Biologia Forense

Curso de verano
Biologa Forense
La Rbida, 1 al 5 de agosto de 2005

Directores
Dra. Pilar Sanz Nicols
Dr. Manuel Lpez soto
LAS CIENCIAS FORENSES EN ESPAA. INTCF, IML, LABORATORIOS DE

POLICA CIENTFICA Y GUARDIA CIVIL
PILAR SANZ NICOLS

Directora de Departamento de Sevilla del Instituto Nacional de Toxicologa
y Ciencias Forenses.
La definicin ms sencilla de Ciencia Forense, de acuerdo con la

Forensic Science Society del Reino Unido, es la que la considera como la
aplicacin de los conocimientos cientficos a cuestiones legales. Cuestiones
legales que puedan requerir la intervencin de un cientfico son todos los
sucesos que necesitan la decisin de un juez o un jurado y en los que hay que
investigar causas que excedan de los conocimientos que aporta el derecho (un
robo, una falsificacin de documentos, el derrumbamiento de un edificio, un
vertido a un ro, una homicidio...).
Expertos de cualquier rama del conocimiento pueden ser llamados a
colaborar
con la justicia. En ese mismo momento pasan a ser expertos
forenses. Recogern informacin de las personas que han intervenido en el

suceso, del lugar en que ha ocurrido o de los objetos relacionados, para aportar
datos objetivos que ayuden a esclarecer el caso judicial. El bilogo forense
recoger esa informacin de pistas biolgicas (fluidos corporales, restos
humanos o animales, vegetales)
que han ido quedando sobre los propios
implicados y en el lugar de los hechos o los objetos. Las analiza, las identifica,
las individualiza y colabora as a aclarar los hechos.
Los bilogos forenses intervienen en casos civiles, como son los
estudios de parentesco (por ejemplo filiaciones: reconocimiento o impugnacin
de paternidad), en casos penales como puede ser un robo en el que el ladrn
se ha herido y ha dejado su sangre en un cristal, o en casos criminales
(homicidios, agresiones sexuales) y en desastres en masa (accidentales o
terroristas).
En la investigacin de delitos (investigacin de la escena del crimen,

CSI) intervienen muy distintos tipos de profesionales. Al lugar de los hechos
acuden
distintos cuerpos policiales (local, nacional, guardia civil); tambin
puede ser necesaria la presencia de bomberos, si hay un incendio, una

inundacin o cualquier otro percance que los requiera, del 061 y otros grupos
asistenciales si hay heridos o muertos. El primero que se entera avisa a la
polica y se pone el hecho en conocimiento del Juzgado de Guardia. Si hay
personas heridas o fallecidas acude el mdico forense. Tambin puede ocurrir
que una vctima de cualquier tipo de agresin acuda directamente a la polica,
al hospital o al Juzgado a poner la denuncia.
Esquemticamente, el mdico forense se encarga del reconocimiento de
las personas o de la autopsia en su caso, la polica inspecciona el lugar de los
hechos y busca al delincuente (que tambin puede ser atendido por el mdico
forense). Tanto unos como otros, en el desempeo de su funcin, recogen
cuantos vestigios y objetos presenten inters y los envan al laboratorio para su
anlisis.
Tanto Polica Nacional como Guardia Civil disponen de laboratorios
propios y los Mdicos Forenses, actualmente organizados en Institutos de
Medicina Legal provinciales o regionales (segn autonomas; algunos de ellos
disponen tambin de laboratorios), mandan las muestras al Instituto Nacional
de Toxicologa y Ciencias Forenses (INTCF). Existen en Espaa tres
Departamentos del INTCF, dependientes del Ministerio de Justicia, en Madrid,
Barcelona y Sevilla y una Delegacin en Tenerife. No obstante esta
multiplicidad de laboratorios con funciones muy parecidas, pertenecientes a
distintos Ministerios, intercambian a menudo muestras e informacin.
Los laboratorios forenses realizan pruebas periciales y emiten informes
forenses.
LA PRUEBA PERICIAL EN LA RESOLUCIN DE DELITOS
PILAR SANZ NICOLS

La Administracin de Justicia tiene una doble misin; por una parte el
conocimiento de la Ley y por otra la consideracin de los hechos a los que se
aplica. En esta segunda misin, si se sobrepasa el conocimiento que
proporciona el Derecho es necesario recurrir a la prueba pericial.
El Juez acordar el informe pericial cuando, para conocer o apreciar
algn hecho o circunstancia importante en el sumario, fuesen necesarios o
convenientes conocimientos cientficos o artsticos (Artculo 456 de la Ley de
Enjuiciamiento Criminal). Las pruebas periciales al ser actos jurdicos se rigen
por leyes, la de Enjuiciamiento Civil para los casos civiles (para nosotros los
estudios de filiacin) y por la ley de Enjuiciamiento Criminal (LEC), donde estn
definidos perfectamente todos los momentos y circunstancias de la prueba:
-
La recogida y conservacin de los vestigios o pruebas materiales
Como debe describirse el lugar del delito y los objetos que se

encuentren.
Como deben recogerse los vestigios o huellas para garantizar su

autenticidad
En que circunstancias se recurre a la colaboracin de peritos.
Es una ley que data de 1882 y aunque ha sufrido numerosas

modificaciones, la ltima en 2003, todava conserva un lenguaje decimonnico
y habla de Ministerio de Gracia y Justicia como se denominaba antes. Cuando
habla de pruebas periciales se refiere normalmente a anlisis de sustancias
qumicas, y alguna vez cita los anlisis biolgicos. En la modificacin ltima se
incluye un apartado dedicado al ADN.
El Perito se define como la persona no-jurista con conocimientos
especiales (experto), que informa al Juez sobre puntos litigiosos y el Perito
Bilogo es por tanto el facultativo especializado en Biologa que proporciona
conocimientos y experiencias conforme a su profesin y emite dictmenes no

jurdicos. La Biologa forense es muy amplia, abarca muchos aspectos y en el
Laboratorio de Biologa Forense lo mismo hay que identificar plantas que setas,
realizar estudios microbiolgicos, buscar diatomeas en sangre o tejidos de
personas ahogadas, identificar alimentos en un contenido gstrico, pero el
grueso del trabajo lo constituyen los estudios de parentescos y la
individualizacin de vestigios en casos penales o criminales. La herramienta de
eleccin es la individualizacin gentica por lo que los laboratorios de Biologa
Forense actuales estn altamente especializados en Gentica Molecular.
De acuerdo con la LEC, los Peritos pueden ser titulares (con titulacin
acadmica) o no titulares y a su vez los Titulares pueden ser oficiales o no
oficiales. Los Peritos oficiales son funcionarios de un organismo estatal como el
INTCF.
Normalmente los jueces prefieren peritos titulares y, siempre que los
haya, oficiales y la LEC exige que la prueba pericial se lleve a cabo por dos
peritos.
En resumen, la prueba pericial es el examen de las pruebas por un
experto aunque la LEC se refiere a ella como reconocimiento o acto pericial,
porque presupone (pensemos en el siglo XIX) que se realiza en el transcurso
del juicio oral. Como es lgico los recursos tcnicos que se aplican hace que el
acto pericial biolgico se lleve a cabo en laboratorios especializados donde el
perito. por orden del Juez Instructor y a travs del Instituto de Medicina Legal,
hace los anlisis y emite los informes.
La prueba pericial auxilia a la administracin de justicia, es eficaz y a
menudo decisiva (exclusin de una paternidad), pero no es vinculante, es decir
que no es obligatorio que jueces y tribunales se atengan a ella y resuelven
libremente de acuerdo con todos los dems datos y circunstancias del hecho.
MESA REDONDA
ACTUACION EN EL ESCENARIO DEL CRIMEN. POLICIA JUDICIAL.
LA INSPECCION OCULAR: BUSQUEDA Y RECOGIDA DE INDICIOS.
LA VICTIMA. EL AGRESOR.
MARIANO PERELL RIUS
Laboratorio Biologa/ADN de la Brigada Provincial de Polica Cientfica de
la Jefatura Superior de Polica de Andaluca Occidental.
INTRODUCCION: LA POLICIA CIENTIFICA
Se enuncia cual es la misin asignada a las unidades de Polica
Cientfica dentro de la estructura bsica de la Direccin General de la Polica
as como las funciones desarrolladas por las mismas en la prctica habitual.
Breve explicacin de cmo se incardina la actuacin de la Polica
Cientfica en la investigacin policial de un hecho delictivo.
LA INSPECCION OCULAR TECNICO-POLICIAL: OBJETIVO, FASES Y

MEDIOS
Definicin genrica de la Inspeccin Ocular Tcnico-Policial y su
concrecin dentro del campo de actuacin de la Biologa Forense.
Antes de proceder a la Inspeccin Ocular propiamente dicha, es
preceptiva la realizacin de unas Actuaciones previas que abarcan tanto la
asistencia a la vctima como el aislamiento de la zona.
La Inspeccin Ocular tiene un triple objetivo: Comprobar la realidad del
delito y servir de base a la investigacin (saber que hecho delictivo ha
ocurrido), Evidenciar los medios empleados (como se ha producido el delito)
e Identificar a los autores.
La investigacin pericial de los indicios en general, y de los biolgicos en
particular, consta de tres etapas:
- Bsqueda en la escena del delito.
- Recogida y envo al Laboratorio de los indicios.
- Investigacin analtica de los mismos.
Es de capital importancia sealar que el resultado final de la prueba del
ADN va a depender en gran medida de la correcta ejecucin de los procesos
de recogida y envo de muestras al laboratorio; y adems, la admisibilidad de

dicha prueba en los Tribunales de Justicia tambin vendr condicionada por el
cumplimiento de la cadena de custodia.
En cuanto a los medios que habitualmente se emplean en el examen del
lugar de los hechos, a efectos de la bsqueda y recogida de indicios biolgicos
podemos englobarlos en dos apartados:
-
Medios que facilitan la bsqueda y localizacin de los indicios

(reactivos qumicos y equipos de iluminacin).
Medios empleados para la recogida de muestras (maletines de

Inspecciones Oculares y Kits de recogida).
BUSQUEDA DE INDICIOS BIOLOGICOS

Como introduccin se enumeraran cuales son los indicios biolgicos ms
frecuentes en los Laboratorios Forenses.
La metodologa a seguir en la bsqueda vendr condicionada por las
circunstancias particulares de cada caso en concreto; si bien es muy
conveniente efectuar una interpretacin in situ de los indicios antes de
manipular nada, ya que una correcta valoracin de los mismos exige su estudio
dentro del contexto del lugar en que se ha producido el delito.
La bsqueda en s debe de ser minuciosa, ordenada y sistemtica,
extremando las precauciones para no pasar por alto algn indicio o destruirlo
inadvertidamente; siendo muy recomendable seguir los mtodos de dividir la
escena en cuadrculas, que se irn examinando sucesivamente, o bien en
crculos concntricos, tomando como centro el lugar que consideremos ms
importante, por ejemplo, la ubicacin del cadver.
En cualquier caso, antes de proceder a la recogida, se debe documentar
la localizacin de todos los indicios biolgicos que se vayan a recoger mediante
esquemas, fotografas o vdeo, lo cual nos podr servir para poder plantear una
hiptesis sobre los hechos.
En cuanto a los lugares de bsqueda, vendrn condicionados por las
circunstancias particulares de cada caso en concreto. A ttulo de ejemplo, se
describir como se procedera en los casos ms comunes (lugar cerrado,

abierto, vehculos, vctima y agresor).
RECOGIDA DE INDICIOS BIOLOGICOS
Durante el proceso de recogida es muy conveniente adoptar una serie
de precauciones que abarcan un doble mbito: La proteccin del personal
encargado de la recogida y la proteccin de las muestras (esta ltima para
evitar distintos procesos que puedan afectar a su integridad, fundamentalmente
la posible contaminacin de las mismas).
Como complemento a la prctica de la Inspeccin Ocular, en muchos
casos se efecta la toma de las denominadas muestras de referencia o
indubitadas, que seran aquellas
de las que sabemos de qu persona
proceden (vctima, sospechoso, cadver) para su cotejo con las evidencias

recogidas en el lugar del delito (muestras dubitadas).
En lo referente a la recogida de indicios biolgicos en el lugar de los
hechos, se enumerarn las normas bsicas a seguir para efectuar una correcta
recogida de los indicios, con ejemplos de la casustica mas frecuente (manchas
en soportes pequeos y de fcil transporte, en soportes no transportables,
soportes absorbentes y no absorbentes, indicios hmedos, lquidos, pelos, etc.)
MESA REDONDA
ACTUACIN EN EL ESCENARIO DEL CRIMEN. POLICA JUDICIAL.
INSPECCIN OCULAR: BSQUEDA Y RECOGIDA DE INDICIOS
LA VCTIMA. EL AGRESOR
FLIX SNCHEZ UGENA
Director del Instituto de Medicina Legal de Badajoz.
La existencia de una persona fallecida en condiciones extraas o de
forma violenta, supone un acontecimiento desde el punto de vista Policial y
Judicial que pone en marcha un dispositivo especfico encaminado a esclarecer
las causas y circunstancias de ese fallecimiento.
Entre las actuaciones previstas est la prctica de la autopsia Mdico
Legal, conforme a lo establecido en la Ley de Enjuiciamiento Criminal (Art. 343)
La autopsia judicial no se limita al examen interno del cadver como
podra pensarse, sino que comprende una serie de pasos bien diferenciados y
de gran trascendencia cada uno de ellos, a saber:
- Inspeccin ocular y levantamiento del cadver.
- Examen externo y examen interno del cadver.
- Pruebas y estudios de laboratorio complementarios.
EL LEVANTAMIENTO DEL CADVER

Se trata de una actuacin judicial por la que se constituye en el lugar de
los hechos la Comisin Judicial, formada por el Juez, el Secretario, el Mdico
Forense y el Agente Judicial. Una vez practicada, el Juez ordena el
LEVANTAMIENTO DEL CADVER y su traslado al lugar donde vaya a
realizarse la autopsia.
La diligencia de inspeccin ocular y levantamiento del cadver es de
extraordinario inters mdico forense ya que como dice el profesor Gisbert un
examen a la ligera del cadver en el lugar de los hechos puede invalidar y
hacer ineficaz la ms minuciosa y perfecta de las autopsias.
En primer lugar, se trata de proceder al examen del cuerpo para
comprobar la realidad de la muerte, el momento estimado del fallecimiento y el
posible origen (natural o violento) de la misma. A continuacin habr que
recoger aquellos datos e indicios que nos permitan la posibilidad de reconstruir

los hechos, una aproximacin a la causa, circunstancias de la muerte y la
posible intervencin de terceros.
Para ello se tomar nota de los siguientes datos: posicin del cuerpo y
relaciones con el entorno, examen somero de las ropas, apreciacin de
lesiones de forma general, bsqueda y recogida de indicios biolgicos y no
biolgicos y cualquier otra circunstancia de inters. Es fundamental apoyar la
recogida de estos elementos con croquis, esquemas, fotografas o videos.
Cindonos al tema que nos ocupa es evidente que en el estudio
biolgico forense de un determinado caso nosotros somos el primer eslabn de
la cadena. De nada sirve un extraordinario laboratorio, con los mejores
recursos humanos y materiales, s el mdico forense no sabe que indicios
buscar, como los tiene que recoger y conservar y enviar y que tiene que
solicitar al laboratorio.
VESTIGIOS DE INTERS MDICO LEGAL
BIOLGICOS
NO BIOLGICOS
- Sangre
- Semen
- Restos
- Tejidos
- Uas
- Mordeduras / saliva
-Otros
- Ropas
- Balas, tacos, perdigones
- Fibras diversas.
- Restos de pintura
- Fragmentos de vidrio
- Tierra
- Otros
CONSERVACIN DE LOS VESTIGIOS
A.- DURANTE EL TRASLADO
B.- EN EL DEPSITO
- Evitar prdidas y contaminaciones.
- Mnima manipulacin.
- Proteger las manos
- No retirar envoltorio.
- Envolver el cuerpo.
- No desnudar ni lavar.
- No obtener la necrorresea.
RECUPERACIN DE LOS VESTIGIOS

I.- EXAMEN CUIDADOSO DEL CUERPO
- Bsqueda de elementos adheridos en ropa / piel.
- Toma de muestras de sangre.
- Toma de muestras de uas
- Toma de muestra de boca / ano / vagina.
II.- RECOGIDA DE VESTIGIOS BIOLGICOS
III.- RECOGIDA DE VESTIGIOS NO BIOLGICOS
RECONOCIMIENTO Y RECOGIDA DE MUESTRAS DEL POSIBLE AUTOR
INSPECCIN GENERAL. Encaminada a la bsqueda de lesiones o signos de
lucha o defensa, que puedan orientarse hacia su participacin en los hechos.
RECOGIDAS DE INDICIOS.
Ropas que llevaba en el momento de la agresin.
Muestras de pelos: cabellos, barba, bigote, vello pbico...
Muestras de sangre y/o saliva.
Hisopo lavado de glande.
OTROS PROBLEMAS MDICO LEGALES QUE NOS PUEDE RESOLVER
LA BIOLOGA FORENSE
INVESTIGACIN BIOLGICA DEL PARENTESCO.

INDIVIDUALIZACIN DE RESTOS HUMANOS.
IDENTIFICACIN DE RESTOS SEOS.
ESTUDIO BIOLGICOS DE LA MUERTE POR SUMERSIN.
ENVO DE MUESTRAS AL LABORATORIO FORENSE
VICTORIA PRIETO RUIZ-CANELA

Facultativo del Servicio de Biologa. Instituto Nacional de Toxicologa y
Ciencias Forenses. Departamento de Sevilla
El estado actual de las tcnicas de identificacin gentica hace posible el
anlisis de cantidades trazas de restos biolgicos y la convierten en una
herramienta imprescindible en la investigacin de vestigios biolgicos de
inters forense. Desde una colilla dejada en el lugar del crimen, un pelo o unos
escasos restos epiteliales restantes en unas uas tras un araazo son hoy
valiosas pruebas que pueden por si solas arrojar la informacin suficiente
para identificar a un sospechoso.
Sin embargo, paralelamente al aumento de sensibilidad en las tcnicas
de deteccin de ADN, ha crecido el riesgo de contaminaciones exgenas de las
que puede derivarse el fracaso de la investigacin. Adems, una mala praxis
en la toma de muestras o el incumplimiento de la cadena de custodia puede
incurrir en la invalidacin de la prueba ante los Tribunales.
Conscientes de estos riesgos, se han realizado desde hace tiempo
muchos esfuerzos encaminados a mejorar las condiciones de recogida de
indicios, su preservacin y envo al laboratorio, como son la elaboracin de
recomendaciones y normas para la recogida de muestras, diseo de protocolos
de actuacin en su recogida y formularios que permitan sintetizar toda la
informacin referente a una muestra concreta.
En el ao 1996, el Instituto Nacional de Toxicologa y Ciencias Forenses
(INTCF) elabor unas Normas para la preparacin y remisin de muestras
objeto de anlisis por el Instituto de Toxicologa, que se publicaron en el BOE
n 308 de 23 de diciembre de 1996 (Orden de 8 de noviembre de 1996) que
contiene, entre otros apartados, informacin sobre el tipo de muestras que
deben estudiarse, cmo deben enviarse y los formularios que deben
cumplimentarse cuando se solicitan anlisis genticos. Estas normas se
encuentran hoy en revisin para adaptarlas a las nuevas tcnicas y se espera

su pronta publicacin en el BOE.
Por otro lado, dentro del GEP-ISFG (Grupo Espaol y Portugus de la
Sociedad Internacional de Gentica Forense) se elabor un documento de
Recomendaciones para la recogida y envo de muestras con fines de
identificacin gentica en el ao 1999, cuya misin es la de difundir buenas
practicas en la toma y manejo de muestras que permitan garantizar la
autenticidad e integridad de las mismas, as como asegurar el cumplimiento de
la cadena de custodia. Este documento se aprob en la reunin del GEP-ISFG
del 2000 y fue publicado por el Ministerio de Justicia en el 2001 y difundido
entre todos los Mdicos Forenses del Estado.
No existe an en Espaa una normativa oficial para la recogida de
muestras, aunque esperamos que se derive de actuales proyectos tales como
los de la ley de bases de datos de ADN y los procesos de acreditacin de los
laboratorios forenses.
Entre los puntos ms importantes que observaremos en relacin con el
envo de muestras al laboratorio forense destacaremos las precauciones
destinadas a la proteccin del personal, las precauciones destinadas a la
proteccin de las muestras, la documentacin necesaria y la toma de muestras.
1. Precauciones destinadas a la proteccin del personal.
En la manipulacin de evidencias biolgicas ser necesario tomar
precauciones universales asumiendo que cualquier muestra puede ser
infecciosa: uso de guantes, mascarilla, bata u otra ropa protectora; prohibicin
del consumo de bebidas, comidas y tabaco; uso de material desechable
siempre que sea posible y uso de contenedores especficos para residuos
biolgicos; vacunacin del personal (hepatitis, ttanos, etc.).
2. Precauciones destinadas a la proteccin de las muestras.
Todo lo expuesto anteriormente tiene cabida tambin en cuanto a la
proteccin de la muestra, que debe ser protegida tanto de la contaminacin
biolgica por otro material gentico ajeno al de la evidencia como de la
degradacin por una incorrecta manipulacin de la misma.
La prevencin de contaminaciones biolgicas de la muestra debe

contemplarse en todos los estados de recogida, procesado previo y anlisis de
las muestras y en este sentido la primera regla de oro a observar ser: Nunca,
bajo ninguna circunstancia, se permitir al sospechoso ocupar el mismo rea
de la vctima (o viceversa) hasta que todas las evidencias se hayan recogido.
Esto incluye vehculos, salas de espera, salas de interrogatorio, etc. La misma
regla cuenta para el envo de muestras dubitadas e indubitadas que jams
deben compartir el
mismo embalaje, e incluso en el laboratorio durante el
alicuotado y procesado de las muestras debe observarse una separacin

espacial y temporal entre evidencias y muestras indubitadas.
Adems, deben preservarse las evidencias de la exposicin a condiciones
medioambientales adversas que podran favorecer la proliferacin microbiana,
utilizar embalajes de papel con preferencia al plstico y nunca aadir
conservantes del tipo del formol.
3. Documentacin necesaria.
-
Formularios de envo de muestras en casos de inters criminal y de

investigacin de la paternidad, especificando el tipo de estudio solicitado.
Datos de identificacin de la muestra.
Cadena de custodia: nombre y firma del personal que recoge la muestra,

fecha y hora, y condiciones de almacenamiento hasta su envo. Fecha de
envo y medio de transporte utilizado.
Documentos adicionales: informe preliminar de autopsia, antecedentes

clnicos, fotografas de la localizacin de los indicios, etc.
4. Toma de muestras.
-
Muestras de referencia en personas vivas: sangre, saliva, pelos.
Muestras de referencia en cadveres: sangre, saliva, pelos.
Muestras de referencia en cadveres en avanzado estado de putrefaccin

o esqueletizados: dientes, hueso largo.
Otras
posibles
muestras
de
referencia:
biopsias,
preparaciones
histolgicas, objetos personales del fallecido.... .

-
Indicios biolgicos: recoger en funcin de la naturaleza del indicio y del

soporte sobre el que se presenta. Empaquetar cada indicio por separado.
CRITERIOS DE ORGANIZACIN Y CALIDAD
PILAR SANZ NICOLS

El Laboratorio Forense rene una serie de requisitos que lo hacen muy

diferente de otros tipos a los que estamos ms acostumbrados como son los de
centros de investigacin, universitarios o incluso los de algunas empresas.
Estos requisitos se refieren al propio tipo de trabajo, que por ser judicial
est sujeto a absoluta confidencialidad. El perito tambin tiene que reunir una
serie de requisitos, independientemente de su preparacin tcnica, y no puede
participar en una pericia si existen relaciones de parentesco, consanguneo o
de afinidad, o amistad o enemistad, con el acusado o la vctima, tampoco si
tiene algn tipo de inters en la causa judicial. Y por ltimo una de las
diferencias ms importantes en el trabajo pericial lo constituyen las propias
muestras, sobre todo en los casos criminales.
Por tratarse de pruebas para el esclarecimiento de un delito, se les
denomina vestigios, suelen ser nicas, las ms de las veces irrepetibles (salvo
las muestras de referencia que se toman a un acusado o a una vctima viva),
son limitadas y muy frecuentemente muy escasas, sobre todo desde que
disponemos de la tecnologa del ADN y podemos analizar muestras mnimas.
Todo ello exige por parte del experimentador (facultativo o auxiliar de
laboratorio) altas dosis de cuidado y responsabilidad. Pero adems,
como
necesariamente tienen que estar perfectamente autentificadas, es obligatorio

conservar al menos una parte para futuros anlisis y muchos de los objetos son
tambin piezas de conviccin que hay que aportar al momento del juicio (un
arma, unas ropas), es necesario tener rigurosamente establecida y controlada
la cadena de custodia.
La cadena de custodia no debe presentar ni una sola discontinuidad;

debe en todo momento estar documentada la localizacin exacta de las
muestras originales, de las muestras de anlisis, sus alcuotas y extractos.
Esta custodia abarca desde la entrega al Centro por el transportista, la entrega
al laboratorio, la conservacin hasta el momento del anlisis y durante el
mismo y la custodia postanlisis hasta la devolucin de las muestras originales
al Juzgado cuando procede o su destruccin. Todos los cambios de ubicacin
o de mano deben estar registrados y los posibles envos al exterior
documentados (devoluciones al Juzgado o envo a otros Laboratorios para
ampliacin de anlisis).
El informe escrito est tambin estipulado y la LEC exige que conste una
descripcin detallada de las muestras y de su estado, una relacin detallada de
los anlisis y de los resultados. Esto y la necesaria rigurosidad de los estudios
hace que se disponga de protocolos normalizados de trabajo para todas las
operaciones del laboratorio, de hojas de recogida de datos en los que se
consignan todas las circunstancias de cada ensayo y sus resultados y que
estos estn contrastados por los dos peritos que firman el informe. El
laboratorio forense debe estar por tanto sometido a medidas de control de la
calidad basadas en la norma internacional ISO17025 y a la larga tendr que
estar acreditado.
Por ltimo y como ya se ha dicho al comentar la necesidad de conservar
una parte de las muestras originales, las pruebas periciales pueden estar
sometidas a contraanlisis por otros peritos, para confirmar resultados no
aceptados por alguna de las partes (acusacin o defensa). Por ese motivo y
para que los anlisis puedan ser comparativos, los laboratorios forenses deben
utilizar Mtodos Normalizados Oficiales desarrollados por Centros de
Referencia y regirse por normativas de carcter internacional. En el caso de la
Gentica Forense estas normas las dicta la Sociedad Internacional de Gentica
Forense a los que todos los miembros de los laboratorios de Biologa Forense
de Espaa pertenecemos. Para revalidar la calidad de nuestras pericias
realizamos adems controles de calidad internos y ejercicios anuales
interlaboratorios.
TIPOS DE ESTUDIOS EN UN LABORATORIO DE BIOLOGA FORENSE

Si nos dejsemos llevar por nuestra imaginacin, uno pensara que no
hay nada imposible para un laboratorio de biologa, en este caso forense, y
esto es porque la visin que la sociedad recibe de la biologa moderna suele
ser a menudo una simplificacin llena de falsedades procedentes del
sensacionalismo periodstico y de la ciencia-ficcin. A pesar de los avances
tecnolgicos, an quedan cuestiones por resolver, tales como la data exacta de
una
mancha,
por
ejemplo.
Los
tipos
de
estudios
solicitados
ms
frecuentemente en un laboratorio de biologa forense son:

Estudios de filiacin: el caso ms simple sera la investigacin
biolgica de la paternidad o maternidad en un tro hijo-madre-padre o bien
contando
nicamente
con
el
progenitor
cuestionado
el
hijo.
Las
complicaciones aparecen cuando no es posible contar con el progenitor

cuestionado por fallecimiento, siendo necesario en tal caso recurrir al anlisis
de otras muestras biolgicas del fallecido, al anlisis de familiares directos de
ste que permitan reconstruir su genotipo
o incluso a la exhumacin del
cadver.
Estudios de identificacin de restos cadavricos: se realiza mediante
el anlisis biolgico de maternidad o paternidad o en su defecto anlisis de
otros familiares que compartan la lnea materna o paterna. Tambin puede
recurrirse al anlisis de otras muestras biolgicas del fallecido o de objetos
personales del mismo.
Identificacin de indicios biolgicos de inters criminal: son el tipo
de anlisis ms solicitado en el laboratorio de biologa forense. Todos los
indicios recogidos sobre la vctima, el sospechoso o el lugar de los hechos
deben ser objeto de un minucioso y exhaustivo estudio que permita localizar,
conocer o confirmar la naturaleza de los indicios, que variaran en funcin de las
caractersticas del suceso investigado. Los vestigios biolgicos ms frecuentes

son los restos de sangre, fluidos seminales, fluidos vaginales, saliva, pelos y
restos orgnicos en uas. Otro tipo de restos biolgicos menos frecuentes son
la orina, las heces, la caspa, las uas... . En el prximo tema de este curso
tendremos ocasin de conocer en detalle cuales son los mtodos de deteccin
de estos indicios en funcin de sus caractersticas, los tipos de soporte ms
frecuentes sobre los que se encuentran
as como sus posibilidades de
individualizacin.
Identificacin de especie: determinados restos hallados casualmente
pueden ser indicios de hechos delictivos que puedan ser causa para abrir una
investigacin. La solicitud de identificacin de especie suele ir frecuentemente
ligada al hallazgo de restos seos muy fragmentados o cualquier otro resto
orgnico del que pueda sospecharse un origen humano.
Estudios complementarios en casos de muerte por sumersinasfixia: siempre que se recupera un cadver del agua o cuando se sospecha
que la causa de la muerte puede haber sido la sumersin, ser necesario
confirmar los datos macroscpicos obtenidos en la autopsia mediante estudio
anatomopatolgico y considerar otros datos tales como la existencia de
hidremia ( hemodilucin de la sangre del ventrculo izquierdo respecto de la del
derecho) y la existencia de elementos formes en las vsceras del cadver que
deben compararse, siempre que sea posible, con las del lquido de sumersin.
Estudios
bioqumicos
en
casos
de
muertes
sbitas
intoxicaciones: En casos de shock anafilctico, los marcadores biolgicos que

se investigan son la histamina, la triptasa y la IgE total y la especfica. En casos
de muerte sbita interesa la determinacin de glucosa, urea, creatinina y
cloruros. En casos de intoxicacin por organofosforados y carbamatos se
proceder a la determinacin de acetilcolinesterasas y/o pseudocolinesterasas.
Identificacin
de
setas
y plantas superiores en casos de
intoxicacin: cuando se sospecha una intoxicacin debida a setas o plantas

txicas es necesario la identificacin del elemento txico para confirmar si es el
responsable de los sntomas observados. La confirmacin del origen de la
intoxicacin servir para adecuar el tratamiento mdico al txico concreto en
funcin de su naturaleza. A tal fin, deben enviarse al laboratorio los

especimenes completos responsables de la intoxicacin, si se cuenta con ellos,
o restos cocinados o de contenido gstrico. Es posible identificar restos de
setas en contenido gstrico o en otras muestras utilizando tcnicas de ADN,
como veremos a lo largo de este curso.
Estudios microbiolgicos en muestras postmortem en casos de
etiologa no aclarada: en el caso concreto del INTCF se realizan nicamente
en el Departamento de Madrid y su finalidad es intentar arrojar algo de luz en
aquellos casos de muertes de etiologa desconocida en los que se sospeche un
origen infeccioso. Si durante el curso de la investigacin se detecta algn
patgeno de reconocida alarma social tal como el meningococo, en
colaboracin con otros centros de referencia se proceder a informar a la
consejera de salud correspondiente y a la puesta en marcha de los
dispositivos de control epidemiolgico.
Estudio del contenido gstrico: en algunos casos, conocer el estado
de la digestin as como la naturaleza de la ltima comida puede aportar datos
en una investigacin. A menudo, la integridad de los fragmentos de alimento
hallados en un contenido gstrico podra indicar un perodo corto de digestin,
sin embargo, este dato no puede correlacionarse con una ingesta inmediata al
momento de la muerte ya que pueden confluir muchos factores que hacen esta
correlacin muy inexacta. Los estados emocionales del individuo as como la
propia naturaleza de los alimentos influyen en el tiempo de digestin y
permanencia de los alimentos en el estmago.
IDENTIFICACIN DE INDICIOS

Los tipos de indicios ms comnmente estudiados en el laboratorio de
biologa forense son los restos de sangre, semen, fluidos vaginales, saliva y
pelos, que se presentan sobre una amplia variedad de soportes. Casi todos
tienen en comn que son escasos, estn degradados o contaminados y son
nicos e irrepetibles. La localizacin de una determinada evidencia de asiste a
menudo con el uso de una fuente de luz forense que nos permite la utilizacin
de diversas longitudes de onda y diversos filtros para detectar la fluorescencia
tpica de los fluidos orgnicos. En nuestro laboratorio contamos con una de
estas fuentes (MCS-400 de Spex Forensics) basadas en el uso de distintos
filtros, que han ido reemplazando a las fuentes laser por sus ventajas en el
campo forense. Tras ser localizado, realizaremos una serie de pruebas
preliminares, especficas para cada tipo de indicio, con las que estableceremos
el diagnstico de orientacin o de certeza sobre la naturaleza del indicio.
Sangre: es un tipo de indicio fcilmente reconocible sobre determinados
soportes. Existe una amplia variedad de tests de diagnstico previo que ponen
de relieve su presencia (luminol, benzidina, fenolftaleina, o-toloidina, guayacol,
verde leucomalaquita...). Los tipos de soporte ms comunes sobre los que se
presenta son ropas, armas, uas, en el lugar de los hechos (tierra, suelo,
piedras, paredes..). El estudio de la morfologa de las manchas en la escena
del delito proporciona informacin a cerca de cmo se produjeron los hechos.
Semen:
el
principal
componente
celular
del
semen
es
el
espermatozoide, clula especializada flagelada que suele medir entre 50 y 55

m, distinguindose bsicamente dos partes: cabeza y cola. Su nmero puede
variar entre 50 x 106 y 150 x 106 por mililitro de eyaculado, con una media de
unos 100 x 106/ml en individuos normospermos. El volumen de eyaculado
tambin vara entre unos 2 ml y 6 ml con un valor medio de unos 3,5 ml. Existe
una gran variabilidad en estos datos no slo entre individuos, sino tambin
dentro del mismo individuo segn la edad o entre distintos eyaculados. Adems
de los espermatozoides, en el semen podemos encontrar otros elementos
formes tales como leucocitos y clulas epiteliales del tracto urinario aunque en
nmero mucho menor. As, si en un individuo normospermo podemos esperar
unos 450 g de ADN/ml de eyaculado, en un individuo azoosprmico
esperaremos unos 30 g, esto es, slo un 6,3% del normal.
Otros rasgos caractersticos del semen son su pH bsico (8,3) y su
capacidad de fluorescer en la regin visible del espectro cuando es irradiado
con luz ultravioleta. La presencia caracterstica de altas concentraciones de
fosfatasa cida y de una protena especfica (protena P30 PSA) sern rasgos
que se utilicen en el diagnstico previo ( test presuntivos) en la investigacin de
restos de semen. Las tcnicas de confirmacin implican la observacin de
espermatozoides en preparaciones microscpicas realizadas a partir de las
muestras a analizar.
Fluidos vaginales: las clulas del epitelio vaginal sintetizan glucgeno
bajo la accin de los estrgenos. La identificacin de estos restos se basa en
esta particularidad (Reaccin de PAS (+) Periodic Acid-Schiff) as como en la
presencia de flora bacteriana caracterstica (bacilos de Dderlein). Sin
embargo,
este
carcter
glucogenognico
est
ausente
en
mujeres
amenrquicas (aunque las terapias con estrgenos pueden afectar esto) y

sufre variaciones durante el ciclo menstrual, alcanzndose los niveles ms
altos de glucgeno durante la ovulacin. Estas clulas no son exclusivas del
epitelio vaginal ya que se encuentran tambin en menor cantidad en la boca y
en el tracto uretral de hombres (en concreto en la fosa navicular). Por tanto, el
hallazgo de unas pocas clulas puede ser comprometido, hecho que se da a
veces cuando se solicita la localizacin de clulas procedentes del epitelio
vaginal en un hisopo penil.
Saliva: a menudo estos restos se hallan en cantidades mnimas, por lo
que es comprometido decidir entre la identificacin del tipo de vestigio o la
obtencin del perfil de ADN. Los humanos producimos entre 1 y 1,5 litros de
saliva al da y, acompaando a la saliva, se encuentran las clulas
descamadas del epitelio bucal que sern el sustrato para la extraccin de ADN
en estos restos. Las pruebas de orientacin se basan en la deteccin de

actividad alfa-amilasa. Esta enzima no es especfica de la saliva, se encuentra
tambin en el pncreas, en el sudor, en la leche materna, en el semen y en los
fluidos vaginales. Puede considerarse un buen marcador para la presencia de
saliva ya que sus niveles son 50 veces ms altos en saliva que en el resto de
fluidos orgnicos. Las amilasas se encuentran tambin en animales (tipo alfaamilasas) y en plantas (tipo beta-amilasas). Para la confirmacin de presencia
de restos de saliva debern observarse clulas del epitelio bucal en los
extractos de las muestras. Los soportes ms comunes son colillas, sellos,
sobres, mordazas, mordeduras, manchas en ropas, chicles, vasos... .
Pelos: en los mamferos, el pelo atraviesa tres fases en su ciclo de
crecimiento, angena, catgena y telgena. La fase angena es la fase de
crecimiento activo del pelo, en ella las clulas del folculo se multiplican por
mitosis y forman el pelo al queratinizarse completamente. Un cabello humano
crece a un ritmo aproximado de 0.35 mm por da. La fase catgena es una
transicin entre el estado de crecimiento activo y el estado de no crecimiento.
En la fase telgena, ha cesado la actividad del folculo.
Una cabeza humana tiene aproximadamente entre 100.000 y 150.000
folculos pilosos, de los cuales entre el 80 y el 90% estarn en fase angena y
entre el 10 y el 20% en fase catgena o telgena. En nuestra actividad diaria,
los humanos perdemos entre 50 y 100 pelos. A menudo un perito es
consultado sobre la cuestin de s un determinado pelo hallado en la escena de
un crimen puede haber sido arrancado o simplemente cay all. Si el pelo fue
arrancado por la fuerza muy probablemente quedar tejido folicular adherido a
la base del pelo, sin embargo es posible arrancar pelos que estuviesen en fase
telgena o que no cuenten con ningn tejido adherido a la base. Por tanto, la
ausencia de tejido folicular no prueba necesariamente que el pelo fuese cado y
no arrancado. A diferencia de los cabellos, los pelos pbicos pasan ms tiempo
en fase telgena que en angena. La mayora de los pelos que encontraremos
en casos de agresin sexual sern telgenos. De entre todas las evidencias,
los pelos son los ms susceptibles de transferencias secundarias.
Restos en uas: una excoriacin leve en la piel, cuyas seales

desaparezcan a las 24 horas, puede dejar restos epidrmicos en las uas
suficientes para obtener un perfil de ADN por PCR.
Un estudio realizado entre voluntarios que se produjeron excoriaciones
leves y superficiales que desaparecieron dentro de las 24 horas posteriores al
experimento concluy que: los dedos ndice y medio producen los araazos
ms largos y profundos; a igual fuerza aplicada, en los araazos sobre
regiones de piel ms suave tales como el cuello o zona superior del brazo se
recuperaron restos epidrmicos pero no as en zonas de piel muy curtidas
como el antebrazo; se encontr una correlacin entre la fuerza aplicada y la
cantidad de ADN recuperado.
Otros tipos de indicios menos frecuentes en el laboratorio: a veces
se solicita al laboratorio el anlisis de restos que, aunque no son habituales,
pueden aportar datos importantes a la investigacin de un caso determinado.
Entre estos restos podemos citar:
Restos de orina: La identificacin de la orina se basa en la deteccin de
iones o compuestos orgnicos que se hallan ms concentrados en orina que en
otros fluidos fisiolgicos, tales como la urea o creatinina, tambin presentes en
sudor, sangre, saliva, semen... pero en menor concentracin. Contiene clulas
epiteliales del tracto urinario, as como leucocitos y eritrocitos, muy diluidas en
la orina, por lo que la esperanza de recuperar ADN a partir de manchas de
orina es muy baja. Adems, la flora bacteriana propia de la orina acelera los
procesos de degradacin en la muestra.
Heces: La identificacin de restos fecales se basa en la presencia de
pigmentos biliares y de restos alimenticios no digeridos. Son un psimo
sustrato para la extraccin de ADN. No es posible el estudio de ADN nuclear en
estos restos debido a la extrema degradacin y a su contaminacin natural
(aproximadamente la tercera parte del peso seco de las heces son bacterias).
Sin embargo, si se han conseguido resultados en ADN mitocondrial, en
concreto la regin HV1, partiendo de 10 mg de heces frescas.
Otros restos tambin analizados en el laboratorio son secreciones
nasales, uas, restos de tejido, caspa...
TECNOLOGA DEL ADN EN EL PROCESADO DE MUESTRAS FORENSES
MANUEL LPEZ SOTO

Ciencias Forenses. Departamento de Sevilla.
De todas las partes que comprende una investigacin criminal, sta que
a continuacin desarrollaremos, pondr de manifiesto la capacidad pericial y
profesional del laboratorio de biologa forense. De forma general y una vez que
tenemos seleccionadas las muestras objeto de anlisis, todo el proceso
analtico se puede dividir en tres grandes bloques: EXTRACCIN de ADN,
AMPLIFICACIN (PCR) y DETECCIN.
Extraccin de ADN
Posiblemente, de los tres bloques citados anteriormente, la extraccin
constituya el paso ms crtico, ya que cualquier manipulacin errnea de la
muestra en esta etapa inicial del proceso puede conducirnos a su descarte,
siendo en algunos casos, el nico indicio biolgico de que se dispone para
resolver un delito.
Cualquier laboratorio forense debe contar con diferentes mtodos de
extraccin que permitan obtener en cantidad y calidad suficiente ADN de la
enorme variabilidad muestral que recibe. Los mtodos de extraccin se pueden
dividir en tres grupos:
a) Aquel que comprende una digestin, una extraccin orgnica y una
purificacin-concentracin o, como alternativa, una precipitacin con
etanol. Se utiliza para la mayora de las muestras biolgicas de
inters forense.
b) Aquel que comprende una etapa de digestin seguida de una
precipitacin con etanol. Se usa, principalmente, para obtener mucha
cantidad de ADN a partir de sangre en buen estado.
c) Aquel que comprende solo una extraccin directa mediante

membranas especiales o bolas de slice o similares. Su uso se limita
normalmente a muestras de sangre lquida.
Centrndonos en el primer mtodo de extraccin, y en concreto en la
digestin lo que se consigue con ella es romper toda la estructura celular, es
decir, se alteran todos los sistemas membranosos de la clula as como todas
las estructuras en las que estn implicadas protenas (nucleosomas,
citoesqueleto celular, etc.),
dejando el ADN libre. Para ello, se utiliza un
tampn de lisis con detergente (SDS) para solubilizar los lpidos y una enzima
proteoltica (Proteinasa K) para lisar las protenas.
Una vez que se encuentran todos los componentes celulares libres entre
s, pasamos al proceso de extraccin propiamente dicho, donde se recuperar
el ADN de todo ese caldo molecular. El mtodo ms extendido de todos es el
de extraccin orgnica con fenol cloroformo isoamlico (FCI). Al mezclar esta
solucin de FCI con el lisado celular obtenido de la etapa de digestin se
genera una emulsin, que despus de un centrifugado, permitir separar el
ADN de todo el material celular, aunque a veces junto con el ADN se separen
otras molculas que ser una fuente potencial de inhibidotes para el proceso de
amplificacin. Seguidamente, se aade N-butanol para eliminar los posibles
restos de fenol que pudieran haber quedado en la solucin acuosa. A
continuacin, esta solucin acuosa se pasa por unidades de microfiltracinpurificacin para obtener un ADN lo ms limpio posible, ptimo para el
proceso de amplificacin. Alternativamente a esta ltima etapa podremos llevar
a cabo una precipitacin con etanol.
Como ejemplo de mtodos de extraccin directa expondremos la
extraccin con Chelex y con columnas GFx, entre otros.
Por ltimo, realizaremos un recorrido por los distintos tipos de muestras
que llegan al laboratorio y por los mtodos de extraccin que se aconseja
aplicar en cada caso. Adems, se abordar brevemente la cuantificacin del
ADN humano y sus diferentes mtodos.
Amplificacin de ADN
Sin lugar a dudas, posiblemente el desarrollo de esta tecnologa de la
Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR) y su aplicacin a la biologa
molecular ha permitido que este campo de la ciencia se haya desarrollado a un
ritmo espectacular. El proceso en s mismo es muy sencillo; utilizando solo
unos cuantos ingredientes se puede multiplicar (en millones de copias)
cualquier fragmento de ADN que queramos. Desde el punto de vista molecular
se
requiere
exclusivamente
dNTPs,
Cl2Mg,
cebadores,
polimerasa
termorresistente, agua y el molde de ADN que se quiera multiplicar. El proceso

de amplificacin se puede dividir en tres etapas:
a) Desnaturalizacin del ADN a 95C
b) Annealing o unin de los cebadores al molde de ADN
c) Extensin, es decir, la polimerasa empieza a fabricar la nueva
cadena de ADN.
Como requerimiento instrumental se necesitar un Termociclador.
En definitiva, la PCR constituye un mtodo fiable, sencillo, rpido y
econmico.
Sistemas de deteccin de ADN
Hace unos aos, la gran mayora de los laboratorios de gentica
molecular utilizaba como principal sistema de deteccin, geles de poliacrilamida
seguidos de una tincin con plata. Sin embargo, con el desarrollo de los
secuenciadores automticos, que combinan qumica y fluorescencia tanto en
su formato de gel como de capilar, no solo se ha mejorado en gran medida la
calidad y la rapidez en la deteccin de un producto amplificado, sino que
adems ha permitido incluso analizar simultneamente fragmentos de ADN del
mismo peso molecular. Dentro de los secuenciadores automticos parece que
ha tomado ventaja en el mercado el de capilar respecto al de gel entre otras
razones porque requiere una menor manipulacin de la muestra y permite
reanalizarla sin tener que volver a prepararla. En la actualidad existen varios
modelos de secuenciadores del formato de capilar: uno, cuatro, diecisis y
noventa y seis capilares.
APLICACIN FORENSE DE MICROSATLITES AUTOSMICOS
MARA JOS FARFN Espuny

Jefa del Servicio de Biologa. Instituto Nacional de Toxicologa y Ciencias
Forenses. Departamento de Sevilla
La primera aplicacin de la tecnologa del ADN a la resolucin de un
caso judicial data de 1985, cuando las autoridades britnicas exigieron una
prueba biolgica de filiacin en un asunto de inmigracin en el que con la
batera de ensayos disponibles en ese momento se pudo deducir que el joven
ghans investigado perteneca al entorno familiar de su supuesta madre, pero
no se poda resolver si era su hijo biolgico o su sobrino. Para resolver el caso
se solicit la colaboracin de Alec Jeffreys que acababa de publicar la
posibilidad de aplicar el anlisis de determinadas regiones repetitivas y muy
polimrficas del ADN a cuestiones de identificacin humana, incluidos los
estudios de filiacin. Mediante el anlisis de la huella gentica del joven y de
sus presuntos madre y tres hermanos pudo confirmarse la maternidad.
Desde entonces, la tecnologa del ADN ha experimentado un
espectacular avance del que se ha visto beneficiada enormemente la Gentica
Forense. Actualmente la prueba del ADN constituye una pericia de enorme
trascendencia en muchos casos judiciales lo cual ha supuesto en los ltimos
aos un incremento considerable en la intervencin de este tipo de pericias en
los tribunales de justicia.
En una clula humana, el ADN se localiza principalmente en el ncleo,
aunque tambin existe una pequea cantidad de ADN en las mitocondrias, de
cuya aplicacin forense se hablar en otro captulo. El ADN nuclear se
encuentra dividido y muy compactado en los cromosomas, que son unas
estructuras muy densas formadas por ADN y protenas. El genoma humano
nuclear est constituido por 22 pares de cromosomas autosmicos y un par de
cromosomas sexuales, X e Y, cuya combinacin determina el sexo femenino
(XX) o masculino (XY).
La mayor parte de los anlisis de identificacin gentica humana se

centra en marcadores polimrficos localizados en regiones no codificantes de
los cromosomas autosmicos. Casi la mitad del ADN no codificante est
constituido por ADN repetitivo, en el que destacan las secuencias repetidas en
tndem,
constituidas
por
una
secuencia
determinada
que
se
repite
consecutivamente una detrs de la otra un nmero variable de veces.

Atendiendo al tamao de la unidad de repeticin, estas secuencias se
denominan
satlites
(unidad
de
repeticin:
1 000-10 000
nucletidos),
minisatlites (unidad de repeticin: 7-100 nucletidos) y microsatlites o STRs

(Short Tandem Repeats) (cuya unidad de repeticin contiene de 2 a 6
nucletidos), siendo stos ltimos los ms ampliamente utilizados en Gentica
Forense.
Anlisis de STRs mediante reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)

La introduccin de la PCR en Gentica Forense ha hecho posible el
anlisis de una gran variedad de muestras cuyo estudio resultaba imposible
mediante las tcnicas convencionales. La PCR permite la obtencin in vitro de
millones de copias de un fragmento de ADN especfico a partir de una cantidad
nfima de ADN mediante una reaccin enzimtica cclica.
Dados
los
espectaculares
avances
cientficos
tecnolgicos
experimentados en los ltimos aos (que incluyen el desarrollo de mltiples

fluorocromos para el marcaje diferencial de fragmentos de ADN y plataformas
complejas de deteccin capaces de discriminar selectivamente entre ellos), hoy
en da se pueden analizar de forma conjunta 15 STRs o ms a partir de tan
slo 0,1-1 ng de ADN, obtenindose un perfil gentico suficiente para la
individualizacin de un resto biolgico.
La principal ventaja de la aplicacin de la PCR al laboratorio forense
reside en el espectacular incremento en la sensibilidad de la tcnica de
individualizacin por ADN. No obstante, ello conlleva el inconveniente de un
elevado riesgo de contaminacin. Adems, aunque la PCR ha supuesto una
revolucin en biologa forense, presenta una serie de limitaciones que a veces
son muy difciles de salvar y que se refieren principalmente a las posibilidades
de degradacin, inhibicin de la reaccin de PCR o la modificacin del ADN.

Por otra parte hay que tener en cuenta que durante la amplificacin por PCR de
marcadores STRs pueden originarse una serie de artefactos que pueden
interferir con una clara interpretacin de los resultados y cuya consideracin es
necesaria para garantizar un correcto genotipado.
Por otra parte, con cierta frecuencia llegan al laboratorio muestras en las
que se detectan perfiles genticos que reflejan la presencia de una mezcla de
clulas procedentes de ms de un individuo cuyo anlisis es ms complicado y
laborioso que en casos de perfiles nicos y requiere un alto grado de formacin
y experiencia por parte del perito para distinguir entre los alelos verdaderos
presentes en la mezcla y los posibles artefactos, lo cual no siempre es posible.
STRs autosmicos de uso generalizado en gentica forense

Con fines de identificacin humana es importante disponer de
marcadores de ADN que exhiban una alta variacin entre individuos y que en
conjunto permitan discriminar entre ellos. Actualmente existen miles de STRs
identificados y se calcula que en el genoma humano existe un STR cada 10 000
pares de bases. En los criterios a seguir para la seleccin de STRs con
aplicacin en identificacin humana deben primar los siguientes factores: alto
poder de discriminacin, alta heterocigosidad, localizacin en distintos
cromosomas para evitar el ligamiento entre marcadores, robustez y
reproducibilidad de resultados en reacciones mltiplex, baja tasa de mutacin y
longitud de alelos en el rango de 90-450 pares de bases.
Para un intercambio y comparacin de resultados efectivo entre distintos
laboratorios es necesaria la utilizacin de una batera de marcadores genticos
comunes. Actualmente, los marcadores ms extendidos en el mbito mundial
son los 13 STRs autosmicos integrados en el sistema CODIS (Combined
DNA Index System) establecido en 1997 por el FBI para la creacin de un
banco de datos nacional. La probabilidad de coincidencia al azar entre
individuos no relacionados mediante el anlisis de los 13 marcadores del
CODIS es inferior a uno en un billn.
APLICACIN FORENSE DE LOS CROMOSOMAS X e Y
MARA JOS FARFN ESPUNY

Forenses. Departamento de Sevilla
Aparte de los STRs autosmicos, estrellas de la individualizacin

mediante tcnicas de ADN y a los que hemos dedicado el captulo anterior,
existen marcadores genticos de especial relevancia en los cromosomas
sexuales, cuyas peculiaridades los hacen idneos para determinadas
aplicaciones concretas.
Un marcador de sexo: amelogenina
La amelogenina es un locus localizado en una regin homloga de los
cromosomas sexuales. Existe una diferencia de 6 pares de bases entre el
tamao del alelo presente en el cromosoma X y el Y, que se debe a una
pequea delecin en el cromosoma X. El resultado de la amplificacin por PCR
de este locus en un ADN femenino (XX) ser de una nica banda, mientras que
si el ADN es masculino (XY), el resultado sern dos bandas de distinto tamao.
La mayora de los kits comerciales actuales incluyen este marcador, que
permite la designacin del sexo del individuo donante de la muestra. No
obstante, hay que tener en cuenta que, aunque ocurre con muy baja
frecuencia, se ha detectado la existencia de deleciones en esta regin del
cromosoma Y, de tal forma que una muestra masculina podra asignarse
errneamente como femenina. En este caso, el anlisis de marcadores
especficos del cromosoma Y permitiran una correcta asignacin del sexo.
STRs del cromosoma Y

El cromosoma Y presenta una diferencia importante respecto al resto de
cromosomas, su herencia es exclusivamente paterna, es decir, se transmite de
padres a hijos varones sin que exista la posibilidad de recombinacin. Por
tanto, la informacin gentica contenida en el mismo se hereda como haplotipo,

o sea, los genotipos para cada uno de los marcadores del cromosoma Y se
transmiten en bloque y no de forma independiente. De esta forma, salvo
posibles mutaciones, todos los individuos varones emparentados por va
paterna comparten el mismo haplotipo para el cromosoma Y.
En los ltimos aos, el anlisis de marcadores del cromosoma Y se ha
extendido en los estudios de evolucin humana para trazar linajes paternos. En
Gentica Forense, estos marcadores han demostrado tambin su utilidad en
casos de mezclas complejas, en estudios de filiacin cuando los individuos
implicados son varones y resultan de especial utilidad en los casos de agresin
sexual. En stos es comn encontrar indicios donde existe una mezcla de
clulas femeninas de la vctima y masculinas del agresor. Aunque existen
mtodos de extraccin basados en una lisis diferencial que permite la
separacin del ADN de las clulas epiteliales (normalmente vaginales) del ADN
de los espermatozoides, esta separacin no siempre es posible, especialmente
si los espermatozoides estn muy deteriorados o el agresor es azoosprmico.
En estos casos, el uso de marcadores especficos del cromosoma Y aumenta
las posibilidades de detectar pequeas cantidades de ADN masculino
presentes en un fondo de abundante ADN femenino, el cual en otro tipo de
anlisis (STRs autosmicos, por ejemplo) enmascarara la obtencin de
resultados a partir del ADN masculino.
La limitacin de este tipo de anlisis reside en que, dado que el
cromosoma Y no est sujeto a recombinacin, es menos variable entre
individuos, por lo que es necesario el anlisis de muchos marcadores para
obtener un alto poder de discriminacin.
STRs del cromosoma X
En las clulas femeninas existe una pareja de cromosomas X de forma
que stos pueden recombinar entre s comportndose de la misma forma que
los cromosomas autosmicos, hablando en trminos de su herencia. No
obstante, los individuos varones transmiten a su descendencia femenina todos
los marcadores localizados en su cromosoma X en bloque, es decir, uno de los
cromosomas X de cada mujer es idntico al de su padre. Esta peculiaridad
proporciona una herramienta til en casos de paternidad con descendencia

femenina as como en estudios de filiacin o identificacin en los que el
presunto padre no est disponible y hay que recurrir a familiares en primer o
segundo grado de parentesco.
APLICACIN FORENSE DEL ANALISIS DEL ADN MITOCONDRIAL
MANUEL CRESPILLO MRQUEZ

Ciencias Forenses. Departamento de Barcelona.
Todo el patrimonio gentico que poseemos los seres humanos se
encuentra confinado en dos orgnulos celulares: ncleo y mitocondria dando
nombre al ADN que en dichos estructuras se localiza: ADN nuclear (ADNn) y
ADN Mitocondrial (ADNmt). La mayor parte del ADN celular se encuentra
empaquetado en el ncleo, sin embargo, las mitocondrias, que se encuentran
ubicadas en el citoplasma y constituyen las autenticas plantas generadoras de
energa de la clula, poseen un ADN propio dispuesto circularmente y cerrado
que se encuentran en mltiples copias dentro de la clula (1000 a 10000
copias).
Por su composicin bioqumica, las dos cadenas son diferentes, ya que
en la secuencia nucleotdica de una de ellas prevalecen las bases pricas
(adenina y guanina), por lo que es ms pesada que su complementaria donde,
para respetar la complementariedad han de predominar las pirimidnicas (timina
y citosina). As la primera de las hebras se denomina H (Heavy o pesada) y a la
segunda L (Light o ligera).
El ADNmt tiene 16569 pares de bases y en esa secuencia se distribuye
37 genes que codifican aproximadamente para el 10 % de las protenas
constitutivas de la mitocondria. nicamente un 10% del genoma mitocondrial
es no codificante.
El ADNmt fue secuenciado completamente en 1981 por Anderson et al.
La mayor parte de las variaciones entre individuos aparecen en una regin no
codificante del ADNmt de aproximadamente 1112 pares de bases y
denominada bucle de desplazamiento (displacement loop, D-loop o regin de
control) (1-3 nucletidos diferentes cada 100 bases), y dentro de esta regin
aparecen dos regiones descritas como regin hipervariable I (HVR1) y regin
hipervariable II (HVRII) que son las que ms inters han suscitado para la
comunidad forense.
Pero, Por qu interesa el ADNmt?. Tres son las caractersticas que hacen del
ADNmt una herramienta til para el laboratorio forense.
1. El nmero de copias de ADNmt por clula puede oscilar entre 1000 y
10000 dependiendo del tipo de clula y su actividad metablica. Esta
peculiaridad permite que ante muestras degradadas o con escasa o nula
cantidad de ADNnuclear (pelos cados) por una cuestin de mera
probabilidad siempre puedan presentarse molculas de ADNmt ntegras
dispuestas para ser analizadas.
Posiblemente, caractersticas estructurales como la disposicin circular y su
escasa extensin (slo 16569 pb) la hacen tambin ser ms difcilmente
vulnerable a la accin de nucleasas, de manera que esta resistencia al
proceso de degradacin, tan usual en las muestras procesadas en el
laboratorio forense, aumenta extraordinariamente el atractivo del ADNmt.
2. La ubicacin de la molcula de ADNmt en zonas prximas a la membrana
interna de la mitocondria, lugar donde se lleva a cabo la fosforilacin
oxidativa, expone de forma permanente al ADN a la accin de los radicales
libres generados con el consiguiente efecto mutagnico. A diferencia de lo
que ocurre con el ADN nuclear el ADNmt no posee histonas, de manera que
dicho ADN quedar mucho ms expuesto a la accin mutagnica. Por
ltimo la ADNmt polimerasa tiene una pobre actividad reparadora.
El resultado de todo ello es un ADN con unos ndices de mutacin
superiores al ADNn (5-10 veces superior). Esta gran variabilidad es
siempre una propiedad interesante en el mbito forense a efectos de poder
discriminar entre individuos.
3. El ADNmt se hereda exclusivamente por va materna, por tanto todos
aquellos individuos emparentados por va materna poseern, salvo
mutaciones de novo puntuales, idntico ADNmt.
Esta propiedad es especialmente til en casos de identificacin de
cadveres en los que no se dispone de muestras de familiares prximos y
se tiene que recurrir a familiares lejanos emparentados por va materna.
Hay un caso que ilustra a la perfeccin lo expuesto, se trata
de la
identificacin de los restos del ltimo zar de Rusia Nicols II y parte de su

familia, los cuales fueron ejecutados y sepultados tras la Revolucin
bolchevique en 1918 y el hecho de poder contar con muestras de referencia
de parientes maternos, algunos de ellos an vivos, permiti su identificacin
certera mediante el anlisis del ADNmt.
Por tanto, el tipo de muestras en las que el anlisis de ADNmt resulta
especialmente til son en aquellas que presentan un avanzado estado de
degradacin o en aquellas que la cantidad de ADN nuclear sea escasa o nula
(por ej. pelos cados o carentes de raz).
Actualmente el anlisis del ADNmt se lleva a cabo mediante
secuenciacin directa de las regiones HVR1 (~400pb) y HVR2 (~400pb) tras la
reaccin de PCR.
En los ltimos aos y gracias a un importante avance tecnolgico, los
mtodos
procedimientos
de
secuenciacin
han
experimentado
un
espectacular avance que ha permitido rpidos y precisos procesos de anlisis y

gran culpa de ello lo ha tenido especialmente la aparicin de secuenciadores
automticos y el empleo de fluorocromos.
Sin embargo, recientemente, la comunidad cientfica forense ha fijado
sus esfuerzos en el anlisis de otro tipo de polimorfismo que se presenta en el
genoma (ADNn y ADNmt) con gran frecuencia, se trata de los SNPs (Single
Nucleotide Polymorphisms).
En este caso las variaciones entre individuos estn basadas en
mutaciones puntuales en la base ubicada en una cierta posicin del genoma.
Las estrategias as como las plataformas de anlisis desarrolladas para el
anlisis de SNPs son muy variadas. El anlisis de este tipo de polimorfismo
dentro del ADNmt supone una herramienta muy til cuando analizamos
muestras altamente degradadas y el anlisis de secuenciacin no es viable o
en aquellos casos en los que la secuencia obtenida es altamente frecuente y
requerimos una mayor discriminacin.
El anlisis del ADNmt presenta tambin una serie de limitaciones que
convienen describir aunque sea sucintamente:
1. En primer lugar nos encontrado con la temida contaminacin, que supone

uno de los autnticos caballos de batalla de los laboratorios forenses. El
anlisis de ADNmt es mucho ms sensible a la accin de contaminaciones,
pensemos que la incorporacin accidental de una sola clula aportando
ADN exgeno al propio de la evidencia supone la adicin de miles de copias
de ADNmt. Esta circunstancia supondr la aparicin de resultados no
interpretables y en el peor de los casos resultados errneos. Es por tanto
fundamental extremar al mximo las medidas encaminadas a evitar
contaminaciones.
2. El ADNmt se hereda exclusivamente por va materna, de manera, que en un
individuo cabe esperar un nico tipo de ADNmt, sin embargo esto no es
siempre as y en ocasiones podemos encontrar individuos en los que
coexisten ms de un tipo de ADNmt. A este fenmeno lo denominamos
heteroplasmia. Estas pueden clasificarse en dos grandes tipos: de
secuencia, caracterizadas por ser molculas que discrepan en una
determinada base en una posicin concreta, y las llamadas heteroplasmias
de longitud, cuya caracterstica es diferenciarse unas de otras en el nmero
de citosinas presentes en determinados tractos de las regiones HV1 y HV2.
La aparicin de una heteroplasmia en una muestra de referencia y no en la
dubitada o viceversa puede, en ocasiones, complicar la interpretacin y
posterior valoracin de resultados sin embargo en otros casos cuando la
heteroplasmia se presenta tanto en la muestra dubitada como en la de
referencia puede dar ms peso, si cabe, al hecho de la coincidencia.
3. El anlisis de ADNmt se muestra como una prueba realmente eficiente en
casos de exclusiones, sin embargo cuando detectamos una coincidencia
entre las muestras dubitadas y las muestras de referencia se hace
imprescindible un tratamiento estadstico, y por tanto darle un peso a dicho
match. El hecho de que la herencia del ADNmt sea exclusivamente
materna, lo que implica una ausencia de recombinacin, obliga a tratar la
secuencia de ADNmt como un nico locus. La prctica corriente y por otra
parte recomendada por la Internacional Society of Forensic Genetic (ISFG)
consiste en determinar la rarezade una determinada secuencia mediante
comparacin con bases de datos poblacionales, y determinar el nmero de

secuencias idnticas a la de la muestra problema que hayan sido
detectadas en dicha base de datos. Las bases de datos que actualmente se
disponen estn nutridas con un nmero de secuencias relativamente
escaso (3500-4000), el resultado es un bajo poder de discriminacin si lo
comparamos con el que el anlisis del ADNn nos ofrece. Es por tanto muy
importante hacer crecer dichas bases de datos y en esa lnea ha volcando
la comunidad forense sus esfuerzos con el fin de generar una gran base de
datos mundial que contenga secuencias perfectamente contrastadas
(EMPOP -EDNAP mtDNA population database-www.empop.org).
En resumen, hemos de sealar que la molcula de ADNmt rene una
serie de caractersticas que hacen de ella una herramienta imprescindible en
los laboratorios forenses. La comunidad cientfica ha hecho y sigue haciendo
grandes esfuerzos para que en la actualidad su uso ante los Tribunales de
Justicia de todo el mundo est ampliamente aceptado.
El anlisis del ADNmt ha posibilitado emitir conclusiones y dictmenes en
casos, que sin este tipo de estudio, hubiera sido del todo imposible, es por
tanto justo darle la importancia que requiere este tipo de anlisis con las
ventajas e inconvenientes que hemos descrito anteriormente.
NUEVAS TECNOLOGAS EN GENTICA FORENSE
LOURDES PRIETO SOLLA

Laboratorio de Biologa-ADN de la Comisara General de Polica Cientfica.
Introduccin
La gentica forense es una ciencia que no ha dejado de evolucionar y
que sigue en constante cambio. Desde sus comienzos en Espaa a principios
de los aos 90, hasta hoy, se han producido muchos avances en el campo
molecular que se han ido incorporando a la rutina de los laboratorios forenses.
Hace unos aos se requera una mancha de sangre de considerable tamao
para poder realizar una identificacin y hoy se puede obtener un perfil gentico
de un filtro de cigarrillo e incluso de los restos epiteliales presentes en las
prendas de vestir producidas por el contacto continuado con la piel.
Pero qu podemos esperar en los prximos aos?; si el anlisis de
ADN con fines forenses es una tcnica tan estandarizada y establecida por
qu buscar nuevas tecnologas?
Aunque es verdad que la tecnologa del ADN ha permitido mejorar las
investigaciones criminales, todava existen limitaciones que actualmente estn
tratando de superarse. En la mayora de los casos, los resultados de la prueba
del ADN son claros y no estn sujetos a debate. Sin embargo, no podemos
obviar que los resultados analticos de algunos casos son ambiguos.
Desgraciadamente, las muestras biolgicas relacionadas con el delito se
encuentran a veces, diluidas, degradadas o proceden de varios contribuyentes.
En estos casos, el anlisis estndar de ADN y las bsquedas en las bases de
datos son menos productivas y los resultados que ofrecen no son de elevada
confianza. Por otro lado, el tiempo que transcurre desde que las evidencias
biolgicas llegan al laboratorio hasta que se emite el informe pericial puede ser
considerablemente largo si el nmero de muestras involucradas en el caso es
elevado. Por ello, las nuevas tecnologas en el anlisis forense de muestras
biolgicas con fines identificativos se centran fundamentalmente en: posibilitar
el anlisis de muestras degradadas, facilitar el anlisis de mezclas y aumentar

la rapidez y eficacia de los anlisis.
Estrategias en el estudio de muestras degradadas

La identificacin gentica puede complicarse cuando existen largos
perodos de tiempo entre la muerte y la aparicin del cadver, cuando la
muerte ocurri en unas condiciones crticas (explosiones por ejemplo), o
cuando las muestras han estado sometidas a condiciones ambientales muy
desfavorables (temperatura, humedad, cambios en el pH, agentes oxidantes,
radiacin, etc.), incluso aunque el tiempo transcurrido no sea muy largo. En
estos casos el escaso ADN que pueda permanecer en las muestras se
encuentra totalmente degradado (rotura de hebras, prdida de nucletidos,
etc.).
En estas muestras crticas, el anlisis de STRs convencionales es
problemtico, pues los de mayor tamao (300-400 pares de bases) no se
logran amplificar en la reaccin PCR. Actualmente, para evitar este problema,
muchos laboratorios estn centrndose en el diseo de nuevas PCR
multiplexes con el fin de obtener amplicones ms cortos (miniSTRs) que no den
problemas en muestras de ADN de escasa calidad. Los miniSTRs, por tanto,
son polimorfismos STR que se analizan mediante el diseo de los primers en
una zona cercana al propio polimorfismo, evitando grandes regiones
flanqueantes. Con ello se pueden analizar muestras degradadas que
tpicamente producen perfiles genticos parciales y ausencia de informacin
para loci grandes.
Otro tipo de polimorfismos que pueden utilizarse en muestras
degradadas son los SNPs (single nucleotide polymorphisms). Se trata de
cambios de una nica base dentro de una secuencia concreta de ADN. Pueden
amplificarse mediante PCR produciendo amplicones muy cortos (50-100pb),
pero adems presentan otras ventajas como: su abundancia en el genoma
humano, su baja tasa de mutacin (caracterstica muy importante en los casos
de paternidad e identificacin cadavrica) y la posibilidad de automatizar su
anlisis. Es ya una realidad en muchos laboratorios el estudio de SNPs
situados en el ADN mitocondrial y el cromosoma Y, pues al tratarse en estos
casos de genomas haploides, su anlisis es menos dificultoso. Sin embargo, ya

se estn comenzando a estudiar SNPs autosmicos, sobre todo con fines de
fenotipaje. Cuando no disponemos de una muestra de referencia para
comparar con una evidencia, no se puede deducir ninguna informacin til a
partir del ADN que habitualmente estudiamos (excepto el sexo). Por ello,
actualmente se estn buscando SNPs que ofrezcan informacin
sobre el
individuo que dej la evidencia en el lugar del delito. As se podr orientar la

investigacin hacia uno u otro sospechoso en casos delictivos, pero tambin
ser una herramienta til a la hora de facilitar la investigacin de la identidad de
una vctima en casos de cadveres en mal estado de conservacin. Aunque la
ciencia forense est encaminada hacia estas investigaciones, el tipaje de SNPs
autosmicos probablemente tardar aos en ser aceptado en los tribunales.
Estrategias en el anlisis de mezclas

El anlisis de mezclas de ADN es una prctica habitual en la rutina
forense. Su interpretacin es delicada dado que se hace imposible diferenciar
qu alelos pertenecen a cada contribuyente a la mezcla. Si adems la mezcla
est desequilibrada (uno de los contribuyentes aport ms cantidad de fluido
biolgico que el otro u otros) podemos cometer errores al asignar alelos que en
realidad son artefactos de la amplificacin (sttuters) o al no detectar alelos que
realmente existen en la mezcla (drop out allico).
Si la mezcla est formada por el mismo tipo de fluido procedente de dos
o ms individuos la posibilidad de separar los perfiles genticos se complica,
pero si los fluidos que formaron la mezcla presentan diferentes caractersticas
puede lograse la separacin. Tal es el caso de las agresiones sexuales, en las
cuales nos encontramos mezclados el perfil gentico de la vctima procedente
del fluido vaginal con el perfil gentico del sospechoso procedente del semen.
Habitualmente estas muestras se procesan extrayendo su ADN mediante lisis
diferencial, basada en la resistencia que presentan los espermatozoides (y no
las clulas del epitelio vaginal) a la digestin mediante proteinasa K. Sin
embargo, cuando el nmero de espermatozoides es escaso (bien por que la
toma de muestra se realiz transcurrido un tiempo desde la agresin, porque la
vctima retirara la mayora mediante lavado, o porque el agresor sea

oligosprmico) la lisis diferencial no es eficaz.
Para solucionar estos problemas se han creado programas informticos
que nos ayudan a la interpretacin de mezclas (Pendulum) cuando no existe la
posibilidad de la separacin fsica de los perfiles genticos. Por otro lado, en
casos de delitos contra la libertad sexual, donde la separacin fsica es posible,
es cada vez ms frecuente el uso de microscopios capturadores de
espermatozoides.
Estos microscopios permiten aislar mediante lser cada
espermatozoide que visualizamos e introducirlos en un tubo para extraer su

ADN independientemente del de la vctima, evitndose as los perfiles mezcla.
Automatizacin y rapidez del anlisis forense

Uno de los principales problemas hoy en los laboratorios forenses es el gran
nmero de datos electrnicos que se generan regularmente. Desde que una
muestra llega al laboratorio hasta que se escribe el informe pericial son muchos
los pasos que se dan y los resultados analticos que se producen. Hemos de
tener en cuenta el carcter judicial de las muestras que analizamos, y como
tales han de estar controladas en todo momento, siguiendo una cadena de
custodia tanto de los efectos como de las sub-muestras que se generan de
ellos. Por tanto, en los ltimos aos ha sido necesario desarrollar sistemas
informticos que permitieran el manejo fcil y seguro de toda esta informacin
generada, los LIMS (Laboratory Information Management Systems). Estos
sistemas nos permiten saber dnde estn en cada momento las muestras que
se analizan y en qu fase del anlisis se encuentran (trazabilidad), nos
proporcionan las herramientas necesarias para las revisiones administrativas
de cada caso y contienen mdulos analticos para estudios de ADN
(comparacin y almacenamiento de perfiles genticos, anlisis estadsticos,
etc.).
Las tcnicas de anlisis en s tambin estn automatizndose. Existen
hoy en da robots para extraer ADN de un elevado nmero de muestras en un
par de horas, aunque an no estn preparados para muestras crticas.
Tambin se est realizando un gran esfuerzo en acortar los tiempos de anlisis
utilizando tecnologas que permitan realizar PCR multiplexes de un gran
nmero de loci (zip-code primers) as como tcnicas de genotipaje alternativas

a la secuenciacin. La mayor parte de los nuevos mtodos de genotipaje se
basan en dos principios: hibridacin con oligonucletidos especficos de alelo y
uso de enzimas modificadores de ADN. Ejemplos del primer tipo seran el uso
de sondas ASO (allele specific oligonucleotides) o de primers especficos de
alelo durante la PCR. Entre los enzimas modificadores de ADN podemos
nombrar la ADN polimerasa (minisecuenciacin), la ADN ligasa (ligamiento de
oligos) y las ya clsicas enzimas de restriccin).
Estos diferentes mtodos de anlisis pueden combinarse con multitud de
nuevos mtodos de deteccin. Los sofisticados biochips en todas sus
modalidades
(conventional
spoting
microarrays,
electronically
activates
microarrays) y la espectrometra de masas (MALDI-TOF), son algunos de los

ejemplos que ya hoy son una realidad en los laboratorios forenses ms
punteros.
TCNICAS MOLECULARES DE IDENTIFICACIN

DE SETAS CON INTERS FORENSE
M JESS ITURRALDE PARDO
Ciencias Forenses. Departamento de Madrid.
Introduccin
A lo largo de los ltimos 50 aos las intoxicaciones por setas presentan
un crecimiento significativo en todo el mundo. Las causas de este hecho se
deben tanto a la mayor aficin de recolectar y consumir setas como al
incremento del consumo voluntario de setas alucingenas. En cuanto a la
etiologa mdico legal, la mayor parte son accidentales; le siguen el uso
intencionado de hongos psicoactivos siendo excepcional la etiologa homicida o
suicida.
La importancia de los micetismos se encuentra, no tanto en la frecuencia
con que se presentan sino porque los pacientes pueden haber ingerido setas
con toxinas potencialmente mortales. El anlisis de laboratorio no slo sirve
para confirmar el diagnstico de un micetismo y aportar nuevos taxones al
catlogo de especies txicas, sino tambin para evitar tratamientos agresivos,
hospitalizaciones innecesarias y diagnosticar sndromes mixtos o micetismos
cuyos perodos de incubacin queden solapados.
La identificacin tradicional de las setas txicas se basa en criterios
morfolgicos y en la deteccin de toxinas. Estos anlisis en ejemplares muy
deteriorados e incluso triturados, cocinados y a veces en vmitos o heces
suelen ser muy difciles. Por ello un mtodo de identificacin independiente
tanto de la calidad del material fngico como de la cantidad sera
extremadamente til. La determinacin de especie mediante el estudio de
marcadores genticos podra ser una buena herramienta.
Tabla 1. Clasificacin de los micetismos en funcin del periodo de latencia y del rgano sobre el
que acta la toxina.
Periodo de latencia
Organo diana
Tipo de reaccin
Toxinas
Especies
Inferior a 6 horas
Sistema nervioso
- Colinrgico
Muscarina
Clitocybe/Inocybe
- Glutaminrgico
Ac. ibotnico
Amanita muscaria
Muscimol
Amanita pantherina
- Epileptognico
Hidracinas
Giromitra
- Alucinognico
Psilocina
Psilocybe
Psilocibina
Gastrointestinal
Alrgico
- Reaccin disulfiram
Coprina
Boletus sp; Entoloma sp, etc
- Inmunohemoltico
Paxilus involutus
- Neumnico
Entre 6-24 horas
Hgado
Coprinus atramentarius
- Miscelnea gastrointestinal
- Hepototxico
Lycoperdon sp.
Amatoxinas
Amanita phalloides
Lepiota sp; Galerina sp.
Rin
- Nefrotxico
Amanita proxima
Otros
- Eritromelalgia
Acidos acromlicos
Rin
- Nefrotxico
Orellanina
Sistema nervioso
- Neurotxico
Hapalopilus rutilans
Msculo
- Rabdomiolisis
Tricholoma equestre (*)
Amanita smithiana
Clitocybe acromelalga
Clitocybe amoenolens
Superior a 1 da
Cortinarius sp
Russula subnigricans
(*) considerada gran comestible hasta el ao 2001
Regiones polimrficas del ADN en hongos. De los diferentes genes del ADN
que han sido investigados en micologa, gen de la Beta-tubulina, gen de la
Orotidina descarboxilasa, gen de la Chitina sintetasa, gen de la Actina, gen del
Factor de elongacin, son las regiones ITS-1 e ITS-2 (internal transcribed
spacer) del nrDNA las que ms se han utilizado para la identificacin molecular
de hongos.
Metodologa de anlisis del ADN. Basada en la Tcnica de Amplificacin
gnica por PCR (Reaccin en cadena de la polimerasa). Para amplificar cada
una de las regiones diana de inters en taxonoma se disean cebadores
especficos para ellas. Los productos amplificados pueden ser caracterizados
de diferentes maneras. Las tcnicas ms utilizadas en micologa son:
PCR/RAPD (Anlisis del ADN amplificado al azar). Se trata de un mtodo en el
que no se necesita tener conocimientos previos sobre el genoma de un
determinado organismo y se realiza a partir del genoma entero. Se utilizan
diferentes iniciadores de secuencia arbitraria. Los productos amplificados se
separan mediante electroforesis. Se obtiene un patrn de bandas PCR/RAPD

para cada especie.
PCR/RFLP (Anlisis del polimorfismo de la longitud de los fragmentos de
restriccin). Esta tcnica permite obtener, para cada organismo, una serie de
fragmentos del ADN de diferentes tamaos que dan lugar a un patrn de
bandas PCR/RFLP. Ello se consigue fragmentando la regin amplificada
mediante el uso de enzimas de restriccin. Comentarios: tcnicas rpidas y
econmicas pero dan patrones difciles de interpretar y poco reproducibles.
PCR/SSCA (Anlisis conformacionales del ADN de una sola cadena). Es un
mtodo rpido y econmico para detectar polimorfismos de secuencia sin
necesidad de secuenciar. Se basa en la movilidad de las cadenas sencillas de
ADN. Los cambios en la migracin tienen un alto grado de sensibilidad, de tal
manera que dos cadenas del ADN que difieran en una sola base migrarn de
forma diferente. La regin amplificada se desnaturaliza y se realiza una
separacin electrofortica en condiciones desnaturalizantes. El patrn de
bandas PCR/SSCA es propio para cada organismo. Comentarios: Al igual que
ocurre con las tcnicas anteriores, el perfil que se obtiene no es siempre
reproducible pero puede utilizarse como mtodo de screening previo a la
secuenciacin.
PCR/Secuenciacin. El mtodo ms fiable y sensible para detectar la
diversidad gentica es la secuenciacin directa de los productos de
amplificacin de la regin diana. La tcnica ms utilizada es la secuenciacin
cclica con terminadores de cadena marcados con fluorocromos. Las
secuencias de nucletidos que se obtienen para la regin diana en cada
organismo y en diferentes laboratorios pueden ser publicadas en bases de
datos electrnicas (GENBANK, EMBL, etc). Comentarios: en ocasiones puede
que el material de herbario no est identificado correctamente o que no se
utilice la misma nomenclatura sin olvidar las contaminaciones del laboratorio
debido a una mala praxis. Estas situaciones dan lugar a que existan
secuencias errneas en las bases de datos pblicas. Por ello sera conveniente
disponer de bases de datos propias, cuidadosamente generadas, de las
especies txicas.
Anlisis de las secuencias de la regin ITS para la identificacin de

hongos
El anlisis comparativo de una secuencia desconocida con las bases de
datos pblicas, EMBL o Gen Bank, puede ser un mtodo til de identificacin
de especie. Estas bases de datos disponen, via Internet, de programas de
comparacin de secuencias: FASTA y BLAST (Based Local Alignment Search
Tool). Comentarios: aunque existen muchas secuencias publicadas de las
regiones ITS todava son insuficientes para identificar algunos hongos. El
constante aumento de secuencias permitir ir identificando las setas
responsables de producir intoxicaciones.
Diseo de test rpidos para la identificacin de especie
El alineamiento y comparacin de las secuencias nucleotdicas de una
determinada regin diana entre ejemplares de la misma y de distinta especie,
permite conocer la variabilidad de la regin y si es apta para el diseo de
nuevos test. Cada vez se investiga ms el diseo de iniciadores especficos de
especie o sondas TaqMan mediante Real-Time PCR (RT-PCR). Comentarios:
son sistemas de identificacin menos problemticos y ms rpidos que la
secuenciacin.
GENETICA FORENSE NO HUMANA: IDENTIFICACIN DE ESPECIES
LOURDES PRIETO SOLLA

Laboratorio de Biologa-ADN de la Comisara General de Polica Cientfica
La necesidad de estudiar ADN no humano con fines forenses se hace
cada da ms patente y actualmente es frecuente que se solicite a los
laboratorios el anlisis de muestras de origen no humano. Existen multitud de
situaciones en las que cabe este tipo de anlisis: restos de origen no humano
en la escena del crimen (pelos de animales domsticos, restos vegetales, etc),
trfico ilegal de especies protegidas o en peligro de extincin, identificacin de
fauna cadavrica con el fin de estimar la data la muerte (identificacin de larvas
de insectos), fraude en la composicin de alimentos procesados, investigacin
de accidentes de trfico causados presuntamente por animales, negligencia
mdica en casos de infecciones (transmisin de VIH o hepatitis C),
bioterrorismo (ntrax), etc.
El anlisis de restos biolgicos no humanos con inters forense se ha
abordado tradicionalmente mediante estudios inmunolgicos o anlisis de
protenas. Estos mtodos encuentran su limitacin cuando las muestras a
estudiar no se encuentran en condiciones idneas de conservacin. Con el
desarrollo de la biologa molecular han surgido nuevos mtodos basados en las
diferencias genticas entre especies. El anlisis de ADN mitocondrial (ADNmt)
es el ms apropiado para estudiar restos no humanos fundamentalmente por
dos motivos: (i) la gran cantidad de copias por clula permite que muestras
crticas, que no dan resultados con el estudio de ADN nuclear, puedan ser
analizadas (pelos, alimentos tratados) y (ii) su tasa de mutacin es ms rpida
que la del ADN nuclear, hecho que permite encontrar diferencias en las
secuencias de especies muy cercanas.
Las regiones de ADNmt ms utilizadas en gentica forense con fines de
identificacin de especie son el gen responsable del citocromo b (cytb) y los
ADNs ribosmicos 12S y 16S. Los anlisis se realizan mediante PCR y
posterior secuenciacin del producto amplificado. Para ello, dentro de estas
tres regiones se han buscado dos tipos de zonas nucleotdicas: (i) zonas muy
conservadas (con poca variabilidad entre especies) con el fin de poder disear
primers universales que permitan la amplificacin de ADN de los principales
grupos taxonmicos y (ii) zonas menos conservadas que permitan la
discriminacin entre las muestras estudiadas al menos a nivel de gnero. As,
con un nico par de primers se puede amplificar cada regin en distintas
especies y la secuencia obtenida tras la amplificacin puede comparase con
secuencias conocidas de diferentes especies.
El uso de esta tcnica implica el conocimiento de la filogenia de las
especies involucradas, el manejo de las bases de datos de secuencias de ADN
disponibles en la red (GenBank, EMBL), as como el uso de los softwares de
comparacin de secuencias (ej: BLAST, CLUSTAL). Es fundamental, por tanto,
que el bilogo forense se familiarice con las herramientas que la bioinformtica
pone a nuestra disposicin.
Una base de datos biolgica es una lista de datos persistentes larga y
organizada, asociada generalmente a un software automatizado diseado para
actualizar, buscar y recuperar los datos almacenados dentro del sistema.
Actualmente existen organismos que proporcionan bases de datos gratuitas
para que los usuarios las puedan utilizar a travs de Internet. Uno de los
organismos que ms ha desarrollado las bases de datos biolgicas y las
herramientas bioinformticas es el NCBI (National Center for Biotechnology
Information).
Este
organismo
dispone
de
una
pgina
web
(http://www.ncbi.nlm.nih.gov) muy til que y que la mayora de investigadores

del campo de la genmica y la protemica manejan habitualmente. El NCBI
tiene mltiples bases de datos biolgicas (de secuencias, de protenas, de
genomas, taxonmica, de publicaciones, etc) ligadas entre s, de tal forma que
se puede usar un nico sistema de bsqueda y recuperacin de datos llamado
ENTREZ. Este sistema de bsqueda permite que un usuario tenga acceso y
recupere informacin de muchas bases de datos a la vez. Por ejemplo, la base
de datos de secuencias de ADN Entrez est ligada a la base de datos de
taxonoma Entrez. Esto permite al investigador encontrar informacin
taxonmica de la especie a la que pertenece la secuencia.
Otro de los recursos que ofrece el NCBI y que ms se utilizan en biologa
forense es el software BLAST (Basical Logical Alignment Search Tool). Entre
otras aplicaciones este software ofrece la posibilidad de comparar la secuencia
que hemos obtenido en el laboratorio con las secuencias presentes en las

bases de datos de manera automtica.
Aunque las bases de datos de ADN estn en constante crecimiento,
para ciertos organismos no existen datos de las secuencias que nos interesan.
Como consecuencia de esto, el xito en la identificacin del origen de una
muestra forense no humana depende en gran medida de la disponibilidad de la
secuencia de inters en la base de datos. Sin embargo, este problema puede
superarse cuando en la base de datos existen secuencias de especies
relacionadas con nuestra muestra problema o tenemos idea de qu especie
puede tratarse mediante datos no genticos del caso en cuestin (por ejemplo,
el anlisis de pelos encontrados en un vehculo involucrado en el robo de
abrigos de visn). En estas situaciones podemos recurrir al anlisis de una
muestra indubitada de la especie que sospechamos y a la comparacin de
dicha muestra de referencia con nuestra muestra problema.
Por otro lado, no es extrao que tanto cytb, como 12S y 16S presenten cierto
nivel de polimorfismo, lo cual complica la interpretacin de los resultados. As,
secuencias similares en un 98% de sus nucletidos pueden derivarse tanto de
distintos miembros de la misma especie como de dos especies estrechamente
relacionadas que se han separado recientemente.
En ocasiones el problema que se nos plantea es comprobar si los restos
biolgicos encontrados en el lugar de los hechos coinciden en cuanto a especie
con los restos encontrados en, por ejemplo, las ropas de un sospechoso. En
los casos en los que no tenemos idea de a qu tipo de organismo pueden
pertenecer o el posible organismo est pobremente caracterizado a nivel
gentico en las bases de datos, podemos recurrir al anlisis de sus ADNs por
medio de RAPDs (random amplified polimorphic DNA). La tcnica consiste en
el desarrollo de una reaccin PCR en la que los primers se han diseado al
azar. Estos primers de corta longitud (8-12 nucletidos) anillan en diferentes
regiones
del
genoma
del
organismo
problema
generando
productos
amplificados al azar de diferente longitud. Los fragmentos pueden separarse

mediante electroforesis dando un patrn de bandas caracterstico de la
especie.
Muchos laboratorios forenses espaoles tienen ya la tecnologa
necesaria para el anlisis de los fragmentos mitocondriales cytb, 12S o 16S.
Sin embargo queda mucho trabajo por hacer en identificaciones de restos

vegetales o de microorganismos. Sin duda, la gentica forense no humana es
una nueva puerta que se abre para responder a las preguntas aqu expuestas,
pero el campo es tan amplio que se necesitarn grandes inversiones para
satisfacer tan amplia demanda.
VALORACIN ESTADSTICA DE LA PRUEBA DE ADN
MARA JOS FARFN ESPUNY

Forenses. Departamento de Sevilla.
Una
vez
obtenidos
los
perfiles
genticos
resultantes
de
la
individualizacin de una muestra biolgica mediante la aplicacin de la

tecnologa del ADN, stos carecen de valor sin una valoracin estadstica
apropiada. En otro captulo se tratar con ms detalle la valoracin estadstica
en casos de filiacin, por lo que aqu nos referiremos slo a los casos de
investigacin criminal.
En la mayora de estos casos, la prueba del ADN slo tiene sentido si es
posible una comparacin de perfiles de un vestigio frente a una muestra
indubitada o entre diferentes vestigios. Cuando se trata de investigar si un resto
biolgico puede pertenecer a un determinado individuo o al donante de otros
vestigios, es necesario realizar un cotejo de los perfiles genticos obtenidos. Si
los perfiles son distintos, puede asegurarse que ese resto biolgico no
pertenece al individuo en cuestin o que ambos vestigios proceden de
personas diferentes. Pero si existe una coincidencia entre los perfiles
comparados es necesario hacer una valoracin estadstica para estimar el
grado de incertidumbre de que esos perfiles coincidan entre s slo por
cuestiones de azar y no porque procedan del mismo individuo. Para ello se
requiere disponer de datos fiables sobre las frecuencias de los alelos presentes
en la poblacin de referencia, las cuales se estimarn mediante la realizacin
de estudios poblacionales basados en el tipado de numerosos individuos no
relacionados.
Para estimar el valor de la prueba es necesario considerar (al menos)
dos hiptesis alternativas para su ocurrencia. La prueba debe evaluarse
calculando su probabilidad bajo cada una de las hiptesis. Por ejemplo, se
detecta una mancha de semen en la prenda de una vctima de agresin sexual
y el perfil gentico del semen coincide con el del sospechoso. Es necesario
establecer dos hiptesis alternativas, que en este caso seran: H0: el semen
pertenece al sospechoso; H1: el semen pertenece a un individuo al azar de la

poblacin. A continuacin se procede a calcular la probabilidad de obtener ese
perfil gentico para el semen bajo la hiptesis H0, y bajo la hiptesis H1. La
valoracin ms correcta consiste en calcular, mediante la aplicacin del
teorema de Bayes, la razn de verosimilitud o LR (Likelihood Ratio) que es
el cociente entre ambas probabilidades. El resultado obtenido refleja cuntas
veces la coincidencia de perfiles es ms probable si consideramos la hiptesis
H0, (o sea, que el semen pertenezca al sospechoso) que si consideramos la
hiptesis H1, (que el semen pertenezca a un individuo al azar de la poblacin).
Un elemento importante en la comparacin de perfiles genticos con
fines de investigacin criminal o en casos de identificacin reside en la creacin
de bases de datos de ADN, aspecto que se tratar ms detalladamente en otro
captulo.
ORGENES POBLACIONALES MEDIANTE MARCADORES DE HERENCIA

UNIPARENTAL: ADN MITOCONDRIAL y CROMOSOMA Y
MANUEL LPEZ SOTO

La primera pregunta que tal vez pudiera plantearse un alumno de este
curso podra ser qu sentido tiene hablar de los orgenes poblacionales en un
curso de Biologa Forense?. La respuesta a esta pregunta hay que buscarla en
los propios fundamentos de la gentica forense, que no son sino, la aplicacin
de conceptos de la Gentica de Poblaciones a la identificacin de individuos.
En este sentido, siempre que obtenemos un perfil gentico (STRs autosmicos,
ADN mitocondrial, STRs de cromosomas X e Y) es necesario realizar una
valoracin estadstica de dicho perfil mediante comparacin con la poblacin de
referencia. Esto requiere, por un lado, conocer qu frecuencias allicas definen
a dicha poblacin y por otro, qu distribucin haplotpica o de haplogrupos
presenta respecto al ADN mitocondrial y al Cromosoma Y. Estos dos
marcadores, como ya se ha explicado a lo largo del curso, se caracterizan
entre otras cosas, por presentar un modo de herencia uniparental; el ADN
mitocondrial es transmitido por la madre a todos sus descendientes y el
cromosoma Y es transmitido por el padre a sus hijos varones. Este hecho
biolgico nos permite trazar linajes a lo largo de la historia hasta remontarnos al
origen de nuestros antepasados.
Con respecto al origen de los humanos anatmicamente modernos (del
que derivan las poblaciones humanas actuales) se han expuesto dos hiptesis
alternativas. La primera de ellas, llamada multirregional o policntrica, explica
que los humanos modernos surgieron al mismo tiempo en cuatro regiones
distintas, llevando una evolucin paralela a travs de largos perodos de
tiempo, teniendo a la migracin y a la seleccin natural como principales
motores del proceso evolutivo. La otra hiptesis, conocida como OUT OF
AFRiCA, se basa en que los humanos modernos se originaron en frica y
desde all emigraron hacia Asia y Europa y despus a Amrica y Oceana. Esta
segunda hiptesis, ms aceptada por la comunidad cientfica internacional, ha

sido apoyada por estudios de ADN mitocondrial y de cromosoma Y. En otras
palabras, parece claro que los humanos anatmicamente modernos del que
derivan todas las poblaciones actuales surgieron como un nico proceso de
especiacin originado en frica, aunque no est del todo claro si estos
humanos llevaron un reemplazamiento total o parcial de las otras especies de
homnidos existentes, como los neardentales en Europa.
Como hemos dicho anteriormente, estos humanos anatmicamente
modernos llegaron a Europa. Existen opiniones contrarias en relacin con
cmo se produjo el poblamiento de este continente. Para muchos genetistas,
encabezados por la figura de Cavalli-Sforza, Europa se pobl durante el
Neoltico a travs de la llegada de colonos agricultores procedentes de Oriente
Medio, a juzgar por lo que muestran los anlisis genticos de marcadores
clsicos. Sin embargo, para otros genetistas como M. Richards, V. Macaulay y
A. Torroni, basados en los anlisis de ADN mitocondrial, y O. Semino en los de
Cromosoma Y, llegan a la conclusin de que
Europa ya estaba poblada
durante el Paleoltico, que adems se produjo una expansin desde los pocos
territorios libres de hielo en la ltima glaciacin y que hubo una pequea
colonizacin durante el Neoltico.
Una controversia parecida se da con respecto al poblamiento de
Amrica. Para A. Torroni et al. y basados en estudio de ADN mitocondrial, el
poblamiento lleg procedente de Asia, entrando un haplotipo de cada uno de
los haplogrupos existentes en Amrica en tres oleadas diferentes. Sin
embargo, para Merriwheter et al. en Amrica entraron varios haplotipos de ADN
mitocondrial en una sola oleada.
Haremos una pequea mencin a dos poblaciones: la brasilea y los
inuits. Brasil se caracteriza por ser la poblacin ms diversa del mundo desde
el punto de vista gentico-poblacional. De hecho, podemos encontrarnos dos
individuos fenotpicamente muy distintos (blanco y mulato) y presentar ambos
el mismo haplogrupo de ADN mitocondrial o de Cromosoma Y. A modo de
ejemplo, el 28% de la poblacin blanca de Brasil tiene una ADN mitocondrial
africano, que puede explicarse por ser el resultado de la masiva llegada de
esclavos desde el Golfo de Guinea ocurrida en siglos anteriores. Algo similar,
pasa con la poblacin de los Inuits, en la que al analizar el ADN mitocondrial y
el Cromosoma Y se observa que el marcador materno es amerindio y el

paterno, europeo. Se sabe que a estos territorios de hielo llegaron colonos
procedentes de Europa y que era costumbre en estas poblaciones esquimales
ofrecer alimento, alojamiento y la mujer a sus huspedes, de ah el haplogrupo
europeo observado en esta poblacin.
Se presentarn los datos obtenidos de un estudio de ADN mitocondrial
realizado por el departamento de Sevilla del Instituto Nacional de Toxicologa y
Ciencias Forenses en la poblacin andaluza. Cuestiones tales como qu
legado gentico han dejado los ocho siglos de invasin rabe en Andaluca?
encaja el sustrato mitocondrial en la variabilidad europea? qu origen tiene
la poblacin andaluza? hay homogeneidad gentica entre las provincias?,
entre otras, sern resueltas en este curso.
Por ltimo, y enlazando con el principio de este resumen, se presentarn
ejemplos de la aplicacin forense que tiene conocer la distribucin geogrfica o
el origen de los patrones de ADN mitocondrial y de Cromosoma Y.
INVESTIGACIN BIOLGICA DEL PARENTESCO
JUAN ANTONIO LUQUE GUTERREZ

Jefe del Servicio de Biologa. Instituto Nacional de Toxicologa y Ciencias
Forenses. Departamento de Barcelona.
La investigacin biolgica de la paternidad en un sentido amplio
(investigacin biolgica del parentesco), abarca cualquier estudio de la relacin
biolgica entre dos individuos, ya que una relacin gentica entre dos
individuos, siempre puede resolverse como una sucesin de relaciones
paternofiliales ascendentes y descendentes dentro de un rbol gentico, por
muy distantes que sean sus posiciones. As podemos hablar del estudio ms
simple como es el caso estndar (tro Presunto Padre-Madre-Hijo/a), de
paternidad/maternidad con un solo progenitor, de estudios con abuelos, estudio
de hermanos, paternidades a partir de familiares (cuando el padre est fallecido
o no disponible), etc...
Casos especiales de estos estudios son los casos de desastres en
masa, identificaciones de restos cadavricos, o la bsqueda de familiares del
autor de un delito a travs de una base de datos, que tienen como base los
estudios de paternidad pero que conllevan una problemtica asociada adicional
que se ver en otro momento en este mismo curso.
Tambin pueden considerarse paternidad/maternidad en su sentido
amplio el estudio de marcadores de cromosoma Y y de ADN mitocondrial,
estudiando en este caso no una relacin p(m)aternofilial directa, sino una
relacin gentica de toda una lnea gentica padres/hijos o madres/hijos. En
ocasiones (algunos laboratorios de rutina) emplean estas tcnicas como
complementarias en los estudios de paternidad.
El estudio de la paternidad en su sentido ms estricto, como es el aclarar
la paternidad (maternidad) biolgica de un hijo cuestionado, tiene unas
implicaciones legales (aunque se haga de forma privada y no judicial) que hay
que tener presentes. Por suerte, tanto la legislacin como la ciencia han
llegado a un punto en el que es posible la investigacin de la paternidad con

garantas suficientes, pero no siempre ha sido as.
Desde el principio de la historia de una u otra manera se ha permitido o
prohibido la investigacin de la paternidad. En un principio la ciencia no
dispona de herramientas adecuadas para su resolucin, pero se recurra a la
investigacin de otros indicios. As podemos considerar que el Rey Salomn
celebr el primer juicio de paternidad (en este caso maternidad) documentado
histricamente (en la Biblia), en el que se recurri a mtodos psicolgicos.
Durante mucho tiempo, la ciencia no pudo aportar mtodos adecuados para
dicha investigacin, recurrindose a mtodos circunstanciales (como el tiempo
de gestacin) o fsicos (color de pelo, ojos, parecido...). No fue hasta la
descripcin del grupo ABO por Landsteiner en 1900 y la descripcin de su
transmisin hereditaria en 1910, que se dispuso de pruebas objetivas, naciendo
as la hemogentica forense. Desde entonces se han utilizado gran cantidad de
sistemas gentico moleculares hasta nuestros das en que los estudios de ADN
han desplazado por su potencia y facilidad al resto de tcnicas.
En Espaa, no es hasta 1978 que la Constitucin Espaola en su
articulo 39.2 establece que ...La ley posibilitar la investigacin de paternidad,
y posteriormente en 1981 se produce la reforma del Cdigo Civil recogiendo en
su artculo 127 que En los juicios sobre filiacin ser admisible la investigacin
de la paternidad y de la maternidad mediante toda clase de pruebas, incluidas
las biolgicas. Desde entonces, el desarrollo ha sido vertiginoso, unindose, a
los escasos laboratorios que por entonces hacan pruebas, un sinfn de
laboratorios cada vez ms dotados, y que hoy da pueden considerarse de
primer nivel a escala mundial.
En cuanto a las tcnicas utilizadas, los primeros laboratorios utilizaban
una larga batera de grupos sanguneos, enzimas y protenas polimrficas y
HLA,
mediante
reacciones
antgeno-anticuerpo
mediante
tcnicas
electroforticas. Dichas tcnicas suponan un gran trabajo, pero la potencia

obtenida era la justa. La aplicacin en el campo forense por Jeffreys en 1985
del anlisis de VNTR de ADN mediante las llamadas sondas supuso una
revolucin, ya que permita poder analizar directamente genotipos y no
fenotipos como hasta entonces. Al final de los 80 ya se hacan en Espaa,
permaneciendo hoy da un par de laboratorios que todava mantienen una
variante, dado que tienen gran capacidad de discriminacin. Sin embargo, en el

mismo 1985, K. Mullis descubri un proceso al que denomin reaccin en
cadena de la polimerasa (PCR), por la que luego recibira el premio Nobel, que
imita la replicacin del ADN de las clulas en un tubo, consiguiendo hasta un
milln de copias de pequeos fragmentos de ADN. Desde el principio de los 90,
la mayora de los laboratorios trabajan mediante anlisis de marcadores de
PCR.
La prueba biolgica la podemos dividir en varias fases:
Toma de muestras
Este punto es fundamental para una buena pericia. No puede haber un
anlisis de calidad si las muestras no son adecuadas. Ya antes de comenzar

hay que hacer una seleccin de las personas que realizarn la prueba. En
casos estndar (PP-M-H) los individuos vienen predefinidos, pero hay que
tener mucho cuidado en asegurarse de que se toman las muestras con todas
las garantas necesarias, y que se rotulan y se procesan de forma que se
minimice la posibilidad de un cambio de muestras o un fraude de identidad. En
casos complejos (cuando no se dispone del padre), la eleccin de familiares es
crucial para poder alcanzar un resultado fiable, siendo uno de los puntos que
ms aumentan el resultado final el disponer de la madres del hijo dubitado y de
otros hijos legtimos si es que se necesita. En ocasiones los individuos vienen
condicionados por el propio caso, y por tanto no se pueden elegir teniendo que
realizar la prueba con las muestras disponibles.
Obtencin de perfiles de ADN y anlisis gentico

Como ya hemos comentado anteriormente, la mayora de laboratorios
usan hoy da marcadores de PCR. Es necesario disponer de una amplia

batera de marcadores para conseguir lo que llamamos un poder de exclusin
a priori alto, o lo que es los mismo, la probabilidad de excluir de forma directa
a un presunto padre falsamente acusado. Para casos de tros, con 13-15
marcadores suele ser suficiente. A partir de ah, es como un puzzle, cuantas
ms piezas tengamos, ms fcil es saber que dibujo contiene. Por tanto si la
informacin gentica que se aporta es baja (por falta de individuos o por
tratarse de relaciones genticas lejanas), la cantidad de marcadores que se

usen debe incrementarse.
Los anlisis genticos en estos casos suelen ser fciles, ya que las
muestras se suelen recoger en abundancia y en condiciones ptimas. En casos
forenses, a veces las muestras no son tan buenas, teniendo que recurrir a
estrategias especiales.
Hay que tener en cuenta que adems de las leyes de la gentica y de la
estadstica, hay que tener en cuenta las leyes de Murphy, y saber que todo el
proceso se realiza partiendo de unos supuestos tericos, que a veces se
alteran con anomalas varias como pueden se mutaciones, trisomas,
superfecundaciones, etc.
Una vez que tenemos unos perfiles genticos, hay que contrastar los
resultados para comprobar la compatibilidad gentica antes de pasar a la
siguiente fase, que es la valoracin estadstica. La valoracin gentica se basa
en los principios de la herencia mendeliana, sabiendo que cada individuo de los
dos alelos (variantes) que presenta para cada marcador (pseudogen) hereda
uno de su padre y otro de su madre. Si sabemos cual es el alelo que transmite
la madre, tendremos cual es el alelo obligatorio que ha transmitido el padre
biolgico, y podremos contrastar con el presunto padre si posee dicho alelo o
no. En caso de que no lo posea hablamos de exclusin, y por tanto de
incompatibilidad gentica. En caso de compatibilidad habr que valorar
estadsticamente los resultados como veremos ms adelante. No obstante,
debido a que en ocasiones hay anomalas como hemos comentado
anteriormente, en caso de exclusiones aisladas o incluso de nicamente dos
exclusiones, se suele valorar igualmente la prueba con las pertinentes
modificaciones.
En casos ms complejos, la solucin se complica, puesto que puede ser
que la madre no est disponible, o lo que es peor, que no lo est el presunto
padre. En estos casos, lo que se hace es reconstruir el posible perfil gentico.
Si no se obtiene el perfil completo, habr que valorar todas las combinaciones
genticas compatibles con los individuos analizados, y a su vez comprobar si al
menos una de las combinaciones es compatible con el hijo. Si todas son
incompatibles, volveremos a hablar de exclusin. En caso contrario, habr que
valorar estadsticamente todas las combinaciones de forma ponderada.
Valoracin estadstica
Una vez demostrada la compatibilidad de las personas estudiadas,
habr que valorar dicha compatibilidad.

De forma
simplificada y genrica podemos decir que el clculo de
paternidad se basa en calcular la probabilidad del genotipo del hijo (aunque

este clculo se ve afectado por mltiples circunstancias). Habr que diferenciar
cuando el hijo es homozigoto y heterozigoto.
Hijo homozigoto (AA):
Prob. genotipo hijo = prob. Padre trasmita A x prob. Madre trasmita A
Pr(AA) = P->A x M->A
Hijo heterozigoto (AB):
Prob. genotipo hijo = prob. Padre trasmita A x prob. Madre trasmita B +
+prob. Padre trasmita B x prob. Madre trasmita A
Pr(AB) = P->A x M->B + P->B x M->A
Estas frmulas las vamos a usar continuamente para valorar las
paternidades, y en funcin de cada tipo de caso este padre (P) y esta madre
(M) variarn y por tanto las probabilidades de transmisin variarn.
De forma genrica podemos decir que si tenemos un progenitor de
genotipo conocido homozigoto la probabilidad de transmisin del alelo es 1, ya
que no tiene otra opcin y en el 100% de los casos lo trasmite. Si el progenitor
es heterozigoto, la probabilidad de transmisin de cada alelo es la mitad, o sea
0,5. Si el progenitor no tiene el alelo, la probabilidad de transmisin ser 0.
Probabilidad de transmisin del alelo

A
AA
->
AB
->
0,5
BB,BC
->
Si desconocemos el genotipo del progenitor la probabilidad de

transmisin ser la frecuencia poblacional para dicho marcador, es decir la
probabilidad de transmisin del alelo A ser a.
Para la valoracin, se establecen siempre dos hiptesis excluyentes:
H1: el presunto padre (PP) es el padre biolgico del hijo
H0: el presunto padre (PP) no es el padre biolgico del hijo y por
tanto es otro hombre
Estas dos hiptesis tienen una probabilidad (condicionada) en funcin de
la informacin del caso (I) y del anlisis gentico (E de evidencia gentica). A
travs del teorema de Bayes podemos expresarlas en forma de cociente u
odds:
Pr(H 1 | E, I) Pr(E | H 1 , I) Pr(H 1 | I)

=
x
Pr(H 0 | E, I) Pr(E | H 0 , I) Pr(H 0 | I)
(Frmula 1)
Como podemos ver hay tres trminos:

Odds a posteriori = LR x Odds a priori
El odds a posteriori es lo que intenta determinar el juzgador, es decir,
saber en funcin de la informacin del caso que tiene, gentica (E) y de otro
tipo (I), la relacin a favor/en contra de la paternidad. Para ello hay que
combinar el LR (likelihood ratio o coeficiente de verosimilitud) con los odds a
priori. El LR es el valor que puede obtener el laboratorio, que en casos de
paternidad de denomina ndice de Paternidad (IP).

Los odds a priori es un valor que debe proporcionar el juzgador, y que no
viene a ser otra cosa que la relacin a favor en contra de la paternidad que se
tiene antes de realizar la prueba gentica (con las evidencias no genticas).
Tradicionalmente se establece, a falta de otra indicacin, un a priori neutro, es
decir, que hay las mismas probabilidades a favor que en contra. No obstante,
este valor puede no ser adecuado, y de hecho se discute que es incluso
errneo. En varios pases, los tribunales proporcionan un a priori concreto e
incluso se hace el clculo con un panel de a prioris diferentes.
En el caso de las paternidades
Pr(H1|E,I)=1- Pr(H0|E,I)
Pr(H1|I)=1- Pr(H0|I)
(Frmula 2)
Por lo que sustituyendo nos queda
Pr(H 1 | E, I) =
LR Pr(H 1 | I)
LR Pr(H 1 | I) + [1 Pr(H 1 | I)]
Donde Pr(H1|E,I) es la probabilidad de paternidad o W (Wahrscheinlickeit

segn Essen-Mller) y Pr(H1|I) es la probabilidad de paternidad a priori. Si
consideramos que la probabilidad de paternidad a priori es igual que la
probabilidad de no paternidad, y por tanto igual a 0,5 (aplicar frmula 2),
tendramos la ecuacin de Essen-Mller:
W=LR/(LR+1)=1/(1+1/LR)
(por tanto LR=W/(1-
W))
En general, para simplificar tendremos que asumir una serie de
premisas:
1. Ambos progenitores biolgicos (Padre y Madre) no estn relacionados
genticamente
2. Hay equilibrio de Hardy-Weinberg en la poblacin de referencia (lo que

implica que no hay subestructuracin poblacional, que los marcadores son
independientes y que no hay alelos silentes)
3. No ocurren mutaciones
4. La herencia es mendeliana con sistemas codominantes
Ninguna de las premisas son ciertas en mayor o menor grado, y hay que ser
conscientes de si conocemos dichas circunstancias y en que manera pueden
alterar nuestros resultados.
Asumiendo todas las premisas expuestas vamos a abordar el caso ms
simple al que podemos enfrentarnos, el caso estndar (tro PP-M-H). Para
calcular el IP (LR) lo que tenemos a nuestra disposicin es el tipaje gentico
del presunto padre (padre alegado), madre e hijo para un nmero adecuado de
marcadores. Suponemos la maternidad cierta, y que a priori se excluye
cualquier pariente prximo del presunto padre. El IP total ser el producto de
los IP de cada marcador.
Tradicionalmente se expresa el IP como el cociente X/Y
siendo
X=Pr(E|H1,I) e Y=Pr(E|H0,I). La evidencia gentica que tenemos (E) son los

genotipos del presunto padre, madre e hijo (GP, GM, GH). Por tanto:
IP = LR =
X Pr(E | H 1 , I) Pr(G P , G M , G H | H 1 , I)
=
=
Y Pr(E | H 0 , I) Pr(G P , G M , G H | H 0 , I)
Dnde aplicando la tercera ley de la probabilidad
IP =
X Pr(GH | G P , G M , H 1 , I) Pr(GP , G M | H 1 , I)
=
Y Pr(GH | G P , G M , H 0 , I) Pr(GP , G M | H 0 , I)
(Frmula 3)
En esta ecuacin en el segundo trmino, los genotipos de los padres son
independientes de las hiptesis, por lo que sern iguales en el numerador y en
el denominador, y por tanto su valor ser 1. En otros casos (complejos) no ser
as y no se eliminarn de los clculos. Aun as hay autores que prefieren no
eliminarlos de las frmulas y por tanto la X y la Y sern algo diferentes a las

que veremos.
Para hacer ms comprensible la explicacin abandonaremos la notacin
estadstica a partir de aqu y volveremos a la notacin ms gentica y genrica
que es ms intuitiva. El desarrollo completo puede encontrarse en varios
textos.
Como vimos antes se trata de calcular la probabilidad del genotipo del
hijo condicionada al genotipo de los padres bajo ambas hiptesis diferenciando
cuando el hijo es homozigoto y heterozigoto.
Hijo homozigoto (AA):
IP =
X
PP A M A
=
Y Pob A M A
Hijo heterozigoto (AB):
IP =
X
PP A M B + PP B M A
=
Y Pob A M B + Pob B M A
En la X usaremos los genotipos de los padres (presunto padre: PP y

madre biolgica: M) y aplicaremos las probabilidades de transmisin que vimos
anteriormente.
En el caso de la Y (denominador), consideramos que el padre no es el
presunto padre, sino otro individuo no relacionado (padre alternativo), lo que se
conoce como padre de la poblacin (Pob). En este caso la probabilidad de
transmisin ser la frecuencia poblacional para dicho marcador. Para la madre,
que conocemos su genotipo hacemos igual que en el numerador (X).
Habr casos en los que el padre es incompatible con la combinacin
Madre-Hijo, por lo que el valor de X ser cero, y por tanto el IP ser cero.
Para casos ms complejos, las premisas modifican los clculos, y en
casos defectivos hay que jugar con el calculo ponderado de todas las
combinaciones posibles. Con unos ejemplos prcticos podremos entender

mejor la forma de calcularlo.
Emisin de informe y defensa ante los tribunales

Una
vez
valorada
la
prueba,
tanto
genticamente
como
estadsticamente, hay que emitir un informe. En dicho informe se deben reflejar

todos los datos que afecten a la valoracin, como tcnicas y marcadores, las
referencias poblacionales empleadas, y las hiptesis valoradas y los
resultados.
Deben evitarse aseveraciones como es el padre, ya que lo que hace el
laboratorio es evaluar nicamente la evidencia gentica mediante el IP, y por
tanto siempre hablamos de probabilidades que no son absolutas.
Si es requerido, el perito deber defender y explicar su informe ante los
tribunales, cuestin harto difcil, dado el desconocimiento de personas ajenas a
la gentica de temas tan complejos.
IDENTIFICACIN DE RESTOS CADAVRICOS
MANUEL LPEZ SOTO

La aparicin de restos humanos en lugares tan diversos, la exhumacin
de restos seos cuando est en litigio alguna prueba de filiacin,
los
accidentes domsticos y de trfico, los ltimos atentados terroristas que estn

conmocionando al mundo, estn haciendo que la identificacin de restos
cadavricos forme parte de la rutina diaria de un laboratorio de biologa legal o
forense.
Cuando se trata de identificar a individuos vivos podemos recurrir a
multitud que mecanismos que permiten resolver esta cuestin de forma rpida,
como por ejemplo, los datos fisonmicos, el peso, la talla, el registro de voz, el
D.N.I. Sin embargo, cuando queremos identificar un cadver, es decir,
reconocer si una persona es la que se busca, todos esos mecanismos que en
principio parecen tan obvios para los sujetos vivos, en el caso de los
cadveres, brillan por su ausencia en ocasiones.
Cuando
nos
encontramos
ante
unos
restos
cadavricos
que
necesitamos identificar unos restos cadavricos, es preciso observar en primer

lugar el estado de conservacin en el que se encuentra. ste depender de si
se han puesto en marcha o no los procesos de destruccin natural tales como
los mecanismos de autlisis, originados por la fermentacin anaerbica de las
enzimas propias del organismo y los mecanismos de putrefaccin originados
por la contaminacin bacteriana. No obstante, en algunos casos, el cadver se
puede encontrar, de forma natural o artificial, conservado en estados de:
momificacin, embalsamacin, saponificacin, corificacin o congelacin.
De forma general, un cadver se puede identificar siguiendo tres etapas
independientes entre s o consecutivas: datacin de los restos cadavricos
mediante unos criterios morfolgicos y qumicos; un diagnstico de especie
mediante anlisis inmunolgicos o de ADN y por ltimo, un diagnstico
individual mediante la determinacin de la etnia, sexo, talla, y por supuesto,

ADN.
Cuando un laboratorio de biologa forense se enfrenta a la identificacin
gentica de unos restos humanos, se va a encontrar con el problema de que
posiblemente en dichos restos se han puesto en marcha los mecanismos de
modificacin del ADN postmortem, cuyos agentes causales son los agentes
oxidantes, las radiaciones ultravioletas, la humedad, la temperatura, los
microorganismos y el pH ambiental. Todos estos factores, adems de producir
daos moleculares van generar un foco de contaminacin y una fuente de
posibles inhibidores que requerir una excelente praxis pericial por parte del
laboratorio.
Desde el punto de vista del anlisis gentico y con relacin a qu tipo de
muestra se selecciona para su anlisis, existe un gran consenso en el mbito
internacional. El orden ms lgico de seleccin sera, en primer lugar, sangre;
en segundo lugar, msculo o pelos con raz y, en tercer lugar, dientes o
huesos, prefiriendo de estos ltimos, los huesos largos a los cortos o planos.
Aunque cada laboratorio puede elegir el mtodo de extraccin que ms
crea ms conveniente, nosotros recomendamos para la sangre fenolcloroformo-isoamlico (FCI) seguido de un paso de microfiltracin-purificacin o
precipitacin con etanol (si la sangre est en mal estado) o mediante columnas
de extraccin del tipo GFx o NSB (si la sangre es lquida y est en buen
estado); para el msculo, los pelos, los huesos o los dientes tambin
recomendaramos el mismo mtodo de extraccin expuesto para la sangre en
mal estado. No obstante, tanto los huesos como los dientes necesitarn de un
procesado previo consistente en: limpieza, para eliminar restos de suciedad
adheridos a los mismos, exposicin a U.V., para eliminar contaminantes
superficiales, pulverizacin en nitrgeno lquido, descalcificacin (opcional) y
extraccin orgnica con FCI. Los huesos, adems, se sometern a un lijado y
corte en secciones transversales de la superficie que se va a analizar entre el
paso de lavado y pulverizacin.
Una vez extrado el ADN de los restos cadavricos se cuantificar y se
decidir si analizar marcadores de STRs (autosmicos como de cromosoma Y)
o ADN mitocondrial.
Por ltimo, se comentarn algunas de las identificaciones de inters

histrico como fueron las de Josef Mengele y Martin Bormann, las de Jesse
James, las de la familia Romanov y las del Tercer Presidente de los Estados
Unidos, Thomas Jefferson. Tambin abordaremos, dado el inters social que
ha generado en la actualidad, la identificacin de los restos seos de Cristbal
Coln y de Diego Coln, su hermano, as como las de Hernando Coln, hijo del
afamado almirante.
IDENTIFICACIN GENTICA EN GRANDES CATASTROFES
ANTONIO ALONSO ALONSO

La utilizacin de bases de datos de ADN cobra tambin una vital
importancia en los procesos de identificacin humana en grandes catstrofes
en los que a menudo se requiere el uso de herramientas bioinformticas
capaces de realizar bsquedas sistemticas de un alto nmero de perfiles de
ADN de acuerdo a diferentes algoritmos y que al mismo tiempo permitan
evaluar con rapidez la significacin estadstica (LR) de los distintos grados de
coincidencia observados entre los perfiles genticos de las muestras postmortem y los perfiles obtenidos de las posibles muestras antemortem de las
vctimas (utensilios de aseo personal, biopsias,...) o de muestras de referencia
(sangre o saliva) de sus familiares vivos.
Existe un conjunto interrelacionado de factores y circunstancias que
pueden comprometer o dificultar el objetivo final de la identificacin gentica de
las vctimas de una gran catstrofe, tales como: (1) el nmero de vctimas y
modelo poblacional (poblacin abierta o cerrada), (2) los mecanismos de
destruccin de los cuerpos, (3) el grado de fragmentacin, (3) el estado de
degradacin del ADN, (4) la accesibilidad a las muestras post-mortem o (5) el
tipo de muestra de referencia disponible.
En esta leccin examinaremos las diferentes fases del proceso de
identificacin gentica (toma de muestras, anlisis de ADN y tecnologa
aplicable, sistemas de bsqueda y comparacin de perfiles de ADN en base de
datos, valoracin estadstica y criterios de significacin de los distintos grados
de coincidencia) y revisaremos la problemtica de este tipo especifico de
anlisis de ADN en diversos casos de grandes catstrofes descritos en la
literatura cientfica. Pondremos especial nfasis en el progreso cientfico
obtenido de los esfuerzos de colaboracin entre diversos laboratorios pblicos
y privados de EEUU durante la identificacin de victimas del atentado terrorista
contra el WTC de Nueva York el 11 de Septiembre de 2001. Incluyendo no
solamente el desarrollo de nuevas tecnologas (Min-STRs, SNPs, ) aplicables
al estudio de muestras post-mortem altamente degradadas, sino tambin

diversos aspectos de la toma de muestras y su registro y documentacin
electrnicas, as como de la interpretacin estadstica de la prueba del ADN y
su significacin en distintos escenarios.
Analizaremos los principales retos y los posibles obstculos para la
identificacin de las ms de 200.000 vctimas producidas por el Tsunami (26
de Diciembre de 2004) que afect a 12 pases del sur del continente Asitico.
Presentaremos tambin nuestra propia experiencia y la problemtica
surgida en algunos casos recientes tales como el ataque terrorista en Madrid
del 11 de marzo de 2004 que arrojo 191 vctimas, o el accidente areo del
Yakolev-42 en Trabzon (Turqua) el 23 de Mayo de 2003 en el que perdieron la
vida 62 militares espaoles que volvan a Espaa de una misin de paz en
Afganistn.
BASES DE DATOS DE ADN
ANTONIO ALONSO ALONSO

Las bases de datos de ADN con fines de investigacin criminal son
actualmente las bases de datos genticas de mayor inters para los
laboratorios forenses. Gracias a la experiencia acumulada por un gran nmero
de pases en todo el mundo (que ya han desarrollado una legislacin
especfica) hoy sabemos que la comparacin sistemtica de los perfiles de
ADN provenientes de distintas causas penales estructurados en una misma
base de datos, puede ser una herramienta muy eficaz para reducir el ndice de
criminalidad de determinados delitos sin autor conocido y, especialmente,
aquellos en los que existe una alta reincidencia. De esta forma la prueba del
ADN ha dejado de ser un mero testigo a posteriori" de los hechos criminales
para convertirse potencialmente en una herramienta preventiva de la
criminalidad. Sern, por tanto, estas bases de datos las que centren gran parte
del contenido de esta presentacin en la que realizaremos una revisin de la
situacin en Europa para, con posterioridad, hablar de la situacin especifica
de nuestro pas en este tema.
No debemos de olvidar, sin embargo, que existen otro tipo de bases de
datos genticas de gran inters para la comunidad cientfica forense y que
tambin sern abordadas en esta leccin del curso. Me estoy refiriendo por
ejemplo a las bases de datos de ADN para la identificacin de desaparecidos
entre las que destacan los proyectos de identificacin de victimas de conflictos
blicos o de victimas de catstrofes. (Los retos a los que se enfrenta la prueba
del ADN en la identificacin gentica de victimas de grandes catstrofes,
sern tratados por el autor en otra leccin de la presente edicin del curso de
Biologa Forense).
Por otro lado, se abordarn
las bases de datos poblacionales de
marcadores de ADN humanos utilizados en gentica forense (muchas de ellas
pblicas y accesibles por Internet) que se han convertido en una herramienta

esencial para poder realizar una evaluacin bioestadstica adecuada del valor
de la prueba del ADN, tanto de marcadores STR autosmicos como de datos
haplotpicos (Y-STR o mtDNA).
Haremos tambin una breve referencia a un grupo heterogneo de
bases de datos de ADN que emergen en los diversos mbitos de aplicacin de
las ciencias forenses y que pueden ser de utilidad en muy diversos
diagnsticos que van desde la identificacin gentica de vestigios de distintas
especies animales en la escena del crimen a la identificacin de especies
txicas o patgenas.
Por ltimo, nos asomaremos al futuro de las bases de datos de ADN
forense en la era de la genmica.
MESA REDONDA
EL INFORME PARCIAL Y SU DEFENSA ANTE LOS TRIBUNALES
PONENTE: CARLOS PUIGCERVER ASOR

Profesor de Derecho Procesal de la Universidad de Valencia
LA VALORACIN DE LA PRUEBA PERICIAL
1.- INTRODUCCIN
Cuando un Juez o Tribunal dicta una sentencia realiza un acto de
pensamiento que es un juicio lgico jurdico que responde a la estructura del
silogismo en el que, la premisa mayor es la norma, la premisa menor es el
hecho y la consecuencia es el fallo o parte dispositiva de la resolucin judicial.
La sentencia es, pues, aplicacin del derecho mediante la subsuncin de
un hecho en una norma jurdica de manera que se produzca una determinada
consecuencia jurdica.
En uno de los estadios de este proceso intelectual el juez debe fijar los
hechos ocurridos en la realidad y para ello deber valorar la prueba practicada.
2. LA VALORACIN DE LOS MEDIOS DE PRUEBA
En definitiva, para que el juzgador conozca si se han producido o no los
hechos afirmados en el proceso debe valorar la prueba practicada lo que
implica dos operaciones, una primera denominada interpretacin en la que
deber extraer cules son las afirmaciones, las consecuencias que se
desprenden de las pruebas y una segunda que ser la de darles valor para fijar
o no unos determinados hechos como producidos o existentes.
A) Valoracin libre y valoracin tasada o legal de los medios de
prueba
Esa segunda labor que consiste en la de fijar el valor de ese medio de
prueba, puede estar reglada por la ley, en el sentido de establecer unas
normas o criterios para valorar, son los llamados medios de prueba de
valoracin legal o tasada, o, por el contrario, puede dejarse a la libre

apreciacin del juzgador, son los llamados medios de prueba de valoracin
libre.
B) La valoracin de la prueba pericial
La prueba pericial es un medio de prueba de libre valoracin, es decir,
desde el plano terico, los informes periciales, cualquiera que sea la autoridad
cientfica de la que emanan no constituyen verdad intangible o incontrovertible,
sino que slo son una opinin cientfica o tcnica que ser valorada por el Juez
o Tribunal, pues de otro modo, como afirma ALONSO PREZ, se le llegara a
vincular de tal manera que el perito se convertira en juez sustituyendo a ste
en su funcin.
Ahora bien, prueba de valoracin libre no quiere decir prueba arbitraria
de modo que el Tribunal no puede rechazar de manera irrazonada o caprichosa
un dictamen pericial, sino que deber expresar las razones que le llevan a no
darle valor y el proceso lgico llevado a cabo para llegar a esa conclusin, lo
que no resultar fcil cuando deban de manejarse conocimientos cientficos o
tcnicos de gran precisin o complejidad, por lo que en innumerables
ocasiones el juzgador conceder a la prueba pericial un valor absoluto.
3. TRATAMIENTO JURISPRUDENCIAL DE LAS PRUEBAS BIOLGICAS
DE PATERNIDAD
El valor que se concede por los Tribunales a las pruebas biolgicas de
paternidad es absoluto, casi de certeza, aunque dicho valor no se atrevan a
confesarlo directamente en todos los casos, disimulando el valor determinante
de la misma mediante referencias a otros medios de prueba que valorados
conjuntamente les llevan a la misma conclusin.
Es significativo que en todos los casos en que se ha practicado una
prueba de paternidad y su resultado ha dado alta probabilidad de paternidad, la
sentencia ha terminado por declarar la filiacin, eso s declarando que no se le
est dando valor absoluto o de certeza.
Sirva de muestra la Sentencia del Tribunal Supremo (Sala de lo Civil), de
20 mayo 1991 en donde se afirma que la probanza biolgica de la paternidad
constituye una prueba directa, pero no plena y absoluta, no obstante ha de
atribursele valor de casi total aproximacin a la verdad, sobre todo, cuando
sucede, como en la presente controversia, que dicho informe pericial, ha sido

emitido por un rgano tcnico oficial, dotado de medios y eficacia, para su
elaboracin ms exacta, cual es el Instituto Nacional de Toxicologa,
dependiente del Ministerio de Justicia y que concurren el 99,9998 por cien de
probabilidad, y con un ndice (IP) de paternidad de 840191:1, y segn la
posicin cientfica de K. Hammel, ello supone una paternidad prcticamente
probada.
Tambin la Sentencia del Tribunal Supremo nm. 1070/1992 (Sala de lo
Civil), de 24 noviembre que con un porcentaje del 99,9324% en las pruebas
biolgicas afirma que debe entenderse que la paternidad est prcticamente
probada, encontrndonos con ante una prueba de casi absoluta fiabilidad.
Finalmente es de destacar la Sentencia del Tribunal Supremo de 2 de
enero de 1991 en donde se deca que La probabilidad de paternidad (w)
obtenida es de 99,91% valor que se encuentra dentro del rango considerado
por K. Hummel y colaboradores como Paternidad prcticamente probada.
Asimismo el ndice de Paternidad (IP) obtenido es de 1293,48, valor que se
encuentra dentro de rango considerado por los mismos autores como
Paternidad prcticamente probada, y de aqu, que proyectando cuanto
antecede al meritado caso de que se trata, es de llegar a la conclusin de que
en l, se consigui una certeza casi absoluta en el resultado de la valoracin de
la prueba.
4. VALORACIN JUDICIAL DE LA NEGATIVA A SOMETERSE A LAS
PRUEBAS BIOLGICAS DE PATERNIDAD
Para concluir debemos hacer una referencia a las graves y negativas
consecuencias que tiene el no someterse a las pruebas biolgicas, pues,
generalmente, dan lugar a una sentencia declarando la paternidad siempre y
cuando en el proceso se hayan acreditado otras circunstancias tales como la
existencia de relaciones, sostenimiento econmico o relacin personal,
habindose rechazado todos las excusas alegadas para negarse a su prctica
cuando estn basadas en los derechos constitucionales a la intimidad personal
y familiar o a la integridad fsica y moral, admitindose tan solo en dos casos, a
saber, cuando exista un grave peligro para la salud, o cuando no exista un
mnimo de prueba que permita deducir la posibilidad de paternidad.
Recogen esta doctrina las siguientes sentencias: Sentencia Audiencia

Provincial nm. 14/2004 Asturias (Seccin 5), de 22 enero de 2004, Sentencia
del Tribunal Supremo de 11 de septiembre de 2003 y Sentencia del Tribunal
Constitucional 95/1999, de 31 de mayo.
BIBLIOGRAFA DE INTERS:
1.- FONT SERRA, EDUARDO; El dictamen de peritos y el reconocimiento
judicial en el proceso civil. Ed.: La Ley, 1 edicin, mayo de 2000. Las Rozas
(Madrid)
2.- LPEZ-MUIZ GOI, MIGUEL; La prueba pericial. Gua prctica y
jurisprudencia. Ed.: Colex. 2 edicin. Madrid 2004.
3.- ALONSO PREZ, FRANCISCO; Medios de investigacin en el proceso
penal. Ed.: Dykinson, 2 edicin. Madrid 2003.
3.- MONTERO AROCA, JUAN; BARONA VILAR, SILVIA; GMEZ COLOMER,
JUAN-LUIS Y MONTN REDONDO, ABERTO, Derecho jurisdiccional I, Ed.
Tirant lo Blanch. 13 edicin, Valencia 2004.
4.- MONTERO AROCA, JUAN; BARONA VILAR, SILVIA; GMEZ COLOMER,
JUAN-LUIS Y MONTN REDONDO, ABERTO, Derecho jurisdiccional II, Ed.
Tirant lo Blanch. 13 edicin, Valencia 2004.
5.- ALMAGRO NOSETE, JOS; GIMENO SENDRA, VICENTE; CORTS
DOMNGUEZ, VALENTN Y MORENO CATENA, VCTOR, Derecho procesal
Tomo I (Vol. I), Ed. Tirant lo Blanch. 4 edicin, Valencia 1989.
PONENTE: FELIX SNCHEZ UGENA

Director del Instituto de Medicina Legal de Badajoz
El Juez solicitar un informe pericial cuando, para conocer o
apreciar
algn
hecho,
fueran
necesarios
conocimientos
cientficos
especializados. Aunque tradicionalmente se dice que los Jueces sentencian

segn se les informa, lo cierto es que nuestra Legislacin establece que Los
Jueces y Tribunales apreciaran la prueba pericial segn las reglas de la sana
crtica, sin estar obligados a sujetarse al dictamen de los peritos.
REQUISITOS Y CUALIDADES QUE DEBE REUNIR EL PERITO

1.- CUALIDADES PERSONALES
a) Objetividad.
b) Capacidad de reflexin y sentido comn
c) Prudencia.
d) Imparcialidad..
e) Veracidad.
2.- FORMACIN CIENTFICA.
3.- CONOCIMIENTOS JURDICOS.
VALOR JERRQUICO DE LA PRUEBA PERICIAL
CERTEZA MATEMTICA. Consiste en la comprobacin de las leyes

mismas del pensamiento, por lo que partiendo de postulados ciertos se
ha de llegar a resultados exactos.
CERTEZA MORAL. Se trata de una conviccin sin pruebas slidas

que la sustenten.
CERTEZA FSICA. Se encuentra entre lo absoluto de la certeza

matemtica y la relatividad de la certeza moral.
CERTEZA LEGAL. A estos tres grado de certeza podemos aadir en

la prctica la denominada certeza legal. Es aquella que aunque no es
absoluta, si es suficiente para la administracin de justicia, ya que
permite razonablemente fijar una conclusin que responda a criterios
cientficos y lgicos, aunque no alcance una evidencia integral.
EL INFORME PERICIAL
Es un documento mdico-legal emitido por orden de las autoridades o
a peticin de particulares sobre el significado de ciertos hechos con
trascendencia judicial o administrativa. Puede ser evacuado por un solo
perito o por una corporacin cientfica: Instituto Nacional de Toxicologa,
Cuerpo de Mdicos Forenses, Colegios de Mdicos, Reales Academias, etc.
y suele ser solicitado en actuaciones judiciales ya adelantadas.
Sus caractersticas fundamentales serian:
a) Se trata de un documento oficial, parte integrante e importante en el

procedimiento,
que
contienen
datos
mdico-biolgicos
datos
susceptibles de ser discutidos.

b) La discusin tiene como objetivo reconstruir un hecho de inters judicial
sucedido en el pasado.
c) No se trata de aportar una opinin, sino una demostracin.
d) El informe generalmente se continua en una declaracin verbal ante el
tribunal.
Desde el punto de vista formal, un Informe Pericial debe constar de
consta de las siguientes partes
PREMBULO. Se inicia con los hombres del perito o peritos, sus ttulos,
residencia, autoridad o persona que ha solicitado el informe y objeto del
mismo, reproducindolo literalmente de la orden recibida.
RELACIN Y DESCRIPCIN DE LOS OBJETOS ACERCA DE LOS

CUALES DEBE EMITIRSE EL INFORME. Pueden ser documentos mdicolegales, objetos (armas, manchas, huellas o cualquier otro tipo de pruebas
de conviccin) o personas (inculpado lesionado, cadver). Tanto la
trascripcin de los documentos como la descripcin de los objetos y
personas ser minuciosa y fidedigna, y a ser posible acompaarse de

fotografas, croquis...
OPERACIONES PRACTICADAS. Conviene su descripcin, puntualizando

las tcnicas que se hayan usado en cada caso.
VALORACIN. Es lo fundamental del informe. Se trata de la discusin de

estos resultados, de su estudio cientfico, doctrinal y tcnico. Precisa un
razonamiento lgico y claro que sirva de nexo de unin entre los hechos que
se recogen y las conclusiones que se sientan.
CONCLUSIONES.
Deben
ser
entresacadas
de
las
consideraciones
efectuadas en el razonamiento anterior. Se formulan numerndolas en

prrafos separados, haciendo tantos apartados como afirmaciones o
negaciones se hagan.
FRMULA FINAL. Generalmente es la siguiente: Lo cual es cuanto puede

manifestar en cumplimiento de la misin que le haba sido encomendada.
Fecha y firma.
EXPOSICIN DE CASOS PRCTICOS

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