LABORATORIO DE PRINCIPIOS DE QUIMICA ORGANICA

INFORME N6: CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA

SEBASTIAN AROCHA. COD: 245565

JOSEPH MUOZ. COD: 244661

GRUPO 1

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA

FACULTAD DE CIENCIAS

MARZO 2015

Resumen
En el presente informe se mostraran los resultados pertenecientes a llevar a
cabo la experimentacin para la separacin de pigmentos de diferentes
propiedades, esto se lleva a cabo mediante la cromatografa de capa fina,
mediante el uso de diferentes sustancias separadoras.
Procedimiento

Preparar 3 cmaras
cromatograficas con 3
solventes diferentes

Preparar 6 placas

Proceda a realizar la
cromatografa (dibujar los
resultados)

Aplique en cada placa 3

muestras (muestra
original, y colorantes)

Seleccione los eluyentes

ms adecuados para la
mezcla que se tiene

Resultados (IBT)

Cromatografa en capa fina - Fase estacionaria slica gel

ter de
Tolueno:Met
Fase mvil
Tolueno
Metanol
petrleo
anol (9:1)
Placa Placa Placa Placa Placa Placa Placa Placa
Patrn
1
2
1
2
1
2
1
2
Fase mvil
5,9
6,0
6,4
6,0
6,3
6,1
5,4
5,5
Muestra
2,5
2,8
0,0
0,0
6,1
5,5
4,2
5,4
problema
Rojo de metilo
2,8
0,2
5,5
2,3
O-nitrofenol
4,4
1,0
6,0
5,1
Sudan III
2,8
0,0
5,7
5,3
P-nitrofenol
3,6
0,5
5,8
5,3
Tabla 1. Resultados de la cromatografa en capa fina, con fase estacionaria en slica gel, de una muestra
problema comparados con los valores obtenidos para diferentes sustancias patrones usando tolueno, ter de
petrleo, metanol y mezcla tolueno:metanol 9:1 como fases mviles. Valores dados en cm.

Cromatografa en capa fina - Fase estacionaria slica gel (Valores Rf y hRf)

Fase mvil

Placa 1
Patrn

Rf

hRf

Muestra
problema

42
%
47
%
75
%

25
%
28
%
44
%

Sudan III

P-nitrofenol

Rojo de metilo
O-nitrofenol

ter de
petrleo
Placa
Placa 2 Placa 1
2
hR
Rf hRf Rf hRf Rf
f
47 28
0 0
0% 0%
%
%
% %

Tolueno

3% 2%

16
%

10
%

47
%
60
%

28
%
36
%

0
%
8
%

0
%
5
%

Tolueno:Metano
l (9:1)

Metanol
Placa 1

Placa 2

Placa 1

Placa 2

Rf

hRf

Rf

hRf

Rf

hRf

Rf

hRf

97
%
87
%
95
%

61
%
55
%
60
%

90
%

55
%

54
%

42
%
23
%
51
%

98
%

78
%
43
%
94
%

57
%
58
%

93
%
95
%

96
%
96
%

53
%
53
%

Tabla 2. Valores calculados de Rf y hRf para cada una de las sustancias en las diferentes fases mviles

Cromatografa en capa fina - Fase estacionaria slica gel

ter de
Fase mvil
Tolueno
Metanol
petrleo
Placa Placa Placa
Placa Placa
Patrn
Placa 2
1
2
1
1
2
Rojo de
89%
0%
111%
metilo
O-nitrofenol
57%
0%
102%
#DIV/0
Sudan III
100%
96%
!
P-nitrofenol
78%
0%
95%

(Valores hst)
Tolueno:Met
anol (9:1)
Placa Placa
1
2
183%

82%

102%

102%

Tabla 3. Valores calculados de hst para la sustancia problema con respecto a las diferentes sustancias de
referencia.

Anlisis de resultados
Al ver las distancias recorridas por las sustancias, tanto las de referencia como
la problema, en las diferentes fase mviles, es fcil determinar cual de estas es
las ms adecuada para la correcta separacin de los compuestos de la muestra
problema. Los resultados obtenidos usando ter de petrleo como fase mvil
muestran que las sustancias sufrieron una separacin muy leve, puesto que
dos sustancias, la problema y el sudan III, no tuvieron ningn recorrido, y en las
3 restantes sus recorridos fueron muy cortos, siendo el mayor de estos de 1,0
cm para el o-nitrofenol. Aunque dicha fase mvil no es la ms adecuada para la
separacin de todas las sustancias del lquido problema, si nos permite realizar
algunas especulaciones sobre la caracterizacin de estas. Es de resaltar que la
muestra problema no sufri ni el ms mnimo desplazamiento, tal como el
sudan III, usando esta fase mvil. En cambio, a pesar de que el desplazamiento
no fue demasiado largo, el o-nitrofenol si pudo moverse mediante el uso de
ter de petrleo, por lo que esto nos da un indicio de que esta sustancia podra
no estar mezclada en la muestra problema. En el caso del rojo de metilo y del
p-nitrofenol, sus desplazamientos fueron tan cortos que no nos permite ni
siquiera considerar que no podran estar en la sustancia problema.
Considerando el caso donde fue usado el metanol como fase mvil, si bien
hubo desplazamiento en todas las sustancias, no se logr una separacin
significativa en ninguna de las dos placas, por lo que se puede ver claramente
como esta fase mvil no es adecuada para una realizacin correcta de la
cromatografa para esta sustancia problema. A diferencia del caso mostrado
anteriormente, usando metanol como fase mvil no es posible tener ningn
indicio de cuales podran ser las sustancias presentes en la muestra problema.
Analizando los resultados obtenidos usando tolueno como fase mvil, es
fcilmente apreciable la separacin significativa de las sustancias, tanto las de
referencia como la problema. Lo primero que cabe resaltar en este caso es que
se evidencia claramente que el tolueno es una fase mvil correcta para la
separacin cromatogrfica de estas sustancias. Ahora, en cuanto a la
identificacin de las sustancias presentes en la muestra problema, es posible
apreciar como los indicios mostrados en el caso en el cual fue usado ter de
petrleo como fase mvil son confirmados con el tolueno como fase mvil. El onitrofenol tuvo un desplazamiento considerablemente mayor al de la muestra
problema, por lo que se puede descartar su presencia en ella. Sucede lo mismo
con el p-nitrofenol, mostrando as que el breve desplazamiento mostrado en el
ter de petrleo si era una prueba de su ausencia en la muestra problema. En
cambio, tanto el rojo de metilo como el sudan III tuvieron desplazamientos muy

similares, si no iguales, al realizado por la muestra problema, evidencindose

unos hst iguales a 89% y 100% respectivamente.
Al obtener los mejores resultados usando tolueno como fase mvil y con el
metanol tener la capacidad de desplazar las sustancias, fue usada una mezcla
9:1 de tolueno:metanol, buscando obtener una mejor separacin
cromatogrfica con esta fase mvil. Sin embargo, los resultados obtenidos no
fueron los esperados. En la placa 2, las sustancias se desplazaron pero no
sufrieron separacin alguna, tal como en el caso del metanol como fase mvil.
En la placa 1 se observ un comportamiento atpico a lo evidenciado en los
otros casos. Se ve que la muestra problema tuvo un desplazamiento muy
diferente con respecto al uso de esta misma fase mvil pero en la placa 2,
evidenciado en un Rf del 78% en la placa 1 y del 98% en la placa 2. Adems, se
esperaba que el rojo de metilo tuviera un desplazamiento intermedio entre el
obtenido usando metanol como fase mvil y tolueno como fase mvil. Sin
embargo, su desplazamiento fue menor que en ambos casos, evidenciado por
sus Rf, que en los casos anteriores haba sido de 47% y 87%, y en este ltimo
fue de 43%. Probablemente estos resultados inesperados se deban a una
incorrecta manipulacin de las placas con la fase estacionaria, tal vez una
inadecuada introduccin de la placa en la cmara cromatogrfica, la alteracin
de la fase estacionaria al manipular la placa o simplemente alguna
imperfeccin en el momento de aplicar la fase estacionaria sobre la placa.
Observando los hst de la sustancia problema obtenidos usando las diferentes
fases mviles con respecto a las sustancias de referencia, es posible observar
como en el caso del sudan III y del rojo de metilo estos oscilan cerca al 100%
en la mayora de sus casos. Cuando se obtiene un resultado indeterminado en
el hst con el sudan III, esto se debe a que en ambos caso el Rf es de 0%. En los
casos del rojo de metilo, descartando el dato atpico, el resultado de 0% se
debe al Rf de la muestra problema que es igual al 0%. Con esto, podemos
concluir que tanto el rojo de metilo como el sudan III son las sustancia
presentes en la muestra problema. En cambio, realizando el mismo anlisis de
los hst con respecto al p-nitrofenol y o-nitrofenol, se pueden apreciar
desviaciones importantes al 100% que se obtendra en caso de tener alguno de
estos compuestos en la muestra problema. De hecho, donde sus hst fueron
cercanos al 100% fue porque no se realiz separacin de los compuestos, no
porque sus separacin haya coincidido en las distancias desplazadas al punto
de siembra.
Conclusiones
Fue posible el correcto uso de la tcnica de separacin cromatogrfica de capa
fina para la separacin de la muestra problema recibida al inicio de la prctica,
logrando mostrar que las sustancias presentes en dicha muestra eran el rojo de
metilo y el sudan III. Tambin fue posible demostrar que la mejor fase mvil

para la separacin de esta muestra, por medio de la cromatografa de capa

fina, que fue usada en esta prctica fue el tolueno, dado que se logr una
separacin significativa de las sustancias analizadas. Adems, se mostr que el
metanol no es una fase mvil adecuada para la separacin por esta tcnica,
dado que desplaza las sustancias pero no las separa. El ter de petrleo por si
solo no es suficiente para determinar las sustancias presentes en la muestra
problema, porque, aunque logra una breve separacin de las sustancias, y esto
nos da indicios de cuales sustancias podran estar en la mezcla, sus
desplazamientos son demasiado cortos como para poder determinar cuales
estn presentes en la muestra problema y cuales no.
Preguntas
1. Qu ocurre si al introducir la placa en la cmara cromatogrfica, el nivel
del eluyente alcanza el sitio de aplicacin de la mancha?
Rta: si el nivel del eluyente alcanza la mancha de muestra lo que va a pasar es
que dependiendo de la naturaleza de la muestra esta se va a diluir en el
solvente, provocando que se deba repetir el experimento.
2. Cul es el efecto de la polaridad en la cromatografa?
Rta: El efecto de la polaridad en la cromatografa tiene como efecto el poder
arrastrar con mayor facilidad o no la muestra, ya que las sustancias ms
polares tienden a ser ms retenidas mientras que las sustancias menos polares
suelen ser arrastradas fcilmente.
3. Cules son las consecuencias de una columna mal empacada?
Rta: Esto podra generar unos resultados errneos ya que la forma en la que se
distribuye la muestra pasada la sesin de cromatografa depende del material
de relleno y esto depende a su vez de en qu caractersticas se encuentra, es
decir si no se encuentra en un entorno controlado los resultados sern
errneos.
4. Cules son las diferencias entre cromatografa liquida y de gases?
Rta: La diferencia principal radica e cual es la fase mvil, en la cromatografa
liquida la fase mvil es lquida, mientras que en la cromatografa de gases la
fase mvil es un gas, adems de todo esto estas 2 tcnicas se diferencian en
los lugares en los que se desarrolla la cromatografa, mientras que la liquida se
puede desarrollar tanto en una cmara como una columna, la de gases solo
puede hacerlo en una columna.
5. Profundizacin sobre fluorescencia para sustancias incoloras.

Rta: Si la sustancia que se pretende separar es transparente o su color puede

ser finalizado el proceso incoloro, se necesita algo que sirva como marcador
para poder identificar el trayecto de la muestra, muchas veces se usa una
lmpara fluorescente o en contra parte un reactivo que les otorgue coloracin a
las muestras.
6. Parmetros de la cromatografa de alta eficiencia.
Rta: debido a que los diferentes tipos de cromatografa de alta eficiencia son:
cromatografa liquida de alta resolucin, fase normal, fase reversa, exclusin
molecular, intercambio inico, bioafinidad; los parmetros de la cromatografa
de alta eficiencia son: Dimetro interno, medida de las partculas, tamao del
poro, presin del sistema.
7. En qu orden (de arriba abajo) se puede esperar los siguientes
compuestos? Naftaleno, acido butrico y acetato de fenilo en un gel de
placa de TLC de slice desarrollada con diclorometano.
8. Organice los siguientes compuestos en orden creciente de Rf empleando
la Silica como fase estacionaria en cromatografa de capa delgada,
acetaldehdo, 2-octanona, decano y 1-butanol.
9. Que efecto se produce si se siembra mucha muestra en la cromatoplaca.
Rta: si se siembra mucha muestra en la cromatoplaca pueden pasar lo
siguiente: la muestra se puede desperdigar de manera errnea provocando
que se mezcle con otras si se tiene, o que la muestra se diluya en el solvente y
caiga en el recipiente.
10.
Se observa una mancha con un Rf de 0062 despus de desarrollar
la cromatoplaca para una mezcla de reaccin Prueba esto que usted
tiene solamente un producto presente? Explique.
Rta: La definicin del Rf se da como la relacin entre la distancia recorrida por
el centro de la mancha de la sustancia desde el punto de aplicacin y la
distancia recorrida por el eluyente tambin desde el punto de aplicacin, ya
que cada sistema sorbente-eluyente tiene un Rf caracterstico esto nos da a
indicar que efectivamente solo habra un producto presente.
11.
De qu manera influye la saturacin en la cmara en el proceso de
separacin.

Bibliografa
IBT. (s.f.). Obtenido de
http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/cromatografia_de_fase_rever
sa.pdf

wikipedia. (s.f.). Wikipedia. Obtenido de

http://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa_en_capa_fina1metros
Wikipedia. (s.f.). Wikipedia.
Wikipedia. (s.f.). Wikipedia. Obtenido de
http://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa_l
%C3%ADquida_de_alta_eficacia#Par.C3.A