ou por redes de cooperao inter-regionais (Brasil, Argentina, Chile, Uruguai e Paraguai).
Pioneiro na cincia genmica, o Brasil alcana resultados significativos em diversas reas, tais
como:
o
o
o
o
58
6. OS BIOPROCESSOS
FASE DE LABORATRIO
Preparao do inculo
FASE INDUSTRIAL
Preparao do meio
Esterilizao
Ar
Esterilizao
Tratamento final
Subprodutos
Produtos
Resduos
OS MICRORGANISMOS INDUSTRIAIS
NOES SOBRE O METABOLISMO PRIMRIO E SECUNDRIO
Denominamos metabolismo o conjunto de reaes qumicas de degradao (catabolismo) e de
sntese (anabolismo) de substncias em um organismo. As primeiras liberam energia, as outras a
consomem.
As clulas e a maioria dos microrganismos retiram dos compostos orgnicos a energia que
precisam, para a manuteno de sua estrutura e para suas atividades. Nas vias catablicas, a
degradao de compostos orgnicos em molculas menores libera energia; uma parte desta ser
acumulada sob a forma de ATP (trifosfato de adenosina), e a restante dissipada como calor.
Respirao e fermentao so as principais vias catablicas (Figura 6.2). A quantidade de
energia liberada e os produtos finais diferem se a oxidao do composto orgnico for total ou parcial.
Na gliclise, a glicose degradada at uma molcula de trs carbonos, o piruvato. Em presena de
oxignio, a entrada do piruvato no ciclo de Krebs e a fosforilao oxidativa permitem a quebra total
da glicose em CO2 e H2O, liberando uma grande quantidade de energia sob a forma de ATP
(respirao aerbia).
Mediante a reduo do piruvato ou de algum de seus derivados (fermentao), vrios
microrganismos geram outras substncias orgnicas: acetona, butanol, etanol, cido lctico, cido
actico, glicerol etc.
Estas reaes ocorrem geralmente em ambientes onde o substrato abundante, sendo
pequena a quantidade de energia obtida. Dependendo das condies ambientais, isto , da presena
ou ausncia de oxignio, algumas leveduras e bactrias (assim como as clulas musculares) podem
respirar ou fermentar.
FIGURA 6.2. Respirao e fermentao.
Na respirao, onde o ltimo aceptor de eltrons o oxignio, a oxidao de glicose se completa at chegar a
CO2 e H2O, produzindo 36-38 molculas de ATP. Na fermentao, o ltimo aceptor de eltrons o piruvato ou
algum outro derivado, produzindo 2 ATP.
Glicose
GLICLISE (2 ATP)
Citoplasma
FERMENTAO
cido pirvico
Composto orgnico
(etanol, cido lctico)
Sem O2
Com O2
RESPIRAO
Ciclo de Krebs e cadeia respiratria
60
Citoplasma (procariontes)
Mitocndria (eucariontes)
CH 3 CH2OH
Etanol
+ CO2
+ 2 ATP
Com vistas ao desenvolvimento de um bioprocesso, a escolha do microrganismo ter que ser feita
em funo de suas vias metablicas; e as condies de cultivo dependero do objetivo da
fermentao, um metablito primrio ou um metablito secundrio (Figura 6.3B).
61
Tempo
Fase
lag
Fase
log
Fase
estacionria
Fase
de declnio
Meio nutriente
Clulas
Metablito primrio
Metablito secundrio
gua.
Uma fonte de energia e de carbono: glicose, amido etc.
Uma fonte de nitrognio: inorgnica (sulfato de amnia, nitrato de potssio etc.), orgnica (asparragina,
succinato de amnia, glutamato, ureia etc.) ou complexa (farinha de soja, peptona etc.).
Sais minerais, tais como fosfato de potssio (K2HPO4 ou KH2PO4), sulfato de magnsio (MgSO4 7H2O),
cloreto de clcio (CaCl2) etc.
Elementos-trao: ferro, zinco, mangans, cobre, cobalto, molibdnio.
Com vistas a uma explorao comercial, os meios definidos so substitudos na indstria por
matrias-primas de baixo custo como, por exemplo, soro de leite, melao de cana ou de beterraba,
amido de milho etc. Em alguns casos, a matria-prima passa por um tratamento prvio com mtodos
fsicos e/ou qumicos.
No caso de se tratar de um processo enzimtico, o meio dever levar, alm do substrato
adequado, os elementos necessrios para que a enzima possa desenvolver sua atividade cataltica
(precursores, cofatores etc.).
62
63
Controles
Sada de ar
Entrada de ar
Me do vinagre
Mosto
Retirada do vinagre
OS PROCESSOS SUBMERSOS
Atualmente, a maioria dos processos industriais se desenvolve em cubas de vidro ou de ao de at 20
litros. Os agentes biolgicos se encontram submersos no meio de cultivo que ocupa,
aproximadamente, 75% da cuba. s vezes necessrio injetar ar, e em muitas fermentaes se
forma espuma.
O desenho do biorreator deve se adequar ao objetivo do processo, respondendo
eventualmente a diversos imperativos, tais como a esterilizao do sistema, a aerao e
homogeneizao do meio, o acrscimo de nutrientes e de aditivos antiespuma, a manuteno do pH
etc.
Os modelos de fermentadores mais utilizados com microrganismos contam com aerao e
agitao mecnica. Esta facilita a distribuio dos nutrientes na cuba, mas gera calor que deve ser
eliminado mediante a circulao de gua fria (Figura 6.6). Se o processo exigir assepsia, esta ser
conseguida mediante:
o
o
Imobilizadas
Em suportes inertes
Reatores com
agitao mecnica
Reatores com
agitao pneumtica
Reatores de
leito fixo
Reatores
em torre
Reatores STR
Reatores de
fibra oca
Ou de leito
fluidizado
Ou com
membranas planas
Coluna de bolhas
66
Entre membranas
Reatores air-lift
Bancada
Fermentador de laboratrio
1 - 10 litros
LABORATRIO
Fermentador piloto
50 200 500 litros
PILOTO
Fermentador industrial
5.000 50.000 200.000 litros
5 50 200 m3
INDSTRIA
A CONDUO DO PROCESSO
O processo fermentativo pode ser conduzido de maneira contnua ou descontnua (batelada), sendo
que ambas as formas apresentam vantagens e inconvenientes.
Em um sistema descontnuo de produo, uma vez que o fermentador carregado com a
matria-prima e o inculo correspondentes, a fermentao prossegue at o esgotamento dos
nutrientes. Concludo o processo e extrado o produto, o fermentador esvaziado, limpo e
esterilizado antes de receber outra carga.
Apesar do tempo improdutivo entre uma batelada e a seguinte, o sistema relativamente
flexvel, j que o mesmo equipamento pode ser utilizado na fabricao de produtos diferentes. A
produo em bateladas bastante utilizada na indstria farmacutica porque o risco de
contaminao permanece relativamente baixo.
J no sistema contnuo de produo, o acrscimo de nutrientes e a retirada do produto ocorrem
simultaneamente ao longo do processo, eliminando-se quase totalmente o tempo improdutivo.
Como o risco de contaminao aumenta, o sistema se adapta a processos que no exijam assepsia,
como a produo de protena microbiana e de lcool e, obviamente, o tratamento de gua.
Entre o sistema em batelada e o sistema contnuo existe um sistema intermedirio de batelada
alimentada em que, periodicamente, parte do contedo (meio de cultivo + produto) retirada e
substituda por meio fresco.
67
A RECUPERAO DO PRODUTO
A recuperao do produto representa uma frao considervel do custo de um processo
fermentativo. Se o produto for secretado fora da clula, estar disperso em um volume grande de
gua e ser necessrio separ-lo por decantao ou filtrao. Mas se o produto permanecer dentro
das clulas, estas tero que ser desintegradas para proceder a sua extrao.
O produto se concentra por sedimentao, precipitao, filtrao, centrifugao, extrao por
solventes, destilao, evaporao do solvente e secagem. Se a purificao for necessria, esta
envolver outros procedimentos, como a cristalizao e os mtodos cromatogrficos.
Um problema a considerar o despejo dos resduos de uma fermentao, alguns dos quais
podem representar um perigo para o meio ambiente como, por exemplo, o vinhoto resultante da
produo de etanol ou o soro das indstrias de laticnios. Existem formas de tratamento, como o
crescimento de biomassa sobre resduos industriais, que eliminam o problema e ainda permitem a
obteno de mais um produto.
68
OS MEIOS DE CULTURA
O meio de cultura inclui gua, uma fonte de carbono, substncias inorgnicas (sais minerais),
vitaminas, hormnios e fatores reguladores do crescimento (Tabela 1). Alguns destes componentes
podem ser substitudos por misturas pouco definidas, mais econmicas ou simples de manipular
(gua de coco, suco de tomate, suco de laranja). Geralmente, o pH do meio varia entre 5,0 e 6,5.
A composio do meio de cultura varia com as necessidades de cada espcie. O crescimento e a
diferenciao celular so controlados modificando a proporo entre os hormnios e reguladores de
crescimento. De um modo geral, se a proporo entre citocininas e auxinas for maior que 1,
desenvolvem-se brotos, se for menor, razes e, se for igual, calos.
A incubao ocorre a uma temperatura entre 23 e 28C, com 12 a 14 horas dirias de
iluminao.
TABELA 7.1. Os componentes do meio de cultura para clulas vegetais.
COMPONENTES
CARACTERSTICAS E EXEMPLOS
gua destilada
Fonte de carbono
Substncias inorgnicas
Macroelementos (N, P, K, Ca, Mg, S) e microelementos (Fe, Co, Zn, Ni, B, Al,
Mn, Mo, Cu, I), em uma proporo que depende da planta escolhida.
Vitaminas
Hormnios e
reguladores de crescimento
Auxinas
Estas promovem o alongamento celular, a formao de calos e de razes
adventcias; inibem a formao de brotos axilares adventcios e, s vezes, a
embriognese em suspenses celulares. Exemplos: IAA (cido indolactico),
NAA (cido naftalenoactico), IBA (cido indolbutrico), 2,4 D (2,4diclorofenoxiactico).
Citocininas
Estas promovem a diviso celular, regulam o crescimento e o
desenvolvimento dos tecidos vegetais. Exemplos: cinetina, 2iP (2isopentiladenina), BAP (benzilaminopurina), zeatina.
Outras substncias
Exemplos: giberelinas, cido abcssico, etileno.
Misturas de substncias
pouco definidas
Materiais inertes
70
AS ETAPAS DO PROCESSO
A capacidade de regenerao maior nas plantas herbceas que nas lenhosas, distribuindo-se em
forma desigual entre algumas famlias de Solanceas, Crucferas, Gesnericeas, Compostas e
Liliceas; depende tambm do gentipo e das condies ambientais, diminuindo com a idade da
planta.
A cultura in vitro tem a vantagem de ser mais rpida e de ocupar muito menos espao que a
multiplicao in vivo. As principais aplicaes esto no cultivo de plantas ornamentais, de hortalias e
na silvicultura.
Os explantes se cultivam assepticamente em meios de composio adequada, possibilitando a
regenerao direta da planta. O processo envolve quatro etapas:
A. Estabelecimento de uma cultura assptica.
Uma vez retirados da planta-me, os explantes so desinfetados com um agente qumico,
geralmente hipoclorito de sdio, que mais tarde lavado. Os explantes so transferidos para o meio
de cultura, em condies asspticas semelhantes s utilizadas para a cultura de microrganismos
(Figura 7.2). A incubao ocorrer a uma temperatura entre 23 e 28C, com iluminao durante 12 a
14 horas dirias.
B. Multiplicao.
Os propgulos desenvolvidos so divididos e transferidos para um meio de multiplicao, de maneira
a se obter numerosas subculturas (Figura 7.3).
D. Aclimatao.
Transferncia das plntulas, primeiro para o solo ou para algum outro substrato, mais tarde para
uma casa de vegetao. Protegidas da iluminao solar direta, elas aumentaro sua capacidade
fotossinttica adaptando-se lentamente as condies ambientais.
FIGURA 7.2. O procedimento a seguir para se obter uma cultura assptica no laboratrio.
Separao
dos explantes
Esterilizao
Lavados
Dissecao
e semeadura
Incubao
gua + detergente
+ hipoclorito de sdio
gua estril
71
72
AS DIFERENTES MODALIDADES
A cultura de meristemas
A regenerao de uma planta pode ocorrer a partir de um rgo to pequeno quanto a gema apical
(tamanho 0,5 a 2 mm). Nesta, associado aos primrdios foliares e ao tecido subapical, se encontra
um pequeno fragmento (0,01 a 0,3 mm) de meristema, um tecido embrionrio a partir do qual se
formam todos os outros tecidos das plantas. Por isso, a cultura da gema apical pode ser substituda
pela cultura de meristemas (Figura 7.4).
Estoques de plantas livres de vrus e de outros patgenos so obtidos associando a cultura de
meristemas com a termoterapia, uma incubao a 32-340C, por um tempo determinado (gernio,
dlia, crisntemo, cana-de-acar, batata, morangueiro, alcachofra etc.). Recuperam-se com este
mtodo algumas plantas que s se reproduzem naturalmente pela via assexuada e se encontram
ameaadas de extino devido contaminao por vrus
Os exemplos citados na bibliografia sobre o cultivo de meristemas so, no mnimo,
impressionantes. Se um tubrculo de inhame de 100 g produz 25 kg de tubrculos em dois anos, por
micropropagao produzir 300.000 kg; a partir de uma nica gema apical podem-se obter 4.000.000
de cravos em um ano.
A tcnica tambm permite a multiplicao de espcies que se reproduzem lenta e/ou
dificilmente, como as orqudeas, e acelerar a produo de mudas em plantas com ciclo anual ou
bianual. Outra variao desta modalidade a microenxertia, que se aplica s essncias florestais
(eucalipto) e s rvores frutferas (citros). A tcnica gera uma alta produtividade de mudas sadias,
que so cultivadas em pouco espao (mais de 1.000 plantas / m 2) sem depender dos fatores
climticos e da poca do ano.
Do ponto de vista econmico, o custo destas mudas alto porque a cultura em meio slido
necessita um trabalho minucioso e uma mo de obra especializada. A multiplicao dos propgulos
em biorreatores, anlogos aos fermentadores microbianos, visa reduzir os custos. Ao modelo
tradicional de ps giratrias que danifica os tecidos e as clulas, preferem-se pequenas cubas de 1 a
5 l onde os propgulos permanecem em sistemas de imerso permanente ou temporria.
Apesar dos custos, a tecnologia interessante quando se planeja introduzir uma espcie em
uma regio determinada porque elimina qualquer contaminao prvia. Tambm interessante para
iniciar a propagao vegetativa com mudas certificadas, visando a amplificao posterior dos
cultivos.
A cultura de calos
A cultura de calo a modalidade alternativa para aquelas plantas que no podem ser propagadas
diretamente a partir de meristemas. Um calo uma massa de clulas desdiferenciadas que prolifera
de maneira irregular a partir de um explante; trata-se de um tecido de tipo tumoral que, in vivo,
produzido como resposta aos ferimentos em rgos e tecidos.
Uma vez estabelecido em um meio de cultura, o calo pode ser subdividido a cada trs ou quatro
semanas, mantendo indefinidamente as clulas em meio nutriente com a mesma composio. Se o
calo for transferido a outro meio com uma concentrao diferente de hormnios, formar-se-o
rgos ou embries, a partir dos quais podero ser regeneradas numerosas plantas (Figura 7.5).
Diferentemente das outras modalidades de cultura de tecidos, na cultura de calos a proliferao
celular est acompanhada por um aumento das variaes genticas e da instabilidade cromossmica
(variao somaclonal).
73
Devido a essa caracterstica, a cultura de calos resulta menos conveniente que a cultura de
meristemas para micropropagao. Contudo, sua utilizao inevitvel no caso de algumas espcies
economicamente importantes (cereais, leguminosas, forrageiras, espcies florestais e palmeiras
tropicais). Por outro lado, a variao somaclonal permite a seleo de variedades de plantas com
propriedades novas, tais como a resistncia ao estresse, ao ataque de insetos, a patgenos, a
herbicidas, a concentraes salinas elevadas, a molculas qumicas (Al, Mn). A variabilidade pode ser
aumentada pela utilizao de agentes mutagnicos.
A cultura de clulas e rgos vegetais em biorreatores
Desagregando um calo em meio lquido se obtm uma suspenso de clulas que podem ser
cultivadas em biorreatores industriais visando a produo de metablitos secundrios ou de
embrioides, isto de embries formados a partir de clulas somticas. Podem ser encapsulados em
uma substncia gelatinosa contendo nutrientes, envolta por um plstico biodegradvel, formando
sementes artificiais. Estas se desenvolvem normalmente quando semeadas na terra, por isso uma
das aplicaes desta tecnologia sua disperso por avies para o reflorestamento de regies de
difcil acesso.
Os metablitos secundrios, ou compostos naturais, so considerados produtos de Qumica
Fina, tendo um alto valor agregado no mercado. Trata-se de alcaloides, de glicosdeos cardacos, de
substncias antitumorais e antimicrobianas, de hormnios esteroides etc. para a indstria
farmacutica e, tambm, de corantes, adoantes e aromas para as indstrias alimentcia e cosmtica.
A possibilidade de substituir os mtodos tradicionais de extrao ou de sntese, pela produo
mediante o cultivo de suspenses celulares em biorreatores, gerou grandes expectativas comerciais.
No incio da dcada de 1990, vrios estudos estimaram as condies necessrias para que a sntese
ou a bioconverso de compostos naturais em produtos de alto valor agregado resultasse vantajosa.
Os clculos mostraram que se o mercado fosse suficientemente amplo e o valor do produto
superasse os US$ 500 ou 1.000 por kg, a produtividade do sistema deveria ser de pelo menos um
grama de composto por litro de cultura celular. Estas condies no so to frequentes.
Do ponto de vista tecnolgico, as clulas vegetais so grandes (100 m) e sedimentam com
facilidade. A tendncia a formar agregados as torna muito sensveis ao cisalhamento. Como o
crescimento lento, os riscos de contaminao aumentam. Tambm existem problemas
relacionados com a transferncia de oxignio.
Existem diversos modelos de biorreatores para o cultivo de clulas vegetais, entre os quais o
tradicional de ps giratrias e outros de tipo air-lift ou de leito fluidizado. A conduo do processo
pode ser descontnua, semicontnua ou contnua; neste ltimo caso se utilizam clulas imobilizadas.
A escolha de uma modalidade ou outra de cultivo depende da substncia estar, ou no, associada ao
crescimento celular e, tambm, de se tratar de um produto intra ou extracelular.
O cultivo de rgos e especialmente de razes transformadas (hair roots) tem dado bons
resultados, apesar de poucos terem alcanado um nvel comercial. Entre eles, a produo de
shikonina a partir de razes (Lithospermum erythrorhizon) pela empresa Mitsui Petrochemical Ind.
Ltd.; de gingenosdeo (Panax ginseng) e de purpurina (Rubia akane) por Nitto Denko Corp.; e de
paclitaxel (Taxos cuspidata), comercializado como Taxol por Phyton Inc., uma empresa associada a
Bristol-Myers Squibb.
Espera-se que as estratgias para aumentar a produo, combinando o desenvolvimento de
novos processos industriais com a engenharia metablica das clulas, possam vir a estabelecer as
bases de uma agricultura molecular. Por enquanto, as aplicaes se restringem produo de alguns
frmacos e de aditivos para a indstria de alimentos (flavorizantes, corantes e aromas).
74
75
A DIFUSO DA TECNOLOGIA
As tcnicas de cultura in vitro de vegetais foram rapidamente assimiladas por empresas e instituies
de pesquisa e desenvolvimento, porque facilitam o melhoramento gentico das variedades
comerciais e, tambm, porque representam uma etapa indispensvel na obteno de uma planta
transgnica.
Sendo tcnicas de domnio pblico, relativamente simples e de baixo custo, numerosas
empresas as utilizam no mundo todo para garantir a qualidade gentica e fitossanitria das mudas e
sementes comercializadas. Em Cuba, por exemplo, o IBP (do espanhol, Instituto de Biotecnologia de
las Plantas) tem desenvolvido, junto com outros centros cientficos, protocolos para batata, cana-deacar, pltano, banana, goiaba, abacaxi, maracuj etc. O IBP est associado a uma rede de 15
biofbricas com capacidade de produzir 60 milhes de plntulas in vitro e sementes artificiais.
Esta tecnologia est amplamente difundida na Amrica Latina, onde representa o segundo
produto mais comercializado da biotecnologia agrcola, com ampla difuso na olericultura, na
hortifruticultura, na floricultura e na propagao de plantas ornamentais, assim como na produo
de plantas de interesse industrial (cana, caf) e de mudas de essncias florestais para as indstrias de
papel.
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CARACTERSTICAS E EXEMPLOS
gua
Desmineralizada, destilada.
Fonte de carbono
Glicose.
Substncias inorgnicas
L aminocidos
Vitaminas
Misturas de substncias
pouco definidas
Outros
77
Amostra de
sangue com
anticoagulante
Separao dos
leuccitos por
centrifugao
Cultivo dos
leuccitos
Adio de colchicina
e lise celular
Fixao e colorao
(bandeamento)
OBSERVAO
E COMPARAO
Repique
Desagregao
mecnica ou enzimtica
(tripsina, colagenase)
Suspenso
celular
Cultura
primria
Cultura
secundria
ORIGEM
APLICAES
HeLa(*)
Pesquisa
MDCK
Rim de cachorro
3T3
Tcnicas laboratoriais
Nawalwa
Linfoma humano
-interferon
WI-38
VERO
MRC-5
(*) Henrietta Lacks, morreu aos 31 anos de um carcinoma uterino. A linhagem de clulas HeLa isolada na poca
continua sendo cultivada h mais de 50 anos.
78
Nas Colees de Culturas se encontram linhagens celulares de diversos tipos, conservadas por
criopreservao (Tabela 7.3). A cultura in vitro de clulas animais a rota seguida para a manufatura
em grande escala de vrios produtos, tais como as vacinas e os anticorpos monoclonais. Tambm
adequada para a produo de citocinas (linfocinas, interferons, eritropoietina) e de outras protenas
de origem recombinante (fator ativador de plasminognio, p.ex.) que, por exigir modificaes pstraducionais complexas, no podem ser produzidas em bactrias ou leveduras transformadas.
Na hora de passar da escala do laboratrio escala industrial, algumas consideraes devem ser
levadas em conta. A cultura de clulas animais exige, alm de um cuidado extremado, meios de
cultivo complexos e caros, desenvolvendo-se em condies muito rigorosas. Como as clulas se
dividem lentamente (a cada 20 horas aproximadamente), a assepsia deve ser mantida durante
perodos prolongados. As concentraes celulares so baixas, o que diminui a produtividade e a
rentabilidade do processo. A demanda de oxignio alta e as clulas so muito frgeis e sensveis ao
cisalhamento.
Enquanto algumas clulas podem crescer livremente em suspenso, como os linfcitos, outras
s crescem se houver um suporte. No biorreator, este problema pode ser resolvido de diversos
modos: mediante o confinamento das clulas dentro de membranas semipermeveis, imobilizao
em gis ou cpsulas ou fixao sobre suportes, tal como pequenas partculas de 100 a 400 m em
vidro, plstico ou dextrina, em modelos de fermentadores anlogos aos representados no captulo
anterior.
Biorreatores de tamanho pequeno (at 15 l) e processos descontnuos apresentam menos
problemas de contaminao, j os de maior tamanho (at 1.000 l) exigem a substituio da agitao
mecnica por sistemas de tipo air lift ou leito fluidificado. Evita-se a apoptose ou morte celular
renovando periodicamente parte do meio para retirar os produtos excretados.
Nos ltimos anos, as tcnicas de cultura in vitro de clulas animais deram um amplo impulso s
pesquisas bsicas e aplicadas, aos testes de diagnstico, s tcnicas de fertilizao in vitro,
produo de compostos biolgicos (protenas recombinantes), de tecidos para transplante e de
vacinas para uso humano e veterinrio. Nos estudos toxicolgicos, esta tecnologia substitui, ao
menos parcialmente, a experimentao com animais, uma atividade que suscita forte resistncia na
sociedade devido aos questionamentos ticos levantados.
Estima-se que o mercado gerado pela venda de meios de cultivo, soros e reagentes chegar a
US$ 3,4 bilhes em 2013.
79
80
8. A TECNOLOGIA DO DNA
AS FERRAMENTAS DISPONVEIS
A tecnologia do DNA engloba uma srie de procedimentos para extrair, fragmentar, sintetizar,
marcar, identificar, amplificar e sequenciar o DNA. Estas tcnicas foram desenvolvidas ao longo de
uma dcada (1985-1995), constituindo hoje um conjunto de ferramentas que utilizado
rotineiramente nos laboratrios, geralmente em sistemas automatizados especialmente desenhados
para efetuar rapidamente um nmero altssimo de operaes.
A extrao de DNA um procedimento relativamente simples. De um modo geral, a quebra de
paredes e membranas libera o contedo celular, do qual se eliminam o RNA e as protenas antes de
separar o DNA, que se precipita com etanol. Uma vez extrado e purificado o DNA, diversos tipos de
tratamento so possveis.
Pelo menos uma trintena de empresas j comercializa diferentes tipos de kits para a extrao de
cidos nucleicos, substituindo os protocolos tradicionais por sistemas mais fceis de automatizar.
Estima-se que este mercado alcance um valor de US$ 158 bilhes, em 2014.
AS NUCLEASES OU ENZIMAS DE RESTRIO
Entre as numerosas enzimas utilizadas diariamente nos laboratrios, as nucleases merecem ateno
especial. Estas enzimas quebram as ligaes entre os nucleotdeos de uma cadeia de DNA; algumas
comeam pelas extremidades eliminando-os um a um; outras cortam a molcula por dentro.
Pertencem a este ltimo grupo as enzimas de restrio, que so capazes de cortar o DNA em stios
especficos.
Normalmente, as enzimas de restrio so produzidas por bactrias, como uma arma de defesa
contra o ataque de vrus (bacterifagos), j que ao cortar o DNA viral impedem sua multiplicao. O
DNA bacteriano no atacado por suas prprias enzimas, seja porque no possui as sequncias
correspondentes, seja porque estas esto camufladas pela adio de um grupo metila.
Desde sua descoberta por Werner Arber, na dcada de 1960, j foram isoladas centenas de
enzimas de restrio. Todas elas agem como tesouras qumicas que cortam o DNA ao reconhecer,
como os seus pontos-alvo, determinadas sequncias de 4 a 8 bases.
Por exemplo, a enzima EcoRI, cujo nome deriva de "Escherichia coli linhagem RY13 (R), primeira
endonuclease a ser descoberta I" corta o DNA em dois pedaos com pontas lascadas: as setas
indicam o ponto de corte. Observe-se a existncia de um palndromo, isto de uma sequncia que
pode ser lida do mesmo modo (GAATTC) nos dois sentidos (5- 3 ou 3- 5), de forma anloga a frases
como Amor a Roma. Assim como h enzimas que cortam o DNA, outras colam os fragmentos
(ligases).
82
A ELETROFORESE DO DNA
A eletroforese separa os fragmentos de DNA obtidos com uma enzima de restrio. As amostras so
colocadas em um gel no qual se aplica um campo eltrico. Os fragmentos de DNA carregados
negativamente se movimentam na direo do plo positivo. Ao encontrar uma resistncia menor, os
fragmentos menores migram mais rapidamente (Figura 8.1).
O poder de separao varia com o suporte (gel de agarose ou de poliacrilamida) e com o
tamanho do poro, que depende da concentrao do meio. Tambm varia com as caractersticas do
campo eltrico aplicado. Os fragmentos de restrio formam bandas que podem ser observadas na
luz ultravioleta, aps colorao com uma substncia fluorescente. Fragmentos de tamanho
conhecido inseridos no gel, maneira de uma rgua molecular, servem como padro de comparao
para estimar o tamanho das bandas do DNA analisado.
Uma das primeiras aplicaes da eletroforese dos fragmentos de restrio foi o estudo dos
polimorfismos. A modificao do stio de restrio de uma molcula de DNA (como, por exemplo, de
GAATTC para GAACTC) origina fragmentos de tamanhos diferentes, denominados RFLPs ou rifleps
(do ingls, restriction fragment length polymorphism). Os RFLPs so marcadores que podem ser
estudados do mesmo modo que um gene que determine um carter visvel ou uma modificao
bioqumica (Figura 8.2).
Uma mutao pode gerar dois alelos diferentes, A 1 (nenhum stio de restrio) e A2 (um stio de
restrio). Na eletroforese, o DNA dos indivduos A1A1 ser visualizado como uma banda, o de A1A2
como trs bandas e o de A2A2 como duas bandas.
HIBRIDIZAO E SONDAS GNICAS
Quando o DNA colocado em determinadas condies de temperatura, pH ou concentrao salina,
os dois filamentos da hlice se separam. A dissociao se deve quebra das pontes de hidrognio
entre as bases complementares. Voltando s condies iniciais, essas ligaes se restabelecem e os
filamentos se associam novamente.
A reao de hibridizao tambm ocorre entre filamentos de DNA ou de RNA de diferentes
origens e tamanhos, sempre que houver algumas sequncias complementares. Em funo desta
propriedade se constroem filamentos simples, geralmente marcados radiativamente, de DNA ou RNA
de sequncia conhecida. Estes se usam como sondas para reconhecer a presena de uma sequncia
complementar em um cromossomo ou em um fragmento de DNA (Figura 8.3).
83
2. Eletroforese
Os fragmentos de restrio so separados
por eletroforese.
3. Transferncia
O DNA desnaturado e os fragmentos
unifilamentares transferidos a uma
membranade nitrocelulose.
4. Sonda radiativa
Acrescenta-se uma sonda unifilamentar
complementar ao gene procurado. Esta
hibridiza com o fragmento portador da
sequncia complementar.
5. Autorradiografia
Depois de lavar, para eliminar o excesso
de reagente, coloca-se sobre o filtro um
filme sensvel radiatividade.
84
O MTODO DE SOUTHERN
Em 1975, E.M. Southern descreveu um mtodo para analisar fragmentos de restrio, utilizando
sondas de DNA. Uma vez separados os fragmentos por eletroforese, transferem-se os fragmentos a
uma membrana de nilon ou de nitrocelulose. A hibridizao de uma sonda radiativa com o seu alvo
registrada em um filme apropriado (Figura 8.4).
O mtodo, denominado Southern blotting, tem sido utilizado para diagnstico de doenas
genticas, algumas das quais so causadas por mutaes que, ao eliminar ou criar um stio de
restrio, modificam o padro de bandas.
Mtodos anlogos foram desenhados para estudos de RNA (Northern blotting) e de protenas
(Western blotting). Observe-se que, no primeiro caso, a sonda pode ser um fragmento de cido
nucleico, mas no segundo a sonda um anticorpo especfico.
O FINGERPRINT
Descrita por A. Jeffreys em 1985, uma variante do mtodo de Southern focaliza as regies do
genoma que no se expressam, acumulando mutaes que conferem a cada indivduo uma
sequncia nica (excetuando-se os gmeos). Muitas delas representam sequncias repetidas que
esto dispersas ao longo do genoma.
Denominadas VNTR ou vinters (do ingls variable-number tandem repeats) estas sequncias se
repetem um nmero de vezes que pode variar de um cromossomo ao seu homlogo. Sendo assim,
os fragmentos de restrio correspondentes tero um tamanho diferente, o que pode ser visualizado
por eletroforese (Figura 8.5).
Ao aumentar o nmero de sondas para o reconhecimento de outros tipos de VNTRs, obtm-se
um padro de bandas individual, parecido com o cdigo de barras do comrcio. Assim como as
impresses digitais identificam as pessoas, as sondas revelam a identidade gentica de cada um de
ns. O procedimento, no por acaso chamado de Fingerprint, encontrou rpida aplicao tanto na
investigao de paternidade (ou maternidade), como na identificao policial ou forense.
A SNTESE E AMPLIFICAO DE DNA
Sntese de oligonucleotdeos
A sntese de oligonucleotdeos de DNA e RNA se desenvolve hoje em mquinas automatizadas
(sintetizadores) capazes de construir, em poucos minutos, molculas com dezenas de pares de bases
(Figura 8.6). Estes oligonucleotdeos podem ser utilizados como sondas ou como primers para a PCR
(ver um pouco mais adiante).
Sntese de cDNA
Uma enzima de origem viral transcreve a informao gentica no sentido RNA DNA. Esta enzima,
denominada transcriptase reversa, normalmente garante aos vrus com genoma de RNA sua
multiplicao no hospedeiro (como o HIV, por exemplo).
O rRNA e os tRNAs podem ser isolados facilmente devido a seu tamanho; o mRNA, por sua vez,
deve ser isolado dos tecidos onde se expressa. O mRNA da protena da seda ou fibrona, por
exemplo, se extrai das glndulas salivares do bicho-da-seda.Como ferramenta de laboratrio, a
transcriptase reversa possibilita a construo de filamentos de DNA complementares (cDNA) a
qualquer molcula de RNA (Figura 8.7). Note-se que, diferente do gene original, no haver ntrons
no cDNA reconstrudo a partir de RNA.
85
86
B. A amplificao do DNA.
87
1.
2.
3.
4.
5.
89
Calculava-se que, no auge do estudo do genoma humano, uma empresa ligada a Celera
(Biosystems Applied) mantinha os computadores funcionando dia e noite, chegando a gastar U$S
1.000.000 mensais com eletricidade.
Apesar de ter possibilitado o estudo de numerosos genomas, a partir de 2006 o mtodo
automatizado de Sanger comeou a ser considerado pouco eficiente, surgindo a necessidade de
desenvolver uma nova gerao de tecnologias, mais rpidas e mais baratas.
Vrias plataformas comerciais (Roche/454, Illumina/Solexa, Life/APG, Helicos Biosciences)
coexistem atualmente no mercado e numerosas empresas contam com tecnologias em diferentes
etapas de desenvolvimento e comercializao (IBM, Oxford Nanopore Technologies, Intelligent Biosystems, LaserGen Inc. e NABsys).
Em 2006, os mtodos utilizados eram 500 vezes mais rpidos que os da dcada anterior. Hoje,
alm de serem ainda mais velozes, as tecnologias de segunda gerao tem derrubado os custos do
sequenciamento. Se em outubro de 2004, o custo do sequenciamento de 1 Megabase (1.000.000 de
pares de bases) era de US$ 1598,91, em julho de 2011 o preo era de US $ 0,12.
Em consequncia temos uma enorme avalancha de dados, que possibilita estudos comparativos
e evolutivos de uma dimenso inimaginvel alguns anos atrs. Tambm abre o caminho para estudos
sobre as diferenas genticas que afetam a sade e a doena.
OS ARRAYS
Em consequncia do conhecimento acumulado sobre o genoma do homem e de outros organismos,
j podem ser estudados alguns aspectos relacionados com a expresso e a interao dos genes. Lidar
com um nmero enorme de informaes demanda novos avanos tecnolgicos, entre os quais a
construo de chips de DNA e microarrays.
Os microchips so pequenas placas de vidro, nilon ou slica com centenas de sondas por cm 2,
fixadas mediante diferentes tecnologias (robtica, fotolitografia). Coloca-se a amostra, marcada com
um corante fluorescente, sobre a placa; as molculas complementares a alguma das sondas ficaro
grudadas, as restantes sero eliminadas na lavagem posterior. Os pontos onde ocorreu a hibridizao
so identificados por varredura com um raio laser e um software apropriado para o tratamento da
informao (Figura 8.10).
Escolhem-se as sondas entre os genes codificadores de protenas que se expressam na clula.
Desse modo, se excluem os genes que correspondem ao rRNA, aos tRNAs, s sequncias de controle
e ao DNA extragnico. A escolha de sequncias transcritas, denominadas ESTs (do ingls, expressed
sequence tags), aumenta as chances de detectar os genes que participam de alguma resposta
patolgica.
Atualmente, a tecnologia utilizada para diversos tipos de anlise de DNA e RNA, como, por
exemplo:
o
o
o
o
Numerosas empresas fabricam arrays comercialmente; algumas estimam que em pouco tempo
sero construdos arrays do tamanho de uma moeda, contendo todo o genoma humano. difcil
prever os alcances desta tecnologia to promissora, mas os analistas estimam que, at 2012, o
mercado chegar a 1,47 bilho de dlares por ano.
.
90
91
A BIOLOGIA SINTTICA
Com o desenvolvimento da genmica e a apario de novas plataformas tecnolgicas surge, na
interface entre a biologia e a engenharia, a biologia sinttica. Trata-se de uma nova rea de
conhecimento com finalidades prticas, que visa o desenho e a construo de sistemas biolgicos
simplificados.
A sntese cada vez mais rpida de alguns genomas virais (hepatite C, 2000; poliomielite, 2002;
phi X 174, 2003) permitiu a construo e o patenteamento de uma bactria parcialmente sinttica
(Mycoplasma laboratorium) por pesquisadores do Instituto J. Craig Venter.
Em 2010, pesquisadores do mesmo Instituto obtiveram uma bactria sinttica, mediante a
introduo de unidades bsicas de DNA de Mycoplasma mycoides em uma bactria receptora de
outra espcie, Mycoplasma capricolum, e a eliminao posterior do genoma desta. A bactria
sinttica, denominada Synthia, se reproduz normalmente e leva sequncias especficas que
confirmam sua origem artificial.
Molculas de DNA sintetizadas automaticamente e associadas entre si como blocos de Lego so
os elementos fundamentais para construir genomas mnimos, capazes de cumprir funes
determinadas.
Com o objetivo de desenvolver a biologia sinttica em benefcio da humanidade e do planeta,
vrias organizaes (Biobricks Foundation, DIYBIO, SYNBIO etc.) e universidades (Harvard, MIT etc.)
promovem a criao de uma comunidade que compartilhe valores e normas de trabalho, mediante a
livre difuso de protocolos e sequencias biolgicas standard que possam ser usadas, com segurana,
como blocos fundamentais. Esperam-se da biologia sinttica avanos substanciais em medicina,
indstria, energia e meio ambiente.
92
9. A ENGENHARIA GENTICA
FIGURA 9.1. A experincia que deu origem engenharia gentica: cortar, colar, copiar.
1. Preparao dos plasmdeos recombinantes
Bactrias T R
CORTAR
COLAR
Enzimas de
restrio
Bactrias T S
pSC 101
pSC 102
Plasmdeos
Bactrias T K recombinantes
COPIAR OU CLONAR
Multiplicar
Bactrias T S K S
Meio de cultivo
com tetraciclina
e kanamicina
Legenda
T: tetraciclina, Ts: sensvel tetraciclina, Tr: resistente tetraciclina, K= kanamicina, Ks: sensvel kanamicina,
Kr: resistente kanamicina, pSC101: plasmdeo de Stanley Cohen n0 101; pSC102: plasmdeo de Stanley Cohen
n0 102.
Xenopus
94
DNA de Xenopus
Bactria recombinante
Molculas de Xenopus
MITOS E REALIDADE
As infinitas possibilidades da tecnologia do DNA-recombinante despertaram alguns dos antigos
mitos. Por desobedecer a Zeus, entregando o fogo ao homem, Prometeu sofreu o terrvel castigo de
ser acorrentado a uma montanha e ter o fgado devorado por uma guia. Instrumento da vingana
divina, Pandora abrira a caixa da qual saram todos os males da humanidade. A ambiguidade da nova
biotecnologia, com os seus desafios e promessas, costuma ser representada nas duas faces de Janus,
um rei com o dom de ver simultaneamente o passado e o presente.
Em 1974, P. Berg e mais nove pesquisadores publicaram uma carta nas revistas cientficas
Science, Nature e Proceedings of the National Academy of Science, alertando os colegas sobre os
possveis riscos da nova tecnologia e pedindo uma moratria sobre os experimentos com DNA, at
serem estabelecidos os cuidados e salvaguardas necessrias. Considerando que o uso desta
tecnologia apresenta vrios riscos possveis porque novos tipos de organismos, alguns deles
potencialmente perigosos, podem ser introduzidos no ambiente, se no existirem os devidos
controles, o National Institute of Health (NIH) formou o Recombinant DNA Advisory Committee
(RAC).
Em 1975, a conferncia de Asilomar (Monterrey, Califrnia), reunindo 139 pesquisadores de 17
pases, classificou os experimentos em funo do risco (baixo, mdio ou alto), pedindo a suspenso
dos experimentos de alto risco enquanto no se determinassem quais as formas de conteno
adequadas, tanto fsicas como biolgicas. Enfatizava-se tambm a necessidade de trabalhar com
microrganismos enfraquecidos, incapazes de sobreviver fora do laboratrio.
Em 1976, o RAC publicou um conjunto de normas de trabalho que, alm de revisadas
periodicamente, devem ser seguidas por todos os pesquisadores e instituies que recebam dinheiro
do NIH para pesquisas com DNA-recombinante.
Com base nos trabalhos publicados em 1973, a Universidade de Stanford obteve uma patente
que lhe rendeu U$S 300 milhes, divididos com a Universidade da Califrnia em San Francisco. A
Universidade de Stanford licenciou o uso da tecnologia a mais de 400 empresas, entre as quais
Amgen, Eli Lilly, Genentech, Johnson & Johnson e Schering Plough. Qual o invento patenteado? O
processo ou ferramenta biotecnolgica que consiste em inserir um DNA exgeno em um plasmdeo
bacteriano e este em uma bactria, que se transforma assim em uma fbrica capaz de reproduzir
esse gene em quantidades ilimitadas.
Nesta breve recapitulao do nascimento da Biotecnologia moderna, vale destacar a
preocupao com a segurana, mostrada oportunamente pelos pesquisadores e as instituies
cientficas envolvidas. No h na histria da cincia ou da tecnologia um episdio de
responsabilidade coletiva comparvel ao da Conferncia de Asilomar. Paralelamente a sua
explorao comercial, a engenharia gentica utilizada atualmente em centenas de laboratrios de
universidades e institutos de pesquisa. E mais de trinta anos depois no h registro ou relato de
nenhum acidente relacionado com essa tecnologia. Talvez valha a pena lembrar que Prometeu foi
liberado depois de 30 anos, e que bem no fundo da caixa de Pandora estava a esperana.
95
96
AS BIBLIOTECAS DE GENES
O enorme tamanho de um genoma dificulta tanto o mapeamento como a localizao de um gene.
Uma forma de facilitar a manipulao extrair o DNA de um organismo determinado, cort-lo com
enzimas de restrio, inserir os fragmentos em plasmdeos e introduzir os plasmdeos recombinantes
em bactrias. Cada bactria formar um clone e cada clone levar um fragmento do genoma do
organismo estudado. O conjunto de clones representa o genoma inteiro de um organismo,
constituindo uma biblioteca genmica (Figura 9.3).
Boa parte do DNA lixo e no leva genes. Por isso, um procedimento alternativo a
montagem de uma biblioteca gnica, incluindo exclusivamente os genes que se expressam, ou seja,
os genes responsveis pela sntese de protenas. Separa-se o mRNA codificador, e, com a enzima
transcriptase reversa, se constroem as molculas correspondentes de cDNA. Inserem-se estas em
plasmdeos, e os plasmdeos em bactrias. Com este procedimento, obviamente, o nmero de clones
na biblioteca ser menor (Figura 9.3).
De fato, o nmero de clones depende no s do nmero de genes como do tamanho do
fragmento que o vetor pode carregar. Como os plasmdeos bacterianos e o bacterifago s
transportam fragmentos pequenos de DNA de 10 kb a 20 kb, outros vetores genticos foram
especialmente desenhados para carregar fragmentos maiores (cosmdeos, YACs ou yeast artificial
cromossomes, BACs ou bacterial artificial chromossomes, transposons etc.).
A construo de bibliotecas de genes representa o primeiro passo para o mapeamento de um
genoma. Ao sequenciamento dos fragmentos segue a montagem da informao. Trata-se de uma
etapa complexa em que se alinham as sequncias, se preenchem lacunas e se verificam os dados. O
tratamento matemtico das informaes demanda algoritmos sofisticados e computadores
poderosos. Uma vez organizada a sequncia, esta armazenada em bancos de dados. O usurio tem
acesso atravs da Internet, mediante programas especializados que acumulam uma enorme
quantidade de informaes.
97
O sinal correspondente ao peptdeo-guia removido do cDNA com a enzima de restrio Hae III, que
remove tambm 72 bases, codificadoras dos primeiros 24 aminocidos da molcula.
cDNA de somatotropina
Fragmento de DNA sinttico com
as 72 bases correspondentes
aos 24 primeiros aminocidos
Insero em um plasmdeo
Plasmdeo recombinante
Transformao
Biblioteca gnica
Clonagem e subclonagem
em Escherichia coli
Reao em cadeia
da polimerase (PCR)
ENCONTRAR O GENE
De um modo geral, encontrar um gene equivale a procurar agulha em palheiro. O gene pode ser
localizado por triagem dos clones de uma livraria gnica ou genmica (Figura 9.3). Se esta no existir,
pode ser necessrio constru-la, em uma primeira rodada de clonagem, para encontrar o gene de
interesse.
A segunda dificuldade est na obteno de numerosas cpias desse gene. Uma soluo a
multiplicao do clone correspondente e posterior isolamento do gene procurado. Outra a
amplificao do gene mediante a PCR, sempre que se conheam as sequncias iniciais e finais ou,
eventualmente, as sequncias adjacentes regio onde est inserido. Se a sequncia do gene for
conhecida e relativamente curta, podem-se construir cadeias curtas de oligonucleotdeos e associlas, formando um gene sinttico que ser amplificado por PCR. Existem numerosas estratgias, que
dependem do caso e, tambm, das caractersticas e possibilidades do laboratrio (Figura 9.5).
Seja qual for o caminho seguido, uma vez que as cpias do gene de interesse forem obtidas,
estas tero que ser transferidas ao hospedeiro definitivo.
INSERIR O GENE
Vetores de expresso gnica
A transferncia de um fragmento estranho de DNA se v facilitada pela utilizao de vetores. Um
vetor uma molcula de DNA que se duplica de maneira autnoma dentro de uma clula,
carregando vrios genes, entre os quais alguns marcadores que permitam reconhecer sua presena
dentro da clula. no vetor que ser inserido o fragmento de DNA estranho, para multiplicao ou
integrao no genoma.
Alm dos plasmdeos (bacterianos e de leveduras) e os bacterifagos (, m13), tambm se
utilizam como vetores os transposons, que so elementos genticos mveis capazes de pular de um
lugar a outro do genoma, espalhando ou no cpias. Construdos em funo das necessidades,
existem hoje vetores bacterianos, vetores de leveduras e vetores bifuncionais que podem ser
utilizados tanto em bactrias como leveduras.
As primeiras experincias de Engenharia Gentica foram feitas na bactria Escherichia coli, um
microrganismo muito conhecido e fcil de se cultivar no laboratrio. Porm, Escherichia coli no o
organismo ideal para a expresso de genes eucariticos. Clulas procariticas e eucariticas diferem
em relao ao processamento do mRNA e s modificaes das protenas depois da traduo. Por
este motivo, quando se procura expressar genes de mamferos, Escherichia coli substituda por
outras clulas eucariticas, como a levedura Saccharomyces cerevisiae, um fungo utilizado h sculos
na produo de alimentos e bebidas.
Para que um gene se expresse em uma clula hospedeira, necessrio que esta reconhea seus
prprios sinais de expresso. Para poder sintetizar uma protena exgena, a clula dever ler a
sequncia codificadora com seus prprios sinais de transcrio (promotor) e de traduo (stio de
ligao com o ribossomo, trmino de leitura).
O ideal construir um vetor que j contenha os genes marcadores para seleo ou
reconhecimento, os stios de restrio, uma sequncia promotora e os sinais adequados de incio e
fim da transcrio. Ao colocar a sequncia codificadora da protena, o vetor funciona como um
cassete de expresso (Figura 9.6).
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Transformao e transfeco
Existem diversos mtodos para inserir o DNA recombinante dentro da clula. Facilita-se a entrada do
DNA com algumas manipulaes, tais como a adio de CaCl 2 no meio e/ou a modificao da
temperatura. A aplicao de foras eltricas tambm aumenta as chances do DNA penetrar na clula,
ao abrir os poros da membrana (eletroporao).
Os plasmdeos atravessam a membrana celular em um processo denominado transformao,
que ocorre em determinadas condies fisiolgicas da clula hospedeira. Em se tratando de vetores
virais, a infeco da clula promove a entrada do DNA exgeno dentro da clula. Fala-se neste caso
de transfeco (transformao + infeco).
A tecnologia do DNA-recombinante est baseada em fenmenos que ocorrem em frequncias
muito baixas. A existncia de mtodos de seleo eficientes possibilita detectar e recuperar aquelas
clulas que incorporaram um gene estranho.
Associa-se o gene estranho a um marcador seletivo como, por exemplo, um gene de resistncia
a algum antibitico. Em presena deste, s podero se multiplicar e formar clones ou colnias as
clulas que incorporaram ambos os genes. Entretanto, o uso de genes de resistncia a antibiticos
considerado polmico, porque existe uma possibilidade remota dos genes serem transferidos das
bactrias transformadas para as bactrias do ambiente.
100
104
Poucos meses depois do nascimento de Dolly, o mesmo grupo do Instituto Roslin e de PPL
Therapeutics anunciou o nascimento de Polly, uma ovelha transgnica para o gene codificador do
fator IX, uma protena que falta nos hemoflicos. O fato de ter-se utilizado para gerar Dolly uma
clula diferenciada mantida em cultivo teve uma importncia enorme, porque clulas embrionrias
em cultura podem ser transfectadas e os seus ncleos transferidos para a obteno de animais
transgnicos, como Polly.
Aps a transfeco de clulas-tronco embrionrias com um gene desativado, realiza-se sua
transferncia a blastcitos, que, reimplantados, originaro animais quimricos, isto animais com
clulas de dois tipos: umas em que o gene est ativado e outras em que no est ativado porque
incorporaram o transgene.
Dos cruzamentos entre quimeras com clulas germinais portadoras do gene desativado
nascero animais homozigticos com duas cpias do gene inativo (Figura 9.10). Esta estratgia
utilizada no s para construir modelos animais com um gene inativo (knock out), como para colocar
um gene ativo (knock in). Mesmo sendo difcil de obter, um animal transgnico pode ser bem mais
interessante do ponto de vista econmico que o cultivo de clulas em biorreatores, um processo
complexo e de alto custo.
Na construo de animais transgnicos para a produo em grande escala de uma protena
recombinante, escolhe-se habitualmente um promotor que se expresse na glndula mamria, de
modo que o produto gnico aparea no leite do animal. Cabras transgnicas produtoras de fator
ativador de plasminognio (tPA), vacas produtoras de lactoferrina, somatotropina ou insulina j so
uma realidade. Chama-se Atryn o primeiro anticoagulante liberado comercialmente em 2009,
produzido a partir do leite de uma cabra transgnica pela empresa GTC Biotherapeutics.
105
A. Microinjeo.
Aps a transfeco, se implantan os ovos em fmeas receptivas (pseudogrvidas). Aqueles que incorporaram o
transgene originaro, neste caso, animais de tamanho maior (supermouse).
106
OS REBANHOS FARMACUTICOS
Algumas protenas teraputicas (somatotropina, insulina) so obtidas atualmente mediante o cultivo
de clulas animais ou de bactrias e leveduras recombinantes; no entanto, provvel que em um
futuro prximo estes agentes biolgicos sejam substitudos por mamferos transgnicos. A
modificao das tcnicas de produo interessa indstria farmacutica porque elimina as
dificuldades inerentes conduo dos bioprocessos e purificao dos produtos. Apesar do elevado
valor da inverso inicial, bastam poucos animais para se extrair uma quantidade grande de protena
recombinante, com o qual seria possvel baratear o seu preo. J existem cabras produtoras do fator
ativador de plasminognio (tPA) e vacas produtoras de lactoferrina, j prximos de ser
comercializados.
Biosidus, uma empresa argentina do Grupo de Empresas Farmacuticas Sidus, iniciou as
experincias de clonagem de bovinos em 1997. Como as dificuldades tcnicas so numerosas, muitas
tentativas tiveram que ser feitas at alcanar o xito. Este chegou em 2002, com o nascimento de
Pampa, uma vaca da raa Jersey que o primeiro clone bovino da Amrica Latina. Uma vez
dominada a tecnologia, o passo seguinte era conseguir um animal que secretasse o hormnio de
crescimento humano (somatotropina) no leite.
Com esse objetivo, se elaborou uma construo gnica que inclua o gene codificador da
somatotropina e um promotor para sua expresso no leite. Esta construo foi inserida em
fibroblastos fetais. Da fuso destes fibroblastos com ovcitos anucleados resultaram embries que
se implantaram em vacas portadoras. Em 2002, nascia Pampa Mansa, uma vaca clonada e
transgnica que um ano mais tarde comeou a produzir leite com somatotropina. Estima-se que
bastariam trs animais semelhantes para abastecer o mercado latino-americano.
A partir de fibroblastos da orelha de Pampa Mansa obteve-se uma dinastia de vacas, clones de
um clone. Em 2004, com o nascimento de Pampero, um touro transgnico resultante do cruzamento
entre Pampa Mansa e um animal reprodutor, a multiplicao dos animais passou a ser independente
da clonagem. O tambo farmacutico est completo.
Em 2005, a empresa Biosidus obteve das autoridades a autorizao para liberar um nmero
limitado de animais no meio ambiente agropecurio, em condies estritamente controladas. O
prximo passo ser a aprovao do produto para o uso farmacutico.
O projeto colocou a Argentina entre os pases que dominam esta tecnologia, juntamente com
Estados Unidos, Alemanha, Frana, Japo, Reino Unido e Austrlia. Alm da participao pioneira de
Biosidus, o tambo farmacutico demandou um investimento de US$ 7.000.000, a participao de
uma equipe multidisciplinar de 40 pesquisadores e a assessoria do CONICET (Consejo de
Investigaciones Cientficas y Tcnicas da Argentina). Biosidus contempla a ampliao do rebanho
para outras protenas teraputicas (Dinastia Patagnia produtora de pr-insulina humana, Dinastia
Portenha, produtora de hormnio de crescimento bovino).
107
108
O PROCESSO WEIZMANN
Por ser o primeiro processo fermentativo industrial a se desenvolver em condies asspticas, o
processo Weizmann considerado um marco histrico na biotecnologia industrial.
Ao longo do sculo XIX, dois acontecimentos decisivos transformaram a borracha natural em um
material estratgico para o crescimento da indstria automotora; em 1839, C. B. Goodyear descobriu
que a vulcanizao lhe conferia elasticidade e resistncia e, em 1888, J. Dunlop inventou os pneus. A
diminuio da oferta de borracha natural, proveniente do Brasil e das plantaes inglesas na Malsia,
com o correspondente aumento do preo, desencadeou uma corrida borracha sinttica.
Enquanto a Alemanha tentava sintetizar a borracha a partir de um derivado do petrleo
(butadieno), a Inglaterra explorava as possibilidades de sntese de molculas precursoras por
fermentao. Nesse contexto histrico, o qumico de origem russa Chaim Weizmann desenvolveu, na
Universidade de Manchester (1914), um processo fermentativo no qual a bactria Clostridium
acetobutilycum produz butanol (um precursor do butadieno) e acetona.
Com o incio da Primeira Guerra Mundial, a ateno da Inglaterra desviou-se da borracha para a
produo de explosivos e, especialmente, de uma plvora (cordite) base de nitrocelulose em cuja
preparao se usa acetona como solvente. Como esta era sintetizada a partir de carbonato de clcio,
uma matria-prima importada da Alemanha, a produo de acetona por via qumica se tornou
invivel, e a Inglaterra comeou a explorar a via biotecnolgica.
Recrutado pelo Comit de Munies e tendo cedido a patente do processo ao governo britnico,
Weizmann comeou a produzir acetona por fermentao microbiana do amido de milho na
Nicholson Gin Distillery (Londres). Contudo, devido guerra e falta de alimentos, o suplemento de
carboidratos acabou se tornando o fator limitante da produo.
Em 1916 os britnicos transferiram a produo para uma destilaria em Toronto (Canad), ao
tempo que era construda outra fbrica na ndia. Em 1917 comeou a funcionar uma fbrica
produtora de acetona por fermentao do milho em Indiana (Estados Unidos). Uma vez finalizada a
guerra, a acetona e o butanol continuaram a ser utilizados como solventes.
Os caminhos da cincia, da tecnologia e da poltica se cruzaram mais uma vez. Qumico e
jornalista, Weizmann chegou a ser um dos mais importantes lderes comunitrios do movimento
sionista mundial.
Em 1948, ao finalizar o mandato conferido pela Liga das Naes Gr Bretanha e a partilha da
Palestina, Weizmann foi escolhido primeiro presidente do Estado de Israel. O instituto de pesquisas
cientficas e tecnolgicas fundado em Rehovot (Israel) leva o seu nome. O processo Weizmann est
indissoluvelmente ligado histria do sculo XX.
A INDSTRIA QUMICA
A VIA QUMICA
A indstria qumica se caracteriza por produzir substncias que atendem as necessidades de outras
indstrias. Enquanto algumas empresas sintetizam os derivados petroqumicos bsicos (etileno,
propileno, butadieno), outras os transformam nos petroqumicos finais: polietileno (PE),
polipropileno (PP), policloreto de vinil (PVC), polisteres e xido de etileno. Um terceiro grupo
converter esses materiais em objetos de consumo tais como filmes, recipientes, objetos diversos
etc.
Copyright Maria Antonia Malajovich
Biotecnologia: ensino e divulgao (www.bteduc.bio.br)
MATRIA-PRIMA
COMPONENTES
APLICAES
Acar e
amido
Cana-de-acar, beterraba
aucareira, sorgo sacarino,
trigo, milho, batata, arroz
mandioca etc.
Acar, amido,
melao.
leos
vegetais
Triglicerdeos,
cidos graxos,
glicerol.
Madeira
Pinho, eucalipto.
Celulose, papel e
lignina.
110
111
cidos orgnicos
A produo de cido ctrico (4.0 x 105 toneladas/ano) depende quase exclusivamente do cultivo do
fungo filamentoso Aspergillus niger, em processos fermentativos de diversos tipos (meio slido e
cultura em superfcie; meio lquido e cultura submersa). O cido ctrico utilizado na indstria de
alimentos como aditivo (acidulante e antioxidante), na cosmtica como regulador do pH e, na
indstria farmacutica, como anticoagulante e ingrediente de tabletes efervescentes.
Em relao ao cido actico, os processos industriais modernos tambm dependem da ao
bacteriana (gneros Acetobacter, Gluconacetobacter e Gluconobacter). Com numerosas aplicaes, o
cido actico um precursor de vrias molculas intermedirias como o anidrido actico e os
acetatos ster, e de produtos como o acetato de celulose, o celofane, o acetato raiom etc. Tambm
se usa como solvente na produo de plsticos, borracha, gomas, resinas e leos volteis. A indstria
farmacutica o utiliza como acidificante.
O cido lctico obtido por fermentao bacteriana (Lactobacillus) ou fngica (Rhizopus
oryzae), sendo um importante insumo para as indstrias de alimentos e de frmacos e a cosmtica.
Tambm utilizado como monmero na sntese de cido polilctico (PLA), um polmero
biodegradvel.
O cido succnico tambm encontra aplicaes em vrias indstrias (alimentos, frmacos,
cosmtica), assim como na produo de plsticos e de materiais para a indstria automotora. Tratase de outro bloco fundamental na sntese de polmeros, resinas de ABS (acrilo-nitrilo-butadieno),
Nylon 6.6, solventes etc.
TABELA 10.2. Metablitos primrios e secundrios obtidos por fermentao e/ou bioconverso
enzimtica.
METABLITOS PRIMRIOS
EXEMPLOS
lcoois e solventes
cidos orgnicos
cido lctico, cido ctrico, cido actico, cido glucnico, cido itacnico,
cido mlico, cido tartrico, cido pirvico, cido succnico.
Aminocidos
Polissacardeos
Nucleotdeos e nucleosdeos
Vitaminas
Corantes
METABLITOS SECUNDRIOS
EXEMPLOS
112
Aminocidos
A produo industrial de aminocidos se destina nutrio humana (66%) e ao enriquecimento de
raes animais (33%) e, em grau bem menor, s indstrias farmacuticas e cosmticas (1%). O
mtodo produtivo mais antigo a extrao por hidrlise de protenas (soja, cabelos), que tem como
limitao principal a disponibilidade da matria-prima. Os outros mtodos incluem a sntese, a
fermentao e a biocatlise.
A sntese qumica apresenta o inconveniente de gerar misturas das duas formas isomricas (acilD e acil-L), representadas habitualmente como tipo mo direita" e tipo "mo esquerda". Como os
organismos vivos s assimilam L-aminocidos, estes devem ser separados por biocatlise das
misturas racmicas. A imobilizao de enzimas estereoespecficas nos biorreatores facilita a
produo industrial, reduzindo os custos de maneira significativa. Observe-se que a separao
desnecessria no caso da glicina, que no apresenta ambas as formas, e da DL-metionina, j que os
seres vivos convertem a forma D em L.
A via fermentativa conveniente para a produo de vrios aminocidos. O agente biolgico
Corynebacterium glutamicum produz cido glutmico (1,1 milho de toneladas/ano), que usado na
cozinha oriental como flavorizante (glutamato monossdico), para realar o sabor dos alimentos.
O cido L-asprtico e a L-fenilalanina so obtidos por imobilizao conjunta de Escherichia coli e
Pseudomonas dacunhae em uma coluna de fermentao, ou por uma bactria geneticamente
modificada (Escherichia coli). Ambos so os componentes do adoante no calrico Aspartame
(15.000 toneladas/ano).
Outros aminocidos cumprem a funo de aditivo em alimentos (L-cistena, 3.000
toneladas/ano), ou de complemento nutricional em raes animais (L-treonina, 50.000
toneladas/ano; L-lisina 550.000 toneladas/ano). Por outro lado, a indstria farmacutica absorve
1.000 toneladas/ano de L-arginina e 500 toneladas/ano de L-triptfano, de L-valina e de L-leucina.
Polissacardeos
Os polissacardeos de origem microbiana substituem parcialmente os espessantes e gelificantes
extrados das algas marinhas. A goma xantana (20.000 toneladas/ano), um produto de fermentao
da bactria Xanthomonas campestris, entra na composio de molhos prontos, pudins, geleias,
sorvetes, dentifrcios etc. Suas propriedades espessantes so tambm utilizadas na recuperao do
petrleo.
As dextranas (200 toneladas/ano) so obtidas por via fermentativa a partir de diversos
microrganismos. As de alto peso molecular se empregam como espessantes na indstria de
alimentos, na preparao de filmes protetores de sementes (indstria agrcola) e na composio das
emulses fotogrficas. As de baixo peso molecular se usam como plasma sanguneo artificial, para
melhorar o fluxo sanguneo em casos de traumatismos e cirurgias.
Vitaminas
Apesar da maior parte das vitaminas serem obtidas industrialmente por via sinttica ou extrativa, a
via fermentativa vantajosa nos casos da riboflavina (vitamina B 2) e do cido ascrbico (vitamina C).
Ainda a nica possvel para a cianocobalamina (vitamina B12), uma molcula complexa que,
naturalmente, no sintetizada por animais ou por vegetais. Um precursor da vitamina A, o caroteno, sintetizado pela alga Dunaliella bardawil, que consegue se desenvolver na gua salobra
em grandes tanques ao ar livre, em uma regio desrtica perto da costa do Mar Vermelho (Israel).
113
ENZIMAS
Algumas enzimas podem ser extradas facilmente dos tecidos ou dos rgos de seres vivos: as
amilases do malte da cevada; a papana da papaia; a ficina do figo, a bromelina do ltex do abacaxi.
Do estmago de sunos se separa a pepsina e do pncreas dos mesmos se obtm a pancreatina, que
uma mistura de amilases, proteases e lipases. J a renina extrada do quarto estmago de
bezerros, e a catalase, do fgado ou do sangue de bovinos.
A extrao de enzimas de origem vegetal ou animal est sujeita disponibilidade de terra e s
flutuaes das colheitas ou do abate. Por isso, a tendncia substitu-las por outras de origem
microbiana que, por serem obtidas mediante processos fermentativos em grande escala, garantem
uma produo regular de qualidade constante.
Mesmo cumprindo uma funo idntica, duas enzimas produzidas por microrganismos
diferentes podem apresentar propriedades dessemelhantes. Por exemplo, a lactase (galactosidase), uma enzima que hidrolisa a lactose, est presente em bactrias, leveduras e fungos.
No entanto, as condies timas de funcionamento diferem uma da outra: 400C, 370C e 55-600C
(temperatura); 3-4, 7,2 e 6,6 (pH). A escolha de uma enzima proveniente de um microrganismo ou de
outro depender das condies que o bioprocesso demande.
Considerando que a biodiversidade microbiana ainda comea a ser desvendada, assim como a
arte de alterar suas vias metablicas, existem grandes chances de se encontrar enzimas com
propriedades diferentes que possibilitem o desenho de processos industriais inovadores.
A otimizao de um processo industrial contempla o custo da matria-prima, o tipo de
fermentao (submersa ou em meio semisslido) e os controles necessrios para o bom
desenvolvimento do processo, como, por exemplo, o pH e a temperatura. Do ponto de vista
econmico, no vale a pena elaborar ou redimensionar esses parmetros para cada microrganismo
que produza uma enzima interessante, sendo mais proveitosa a transferncia da sequncia
codificadora dessa enzima a um dos microrganismos industriais j bem conhecidos (bactrias
Escherichia coli, Streptomyces ou Bacillus subtilis; fungos Aspergillus oryzae, Saccharomyces
cerevisiae ou Kluyveromyces). Mais de 60% da produo industrial atual de enzimas provm da
biotecnologia moderna.
O custo de uma enzima tambm depende das dificuldades tcnicas encontradas nas etapas
posteriores fermentao (separao, purificao). Em geral, as enzimas mais baratas so as
extracelulares, ou seja, as que so secretadas para fora da clula como, por exemplo, as hidrolases
(amilases, proteases e celulases). As mais caras so as enzimas intracelulares, j que, por serem
utilizadas como frmacos ou reagentes em testes de diagnstico, requerem um grau de pureza
maior.
As enzimas so insumos para outras indstrias, especialmente as de alimentos e bebidas,
raes, detergentes, analticas e farmacuticas. Estima-se que o mercado global de enzimas poder
alcanar, em 2013, um valor aproximado de US$ 7 bilhes/ano. Atualmente, o maior produtor
Novozyme, uma empresa pertencente ao grupo Novo (Dinamarca), que responde por 47% do
mercado. A empresa mantm em funcionamento vrios fermentadores de 80.000 l, contabiliza mais
de 4.000 patentes e dedica a quase totalidade de seu oramento de pesquisa e desenvolvimento
otimizao de microrganismos, produtos enzimticos e tecnologia.
BIOPOLMEROS E BIOPLSTICOS
A denominao de biopolmeros abrange dois tipos de polmeros. O primeiro inclui os que so
sintetizados pelos seres vivos, como a celulose, o amido e os leos vegetais, o segundo, os que
resultam da polimerizao de uma molcula bsica, como o cido lctico, proveniente de uma fonte
renovvel.
114
Um dos bioplsticos mais versteis o polilactato (PLA), um polister obtido por polimerizao
do cido lctico resultante da fermentao de milho. Utiliza-se como recheio de almofadas e
edredons (NatureWorks), revestimento de filmes e de papel (BASF), e material de embalagens
descartveis (Ingeo) por diversas empresas (Coca-Cola, McDonalds). Tambm est sendo
aproveitado na indstria automotora (Hyundai) e eletrnica (Samsung).
Polmeros sintetizados diretamente por microrganismos, como os poli-hidroxialcanoatos (PHAs)
e o poli-hidroxibutirato (PHB), comeam lentamente a entrar no mercado de embalagens da
indstria de alimentos. Este ltimo, por ser biocompatvel, encontrou importantes aplicaes na rea
mdica (Biopol). No interior de So Paulo, uma usina piloto relacionada com empresas do setor
sucroalcooleiro (Biagi, Balbo) j est produzindo PHB por fermentao bacteriana do acar de cana
(Biocycle). A transferncia dos genes codificadores de PHA (Ralstonia eutropha) e de PHB
(Alcaligenes eutropus) a microrganismos e plantas (canola) representa um avano das pesquisas.
Alm desses dois tipos de biopolmeros, os bioplsticos compreendem um terceiro, constitudo
por polmeros biodegradveis sintetizados a partir de uma molcula de origem petroqumica, como
alguns polisteres sintticos. Qualquer um dos dois critrios, a origem fonte renovvel como a
propriedade biodegradabilidade, basta para definir um bioplstico.
A indstria dispe atualmente de aproximadamente trinta molculas essenciais para a
construo de polmeros, tais como os cidos carboxlicos, o etanol, os aminocidos, os triglicerdeos,
o furfural, o sorbitol, o glicerol etc.
Essas molculas, de origem biolgica, possibilitam tanto a obteno de plsticos inovadores
biodegradveis como a de bioplsticos convencionais, no biodegradveis e semelhantes aos de
origem petroqumica. Entre estes: as resinas de poliuretano sintetizadas a partir de leo de soja, o
polister de origem bacteriano Sorona 3GT (DuPont, Genencor) de amplo uso na indstria txtil, do
PVC ou polietileno verde (Braskem, Tetrapak), que um polmero do etileno obtido a partir do
etanol de cana.
A produo de bioplsticos ainda est limitada pelos custos, no entanto e apesar de representar
atualmente apenas 1% do negcio de polmeros, se espera que esse valor aumente rapidamente se
os custos diminurem.
OS BIOCOMBUSTVEIS
Aproximadamente 75% da energia consumida no mundo retirada dos combustveis fsseis (carvo,
petrleo e gs natural). Considerando que as reservas so limitadas e que a queima de combustveis
fsseis a causa de vrios problemas ambientais, parece acertado buscar outras formas de extrair
energia. Uma fonte alternativa a biomassa, um recurso que, por ser renovvel, pode nos fornecer
energia de modo sustentvel.
A combusto a forma mais simples de liberar a energia da biomassa, seja esta madeira,
resduos vegetais ou excrementos secos de ruminantes. Trata-se de um procedimento rural, no
comercial.
A tecnologia atual nos oferece combustveis eficientes por fermentao da biomassa, como o
etanol ou o biogs. Existem outras possibilidades, tais como a obteno de biodiesel por
transformao qumica de leos vegetais e, futuramente, a produo de hidrognio a partir de gua,
utilizando a capacidade fotossinttica das microalgas.
Os biocombustveis contribuem para reduzir alguns dos problemas ambientais que nos afligem,
tais como a acumulao de CO2 e outros gases de efeito estufa. A grande vantagem da biomassa
sobre os combustveis fsseis que libera uma quantidade de CO2 igual que absorveu durante o
seu crescimento em um perodo recente, enquanto a quantidade de CO2 liberada pelos combustveis
fsseis foi removida do ambiente h milhes de anos.
115
BIOMASSA AMILCEA
BIOMASSA SACARINA
Hidrlise enzimtica
Fermentao
Destilao
ETANOL
116
BIOMASSA CELULSICA
O ETANOL
A produo por via fermentativa
A produo de etanol pela via biotecnolgica envolve a ao fermentativa de leveduras sobre um
substrato adequado: cana-de-acar, beterraba aucareira, sorgo aucareiro, milho. No Brasil, a
matria-prima a cana-de-acar (Figura 10.2).
FIGURA 10.2. A produo de etanol a partir da cana-de-acar.
LAVOURA
Transporte
CANA-DE-ACAR
Triturao e extrao
CALDO, GARAPA
OU MOSTO
BAGAO Combustvel
LEVEDURAS
Reaproveitamento
Fermentao
MELAO
ACAR
CO2
VINHO
Destilao
FLEGMA
VINHAA Fertilizante
Retificao
ETANOL HIDRATADO
Deshidratao
ETANOL ANIDRO
117
118
O2
ACETATO
Aerobiose
H2O
Anaerobiose
CO2
H2O
CH4
CO2
BIOGS
MATRIA-PRIMA
MOLCULAS COMPLEXAS
Microrganismos fermentativos
MOLCULAS SIMPLES
Bactrias acidognicas
BIODIGESTOR
CIDOS E LCOOIS
Bactrias acetognicas
ACETATO
Bactrias metanognicas
BIOGS
120
A utilizao do biogs
O biogs est formado por 50-65% de metano e 35-50% de dixido de carbono, com traos de gs
sulfdrico (corrosivo), nitrognio, oxignio e hidrognio. O poder calorfico menor que o do gs
natural, um combustvel fssil cuja composio inclui metano, etano, propano e butano (Tabela
10.3).
A primeira fbrica de biogs comeou a funcionar em 1859 em Bumbai (ndia). A iniciativa
alcanou bastante sucesso de modo que, em 1980, a ndia contava com 150.000 biodigestores.
Talvez seja esta uma das razes pelas quais se considere a digesto anaerbia como um processo
biotecnolgico adequado a pequenas cidades e comunidades rurais. No entanto, a produo de
biogs pode alcanar outra dimenso se for encarada como uma tecnologia moderna que visa a
produo de calor e de eletricidade (Figura 10.5).
Em 1995, quando contabilizava mais de cinco milhes de pequenos biodigestores rurais, a China
teve o empenho de construir reatores tecnologicamente avanados, para o tratamento de rejeitos
urbanos e a gerao de eletricidade. A Dinamarca o lder mundial na produo de biogs, estando
bem desenvolvida a tecnologia em outros pases como os Estados Unidos, a Alemanha, a Frana, o
Japo e a Sucia.
Na Amrica Latina, algumas pequenas comunidades contam com geradores de biogs que as
abastecem com energia suficiente para cozer os alimentos ou alimentar um motor. Contudo, nos
ltimos anos surgiram vrios projetos ambiciosos de explorao do potencial existente nos aterros
sanitrios urbanos (Olavarra, Argentina; Bandeirantes, Nova Iguau e Petrpolis, Brasil; Santiago,
Chile; Monterrey, Mxico; Maldonado, Uruguai). O tratamento dos rejeitos agroindustriais,
especialmente da indstria aucareira e da suinocultura, tambm uma fonte considervel de
biogs. Cuba conta com mais de 100 fbricas produtoras de biogs.
GS
Butano
28.000
Gs natural
7.600
Propano
22.000
Biogs
5.500
Metano
8.500
Gs de cidade
4.000
GS
PLANTAS PURIFICADORAS
E DE ARMAZENAMENTO
ENERGIA TRMICA
ENERGIA ELTRICA
COMBUSTVEL
TRANSPORTE AUTOMOTOR
121
O BIODIESEL
A transesterificao
O biodiesel um combustvel composto por steres (etlicos ou metlicos) produzidos na reao
qumica de transesterificao entre leos vegetais e lcool (etanol ou metanol), em presena de um
catalisador inorgnico ou enzimtico (lpases) (Figura 10.6).
FIGURA 10.6. A reao de transesterificao.
H2C O CO R
HC O CO R
CH2OH
+ 3R OH
H2C O CO R
Triglicerdeos
HCOH
3R O CO R
CH2OH
lcool
Glicerol
steres
A reao deixa como subproduto o glicerol (5 a 10% do produto bruto), que aproveitado por
algumas indstrias (alimentos, cosmtica, medicamentos). Aumentar a produo de biodiesel
significa ampliar o leque de aplicaes porque, diferente do bagao de cana, o glicerol gera uma
substncia txica (acrolena) quando queimado.
O biodiesel fornece entre 88 e 95% da energia do diesel, mas quando misturado com o diesel
convencional (B1 com 1% de biodiesel a B20 com 20% de biodiesel) aumenta a qualidade do
combustvel, diminuindo a emisso de partculas poluentes e gases txicos na atmosfera.
A produo de biodiesel
A produo de biodiesel est localizada principalmente na Unio Europeia (60%) e, em menor parte,
nos Estados Unidos, na China, na Indonsia e na Malsia. A matria-prima variada: soja nos Estados
Unidos, canola na Unio Europeia e no Canad, soja e girassol na Argentina, dend na sia. No Brasil,
tem-se experimentado soja, mamona, babau, dend, girassol, milho, amendoim, pinho-manso etc.
A implementao do Programa Nacional de Produo e Uso de Biodiesel (PNPB) estimula a
produo sustentvel, enfatizando a incluso social e o desenvolvimento regional. Desde janeiro
2010, adiciona-se no Brasil 5% de biodiesel ao diesel convencional, estimando-se que a proporo
aumente a 20% at 2020.
Restam alguns pontos a considerar, especialmente em relao utilizao de matrias-primas
como a mamona, com o intuito de estimular o pequeno agricultor. Em princpio, o biodiesel
carbono-neutro. No entanto, diferente do etanol de cana, o sistema produtivo seria carbononegativo, quando se leva em conta a energia necessria para adubao e irrigao da terra, a
movimentao da maquinaria agrcola, o armazenamento e transporte da matria-prima e dos
produtos etc.
Do ponto de vista energtico, os sistemas produtivos mais eficientes seriam os associados aos
complexos agroindustriais (soja, milho, girassol), embora apresentem o grave defeito de desviar para
a produo de energia as matrias-primas de alimentos e raes.
122
PERSPECTIVAS
Cunhado recentemente, o conceito abrangente de biorrefinaria se refere a um complexo industrial
com instalaes para o processamento biotecnolgico, qumico, fsico e trmico da matria-prima
renovvel, transformando-a em numerosos intermedirios qumicos e bioqumicos que alimentaro
um conjunto de linhas de produo muito diversificado.
A primeira gerao de biocombustveis abrange o etanol (acar de cana-de-acar ou
beterraba, amido de milho) e o biodiesel (leos vegetais). A segunda gerao de bioetanol utilizar
biomassa lignocelulsica proveniente dos resduos agroindustriais, tais como bagao e folhas de
cana, palha e sabugo de milho, serraduras e aparas de madeira etc.
A maior dificuldade reside na prpria estrutura da matria-prima lignocelulsica. A celulose
(polmero de hexoses) e a hemicelulose (polmero de hexoses e de pentoses) se encontram
circundadas por lignina, uma substncia de suporte das plantas, sendo necessrio um prtratamento que as separe, possibilitando a hidrlise enzimtica e a liberao de acares
fermentescveis (hexoses e pentoses).
Equipamentos com o design apropriado e enzimas celulolticas (celulases e hemicelulases) para
uso industrial j esto a caminho. Algumas indstrias funcionam experimentalmente na Sucia, na
Espanha, na Dinamarca, no Canad e nos Estados Unidos. Estima-se que o Brasil poder contar com
uma instalao piloto em 2012. Tambm se investe em processos termoqumicos em que o gs de
sntese obtido por combusto da biomassa convertido em etanol, por catlise ou ao microbiana.
Em relao ao biodiesel, h bastante expectativa no uso de algas para a produo de
hidrocarbonetos e triacilglicerdeos, porque permitiriam dedicar terras frteis e gua doce para a
produo de alimentos. A adio de bioquerosene ao querosene diminuiria os custos do combustvel
de avio. Recentemente instalada no interior paulista, a empresa norteamericana Solazyme espera
obter, at o fim de 2013, 50 milhes de toneladas de leo a partir de algas.
Em outra linha de trabalho (biologia sinttica), e com bastantes possibilidades de sucesso, se
modifica o metabolismo da levedura de modo a direcion-lo para a produo de molculas
interessantes para a rea de energia (biodiesel) e de qumica fina (Amyris do Brasil, Crystalsev,
Santelisa, Vale, Boa Vista). Com a liberao comercial no Brasil de uma levedura transgnica que
sintetiza farneseno, um precursor do biodiesel, a partir de cana de acar, se espera que a partir de
2011 sejam fabricadas 2 milhes de toneladas do biocombustvel.
123
124
O DESENVOLVIMENTO SUSTENTVEL
Qual o impacto das atividades humanas sobre o meio ambiente? Que legado deixaremos para as
prximas geraes? a partir destas perguntas que emerge o conceito de desenvolvimento
sustentvel, definido como a capacidade de atender s necessidades do presente sem comprometer
a capacidade das geraes futuras em atender suas prprias necessidades (Informe Brtland, 1987).
O desenvolvimento sustentvel depende das aes realizadas nas reas econmica, social e
ambiental. Este o consenso alcanado ao longo de quase duas dcadas e de vrias conferncias
internacionais (Rio de Janeiro, 1992, e Agenda 21; Kyoto, 1997; Johanesburgo, 2002; Copenhague,
2009; Cancn, 2010; Durban, 2011). Contudo, os relatrios publicados em 2007 pelo Painel
Intergovernamental sobre Mudanas Climticas (IPCC, da sigla em ingls) das Naes Unidas
apontaram a responsabilidade do homem no futuro do planeta, mostrando que no podemos seguir
protelando aes concretas de proteo do meio ambiente.
Qual a contribuio das biotecnologias para o desenvolvimento sustentvel? Em relao
economia, as biotecnologias diminuem os custos no s da matria-prima como da produo
industrial, com processos e produtos novos e/ou de maior valor agregado. Na rea social, se espera
que o desenvolvimento de novas plataformas tecnolgicas possibilite a conservao ou a criao de
empregos. E na rea ambiental, as biotecnologias cumprem um importante papel na preveno,
remediao e monitoramento da contaminao.
AS TECNOLOGIAS LIMPAS
Lentamente, a sociedade comea a aceitar que prefervel no contaminar a ter que desenvolver
mtodos para limpar o ambiente. No contexto das chamadas "biotecnologias brancas", vrias
tecnologias limpas podem substituir outras mais poluentes, ajudando tambm a reduzir o volume de
resduos domsticos, agrcolas e industriais.
A SUBSTITUIO DE PROCESSOS INDUSTRIAIS
A primeira opo para diminuir a poluio a tecnologia enzimtica, porque comporta a substituio
de alguns processos e produtos industriais por outros menos agressivos ao meio ambiente.
Diferentemente dos catalisadores no biolgicos, as enzimas so especficas, no txicas e
biodegradveis. Como agentes biolgicos, as enzimas tornam os processos produtivos mais limpos e
seguros, diminuindo o consumo de energia e a quantidade de resduos. O desenvolvimento de
enzimas ativas a altas temperaturas, em solventes no aquosos e em slidos, poder futuramente
expandir suas aplicaes.
Aplica-se a tecnologia enzimtica em setores muito diversos, alguns dos quais
reconhecidamente poluentes, tais como as indstrias de alimentos, raes, detergentes, txteis,
papel e celulose, couros etc. Nos curtumes, por exemplo, o uso de enzimas reduz em 40% o consumo
de derivados do enxofre, ao tempo que produz couro de melhor qualidade. A introduo de at oito
enzimas nos detergentes evita a fervura das roupas, diminuindo o consumo de energia e facilitando a
retirada das manchas.
Os plsticos representam uma frao significativa (20% v/v) do lixo dos pases industrializados,
sendo a maior parte proveniente das embalagens convencionais da indstria de alimentos. Alm de
permanecerem por longo tempo na natureza, sua fabricao envolve uma matria-prima no
renovvel (petrleo) e um processo muito poluente que gasta uma quantidade grande de energia.
Em curto ou mdio prazo, esses plsticos convencionais podero ser substitudos por polmeros
de origem bacteriana ou vegetal, compostveis em poucos meses. Uma das vantagens das
embalagens bioplsticas de alimentos que degradam junto com os restos de comida, dispensando
as etapas de triagem e limpeza.
A indstria de papel e celulose outro caso a considerar. O Brasil conta com 1,5 milho de
hectares de florestas plantadas, basicamente, com eucaliptos (60%) e pinos (30%). A atividade
industrial gera 100.000 empregos diretos em 450 municpios, e as exportaes alcanam o valor de
US$ 2,8 bilhes.
A madeira est composta por celulose, hemicelulose e lignina. Aproximadamente 90% desta
ltima eliminado mediante um tratamento a altas temperaturas, realizado em meio alcalino. A
lignina restante (10%) confere uma cor escura caracterstica ao produto resultante, ou pasta Kraft,
que utilizada na fabricao de carto e papel pardo. O branqueamento requer um tratamento
especfico com oxignio e cloro, formando-se derivados clorados txicos. Um procedimento
alternativo o biopulping, em que uma enzima (xilanase) degrada o xilano da hemicelulose,
facilitando a eliminao da lignina que lhe est associada (Figura 11.1).
O sequenciamento do genoma do eucalipto facilitar o melhoramento da qualidade da madeira,
especialmente visando aumentar a proporo celulose/lignina em rvores de crescimento rpido. O
sequenciamento do genoma do fungo Phanerochaete chrysosporium ("podrido branca") revelou a
existncia de mais de 240 genes codificadores de enzimas extracelulares que esto envolvidas na
degradao de carboidratos. Este fungo o mais eficiente na degradao da madeira, sendo utilizado
tambm na eliminao de numerosos poluentes de origem orgnica, assim como no branqueamento
da polpa de papel e de txteis.
FIGURA 11.1. A indstria de papel e de celulose.
O branqueamento da pasta Kraft admite tratamentos qumicos (cloro) e biolgicos (xilanase); estes ltimos
diminuem a carga poluidora do efluente.
MADEIRA
Lignina + celulose + hemicelulose
Extrao alcalina a alta temperatura
Lignina (90%)
PASTA KRAFT
Lignina (10%) + celulose + hemicelulose
POLPA BRANCA
EFLUENTE
126
EFLUENTE
Alm dos fertilizantes agrcolas, outra das causas de liberao excessiva de fsforo no ambiente
a criao intensiva de animais. Os porcos e as aves no conseguem metabolizar o fitato, um
derivado presente nas raes, mas a complementao destas com uma enzima (fitase) tem um efeito
importante no ambiente, porque ao reduzir em mais de 30% a quantidade de fsforo excretado,
diminui a contaminao dos lenis de gua. A fitase produzida industrialmente por um
microrganismo geneticamente modificado. A genmica poder vir a dar um novo impulso a esta rea
de vital importncia.
Manejo integrado de pragas vs agrotxicos
Prticas agrcolas como a utilizao de variedades selecionadas e a rotao dos cultivos reduzem
substancialmente a necessidade de aplicar pesticidas sintticos. O controle biolgico d um passo
alm, visando a preservao das plantaes e a salvaguarda da produo de alimentos mediante a
substituio dos praguicidas qumicos por alternativas biolgicas, tais como bactrias, fungos e vrus
entomopatognicos. Observe-se que em seu clssico livro A Primavera Silenciosa, de 1972, a
pesquisadora Rachel Carson j alertava para os danos causados pelo uso do DDT, recomendando a
procura de solues de cunho biolgico.
Anos mais tarde, contamos com numerosos exemplos de substituio de pesticidas por agentes
biolgicos especficos (Tabela 11.1). Um deles a aplicao, nas lavouras de soja, de partculas de
baculovirus, um organismo que normalmente infecta e mata as lagartas (Anticarsia gemmatalis) que
parasitam essa planta. Outro a pulverizao de esporos do fungo Metarhizium anisopliae para lutar
contra a cigarrinha-da-folha-da-cana-de-acar ou a broca-dos-citros.
Contudo, o exemplo mais conhecido dessa tecnologia verde envolve a bactria do solo Bacillus
thuringiensis ou Bt. Esta utilizada como pesticida agrcola h mais de trinta anos, sem que suas
toxinas tenham causado danos s pessoas, vida silvestre ou maioria dos insetos benficos. Com o
desenvolvimento da engenharia gentica, os genes correspondentes foram transferidos a vrias
plantas (milho, algodo etc.) que agora produzem diretamente a toxina inseticida.
TABELA 11.1. Alguns exemplos de utilizao de agentes biolgicos como pesticidas.
AGENTE BIOLGICO
PRAGA COMBATIDA
Fungo Metarhizium
anisopliae
Diversas, florestais.
128
Por outro lado, a decomposio in natura do lixo nos aterros sanitrios cria uma zona de anaerobiose
onde se produz biogs. Este liberado na atmosfera, onde contribui para o efeito estufa e o
aumento da temperatura, afetando o clima.
O TRATAMENTO DAS GUAS RESIDUAIS
O esgoto est constitudo por excrementos (fezes e urina), guas de uso domstico (banho, lavagem
de roupas etc.) e, eventualmente, alguns dejetos de origem industrial. Ao ser liberado diretamente
nos cursos de gua, o esgoto desestabiliza as populaes microbianas, que se multiplicam
rapidamente consumindo o oxignio dissolvido e ocasionando a morte de peixes e crustceos.
FIGURA 11.2. A compostagem.
LIXO ORGNICO
AR
GUA
FONTE DE NITROGNIO
CALOR
CO2
GUA
OUTRAS SUBSTNCIAS
COMPOSTO
ESGOTO
Fossas spticas
Gradeamento
Lagoas de oxidao
Tanque de areia
EFLUENTE
Tanque de
sedimentao
Tanque de
sedimentao
EFLUENTE
Lodo
Lodo ativado (2 )
Lodo
EFLUENTE
Biodigestor
anaerbico
RESDUO
SLIDO
Lodo
130
131
EXEMPLO
Inorgnicos
Metais (cdmio, mercrio, prata, cobalto, chumbo, cobre, cromo, ferro), istopos
radiativos, nitratos, nitritos, fosfatos, cianetos, asbestos.
Orgnicos
Gasosos
Gases: dixido de enxofre (SO2), dixido de carbono (CO2), xidos nitrosos (NOx), metano
(CH4).
Compostos volteis: clorofluorocarbonetos (CFCs), compostos orgnicos volteis (VOCs).
132
Uma forma de biorremediao a produo de biomassa especfica no local contaminado (in situ).
Do ponto de vista prtico, duas estratgias so possveis:
o
o
Microrganismos
selecionados
Microrganismos geneticamente
modificados (em sistema fechado)
MEIO CONTAMINADO
Suplemento de nutrientes
MEIO DESCONTAMINADO
134
Os problemas que exigem biorremediao so muito pontuais, de modo que cada um deles
demanda um tratamento particular. Como no h um produto a patentear, mas um servio a prestar,
a tecnologia est em mos de organizaes governamentais ou de pequenas firmas que agem
localmente.
UM EXEMPLO: OS VAZAMENTOS DE PETRLEO
Um dos mais srios problemas de contaminao ambiental o derramamento de petrleo nos
mares, devido a acidentes notrios (Prestige, Exxon Valdez, Torrey Canyon, Amoco Cadiz, Braer and
Sea Empress, British Petroleum) e a situaes blicas (Guerra do Golfo). As manchas de leo
despejadas no mar contm compostos txicos que representam uma ameaa para a ecologia
marinha e costeira, afetando todas as formas de vida aqutica e constituindo um risco para a sade
do consumidor.
A formao de carvo e petrleo nas profundezas da terra possvel porque, em condies
anaerbias, tanto a lignina como os hidrocarbonetos so compostos qumicos estveis. Porm, em
condies aerbias, ambos so degradados pelos microrganismos do ambiente. O petrleo
derramado no mar flutua na superfcie, onde os componentes volteis evaporam rapidamente. O
que no recuperado pelo homem, se dispersar com o movimento das ondas, permanecendo em
alto-mar ou sendo levado at a costa.
O petrleo derramado ser degradado pelos microrganismos naturalmente presentes no
ambiente marinho, geralmente pobre em nitratos e fosfatos. Por isso, devem-se acrescentar
nutrientes aos dispersantes qumicos (detergentes) ou s espumas de limpeza das rocas da costa.
Estima-se que, at o momento, o solo de mais de 30.000 stios contaminados com petrleo,
proveniente de vazamentos de tanques de armazenamento, tenha sido tratado por biorremediao.
Uma das primeiras patentes de um ser vivo corresponde a uma bactria engenherada projetada
para degradar alguns componentes do petrleo (Chakrabarty, 1971). Porm, o uso deste tipo de
bactrias no teve sucesso na remoo do petrleo derramado em alguns acidentes, como o do
navio Exxon Valdez no Alaska (1989). As pesquisas atuais visam preferentemente os microrganismos
ambientais, especialmente Alcanivorax borkumensis, uma bactria capaz de metabolizar 70% dos
compostos do petrleo, especialmente os de baixo peso molecular. O sequenciamento de seus 2.755
genes, completado recentemente, dar novas informaes sobre suas rotas metablicas e seus
requerimentos de fsforo e de nitrognio.
A RECUPERAO DE RECURSOS NATURAIS
Os processos biolgicos tambm so utilizados para a extrao de petrleo e de metais (cobre, ouro,
urnio).
O PETRLEO
Na extrao de petrleo, tcnicas especiais (EOR, do ingls enhanced oil recovery) envolvem o uso de
polmeros de origem microbiana (xantana), para aumentar a viscosidade e facilitar o seu
bombeamento.
A introduo direta dos microrganismos no poo (MEOR, do ingls microrganism enhanced
oil recovery) parece menos interessante do ponto de vista econmico, mas isso pode mudar se o
petrleo comear a se esgotar.
135
OS METAIS
A extrao de metais solubilizados nas cidas e escuras guas do Rio Tinto (Andaluzia, Espanha) data
do domnio romano; abandonadas durante sculos, as minas foram exploradas a partir do sculo XIX
por uma empresa inglesa, hoje australiana. Em 1947, com o isolamento de bactrias quimiotrficas
do gnero Thiobacillus mostrou-se que a acidificao das guas e a consequente solubilizao dos
metais eram o resultado no s de uma ao qumica, mas tambm de uma ao bacteriana.
As bactrias transformam os sulfetos metlicos insolveis em sulfatos solveis, mediante uma
reao de oxidao que libera a energia necessria para sua reproduo e crescimento. A fixao de
dixido de carbono fornece o carbono necessrio para a sntese dos componentes celulares e os
requerimentos se limitam ao oxignio e a pequenas quantidades de nitrognio e fsforo.
A biolixiviao se aplica especialmente extrao de cobre, ouro, zinco, nquel e cobalto. A
tecnologia relativamente simples e requer pouca inverso, sendo adaptada aos pases em
desenvolvimento. Na Amrica Latina, se usa a biolixiviao para a extrao de cobre (Chile, Mxico e
Peru) e de ouro (Brasil, Chile e Peru).
A BIOMINERAO
Os Andes chilenos guardam as maiores reservas de cobre do planeta. Na poca pr-colombiana, as
culturas Tiahuanaco e Inca o utilizaram na produo de bronze, uma liga de cobre e estanho. Durante
o perodo colonial, a produo de cobre se manteve baixa, mas entre 1820 e 1900 extraram-se dois
milhes de toneladas. Ao finalizar o sculo XIX, as jazidas com alta concentrao de cobre
comearam a dar indcios de esgotamento.
No sculo XX, os consrcios internacionais que dominavam a tecnologia necessria para a
extrao do cobre em baixas concentraes assumiram o controle da indstria do cobre (Braden
Copper Co., Kenecott Corporation, Chile Exploration Company). Segue-se um processo de
chilenizao que culmina em 1971 com a nacionalizao das principais minas de cobre.
Ainda hoje, o Chile o maior produtor de cobre do mundo, com 5.700 toneladas mtricas que
representam 42% da produo de cobre mundial (2008). Atualmente, 36% da produo de cobre do
pas est em mos da Codelco (do espanhol, Corporacin Nacional del Cobre), uma empresa estatal
criada em 1976 e que emprega 16.000 pessoas. O resto produzido pelo setor privado.
As primeiras experincias de biolixiviao foram realizadas entre 1950 e 1980 em Rio Tinto
(Espanha), Cananea (Mxico) e Toromocho (Peru). A explorao da mina de Pudahuel (Chile,
Codelco) com tecnologia nacional de biolixiviao comeou na metade da dcada de 1980. A biohidrometalurgia se estendeu rapidamente e j se encontram em funcionamento no Chile os
primeiros estabelecimentos que extraem o cobre exclusivamente por biolixiviao (Cerro Colorado,
Quebrada Blanca).
As operaes so especialmente apropriadas para as minas de baixa qualidade ou
semiesgotadas, assim como para a recuperao do cobre nos refugos existentes. A oxidao
biolgica ocorre geralmente em amontoados e pilhas, recuperando-se entre 75% e 90% do cobre em
perodos que oscilam de 6 a 12 meses e a um custo muito baixo. Atualmente, 5% da produo de
cobre chilena depende de biolixiviao.
Do desenvolvimento da biominerao participaram universidades e institutos de pesquisa, alm
do setor produtivo, com apoio do governo e do PNUD (Programa das Naes Unidas para o
Desenvolvimento). As pesquisas atuais contemplam o uso de microrganismos termoflicos
(Sulfobolus) e a otimizao do processo de bio-oxidao.
136
Fundada em 2002 por Codelco e Nippon Mining & Metals Co. Ltd., a empresa BioSigma
desenvolve estudos microbiolgicos e genmicos, assim como tecnologias para a produo de
biomassa. Recentemente, a empresa registrou nos Estados Unidos uma patente descrevendo um
mtodo para modificar geneticamente bactrias extremfilas do gnero Acidithiobacillus,
encontradas no minrio de cobre.
O DIAGNSTICO DE CONTAMINAO AMBIENTAL
O diagnstico de contaminao ambiental exige o monitoramento da gua, do ar e do solo. As
tecnologias abrangem o uso de indicadores biolgicos, de tcnicas imunolgicas e genticas e de
biossensores.
INDICADORES BIOLGICOS
Estes so plantas e animais capazes de acumular metais pesados e poluentes orgnicos persistentes.
Determinando diretamente a concentrao do contaminante em um organismo especfico, podemos
avaliar a contaminao ambiental. Uma avaliao indireta pode ser obtida a partir de outras
variveis, tais como o nmero de plantas e de espcies microbianas, o nmero de indivduos nessas
espcies etc.
TCNICAS GENTICAS
Estas se aplicam na identificao das populaes microbianas. Como ainda no sabemos cultivar em
laboratrio a maior parte dos microrganismos do ambiente, uma boa parte da biodiversidade
microbiana permanece desconhecida. A tecnologia do DNA facilita a identificao dessas espcies em
funo das sequncias gnicas correspondentes ao RNA ribossmico (rRNA de 16S) e tambm ajuda
a monitorar as mudanas nas comunidades microbianas utilizadas na remoo de poluentes, de
maneira a detectar qualquer variao ambiental e restaurar rapidamente as condies timas do
sistema. Microarrays adequados avaliam a expresso dos genes em uma linhagem ou uma
comunidade microbiana em relao a um agente ambiental (genossensores).
TCNICAS IMUNOLGICAS
Estas utilizam anticorpos especficos, marcados ou associados a enzimas. As tcnicas
imunoenzimticas, cujos resultados podem ser apreciados simplesmente por uma mudana de cor,
resultam especialmente apropriadas para os testes de campo. Pouco a pouco esto substituindo os
testes tradicionais que, alm de serem lentos, exigem um equipamento complexo, como os testes de
coliformes na gua.
Imunoensaios de diversos tipos permitem o monitoramento contnuo, automatizado e barato de
pesticidas como o dieldrin, o parathion e os PCBs.
BIOSSENSORES
Estes combinam diferentes componentes biolgicos e eletrnicos imobilizados em um substrato,
geralmente sob a forma de um chip. Alguns so muito seletivos, outros so sensveis a um amplo
espectro de substncias.
137
Substrato
Membrana
Biodetector imobilizado
138
No Novo Mundo e ligado ao trfico de escravos, deu-se incio ao ciclo da agricultura das
plantaes, com o cultivo de plantas produtoras de fibras (algodo, juta) e de borracha (caucho), de
acar (cana-de-acar), de leo (amendoim, palma), de frutos (banana), de substncias
estimulantes (ch, caf, cacau) etc. Nesse marco histrico se definem claramente algumas das
caractersticas da agricultura moderna, que visa satisfazer as necessidades dos consumidores no s
em relao produo de alimentos, como tambm de insumos industriais.
Em relao aos animais a histria segue um curso parecido, comeando na sia com a
domesticao do cachorro, no final do paleoltico. Entre 8.000 e 7.000 a.C., foram domesticadas a
cabra e a ovelha (Mesopotmia), o boi e o zebu (Mesopotmia, Egito), o porco (China, Europa) e o
gato (Mediterrneo). A domesticao do cavalo ocorreria bem mais tarde (Ucrnia, 4.000 a.C.). No
continente americano, bem antes da chegada dos europeus, as populaes do continente americano
mantinham criaes de lhamas, alpacas, vicunhas, perus e pres.
Aps a conquista do Novo Mundo, os europeus levaram para o continente seus animais
domsticos: cavalos, vacas, porcos e cachorros. Estes se multiplicaram rapidamente, causando
grande devastao na flora local. As grandes plancies se tornaram um lugar ideal para a criao de
gado.
FIGURA 12.2. Distribuio da produo agrcola (gros e cereais, pradarias e pastagens, cultivos
diversos) na rea habitvel do planeta.
EXEMPLOS
Cereais
Plantas proteaginosas
Razes e tubrculos
Plantas oleaginosas
Frutas e hortalias
140
141
1980
2000
2011
2030
2050
4,4
6,1
8,3
9,3
PLANTAS INDUSTRIAIS
Biocombustveis
Fibras txteis
leos e gorduras
Essncias e fragrncias
Ltex
Ceras
Carnaba, jojoba.
Resinas
Blsamos e gomas.
Especiarias
Taninos
Tinturas
142
Segundo a Food and Agriculture Organization (FAO), para responder s necessidades da populao, a
produo de alimentos dever aumentar em 60%, nos prximos 30 anos. Considerando que 90% das
pessoas vivero na faixa intertropical, onde est situada a maioria dos pases em desenvolvimento, a
falta de alimentos poder se agravar.
Em parte porque, salvo algumas excees significativas (ch, caf, cacau, banana etc.), os
alimentos se consomem no lugar mesmo onde so produzidos. E, tambm, porque ir aumentar o
nmero de pessoas que em vez de produzir alimentos dever compr-los, em funo da tendncia
migratria para as grandes cidades.
Embora j tenham aparecido sinais de eroso e de esgotamento do solo em vrios lugares, a
expanso da fronteira agrcola parece improvvel. Boa parte da terra no utilizada se encontra em
regies pouco frteis, distantes, carentes de infraestrutura ou cobertas por florestas. Sua ocupao
aceleraria a degradao de ecossistemas com perda de biodiversidade e risco de apario de
doenas.
Dois grandes desafios aguardam a humanidade: aumentar a produtividade dos sistemas
agrcolas e reduzir a desigualdade de acesso aos alimentos. Se, por um lado, o desenvolvimento
tecnolgico indispensvel, a histria dos ltimos anos mostra que, sem mudanas sociais e
polticas, no haver soluo para o problema da fome.
AS PLANTAS COMERCIAIS
A produo de insumos
Vrias plantas so cultivadas e comercializadas, s vezes internacionalmente, como matria-prima
para diversas indstrias (Tabela 12.3). Assim como o ouro, a carne, o petrleo e o gs natural, os
gros so considerados commodities, isto , produtos equivalentes independentemente do produtor.
Os preos so fixados em mercados futuros que estabelecem a quantidade e a qualidade da
commodity a ser comercializada.
De todas as plantas industriais, a soja merece uma ateno especial. Nos ltimos anos, o seu
cultivo alcanou um enorme sucesso comercial que pode ser atribudo extraordinria versatilidade
de seus produtos.
O gro e os brotos podem ser consumidos diretamente ou entrar como farinha na composio
de pes, doces, bebidas, massas, biscoitos etc. Os gros fermentados se utilizam na culinria oriental
(mis, tempeh).
A frao proteica do gro substitui a protena de origem animal (carne de soja) e usada na
elaborao de produtos dietticos, pastas e cremes, massas, sucrilhos, comida de bebs, bebidas etc.
A torta de soja tambm includa nas raes animais. Mas, por outro lado, essa frao proteica entra
na composio de adesivos, reagentes analticos, colas de madeira, emulso asfltica, produtos de
limpeza, cosmticos, substitutos de couro e plsticos.
O leo extrado do gro usado para cozinhar e como condimento para saladas, entrando na
composio de molhos, maioneses, coberturas de bolo, bebidas, pats e margarinas. Utiliza-se
tambm como anticorrosivo e antiesttico, entrando na composio de agentes dispersantes e
antiespumantes, selantes, cosmticos, madeirite, corantes e tintas. Atualmente, 80-90% do leo de
soja produzido provm de culturas transgnicas.
Assim como a soja, outras plantas apresentam um espectro de aplicaes de amplido
equivalente na alimentao e na indstria. No causa surpresa o fato de que os primeiros cultivos
transgnicos a serem comercializados correspondam a quatro das plantas industriais: a soja, o milho,
o algodo e a canola.
143
AS PLANTAS MEDICINAIS
At o momento, h identificadas cerca de 20.000 espcies de plantas medicinais. Muitas delas
representam ainda o nico recurso possvel para 80% da populao rural, que no tem acesso aos
medicamentos comercializados.
Em alguns casos, o princpio ativo das plantas tem sido identificado e sintetizado quimicamente.
o caso bem conhecido do cido acetilsaliclico da frmula da aspirina, cujo efeito comparvel ao
do cido saliclico extrado da casca do salgueiro que, desde a Antiguidade, se administra em chs e
poes, como analgsico e antitrmico.
A metade das drogas medicamentosas consumidas atualmente extrada de plantas silvestres
(no cultivadas). Esses medicamentos derivam de 250 espcies de plantas, que representam 0,1%
das 250.000 plantas vasculares.
A procura por novos medicamentos comea pela coleta das plantas e a extrao de substncias
qumicas que se submetem a testes de atividade biolgica. Encontrar um princpio ativo pode
significar altos lucros, embora s chegue ao mercado um em cada 10.000 produtos testados. Entre os
fitoqumicos bem-sucedidos esto: a diosinina (produo de anticoncepcionais), a vincristina e a
vinblastina (medicamentos anticancerosos), a morfina (anestsico) e o curare (relaxante em
cirurgias).
A BIODIVERSIDADE AMEAADA
A EROSO GENTICA
A perda de biodiversidade acarreta a perda de variao gentica (eroso gentica). Os dados so
estarrecedores: 11 milhes de Ha/ano de florestas destrudas; avano da desertificao em 27
milhes de Ha/ano; desapario de 30 a 300 espcies por dia. A destruio dos ecossistemas, a
diminuio do nmero de espcies existentes e a perda de variabilidade gentica so danos
irreparveis; para avaliar sua gravidade basta considerar que, para o melhoramento gentico de uma
linhagem cultivada, preciso recorrer aos genes das variedades silvestres.
A ameaa da eroso gentica aparece claramente em relao s plantas alimentcias, um
nmero restrito de cultivos, uniformizados em funo das prticas agrcolas modernas. No incio do
sculo XX existiam, na ndia, mais de 30.000 variedades nativas de arroz, das quais provavelmente
no restam hoje mais de cinquenta.
Tambm preocupante o futuro das plantas medicinais, muitas delas silvestres, porque as
melhores plantas so as primeiras a serem colhidas, enquanto as restantes ficam no terreno,
produzindo as sementes que daro origem s prximas geraes. Este tipo de seleo negativa
contribui para a eroso gentica das espcies.
A EXPANSO DO AGRONEGCIO
Por enquanto, as plantas geneticamente modificadas se limitam a um nmero reduzido de espcies e
poucos traos, principalmente tolerncia a herbicidas e resistncia a insetos. A globalizao dos
cultivos de plantas geneticamente modificadas traz alguns questionamentos relativos ao seu impacto
sobre a biodiversidade.
Vrios cenrios so possveis, com diferentes consequncias para os ecossistemas e sua
biodiversidade. No primeiro, a expanso do agronegcio afetaria os espaos dedicados a outras
culturas, pastagens e florestas. No segundo, ao aumentar a produo agrcola, as variedades
transgnicas diminuiriam a presso sobre as reas no cultivadas, especialmente as florestas.
145
CULTIVOS
Amrica do Sul
China
Soja, colza, lichia, pera, pssego, repolho, ch, gengibre, ginseng, cnfora etc.
frica (Etipia)
sia menor
146
Por ser de cunho religioso e essencialmente subjetivo, esta viso no corresponde ao nosso
conhecimento atual sobre as espcies, que so unidades morfolgicas e reprodutivas essencialmente
dinmicas. Sem fundamentao cientfica, o criacionismo ignora os inmeros estudos sobre a
evoluo dos seres vivos e, tambm, as descobertas sobre os genomas, mostrando que as espcies
compartilham um nmero grande de genes.
Por outro lado, no deve se esquecer que muitas das plantas consideradas naturais so um
invento recente do homem. Um exemplo o morango, resultante de um cruzamento acidental entre
duas variedades que no coexistem na natureza: a norte-americana Fragaria virginiana e a sulamericana Fragaria chiloense, ocorrido no sculo XIX em um Jardim Botnico da Frana. Outro
exemplo o tritical, um hbrido de trigo e centeio, obtido em laboratrio em fins do mesmo sculo.
Tratado inicialmente como uma curiosidade cientfica, este cereal teve suas propriedades
agronmicas desenvolvidas recentemente, sendo utilizado hoje na composio de pes e biscoitos e
de raes animais; tambm vendido em algumas lojas de produtos naturais.
A PROTEO DA BIODIVERSIDADE
OS CENTROS DE DIVERSIFICAO
No incio do sculo XX, o gegrafo e geneticista russo Nikolai I. Vavilov percorreu 64 pases, em mais
de 100 expedies, coletando sementes, gros, tubrculos etc. Nessas viagens, ele observou que em
alguns lugares o nmero de variedades cultivadas e distintas muito maior que em outros. Essas
reas geogrficas corresponderiam aos centros de diversificao, ou de origem, das plantas
cultivadas.
Assim, a existncia de mais de 1.000 variedades de batata na Cordilheira dos Andes, cada uma
delas identificada com um nome pela populao local, mostraria que esse seu centro de
diversificao. A partir de observaes anlogas, Vavilov localizou seis a oito centros geogrficos
onde, presumivelmente, teria se originado a agricultura (Tabela 12.4).
Vavilov no chegou a completar sua obra, falecendo em 1943 na priso de Saratov, onde foi
encarcerado por se opor a uma interpretao ideolgica da hereditariedade e defender o conceito
mendeliano da herana. Na antiga Unio de Repblicas Socialistas Soviticas (URSS) a gentica foi
considerada uma teoria reacionria e burguesa, entre 1929 e 1964.
A teoria de Vavilov foi extremamente fecunda para os estudos evolutivos das plantas cultivadas
e, consequentemente, para a conservao da biodiversidade. Admite-se hoje que a diversidade das
plantas cultivadas e silvestres bem maior em alguns pontos geogrficos, e que alguns biomas foram
mais propcios que outros para o nascimento de prticas agrcolas.
Nem sempre os centros de diversidade coincidem com os centros de origem, porque as
migraes humanas permitiram a apario de centros de diversidade secundria. Nestes, as espcies
foram selecionadas em funo das prticas agrcolas e da presso ambiental, tornando-se tolerantes
as condies ambientais e resistentes s doenas locais.
A CONSERVAO DA BIODIVERSIDADE
Uma das consequncias do processo evolutivo a extino de espcies, como evidenciado pelo
nmero de espcies vivas, que no chega a 1% das que alguma vez povoaram a Terra. O que
preocupa no tanto a apario e desapario das espcies, como a velocidade a que isso est
acontecendo, porque configura uma extino em massa, causada pelo homem.
147
Consideremos por exemplo o caso da Mata Atlntica brasileira, cuja biodiversidade maior
ainda que a da Amaznia. A devastao tal que s restam pedaos da floresta original e sua
conservao depende da manuteno de corredores entre os diversos fragmentos.
Negociada sob os auspcios do Programa das Naes Unidas para o Meio Ambiente (UNEP), a
Conveno sobre a Diversidade Biolgica entrou em vigor em 1993. Promove a cooperao
internacional para a conservao da diversidade biolgica, o uso sustentvel dos recursos biolgicos
e a distribuio justa e equitativa dos benefcios resultantes do uso dos recursos genticos.
Conservar a biodiversidade e os recursos genticos significa muito mais que salv-los da
extino, trata-se de conservar suficiente diversidade dentro de cada espcie de forma a garantir que
seu potencial gentico seja usado no futuro.
De um modo geral, em todas as variedades cultivadas atualmente tem-se incorporado genes
provenientes de variedades selvagens ou dos estoques genticos conservados por povos que
praticam uma agricultura tradicional. A produo comercial do tomate, por exemplo, seria impossvel
sem a contribuio de genes silvestres de Amrica Latina. Graas aos trigos selvagens, dispomos de
variedades resistentes aos fungos, seca, ao calor ou ao frio. A resistncia a quatro doenas do arroz
que cultivado atualmente se deve a uma variedade encontrada na ndia central.
A conservao in situ
A biodiversidade pode ser conservada in situ mediante a proteo ambiental de uma regio
determinada (unidades de conservao ambiental). Alm de manter a dinmica evolutiva das
espcies, h de se contemplar as necessidades da populao local criando reservas de
desenvolvimento sustentvel (Mamirau, Brasil; Slan Kan, Mxico). Na Costa Rica, uma lei de 1996
compensa aqueles que conservem ou aumentem a rea de floresta dentro de suas propriedades.
Uma nova tendncia o retorno da vida selvagem mediante a reintroduo de animais como o
urso, nos Pirineus, ou o lobo, nas florestas europeias. Projetos mais arrojados contemplam a criao
de comunidades de grandes mamferos.
Em Oostvaarderplassen (Pases Baixos), os animais extintos so substitudos por outros que lhes
sejam aparentados. Extinto em 1627, o auroque substitudo pelo auroque de Heck, criado em 1920
por cruzamentos entre as mais antigas raas de bovinos europeus. O pnei Konik da Polnia ocupa o
lugar do tarpan, um cavalo selvagem extinto.
Um projeto anlogo procura recriar as estepes da tundra anteriores ltima era glacial (parque
pleistocnico, Rssia).
A conservao ex situ e os bancos de germoplasma
A estratgia envolve a coleta de amostras representativas de uma populao e sua manuteno em
bancos de germoplasma e/ou jardins botnicos, na forma de sementes, estacas, plantas inteiras etc.
A conservao ex situ se aplica especialmente s plantas cultivadas que se reproduzem por
sementes. Estas podem ser conservadas no frio durante longos perodos de tempo (a 50C durante 20
a 30 anos; de -180C a -200C durante um sculo). Como a viabilidade das sementes decai com o
tempo, periodicamente devem ser germinadas, desenvolvendo novas plantas e podendo colher
sementes frescas.
Alm de facilitar o acesso informao dos melhoristas, a criopreservao tem a vantagem de
conservar o material em um espao reduzido e com cuidados intensivos. Mas, devido s limitaes
do tamanho das amostras, a conservao dos recursos fitogenticos pode ser insuficiente. Os custos
so muito altos e inclusive a coleo da Estao Experimental Vavilov (So Petersburgo, Rssia), que
sobreviveu Segunda Guerra Mundial, enfrenta hoje grandes dificuldades econmicas.
148
Muitas plantas no resistem dessecao (coco, cacau, ctricos, caf, dend, borracha e 70%
das rvores das florestas tropicais), mas podem ser conservadas graas s tcnicas de cultura de
tecidos que tambm permitem a conservao de plantas de multiplicao vegetativa (razes, como a
mandioca, tubrculos como a batata, banana, cana-de-acar). A criopreservao preserva os tecidos
por tempo indeterminado. As tcnicas de anlise de DNA tm sido incorporadas tanto nos estudos
de diversidade gentica como no controle da duplicao de amostras.
Com o mapeamento do genoma das plantas bsicas para a produo agrcola e a disponibilidade
dos dados no domnio pblico, abrem-se novas perspectivas na conservao dos recursos genticos.
Existem hoje mais de 1.400 bancos de genes e de germoplasma com mais de 6.000.000 de
amostras. Os principais se encontram nos Estados Unidos, na China, na Alemanha e no Brasil
(Embrapa). Na Noruega, a 1.000 km do Polo Norte, um lugar considerado a salvo de mudanas
climticas, desastres naturais e guerras, foi criado recentemente o banco de sementes de Svalbard
com capacidade para armazenar 4,5 milhes de amostras, cada uma delas com 500 sementes.
Devido localizao geogrfica dos centros de origem e de diversificao, resulta preocupante a
recente multiplicao dos conflitos blicos (Afeganisto, Iraque) que afetam no s a populao local
como comprometem o seu futuro ao devastar a sia Menor, uma regio de grande biodiversidade e
riqueza gentica.
Os bancos de germoplasma podem ajudar a restaurar uma agricultura devastada por conflitos
blicos. Em Ruanda, um pas em que 90% das pessoas dependiam da agricultura e onde eram
conhecidas 600 variedades de feijo, o conflito blico entre etnias rivais causou, em 1994, a morte de
800.000 pessoas e a migrao forada de dois milhes de pessoas. Durante esse perodo,
organizaes internacionais conservaram, em bancos de germoplasma, as sementes essenciais para a
reconstruo do pas.
O CGIAR E O CENTRO INTERNACIONAL DA BATATA
Uma das organizaes dedicadas conservao da biodiversidade e ao desenvolvimento agrcola dos
pases em desenvolvimento a Future Harvest, uma iniciativa com 16 centros localizados em
diversos lugares, porm mantendo uma estrutura descentralizada que favorece a difuso das
informaes. Os centros so mantidos pelos governos de 165 pases, fundaes privadas e
organizaes internacionais e regionais que integram o Consultative Group on International
Agricultural Research (CGIAR), apoiado pela Food and Agriculture Organization (FAO).
Os centros do CGIAR na Amrica Latina so: o Centro Internacional para el Mejoramiento del
Maz y el Trigo (CIMMYT) no Mxico, o Centro Internacional de la Papa (CIP) no Peru e o Centro
Internacional de Agricultura Tropical (CIAT) na Colmbia.
A batata originria da regio andina. No sculo XVI chegou Europa onde, depois de vencer a
resistncia da populao, transformou-se em um dos poucos alimentos consumidos pela populao
mais pobre. Quando em meados do sculo XIX o fungo Phytophtora infestans infectou as batatas,
desencadeou-se na Irlanda um terrvel perodo de fome, que causou a morte de um milho de
pessoas e a emigrao de boa parte da populao.
Hoje, a batata o quarto cultivo mais importante do mundo, com uma produo anual de 300
milhes de toneladas. Em muitos pases, a populao depende de batata e de outros tubrculos
(batata-doce) para sua alimentao, por serem relativamente ricos em energia e nutrientes.
O Centro Internacional da Papa (CIP) preserva a batata (Solanum tuberosum), a batata-doce
(Ipomoea batatas) e nove tubrculos ou razes andinas (Oca, Ulluco, Mashua, Arracacha, Yacon,
Achira, Ahipa, Maca, Mauka). O banco de germoplasma de batata inclui amostras de uma centena de
espcies selvagens coletadas em 8 pases de Amrica Latina, alm das variedades cultivadas
tradicionalmente pela populao andina.
149
150
Como a perda do efeito da heterose diminui a produtividade da descendncia das plantas hbridas, o
agricultor passou a comprar anualmente as sementes. Em 1960, o milho hbrido era cultivado, com
raras excees, em todas as plantaes dos Estados Unidos e do Canad. O melhoramento das
plantas j no dependia daqueles diretamente envolvidos em seu cultivo, mas daqueles que
produziam as sementes.
A dcada de 1960 est marcada pela revoluo verde, que salvou da fome mais de 1 bilho de
pessoas. Em 1970, o engenheiro agrnomo Norman Borlaug recebeu o Prmio Nobel da Paz pelo
desenvolvimento de uma variedade de trigo de alto rendimento, resistente a doenas causadas por
fungos. O trabalho de Borlaug, que permitiu aumentar a quantidade de alimentos, representa uma
contribuio fundamental para a paz mundial.
Graas ao desenvolvimento e ao cultivo de variedades melhoradas geneticamente houve uma
duplicao da produtividade dos cereais, mas eram necessrias prticas agrcolas complexas
(irrigao, mecanizao, aplicao de fertilizantes e pesticidas). Em funo do custo de fertilizantes e
agrotxicos e de sua aplicao em quantidades excessivas, a revoluo verde trouxe tambm
problemas ambientais, sociais e de sade. Contudo, devido necessidade de grandes investimentos
de capital para a mecanizao e a aplicao de produtos qumicos, em muitos pases os pequenos
agricultores no chegaram a usufruir a revoluo verde.
152
Com a crise do petrleo da dcada de 1980, o setor de sementes agrcolas invadido pelas
grandes empresas transnacionais, produtoras de agrotxicos e fertilizantes. A inverso extraordinria
de recursos do setor privado em pesquisa e desenvolvimento permite a introduo das novas
tcnicas de engenharia gentica na agricultura. Traspassando as barreiras interespecficas, a nova
tecnologia facilita a obteno de plantas mais produtivas ou com propriedades novas. Hoje, a
tecnologia est inserida na semente.
Comercializadas a partir de 1996, as principais plantas transgnicas cultivadas atualmente so a
soja, o milho, a canola e o algodo, com tolerncia a herbicidas e/ou resistncia a insetos. A rea
semeada com estes cultivos se estende por 25 pases, dos quais cinco respondem por 43% da
superfcie cultivada mundialmente (Brasil, Argentina, ndia, China e frica do Sul).
A OBTENO DE NOVAS VARIEDADES
MUTAO GNICA E SELEO
O melhoramento est baseado na reproduo seletiva entre indivduos pertencentes a uma mesma
espcie. Como a variao intraespecfica limitada, o mtodo clssico envolve a induo aleatria de
mutaes por agentes fsicos ou qumicos. O mutante obtido cruzado por vrias geraes com um
dos tipos parentais (retrocruzamentos), at que este incorpore as caractersticas desejadas
(introgresso gnica).
Esse processo demora de cinco a 15 anos e, quando finalizado, o gene selecionado estar
acompanhado por outros, desejveis ou no. Duas variedades comerciais de batata (Lenape, 1960;
Magnum bonum, 1990), obtidas por este mtodo, tiveram que ser retiradas do mercado devido ao
alto contedo de alcaloides, caracterstico das plantas selvagens.
O progresso alcanado na induo de mutaes (TILLING, do ingls Targeting induced local
lesions in genomes) e na seleo assistida por marcadores moleculares facilita a obteno de novas
variedades, como a batata Amflora. A genmica tambm trouxe avanos notveis, como a
identificao de 40 genes de resistncia a patgenos no tomate, que foram reunidos em um
gentipo nico. Contudo, em ambos os casos, trata-se de genes pertencentes mesma espcie.
ALTERAO DO NMERO DE CROMOSSOMOS
A multiplicao do nmero de cromossomos (poliploidia) um fenmeno que acontece
espontaneamente nos vegetais, seja por no disjuno dos cromossomos ou por uma falha da
citocinese durante a diviso celular. Ao longo do processo evolutivo, duplicaes dos lotes
cromossmicos originais (autopoliploidia) ocorreram em vrias das espcies que so cultivadas
atualmente, tais como a batata ou a cana-de-acar.
A multiplicao dos lotes cromossmicos pode ocorrer em hbridos interespecficos, pouco
frteis ou estreis, restaurando a fertilidade e gerando uma nova espcie, diferente de ambas as
linhagens parentais (alopoliploidia). Este mecanismo deu origem a plantas como o trigo, a colza, a
aveia, o tabaco, o algodo, o caf etc.
A descoberta da colchicina (1935), uma substncia que interfere com a formao dos fusos
mitticos, permitiu a criao de novas espcies poliploides. A hibridizao do trigo e do centeio,
seguida de uma duplicao cromossmica, originou o triticale, uma planta que rene a qualidade do
gro do primeiro e a rusticidade do segundo.
Outra forma de alterao do nmero de cromossomos a cultura de anteras, para a obteno
de plantas haploides. Essa tecnologia permite identificar mutantes recessivos e obter rapidamente
variedades diferentes por hibridizao ou duplicao cromossmica.
153
ENGENHARIA GENTICA
medida que a distncia entre as espcies aumenta, os cruzamentos se tornam cada vez mais
difceis; a transferncia dos genes pode exigir o uso de tcnicas complexas, como a fuso de
protoplastos (hibridizao somtica) e o cultivo de embries. Quando os recursos genticos provm
de outros organismos distantes na escala evolutiva (plantas, microrganismos ou animais), sua
transferncia demanda a utilizao da engenharia gentica ou tecnologia do DNA-recombinante.
Qual a diferena entre uma planta obtida por cruzamento seletivo e outra por engenharia
gentica? Na primeira, genes da mesma espcie ou de uma espcie muito prxima se introduzem
aleatoriamente. Na segunda, se incorpora diretamente um transgene, isto uma construo gnica
que pode provir de uma espcie distante. Trata-se de uma tecnologia poderosa demais para ser
negligenciada.
A construo de uma planta transgnica comea com o isolamento e caracterizao do gene de
interesse (transgene) e a construo de uma estrutura gentica complexa, incluindo tambm um
gene promotor e um gene marcador. O primeiro possibilita a transcrio do transgene e determina
se este ir se expressar em todas as clulas ou somente em alguns tecidos. O segundo permite
selecionar as clulas transformadas.
A construo gentica transferida s clulas receptoras por algum dos mtodos possveis
(eletroporao, biolstica ou uso de vetores, como o plasmdeo Ti de Agrobacterium tumefaciens). As
clulas transformadas so recuperadas procedendo-se regenerao das plantas mediante as
tcnicas de cultura in vitro (Figura 13.3). O trabalho laboratorial realizado com plantas cujo
gentipo favorea a transformao e a regenerao da planta transformada, mas que geralmente
resultam pouco vantajosas do ponto de vista agronmico.
FIGURA 13.3. As etapas da construo de uma planta transgnica.
154
No Brasil, o cultivo de plantas transgnicas regido pela lei de Biossegurana que estabelece a
observncia do princpio da precauo para a proteo do meio ambiente. O Princpio 15 da
Declarao do Rio de Janeiro sobre Meio Ambiente e Desenvolvimento Sustentvel (1992) diz o
seguinte: De modo a proteger o meio ambiente, o princpio da precauo deve ser amplamente
observado pelos Estados, de acordo com as suas capacidades. Quando houver ameaa de danos
srios ou irreversveis, a ausncia de absoluta certeza cientfica no deve ser utilizada como razo
para postergar medidas eficazes e economicamente viveis para prevenir a degradao ambiental.
Diferente da preveno, que trata de riscos conhecidos, a precauo contempla riscos
potenciais. Mesmo havendo incertezas ou falta de unanimidade entre os expertos, o princpio de
precauo demanda aes concretas para a proteo do meio ambiente.
Por outro lado, o Princpio 10 da mesma declarao nos diz que: A melhor maneira de tratar
questes ambientais assegurar a participao, no nvel apropriado, de todos os cidados
interessados. No nvel nacional, cada indivduo deve ter acesso adequado a informaes relativas ao
meio ambiente de que disponham autoridades pblicas, inclusive informaes sobre materiais e
atividades perigosas em suas comunidades, bem como a oportunidade de participar em processos de
tomada de decises. Os Estados devem facilitar e estimular a conscientizao e a participao
pblica, colocando a informao disposio de todos. Deve ser propiciado acesso efetivo a
mecanismos judiciais e administrativos, inclusive no que diz respeito compensao e reparao de
danos.
Vrios pontos merecem ser destacados: admite-se a incerteza e a falta de unanimidade entre os
expertos, afirma-se o direito de todos informao e pede-se a participao, no nvel apropriado, de
todos os cidados interessados. A responsabilidade pela tomada de decises no ser
exclusivamente de um grupo de indivduos, sejam estes cientistas, administradores, empresrios,
polticos ou comunicadores. Ter que ser democraticamente assumida por um grupo heterogneo
que represente os interesses da sociedade, mesmo tendo que abrir as portas ao marketing, aos
lobbies e presso dos grupos polticos, ambientalistas ou no.
Considerado por alguns grupos de opinio como um dos alicerces do desenvolvimento
sustentvel e uma proteo contra o controle da tecnologia pelas grandes empresas, o princpio de
precauo tambm visto por outros como um obstculo ao progresso e uma tentativa de
protecionismo.
A formalizao do princpio mediante uma estrutura jurdica, como a lei de biossegurana, assim
como o estabelecimento de normas, regras e procedimentos claros a melhor maneira de gerenciar
o desenvolvimento tecnolgico, minimizando os riscos correspondentes.
AS PLANTAS BIOTECNOLGICAS ATUAIS
As plantas biotecnolgicas apresentam traos, inseridos como transgenes, que visam modificar suas
propriedades agronmicas e/ou melhorar suas qualidades nutricionais, industriais ou ambientais.
Poderiam escapar dos limites do plantio e suplantar as plantas silvestres, tornando-se invasoras?
Existe o precedente de plantas ornamentais se transformarem em pragas quando introduzidas,
inadvertidamente, em um ambiente novo: a lantana prolifera descontroladamente na Austrlia; o
kudzu, procedente do Japo, se espalha no sul dos Estados Unidos; e o rododendro, originrio da
pennsula ibrica, se multiplica na Inglaterra.
Alm da degradao ambiental devida ao desmatamento, jardinagem ou agricultura, para
que o cenrio se repetisse seriam necessrias vrias caractersticas hereditrias, que so
sistematicamente eliminadas como fatores indesejveis nas plantas cultivadas (dormncia da
semente, plasticidade fenotpica, crescimento indeterminado, florescimento e produo contnua de
sementes etc.).
156
Com o objetivo de reduzir o risco futuro de introduzir um gene que transforme uma planta
normal em praga, a FAO (Food and Agriculture Organization) estabeleceu uma srie de diretrizes,
cumpridas em 130 pases, que se aplicam tambm a insetos, bactrias e fungos. Nenhum dos cultivos
biotecnolgicos disponveis no mercado se mostrou persistente ou invasor nos testes prvios a sua
comercializao ou no monitoramento posterior.
MODIFICAO DAS PROPRIEDADES AGRONMICAS
Os principais cultivos comercializados atualmente so a soja, a canola, o milho e o algodo. As
propriedades agronmicas transformadas so a tolerncia a herbicidas, a resistncia a insetos, a
resistncia a vrus, o amadurecimento tardio, o contedo e a qualidade do leo, a tolerncia seca e
salinidade etc.
O aumento da produtividade dos cultivos fundamental porque significa um aumento da
produo de alimentos e, tambm, porque se trata de plantas de uso industrial que podem ser
exportadas, gerando divisas.
Tolerncia a herbicidas
O crescimento das ervas daninhas no campo prejudicial por dois motivos: competem pelos mesmos
nutrientes e contaminam a colheita. O agricultor pode elimin-las aplicando herbicida antes do
plantio, uma prtica que demanda o revolvimento prvio do solo, acelerando a eroso.
Contudo, se uma planta for tolerante a um herbicida de amplo espectro, bastar seme-la e
aplicar o herbicida depois da germinao. Esta caracterstica compatvel com a adoo do plantio
direto na palha e outros restos vegetais, um sistema no qual as sementes e os fertilizantes so
depositados em sulcos, sem preparao do solo. Em vrios pases, comercializam-se sementes
transgnicas de soja, de milho, de algodo e de canola tolerantes a herbicida.
O herbicida no seletivo mais utilizado o glifosato, que est presente em vrios produtos
comerciais, tais como Roundup, Buccaneer, Rodeo, Accord etc. Sua ao inibitria sobre
sistemas enzimticos exclusivamente vegetais permite eliminar as ervas daninhas, anuais e perenes.
Considerado pouco txico em caso de exposio oral ou de inalao, o glifosato degradado
rapidamente no ambiente.
Sementes de plantas tolerantes ao glifosato so comercializadas com o nome de
RoundupReady (RR) pela empresa Monsanto. Com o vencimento, no ano 2000, da patente do
Roundup e o aparecimento no mercado de outras variaes do produto, mais accessveis para o
agricultor, as vendas geminadas das sementes e o herbicida tendem a se desfazer. Por outro lado, a
BayerCropScience comercializa, com o nome Liberty Link, sementes tolerantes ao glufosinato, um
herbicida presente em outro grupo de produtos (Basta, Liberty, Ignite etc.).
Glifosato e glufosinato no so os nicos herbicidas no mercado. Existem outras substncias, do
grupo das imidazolinonas, cuja tolerncia tem sido transferida recentemente soja Cultivance, um
empreendimento da Embrapa e da Basf que ser comercializado a partir de 2011. Ao diminuir a
aplicao dos agroqumicos tradicionais, os cultivos biotecnolgicos favorecem a conservao dos
recursos ambientais.
A aprovao de plantas transgnicas considerada caso a caso, em funo de uma anlise de
riscos. Sua vantagem sobre as plantas silvestres depende da presena de um agente seletivo, como
um herbicida ao qual elas sejam tolerantes. Sem o herbicida, ou fora de seu alcance, as plantas
geneticamente modificadas no tm nenhuma vantagem sobre as plantas silvestres nem conseguem
competir com estas em ambientes naturais.
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O risco de polinizao cruzada depende da espcie, sendo mais fcil de acontecer no milho, em
que o plen se dispersa levado pelo vento, do que na soja ou no trigo, em que h autofecundao. A
presena de espaos ou corredores de isolamento evita a disseminao de plen transgnico no s
para as variedades silvestres como, tambm, para as convencionais, evitando prejuzos significativos
para o agricultor que os comercializa.
O tamanho dos espaos ou corredores de isolamento depende das caractersticas reprodutivas
da espcie em questo e de fatores ambientais, como o vento. No caso do milho, por exemplo, se
estima que o risco de polinizao cruzada entre os cultivos passa de 1% a zero quando a distncia
entre ambos aumenta de 100 a 1.000 ps.
A probabilidade de ocorrer o fluxo gnico aumenta se houver, na proximidade, espcies
silvestres compatveis. Por isso devem-se extremar os cuidados em relao ao cultivo de plantas
geneticamente modificadas nos lugares onde existam variedades silvestres aparentadas, tais como a
batata no Peru, o milho no Mxico, o arroz na ndia, a soja na Coreia e na China. No Brasil, onde
existem variedades silvestres do algodo, a CTNBio delimitou zonas de excluso para o cultivo de
algodo biotecnolgico.
Em relao vida silvestre, apesar do estardalhao causado oportunamente pela notcia de que
as borboletas monarcas seriam afetadas pelo contato com plen de plantas de milho Bt, segundo os
prprios autores do estudo, trata-se de uma experincia laboratorial desenvolvida em condies
diferentes das de um ambiente natural.
Resistncia a vrus
Assim como a vacinao, a resistncia a vrus est baseada na transferncia de uma parte do genoma
viral a fim de inibir sua reproduo. A produo em excesso da protena de revestimento viral inibe a
sntese de seu material gentico. Esta tecnologia foi utilizada para erradicar viroses da batata, da
beterraba, do pepino, do tomate, da couve-flor e do melo.
Os produtos hortcolas tm recebido menos ateno que os cereais e as leguminosas em funo
da resistncia do consumidor tecnologia e, tambm, do alto custo da construo de uma planta
transgnica para cultivos com pequena produo. Contudo, as variedades de papaia resistente a
vrus (UH Rainbow, UH SunUp), comercializadas nos Estados Unidos, salvaram o Estado do Hava de
um desastre econmico.
No Brasil, a CTNBio autorizou recentemente o cultivo do feijo tolerante ao vrus do mosaico
dourado. Aguarda-se a liberao do mamo resistente ao vrus da mancha anelar. Ambos foram
desenvolvidos pela Embrapa.
Eventos combinados
A insero de um trao considerada um evento que demanda a aprovao das autoridades
correspondentes. Novidade no mercado, as plantas piramidadas apresentam vrios eventos
combinados, tais como tolerncia a dois herbicidas, tolerncia a herbicida e resistncia a insetos, ou
resistncia a dois tipos de insetos, um que ataca a raiz e outro a parte superior da planta.
O mais recente lanamento o milho Genuity SmartStaxTM (Monsanto, DowAgroSciences), que
rene oito genes para o controle de pragas acima e abaixo do solo, e a tolerncia a herbicidas para o
controle de plantas daninhas.
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O AGRONEGCIO
A ADOO DOS CULTIVOS BIOTECNOLGICOS NO MUNDO
As primeiras plantas transgnicas datam de 1995 (resistncia a insetos) e 1996 (tolerncia a
herbicidas). Embora sua utilizao tenha suscitado polmicas acirradas, em quinze anos a rea
semeada com cultivos biotecnolgicos aumentou progressivamente at chegar a 148 milhes de
hectares, em 2010. Segundo o International Service for the Aquisition of Agri-Biotech Applications
(ISAAA), uma organizao internacional que divulga anualmente os dados correspondentes adoo
dos cultivos biotecnolgicos no mundo, em 2010 foram dez os pases que semearam mais de um
milho de hectares: Estados Unidos, Brasil, Argentina, ndia, Canad, China, Paraguai, Paquistan,
frica do Sul e Uruguai. O mercado global de sementes biotecnolgicas alcanou US$ 11,2 bilhes e o
dos principais cultivos (soja, milho, algodo) se aproximou de US$ 150 bilhes.
Os cultivos biotecnolgicos possibilitaram o aumento da produo agrcola e melhoraram as
condies econmicas dos agricultores. Mais de 90% dos 15,4 milhes de fazendeiros que plantaram
sementes biotecnolgicas so pequenos produtores rurais, especialmente na China, na ndia, nas
Filipinas e na frica do Sul. Os outros so grandes produtores de pases industrializados, como os
Estados Unidos e o Canad, e de pases emergentes como Argentina e Brasil.
Nos pases onde a mo de obra agrcola est constituda principalmente por mulheres, os
cultivos biotecnolgicos melhoraram suas condies de vida, ao permitir que elas dedicassem mais
tempo ao cuidado das crianas ou a outras atividades. Os problemas de sade causados pela
contaminao ambiental com agrotxicos diminuram em funo de uma reduo de 14% na
aplicao de inseticidas, sendo que em alguns casos esa diminuio teria chegado a 50% (China,
Argentina).
Com a liberao da comercializao do arroz Bt na China e do feijo resistente vrus no Brasil,
inicia-se uma nova etapa que contempla as principais fontes de alimento locais. Encontram-se em
andamento vrios estudos, sobre o gro de bico na frica, a berinjela na ndia, o milho resistente
seca nos Estados Unidos e na frica sub-sahariana.
Calcula-se que o nmero de pases produtores de cultivos biotecnolgicos passe de 29 em 2010
a 40 em 2015, ano dos Objetivos do Milnio, um compromisso da sociedade em reduzir metade a
fome e a pobreza.
O MERCADO DE SEMENTES
Os gigantes gnicos
Nos pases do continente africano e de parte da sia, em que a agricultura a principal fonte de
alimentos, os pequenos agricultores dependem das sementes; na poca da colheita eles separam
uma parte que ser conservada para o plantio do prximo ano.
Nos pases desenvolvidos, a proporo da populao dedicada s tarefas agrcolas bem menor,
devido mecanizao do campo. A agricultura de subsistncia cede lugar a um enorme complexo
agroindustrial, que integra outras atividades, como a venda de insumos (maquinarias, produtos
qumicos, sementes etc.) e a transformao e distribuio de produtos.
Embora a produo de sementes como atividade lucrativa remonte ao sculo XIX, o milho
hbrido que inicia a dependncia do agricultor das empresas produtoras de sementes. As construes
genticas que conferem vigor (heterose) s plantas foram o agricultor, ano aps ano, a comprar
novas sementes.
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Inventores / Obtentores
Multiplicadores
Produtores e comerciantes
Agricultores
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A COEXISTNCIA POSSVEL?
Todos os sistemas agrcolas exercem algum impacto sobre o meio ambiente. No entanto, uma
agricultura sustentvel pode minimizar os efeitos negativos da produo agrcola, restaurando a
fertilidade e limitando a eroso da terra.
Algumas prticas agrcolas j so compartilhadas pelas diversas modalidades agrcolas (orgnica,
industrial ou de preciso), incluindo a rotao de culturas, a adubao verde, o manejo de pragas e
de nutrientes, o plantio direto com uma cobertura na superfcie do solo etc. Outras so especficas,
como, por exemplo, a proibio para os produtores orgnicos de utilizar sementes geneticamente
modificadas ou de cultivar terrenos onde previamente tenham sido plantadas culturas
biotecnolgicas.
Cultivos convencionais e biotecnolgicos ocupam diferentes faixas de mercado e crescem em
funo das oportunidades econmicas. A proporo de variedades convencionais e biotecnolgicas
varia nos principais cultivos industriais, que so a soja, o algodo, o milho e a canola.
A contaminao de um cultivo convencional por um cultivo biotecnolgico acarreta perdas
considerveis para o agricultor. Medidas de proteo so tomadas, envolvendo o distanciamento dos
cultivos e a manuteno de faixas de excluso de diferente tamanho, segundo as caractersticas da
fecundao, autopolinizao ou polinizao cruzada. Testes genticos e imunolgicos permitem
identificar a presena de organismos geneticamente modificados em uma carga de cultivos
convencionais. O objetivo de ambas as medidas reduzir a presena de sementes adventcias a um
limite comercialmente aceitvel (0,9%).
Os modelos de regulao dos cultivos tradicionais, orgnicos e biotecnolgicos so considerados
de ndole econmica, porque do ao agricultor a possibilidade de escolher a modalidade que melhor
lhe convier. No envolvem biossegurana, porque esta analisada no momento da aprovao da
variedade biotecnolgica, uma vez satisfeitas as normas legais. Um modelo de regulao, baseado
em normas de coexistncia, tem sido desenvolvido na Espanha (2005).
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A fitase produzida por fermentao microbiana e sua adio nas raes obrigatria na
Europa. Trata-se de um mercado mundial de aproximadamente US$ 500 milhes, 40% do qual sito na
China. A aprovao do milho com fitase (Academia de Cincias Agrcolas da China, Origin Agritech
Ltda.) representa um marco importantssimo para a China.
AS RAES TRANSGNICAS
O escndalo da vaca louca, seguido pelo caso dos frangos contaminados com dioxina mostrou o
descaso existente pelos produtores europeus em relao s raes animais. Por isso, em 1998, no
foi surpresa o estardalhao causado por A. Pusztai, um renomado cientista do Reino Unido, ao
declarar na televiso ter encontrado alteraes do sistema imune em ratos alimentados com batatas
cruas, transgnicas para uma lectina inseticida natural de campnula. Uma auditoria realizada por
cientistas independentes considerou essas concluses errneas, o que foi confirmado mais tarde
pela Royal Society do Reino Unido.
As raes representam at 70% dos custos da criao de animais, sendo um dos gargalos da
produo agrcola. Toda tentativa de baratear as raes assimilada rapidamente. Porm, devido
aos precedentes desastrosos e a desconfiana da populao, a introduo de plantas geneticamente
modificadas foi analisada cuidadosamente em diversos tipos de animais, e no se evidenciaram sinais
de toxicidade da soja, da ervilha, do lupino, do algodo e da batata em ratos, nem da colza em
coelhos. As caractersticas das carcaas, dos tecidos e das carnes no mudaram em animais que
receberam alimentos transgnicos.
Numerosos estudos desenvolvidos em instituies de pesquisa e universidades mostraram que,
tanto em relao composio qumica como digestibilidade e ao valor nutritivo, as plantas
biotecnolgicas disponveis so substancialmente equivalentes s no transgnicas. Organizaes
internacionais como FAO/WHO (Food and Agriculture Organization e World Health Organization)
consideram, desde 1991, que a ingesto de DNA segura, independentemente de ser sua fonte
transgnica ou no. As organizaes norte-americanas FDA (Food and Drug Agency), em 1992, e EPA
(Environmental Protection Agency), em 2000, manifestaram-se no mesmo sentido. A Unio Europeia
no considera necessrio rotular os alimentos provenientes de animais alimentados com raes
geneticamente modificadas.
Segundo a FASS (Federation of Animal Science Societies), as raes so digeridas normalmente
pelos animais estudados, sem que sejam detectados cidos nucleicos ou protenas de origem
transgnica na carne, no leite ou nos ovos. Este era um resultado esperado, porque em funo dos
conhecimentos sobre digesto e absoro, tanto as protenas como o DNA so degradados durante o
processo digestivo.
Em alguns casos em que as plantas tm as propriedades agronmicas modificadas como, por
exemplo, o milho resistente a insetos (milho-bt), verifica-se uma reduo substancial do teor em
micotoxinas. Isto porque, ao diminuir os ataques de insetos, h menos leses que possibilitem a
infeco e o crescimento dos fungos. As micotoxinas so muito perigosas para os animais que
ingerem os gros contaminados, porque causam hemorragias, danos no fgado e nos rins, diarreias e
cncer. O milho transgnico melhora a qualidade do alimento e a sade animal, especialmente dos
monogstricos, mais sensveis as micotoxinas que os ruminantes.
Esto sendo estudadas plantas com maior digestibilidade, como uma alfafa transgnica com
menos lignina. Por outro lado, o melhoramento das plantas forrageiras tambm abre perspectivas
interessantes. Observou-se, por exemplo, aumento de peso e bom crescimento da l em ovelhas
alimentadas com lupino transformado geneticamente, de maneira a sintetizar uma protena de
girassol com alto contedo de metionina.
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Com o desenvolvimento das tcnicas de criopreservao pode-se utilizar tanto o smen fresco
como o congelado, o que possibilita tambm a conservao da biodiversidade de raas em perigo de
extino. Uma dose de smen custa a partir de 14 reais e, se for de qualidade comprovada, 20 reais.
O touro Bandido, que teve uma exitosa participao em uma novela de televiso e morreu
prematuramente, deixou smen congelado. Dele descendem os touros Zango, Matador e
Carrancudo que participam em festas de rodeio por todo o Brasil.
Normalmente, uma vaca produz uma cria por ano. Tratada com hormnios para induzir uma
superovulao e inseminada artificialmente, essa vaca poder gerar simultaneamente cinco
embries, que sero colhidos mediante a lavagem do tero e transferidos a uma vaca receptora. A
criopreservao garante que 25 a 50% dos embries congelados possam originar animais vivos.
Como o processo todo (superovulao + inseminao + transferncia dos embries) pode ser
repetido quatro vezes por ano, apesar das limitaes tcnicas existentes, uma vaca ter 10 crias por
ano.
Outra variante consiste em extrair os ovcitos das vacas superovuladas, ou dos ovrios de
animais sacrificados, procedendo a uma fecundao artificial antes de reimplantar os embries nas
vacas receptoras. O nmero de embries tambm pode ser aumentado por bipartio, por
micromanipulao do blastcito com 64 a 128 clulas. A aplicao de testes genticos nos pais e nos
embries, antes de ser reimplantados, permite uma seleo apurada da descendncia.
FIGURA 15.1. O Controle da reproduo em bovinos.
O controle da reproduo dos animais domsticos depende de diversas tcnicas (superovulao, inseminao
artificial, coleta de ovcitos ou de embries, criopreservao, transplante de embries).
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AS NOVAS TECNOLOGIAS
O mapeamento do genoma dos animais domsticos
O estudo do genoma dos animais domsticos fornece informaes precisas e eficientes para a
seleo de alguns caracteres. O objetivo bsico estabelecer uma correlao entre os genes e as
sequncias no funcionais que, distribudas ao longo do genoma, iro cumprir o rol de marcadores
moleculares.
Centenas destas sequncias j foram identificadas na vaca, no porco, no frango, na cabra, na
ovelha, no salmo, no camaro etc. Trata-se de micro e minissatlites, isto , sequncias curtas de
DNA repetidas um nmero varivel de vezes que so transmitidas de uma gerao a outra e podem
ser identificadas por eletroforese.
Quando o gene responsvel por uma caracterstica de interesse est associado a um
determinado marcador, ambos sero selecionados juntos. Com caracteres monognicos, os
resultados se obtm rapidamente, mas com caracteres polignicos devem-se procurar os genes que
contribuem substancialmente na variao. A anlise de marcadores tambm utilizada na
determinao do parentesco (pedigree) e na identificao dos animais, tanto no campo como nos
produtos derivados.
J foram sequenciados alguns genomas de animais domsticos. medida que outros sejam
completados e se conheam melhor as sequncias expressas nas molculas de mRNA, as tcnicas
eletroforticas podero ser substitudas por chips de DNA (microarrays).
A clonagem
A clonagem de animais domsticos por partio embrionria utilizada desde a dcada de 1980. Na
dcada seguinte, outras perspectivas se abriram com a tcnica de transferncia nuclear, que consiste
em transferir o ncleo de uma clula doadora a um ovcito receptor, previamente anucleado, de
outro animal. Dolly (1977-2003) foi o primeiro animal obtido mediante esta tcnica, depois de 277
tentativas fracassadas (Figura 9.9).
Fenmeno meditico, Dolly teve um tumor no pulmo, sendo sacrificada depois de desenvolver
artrite em uma pata e de mostrar sinais de envelhecimento precoce. Nascidas pouco tempo depois,
Polly e suas irms levam o gene codificador do fator IX, uma protena fundamental para a coagulao
sangunea.
As dificuldades tcnicas esto, principalmente, na estimulao do citoplasma receptor e na
coordenao entre a atividade citoplasmtica e nuclear. Quando a reprogramao celular
incompleta, observam-se fenmenos epigenticos que abrangem o DNA, a cromatina e a inativao
do cromossomo X. Por outro lado, os problemas de sade so mais frequentes em clones porque a
gestao mais demorada e o tamanho do recm-nascido maior. As taxas de mortandade perinatal
aumentam assim como o nmero de malformaes congnitas.
Por enquanto, a clonagem no usada no melhoramento direto dos rebanhos, sendo aplicada
aos animais fundadores, principalmente bovinos e sunos, porque so os nicos em que os benefcios
justificam o custo do procedimento.
Alguns exemplos so ilustrativos: Bull 86 Squared, um clone de um animal resistente
brucelose, salmonelose e tuberculose; Annabell Zeta, uma vaca da raa Holstein recordista da
produo de manteiga, clonada com sucesso por apresentar problemas de fertilidade; Second
Chance, nascido depois de 189 tentativas de clonagem de Chance, um touro que participou em
rodeios e filmes.
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MOBILIDADE
CAPACIDADE DE VOLTAR
AO ESTADO SELVAGEM
CAPACIDADE DE ESCAPAR
DO CONFINAMENTO
Camundongos
Alta
Alta
Alta
Peixes
Alta
Alta
Alta
Insetos
Alta
Alta
Alta
Porcos
Baixa
Alta
Moderada
Aves
Baixa
Baixa
Baixa
Vacas
Baixa
Baixa
Baixa
O MELHORAMENTO DA PRODUO
CARNE, LEITE, OVOS E L
A produo de alimentos um dos objetivos fundamentais da atividade agropecuria. A utilizao de
modificadores metablicos permite no s incrementar a produo como modificar a relao entre
carne e gordura, de maneira a diminuir o desperdcio.
Entre os modificadores metablicos mais utilizados esto os hormnios bST (somatropina
bovina) e pST (somatropina porcina), produzidos a partir de microrganismos transformados por
engenharia gentica. Os hormnios estimulam o crescimento em bezerros e porcos e a produo de
leite em vacas. Sua utilizao gerou polmicas, sendo proibidos em alguns pases da Europa, mas
permitidos em 19 pases, entre os quais a Argentina, o Mxico e o Brasil.
Experincias de transgnese visam melhorar a qualidade do leite de vaca modificando as
protenas (leite humanizado para lactantes) ou reduzindo a lactose (para as pessoas com
intolerncia). Na Nova Zelndia e nos Estados Unidos vm sendo obtidas vacas que produzem mais
casena no leite, uma propriedade interessante para a indstria de queijos.
A insero de um gene bacteriano codificador de fitase deu a origem ao EnviropigTM, um porco
que produz a enzima na saliva, de maneira que a concentrao de fsforo no esterco 60% menor
que no dos porcos convencionais. Ainda sem a aprovao das autoridades pertinentes, o EnviropigTM
est sendo criado em confinamento, no Canad.
Algumas tentativas foram feitas em relao produo de fibras animais: ovelhas transgnicas
que no precisassem de determinados suplementos de aminocidos na dieta; modificao da
estrutura das fibras de l e de caxemira para facilitar o tingimento e diminuir o encolhimento;
alterao das propriedades da seda. A partir de uma protena de aranha, sintetizada por uma cabra
transgnica, se desenvolveu e patenteou o BiosteelTM, um produto muito resistente que pode ter
diversos usos, inclusive militares.
Na dcada de 1980, a transferncia de um gene codificador de hormnio de crescimento
humano originou ratos duas vezes maiores. Quando repetida a experincia com porcos, obteve-se o
Beltsville pig, um animal que apresentou problemas variados: dificuldades respiratrias, artrite,
letargia etc. O fracasso suscitou vrios questionamentos ticos em relao ao tratamento infringido
aos animais. De um modo geral, a transgnese do hormnio de crescimento (GH, do ingls growth
hormone e GHFR, do ingls growth hormone factor releasing) nos animais domsticos tem sido
problemtica, salvo em peixes.
172
A AQUICULTURA
Os principais pases produtores de peixes, mariscos e crustceos por aquicultura so a Noruega, o
Chile, o Canad, os Estados Unidos, o Reino Unido, a Nova Zelndia e os pases asiticos.
O desenvolvimento da aquicultura parece uma alternativa razovel para a produo de
alimentos porque, em funo da pesca desmedida, os estoques de peixes nos mares e oceanos tm
diminudo assustadoramente. No entanto, do ponto de vista ecolgico, ainda subsistem dvidas em
relao aquicultura. Alguns peixes no exigem nenhuma complementao da rao, como as
carpas e tilpias. J o camaro e o salmo so criados com raes que incluem farinha de peixe.
Quais seriam as vantagens da aquicultura se for necessrio extrair peixe para a preparao das
raes?
A criao de peixes e mariscos uma atividade empresarial que cria empregos, demanda poucos
insumos e gera um produto de alto valor agregado. Contudo, alguns problemas subsistem, como a
distncia dos mercados de destino e a contaminao das guas costeiras, que dificulta a criao de
mariscos filtradores de plncton, favorecendo o florescimento das algas. O gerenciamento destas
variveis nas fazendas de salmo d um retorno econmico importante para a Noruega, o Chile o
Canad e os Estados Unidos.
No entanto, como as guas e os invernos canadenses so muito mais frios que os chilenos, onde
o salmo pode ser criado o ano inteiro, os produtores canadenses e norte-americanos se
interessaram por um salmo resistente ao frio e de crescimento rpido.
Dentro deste contexto, a empresa AquaBounty transferiu para o salmo do Atlntico um cassete
de expresso, denominado AquAdvantageTM, com dois genes codificadores de uma protena
anticongelamento e um hormnio de crescimento do salmo do Pacfico. O peixe cresce
rapidamente em condies comerciais, consumindo 250% mais comida e alcanando o tamanho
equivalente ao de um salmo convencional em menos tempo (18 meses em vez de 24 ou 30).
Para alguns especialistas, existiriam alguns riscos como a invaso e substituio dos salmes
naturais pelos transgnicos ou a introduo de genes de valor adaptativo inicialmente maior que os
das populaes selvagens, mas cujo valor diminuiria a mdio prazo, levando a espcie extino
(genes troianos). A empresa AquaBounty considera esses riscos sob controle, em funo da condio
triploide dos salmes GM AquAdvantage que garante a esterilidade de 98,9% dos peixes e das
condies ambientais desfavorveis em Prince Edwards Island (Canad), onde sero produzidos os
ovos.
Segundo o Protocolo de Cartagena, os peixes transgnicos devem ser criados exclusivamente
em conteno. Por isso, a explorao comercial de salmes transgnicos no poder ser feita como
at agora, em jaulas marinhas; eles tero que crescer confinados em fazendas dentro do territrio,
de maneira a diminuir os riscos de escapamento. AquaBounty planeja desenvolver o processo no
Panam, em regies de altitude com a temperatura adequada e rios desfavorveis para a
sobrevivncia do salmo. Aguarda-se para 2011 a aprovao do FDA (Food and Drug Administration)
para sua liberao comercial.
Estima-se que atualmente existam umas 30 variedades de peixes transgnicos em laboratrios
de diferentes lugares. Tilpias e carpas transgnicas se encontram em vias de aprovao em Cuba e
na China, respectivamente. Tambm esto sendo desenvolvidos camares e mariscos desprovidos da
protena responsvel por 80% das alergias e uma truta com mais cidos graxos mega 3.
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Do ponto de vista comercial, as vacinas DIVA (do ingls, differentiating infected from vaccinated
animals) so especialmente interessantes porque permitem distinguir animais infectados de animais
vacinados. Estuda-se tambm a substituio da vacina atual de vrus inativado por alfafa transgnica
que expresse algumas protenas do vrus da aftosa (plant-pharming).
Tecnologias avanadas so habitualmente aplicadas na produo de vacinas veterinrias. At o
incio de 2011, 12 vacinas geneticamente modificadas foram liberadas no Brasil pela CTNBio
(Comisso Tcnica Nacional de Biossegurana).
A aquicultura abre um espao para as empresas que desenvolvem testes de diagnstico e
vacinas para os patgenos que afetam as fazendas, como a argentina Tecnovax S.A. e as chilenas
Recalcine e AquaGestin, que desenvolveram uma vacina contra o vrus da anemia infecciosa do
salmo.
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Em 1959, Russell e Burch estabeleceram um marco conceitual conhecido hoje como os trs Rs
(do ingls, replacement, reduction and refinement). No momento atual, a cincia no tem como
prescindir dos testes em animais em algum momento do desenvolvimento de novos medicamentos e
de outras pesquisas. Contudo, os Rs deram incio a uma reflexo tica em relao aos animais
(Tabela 14.2).
Admite-se hoje que nem tudo o que tecnicamente possvel deve ser permitido, cabendo aos
Comits de tica das instituies de pesquisa discutir este aspecto em relao aos projetos que
envolvem seres vivos, a fim de evitar o conflito entre o bem dos seres humanos e o dos animais.
Nem sempre os maus-tratos decorrem dos procedimentos experimentais, tambm podem ser
genticos. Um exemplo significativo o da raa bovina Belgian Blue, que apresenta um crescimento
muscular extraordinrio devido a uma mutao no gene codificador da miosina.
A carne macia e com muito pouca gordura. Devido largura reduzida do canal plvico e ao
grande tamanho dos bezerros, o nascimento s possvel por cesrea. Alguns pases, como a
Dinamarca, pedem a extino desta raa.
Em relao aos transgnicos, a principal crtica se refere ineficincia dos mtodos de
microinjeo. Como s 3% a 5% dos animais carregam o transgene, o nmero de animais descartado
muito alto.
TABELA 14.2. Significado e alcance dos trs Rs.
R
SIGNIFICADO
EXEMPLOS
Substituir
Reduzir
Refinar
OS ANIMAIS DE ESTIMAO
O bem-estar dos animais domsticos uma responsabilidade do homem, que deve lhes dar
qualidade de vida e minimizar o sofrimento e a dor. Entre estes, os bichinhos de estimao
constituem um grupo a parte. Submetidos a processos seletivos diversos, eles experimentam
algumas consequncias negativas como a surdez, que atinge quase 10% dos dlmatas. Os cachorros,
alis, carregam 300 condies genticas recessivas das quais 250 foram descritas tambm no
homem.
Em 2010, estimam-se em US$ 11 bilhes os gastos em produtos de sade para os pets norteamericanos. Trata-se de vacinas (raiva, hepatite, leucemia felina etc.) e medicamentos (artrite,
parasitas, alergias, problemas dentrios, doenas cardacas, falncia renal, ansiedade de separao,
sndrome de disfuno cognitiva etc.).
O mercado tambm propcio para a clonagem dos animais de estimao. Algumas empresas j
esto envolvidas com a tecnologia, que at agora parece ser mais fcil em relao aos gatos que aos
cachorros.
O desenvolvimento de Night pearls, um peixe transgnico que brilha no escuro, custou US$ 2,9
milhes. Inicialmente desenhado para monitorar a qualidade da gua, este peixe se transformou em
mascote. Existem variedades com fluorescncia verde, vermelha e com uma combinao das duas
cores, a um preo de US$ 17,40, no lanamento em Taiwan (2003).
177
178
Farinhas
gua
Leveduras
Enzimas
Fermentao principal
Diviso da massa
Boleamento
Fermentao secundria
Moldagem
Fermentao final
Cozimento
Resfriamento
Corte em fatias
Embalagem
Distribuio
180
Outros Aditivos
O VINHO
A vinificao
O vinho uma bebida proveniente da fermentao alcolica da uva, originada no norte da frica e
na Europa por volta de 3000 a.C. Durante o amadurecimento da uva, vrias espcies microbianas se
sucedem, primeiro transformando os acares em etanol e, posteriormente, o etanol em cido
actico. Considerando que o destino natural da uva o vinagre, a arte da vinificao representa um
ganho tecnolgico considervel.
A uva composta por gua (86%), acares fermentescveis (12%) e molculas diversas (2%).
Retira-se o sumo espremendo ou prensando a polpa, sendo frequente o agregado de enzimas de
macerao (pectinases, celulases e hemicelulases) para melhorar o rendimento.
O agente biolgico da fermentao alcolica a levedura Saccharomyces cerevisiae, que se
encontra na pele da uva. Salvo na produo artesanal, a fermentao no depende das leveduras
naturais da uva. A indstria vitivincola conta com um leque amplo de linhagens selecionadas para
favorecer o processo fermentativo.
Na vinificao, monitora-se cuidadosamente a fermentao alcolica at a concluso do
processo. Procede-se ento a duas trafegas, entre as quais ocorre uma segunda fermentao,
denominada fermentao maloltica. Esta etapa, que uma das mais complexas na elaborao dos
tintos, se deve ao de bactrias lcticas, como Oenococcus oeni, que transformam o cido mlico
(dicido) em cido lctico (monocido). Em consequncia da fermentao maloltica, a acidez do
vinho diminui e aparecem as primeiras modificaes aromticas. Posteriormente, o vinho
clarificado e colocado para envelhecer em tonis ou garrafas, at o total desenvolvimento do buqu.
A obteno de um vinho tinto ou branco depende basicamente do tipo de uva e do
procedimento seguido (Figura 15.2). Se quisermos obter vinho branco, utilizaremos uvas brancas ou
tintas sem a pele ou casca que as recobre. As uvas tintas com pele originam vinhos tintos, porque
esta libera compostos fenlicos (antocianinas, flavonas, taninos).
O cultivo da videira
Existem diferentes espcies de videiras. A Vitis vinifera fornece os vinhos mais finos, enquanto a Vitis
labrusca, a Vitis ripari e outras variedades mais rsticas da prpria Vitis vinifera so utilizadas para a
elaborao de vinhos comuns. Existe uma combinao de solo e clima ideal para cada cultivo,
denominada terroir, sem a qual dificilmente se obtero os melhores resultados.
Alguns vinhos resultam da mistura de uvas diferentes, sendo denominados vinhos genricos ou
de corte. Outros so elaborados a partir de uma nica variedade, sendo denominados varietais. Esta
categoria inclui nomes como Pinot Noir, Chardonnay e Pinot Blanc (vinhos de Borgonha), CabernetSauvignon (vinhos de Bordeaux), Sangiovese (vinhos de Chianti) e Zinfendel (vinhos da Califrnia).
Observe-se que, dependendo do processo utilizado para a elaborao do vinho, a partir de uma
variedade de uva como a Pinot Noir podero ser obtidos vinhos to diferentes como um Borgonha
ou um Champanhe.
Em 2007, um grupo franco-italiano completou o mapa do genoma da Vitis vinifera, variedade
Pinot Noir. A informao abrange mais de 30.000 genes, muitos dos quais respondem pelos aromas e
sabores dos vinhos e outros regulam a quantidade de resveratrol, uma molcula que diminui os
nveis de colesterol.
Os estudos genmicos abrem numerosas perspectivas para os viticultores. Uma aplicao
importante o monitoramento da madurao da fruta, mediante arrays de marcadores moleculares,
possibilitando a escolha do momento adequado para a vindima.
181
Uva tinta
Desengaamento e esmagamento
Uva branca
Desengaamento e esmagamento
Macerao
Inoculao
Inoculao
Fermentao alcolica
Fermentao alcolica
Fermentao maloltica
Clarificao
Clarificao
Envelhecimento
Engarrafamento
Engarrafamento
Vinho tinto
Vinho branco
Vinificao em tinto
O mosto obtido por esmagamento da uva tinta
passa para a cuba de fermentao, uma vez
corrigidas a acidez e a quantidade de acar.
Depois da primeira fermentao (fermentao
alcolica), separa-se, por trasfega, o mosto da
borra. Inicia-se a segunda fermentao
(fermentao maloltica). Depois de
clarificado, o vinho deve aguardar
dois anos at estabilizar e ser
engarrafado. Os vinhos rosados ou
ross so obtidos seguindo um
procedimento semelhante, mas
deixando macerar durante menos
tempo o mosto com as cascas de uva. Tambm
possvel consegui-los misturando vinhos brancos e
tintos.
Vinificao em branco
O mosto obtido por esmagamento de uva
branca ou de uva tinta sem casca, sem permitir a
macerao. Salvo em alguns vinhos brancos de
Borgonha, evita-se a fermentao maloltica. Os
vinhos espumantes (Champagne, Cava, Prosecco)
passam por uma segunda fermentao alcolica
na garrafa.
182
O cultivo da videira uma tarefa complexa que exige tratamentos, enxertos e podas. Os viticultores
praticam a multiplicao vegetativa das videiras, o que garante uma qualidade constante, mas
aumenta a susceptibilidade da plantao aos patgenos. Espera-se que os estudos genmicos
permitam identificar e selecionar genes de resistncia a algumas enfermidades.
A transferncia de genes de resistncia de uma variedade a outra vista com muita
desconfiana pelos produtores, porque o rtulo de varietal parte da estratgia de vendas dos
vinhos de qualidade. Contudo, alguns produtores consideram aceitvel a transferncia de genes de
videiras rsticas para plantas de elite, com o objetivo de melhorar a produo.
Com a entrada no mercado internacional de pases menos apegados s tradies (Estados
Unidos, Chile, Argentina, Brasil, frica do Sul, Austrlia etc.), pode ser que as novas tecnologias
genmicas se apliquem na produo de plantas resistentes a doenas e pragas.
O rol da levedura na vinificao
As propriedades organolpticas dos vinhos dependem basicamente da cultivar escolhida, mas as
enzimas da uva e as atividades metablicas microbianas tambm cumprem um papel importante.
A transformao do mosto em vinho envolve inmeras reaes qumicas desenvolvidas por
leveduras e bactrias lcticas. Com o mapeamento do genoma de ambos os microrganismos e a
construo de microarrays adequados, estas reaes podero vir a ser bem conhecidas e
controladas.
Existe a tendncia, na indstria moderna, de substituir as leveduras selvagens por leveduras
enolgicas selecionadas. Contudo, alguns produtores consideram que estas ltimas massificam a
qualidade do vinho, preferindo utilizar as leveduras nativas e obter assim um produto original
qualitativamente diferente dos outros. Bancos de leveduras nativas facilitam a preservao da
biodiversidade.
Recentemente, duas linhagens de leveduras geneticamente modificadas fizeram sua entrada na
indstria de vinhos dos Estados Unidos e Canad. Trata-se da levedura ML01, que realiza ambas as
fermentaes (alcolica e maloltica), evitando a produo de histaminas, e da levedura ECMo01
que degrada a ureia, impedindo a formao de uma substncia carcinognica.
A CERVEJA
As bebidas fermentadas representam uma opo saudvel na falta de gua ou no caso de estar
contaminada. Todos os povos elaboraram alguma a partir dos elementos de seu entorno, sejam estes
gros, frutas, razes, caules ou folhas.
Em 4000 a.C, os habitantes das margens dos rios Tigre e Eufrates (Mesopotmia) preparavam 20
variedades de cerveja a partir de um procedimento bem simples. Esmigalhava-se o po de cevada em
um recipiente com gua aucarada e, uma vez concluda a fermentao, a bebida era filtrada e
transvasada a outro recipiente.
Os procedimentos melhoraram a partir do sculo VII, quando os frades introduziram algumas
inovaes como incluir diferentes tipos de ervas, uma prtica que no sculo XI culminou com a
adio de lpulo. No sculo XIV, a descoberta da tcnica de fermentao baixa deu maior
estabilidade bebida. Os trabalhos de Pasteur e o progresso da Microbiologia no sculo XIX
permitiram o desenvolvimento de uma poderosa indstria, cuja produo mundial supera os 1.000
milhes de hectolitros por ano.
A fabricao da cerveja comea com a maltagem, um processo em que os gros de cevada
germinados so secados e modos. O malte assim obtido contm as enzimas desenvolvidas durante a
germinao, capazes de catalisar a transformao do amido em acares fermentescveis (Figura
183
Cevada
Malte
Brasagem: Mistura, filtrao
e fervura do mosto.
Mosto
Fermentao alcolica
Cerveja
Acabamento: Amadurecimento,
pasteurizao e engarrafamento.
Comercializao
184
OS QUEIJOS E IOGURTES
A produo de laticnios
As razes da produo de laticnios remontam ao ano 3000 a.C. (Oriente Mdio), quando o homem
comprovara que, ao azedar, o leite mudava de consistncia e de sabor. O soro podia ser consumido
fresco, e a adio de sal ao cogulo o conservava por mais tempo. Em torno de 2.000 a.C., a
utilizao de estmagos de cabras e de ovelhas como recipientes para o leite permitiu obter queijos
mais slidos e robustos. Mais tarde, os romanos introduziram extratos de plantas como o figo para
coagular o leite.
A explicao destes fenmenos simples. As bactrias que normalmente se encontram no
bere dos animais contaminam o leite, proliferando e formando cido lctico. Nesse meio cido, as
protenas precipitam, separando-se do soro. A coagulao tambm ocorre em presena das enzimas
renina e pepsina da mucosa estomacal e da ficina do figo. Hoje, a produo mundial de leite
fermentado (iogurte, coalhada, quefir etc.) de trs milhes de toneladas por ano enquanto a de
queijos chega a 15 milhes de toneladas por ano (Figura 15.4 A).
Vrias espcies bacterianas podem fermentar o leite: Streptococcus thermofilus, Lactobacillus
bulgaricus, Lactobacillus acidophilus, Streptococcus lactis, Bifidobacterium bifidum etc. A maioria dos
produtos vendidos como leite fermentado contm um nmero alto de microrganismos vivos;
sendo consumidos como probiticos, para prevenir o desenvolvimento de outros microrganismos
indesejveis ou patognicos no tubo digestivo.
Todos os queijos passam por trs etapas: a coagulao, o dessoramento e a maturao (Figura
15.4 B). No entanto, a tecnologia de produo de queijos permite uma srie de variaes que se
traduz em mais de 400 tipos diferentes. Algumas dessas variaes so a origem do leite (vaca, cabra,
ovelha, bfalo), o agente da coagulao (calor, enzimas, bactrias lcticas ou ambas), a umidade e
consistncia (mole, semiduro, duro e muito duro) e a maturao. Muitos pases aceitam 35
variedades definidas por regras internacionais.
O rol de microrganismos e enzimas
A produo de queijos envolve a acidificao do meio pelas bactrias lcticas, geralmente
Lactococcus lactis e Streptococcus thermophilus. O coalho, uma substncia extrada do estmago de
bezerros, foi utilizado como agente da coagulao enzimtica durante sculos, mas sua obteno
ficou cada vez mais cara e difcil.
Para estabilizar a produo e satisfazer a maior demanda pelos produtos lcteos, usou-se
transferir o gene da renina a uma bactria (Escherichia coli) e, mais tarde, a uma levedura
(Kluyveromyces) e um mofo (Aspergillus). Alm da enzima produzida (quimosina) ser mais pura que a
renina, os suplementos so constantes, aumentando a eficincia da produo de laticnios e
diminuindo os custos.
O melhoramento de bactrias lcticas visa a obteno de linhagens mais estveis, resistentes
aos vrus bacterifagos e produtoras de bacteriocinas, que so substncias com atividade
antimicrobiana. Tambm linhagens capazes de liberar mais rapidamente suas enzimas poderiam
acelerar o processo de formao de aromas. Com o mapeamento do genoma, espera-se uma
intensificao das pesquisas nessa direo.
O desenvolvimento de bactrias e fungos durante a maturao confere suas caractersticas
tpicas a alguns queijos como, por exemplo, a presena de olhaduras produzidas por
Propionabacterium no Gruyre, ou de um manto branco de Penicillium no Camembert e no Brie ou,
ainda, as estrias azuis de Penicillium no Gorgonzola ou no Roquefort.
185
Pasteurizao
Inoculao com lactobacilos
Fermentao lctica
Resfriamento
Iogurte batido
Comercializao
Comercializao
B. Queijo. Os agentes biolgicos intervm nas etapas de coagulao e na maturao de alguns produtos.
Leite
Pasteurizao
Inoculao com lactobacilos, coalho ou enzimas e adio de CaCl 2
Fermentao lctica
Coagulao
Dessoramento
Enformagem, prensagem, viragem e salga
186
OS ADITIVOS
OS DIVERSOS TIPOS
A adio de algumas substncias nos alimentos tem diversos objetivos como, por exemplo, conservlos por mais tempo (antibiticos, cido actico, cido lctico, etanol), complementar seu valor
nutritivo (vitaminas, aminocidos) ou mudar a consistncia (gomas e enzimas). Os aditivos tambm
so usados para melhorar a cor e o flavor, um termo que abarca o aroma, o sabor e a textura. Apesar
da m fama que os acompanha, s uma em 6.000 pessoas apresenta alergia e intolerncia aos
aditivos, um nmero baixo, considerando que uma pessoa em 50 alrgica ou intolerante a algum
alimento.
Os principais aditivos utilizados pela indstria de alimentos so os cidos ctrico e lctico, alguns
corantes naturais (-caroteno, riboflavina), flavorizantes (monoglutamato de sdio, extrato de
levedura, aromas), gomas espessantes (xantana, gelana, dextrana), antioxidantes (-caroteno),
vitaminas (B2, B12, Biotina), enzimas e antibiticos. Alguns desses aditivos so obtidos em culturas de
clulas vegetais. Outros tm uma origem microbiana, sendo utilizadas linhagens de microrganismos
geneticamente modificados para sua produo industrial.
Vimos anteriormente o importante rol desempenhado por algumas enzimas na produo de
alimentos e bebidas por fermentao. Falta destacar o uso da lactase na elaborao do leite
deslactosado, um produto dirigido s pessoas com intolerncia lactose. E da pectinase que, junto
com celulases e amilases, facilita a extrao do suco de frutas retido na pectina, sendo tambm
utilizada na clarificao do suco.
Finalmente, entre os antibiticos usados para conservar alimentos, citaremos a Nisina (INS234),
que inibe o crescimento de bactrias Gram-positivas em queijos, salsichas e produtos cozidos de
origem avcola, e tambm a Natamicina ou Pimaricina (INS235), utilizada como conservante na
superfcie de produtos crneos embutidos.
187
OS ADOANTES
Outro caso interessante o dos adoantes. O aspartame (cido asprtico e fenilalanina) consumido
para limitar a ingesto de calorias, e o xilitol, para diminuir a incidncia de cries dentrias. Outros,
como o xarope de glicose ou de frutose, substituem o acar na indstria de alimentos.
A hidrlise cida ou enzimtica (-amilase e glicoamilase) do amido do milho produz xaropes de
maltose e de glicose. J a ao enzimtica da lactase sobre o soro das indstrias de laticnios origina
um xarope de dextrose (glicose, galactose). Uma vez refinados e concentrados, esses xaropes podem
ser usados como ingredientes na elaborao de produtos alimentcios (biscoitos, sorvetes etc.).
O poder adoante da glicose menor que o da frutose, mas a transformao enzimtica
(invertase ou glicose isomerase) transforma uma em outra (Figura 15.5). O resultado um xarope
(42% de frutose, 52% de glicose) que pode ser concentrado por mtodos cromatogrficos at
alcanar um teor de 90% de frutose. A indstria de refrigerantes substitui a sacarose pelo xarope de
frutose com uma concentrao de 55%, obtido mediante a mistura dos dois tipos.
O processo comeou a ser estudado na dcada de 1960, sendo o custo da glicose-isomerase o
principal fator limitante da tecnologia. Com o desenvolvimento das tcnicas de imobilizao
enzimtica, o processo tornou-se econmico, possibilitando o uso do amido proveniente de cereais
excedentes. Mas por outro lado prejudicou os pases produtores de acar, que viram diminuir a
demanda por este produto.
O descobrimento de um gene microbiano capaz de transformar a sacarose em cadeias curtas de
frutose (fructanos), com o mesmo gosto e desprovidas de calorias, indica que novos produtos
podero entrar em breve no mercado de adoantes.
FIGURA 15.5. A produo de xarope de frutose.
A hidrlise e a sacarificao do amido produzem glicose; esta transformada em frutose pela enzima glicoseisomerase, imobilizada em um biorreator.
Amilases e glicoamilases
Hidrlise e sacarificao
Glicose
Isomerizao
(invertase imobilizada)
Frutose
188
OS ALIMENTOS BIOFORTIFICADOS
O homem no se alimenta exclusivamente por motivos fisiolgicos. A seleo dos alimentos ocorre
dentro de uma tradio sociocultural que inclui a noo do que saudvel. O homem tenta escolher
os alimentos em funo da satisfao sensorial, emocional e afetiva que espera obter, mas o peso
das consideraes econmicas decisivo.
Combate-se a fome de uma populao dando-lhe acesso aos alimentos. Contudo, a falta total de
alimentos hoje um fenmeno menos frequente que a desnutrio devida carncia de
determinados nutrientes na dieta. Descrita magistralmente por Josu de Castro, na dcada de 1950,
essa fome parcial ou fome oculta ainda afeta mais da metade da populao mundial,
fundamentalmente mulheres e crianas, sendo a causa de diversas doenas.
Segundo a Organizao Mundial da Sade, o ferro, o zinco e a vitamina A so as principais
deficincias nutricionais dos pases em desenvolvimento. A estratgia tradicional consiste em
suplementar os alimentos industrializados com os nutrientes correspondentes. Existem outras
possibilidades, tais como a fertilizao dos solos e, consequentemente, o enriquecimento das
culturas de base.
Contudo, o melhoramento gentico parece ser a estratgia mais promissora para aumentar as
concentraes de nutrientes nas culturas de base (arroz, milho, trigo, feijo, mandioca e batatadoce). A engenharia gentica pareceria, a priori, a via mais rpida para fortificar os alimentos. Porm,
os empecilhos legais encontrados pelo arroz com pr-vitamina A (Golden Rice), que conta com mais
de 10 anos pronto sem ter sido comercializado, desestimulam a escolha dessa tecnologia.
Na biofortificao dos cultivos so utilizadas outras tecnologias com base biolgica. Nos Bancos
de Germoplasma do CGIAR j foram encontradas variedades de feijo com maior contedo de ferro,
de arroz e trigo com altos nveis de zinco, de mandioca, milho e batata-doce ricos em vitamina A etc.
As novas tcnicas de anlise gentica de traos quantitativos e, especialmente, a seleo assistida
por marcadores moleculares facilitam o melhoramento gentico das culturas de base.
As novas variedades devero ser altamente produtivas e contar com os nutrientes desejados.
Espera-se que contem com a aceitao das populaes necessitadas e, tambm, que os nutrientes
sejam assimilados de maneira a melhorar sua condio nutricional.
A biofortificao de alimentos um programa internacional desenvolvido por HarvestPlus
(CGIAR), um consrcio de instituies de pesquisa e agncias de desenvolvimento que age
especialmente na Amrica Latina e na frica. No Brasil, a Embrapa Agroindstria de alimentos
participa do programa HarvestPlus, tendo j desenvolvido variedades biofortificadas de feijo e
milho. Os primeiros testes esto sendo realizados em Sergipe.
SEGURANA ALIMENTAR
Em relao aos alimentos, a noo de segurana est baseada na tradio. Com o desenvolvimento
de uma moderna indstria de alimentos, surgem alguns questionamentos.
Atualmente, linhagens microbianas selecionadas so utilizadas para iniciar as fermentaes,
como starters. Ao acabar o processo fermentativo, essas linhagens podem permanecer no meio,
como os lactobacilos dos iogurtes. Tambm podem ser eliminadas por calor ou filtrao, como as
leveduras do po e da cerveja.
Apesar de ter passado por uma srie de processos seletivos que as torna muito diferentes
geneticamente das linhagens selvagens, as linhagens starters so bem conhecidas e no representam
risco algum para a sade. Classificadas pelas agncias internacionais como GRAS (do ingls, generally
recognized as safe) essas linhagens so as nicas permitidas na produo de alimentos.
189
No existem normas explcitas sobre o que seria um OGM food-grade, isto , um microrganismo
transgnico que possa ser utilizado na indstria de alimentos. Alguns aspetos de biossegurana
teriam que ser considerados. Um deles seria evitar ou eliminar qualquer gene de resistncia a
antibiticos que tivesse sido introduzido como marcador seletivo na transferncia gnica. O outro diz
respeito aos organismos doadores de genes, esboando-se diferentes critrios.
Segundo um critrio estrito, para poder ser considerado food grade, um OGM deveria conter
exclusivamente DNA da mesma espcie, aceitando-se na construo gnica a presena de pequenos
fragmentos sintticos de DNA, sempre que no codifiquem DNA ou RNA. Em outros termos, a
tecnologia do DNA-recombinante se aplicaria a microrganismos de diferentes linhagens da mesma
espcie.
Atualmente, tem obtido aceitao um critrio mais amplo, permitindo a incluso de DNA de
outros microrganismos alimentares, a condio de estes pertencerem ao mesmo grupo de
microrganismos que participam no processo. Como, por exemplo, a transferncia de genes das
bactrias malolticas para as leveduras da vinificao.
A aceitao de OGMs nos alimentos depende das regulamentaes de cada pas, bem menos
flexveis na Europa que nos Estados Unidos e no Canad, onde recentemente fora colocada no
mercado uma linhagem de Lactococcus geneticamente modificada e considerada GRAS.
As enzimas cumprem um importante papel em vrias das indstrias de alimentos (produo de
pes, biscoitos, laticnios, sucos de frutas, bebidas alcolicas, derivados do amido e de protenas).
Atualmente, mais de 30 enzimas diferentes so utilizadas no processamento de alimentos.
A primeira enzima sintetizada por um microrganismo transgnico foi a quimosina, que
utilizada h anos como substituto da renina de origem animal, na produo de queijos. Hoje,
aproximadamente 80% dos queijos so elaborados com quimosina, sendo aceitos pelos
consumidores lactovegetarianos.
Os microrganismos utilizados para a sntese de enzimas food-grade so organismos
pertencentes categoria GRAS, bem conhecidos e altamente produtivos, aos quais foram
transferidos os genes de interesse mediante engenharia gentica. Esses OGMs no esto presentes
na preparao final que, depois de purificada, contm exclusivamente a enzima. Essa modalidade
produtiva garante indstria de alimentos vrias enzimas seguras e de baixo custo entre proteases,
amilases, lipases, lactases, pectinases, glicose-oxidase, invertases etc.
A esse respeito, pareceria haver um consenso amplo, incluindo a Comisso Europeia, que
considera que os aditivos (corantes, aromas e flavorizantes) s devem ser rotulados como sendo de
origem transgnica se o produto final tiver DNA ou protena de origem recombinante.
A mais alta autoridade internacional sobre os alimentos o Codex Alimentarius, uma comisso
de FAO/WHO, reconhecida por 169 pases. Esta Comisso se encarrega de estabelecer uma
metodologia que permite analisar a segurana alimentar em relao aos produtos derivados de
microrganismos geneticamente modificados
.
190
O produto resultava mais econmico tanto para a indstria como para o consumidor, sendo
vendido com bastante aceitao pela rede Sainsbury (Reino Unido), entre 1996 e 1999. No auge da
campanha contra os transgnicos, o produto teve que ser retirado do mercado.
MELHORANDO AS CARACTERSTICAS NUTRICIONAIS
Outra forma de chegar ao consumidor seria mediante produtos com melhores caractersticas
nutricionais: carne e leite com menos gordura, soja e batata com mais protena, frutas mais doces,
canola com vitamina A, milho com metionina, mandioca e batata sem toxinas, camaro e amendoim
sem substncias alergnicas etc. Tambm seriam bem-vindos alimentos com melhores propriedades
organolpticas, tais como pimentes e meles com mais aroma ou cebolas que no faam chorar.
O consumidor tambm poderia ser atrado por alimentos com componentes biologicamente
ativos, como os antioxidantes do ch verde ou as substncias capazes de diminuir o colesterol que se
encontram no alho e na cebola.
Quais as tecnologias com chances de ser aceitas pelo pblico, engenharia gentica ou
melhoramento convencional, assistido por tcnicas de biologia molecular?
Um primeiro caso a analisar o do arroz dourado (Golden Rice). O arroz uma planta que no
produz vitamina A. Na sia, onde este constitui a base da alimentao, a deficincia vitamnica mata
6 mil crianas por dia e cega 500 mil por ano. Um grupo de pesquisadores, liderado por Ingo
Potrykus, obteve, na Sua, mediante a transferncia de genes do narciso, um arroz com a
capacidade de sintetizar o -caroteno, que um precursor da vitamina A.
O projeto contou com subvenes privadas, e vrias das grandes corporaes cederam as suas
patentes. Apesar de estar pronto desde 1999, o arroz dourado ainda no chegou ao mercado, tais os
empecilhos legais encontrados em funo de sua origem transgnica, que podero pospor sua
distribuio at 2014. Se o Golden Rice tivesse sido obtido por vias convencionais, estaria no
mercado desde 2003.
Um segundo caso o da soja Vistive (Monsanto), que rene um trao transferido mediante
tcnicas de melhoramento convencionais (baixo teor de cido linolnico) e um trao de origem
transgnica (tolerncia ao herbicida Roundup). Lanado no mercado norte-americano em 2005, o
leo de soja Vistive representou um passo adiante na preveno de doenas cardiovasculares e de
altos nveis de colesterol. Empresas como Kellog e Cargill o utilizaram logo na preparao de
alimentos com melhor qualidade nutricional. Por se tratar de um nicho promissor, outras variedades
com alteraes no teor de cidos graxos esto a caminho (Soymega, com mais mega 3).
A FAVOR OU CONTRA?
A favor ou contra? Responder essa pergunta simplificar excessivamente uma questo complexa.
Seja qual for a resposta, ela estar atrelada ao momento histrico que vivemos e s nossas
concepes polticas, econmicas e sociais.
Nossa atitude em relao aos transgnicos depende, em grande parte, da viso que cada um de
ns tem da natureza. Conforme ela for considerada fundamentalmente boa ou
fundamentalmente ruim, toda modificao que venha da mo do homem ser considerada
perigosa ou vantajosa. Dependendo da confiana depositada no conhecimento cientfico e no
progresso tecnolgico, os novos alimentos sero vistos como produtos interessantes e promissores
ou como uma ameaa.
192
193
Gene marcador
Transgene
Sequncia terminal
Promotor
A INGESTO DE DNA
A ingesto de DNA, per se, no perigosa. Este um componente de nossos alimentos: um tomate
tem 7mg de DNA, uma banana, 50 mg e um sanduche, 60 mg. O DNA digerido normalmente, junto
com os outros componentes dos alimentos.
Em relao ao alimento transgnico, calcula-se que uma vaca de 600 kg consumindo uma
rao composta por milho geneticamente modificado, ingeriria 600 mg de DNA por dia, dos quais 1,5
mg seria DNA recombinante, o que corresponde a 0,00024% do DNA ingerido diariamente na rao,
uma proporo muito baixa.
OS MARCADORES DE RESISTNCIA A ANTIBITICOS
No h evidncias de transferncia in vivo do DNA ingerido ao homem ou a microrganismos no
intestino. Porm, os estudos in vitro indicam que, mesmo em uma frequncia extremamente baixa,
essa transferncia poderia ocorrer. Apesar de sabermos que, se uma bactria tivesse se tornado
resistente, sua implantao no tubo digestivo s poderia ocorrer na presena do antibitico como
agente seletivo, a utilizao de marcadores de resistncia a antibiticos no transgene um motivo de
preocupao (Figura 16.1).
Geralmente, utilizam-se como marcadores antibiticos sem uso clnico e para os quais j se
encontrou resistncia nas bactrias intestinais, de maneira que a transferncia do marcador no
mudaria a situao. Considerando que j existe a tecnologia apropriada, a recomendao das
agncias internacionais de substituir ou eliminar esse tipo de marcadores.
A COMPOSIO QUMICA
Em relao aos produtos que j esto comercializados, o alimento geneticamente modificado e o
alimento convencional tm a mesma composio qumica e o mesmo valor nutritivo. No caso de um
alimento geneticamente modificado para sintetizar uma vitamina extra, por exemplo, a situao
diferente e este no pode ser considerado igual ao alimento convencional. Estudos adicionais so
necessrios.
A PRODUO DE TOXINAS
Outra preocupao diz respeito produo eventual de toxinas. Sabe-se que as plantas sintetizam,
para sua defesa, substncias qumicas que podem ser txicas para o homem ou os animais. Uma
delas a toxina do Bacillus thuringiensis que, por ser prejudicial para os insetos e incua para o
homem, est sendo utilizada sem problemas nas lavouras orgnicas, h mais de 40 anos.
194
Essa preocupao no teria maiores fundamentos, dado que o promotor CaMV detectado em
14 a 25% da produo de canola, de couve-flor e de repolho, sendo ingerido pelo homem em
quantidades considerveis faz dcadas e sem nenhum efeito reconhecido.
OUTROS EFEITOS
A insero de vrias cpias gnicas em diferentes lugares do genoma poderia gerar a ativao ou
desativao de outros genes, gerando no organismo geneticamente modificado algum tipo de
alterao que no fora previsto.
At agora, no fora registrado nenhum efeito deste tipo nos produtos comercializados, e a
tecnologia de microarrays permite excluir essa possibilidade.
COMO GARANTIR A SEGURANA ALIMENTAR?
O PRINCPIO DE EQUIVALNCIA SUBSTANCIAL
Antes de comercializar um alimento transgnico, avaliam-se os riscos que este apresenta para os
seres humanos, os animais e o ambiente.
Assim como no h cidade segura, h cidades mais seguras que outras. O conceito de segurana
se estabelece sempre em relao a algum marco de referncia. Quando se trata de segurana
alimentar, o referencial o alimento j conhecido e consumido habitualmente. Por isso, antes de
chegar ao mercado, os aditivos, os conservantes e os corantes convencionais novos esto sujeitos
aprovao. Assim como qualquer novo ingrediente de origem biotecnolgica.
Um alimento originado por biotecnologia moderna to seguro para o consumo quanto um
alimento que tenha a mesma composio, as mesmas caractersticas nutritivas e um histrico de uso
seguro. Esse o denominado princpio de equivalncia substancial, admitido por numerosas
organizaes internacionais como FAO (Food and Agriculture Organization), WHO (World Health
Organization), OECD (Organization for Economic Cooperation and Development), ILSI (International
Life Science Institute). O princpio d toda a importncia ao produto final e no tecnologia aplicada
para sua obteno.
A AVALIAO DE RISCOS
No possvel dizer que todos os alimentos transgnicos so seguros nem sequer este alimento
transgnico seguro. S podemos afirmar que os alimentos transgnicos podem ser seguros ou
no e que determinado alimento transgnico to seguro quanto o seu equivalente. A anlise
ter que ser feita caso a caso.
Por exemplo, o amido de uma batata resistente a vrus idntico ao amido de uma batata
qualquer. Porque o amido um carboidrato purificado, sem DNA nem protena da planta da qual foi
extrado. O mesmo raciocnio pode ser feito em relao ao leo de canola ou de soja. J no caso da
torta de soja ou da espiga de milho, os genes inseridos sintetizam protenas e ambos se encontram
no produto final, por conseguinte, deve-se analisar se estes podem ter algum efeito no organismo
que os ingere.
Todos os parmetros anteriormente citados tero que ser avaliados: a construo do transgene,
os efeitos devidos presena do transgene (eventualmente, substncias txicas ou alergnicas), o
valor nutritivo e, tambm, os efeitos no previstos devidos presena do transgene. E como em dois
organismos pode-se inserir o mesmo gene em diferentes lugares e de diferentes modos, cada evento
dever ser analisado separadamente.
196
197
ROTULO E INFORMAO
Quando se trata de escolher entre dois alimentos, basta recorrer nossa percepo sensorial ou,
ainda, nossa experincia pessoal. Nenhuma das duas permite reconhecer a presena de
ingredientes transgnicos, ou de origem transgnica, nos alimentos.
Em funo da resistncia de alguns grupos de consumidores, a rotulagem pareceria a sada mais
lgica para informar de maneira honesta, exata e completa sobre os produtos das prateleiras.
Vimos no Captulo 13 que os produtores de sementes comerciais admitem como aceitvel uma
contaminao de 1% entre as variedades convencionais. Essa contaminao tambm inevitvel
quando coexistem plantaes transgnicas e convencionais. Por conseguinte, o limite de 1% redefine
o nvel de pureza de um ingrediente de origem vegetal, admitindo-se que todo valor inferior a esse
limite pode ser o resultado de uma contaminao acidental.
Sendo assim, o consumidor pode comprar um produto com mais de 1% de ingredientes
transgnicos ou um produto convencional cuja composio conta mais de 99% de ingredientes no
transgnicos. Em outras palavras, o rtulo no garante ao consumidor a ausncia de transgnicos.
Finalmente, cabe refletir sobre o significado de um rtulo para a maioria dos consumidores, e se
a escolha entre um produto e outro no depender essencialmente do preo e do marketing.
Somente o processo educativo pode dar populao os elementos bsicos para formar uma opinio
informada e responsvel e fazer suas escolhas.
O RASTREAMENTO DE UM TRANSGENE
Em um mundo globalizado, a variedade de regulamentos e de modalidades de rotulagem um fator
de complicao das transaes comerciais, em que a qualidade de um produto pode ter que ser
definida em relao presena ou ausncia de um transgene.
A aceitao dos transgnicos varia de um pas para outro e, tambm, entre diversos grupos de
consumidores. Por isso importante contar com formas de rastreamento como a tcnica da PCR
(reao em cadeia da polimerase), que pode ser aplicada em diferentes modalidades:
Testes qualitativos, para reconhecer a presena ou ausncia do transgene.
Testes semiquantitativos, em que a presena ou ausncia do transgene determinada em funo de
um limite como 1%, por exemplo.
Testes quantitativos, que fornecem informao sobre a quantidade do transgene por comparao
com amostras de referncia com concentraes conhecidas. A tcnica permite identificar DNA
exgeno em uma quantidade de 0,1% (1 grama em 1 quilograma), mas algumas variantes
extremamente sensveis reconhecem a presena de 0,001% do transgene.
Observe-se que, para aplicar estes testes, se precisa de informao sobre as sequncias do
transgene. Uma forma de simplific-los seria a incluso em todas as construes genticas de uma
sequncia conhecida. Esta funcionaria como uma etiqueta molecular, facilitando a identificao de
qualquer transgene.
Por outro lado, nem sempre a PCR informativa. Em amostras de gros ou alimentos
processados, o DNA pode estar quase totalmente degradado. Nesse caso, necessrio saber quais as
transformaes que o produto sofreu e estabelecer protocolos adequados. Existem mtodos
imunolgicos (Western Blot, ELISA) que permitem detectar a protena sintetizada pelo transgene e
eventualmente estimar a quantidade presente. Contudo, o custo de todos esses testes alto e ser
pago pelo consumidor.
198
AS DOENAS INFECCIOSAS
O cultivo de plantas e a domesticao de animais aumentaram a disponibilidade de alimentos e,
como consequncia, a densidade das populaes humanas e sua sedentarizao. Essas condies
possibilitaram a passagem de germes dos animais domesticados ao homem, originando doenas
como a varola, o sarampo e a gripe.
No sculo XIX, mais de 80% das crianas morriam de doena antes dos 10 anos de idade. Hoje,
na maioria dos pases, elas esto protegidas por programas de vacinao sistemtica que as
imunizam contra tuberculose, hepatite B, poliomielite, difteria, ttano, coqueluche, meningite,
sarampo, rubola, caxumba e infeces por rotavrus e pneumococos.
Uma vacina um produto destinado a estimular o sistema imune de maneira a prevenir ou
controlar uma infeco. A vacinao chega s crianas e aos grupos de pessoas sujeitos a maiores
riscos, como as mulheres (sarampo e rubola), os maiores de 60 anos (gripe, pneumonias) e os
profissionais de sade (hepatite B, antraz). Tambm resguarda os residentes em determinadas reas
e os viajantes (febre amarela).
Por outro lado, a vacinao dos animais resulta duplamente eficiente, porque alm de proteglos da doena, quebra o elo de transmisso ao homem. Pode-se dizer que nos duzentos anos que nos
separam de Jenner, o descobridor da primeira vacina antivarilica, temos alcanado o sucesso na
preveno de um bom nmero de doenas infecciosas.
A melhora das condies econmicas de uma populao repercute na sade da mesma e,
inversamente, diminuindo a doena e suas sequelas de invalidez ou morte prematura, d-se s
pessoas a possibilidade de melhorar suas condies de vida. O custo de implantao de um sistema
de vacinaes baixo, porque a proteo atinge no s a pessoa que as recebe como os que entram
em contato com ela.
Em uma variante do velho ditado prevenir melhor que curar, segundo a WHO (Organizao
Mundial da Sade; do ingls, World Health Organization), o maior impacto na rea de sade se
consegue com gua limpa e vacinas. Lamentavelmente, ainda morrem anualmente dois milhes de
crianas de doenas para as quais temos vacinas que no chegam at elas, devido aos conflitos
armados e dificuldade de acesso aos centros de sade. E ainda no temos vacinas para doenas
como o dengue, a malria ou para o HIV/AIDS.
A AQUISIO DE IMUNIDADE
Microrganismos infecciosos, suas molculas e substncias qumicas so antgenos. Tambm podem
se comportar como antgenos as clulas de um organismo transplantadas a outro e materiais como o
plen, pelos de animais e alguns alimentos nas pessoas sensibilizadas.
No primeiro contato com um antgeno estranho, o organismo reage com uma resposta
imunolgica primria de intensidade baixa e curta durao, acompanhada de alguns sintomas como
febre, dor de cabea, erupo cutnea. Essa primeira resposta est acompanhada da aquisio de
uma memria imunolgica que facilitar a eliminao do antgeno estranho. A resposta secundria
envolve numerosas clulas e molculas e se caracteriza por ser rpida, intensa e duradoura (Figura
17.1).
Intensidade da
resposta imune
Semanas
Primeiro contato
com o patgeno
(antgeno)
Segundo contato
com o patgeno
(antgeno)
Antgeno
Linfcitos T citotxicos
Linfcitos T auxiliadores
Clulas de memria
Eliminam as clulas infectadas
200
Linfcitos B
Sntese de
anticorpos
Neutralizam ou marcam o antgeno
dando incio a sua eliminao
201
Gene codificador
do antgeno de
superfcie HBsAg
Sntese do
antgeno
Vacina
Levedura
202
Levedura transformada
As vacinas recombinantes
A tecnologia do DNA-recombinante deu tambm um grande impulso produo de vacinas de
subunidades ao possibilitar a produo do antgeno por um microrganismo transformado que possa
ser cultivado sem riscos em um fermentador (Escherichia coli, Saccharomyces cerevisiae, Picchia
pastoris).
O primeiro xito alcanado foi com a vacina contra a hepatite B (Figura 17.3). Encontra-se em
fase experimental uma vacina contra o HIV/AIDS, assim como outra contra a malria. Contudo, as
vacinas de subunidades recombinantes esto limitadas produo de antgenos de tipo proteico.
As vacinas conjugadas
Alguns microrganismos (pneumococos, meningococos) se protegem com uma cpsula de
polissacardeos que dificulta sua identificao pelo sistema imune ainda imaturo de uma criana. As
novas tecnologias possibilitaram a associao de um toxoide s subunidades de polissacardeo, de
maneira a estimular a resposta imune e o reconhecimento dos antgenos capsulares.
Estas vacinas de antgenos conjugados so utilizadas na imunizao contra o Haemophilus
influenzae B (meningite) e o Streptococcus pneumoniae ou pneumococo. As vacinas contra este
ltimo so modificadas frequentemente, adicionando outros antgenos capsulares das mais de 80
linhagens que causam pneumonia em seres humanos.
As vacinas vetorizadas
Outro tipo interessante de vacinas so as vectorizadas, em que o gene codificador do antgeno
transferido a um microrganismo incuo (bactria ou vrus). Ao infetar o hospedeiro, o vetor se
multiplica e comea a produzir o antgeno, induzindo a resposta imune contra o patgeno. Com uma
vacina deste tipo imunizam-se as raposas, atualmente um dos principais elos na transmisso de raiva
na Europa.
Em um segundo tipo de vacinas vetorizadas, o vetor no se multiplica no hospedeiro, agindo
como seringa molecular para introduzir, na clula, o gene codificador do antgeno. Um vetor deste
tipo, por exemplo, o canarypox, que se multiplica em aves, exclusivamente. As vacinas vetorizadas
se encontram em fase experimental, no havendo ainda nenhuma aprovada para uso humano.
A TERCEIRA GERAO
A tecnologia mais promissora parece ser a das vacinas genticas, tambm denominadas vacinas de
DNA nu. Estas consistem de um vetor de expresso com uma construo gnica que inclui o gene
codificador do antgeno. Injetado diretamente no msculo, o DNA ir penetrar nas clulas
apresentadoras de antgeno (clulas dendrticas). Estas migraro at os rgos linfoides, onde
sintetizaro o antgeno, estimulando uma resposta imune de tipo celular que permitir imunizar o
organismo hospedeiro.
Esta tecnologia deve resolver vrios problemas adicionais. Como proteger o DNA, para que no
seja degradado ao ser fagocitado pela clula apresentadora do antgeno? Como aplicar a vacina, por
biolstica ou eletroporao? Como limitar a expresso do gene transfectado s clulas
apresentadoras do antgeno dos tecidos? Persistem ainda algumas dvidas em relao ao risco do
DNA se integrar no genoma da clula transfectada, ativando oncogenes ou desativando genes
supressores de tumor.
203
Esta tecnologia ter uma vantagem fundamental por ser um mtodo genrico que facilita o
desenvolvimento e produo de novas vacinas (Figura 17.4). Estas podero ser elaboradas
substituindo um gene por outro no cassete de expresso gnica, o que diminuiria os custos e o
tempo necessrio para responder a uma emergncia sanitria. Tambm se poderia conseguir uma
supervacina com vrios genes codificadores de antgenos, capaz de imunizar o organismo contra
vrias doenas simultaneamente. Por outro lado, as vacinas de DNA estimulam ambas as respostas,
humoral e mediada por clulas.
Na rea veterinria, j foram aprovadas nos Estados Unidos uma vacina de DNA contra o vrus
IHNV, causante da necrose hematopoitica em trutas e salmes, e outra contra o vrus do oeste do
Nilo, que ataca os equinos. Na rea humana, ainda em fase experimental ou em testes clnicos, se
encontram em andamento vrias vacinas deste tipo contra HIV/AIDS, malria, herpes, tuberculose,
hepatite B, influenza, rotavrus etc.
Tipos de vacinas
V. patognico
V. relacionado
V. atenuado
V. morto
Subunidades
Recombinante
Transfeco
Linfcitos B e T
Doena e
recuperao
Imunidade
adquirida
(espontnea)
204
Imunidade
adquirida
(artificial)
A PRODUO DE VACINAS
PESQUISA E DESENVOLVIMENTO
Antes de comercializar uma vacina, existem certas etapas que devem ser cumpridas. A primeira,
exploratria e pr-clnica, tem uma durao de 3 a 6 anos e se inicia nas bancadas de laboratrio com
experimentos que utilizam cultivos de clulas ou de tecidos. Estes estudos permitem selecionar o
melhor candidato vacinal. Sua capacidade de imunizar um ser vivo comprovada em diversos testes
com animais de laboratrio (camundongos, cobaias ou macacos). Se os resultados forem
satisfatrios, o candidato vacinal poder passar a uma etapa clnica e ser testado em seres humanos.
Os estudos clnicos se iniciam em um grupo de 10 a 100 voluntrios adultos, monitorados bem
de perto, a fim de verificar a ausncia de toxicidade do candidato vacinal e sua capacidade de
imunizar um ser humano. Na segunda fase, que inclui de 100 a 3.000 pessoas da populao alvo, os
testes focalizam as dosagens necessrias para a imunizao. A terceira fase, que envolve de 3.000 a
40.000 pessoas, visa comprovar a eficincia do candidato vacinal em proteger os indivduos
vacinados contra a doena. Nesta fase, compara-se a reduo da incidncia da doena em uma
populao vacinada em relao a uma populao no vacinada. Tambm so identificados os efeitos
adversos. A durao total dos estudos clnicos de 6 a 8 anos para as vacinas humanas.
As pesquisas com seres humanos e, por conseguinte, todos os testes clnicos, devem ser
desenvolvidos dentro do marco tico elaborado pelo tribunal de Nuremberg, por ocasio do
julgamento de vinte mdicos condenados como criminosos de guerra, devido aos brutais
experimentos realizados com prisioneiros durante a Segunda Guerra Mundial.
Segundo o Cdigo de Nuremberg (1949), os experimentos em seres humanos devem visar o
bem da sociedade e serem levados a cabo por pessoas cientificamente qualificadas. Os participantes
recebero todas as explicaes necessrias antes de dar livremente o seu consentimento. As
experincias sero a continuao de outras que, realizadas em modelos animais, permitam prever
um resultado tal que justifique a incluso de testes em seres humanos. O sofrimento mental e fsico
ser evitado, e as pessoas recebero proteo em caso de ocorrer algum efeito adverso.
Nos testes clnicos de avaliao de uma nova vacina participam voluntariamente pessoas que
so informadas sobre os riscos e benefcios de sua participao. Contudo, h algumas dvidas sobre
a validao do consentimento informado quando os testes so realizados em populaes de escassos
recursos, com baixos nveis de instruo.
Se os resultados dos estudos clnicos no forem satisfatrios, ser necessria a realizao de
estudos adicionais, chegando, eventualmente, a interromper os estudos clnicos e proceder escolha
de outro candidato vacinal. Contudo, uma vez comprovado que a vacina segura e eficiente, a
indstria farmacutica poder solicitar aos rgos competentes a licena para comercializar o
produto. Esta etapa dura de 12 a 18 meses.
A liberao da vacina marca o incio do processo de manufatura e da fase de vigilncia
farmacolgica, um monitoramento amplo e rigoroso que coleta toda informao sobre algum efeito
adverso que possa ocorrer. Em 1999, por exemplo, uma primeira vacina contra o rotavrus teve que
ser retirada do mercado em consequncia de alguns casos de intususcepo relacionados com sua
aplicao e identificados nesta etapa, a quarta dos estudos clnicos.
Atualmente, vrios testes clnicos em seres humanos esto sendo realizados com vacinas contra
diferentes doenas, tais como HIV/AIDS, malria, dengue, clera etc.
As vacinas veterinrias passam pelas mesmas etapas, mas as exigncias so menores. possvel
simplificar os testes com animais de laboratrio e testar o candidato vacinal no animal para o qual
destinado o produto. O nmero de indivduos necessrios para os testes clnicos tambm menor.
205
ASPECTOS TECNOLGICOS
A produo de vacinas uma tarefa delicada, e todos os cuidados devem ser extremados. Cada lote
da vacina deve passar por controles estritos a fim de garantir a qualidade e manter a credibilidade
no s da indstria, mas da prpria vacinao.
A vacina Salk contra a poliomielite, preparada com vrus inativados, aplicada correntemente
em vrios pases, sendo considerada hoje uma das vacinas mais seguras. Porm, em 1954, duas
semanas depois de liberada, esta induziu 260 casos de plio, inclusive 10 mortes. O acidente, devido
inativao incompleta de algumas partculas virais, resultou de um problema na fabricao da
vacina no Laboratrio Cutter (Estados Unidos).
Uma vacina deve reunir vrias qualidades, principalmente eficincia, pureza, segurana e baixo
custo. O processo industrial varia em funo do microrganismo utilizado para a produo de uma
vacina, e responde a critrios estritos de qualidade (BPL ou Boas Prticas de Laboratrio; BPF ou Boas
Prticas de Fabricao). Atualmente, o controle de qualidade ocupa 70% do tempo dedicado
produo de uma vacina.
As bactrias se multiplicam em biorreatores, cujo volume depender da produtividade do
prprio processo fermentativo e das concentraes obtidas (bactrias, antgenos ou toxinas), assim
como do tratamento posterior para a obteno de antgenos ou de toxoides.
Os vrus, parasitas obrigatrios, precisam de clulas para se multiplicar. Tradicionalmente,
utilizam-se a pele de bezerro e os ovos de galinha, mas a tendncia serem substitudos por culturas
celulares, possibilitando o desenvolvimento de vacinas virais para uso humano (poliomielite,
sarampo, rubola, influenza, caxumba, raiva) e veterinrio (febre aftosa, raiva, encefalite equina,
doena de Mareck e de Newcastle etc.). Do ponto de vista tecnolgico, as mais complicadas so as
vacinas combinadas.
Vacinas antibacterianas podem ser preparadas em grandes quantidades, com equipamento
relativamente simples, enquanto as virais precisam de aparelhos sofisticados e, em muitos casos, de
um laboratrio de cultura de tecidos. As protenas recombinantes de vrus ou bactrias so
produzidas em biorreatores (leveduras) ou em cultivos celulares. Ao processo de extrao seguem-se
vrias operaes de purificao por tcnicas complexas (ultrafiltrao, cromatografia em coluna).
Alm do antgeno, na formulao de uma vacina incluem-se outras substncias: os adjuvantes
permitem dosagens menores por serem capazes de estimular a resposta imune, os estabilizantes
impedem as alteraes devidas ao calor, luz ou umidade, os preservantes conservam os frascos
com mltiplas doses.
Uma das tendncias atuais na administrao de vacinas reduzir o nmero de doses mediante a
imunizao simultnea para vrias doenas em uma mesma injeo (trplice viral ou trplice
bacteriana). Tambm se d preferncia a sistemas que diminuam a necessidade de refrigerao, j
que esta contribui com 15% dos custos dos programas de vacinao.
Outras novidades viro da procura de novas formas de aplicao que substituam o uso de
seringas, tais como pistolas, gis, adesivos cutneos, cpsulas, tabletes, inaladores e sprays nasais.
Estes ltimos comearam a ser utilizados na aplicao de vacinas contra a gripe (FluMist, nos Estados
Unidos; NasVax, em Israel). As vacinas orais tm importantes aplicaes na rea veterinria.
Plantas e animais transgnicos produtores de antgenos podero revolucionar alguns aspectos
da produo de vacinas. A ideia de ter vacinas comestveis e de poder vacinar as crianas com uma
banana em vez de uma injeo muito sedutora. Contudo, alguns problemas de segurana exigem
ateno, como, por exemplo, o risco de se misturar bananas-vacina e bananas-alimento,
contaminando os alimentos ou dificultando o reconhecimento de um medicamento como tal.
Provavelmente, os antgenos sero extrados e administrados em tabletes ou cpsulas.
206
Em 2005, Dow AgroSciences registrou nos Estados Unidos uma vacina para a doena de
Newcastle em aves, produzida na planta aqutica Lemna. Encontra-se em andamento uma nova
vacina contra a febre amarela em plantas de tabaco hidropnicas, pela Fundao Oswaldo Cruz
(Fiocruz) em parceria com instituies dos Estados Unidos.
ASPECTOS ECONMICOS
A produo de vacinas uma atividade menos rentvel que a produo de medicamentos. Contudo,
a chegada das novas tecnologias com base biolgica despertou novamente o interesse do setor
farmacutico. Atualmente, cinco grandes empresas (Sanofi-Pasteur, Merck, GlaxoSmithKline, Wyeth
e Novartis) concentram de 80% a 90% do mercado global de vacinas humanas, estimado em US$ 25
bilhes em 2015. O resto est ocupado por 200 a 250 empresas que desenvolvem mais de 600
produtos.
O processo de desenvolvimento de uma nova vacina leva de 14 a 25 anos, a um custo que pode
variar entre US$ 300 milhes e US$ 1 bilho. Alguns produtos, como a vacina antimeningococo
Prevnar, atingiram nveis de vendas que superam o bilho de dlares.
Estima-se que o mercado aumentar significativamente nos prximos anos, em funo do
crescimento do setor adulto e especialmente das vacinas teraputicas, que sero analisadas no
Captulo 20. Tambm aquecero o mercado produtos novos, tais como as vacinas para a gripe
(influenza) e as vacinas que protejam o turista (febre amarela) ou diminuam o abuso de drogas
(nicotina).
Em meio a numerosas crises econmicas, vrios pases latino-americanos (Argentina, Chile, por
exemplo) descuidaram de suas estruturas cientficas e tecnolgicas e passaram a importar as vacinas
necessrias para a populao. No entanto, e por diferentes motivos, depois de vrias dcadas de
retrao na rea de produo de vacinas, esta comea a ser considerada novamente uma rea
estratgica.
Para os pases em desenvolvimento, o estmulo produo nacional de vacinas fundamental
como parte das obrigaes frente a sua populao e, em termos de sade pblica, para manter sua
independncia nesta rea. Trata-se de um setor que no pode ser negligenciado, observando-se
indcios slidos de mobilizao para recompor as estruturas produtivas.
Alguns pases, como Brasil, China e ndia, contam com instituies de pesquisa e
desenvolvimento para a produo de imunobiolgicos, sendo frequentes as parcerias com as
grandes empresas farmacuticas. Fundaes privadas, como a Bill & Melinda Gates Foundation,
fornecem fundos em prol de melhores e novas vacinas que protejam as crianas das doenas. Para
organizaes internacionais como a WHO (World Health Organization), a vacina a mais simples das
medidas preventivas possveis na rea de sade.
Nos prximos anos, haver progressos na preparao das vacinas preventivas e no
desenvolvimento de produtos novos, como as vacinas teraputicas para alguns tipos de cncer ou a
doena de Alzheimer. Entretanto, esperam-se vacinas novas ou melhores contra as doenas que
afetam um nmero altssimo de pessoas, tais como HIV/AIDS, malria, dengue e tuberculose.
UM SETOR ESTRATGICO PARA A SOCIEDADE
No Brasil, onde existe uma tradio de um sculo na produo de imunobiolgicos (vacinas, soros,
hemoderivados e reativos para diagnstico), as vendas chegam a US$ 600 milhes por ano, o que
representa 3% do mercado da indstria farmacutica.
207
VACINAS
Instituto Butantan
Laboratrio BioManguinhos
Poliomielite
Trplice viral (sarampo, caxumba e rubola)
Meningites meningoccicas
(A/C, por Haemophilus influenzae, HIB e HIB/DTP)
Febre amarela
Tecpar
Antituberculose (BCG)
At a dcada de 1960, muitas vacinas humanas e veterinrias eram fabricadas no pas. A perda da
autossuficincia criou uma situao crtica quando, em incios da dcada de 1980, uma multinacional
retirou-se do mercado, deixando a populao em risco de ficar sem vacina trplice, soros antitxicos
e antiofdicos. Evidenciou-se nessa ocasio que a produo de vacinas um setor estratgico, ao qual
a sociedade deve ter o acesso garantido.
O Programa de Autossuficincia Nacional de Imunobiolgicos (PASNI) de 1985 reverteu essa
situao mediante uma estratgia de substituio das importaes que estimulou a modernizao
das instalaes e a incorporao de novas tecnologias nos sete laboratrios oficiais: Instituto de
Tecnologia em Imunobiolgicos (Biomanguinhos, Fiocruz, RJ), Instituto Vital Brazil (IVB,RJ), Instituto
de Tecnologia do Paran (Tecpar, PR), Fundao Ezequiel Dias (Funed, MG), Fundao Ataulfo de
Paiva (FAP,RJ) e Instituto de Pesquisas Biolgicas (IPB, RS). Atualmente, o Instituto Butantan (SP) e
BioManguinhos (RJ) produzem 11 tipos de vacinas e respondem por 70% das vacinas distribudas
pelo servio pblico (Tabela 17.1).
Vrias vacinas esto sendo desenvolvidas nas prprias instituies citadas anteriormente, e
tambm em parcerias entre elas ou com laboratrios estrangeiros (Sanofi Pasteur, GlaxoSmithKline,
Instituto Finlay etc.). Algumas das vacinas resultantes desses convnios protegem a populao de
sarampo, caxumba e rubola (trplice viral), influenza, rotavrus, raiva (cultivo do vrus em clulas
Vero) etc.
Os diferentes acordos de cooperao internacional entre os pases latino-americanos tambm
tero uma importncia fundamental para o desenvolvimento de polticas de sade pblica que
garantam populao o acesso s vacinas.
O ROL DAS VACINAS NA ERRADICAO DA DOENA
De um modo geral, as vacinas protegem de 80% a 95% das pessoas imunizadas, e os efeitos adversos
que elas podem apresentar ocorrem em frequncias muito baixas. O calendrio de imunizaes
depende das autoridades nacionais e, em vrios pases, a vacinao no obrigatria.
O impacto das vacinas na morbidade infantil relega ao passado algumas das temveis doenas
que assolaram o sculo XX (difteria, coqueluche ou pertussis, ttano, poliomielite, meningite,
caxumba, sarampo e rubola). Estima-se que a cooperao entre a indstria, os governos e as
entidades no lucrativas poderia salvar 10 milhes de vidas entre 2010 e 2020.
208
209
na Iugoslvia (1972) foi necessrio complementar as medidas com uma vacinao em massa. O
ltimo caso de varola ocorreu na Somlia em 1977.
Em 1978, o escapamento do vrus de um laboratrio da Universidade de Birmingham (Reino
Unido) causou a morte de duas pessoas. Com a confirmao da erradicao da varola em 1979, o
vrus da varola comeou a ser eliminado dos laboratrios. Dois estoques virais foram conservados
preventivamente, um deles no CDC (Center for Disease Control and Prevention, Atlanta, Estados
Unidos) e no VECTRO (Instituto para Preparaes Virais, Moscou, Rssia). Apesar de estar prevista
sua destruio no ano 2000, esta no ocorreu.
A mera possibilidade de um ato de terrorismo assustadora. No se pode afirmar que no
existe algum estoque de vrus em outro lugar. Em caso de um surto, os mdicos teriam dificuldades
em diagnosticar uma doena restrita aos livros. A populao deixou de ser vacinada em fins da
dcada de 1970, de modo que uma boa parte da populao nunca foi imunizada. Sem doses de
reforo, o restante pode ter perdido a imunidade. A validade de um pequeno estoque de vacinas que
sobrou de dcadas atrs est comprometida. Existem contraindicaes para a aplicao da vacina em
pessoas com eczemas ou imunodeprimidas, que hoje so muito mais frequentes que no incio do
sculo XX.
Mesmo tendo erradicado a varola, precisamos de vacinas antivarilicas eficientes e seguras,
formuladas mediante as novas tecnologias. Algumas j se encontram na fase dos estudos clnicos.
O CASO DA POLIOMIELITE
A poliomielite ou paralisia infantil uma doena causada por um enterovrus que se transmite pela
gua. O perodo de incubao de 4 a 35 dias, e 10% das pessoas infectadas desenvolvem os
seguintes sintomas: febre, fadiga, dor de cabea, vmitos, constipao ou diarreia, rigidez na nuca e
dor nas extremidades.
Em aproximadamente 1% dos casos, o vrus da poliomielite passa do intestino para a corrente
sangunea e invade o sistema nervoso central, onde se multiplica destruindo os neurnios motores e
causando a paralisia das extremidades. Estas pessoas desenvolvem a forma paraltica da doena, e,
nos casos em que o vrus se aloja no bulbo, os pacientes precisam de ajuda mecnica para respirar. A
doena pode deixar sequelas motoras permanentes (SPP ou sndrome post-plio).
Apesar de haver evidncias da doena no Antigo Egito, os primeiros surtos epidmicos
ocorreram a fins do sculo XIX. Em 1908, depois de inocular macacos com o tecido nervoso de um
paciente morto, K. Landsteiner confirmou que a poliomielite uma doena infecciosa.
Na primeira metade do sculo XX, as epidemias de poliomielite deixaram numerosas vtimas,
principalmente entre as crianas, mas tambm entre os adultos como, por exemplo, Franklin Delano
Roosevelt, presidente dos Estados Unidos.
Suspeita-se que as melhores condies higinicas do sculo XX diminuram o contato prematuro
da populao com o vrus. Porm, a exposio na idade escolar de um grupo vulnervel ao vrus teria
favorecido a apario de surtos. Na dcada de 1950, a doena era aterradora. Havendo um surto, as
escolas fechavam e as crianas eram privadas do contato entre elas, permanecendo isoladas at o
perigo passar. A notcia de uma vacina teve uma repercusso extraordinria.
Em 1954 comeou a ser aplicada a vacina de vrus inativados de Jonas Salk (IPV, do ingls,
injetable polio vaccine), que era elaborada com trs tipos de poliovrus em rim de macaco,
inativando-o posteriormente com formalina. Em 1963, houve uma segunda opo, a vacina de vrus
atenuados de Albert Sabin (OPV, do ingls oral polio vaccine). Nos anos posteriores, devido a
modificaes nos processos produtivos, a eficincia de ambas as vacinas aumentou
significativamente.
210
Ambas apresentam vantagens e desvantagens. Para ser aplicada, a IPV demanda agulhas e
seringas estreis, um procedimento mais caro e complicado que a ingesto por gotas da OPV. Em
contrapartida, por ser uma vacina de vrus atenuados, a OPV exige a manuteno da cadeia de frio, o
que a IPV dispensa.
Do ponto de vista da eficincia, a OPV confere uma imunidade mais ampla porque abrange a
mucosa digestiva, impedindo a entrada do vrus selvagem no organismo e a infeco das clulas
nervosas. Porm, como o vrus atenuado eliminado nas fezes e permanece no ambiente, a OPV
acaba por atingir outras pessoas, afetando os no vacinados e os imunodeprimidos presentes no
entorno. Por isso, alguns pases preferem a IPV e outros a OPV.
Novas vacinas esto sendo pesquisadas como, por exemplo, uma de tipo recombinante que leva
o gene codificador de uma protena do capsdeo viral, inserido em Escherichia coli. A sntese dessa
protena por uma bactria, que coloniza normalmente o intestino, possibilitaria a imunizao do
hospedeiro.
Apesar do sucesso alcanado pela vacinao, a erradicao da doena parece ser bem mais
difcil do que o esperado. A plio subsiste ainda em algumas regies da frica, do subcontinente
indiano e do extremo Oriente, onde as campanhas de vacinao so complexas e muitas vezes
interrompidas por conflitos blicos.
Um surto da doena atingiu um grupo que se ope vacinao por motivos religiosos,
mostrando que o vrus selvagem continua presente no ambiente (Pases Baixos, 1992-1993). Em
2000, a plio reapareceu no Haiti e na Repblica Dominicana. Na ocasio, revelou-se que o vrus
atenuado pode reverter a sua forma patognica, e que, mesmo tendo desaparecido a doena, a
vacinao ter que ser mantida. Em 2004, com a apario de um novo surto de plio em pases do
oeste africano, confirmou-se que o objetivo ainda se encontra distante.
O CASO DA INFLUENZA
A influenza ou gripe uma doena causada pelo vrus da influenza e apresenta os seguintes
sintomas: febre, dores musculares, garganta inflamada, fadiga e dor de cabea.
O material gentico do vrus RNA, que est rodeado por um capsdeo proteico e um envelope
derivado da membrana celular do hospedeiro. O RNA confere a seu portador uma enorme
variabilidade porque, diferente do DNA, os erros de replicao no so reparados por nenhum
mecanismo celular.
Em funo das protenas do capsdeo, os vrus da influenza so classificados em trs categorias
(A, B e C). As variantes de duas protenas do envelope, a hemaglutinina (HA) e a neuraminidase (NA)
determinam os diferentes subtipos como, por exemplo, H1N1, H5N1 etc.
Os vrus da influenza da categoria A so os mais perigosos porque se multiplicam tanto no
homem como em outras espcies (aves, sunos, cachorros, cavalos). Ao pular de uma espcie a outra,
o material gentico de diferente origem recombina formando vrus com caractersticas novas. Para
desencadear uma pandemia necessrio que esse vrus infecte o homem e sofra uma mutao que
possibilite a transmisso pessoa a pessoa.
Ao longo do sculo XX, vrias pandemias de gripe assolaram a terra. Em 1918, um surto de gripe
sobreveio na Espanha, de onde se espalhou pelo mundo todo causando a morte de 40 a 70 milhes
de pessoas. O vrus H1N1 da gripe espanhola circulou durante vrias dcadas, embora tenha perdido
parte de sua patogenicidade a partir de 1920.
Em 1957, uma segunda pandemia originou-se na China. A gripe asitica, devida ao subtipo
H2N2, causou a morte de 2 milhes de pessoas. Poucos anos mais tarde, em 1968, o subtipo H3N2
apareceu em Hong Kong e alastrou-se pelo mundo, deixando 47.000 mortos.
211
A gripe aviria (subtipo H5N1) surgiu na sia, em 1997. Embora a transmisso tenha sempre
ocorrido no sentido ave-ave e ave-homem, milhares de aves foram sacrificadas durante os surtos de
2003 e 2004 devido ao temor de uma mutao que possibilitasse a transmisso do homem ao
homem.
O H5N1 traz uma limitao em relao aos mtodos tradicionais de produo de vacinas, j que
estes utilizam embries de frango. Selecionando a informao gentica relevante do vrus e
transferindo-a para um vrus de laboratrio obtm-se um prottipo viral para a produo da vacina.
Este rene a informao para estimular a resposta imune ao H5N1 e pode crescer em embries de
frango.
A gripe A (subtipo H1N1) ou gripe suna apareceu no Mxico em 2009. Diferentemente das
variantes anteriores, esta causou mais vtimas entre os jovens e as mulheres grvidas. A resistncia
dos mais velhos pode ser explicada por um contato prvio com vrus de tipo H1N1 que circularam
por um tempo na populao.
A existncia de medicamentos antivirais contribuiu para o controle da pandemia. Contudo, a
rpida mobilizao das autoridades nacionais e internacionais, assim como das empresas
farmacuticas, foi decisiva para a obteno de uma vacina adequada.
Durante esta ltima pandemia, algumas fraquezas foram expostas. Uma delas a dificuldade de
produzir rapidamente uma vacina em ovos embrionados, porque se estima que sejam necessrios
900 milhes para obter 300 milhes de doses da vacina. Em caso de urgncia, a produo em cultivos
celulares resultaria mais rpida.
Mutao do RNA e recombinao de RNAs de diferente origem so as duas estratgias que
explicam a enorme variabilidade do vrus da influenza e justificam a necessidade de mudar
continuamente os antgenos da vacina. O candidato vacinal de hoje pode ser incuo amanh, sendo
difcil prever contra quais antgenos do vrus dirigir a vacina. Por isso, as vacinas contra a gripe so
preparadas anualmente, escolhendo as linhagens que se supe causaro a prxima epidemia.
A AMEAA DAS DOENAS EMERGENTES
medida que eliminamos ou controlamos doenas, outras novas emergem e algumas das antigas
reaparecem. Os microrganismos adquirem resistncia aos medicamentos e a destruio de habitats
naturais deixa o homem a merc de agentes infecciosos com os quais no teve contato prvio. O
crescimento da populao, as mudanas climticas, o incremento das viagens internacionais e do
comrcio, assim como as mudanas comportamentais, so outros fatores determinantes para a
disperso de agentes infecciosos.
A gripe espanhola, a hepatite B, as febres hemorrgicas (Junin, Lassa, Marburg, Ebola etc.), a
doena de Lyme, a doena dos Legionrios, a AIDS (do ingls, agude immunodeficiency sindrome), a
Escherichia coli 0157:H7 contaminante dos alimentos, o vrus do Nilo ocidental, a BSE (encefalopatia
espongiforme bovina) e a dengue so alguns dos exemplos de doenas emergentes.
Vrias dessas doenas contam com testes diagnsticos, e, para algumas, j temos vacinas
(hepatite B, doena de Lyme). Mas, desde a descrio ou a identificao do patgeno
correspondente at a produo de uma vacina, passa um tempo considervel.
Por enquanto, a mais insidiosa talvez seja a HIV/AIDS, porque destri a capacidade do sistema
imune de responder a infeces oportunistas. Os primeiros casos apareceram em 1981 e se
estenderam rapidamente pela populao. Estima-se que 3,1 milhes de pessoas morreram e que 5
milhes foram contaminadas em 2002, chegando ao total de 42 milhes de pessoas atingidas.
Aproximadamente 90% das novas contaminaes ocorrem nos pases em desenvolvimento,
especialmente o sul da frica e a sia. No rasto da HIV/AIDS (e da adio a drogas injetveis), a
tuberculose reaparece com germes resistentes aos medicamentos.
212
eles obtiveram partculas virais. Recentemente, outro grupo de pesquisadores utilizou o mesmo
mtodo para sintetizar o vrus da gripe espanhola.
No fim do ano 2011, pesquisadores holandeses e norteamericanos noticiaram ter conseguido
manipular o vrus H5N1 em laboratrio, tornando-o facilmente transmissvel em seres humanos. O
trabalho, que poderia servir tanto para elaborar uma vacina como para criar uma arma letal, levanta
o problema da liberao dos dados da pesquisa que, normalmente, so compartilhados por
pesquisadores de todos os pases.
O perigo do bioterrorismo no deve ser subestimado. Denomina-se biosseguridade a nova
disciplina que lida com a utilizao inadequada do conhecimento biolgico e, particularmente com as
pesquisas consideradas de uso duplo.
214
OS TESTES DIAGNSTICOS
O reconhecimento dos sintomas de uma doena exige do mdico conhecimento e experincia. O
diagnstico estabelecido a partir de vrios elementos, tais como a histria clnica do paciente, a
anamnese, os exames fsicos e uma bateria de anlises e/ou testes laboratoriais.
Solicitados pelo mdico para monitorar o estado de sade do paciente, os testes de rastreio
identificam fatores qumicos, microbianos ou genticos que possam causar uma doena ou estar-lhe
associados. Constituem uma rotina que varia em funo do sexo e da idade do paciente. Os
resultados sero avaliados em relao a um conjunto de valores que considerado o normal, e
remetidos ao mdico como uma fonte objetiva de informao.
Geralmente realizados em amostras de sangue e de urina, o objetivo desses testes detectar
qualquer disfuno de maneira a induzir mudanas no estilo de vida do paciente e/ou iniciar
rapidamente um tratamento. Como exemplos, o hemograma, a anlise de urina, o lipidograma e,
tambm, a identificao do antgeno prosttico para diagnstico de cncer etc.
Qualquer negligncia em relao adoo dos testes adequados pode ter consequncias graves
para a sade pblica. Embora existisse no mercado um teste da empresa Abbott para o diagnstico
de HIV, em 1985 a Frana postergou o rastreio das doaes de sangue, em uma medida protecionista
visando favorecer o lanamento de um teste francs. Em poucos meses, 297 pessoas receberam
transfuses de sangue contaminado e trs ministros de Estado tiveram que comparecer na Justia
para responder pelo escndalo.
Inserida nos setores mdico e veterinrio, estima-se que a indstria de diagnsticos in vitro ter
um volume de vendas global de US$ 60 bilhes em 2014. O setor que cresce mais rapidamente o de
diagnsticos moleculares (doenas infecciosas e cardiovasculares, oncologia e farmacogentica), em
funo do crescimento dos mercados da Amrica Latina, do Leste Europeu, do Meio Oriente e do
Leste Asitico.
AS TENDNCIAS ATUAIS
Uma das tendncias atuais centralizar os testes diagnsticos em um ambiente automatizado, de
alta tecnologia, onde se integrem os reagentes, os instrumentos analticos e os produtos acessrios
de controle de qualidade. Em consequncia, as anlises clnicas esto se concentrando em umas
poucas empresas, com suficiente poder econmico para desenvolver a tecnologia e adquirir um
volume de amostras que justifique a utilizao desses sistemas robotizados.
Em outra vertente mercadolgica, kits comerciais relativamente simples permitem o diagnstico
de gravidez e o monitoramento de algumas condies crnicas como a diabete, e so vendidos nas
farmcias ou via Internet.
A construo de dispositivos miniaturizados de arrays moleculares de protenas, anticorpos ou
cidos nucleicos estimulou o desenvolvimento de vrias plataformas comerciais (Affymetrix, Illumina,
Agilent, Applied Biosystems, Incyte / Stanford etc.). A chegada de materiais e dispositivos construdos
em escala nanomtrica dever revolucionar os testes in vitro.
Copyright Maria Antonia Malajovich
Biotecnologia: ensino e divulgao (www.bteduc.bio.br)
DEFINIO
Sensibilidade
Especificidade
Exatido
Reprodutibilidade
216
217
MTODO INDIRETO
218
219
Tecido da paciente
Tecido controle
Extrao de mRNA
Extrao de mRNA
Preparao de cDNA
(transcriptase reversa)
Preparao de cDNA
(transcriptase reversa)
Varredura e leitura
Diagnstico
220
Tambm necessria a tipificao dos sistemas ABO e Rh antes de uma transfuso sangunea.
Esta interveno salva vidas em pacientes que sofreram uma hemorragia (acidente, cirurgia, doenas
digestivas etc.) ou que apresentam um quadro de anemia sria (quimioterapia, cncer, doenas
hematolgicas).
Nem sempre basta a tipificao dos antgenos ABO e RH da superfcie das hemcias, porque
existem vrios outros sistemas de grupos sanguneos que podem desencadear uma reao grave. Em
pacientes que tenham passado por uma gravidez ou uma transfuso prvia, os anticorpos a esses
sistemas so pesquisados mediante kits de hemcias especficas. A palavra final corresponde aos
testes de compatibilidade, em que se coloca o soro do receptor em presena das hemcias do
doador. Indispensveis na rotina de um banco de sangue, estes testes personalizados so realizados
por pessoal mdico ou tcnico.
Nos centros hospitalares que processam um nmero alto de amostras de sangue, os testes
sorolgicos clssicos em tubos de vidro esto sendo substitudos por novas tecnologias, em estaes
de trabalho automatizadas: Gel Tests para tipificao de hemcias, ACT (do ingls affinity column
technology) para identificar subclasses de imunoglobulinas em hemcias sensibilizadas, tecnologia
para pesquisa de anticorpos em placas de microtitulao.
OUTROS TECIDOS E RGOS
A rejeio de um rgo transplantado de uma pessoa a outra se deve incompatibilidade entre os
respectivos tecidos. Alm dos antgenos do grupo sanguneo (ABO), outros marcadores de identidade
tambm se expressam nas clulas de um organismo. O sistema imune os utiliza para diferenciar as
clulas que fazem parte do organismo (eu) das que no pertencem a ele (no eu).
Esses antgenos de identidade so codificados por um conjunto de genes estreitamente ligados,
localizados no cromossomo 6. Os genes HLA, HLB e HLC determinam os antgenos de classe I,
presentes em todas as clulas, excetuando as hemcias. J o locus HLD determina outros trs
antgenos (DR, DQ e DP), denominados de Classe II, que so encontrados em algumas clulas
(macrfagos, moncitos, clulas dendrticas e clulas endoteliais). Os de maior importncia clnica
so os antgenos de classe I codificados pelos alelos de HLA e HLB e os de classe II, relativos a DR.
FIGURA 18.8. O sistema HLA.
A herana dos hapltipos
222
A herana do sistema HLA segue um padro de codominncia, ou seja, ambos os alelos se expressam
nas clulas. Quando uma pessoa caracterizada como HLA - A1 A3 B8 B14 DR2 DR10, isto significa
que, em um cromossomo, leva os alelos A1 B8 DR2 herdados de um dos pais, e, no outro, A3 B14
DR10, herdados do outro. Por estarem estreitamente ligados, esses genes se transmitem em blocos,
denominados hapltipos (Figura 18.8).
Como esses genes contam com mais de 450 alelos, milhes de combinaes seriam possveis e
cada pessoa teria uma identidade nica. Contudo, alguns hapltipos so mais frequentes que outros,
especialmente em diferentes grupos raciais.
Para tipificar os tecidos, os antgenos celulares devem ser identificados mediante baterias de
anticorpos e instrumentao laboratorial. A incompatibilidade entre os linfcitos ou tecidos do
doador e os linfcitos do receptor evidenciada pela proliferao celular in vitro (reao mista).
Utiliza-se tambm a PCR para caracterizar os genes HLA-DP do doador e do receptor (testes de DNA).
Antes de um transplante, tambm estudada a compatibilidade entre o soro do receptor e os
tecidos do doador, para verificar a ausncia de anticorpos contra o rgo a transplantar
(crossmatch), que podem aparecer devido a gravidezes, transplantes anteriores ou transfuses.
A PRTICA FORENSE
Com exceo dos gmeos idnticos, nenhuma pessoa geneticamente idntica outra. Durante
quase um sculo, a identificao das pessoas dependeu das impresses digitais. E muitos crimes
foram resolvidos graas a estudos bioqumicos e imunolgicos, apesar das enormes dificuldades em
encontrar uma quantidade suficiente de material em estado de conservao adequado.
A anlise do DNA para a identificao das pessoas utilizada a partir da dcada de 1980, quando
A. Jeffreys idealizou a tcnica do Fingerprint, estabelecendo uma relao nica entre um indivduo e
sua sequncia gnica. A identificao recorre a pequenas sequncias no codificadoras dispersas no
DNA, denominadas VNTRs ou vinters (do ingls, variable-number tandem repeats). Essas sequncias
polimrficas repetem-se um nmero de vezes que pode variar de um cromossomo ao seu homlogo,
de modo que os fragmentos de restrio tero tamanhos diferentes (Figura 8.5).
Sondas genticas especficas identificam at 20 tipos diferentes de sequncias VNTRs. No gel de
eletroforese aparecer um padro de bandas individual, parecido com os cdigos de barras usados
no comrcio. Como a probabilidade de duas pessoas escolhidas ao acaso terem o mesmo perfil de
DNA menor a um em um trilho, o resultado praticamente nico para cada indivduo. Os VNTRs
tambm podem ser amplificados por PCR.
Na determinao da paternidade, os estudos de grupos sanguneos e de protenas do soro tm
sido complementados ou substitudos pelos testes de DNA, que se transformaram no eixo de varias
investigaes muito comentadas na mdia. No Brasil, o jogador de futebol Pel teve que reconhecer a
paternidade de Sandra Regina, e o menino Pedrinho, sequestrado na maternidade logo aps seu
nascimento pde, anos mais tarde, reencontrar sua verdadeira famlia.
Apesar das crticas levantadas em relao s possibilidades de erros laboratoriais devidos
contaminao de amostras, ao risco da participao de pessoal treinado inadequadamente e s
dificuldades de interpretar estatisticamente os dados, em poucos anos a anlise de DNA se
transformou em uma ferramenta indispensvel na prtica forense.
Depois de anos de mistrios e rumores, os cadveres enterrados em uma fossa comum perto de
Jekaterinburg foram reconhecidos, em 1994, como sendo os do tzar Nicolau II, sua famlia e
servidores, assassinados durante a Revoluo Russa (1918). Em 1992, os ossos encontrados, anos
antes, em uma tumba no Brasil, foram identificados como pertencentes ao comandante do campo
de extermnio de Auschwitz, Joseph Mengele, um dos homens mais procurados aps a Segunda
Guerra Mundial. Mais recentemente, nos Estados Unidos, uma mancha no vestido azul de uma
223
Um teste gentico pode no detectar todas as mutaes capazes de causar uma doena. Por outro
lado, sua sensibilidade depende da incluso da informao mais recente resultante da pesquisa
gentica.
Existem doenas genticas que aparecem em uma famlia devido a mutaes em algum gene
desconhecido, de modo que no possvel sua identificao. O caso no pode ser resolvido, a no
ser que se encontre uma ligao com outro gene prximo e bem conhecido, que funcionar como
um marcador. A transmisso do gene marcador permite inferir como transmitido o gene
desconhecido. Um estudo desenvolvido por 50 grupos de pesquisa (Wellcome Trust Case Control
Consortium) identificou recentemente 24 regies do genoma humano fortemente relacionadas com
7 doenas diferentes (Doena de Crohn, diabete tipo 1 e 2, doena cardiovascular, hipertenso,
artrite reumatoide e doena bipolar).
Tambm difcil determinar qual a contribuio dos genes para doenas que apresentam um
padro de herana complexo, com vrios genes interagindo com fatores ambientais. A no ser que
haja um gene com um efeito muito maior que os restantes, os testes genticos so de difcil
elaborao.
224
A presena de determinados alelos, como BRCA1 e BRCA2, est associada a uma predisposio
familiar ao cncer de mama. Contudo, esses alelos no so detectados na maioria dos outros casos
da mesma doena. Em outros termos, nem todas as doenas de origem gentica so familiares,
podendo aparecer devido a mutaes ou alteraes cromossmicas ocorridas ao longo da vida.
AS ESTRATGIAS SEGUIDAS
Apesar de suas limitaes, os testes genticos representam um avano significativo do ponto de vista
mdico e individual. Aplicados em qualquer momento da vida de uma pessoa, respondem a
diferentes objetivos.
O rastreio de portadores realizado quando um casal planeja ter filhos e deseja saber se tem ou
no um determinado alelo. Geralmente, solicitado quando h casos de doena na famlia ou
quando o casal pertence a uma populao em que a frequncia da doena alta. Nas famlias
afetadas, os testes genticos identificam os indivduos portadores de um gene ou de uma alterao
cromossmica que possa trazer problemas para eles ou para sua descendncia.
Rastreio de portadores e aconselhamento gentico so duas medidas que conseguiram diminuir
a incidncia de vrias doenas em algumas comunidades: a anemia falciforme entre os afroamericanos, a doena de Tay-Sachs entre os judeus ashkenazim, a fibrose cstica entre os irlandeses.
O rastreio de erros inatos do metabolismo no recm-nascido possibilita o tratamento de
algumas condies hereditrias, evitando danos e leses irreparveis. Aproximadamente 5% das
crianas nascem com problemas congnitos ou hereditrios, alguns dos quais podem ser previstos
mediante testes genticos de rastreio.
A partir da dcada de 1960, diminuram as deficincias mentais causadas pela fenilcetonria,
graas implantao do Teste de Guthrie ou do pezinho, que mede a quantidade de fenilalanina
no sangue. Uma tcnica nova, derivada da espectrometria de massa, capaz de detectar 20
transtornos metablicos em um nico teste.
O diagnstico pr-natal realizado quando h algum risco ou indcio de doena gentica no
feto. Por exemplo, uma concentrao elevada de -fetoprotena no sangue materno, entre a 15a e a
20a semana de gravidez, indica a possibilidade de o feto apresentar anomalias, como a sndrome de
Down. Neste caso, a me poder ser aconselhada a fazer uma amniocentese, extraindo-se uma
pequena quantidade de lquido amnitico e estudando as clulas do feto para confirmar ou excluir
vrios diagnsticos. A me poder optar tambm por uma biopsia de vilosidades corinicas, em que
se retiram algumas clulas da placenta (crion) para anlise.
Em uma fecundao in vitro, o diagnstico pr-natal pode preceder a implantao do embrio.
Aps trs divises celulares, quando o embrio se encontra num estado de oito clulas, uma delas
removida para a determinao do sexo e das caractersticas genticas. O procedimento no causa
dano ao embrio.
No adulto, os testes genticos so feitos a partir de alguma evidncia clnica, para confirmar ou
descartar um diagnstico. Realizam-se tambm para prever se uma pessoa que no apresenta
sintomas ir desenvolver uma doena da qual j existem casos na famlia (doena de Huntington,
doena de Alzheimer) ou para detectar a presena de algumas mutaes gnicas associadas
predisposio a alguma doena.
225
Cromossmica
HERANA
Espordica
Autossmica
recessiva
EXEMPLO
CARACTERSTICAS
APARIO
DOS
SINTOMAS
Sndrome de Down
Nascimento
Sndrome de Turner
Alteraes da diferenciao
sexual (mulheres)
Nascimento
Sndrome de Klinefelter
Alteraes da diferenciao
sexual (homens)
Nascimento
Fibrose cstica
1-2 anos
Fenilcetonria
Deficincia mental
Nascimento
Anemia falciforme
A partir dos 6
meses
Doena de Tay-Sachs
3-6 meses
Talassemias
A partir dos 6
meses
Hipercolesterolemia
familiar
20-30 anos
Doena de Huntington
Movimentos involuntrios,
demncia
35-45 anos
Rim policstico
40-60 anos
Hemofilias
Alteraes da coagulao
sangunea, sangramento
excessivo dos ferimentos
A partir de 1
ano
Degenerao muscular
1-3 anos
Sndrome de Lesch-Nyan
Nascimento
Asma
Dificuldade em respirar
Nascimento
Doena cardiovascular
Idade adulta
Monognica
Autossmica
dominante
Ligada ao X
Distrofia muscular
Duchenne
Multifatorial
226
Contribuio
gentica
varivel
de
227
228
A INDSTRIA DE MEDICAMENTOS
A origem da farmcia atribuda a Galeno (sculo II), um mdico romano que, combinando
elementos dos trs reinos do mundo natural, elaborara numerosas preparaes medicinais. Durante
a Idade Mdia, conservou-se seu legado, a denominada farmcia galnica, em conventos e
monastrios.
No sculo XVI, o mdico e alquimista suo Paracelso estabeleceu as bases da farmacologia, ao
postular que os agentes curativos do mundo interior (microcosmo) devem ser procurados nas
substncias qumicas do mundo exterior (macrocosmo). Devemos a ele outros importantes
conceitos: existe um remdio especfico para cada doena e qualquer remdio pode ser txico,
dependendo da dose.
O desenvolvimento da qumica, no sculo XVIII, possibilitou a evoluo das tcnicas
farmacolgicas. Na primeira metade do sculo XIX, fundaram-se os primeiros laboratrios
farmacuticos. Rapidamente, os mtodos artesanais foram substitudos por sistemas de produo
industrial.
A indstria farmacutica cresceu solidamente ao longo do sculo XX. O setor compreende os
fabricantes de diversas categorias de medicamentos (de marca, genricos e de venda liberada), alm
das empresas que elaboram produtos novos e das que desenvolvem pesquisas, geralmente
terceirizadas.
A indstria sustenta numerosas atividades de pesquisa e desenvolvimento de novos produtos.
De 5.000 a 10.000 compostos que passam pelo crivo de uma primeira triagem, s um chegar ao
mercado, em um processo que leva de 10 a 15 anos, a um custo aproximado de US$ 800 milhes. O
retorno do investimento garantido pelos lucros e por um sistema de patentes vlido por 20 anos
(Figura 19.1).
O controle da produo de medicamentos depende das grandes corporaes multinacionais em
contnuos ciclos de fuso, consolidao e expanso. Extremamente competitivo e dinmico, o setor
capaz de absorver rapidamente os avanos cientficos e tecnolgicos. Na disputa por um mercado em
crescimento, destacam-se como empresas lderes: Pfizer, Novartis, Sanofi-Aventis, Merck, Roche,
GlaxoSmithKline, AstraZeneca, Johnson & Johnson, Eli Lilly e Abbott.
Em 2010, o mercado global de medicamentos movimentou US$ 850 bilhes, contabilizando,
cada uma dessas empresas, vendas em valores superiores aos US$ 19 bilhes. No mesmo ano, os
medicamentos mais vendidos foram os oncolgicos, os agentes respiratrios, os reguladores de
lipdios, os antidiabticos e os antipsicticos. Estima-se que, em 2014, o volume global de vendas de
medicamentos ser de US$ 1 trilho.
Apesar do nmero de medicamentos novos colocados no mercado ter diminudo nos ltimos
anos, o nmero de compostos em testes pr-clnicos ou clnicos aumentou. A estrutura do setor
poder ser reorganizada nos prximos anos em funo da chegada de novas tecnologias robticas,
informticas e biolgicas.
5.000 compostos
Descoberta
Fase pr-clnica
5 compostos
6
8
Testes clnicos
10
12
1 composto
14
16
18
Procedimentos
administrativos
20
Vencimento da patente
22
24
Genricos
Anos
230
OS FITOTERPICOS
At o momento, foram identificadas mais de 50.000 espcies de plantas medicinais. Para a
populao mais pobre, muitas delas representam a nica fonte de tratamento acessvel.
Tambm so utilizadas por outra parcela da populao, adepta das medicinas alternativas e do
consumo de medicamentos fitoterpicos tradicionais, considerados mais suaves e com menos efeitos
colaterais. Nessa corrente de pensamento, o natural percebido como bom, admitindo-se que o
extrato vegetal seja mais eficiente que alguma de suas partes (princpio biologicamente ativo).
Os fitoterpicos so produtos relativamente baratos, de venda livre e com poucas
oportunidades de patentes. Contudo, sua eficcia varia com as condies de cultivo das plantas, j
que a sntese das substncias ativas depende do solo, da estao e at do momento do dia. Outras
limitaes importantes so a falta de conhecimento sobre os efeitos secundrios, a ausncia de
estudos clnicos em grande escala e a carncia de controles de qualidade estritos.
A promoo da medicina tradicional pela WHO (World Health Organization), enunciada na
declarao de Alma-Ata (1978) sobre a ateno primria a sade, marca uma mudana de atitude em
relao aos fitoterpicos. A partir de 1990, o uso dos fitoterpicos aumentou significativamente,
estimando-se que o mercado global seja de US$ 62 bilhes por ano.
Com a publicao de um manual relativo ao controle de qualidade dos materiais extrados das
plantas medicinais (WHO, 1998) e o estabelecimento de diretrizes gerais sobre metodologias de
pesquisa e avaliao das medicinas tradicionais (WHO, 2000), o mercado dos fitoterpicos entra em
uma nova etapa.
AS NOVAS TECNOLOGIAS
Em uma linha totalmente diferente perfilam-se as grandes empresas de produtos farmacuticos. A
descoberta recente de algumas substncias antitumorais (taxol, vinblastina, vincristina etc.) de
origem vegetal estimulou a procura por princpios ativos em plantas, animais e microrganismos,
especialmente em regies de grande biodiversidade.
Contudo, as opinies no so unnimes em relao a possveis e eventuais descobertas de
molculas com aplicaes teraputicas. Algumas empresas farmacuticas consideram que, em quase
duzentos anos de prospeco, j teriam sido descobertos praticamente todos os princpios ativos de
interesse, e preferem passar ao desenho de medicamentos por qumica combinatria e modelos
computacionais. Outras ponderam que na diversidade dos microrganismos e das plantas que
devem ser procuradas novas molculas, porque ainda existiriam numerosas fontes de princpios
ativos desconhecidos na flora to diversa como mal estudada de muitas regies.
FIGURA 19.2: A frmula da aspirina.
cido saliclico
COOH
COOH
OH
O-CO-CH3
cido acetilsaliclico
231
232
AS SUBSTNCIAS ANTIBITICAS
O CASO DA PENICILINA
At a Segunda Guerra Mundial, as nicas armas disponveis na luta anti-infecciosa eram umas poucas
vacinas e antitoxinas. No incio do sculo XX fora descoberto, no laboratrio de Paul Ehrlich, um
derivado do arsnico para o tratamento da sfilis. Comercializado em 1910 pela empresa Hoechst, o
Salvarsan resultou em um terrvel fracasso por duas razes: era txico e devia ser injetado, em uma
poca em que no existiam seringas. Os primeiros inibidores bem sucedidos do crescimento
microbiano foram as sulfas, derivados da sulfonamida, no final da dcada de 1930.
Em 1928, o bacteriologista Alexander Fleming observou que, em um cultivo de estafilococos
semeado em uma placa de Petri e contaminado por um fungo, as bactrias no cresciam ao redor do
contaminante. Alm de isolar, cultivar e identificar esse fungo como sendo o Penicillium notatum,
Fleming conseguiu extrair uma substncia, a penicilina, e test-la em animais.
A penicilina revelou-se um antissptico eficaz que, no sendo txico nem causador de irritao,
podia ser aplicado ou injetado em doses macias. Este resultado no teve repercusso alguma na
comunidade cientfica.
Durante quase 10 anos, Fleming tentou, sem sucesso, obter penicilina em estado puro. Em
1940, nos laboratrios da Universidade de Oxford, H. Florey e E. Chain obtiveram um sal sdico de
penicilina com baixo grau de pureza (Figura 19.3). Este produto teve um efeito extraordinrio nos
primeiros ensaios clnicos, mas a quantidade disponvel resultou pequena para o seu uso teraputico.
Com o objetivo de iniciar sua produo em grande escala, Florey e Chain transferiram-se em
1941 para Peoria (Illinois, Estados Unidos), onde a participao da indstria farmacutica (Pfizer,
Merck) foi decisiva para o sucesso da tarefa. Dois fatores possibilitaram a produo industrial de
penicilina.
O primeiro, a descoberta em um melo podre de uma linhagem de Penicillium chrysogenum,
capaz de produzir 200 vezes mais penicilina que a linhagem original. O segundo foi o aumento da
produtividade, que passou de 50 mg/l a 50-100g/l, mediante a substituio do cultivo em garrafas
pelo cultivo submerso em biorreatores, com capacidade entre 40.000 e 200.000 litros.
Graas a essas mudanas, as foras aliadas dispuseram de suficiente penicilina para o
tratamento dos soldados feridos na invaso da Europa, em 1944.
OS LIMITES AO USO DE ANTIBITICOS
Aps o sucesso da penicilina, comeou a triagem de outros antibiticos nos microrganismos do solo,
um ambiente muito competitivo onde essas substncias conferem uma vantagem seletiva. Assim,
descobriram-se a actinomicina, a neomicina e a estreptomicina, esta o primeiro antibitico eficiente
para o tratamento da tuberculose. Um pouco mais tarde os antibiticos de amplo espectro, como o
cloranfenicol, a aureomicina e a terramicina, entraram no mercado.
Paralelamente, a indstria procedeu ao aprimoramento dos mtodos de extrao e de
purificao, assim como da pesquisa de formas moleculares alternativas que facilitassem sua
utilizao na atividade clnica. Alm de produtos de origem natural (antibiticos), hoje contamos com
outros de origem sinttica (antibacterianos). O cloranfenicol, extrado de Streptomyces venezuelae,
tambm produzido por sntese qumica.
A descoberta de novos produtos (eritromicina, vancomicina, ampicilina, meticilina,
cefalosporina) possibilitou a cura de doentes e feridos para os quais, meio sculo atrs, a medicina
no tinha tratamento.
233
Contudo, o tempo mostrou o outro lado da moeda. O uso clnico indiscriminado de antibiticos
favoreceu a apario de linhagens resistentes que se espalharam rapidamente.
Os antibiticos agem de diversos modos, mas sempre alvejando algumas poucas funes vitais
da clula, tais como a sntese da parede celular, dos cidos nucleicos, das protenas ou do cido
flico. Para cada alvo atingido, aparece uma forma especfica de resistncia. O anel -lactmico das
penicilinas e cefalosporinas desativado mediante a sntese de -lactamases. A inibio da sntese
proteica pela estreptomicina desaparece com uma modificao do stio-alvo no ribossomo. A
tetraciclina bombeada para fora das clulas se houver uma alterao da permeabilidade celular.
Por outro lado, a transferncia horizontal de plasmdeos pode disseminar a resistncia mltipla s
drogas.
De fato, nessa corrida sem fim entre a utilizao de antibiticos e a apario de microrganismos
resistentes, novos medicamentos devero ser descobertos, se quisermos manter alguma vantagem
sobre as bactrias.
A NECESSIDADE DE INOVAO
As principais classes de antibiticos foram descobertas entre 1940 e 1962. Posteriormente,
passaram-se vrias dcadas sem grandes inovaes neste campo, at a chegada das oxazolidinonas,
que so molculas bloqueadoras da sntese de protenas bacterianas (Tabela 19.1).
Existem muitas substncias com propriedades antibiticas, mas poucas so interessantes do
ponto de vista clnico. Devido s dificuldades encontradas em descobrir molculas novas, e para
contornar a apario de resistncia, a indstria investiu nas chamadas Me-too-Drugs, isto ,
substncias iguais com pequenas modificaes qumicas.
Por outro lado, o vencimento de muitas das patentes possibilitou o aparecimento das formas
genricas de alguns dos antibiticos mais difundidos, como o Augmentin (amoxacilina/clavulanato)
ou o Cipro (ciproflaxin).
Nos ltimos anos, muitas empresas abandonaram o mercado para atender o setor bem mais
lucrativo das doenas crnicas. No obstante, cinco das maiores ainda continuam produzindo
antibiticos: Abbott, Novartis, AstraZeneca, Merck, Pfizer e Johnson & Johnson. Outras firmas novas
ocuparam o espao vacante, como Basilea Pharmaceutica LTd., que lanou o Ceftobiprole, uma
cefalosporina de quinta gerao, eficaz contra os MRSA (do ingls, meticillin-resistent Staphylococcus
aureus) e outros supermicrbios.
TABELA 19.1. A linha do tempo de entrada dos antibiticos e antibacterianos no mercado.
234
ANTIBITICOS E ANTIBACTERIANOS
DATA
Sulfonamidas (Sulfas)
1936
-lactmicos
1940
Cloranfenicol, tetraciclinas
1949
Aminoglicosdeos
1950
Macroldeos
1952
Quinolonas, estreptograminas
1962
Oxazolidinonas
2000
Lipopeptdeos
2003
Glicilciclinas
2005
Mutilinas
2007
235
Cadeia B
Cadeia A
Traduo
mRNA de insulina
Remoo do sinal e
unio das cadeias A e B
Molcula precursora
Remoo
da cadeia C
Pr-insulina
Insulina
Insero no plasmdeo
e clonagem em E.coli
Sntese da cadeia B
Insero no plasmdeo
e clonagem em E.coli
236
Insulina
237
Fonte: Nature Biotechnology, 2003, vol. 21, n8, em Porque Biotecnologia, Cuaderno n 49
PRODUTO
FATORES DE COAGULAO
Fator VIII
Fator IX
Fator VIIa
ANTICOAGULANTES
Fator ativador de plasminognio
Fator ativador de plasminognio
Hirudina
SISTEMA DE PRODUO
INDICACO TERAPUTICA
Hemofilia A
Hemofilia B
Certas formas de hemofilia
Infarto de miocrdio
Infarto de miocrdio
Trombocitopenia e preveno de
trombose
Diabetes mellitus
Hormnio de crescimento
Leveduras
Escherichia coli
Escherichia coli
Hormnio folculo-estimulante
Hormnio paratirideo
Gonadotrofina corinica
Tirotrofina
Escherichia coli
Cultivo de clulas de mamfero
Cultivo de clulas de mamfero
Hormnio luteinizante
Calcitonina
Glucagon
FATORES HEMATOPOITICOS
Eritropoietina (EPO)
Fator estimulante de colnias de
granulcitos/macrfagos (GMCSF)
Interferon e interleucinas
Interferon alfa (IFN alfa)
HORMNIOS
Insulina
Anemia
Neutropenia, transplante autlogo de
medula
Escherichia coli
Cncer de rim
Imunizao contra a hepatite B
Imunizao contra a hepatite A
Imunizao contra a doena de Lyme
Asma
Artrite reumatoide
Preveno da rejeio aguda do
transplante de rim
Fratura de tbia
Doena de Fabry (deficincia de galactosidase)
Mucopolissacaridose
Sepse severa
Doena de Gaucher
Fibrose cstica
AS PROTENAS RECOMBINANTES
AS BASES TECNOLGICAS
O tamanho das protenas de uso teraputico 100 vezes maior que o das molculas presentes nos
medicamentos convencionais. Os mtodos extrativos fornecem quantidades mnimas que no
chegariam nunca a satisfazer a demanda do mercado, de modo que a produo dessas protenas
seria invivel sem a tecnologia do DNA-recombinante.
A rpida incorporao das novas tecnologias nos mtodos de produo facilitou, j na dcada de
1980, a obteno de insulina e de interferon mediante bactrias e leveduras modificadas
geneticamente, cultivadas em biorreatores. Em alguns casos, os microrganismos foram substitudos
por clulas animais que, apesar de mais difceis de cultivar, so capazes de levar a cabo as
modificaes ps-traducionais indispensveis.
Com o objetivo de aumentar a produtividade e diminuir os custos, foram construdos plantas e
animais transgnicos (vacas, cabras, ovelhas etc.) para uma centena de protenas de tipo
recombinante, muitas das quais se encontram j na fase de testes clnicos. O primeiro anticoagulante
extrado do leite de uma cabra transgnica entrou no mercado em 2009 (Atryn, GTC
Biotherapeutics).
A hostilidade da sociedade com as plantas e alimentos transgnicos no existe em relao aos
animais transgnicos e os medicamentos. O princpio de equivalncia, contencioso no setor de
agroalimentos, totalmente aceito em relao aos novos medicamentos. Uma atitude contraditria
que nos incita reflexo.
OS PRODUTOS E SUAS UTILIZAES
As protenas teraputicas cumprem diversas funes (Tabela 19.2). Algumas substituem ou
complementam molculas naturais: hormnios, interferons, interleucinas, fatores estimuladores do
crescimento celular, fatores de coagulao sangunea, enzimas.
Outras so produtos especialmente desenhados para cumprir uma funo medicamentosa:
trombolticos (tPA ou fator ativador de plasminognio, estreptoquinase, uroquinase), anticorpos
monoclonais e antgenos bacterianos para vacinas.
Utilizam-se fundamentalmente nas reas mdicas de hematologia, oncologia, diabetes e
endocrinologia, artrite, inflamao, doenas imunes e doenas genticas lisossmicas (Gaucher,
Hurler, Fabry, Pompe).
A INDSTRIA BIOTECNOLGICA
Estima-se que o mercado global de produtos biotecnolgicos ser de US$ 103 bilhes em 2014, o que
representa pouco mais da dcima parte do mercado farmacutico mundial. Mais de 300 protenas
aprovadas e muitas outras em testes clnicos indicam um mercado em crescimento, do qual o setor
mais dinmico o dos anticorpos monoclonais, com uma previso de mais de US$ 79 bilhes em
2015.
Em funo dos avanos nos estudos genmicos, muitos outros biofrmacos sero descobertos e
patenteados nos prximos anos. Os imensos bancos de dados e as tcnicas de triagem assistidas por
computador permitiro diminuir o tempo necessrio para os estudos experimentais.
239
Vrios dos biofrmacos lderes de vendas so anticorpos teraputicos (Tabela 19.3). A maioria se
destina principalmente oncologia e ao tratamento de artrite e outras doenas imunes e
inflamatrias. Contudo, existe pelo menos um que permite a obteno de imagens, e outro em que a
molcula se encontra acoplada a uma toxina que destri a clula cancerosa. Quase uma centena se
encontra na fase final do processo de aprovao.
Na Amrica Latina existe uma indstria farmacutica que fabrica medicamentos para consumo
interno e para exportao, destacando-se Argentina, Brasil, Cuba e Mxico. Os principais produtos
biotecnolgicos so os anticoagulantes (eritropoietina), os hormnios, os interferons ( e ) e os
fatores estimuladores do crescimento celular.
A Argentina conta com um setor farmacutico slido e competitivo. Vrias protenas
recombinantes so produzidas localmente, por trs empresas biotecnolgicas nacionais (Bio Sidus,
PC-gen, Zelltek) que vendem seus produtos atravs de suas empresas farmacuticas
correspondentes (Sidus, Pablo Cassar) e as exportam para diversos pases de sia, Oriente e
Amrica Latina. Uma empresa estrangeira, Sanofi, produz vacinas contra a hepatite B.
Bio Sidus obteve sucesso com seu tambo farmacutico, pequenos rebanhos de vacas
transgnicas produtoras de hormnio de crescimento, de insulina ou de leite maternizado, um
empreendimento que ir sem dvida lhe garantir uma posio de destaque no setor produtivo.
TABELA 19.3. As principais protenas teraputicas comercializadas atualmente.
NOME GENRICO
NOME COMERCIAL
e Eritropoietina
Eprex,
e Interferon
Insulina Humana
Neupogen, Neulasta
Rituximab
Rituxan
Roche
Etarnecept
Enbrel
Amgen, Wyeth
Infliximab
Remicade
Trastuzumab
Herceptin
Roche
Hormnio de crescimento
Serostim,
Saizen,
Protopin, Neutropin
Palivizumab
Synagis
MedImmune
Gonal F, Folistim
Serono, AkzoNobel
Glucocerebrosidase
Cerezyme, Ceradase
Genzyme
Adalimumab
Humira
Abbott
Fator VII
Novo Seven
Novo Nordisk
Toxina botulnica
Botox
Allergan
Bevacizumab
Avastin
Genentech, Roche
240
EMPRESAS
Humatrope,
O Laboratrio Pablo Cassar outra empresa tradicional que proximamente ir colocar no mercado
uma nova vacina em duas doses contra a hepatite B e, recentemente, obteve uma enzima
recombinante capaz de reparar as leses causadas pela exposio aos raios X. Ambas as empresas
distribuem seus produtos no Brasil.
Diferente da Argentina, no Brasil as empresas pblicas como Farmanguinhos e Instituto Butant
tem um papel determinante na produo de medicamentos, destacando-se respectivamente na
produo de retrovirais e de eritropoietina. Contudo, depende-se ainda da importao de
biofrmacos, alguns dos quais so inclusive distribudos pelo Sistema nico de Sade (eritropoietina,
imunoglucerase, infliximab, interferon, somatotropina recombinante humana). Acordos de
transferncia de tecnologia para 25 produtos, envolvendo laboratrios nacionais (pblicos e
privados) e estrangeiros, visam reverter essa dependncia.
No Mxico, a empresa ProBioMed tem desenvolvido com o setor universitrio uma dezena de
protenas recombinantes (anticoagulantes, interferons, fatores estimuladores do crescimento
celular) para uso interno e exportao para outros pases de Amrica Central e Amrica do Sul.
Outros laboratrios (Silanes, Biocln) tm se destacado na produo de antitoxinas.
Cuba tem registrados numerosos produtos biotecnolgicos, desenvolvidos por Centros de
Pesquisa (Centro de Inmunologa Molecular, Centro de Ingeniera Gentica y Biotecnologa, Centro
Nacional de Biopreparados e Instituto Finlay) e comercializados por empresas farmacuticas
associadas (Heber Biotec, CIMAB etc.).
Hoje Cuba produz 11 vacinas, mais de 40 molculas teraputicas e vrios sistemas de
imunodiagnstico. Esses produtos renderam aproximadamente 900 patentes no exterior e so
exportados para 40 pases. Assim como o nquel, o tabaco e o acar, a biotecnologia um dos
principais produtos de exportao da ilha.
OS MEDICAMENTOS PERSONALIZADOS
A FARMACOGENMICA
O mapeamento do genoma foi o primeiro passo para o desenvolvimento de novos produtos e aes
teraputicas, um terreno onde se afirma a farmacogenmica, uma disciplina nova que visa identificar
as diferenas genticas associadas a diversas doenas.
Dado que os seres humanos compartilham 99,9% do genoma, as variaes entre eles devem ser
procuradas no 0,1% restante, quer dizer, entre os 30 milhes de polimorfismos de um nico
nucleotdeo ou SNPs (do ingls, single nucleotide polymorphisms). Trata-se de variaes de uma base
a cada 1.000 nucleotdeos, distribudas ao longo do genoma. As mais interessantes so as que
ocorrem dentro de um gene ou em uma regio reguladora.
O estudo de cada um desses SNPs est alm das capacidades tecnolgicas atuais, mas sabendo
que dois pontos que se encontram muito prximos no cromossomo tendero a ser transmitidos
juntos, pode-se dividir o cromossomo em blocos de aproximadamente 10.000 bases (hapltipos) e
caracteriz-los por alguns dos SNPs de cada bloco (Figura 19.6). Este o objetivo do International
HapMap, recentemente concludo e baseado no genoma de pessoas de origem europeia, asitica e
africana.
A importncia do mapeamento do genoma foi claramente percebida pelas empresas
farmacuticas. Antes de se completar o sequenciamento, algumas das grandes empresas
farmacuticas (Glaxo Wellcome, Novartis) comearam a compilar informaes sobre os genes que
podiam ser associados a doenas e a localizar SNPs dentro de alguns genes previamente
selecionados.
241
Indivduo 1.
A...C...A...T...G...T
T...G...T...A...C...A
Indivduo 2.
A...C...A...G...G...T
T...G...T ...C...C...A
Indivduo 3.
G...C...A...T...G...T
C...G...T...A...C...A
Considerando que as doenas devem ser estudadas no contexto evolutivo e histrico de uma
populao, em 1999 a empresa americana deCode obteve da Islndia, por US$ 200 milhes, a
exclusividade para elaborar um gigantesco banco de dados incluindo os registros de sade, as
genealogias e os perfis de DNA de seus habitantes. Povoada h 1.000 anos pelos viquingues e com
poucos contatos com outras populaes, a Islndia (270.000 habitantes) conta com uma populao
homognea especialmente apta para este tipo de estudos.
O projeto suscitou controvrsia. Um acordo da deCode com a Hoffmann-La Roche visava
identificar os genes responsveis por vrias doenas. No caso de serem obtidos resultados positivos,
os habitantes de Islndia teriam direito, por cinco anos, gratuidade nos medicamentos
desenvolvidos. Em funo dos problemas ticos e legais levantados oportunamente, a empresa
enfrentou algumas dificuldades na construo de seu banco de dados de 140.000 islandeses.
Apesar de ter descoberto uma dezena de alvos medicamentosos, entre os quais protenas
envolvidas em doena cardaca, osteoporose e esquizofrenia, a empresa no obteve resultados
suficientemente rpidos para satisfazer os seus investidores. Em bancarrota, a empresa acabou
sendo vendida, em 2009, para a Saga Investments LLC e Illumina. Hoje, a nova deCode, chamada
deCODEme, comercializa testes diagnsticos e estudos genmicos. Devido a impedimentos legais, os
dados e as amostras biolgicas no puderam ser vendidos e permanecem na Islndia.
Existem outros projetos na mesma linha de investigao, tais como Estonian Genome (Estonia),
Galileo Genomics (Canad), Oxagen (Inglaterra), Rockefeller University (Micronsia), UK.Bank
(Inglaterra). Wellcome Trust Case Control Consortium encontrou 24 associaes a 7 doenas (Crohn,
diabetes 1 e 2, doena cardiovascular, hipertenso, artrite reumatoide e transtorno bipolar).
A FARMACOGENTICA
Outra disciplina nova a farmacogentica, que investiga, dentro da populao, as diferenas
genticas que permitem prever diferentes respostas a um medicamento. As reaes adversas so
temidas tanto pelos consumidores como pelos mdicos e a indstria farmacutica, que se protege
mediante bulas cuidadosamente redigidas. S nos Estados Unidos, as reaes adversas causam
100.000 mortes e 2 milhes de hospitalizaes por ano.
242
Os medicamentos passam por vrias fases de estudos clnicos antes de chegar ao mercado.
Contudo, nem todas as pessoas reagem igualmente a um medicamento, de modo que este pode
resultar eficiente para uns e txico para outros. Por exemplo, aproximadamente 60% dos
medicamentos so metabolizados por uma famlia de enzimas (citocromo P450). Algumas pessoas os
degradam rapidamente, e outras no, dependendo de suas caractersticas enzimticas individuais.
Sabendo a qual dos dois grupos pertence um paciente, pode-se determinar qual a dose do
anticoagulante que lhe dever ser administrada, minimizando os efeitos adversos.
Quando ocorrem em uma frequncia baixa, as reaes adversas a um medicamento podem ser
detectadas unicamente a partir da terceira fase dos estudos clnicos, que envolvem entre 1.000 e
5.000 voluntrios. Muitos medicamentos no conseguem super-la, e houve casos em que tiveram
que ser retirados do mercado, mesmo aps serem comercializados. o caso do Vioxx (Merck), um
medicamento sumamente eficaz para a artrite e a dor, mas que aumentava o risco de ataques
cardacos e derrames, tendo que ser descontinuado em 2004.
Associando marcadores genticos a respostas diferenciais a medicamentos, pode-se dividir a
populao em subgrupos e oferecer um tratamento personalizado. Atualmente, antes de iniciar
um tratamento de cncer de mama com a herceptina, deve-se realizar um teste gentico na paciente
para saber se o medicamento se ajusta, ou no, ao seu caso.
Em pacientes HIV positivos, procura-se determinar a presena do alelo HLA-B*5701 antes de
iniciar o tratamento com abacavir, porque os portadores desse alelo podem ser hipersensitivos ao
medicamento.
O desenvolvimento da farmacogentica dar aos pacientes mais chances de receber a
medicao adequada, na dose certa. Por outro lado, as empresas farmacuticas podero escolher
seus voluntrios para os testes clnicos no subgrupo apropriado, evitando que um produto novo seja
descartado por falta de resposta adequada. No futuro, em vez de um nico produto campeo de
vendas, as empresas farmacuticas podero oferecer medicamentos diferentes, cada um dos quais
respondendo s expectativas de um tipo de consumidor.
O CUSTO DOS NOVOS MEDICAMENTOS
Estima-se que s 3% dos medicamentos desenvolvidos entre 1975 e 1999 foram dedicados ao
tratamento de doenas tropicais, e a metade fora incentivada pela Organizao Mundial da Sade.
Apesar das empresas farmacuticas dedicarem algumas pesquisas s doenas negligenciadas dos
pases em desenvolvimento, ainda faltam medicamentos adequados.
Do consumo mundial de medicamentos, 88% correspondem a um bloco de regies formado por
Amrica do Norte (49%), Europa (28%) e Japo (11%). Como a populao destes pases est
envelhecendo, os principais alvos para o desenvolvimento de medicamentos novos so as doenas
cardiovasculares, o cncer, as alteraes respiratrias assim como outras doenas que afetam a
qualidade de vida (osteoporose, artrite, doenas de Parkinson e de Alzheimer).
A maioria das grandes corporaes est instalada nos Estados Unidos, onde, alm de seu
principal mercado, encontram uma legislao favorvel. Na Amrica Latina, o setor est dominado
pelas empresas internacionais e, salvo algumas excees analisadas previamente (Bio Sidus,
ProBioMed, Heber Biotec), h poucos investimentos na pesquisa e no desenvolvimento de novos
produtos.
O custo dos medicamentos depende em grande parte dos investimentos da indstria
farmacutica na pesquisa e desenvolvimento de novos produtos (US$ 800 milhes em 2002). O
tempo e o custo de desenvolvimento de um medicamento dependem da durao dos testes clnicos
e do uso da tecnologia (robtica, bioinformtica, qumica combinatria, triagem de compostos
biolgicos em alta velocidade, biochips e microarrays).
243
244
Esta salvaguarda se encontra no Acordo sobre Aspectos dos Direitos de Propriedade Intelectual
Relacionados ao Comrcio (TRIPS Agreement), da Organizao Mundial do Comrcio, vigente desde
1995. O artigo 31 assinala que o uso da patente sem autorizao estaria justificado se tivessem sido
feitos os esforos para sua utilizao em condies comerciais razoveis.
Quando da ameaa terrorista de antraz, os Estados Unidos cogitaram quebrar a patente do
antibitico Cipro. Nos pases em desenvolvimento, o acesso aos medicamentos considerado um
direito fundamental dos pacientes de HIV/AIDS, porm, apesar das longas discusses no marco da
Organizao Mundial de Comrcio, milhes de pessoas morrem anualmente por falta desses
medicamentos.
245
246
OS ANTICORPOS MONOCLONAIS
A chegada da tecnologia de hibridomas despertou grandes esperanas, porque se tencionava que os
anticorpos monoclonais cumprissem a funo da mtica bala mgica, no reconhecimento do alvo.
Contudo, o sucesso chegou antes no campo das anlises clnicas que no mbito teraputico.
Depois do muromonab CD3 (Orthoclone OK3), um anticorpo monoclonal que reduz a resposta
imune, evitando a rejeio aos transplantes, passaram-se vrios anos antes que algum outro produto
recebesse a aprovao das agncias reguladoras.
A razo para o impasse era tcnica. Produzidos com clulas de roedores, os anticorpos
monoclonais eram reconhecidos como non-self pelos seres humanos, o que desencadeava a resposta
imune. A modificao e, eventualmente, a substituio de partes da molcula murina gerou
molculas quimricas, humanizadas e, mais tarde, humanas, em linhagens microbianas ou em
animais transgnicos. Uma vez solucionado esse problema, os anticorpos monoclonais entraram no
mercado.
TABELA 20.1. Os 10 anticorpos monoclonais de uso teraputico, lderes de venda em 2010.
Adaptado de http://knol.google.com/k/krishan-maggon/top-ten-monoclonal-antibodies2010/3fy5eowy8suq3/143#
NOME GENRICO (MARCA)
EMPRESAS
INDICAES
Infliximab (Remicade)
Artrite reumatoide
Colite ulcerativa
Doena de Crohn
Psorase
Artrite psoritica
Espondilose anquilosante
8.0
Bevacizumab (Avastin)
Roche
Cncer de clon
6.8
Rituximab (Rituxan)
Roche
Linfoma no Hodgkins
Artrite reumatoide
6.7
Adalimumab (Humira)
Abbott
Artrite reumatoide
Psorase
Artrite idioptica juvenil
Artrite psoritica
Espondilose anquilosante
Doena de Crohn
6.5
Trastuzumab (Herceptin)
Roche
Cncer de mama
5.5
Cetuximab (Erbitux)
BMS
Merck Serono
3.2
Ranibizumab (Lucentis)
Novartis
Roche
Degenerao macular
3.1
Natalizumab (Tysabri)
Biogen Idec
Elan
Esclerose mltipla
1.75
Omalizumab (Xolair)
Roche
Novartis
Asma alrgica
1.1
Palivizumab (Synagis)
Astra Zeneca
1.0
248
VENDAS (2010)
Em US$ BILHES
FIGURA 20.1. A transformao de uma clula normal em cancerosa por mutao (cncer de clon).
Clula normal
Leucoferese (3 horas)
Clulas dendrticas
2 a 3 dias
Clulas dendrticas
Clulas dendrticas
que incorporaram o
antgeno tumoral
PAP-GM-CSF
+ Provenge (PAP-GM-CSF)
250
AS VACINAS TERAPUTICAS
As vacinas profilticas so aplicadas em indivduos saudveis para prevenir doenas. Dentro dessa
linha, existem vacinas contra alguns dos agentes virais que, sabidamente, esto relacionados com o
desenvolvimento do cncer. Trata-se das vacinas contra o vrus da hepatite B (VHB), associado ao
cncer de fgado, e contra o papilomavrus (VPH), responsvel por 70% dos cnceres de tero
(Gardasil, de Merck; Cevarix, de GlaxoSmithKline). Essas vacinas cumprem uma ao preventiva.
Uma das primeiras terapias complementares do cncer, ainda usada atualmente, a inoculao
com a vacina BCG (bacilo de Calmette e Gurin), para estimular no paciente uma reao imunolgica
de tipo celular, que se estende s clulas cancerosas.
As vacinas teraputicas visam o tratamento dos indivduos que j esto doentes. O objetivo
estimular diretamente a resposta imune do organismo, para que este possa eliminar as clulas
cancerosas. Apesar da enorme quantidade de procedimentos possveis, todos so experimentais.
Uma possibilidade a aplicao de vacinas de antgenos sintticos, especficos ou associados ao
tumor. Um dos principais problemas reside na escolha dos antgenos que deveriam entrar na
composio da vacina, pois se alguns so comuns a vrios tipos de clulas cancerosas, outros s
aparecem em cnceres especficos. A vacina ideal teria que ser eficaz em qualquer paciente com um
determinado tipo de cncer.
As vacinas de vetores (vrus, DNA nu) conseguem uma resposta imunolgica mais forte que as
vacinas de antgenos. Vetores virais modificados poderiam infectar exclusivamente as clulas
cancerosas, carregando molculas moduladoras da resposta imune, ou enzimas capazes de
transformar uma droga inativa em ativa.
Outra estratgia seria a elaborao de vacinas de tumores, com clulas cancerosas
enfraquecidas ou mortas. Provenientes do mesmo paciente ou de algum outro, essas clulas
expressariam antgenos associados a um tumor, estimulando a resposta imune.
Uma variante de vacina tumoral envolve o estmulo ex vivo das clulas imunes de modo a que
estas expressem o antgeno (Figura 20.2). Essa estratgia deu origem primeira vacina teraputica
(sipuleucel-T ou Provenge, de Dendreon), contra o cncer de prstata hormonorefratrio,
autorizada pelo FDA, nos Estados Unidos, em 2010. O empreendimento demandou empresa
Dendreon um investimento de US $ 1 bilho.
O sipuleucel-T uma protena de fuso entre uma enzima especfica das clulas prostticas
cancerosas (PAP, do ingls prostatic alcaline phosphatase) e um modulador da resposta imune (GMCSF, do ingls granulocytes and macrophages colony stimulating factor). O tratamento deve ser
adaptado a cada paciente. Comea com a extrao das clulas apresentadoras do antgeno do
doente, segue com a incorporao in vitro dos antgenos tumorais e encerra-se com a reinfuso das
clulas modificadas no paciente. No momento do lanamento, Dendreon estimava o preo de cada
tratamento em US$ 93.000.
Embora representem uma tecnologia promissora, dificilmente as vacinas teraputicas podero
beneficiar um setor amplo da populao, devido complexidade tecnolgica e aos custos de um
tratamento personalizado.
251
AS TERAPIAS GNICAS
TERAPIAS SOMTICAS E GERMINAIS
A terapia gnica visa alterar o funcionamento de um gene, mediante a introduo de DNA nas clulas
de um paciente. Se o gene se expressar, o objetivo da terapia ser o seu desligamento ou a
inativao do produto. Se o gene no se expressar, a finalidade da terapia gnica ser sua
substituio por uma cpia funcional que sintetize a protena faltante. Esta ltima pode ser uma
enzima normal, uma molcula que torne a clula vulnervel ao ataque pelo sistema imune ou uma
substncia txica que desencadeie a apoptose de uma clula cancerosa.
As terapias gnicas visam modificar as clulas somticas de um indivduo, sem pretender que
essa alterao seja transmitida gerao seguinte (Figura 20.3). Assim como em um transplante
transferido um rgo ou um tecido, na terapia somtica transferido um gene e o efeito est
limitado ao indivduo que o recebe. Diferente da terapia somtica, a terapia de clulas germinais visa
a transmisso do gene descendncia.
A terapia gnica de clulas germinais permitiria a eugenia atravs da seleo do gentipo
ideal. Dentro desta tica, quais seriam os caracteres considerados saudveis? E por quem? A
histria do sculo XX, com sua sequncia de horrores (esterilizao de deficientes e doentes mentais
nos Estados Unidos, persecues na Alemanha nazista etc.), mostra que devem ser tomados todos os
cuidados para impedir a discriminao gentica e a implantao de uma sociedade arbitrria. A
terapia gnica da linhagem germinativa no est permitida em nenhum pas.
OS ALTOS E BAIXOS DE UMA TECNOLOGIA
De todas as novas biotecnologias, as terapias gnicas so as mais difceis de avaliar porque, alm de
envolver aspectos cientficos, ticos e religiosos, passaram por altos e baixos ao longo dos ltimos 40
anos
As primeiras experincias de terapia gnica para o tratamento ou a cura de uma doena, foram
realizadas em 1980, por Martin Cline, nos Estados Unidos. Alm de fracassar, essas tentativas
despertaram uma reao contrria unnime, porque os estudos experimentais prvios eram
insuficientes e sua realizao no tinha sido devidamente autorizada pelo comit de tica
correspondente. O episdio motivou o estabelecimento de regras estritas para este tipo de
tratamento.
A primeira terapia gnica foi autorizada, nos Estados Unidos (1990), para o tratamento de dois
casos de Imunodeficincia Severa Combinada (SCID, do ingls severe combined immunodeficiency),
uma doena em que a falta da enzima ADA (desaminase de adenosina) bloqueia um caminho
metablico, causando o acmulo de uma substncia que destri os linfcitos.
As crianas com SCID, chamadas crianas-bolha, sofrem continuamente de infeces e tm
uma expectativa de vida curta. O tratamento habitual contempla a administrao de enzimas, mas os
pacientes acabam desenvolvendo alergias aos componentes do produto injetado. Para essas
crianas, a nica perspectiva restante um transplante de medula ssea, com a condio de
encontrar um doador compatvel.
A terapia aprovada pelo FDA consistia na extrao de linfcitos do sangue, sua modificao
gentica por transferncia de um gene normal de ADA e a reinfuso dos linfcitos modificados na
circulao sangunea do paciente. Aplicou-se esse procedimento na menina Ashanty DeSilva e, mais
tarde, em outra menina, Cynthia, que experimentaram uma melhora significativa.
252
Insero em um vetor
Vrus
Lipossomo
Pulmo
Msculo
Fgado
Cultivo de clulas
(medula ssea)
Reimplantao
253
O ESTADO DA ARTE
O campo das terapias gnicas conta hoje com numerosos estudos, em diferentes etapas de
realizao. As dificuldades so enormes, porque se trata de transferir um gene a uma determinada
clula em certo tecido e conseguir que esse gene funcione adequadamente e de maneira duradoura.
Os dois grandes gargalos ainda so a necessidade de vetores seguros e de procedimentos mais
eficientes. Muitas pesquisas fracassam na ltima etapa dos testes clnicos.
Dos numerosos estudos em vias de realizao, aguardam-se resultados positivos em relao a
sndromes genticas (hemofilia, talassemia, Huntington, Duchenne, fibrose cstica, SCID) e infeces
virais (HIV/AIDS), alm de avanos nos estudos sobre doenas cardiovasculares, oneurolgicas e
oncolgicas.
O sucesso poderia estar muito prximo, tanto em relao ao SCID como a outras duas doenas
genticas (amaurose congnita de Leber ou ALC, adrenoleucodistrofia ou ALD). Contudo, as trs
demandam a modificao gentica ex vivo de clulas-tronco, o que significa um tratamento
personalizado complexo. Estes empreendimentos para doenas de baixa frequncia entram na
categoria de tratamentos/medicamentos rfos, garantindo incentivos financeiros s empresas
farmacuticas.
No combate s doenas infecciosas como o HIV/AIDS, existem diversas linhas de pesquisa. Uma
delas visa bloquear a replicao do vrus e a outra os receptores que o HIV usa para entrar no
linfcito T. Nenhum desses estudos superou ainda a fase correspondente aos testes clnicos.
O futuro das terapias gnicas controverso. Do mesmo modo que em relao a qualquer tipo
de terapia experimental, as objees se centram na utilizao de uma tecnologia ainda imperfeita,
que envolve riscos e da qual se desconhecem os efeitos a longo prazo. Contudo, o grande nmero de
pesquisas em andamento e de testes em fases I e II indicam que, em um futuro prximo, algumas das
dificuldades encontradas podero ser superadas.
No momento, s existe um nico produto comercial disponvel no mercado, que foi
desenvolvido e autorizado na China, em 2004. A Gendicina (Shenzhen SiBiono GeneTech), um
adenovrus com o gene supressor de tumores p53, utilizado no tratamento do carcinoma de clulas
escamosas de cabea e pescoo.
O progresso das terapias gnicas levanta tambm algumas inquietudes em relao ao esporte.
Em 1998, uma equipe inteira de ciclistas foi eliminada do Tour de France devido ao uso indevido da
eritropoietina, que aumenta o nmero de hemcias. Contudo, fraudes deste tipo no poderiam ser
detectadas se o atleta fosse modificado geneticamente para aumentar naturalmente sua produo
de eritropoietina.
Em 2008, na Alemanha, um confuso caso de doping de atletas envolveu um treinador e um
produto de terapia gnica em fase pr-clnica (Repoxygen, de Oxford Biomedica), que induz a
liberao de eritropoietina em baixa concentrao de oxignio.
AS PROMESSAS DO SILENCIAMENTO GNICO
Ao longo dos ltimos trinta anos descobriram-se vrios mecanismos de silenciamento gnico,
baseados nos diversos tipos de RNA e suas propriedades (Figura 20.4).
As ribozimas so molculas de RNA, com propriedades catalticas, que cortam outras molculas
de RNA que apresentem em sua sequncia alguns nucleotdeos complementares. Sua descoberta
teve uma importncia extraordinria, porque deu origem a uma teoria sobre os primrdios da vida,
em um mundo de RNA.
254
A. As ribozimas
Ribozima
RNA
RNA clivado
B. O RNA anti-sense
Sntese de protenas
DNA
Transcrio
Transcrio
RNA anti-sense
mRNA
mRNA
Traduo
No h traduo
C. O RNA interferente
Pequeno RNA
interferente (siRNA)
mRNA
dsRNA (RNA de
dois filamentos)
Complexo enzimtico
Clivagem do mRNA
Exterior
Membrana
celular
Citoplasma
Fragmentos de RNA
255
256
A MEDICINA REGENERATIVA
OS TRANSPLANTES DE RGOS
A primeira tentativa data de 1899, com o transplante de rim de um cachorro a outro. Desde ento
ficou bvio que o fenmeno de rejeio era principal obstculo aos transplantes de rgos. Uma
exceo a crnea, cujo primeiro transplante bem sucedido se realizara em 1905.
O primeiro transplante de corao, realizado pelo cirurgio Christian Barnard (frica do Sul,
1967) teve uma repercusso enorme nos meios de comunicao. O mundo inteiro acompanhou os
comunicados mdicos emitidos em Cidade do Cabo, at a morte do paciente, 18 dias mais tarde.
Durante vrios anos os problemas de rejeio pareceram intransponveis.
Na dcada de 1980, alm da melhoria das tcnicas cirrgicas e da caracterizao dos antgenos
dos tecidos, aparecem os primeiros medicamentos imunossupressores (ciclosporinas), e os
transplantes se tornam rotineiros. Em centros mdicos de todos os pases so substitudos, com
sucesso, diversos rgos e tecidos: corao, rim, fgado, pulmo, intestino, timo, crneas, medula
ssea, pele, pncreas, vlvulas cardacas, veias etc.
Alguns procedimentos so relativamente simples. No isotransplante, a transferncia de um
ovrio ou de um rim feita de um indivduo a seu gmeo idntico. No autotransplante, substitui-se
uma artria coronria por uma safena do mesmo indivduo, ou um fragmento de pele danificado por
outro. Contudo, no alotransplante, em que um rgo transferido a outro indivduo, requer-se a
supresso do sistema imune, para que o organismo possa aceitar uma parte non-self. Caso
contrrio o rgo ser rejeitado e, tambm, o rgo poder rejeitar o hospedeiro.
dificuldade em encontrar um doador compatvel se soma a de encontrar doadores, j que o
nmero de doaes muito menor do que seria necessrio. Por isso uma alternativa seria o
xenotransplante, isto , a transferncia de um rgo de um animal ao homem.
Devido ao tamanho e a estrutura de seus rgos, o porco parece o animal mais indicado. J em
1902, ligou-se o rim de uma paciente a um porco, uma experincia que resultou fatal. Hoje sabido
que, devido presena nas clulas sunas de -1-3 galactose, um tipo de molcula que no se
encontra em primatas, ocorrer um fenmeno de rejeio violento. a menos que se apliquem doses
macias de medicamentos imunossupressores.
O encapsulado das clulas animais em uma matriz inerte que as isole e, ao mesmo tempo, deixe
passar os nutrientes e produtos celulares, poderia evitar a rejeio. Este procedimento foi utilizado
recentemente em pacientes diabticos que receberam clulas sunas encapsuladas e passaram a
secretar insulina. Tambm foi utilizado em uma centena de pacientes de cncer, para a secreo de
molculas que aliviassem a dor.
Em 2002, duas empresas (PPL Therapeutics e Immerge Bio Therapeutics) anunciaram a
clonagem de porcos em que o gene para a -1-3 galactose fora desativado por knock out duplo.
Esses porcos poderiam vir a ser uma fonte de rgos para um transplante temporrio em seres
humanos.
No entanto, mesmo eliminando o perigo da rejeio aguda, ainda falta resolver como evitar o
processo de rejeio que seria desencadeado, um pouco mais lentamente, pelas protenas sunas.
Existe, porm, uma objeo maior aos xenotransplantes, que o risco de introduzir retrovrus de
outras espcies em seres humanos, com resultados imprevisveis.
257
A ENGENHARIA DE TECIDOS
Na interface da biologia celular, da medicina, da bioqumica e da bioengenharia, a engenharia de
tecidos visa a substituio de rgos e tecidos.
Faz anos que o cultivo de pele in vitro utilizado para reparar as leses causadas por
queimaduras. Um pequeno fragmento de pele, isolado do prprio paciente, o bastante para formar
em trs semanas uma superfcie 50 vezes maior. Amolda-se a nova pele a uma superfcie
biodegradvel para evitar que rasgue quando aplicada no paciente. O procedimento se adapta ao
tratamento de queimaduras e de leses de difcil cicatrizao.
A biomimtica consegue reparar in vivo o tecido sseo, utilizando como molde um polmero,
onde migram e se expandem as clulas regenerativas internas. A tecnologia se aplica na reparao
de fraturas e de leses causadas por doena periodontal, assim como a reconstruo da cartilagem
das articulaes. Recentemente, transplantou-se com sucesso uma traqueia, que fora construda
com clulas-tronco do prprio paciente, cultivadas sobre um molde poroso. Este o primeiro passo
na construo in vitro de estruturas tridimensionais anlogas aos rgos. No momento, as estruturas
mecnicas parecem mais fceis de construir que rgos complexos, como um rim ou um pulmo.
TABELA 20.2. As caractersticas comparadas das clulas-tronco adultas e embrionrias
CLULAS-TRONCO ADULTAS
CLULAS-TRONCO EMBRIONRIAS
Induzem rejeio.
FIGURA 20.4. A clonagem teraputica, uma forma de gerar clulas-tronco embrionrias com a
informao gentica do doador do ncleo.
Paciente
Clula
saudvel
Transferncia nuclear
Fuso
celular
Ovcito
Infuso
Clulas-tronco
diferenciadas
258
Ovcito
anucleado
Clulas-tronco
recuperadas
Embrio
AS TERAPIAS CELULARES
As clulas-tronco multipotentes
Clulas-tronco multipotentes so encontradas em tecidos adultos, onde proliferam por longos
perodos de tempo, conservando a capacidade de se diferenciar em diferentes tipos celulares, em
resposta a estmulos adequados (Tabela 20.2). So responsveis pelo crescimento e a reparao dos
tecidos.
Sua presena em tecidos e rgos explica o sucesso alcanado pelos transplantes de pele, de
crnea e de medula ssea. Este ltimo possibilita a regenerao dos elementos sanguneos no
tratamento de leucemias e de linfomas, de doenas hereditrias hematolgicas e na recuperao dos
pacientes que receberam quimioterapia.
As clulas-tronco hematopoiticas so encontradas em frequncias baixssimas na medula ssea
e no sangue perifrico. Embora no apresentem caractersticas morfolgicas que as distingam das
outras clulas, a presena de marcadores moleculares especficos na membrana permite separ-las e
infundi-las mais tarde na mesma pessoa ou em outra que for compatvel.
Numerosos bancos de sangue, pblicos e privados, oferecem um servio de armazenamento de
sangue de cordo umbilical que asseguraria a recuperao de clulas-tronco hematopoiticas, em
caso de necessidade. Como a probabilidade de uma pessoa vir a precisar de suas prprias clulas
baixssima (1/100.000), a existncia de grandes bancos pblicos representa a garantia de encontrar
doadores compatveis.
Pesquisas em andamento investigam a capacidade regenerativa das clulas-tronco adultas na
cicatrizao de queimaduras, na substituio de clulas da crnea, na regenerao de osso e
cartilagem, no tratamento da artrite e na reparao de fraturas. Embora alguns aspectos relativos ao
seu modo de ao no estejam totalmente esclarecidos, os primeiros ensaios clnicos so
promissores.
As clulas-tronco pluripotentes
Devido s limitaes na capacidade de diferenciao das clulas-tronco presentes nos tecidos
adultos, muitos pesquisadores se interessaram pelas clulas-tronco embrionrias, capazes de se
diferenciar em qualquer tipo de clula e muito mais fceis de cultivar no laboratrio (Tabela 20.2).
Entender os mecanismos que controlam o crescimento e a diferenciao celular um dos
maiores desafios atuais, porque as clulas-tronco embrionrias representam a possibilidade de
novos tratamentos de regenerao celular para doenas cardacas, diabetes, leses da medula
espinhal, distrofia de Duchenne, cegueira, surdez e doena de Parkinson.
Nenhum procedimento teraputico com clulas-tronco embrionrias saiu do laboratrio.
Recentemente, foram iniciados, nos Estados Unidos, os primeiros testes clnicos para o tratamento
de duas formas de cegueira por Advanced Cell Technology e para a regenerao da medula espinhal
e de clulas danificadas por derrame cerebral, por Geron e ReNeuron respectivamente.
Explica-se o grande entusiasmo despertado, em seu momento, pelas clulas-tronco
embrionrias porque se esperava que permitissem criar linhagens celulares personalizadas, por
transferncia nuclear. Clulas-tronco embrionrias com a informao gentica de um paciente
regenerariam os rgos lesionados, sem causar problemas de rejeio (Figura 20.4). As clulas
tambm poderiam ser objeto de uma terapia gnica. O procedimento, denominado clonagem
teraputica, abriria possibilidades para o tratamento de doenas para as quais os recursos
teraputicos so escassos (Parkinson, Alzheimer, Duchenne etc.). Contudo, at serem estabelecidas
as regulamentaes pertinentes, a clonagem teraputica ainda permanece no terreno experimental
do laboratrio.
259
260
Nos captulos anteriores revisamos os fundamentos das biotecnologias e seu impacto na sociedade,
destacando alguns exemplos de empreendimentos latino-americanos bem sucedidos: o
desenvolvimento do setor agropecurio e da indstria de medicamentos da Argentina, a plataforma
genmica e a produo de vacinas no Brasil, o alcance da biominerao no Chile, o sucesso da
experincia de Cuba etc.
Apesar das dificuldades econmicas e polticas, essas experincias foram possveis porque se
cumpriu a condio fundamental de contar com instituies competentes, uma massa crtica de
pesquisadores e pessoal tcnico treinado. Em alguns casos, estas existiam previamente, em outros,
elas foram criadas.
A biotecnologia uma disciplina baseada no conhecimento. Em todos os seus nveis, a educao
tem um rol fundamental na formao dos quadros profissionais e na difuso dos conhecimentos
bsicos indispensveis, para avaliar adequadamente os benefcios dessa tecnologia e estabelecer as
normas para sua utilizao.
No incio do sculo XXI, em um momento histrico mundial de conflitos e mudanas sociais,
vrias so as incgnitas que nos cercam:
o Como estimular o interesse das novas geraes pelo conhecimento cientfico e tecnolgico?
o Como impedir o aumento do distanciamento cientfico e tecnolgico entre os pases
desenvolvidos e os pases em desenvolvimento?
o Como sero afetados os rumos da pesquisa cientfica e tecnolgica com a crise econmica
mundial?
o Como a privatizao da pesquisa cientfica e tecnolgica ir alterar, atravs de um sistema de
patentes, a transparncia do processo de aquisio e divulgao do conhecimento?
o Como passar da pesquisa cientfica ao desenvolvimento tecnolgico de um produto ou de um
servio?
o Como incubar e agrupar as empresas que esto dando os seus primeiros passos?
o Como manter a comunicao e a transferncia de conhecimentos entre os pases em
desenvolvimento?
o Como evitar a manipulao da opinio pblica?
o Como assegurar que os benefcios das biotecnologias cheguem aos povos mais desfavorecidos?
o Como conciliar a cultura de segurana e o desenvolvimento de novas tecnologias?
o Como lidar com as pesquisas de uso duplo, que podem ser usadas tanto para o bem como para o
mal?
o Como inserir as novas tecnologias em um contexto que garanta o respeito aos princpios ticos
fundamentais de nossa sociedade?
Para estas perguntas no h uma nica resposta. Discusso e consenso so fundamentais.
Rio de Janeiro, dezembro de 2011.
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CAPTULO 1
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NDICE REMISSIVO
AAT (-1-antitripsina), 176
Abbott, 215, 234, 240, 248, 280.
Acetona, 3, 5, 6, 23, 24, 31, 59, 60, 109, 112.
cido actico, 12, 24, 60, 109, 112.
cido ascrbico (vitamina C), 70, 112, 113.
cido ctrico, 5, 6, 7, 24, 26, 30, 59, 112, 187.
cido glutmico, 24, 49, 113.
cido lctico, 6, 24, 31, 112-115, 179, 181, 185, 187.
cido succnico, 112.
Adalimumab, 248, 240
Advanced Cell Technology, 259.
Afeganisto, 149.
Affymetrix, 7, 215, 216.
frica do Sul, 6, 153, 161, 183, 257.
Agenda 21, 125.
Agilent, 215, 216, 285.
AkzoNobel, 240.
Alemanha, 57, 107, 109, 116, 121, 149, 163, 252, 254.
Algodo Bollgard, 158.
Allergan, 240.
Amflora, 8, 127, 153, 163.
Amgen, 95, 240.
Angola, 193, 289
ANMAT, Administracin Nacional de medicamentos, Alimentos y Tecnologa Mdica, 247.
ANVISA, Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria, 247.
Applied Biosystems, 215, 218, 280.
AquaBounty, 173, 272.
AquaGestin, 175.
Aranesp, 240.
ARG Natural Beef, 171.
Argentina, 4, 57, 68, 107, 121, 122, 132, 144, 153, 161-163, 165, 171, 172, 174-176, 183, 197, 207, 221, 224,
232, 237, 240, 241, 247, 261, 263, 264, 272-277, 280, 282, 283, 287.
Arroz Bt, 161.
Arroz com vitamina A, ver Golden Rice.
Aspartame, 113, 188.
Astra Zeneca, 229, 234.
ATryn, 105, 176, 239.
Austrlia, 107, 136, 144, 156, 165, 183, 244, 267.
Avastin, ver bevacizumab.
Aventis, 229, 237, 280.
AviGenics, 176.
Banting F., 237.
BASF, 8, 110, 115, 127, 157.
Basilea Pharmaceutica, 234.
Bayer, 129, 159, 230.
Berg P., 93
Betaseron, ver interferon.
Bevacizumab, 8, 240, 248.
Copyright Maria Antonia Malajovich
Biotecnologia: ensino e divulgao (www.bteduc.bio.br)
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ORT - ORGANIZAO, RECONSTRUO E TRABALHO - uma instituio educacional de origem judaica que se
dedica ao ensino e treinamento tecnolgico. Atua hoje em mais de 50 pases e suas escolas so frequentadas
anualmente por cerca de 300.000 alunos.
Sem fins lucrativos, concentra seus esforos em permitir o acesso a uma educao de elevado nvel ao maior
contingente possvel de alunos, sem restries de qualquer espcie. Maior organizao no governamental de
ensino e treinamento tecnolgico do mundo, o ORT desenvolve pesquisas educacionais e coloca seu
conhecimento tcnico disposio de governos, indstrias e outras instituies de ensino.
Desde sua fundao em 1880, um dos principais objetivos do ORT foi ajudar a ajudar-se, levando
independncia e autossuficincia. E alcanou-o oferecendo educao e treinamento s pessoas para ajudarlhes a ganhar seu sustento com dignidade.
Maria Antonia Malajovich biloga, com Licenciatura em Cincias Biolgicas pela Universidade de Buenos
Aires, mestrado e doutorado em Gentica pela UFRJ (Brasil). Foi bolsista da CAPES e CNPq (Brasil), do
Ministrio das Relaes Exteriores da Frana, de World ORT e da Universidade das Naes Unidas (UNUBIOLAC). Ao longo de mais de vinte anos dedicados ao ensino cientfico e tecnolgico, ministrou cursos de
Biotecnologia em vrios pases latino-americanos (Argentina, Brasil, Peru, Uruguai, Venezuela). Desempenhase, desde 1992, como Professora e Coordenadora de Cincias e de Biotecnologia no Instituto de Tecnologia
ORT do Rio de Janeiro. Conta com vrios artigos sobre o tema, e livros publicados no Brasil e na Argentina. Em
2008 recebeu o prmio Beatrice Wand-Polak, outorgado por World ORT aos Professores que se destacam no
desenvolvimento de novos programas, materiais e tecnologias educacionais. Fundou o site Biotecnologia:
ensino e divulgao (www.bteduc.bio.br). Em 2011, foi homenageada pelo Dia do Bilogo, na Assembleia
Legislativa do Rio de Janeiro, em reconhecimento sua dedicao em defesa da Biodiversidade e do Meio
Ambiente. Integra a direo cientfica da Associao Nacional de Biossegurana.