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PALABRAS CLAVES
DIDEOXINUCLETIDOS
RECOMBINANTE
CLONACIN
ESCALONADA
BACTERIOFAGO
PLASMIDOS
GLOSARIO
Dideoxinucletidos.- Nucletido modificado que en posicin 3' ha perdido el grupo OH. Se
simboliza como ddNTP. Se incorpora en sntesis de DNA y RNA pero se inhibe el proceso se
sntesis posterior.
Escalonada: Semejante en la superficie a una serie de escalones.
Bacteriofago.- Es un virus que infecta exclusivamente bacterias. Tal y como sucede con muchos
otros virus que infectan a clulas
Plsmidos.-Son molculas de ADN extracromosmico circular que se
replican y transmiten independientes del ADN cromosmico
Recombinante.- Clula u organismo que resulta de la recombinacin de genes en la molcula de
ADN, independientemente de si se ha producido de forma natural o por medios artificiales.
Generacin de
una molcula de
ADN
La estrategia bsica en la
Recombinante.
clonacin molecular es
insertar un fragmento de
ADN de inters en una
molcula que es capas de
replicarse de forma
independiente en una clula
husped.
LOS VECTORES
PLASMIDICOS
GENERALMENTE
CONSISTEN EN 2
A 4 KB DE ADN,
INCLUYENDO UN
ORIGEN DE
REPLICACIN
UN GRUPO DE
FRAGMENTOS DE
ADNC SON
LIGADOS A UN
PLSMIDO DE
ADN
PREVIAMENTE
DIGERIDO
MEDIANTE UNA
En determinados estudios de
anlisis de ADN genmico es
preciso clonar fragmentos de ADN
mayores de lo que un fago X
puede portar.
COSMIDOS
BACTERIOFAGOS PI
CROMOSOMA
ARTIFICIAL PI
En determinados estudios de
anlisis de ADN genmico es
preciso clonar fragmentos de ADN
mayores de lo que un fago X
puede portar.
C. ARTIFICIAL
BACTERIANO
C. ARTIFICIAL DE
LEVADURA
ecuenciacin de ADN
LA CLONACION MOLECULAR DE
UN FRAGMENTO INDIVIDUAL DE
ADN PERMITE EL AISLAMIENTO
DE LAS GRANDES CANTIDADES
DE MATERIAL GENETICO,
INCLUYENDO LA
DETERMINACION DE SU
SECUENCIA DE NUCLEOTIDOS
LA SINTESIS DE ADN SE
INICIA EN UN PUNTO
UNICO DEL ADN
CLONADO
A PARTIR DE UN
CEBADOR SINTTICO
LAS SECUENCIAS
CODIFICANTES DE
GENES ESTAN
RELACIONAS
FRECUENTEMENTE
CON LAS DE GENES
PREVIAMENTE
ESTUDIADO
EL METODO BASICO
EMPLEADO PARA SECUENCIAR
EL ADN(1977), SE BASA EN LA
INTERRUPCION PREMATURA
DE LA SINTESIS DE ADN
MEDIANTE LA INCLUSION DE
DIDEOXINUCLETIDOS
( HIDROXILO 3 DE LA
DESOXIRRIBOSA
LA RECREACCION DE
SINTESIS DE ADN
INCLUYE 4
DIDEOXINUCLETIDOS
( A,C,G y T)
LA INCORPORACION DE UN
DIDEOXINUCLETIDO
DETIENE LA SINTESIS DE
ADN POR QUE NO HAY
NINGUN GRUPO HIDROXILO
EN 3 DISPONIBLE PARA LA
EDICCION DEL SIGUIENTE
NUCLEOTIDO
Serie de
molculas de ADN
Fragmentos de
ADN son entonces
separados en
funcin de su
tamao
La secuencia de ADN
puede ser leda por el
orden
de
fragmentos
marcados
con
fluorescencia
La secuencia de
ADN automtica
de
alto
rendimiento, que
emplea
dideoxinucleotido
s
Se ha desarrollado
mtodos nuevos que
permite secuenciar
el ADN mucho ms
rpido
Tcnicas
novedosas,
agrupadas
bajo el nombre
de
secuenciacin
Es
posible
secuenciar
miles
de
millones
de
bases de ADN
al da.
Se
han
desarrollado
tcnicas
que
permiten
secuenciar
ARN
directamente,