Universidad Nacional Autónoma de México

Facultad de Estudios Superiores Zaragoza

CARACTERÍSTICAS
TINTORIALES DE
LOS HONGOS

MICROBIOLOGÍA GENERAL II
Equipo 8:
MARTÍNEZ PÉREZ LIDIA
JUÁREZ PASTÉN GERARDO
GUZMÁN CÓRDOBA GERARDO
 OBJETIVO

- El alumno al termino de la practica será capaz de

observar y diferenciar hongos de diferentes fuentes,
mediante diferentes técnicas tintoriales.

- El alumno conocerá las principales técnicas de

tinción de hongos.

- El alumno procurara identificar y clasificar los hongos

aislados en la practica 2.
 PARED CELULAR

Esta formada por capas de polisacáridos

- Glucanos (polímeros β-1,6, ramificados de glucosa)
- Mananos(polímeros α –1,6, ramificados de manosa)
- Polímeros de glucosamina
- Proteínas
- Lípidos (ergosterol)
- Quitina (polímero β-1,4 de N-acetilglucosamina)
 MECANISMOS DE COLORACION

¿COMO ENTRAN?

La coloración celular y tejidos son una combinación de

fenómenos físicos y químicos de absorción: los fenómenos
físicos de absorción, capilaridad y ósmosis participan en cierto
grado.
La afinidad de colorantes básicos por los tejidos ácidos y
viceversa indican que hay reacción química.
 ¿CÓMO SE TIÑEN?
La mayoría de los colorantes son compuestos orgánicos que
tienen alguna afinidad específica por los materiales celulares.

Muchos colorantes utilizados con frecuencia son moléculas

cargadas positivamente (cationes) y se combinan con
intensidad con los constituyentes celulares cargados
negativamente, tales como los ácidos nucleicos y los
polisacáridos ácidos. Ejemplos de colorantes catiónicos son el
azul de metileno, el cristal violeta y la safranina.
Otros colorantes son moléculas cargadas negativamente
(aniones) y se combinan con los constituyentes celulares
cargados positivamente, tales como muchas proteínas. Esos
colorantes incluyen la eosina, la fucsina ácida y el rojo Congo.

Otro grupo de colorantes son sustancias liposolubles; los

colorantes de este grupo se combinan con los materiales
lipídicos de la célula, usándose a menudo para revelar la
localización de las gotículas o depósitos de grasa. Un ejemplo
de colorante liposoluble es el negro Sudán.
TINCIONES SIMPLES DIFERENCIALES ESPECIALES
FUNDAMENTO Se utiliza un solo Se utilizan dos o mas Se basan en el hecho de
colorante, es simple colorantes. que distintas estructuras
y fácil de realizar. celulares tienen distinta
composición química, de
modo que se tiñen
selectivamente con
ciertos colorantes.
EJEMPLOS • Azul de • Gram. •Tinta china.
metileno
• Ziehl-
•Grocott – Gomori.
• Safranina Neelsen
.
• Acido •Blanco de
• Eritrocina. peryodico carcoflour
de Schiff
• Anaranja
do de
acridina • Giemsa y
Wright.
• Azul de
algodón
De lactofenol
TINCIONES
SIMPLES
 AZUL DE METILENO
UTILIDAD: Para exámenes en fresco o coloraciones
compuestas.
FUNDAMENTO: Los hongos adquieren un color azul
semejante al azul de algodón, aunque el hongo se
observa mas intenso que el fondo del campo.
COMPONENTES
Azul de metileno 0.3g. Colorante
Agua destilada 100ml

Mucor sp
 Safranina
UTILIDAD: Para el estudio de cultivos y productos
biológicos líquidos.
FUNDAMENTO: Los elementos fúngicos se tiñen de
color rojo intenso, y el resto del campo toma un
tono incoloro o rosa pálido.

Rihizopus sp
Penicillium sp.

Aspergillus sp.
 Tinción con Eritrocina.
Útil para la observación de gránulos
causados por:

• Nocardia
• Madurella grisea
• Madurella mycetomatis

Granos de micetoma por Nocardia sp.

 Anaranjado de Acridina
• Colorante vital, que da una fluorescencia
verde si el microorganismo está vivo y roja si
está muerto.

Tinción de ascosporas de
Sowerbyella rhenana en naranja
de acridina
Mucor mucedo.

Candida albicans
 Azul de algodón
COMPONENTES FUNCIÓN
Fenol Destruye la flora acompañante.
Ácido láctico Conserva las estructuras fúngicas al
provocar un cambio de gradiente
osmótico con relación al interior del
fúngico generando una película por así
llamarlo protectora.
Azul de El colorante es fuertemente ácido y se usa
lactofenol para la tinción directa de micelio
micólico, el cual toma un delicado color
azul claro.

Glicerol Agente humectante.

Microsporium canis Rihizopus sp.
 TINCIONES
DIFERENCIALES
 Tinción de Gram

UTILIDAD: Se emplea para teñir:

- Productos biológicos líquidos

- Exudados de lesiones
- Macerados de biopsias
- Todos los hongos son positivos a la
coloración de Gram, excepto
Cryptococcus neoformans.
 FUNDAMENTO
- El decolorante alcohol acetona disuelve
a los lípidos de la pared impidiendo la
retención del cristal violeta en los
organismos Gram negativos

- Se forma un complejo: lugol-cristal-

violeta-ribonucleato de magnesio

- Esta técnica se basa en las diferencias

en el punto isoeléctrico.
Blastomyces dermatitis Candida albicans

Granos de
Nocardia sp.
 Tinción Ziehl-Neelsen (Ácido-Alcohol-
Resistentes)
UTILIDAD
Útil en algunos microorganismos ácido
resistentes como N. asteroides, N. brasiliensis
y otros actinomicetes.

FUNDAMENTO
El contenido lipídico de estos organismos
esta compuesto principalmente por ceras y
fosfolípidos que alcanzan hasta un 40 % de
su peso seco total .
 Grano de Actinomadura madurae .
Grano de Nocardia sp.

Actinomyces Israelii
 Técnica de Schiff
FUNDAMENTO

- En la tinción PAS se trata el material con

ácido peryódico, que oxida los 1,2-glicoles
formándose grupos aldehído en los
glucanos y mananos de las paredes
celulares de los hongos

- Con el reactivo de Schiff, los aldehídos

reaccionan dando un color rojo luminoso.
 Mucor sp.

Hystoplasma Capsulatum

Coccidioides immitis
 Tinción de Giemsa y Wright

- Utilizada para levaduras intracelulares,

que generalmente se encuentran dentro
de los macrófagos o monocitos

- Forma un halo alrededor de la pared

celular

- Citoplasma se tiñe de azul celeste

- Un polo se tiñe de azul oscuro (media

luna)
Blastomyces dermatitidis. Aspirado de tejido
de perro, tinción Wrigth

Hystoplasma capsulatum
TINCIONES
ESPECIALES
 Tinción negativa con tinta china

Fundamento
Este método es ideal para observar
inclusiones refráctiles que no se tiñen
fácilmente, tales como gránulos de azufre,
ácido poli-B-hidroxibutirico, esporas o capsulas,
debido a que las partículas de carbón
empleadas están cargadas negativamente y
son repelidas por la carga negativa de la
pared y delimitan una silueta mayor que el
tamaño real de la bacteria.
UTILIDAD
- Esta tinción especial
para visualizar a
Cryptococcus
neoformans.
- La tinta china se emplea
en una dilución de 1:2
con agua destilada
(suspensión de coloidal
de carbón o nigrosina) COMPONENTES:
- La técnica consiste en
colocar una gota del Tinta china de buena
calidad (nigrosina, tinta
producto biológico por Pelikan India Ink o Parker
examinar y una gota Black Ink, entre otras).
de tinta china
separados por 3 mm
 Tinción con tinta china para observar la
cápsula de C. neoformans.

La cápsula aparece como un halo claro y nítido en torno a una

levadura redonda, delimitado por las partículas de carbón en
suspensión coloidal de la tinta china, exhibiendo un nítido
contraste.
 Tinción de Gomori-Grocott
(Metenamina de plata)
Fundamento
Esta basada en que presencia de acido
crómico, los grupos hidroxilo de lo
polisacáridos de la pared celular de los
hongos son oxidados a aldehídos; estos a su
vez, reducen el complejo nitrato- plata
metenamina produciendo la coloración
café a negra, debido de la plata reducida
en los lugares de localización de los
aldehídos
Imagen histológica, tinción con Gomori-Grocott (tinción con
plata) mostrando esférulas en diferentes estados de
maduración.
 TINCIÓN DE GROCOTT-GOMORI
Con esta técnica los hongos se tiñen de color negro al igual que unas
bacterias(Nocardia y Actinomices) la mucosa adquiere un color gris
oscuro; las partes internas del micelio rosa oro; el fondo aparece de
color verde claro.

C. neoformans
 Blanco de carcoflour
Fundamento
El calcofloúr es un flourocromo que se une a
polisacáridos con los enlaces beta 1-3 y beta 1-4
presentes en polímeros tales como celulosa y la
quitina. El colorante fluorece cuando se expone a
una fuente de luz ultravioleta de onda corta o
capaz de producir la luz azul (longitud de onda
410-450 nm). Es un método de alta sensibilidad
para definir claramente los elementos micoticos
con microscopio de fluorescencia

Reactivos
- Calcoflour blanco M2R (polysciences)
- Azul de Evans
 HIDRÓXIDO DE POTASIO.
Puede utilizarse para examinar muestras
clínicas con abundantes células y restos
celulares.
El Hidróxido de potasio al 10% (solución de
KOH) permite ver elementos de hongos ya
que el KOH digiere parcialmente los
componentes proteicos, por ejemplo de la
célula huésped, pero no actúa sobre los
polisacáridos de las paredes celulares de
los hongos.

Solución de KOH al 10%

Cabello
infectado de
tiña de la
cabeza (Tinea
capitis)
Procedimiento
• Tomar un espécimen con abundante
crecimiento.

• Aplicar la técnica de tinción

• Observar a 10X y 40X

• Aplicar otra técnica y el KOH al 10 %.

• Observar a 10 y 40X y esquematizar

 REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
- Guzman Arenas Roberto, “Micología médica”., Editorial
McGraw-Hill, 2ª. Edición; México, 2004. Capitulo 34 pag 299-
305

- RubenLopezMartinez, Micología Médica Procedimiento para

el diagnostico de laboratorio, Ed. Trillas, México 2006 Capitulo
10 Pag.149-158

- F.J. Baker, Manual de Técnicas de Micología Médica Editorial

Acribia, S.A Zaragoza España 1998 pag. 18-20; 40-41

- Dr. Norman F. Connan; Micología; Editorial Interamericana

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- Lynch, M; Raphael, S. Métodos de Laboratorio. Editorial

Interamericana. 2º edición. México. 1987. Tomo II pag. 523-530

- MURRAY, G. Microbiología Médica. Edit. El Manual Moderno.

3º edición México D.F. 1997 pag 175-182