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LA BIOMASA
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I. INTRODUCCIN
Biomasa es un termino general que se
refiere a los Mos presentes en un
sistema.
Cantidad
clulas

persona
s

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masa de
seres
vivos
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I. INTRODUCCIN
La determinacin de la biomasa
es una de las variables ms
importantes de un bioproceso

su determinacin
nos lleva a la
comprensin de la
eficiencia del
mismo.

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I. INTRODUCCIN
Consum
o de
nutrient
es

Tasas de
producci
n

Es una
variable
clave
para
establece
r:

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Calculo de
balance de
masas de
cualquier
proceso
biolgico.
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I. INTRODUCCIN
Existen 2 mtodos principales de estudiar
poblaciones microbianas en la naturaleza:
MTODO
DIRECTO

MTODO
INDIRECTO

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A. MTODO DIRECTO

Observacin de los
organismos
En el microscopio
ptico

Conteo del nmero

de Mos

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A. MTODO DIRECTO
Requiere de preparaciones puras sin ningn tipo
de partculas que puedan interferir en los
resultados y:

Se refiere bsicamente a la medida de la masa

celular.

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A. MTODO DIRECTO
Determinacin
del peso hmedo

MTODOS
DIRECTOS

Determinacin
del peso seco

Componentes
caracterstico

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Peptidoglucano
ARN
ADN

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PESO SECO

La cantidad total de biomasa presente en una

muestra puede medirse:

En trminos de peso seco por unidad de

volumen.

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PESO SECO

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PESO HMEDO

Se obtiene a partir de una muestra

en suspensin que es pesada luego
de la separacin de las clulas por
filtracin o centrifugacin.

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PESO HMEDO

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B. MTODOS INDIRECTOS

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B. MTODOS INDIRECTOS
Medidas de turbidez

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B. MTODOS INDIRECTOS
Medidas de turbidez

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B. MTODOS INDIRECTOS
Escala de Mc Farland
Se trata de una serie de patrones de turbidez
previamente calibrados.

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B. MTODOS INDIRECTOS
Escala de Mc Farland
Se basa en la capacidad de:

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B. MTODOS INDIRECTOS
Escala de Mc Farland

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B. MTODOS INDIRECTOS
Espectrofotometra
Se caracteriza por su precisin, sensibilidad y
su aplicabilidad a molculas de distinta
naturaleza (contaminantes, biomolculas, etc.)
y,

Estado de agregacin (slido, lquido, gas).

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B. MTODOS INDIRECTOS
Espectrofotometra
Las
principales
ventajas
espectrofotometra son:

de

la

Sensibilidad relativa elevada.

Facilidad para realizar mediciones rpidas.

Grado de especificidad relativamente elevado.

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B. MTODOS INDIRECTOS
Espectrofotometra
Los espectros de absorcin se miden mediante
un instrumento denominado espectrofotmetro.

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B. MTODOS INDIRECTOS
Espectrofotometra
El espectrofotmetro, mide la absorbancia, A,
que se define por:

D.O. = A = -logT/100
Mide la densidad ptica (D.O.), es decir la absorbancia.
T= transmitancia
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II. OBJETIVOS

Lograr determinar la biomasa Microbiana, a

travs de diversos mtodos.

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III. MATERIALES Y MTODOS

Mtodos directos: determinacin del peso
hmedo y peso seco

Materiales:
Levadura de panificacin Fleishmann
Agua destilada
Pipetas de 5ml
Tubos de ensayo
Balanza analtica
Centrifuga
Estufa
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III. MATERIALES Y MTODOS

Mtodos directos: determinacin del peso

hmedo y peso seco

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III. MATERIALES Y MTODOS

Peso Seco:

Tomar muestras de 5 mL de la solucin inicial y

colocar en 3 tubos de ensayos previamente pesados.
Luego llevar los tubos a la centrifuga y hacerlo girar
a 4 000 rpm, por un tiempo de 10 minutos.
Luego pesar cada tubo de ensayo en la balanza
analtica y anotar los pesos.
Posteriormente, llevar los tubos a estufa, a una T de
105 C por un tiempo promedio de 3 horas.
Pasado el tiempo anotar, los pesos y luego obtener
un promedio. (Anexo 1).
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III. MATERIALES Y MTODOS

Por ultimo expresar los datos en la siguiente

formula.

Fuente: Arniz,C,Determinacin De La Biomasa En Procesos

Biolgicos. Sevilla

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III. MATERIALES Y MTODOS

Peso Hmedo:
Tomar muestras de 5 mL de la solucin inicial y
colocar en 3 tubos de ensayos previamente
pesados.
Llevar los tubos a la centrifuga, donde se hacen
girar a 4 000 r.p.m., por un tiempo de 10
minutos.
Luego pesar cada tubo de ensayo en la balanza
analtica, anotamos los pesos y luego promediar
(Anexo 1).

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III. MATERIALES Y MTODOS

Por ultimo expresar los datos en la siguiente

formula.

Fuente: Arniz,C,Determinacin De La Biomasa En Procesos

Biolgicos. Sevilla

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Figura 01: Metodologa de peso seco y hmedo

Fuente: Google Imgenes
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III. MATERIALES Y MTODOS

Mtodos indirectos: determinacin de turbidez a travs de la
Escala de McFarland y espectrofotometra

Materiales:
cepa de E. coli
Agar Nutritivo
Solucin Salina 0.85%
BaCl2 1%
H2SO4 1%
Agua destilada estril
Tubos de ensayo
Pipetas
Espectrofotmetro

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III. MATERIALES Y MTODOS

Mtodos indirectos: determinacin de

turbidez a travs de la Escala de McFarland
y espectrofotometra

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III. MATERIALES Y MTODOS

Nefelomtria de McFarland:

Agregar los reactivos a los tubos rotulados de

manera apropiada (1 a 10) en las cantidades que
se indican a continuacin:
Estndares de sulfato de
Tubo
1
2
3
4
5
0.
BaCl2 1%(ml)
0.2 0.3 0.4 0.5
1
9.
H2SO4 1%(ml)
9.8 9.7 9.6 9.5
9
Densidad aprox.
De clulas
3
6
9
12 15
(x108/ml

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bario
6
7

10

0.6 0.7 0.8 0.9 1.0

9.4 9.3 9.2 9.1
18

21

24

33

27

9
30

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III. MATERIALES Y MTODOS

Sellar los tubos y rotular. El precipitado de BaSO 4
suspendido corresponde aproximadamente a la
densidad
de
clulas
homogneas
de
Escherichia coli por mililitro.
Luego, se toma una alcuota de la muestra de
bacterias.
Se inocula en un tubo contenido de solucin
salina fisiolgica (0,85%) y se procede a
comparar el tubo con los de la escala estndar y
obtener los resultados de la densidad.

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Figura 02: Escala de Mc Farland

Fuente: Google Imgenes
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III. MATERIALES Y MTODOS

Espectrofotometra:

En el espectrofotmetro establecer la absorbancia

a 546 nm de longitud de onda, de cada uno de
los tubos de la escala de MacFarland.
Con estos datos, teniendo en cuenta las
concentraciones celulares correspondientes a
cada tubo y mediante el uso de un papel
milimetrado semilogartmico establezca una curva
patrn de nmero de bacterias con relacin a la
absorbancia.
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III. MATERIALES Y MTODOS

Prepare diluciones seriadas de la muestra

biolgica en SSF. Para ello, utilice los tubos de
15x125mm y las pipetas estriles. Realice las
siguientes diluciones: 10-1, 10-2,10-3,10-4,y 10-5.
Establezca la absorbancia de las diluciones y a
travs de la curva patrn determine el nmero de
bacterias presentes en cada dilucin y teniendo
en cuenta el factor de dilucin del tubo trabajado,
establezca el nmero de bacterias por mililitro.
Promediando estos datos, determine el nmero
de bacterias presente en la muestra.
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Figura 03: Espectroftometro

Fuente: Google Imgenes
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III. MATERIALES Y MTODOS

Adicional a esto realice una siembra

incorporacin de las muestras en una placa con
agar nutritivo, incubarlas a 37C por horas;
realice un recuento y compare si los resultados
obtenidos concuerdan con lo esperado.

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Figura 04: siembra por incorporacin

Fuente: propia
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BIBLIOGRAFA

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