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R.M.:
Depsito legal:
ISBN:
Elaborado por:
N O552
4-2-224-10P.O.
978-99905-897-7-1
Dra. A. Magdalena Jimnez L. (Consultora Nacional MSH/SPS)
Equipo tcnico:
Edicin:
Primera
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+ 36:6
Ministerio de Salud y Deportes 2010
Apoyo tcnico y edicin de este documento brindado por la Iniciativa Amaznica
contra la Malaria, IAM, Management Science for Health/Strategic Pharmaceutival
System (MSH/SPS) y a la Organizacin Panamericana y Mundial de la Salud (OPS/
OMS).
Esta publicacin es propiedad del Ministerio de Salud y Deportes de Bolivia, se
autoriza su reproduccin, total o parcial, a condicin de citar la fuente y propiedad.
Impreso en Bolivia
PRESENTACIN
VISTOS Y CONSIDERANDO:
Que, la nueva Constitucin Poltica del Estado Plurinacional de Bolivia, en los artculos 35
al 45, establece que El Estado, en todos sus niveles, proteger el derecho a la salud, promoviendo
polticas pblicas orientadas a mejorar la calidad de vida, el bienestar colectivo y el acceso gratuito
de la poblacin a los servicios de salud; que el Estado tiene la obligacin indeclinable de garantizar
y sostener el derecho a la salud, que se constituye en una funcin suprema y primera responsabilidad
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Que, el control y vigilancia de la Malaria constituye una prioridad en todo el territorio del pas,
en cuyo marco la Estrategia de Vigilancia y Control de la Malaria, viene realizando todos los esfuerzos
./
*
#012
Que, la tendencia de situacin epidemiolgica de la malaria a nivel nacional en los tres ltimos
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(
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6
7
-
867-9
#
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1000
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#012
Plasmodium falciparum
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POR TANTO:
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/
Estado Plurinacional;
RESUELVE:
PRIMERO.- Aprobar la GUA PRCTICA DEL DIAGNSTICO DE LA MALARIA,
para su aplicacin en el mbito nacional, el mismo que tiene como objetivo general disminuir la malaria
20H
#01#
P. falciparum
#012
SEGUNDO.- La Unidad de Epidemiologa, la Estrategia de Vigilancia y Control de la Malaria,
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I
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0/9
ndice
Captulo 1.'/ #
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1.1 Procedimientos de la toma de muestra .....................................................................11
A/
"
...................................................... 15
BA/
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3BA/
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JK
....................................................................................... 18
1.4 Calidad del Frotis ...................................................................................................... 18
K #
$& ' &+ '
.................................................... 18
Q4
&' &+
" ................................................................... 20
1.7 Caractersticas Microscpicas del Plasmodium falciparum ...................................... 20
1.8 Caractersticas Microscpicas del Plasmodium vivax .............................................. 21
Captulo 2.#
&
+
......................................................... 27
2.1 Mtodo semicuantitativo por cruces o mtodo simple .............................................. 27
K" R +
" +
$$
$
............... 27
Captulo 3.#+&' + S+ .................................................................. 29
J>+
.................................................................................................. 29
J
!
+ &+ ................................................................... 30
3.3 Mantenimiento y cuidados del microscopio ptico ................................................... 31
Captulo 4.3
#
$& <"+ '
...................................................... 33
WX
3
<"+
+
#
$&
'
................. 33
Captulo 5. Control de Calidad ............................................................................................ 35
' $!
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&)
#+Y Z))#B ................................ 35
' $!
K K
4 ZKK4B ................................................. 37
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.......................................................................................... 39
J>"
$&
........................................ 39
J
>"
/
............................................... 39
Anexos
Form.1 Formulario EED........................................................................................................ 40
Form. 2 Formulario CCI ........................................................................................................ 43
Bibliografa............................................................................................................................ 46
Abreviaciones
AMI
C
CC
CCI
DP
ENVCM
EED
GG
INLASA
LNRDM
MS y D
MSH
Mx
OPS
OMS
P
Pv
Pf
SPS
PDRs
SGCDM
4
*
>
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:
'
Control
Control de Calidad
Control de Calidad Indirecto
#
Estrategia Nacional de Vigilancia y Control de la Malaria
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#+Y
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3
?
:
3
;
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#
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#+
'
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Infeccin Mixta
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Plasmodium
Plasmodium vivax
Plasmodium falciparum
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3
#
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&K
#
$& '
Captulo N 1
Mtodo de Diagnstico Parasitolgico Directo
Gota gruesa/frotis sanguneo
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$
$
$! Z= B
3
^
9^_`+
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a) Gota Gruesa. ) + /
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3
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3
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$
3/+ ,*+
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+
b) Frotis o extendido sanguneo. Es un procedimiento tcnico con el que se separan los elementos
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relacionadas con los estadios y especie de los mismos.
11
k :
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9 3 +
k A
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k >
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3
k X
<$ 4*
+
k :"+$ 3
Materiales:
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$
w
k +
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"
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33
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3
$
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"
k ?
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$
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z&
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+" +
+w3
o la parte angular del taln.
12
Foto N 2: Limpieza del dedo anular con algodn empapado en alcohol
k :+
&
$ &33
$ +
+
$
+
&
$
k ?
$ &
+
k
&
/
*/ * "+ +
suavemente el dedo para extraer las primeras gotas de sangre. Eliminar las dos primeras gotas de
$+"
$ &
$
,$
$ &
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+
$
K
+
3
3
3
"+
$
+
*
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"
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3
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$
$
"
+
$
$
$
"
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3 +
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k :+
$ &
+
,
presione el lugar de la puncin para que la compresin impida el sangrado.
13
k <
$!
+
Z= B
+ +
+
3 ,
+
$
$
+& {
+
3 Z
$
3
deformaciones) tocar el borde de la gota de sangre y esperar que discurra la sangre a lo largo del
3 3
+
3
3+
"$ W}
, +
3 /+
)
mucha sangre se puede levantar el portaobjetos extensor luego de que discurra la sangre a travs
3 3
*
!
+
=
Foto N 5
Foto N 6
{
"$ +
3
"+
$
$
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* $
*3+
3
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3
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$/
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Z
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R X
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14
k #
+
3+ &
+
+ * + $
$
+
3
&
guardadas por mucho tiempo pueden encontrarse restos de hemoglobina.
Secar?
+
+
3+ &*
la gota gruesa siempre debe estar en la parte inferior.
Fijacin.{
*
+
3 + &
++
3
^Q`+ +
J
Z
K
"
3"B
Otra opcin para efectuar este procedimiento consiste en sumergir la muestra en metanol por
espacio de 30 segundos.
15
Coloracin. # /
3
*+
&
"
3
&w
a) Tcnica de Tincin ROMANOWSKY
Secado. #
+
3>
&
$R,
la gota gruesa y el frotis estn secos.
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K
+
$
$
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$
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$$
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$
:
*+
J"
K
"
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3 + &
3
+
&
que el lado del portaobjetos que contiene la muestra sea el correcto.
K3 +
"
++
&
++
#
+ J
#
*
"
$
3
*
de que el agua no desprenda la muestra.
#
+
+
+
3
Observar al Microscopio ptico
16
4g
5g
?
=
,$
+ * $/
$
*
$
$
+
+]
W
Preparacin de la solucin A
Pese los siguientes reactivos
"
!
'
&
$
#
* w
Eosina amarilla hidrosoluble
4g
#*
* &
$
1 ml
1 ml
&
Mezclar
+
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&
$
+
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$
K
"
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3
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17
K3 +
"
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#
+ J
#
*
"
$
3
*
de que el agua no desprenda la muestra.
#
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$
+
3
Observar al Microscopio ptico
18
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H
N
N
E
N
L
P
M
L
L
M
Y
#
!
?U F
Gota gruesa
Aspecto de los elementos celulares sanguneos en frotis y gota gruesa teidos con Giemsa.
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#Q
FG?
#Q
FG?
" FG?
U " FG?
WF
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19
K +
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B
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Plasmodium falciparum
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^`
+
la especie P. falciparum"
>
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3 *
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R P. vivax+ =
Z*
;}B
En el glbulo rojo y en sangre perifrica: 4*
$&3
,
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=
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=
$
$
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, =
adultos se encuentran en tejidos profundos sin embargo pueden observarse en cuadros graves de la
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$
+
$&3
Trofozoitos:? =
+,Y
++
+
$
3!( +
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$ $
& +
+
21
Gametocitos
femenino
Gametocitos
masculino
$%
6,
Plasmodium &
:
=&+
*
=&+ P. vivax"^`
+
+
+"+
Z*
;}B
En el glbulo rojo y en sangre perifrica: Esta especie tiene cierta preferencia por los glbulos
"&*
$
=
=
+*
*
ligeramente ameboide en estadios maduros. Todos los estadios de P.vivax+
en sangre perifrica.
: trofozoitos son las formas jvenes de P. vivax, se mueven libremente al interior del glbulo
,
$
+ $
+
+
+ 3*
*
3=
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$
3
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3
"
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3*
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$+=/
Plasmodium
falciparum.
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Y +
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*
$
Y $
+$
encuentran dispersos en todo el citoplasma
!"+,.
0*
#
&
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* =
A = &*
Z=
B
22
A =
: esquizontes se presentan como una masa de citoplasma condensado que contiene varios
$"
+$
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W ,
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" $
! ,*
"
R
: gametocitos =
*
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" *3
"
+
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$" ?==
3/
:
$
+ $
$
+,Y
+
de cromatina excntrica a diferencia de este los microgametocitos tienen una masa difusa de
,Y
>
&
+
*
++
Cuadro N1 Caractersticas diferenciales del Plasmodium spp.
#$0
(Terciana maligno)
#$&
(Terciana benigno)
#$
(Terciana benigno)
#$
(Cuartana)
Perodo normal de
incubacin
12 das
Z#^
WB
15 das
Z#
B
17 das
Z#Q
_B
28 das
Z#_
WB
Ciclo eritroctico
48 horas
50 horas
72 horas
48 horas
Parasita eritrocitos de
todas las edades
? *
Y
normal del glbulo rojo.
D+
@
@J
"
Primariamente invade
los reticulocitos y
hemates jvenes.
>
Y
de los glbulos rojos.
Frecuentemente
Y +
D+
@J
"
Invade
preferentemente las
clulas jvenes.
&3
Y
3 z
astillados. Ocupan
@J"
El poliparasitismo es
=+
exclusivo.
Pueden exceder de
@ R
@
El poliparasitismo es
=
;*"
parasitemia habitual
J@
El poliparasitismo no
es frecuente es muy
raro.
Nivel max. de
parasitemia habitual
@
El poliparasitismo es
frecuente.
;*"+
3
@
ul.
Moderada
Moderada
Escasa a moderada
Jvenesw
>
+,Y
a medianos.
K +
$
mas o menos grueso
=
+
(
veces doble.
Jvenesw
>
+,Y
a medianos.
K +
=
+
*
doble.
Jvenes:
>
+,Y
+
Citoplasma regular y
$ Z B
Madurosw +
+
$
3
e irregulares con
+$
Y
Maduros:
+
3
$
:
granulaciones de
?==
3/
"+
Glbulo rojo
Aspectos generales
de la parasitacin de
eritrocitos
Cantidad en sangre
perifrica1
P.falciparum
Trofozoitos
P.vivax
Por lo general
abundante
Jvenesw
'
+,Y $
3!(
3
=
=(
+
= >
se observan formas
+=/
(
$
*
(+
3 (
+,(
Madurosw
solo en cuadros graves.
>$ $&3
rojos infectados con
=
pueden presentar
$" "
voluminosos
denominados
'
(
Los individuos adultos en especial suelen desarrollar inmunidad en las regiones endmicas y, en
consecuencia, se reduce la densidad de los parsitos
23
Criterios
Criterios
Granulaciones
P.vivax
#$0
(Terciana maligno)
no visibles.
Ocasionalmente
presentan granulaciones
de Maurer.
X
3
y distribuidas en
el citoplasma
del eritrocito.
?==
En estadios maduros
presentan 18 a 32
$
y compactos.
En estadios maduros
W
aglomerados
irregularmente.
$
"
visible
Esquizontes
#$&
(Terciana benigno)
? +,Y
+
negro pardusco.
#$
(Terciana benigno)
Presentes en todos
manchas pueden ser
"$
que en P.vivax
+
(P.ovale
en sangre perifrica.
#$
(Cuartana)
>
raramente se
+
$"
24
Jvenesw
)=/ +
:
maduros:
=
3
(
(
(
(
P.falciparum
Gametocitos
:
$
"
"
,
$
en el cual la cromatina
adquiere la forma
de bastoncillos en el
centro.
microgametocitos son
menos numerosos y
"+,Y ,
macrogametocitos.
P.vivax
: $
aparecen despus de 7
a 10 das.
Jvenesw
,Y
redondeados difciles
de distinguir de los
=
Jvenes:
6 *
redondeados
Cromatina bien
=
dispersas evidentes.
frecuencia lateral.
dispersas evidentes.
Estos aparecen
despus de pocas
semanas.
Madurosw$
redondeados o con
Maduros: redondeados bordes irregulares y
$
+
z
el hemate.
Cromatina bien
El macrogametocito
+,Y
+
excntrica.
El microgametocito
tiene una cromatina
dispuesta difusamente.
: $
aparecen pronto al
3er da.
Jvenes:
6
*
redondeada.
Maduros:
redondeados ovales
+
3
:
cromatina se presenta
como una mancha
redonda situada en uno
de los bordes
$
*:
gametocitos aparecen
entre los 4 y los 18
das.
A
Y
?==+
#$
#$
A
Y
*
3 z
?==+
Trofozoito
#$0
A
Y
&
10
11
12
A
Y
Puede observarse manchas de Maurer
&
10
11
12
&
Ezquizonte
Gametocito
25
!";!!
#$&
#$0
#$
#$
Ezquizonte
Gametocito
Trofozoito
26
Captulo N 2
Determinacin de la densidad parasitaria
:
3*
&
,
* * Plasmodium spp.+3
$&
3
3/
+
+
*
$
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3
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Interpretacin
#
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"
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#
+
"
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#
+
"
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'"+
"
+
27
2.2 Clculo del nmero de parsitos por microlitro de sangre en gota gruesa
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$
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" "
+
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J+
"
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" +
$
200
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"
$
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" J
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$=&
w
#15 x 6.000^+
" +
$
503
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+
=&R +
"
registrando su recuento hasta 500 y aplicar la frmula con la cantidad de leucocitos
encontrados.
)+ Jw?
_+
" &
28
#508 x 6.000Q^Q+
" +
$
50
k )
3=
R
)+ Ww?
+
" &
Captulo N 3
Descripcin del Microscopio ptico
29
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z
+ + +
=Z"+
B>
,
cual se acerca o se aleja el condensador de la platina del microscopio. En la parte inferior existe una
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+
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3
=
$
,*+
$
,+
al condensador.
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3
& )
, 3*
3,
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B
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&
*3
*
,
componentes de la estructura del aparato estn dispuestos adecuadamente.
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3
=
$
+
)
3
+
k K
=
$
+
3
+
,
+
aumento de contraste y la mejora de la profundidad de foco.
k >
3
++
+
3
3
3*
++
&+
3 3 +
,
+
una imagen.
k ?
"
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3 3
+
+
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3 Z
$
B
k ?
&
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3 3
" +
,
$
&+
&
+ &+
k {
3* W+
+
3*
&
3* +
"
mayor distancia entre la lente frontal y el objeto.
k {
+
$
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/ )
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k <*
,
& $
33
,z
$
?3
$
&+
3 +
,$
$
con la lente frontal del objetivo.
k K
3
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3 +
+
$
)3
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$
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$
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$
$
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3
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+
+
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$
k :
+
"
3" 3
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+&*
31
k ;
+
3*
32
Captulo N 4
Pruebas de Diagnstico Rpido de Malaria
:
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"+
+
$&
3/ +3
$"
Z4KAB +3
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&
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$
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w
B )
*
3
$
$& +
calidad.
B )
*
$&
iii) Regiones donde no se tiene personal capacitado en el diagnstico microscpico de la malaria.
k D
#<
+$
+
9
:
$
Z:#]B,+=
++
" P. falciparum del P.vivax
w
+3
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"
2
33
k :
#<
+
+*
+
3
+$
+
+
+! +
!$
cuatro especies del gnero Plasmodium spp. que parasitan al hombre. Constan de una banda que
se encuentra impregnada con anticuerpos anti-P. falciparumZ+ !
]<
B
3
&]<
+
)
#<
w
$'
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4KA>'<>#=@*
k :
+
+ $ 3
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&
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$
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k :
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"
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Limitaciones
k ; + 3=
=
k ; +
+
k ;
+
3
++
"
=&
k ; +
$
* &
=
&
tratamiento
34
Captulo N 5
Control de Calidad
Sistema de Gestin de Calidad del Diagnstico de Malaria ZSGCDM). Es un conjunto de
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Tcnica del Procesamiento de las Muestras Hemticas
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38
El frotis debe ocupar la otra mitad del porta objetos. Un buen frotis debe ser delgado y constar de 3
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39
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ANEXOS
40
FORM. 1
INSTRUCTIVO DEL FORMULARIO DE EVALUACIN EXTERNA DEL DESEMPEO
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2da Parte: Diagnstico Microscpico.
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Negativo.
Columna N 3:<$
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Pv si se trata de una infeccin por P. vivax,
Pf si es por P. falciparumMx si se trata de una infeccin por dos especies parasitarias y (-) en caso
de resultado negativo.
Columna N 4: Marcar con una X en las casillas correspondientes de acuerdo a los estadios
parasitarios que se
41
Columna N 5:>
#
@
$
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Columna N 6: Registrar el resultado de la lectura ZB cuando el resultado sea Positivo y (-) cuando el
resultado sea Negativo.
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$
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3 (1) cuando el resultado sea correcto y (0) cuando sea
incorrecto.
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Pv si se trata de una infeccin por P. vivax,
Pf si es por P. falciparumMx si la infeccin es por 2 especies y (-) en caso de resultado negativo.
Columna N 10: R
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$
42
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Verdadero Positivas: Muestras positivas reportadas en los registros
como positivas
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Falso Positivas: Muestras negativas reportadas en los registros como
positivas
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+
Falso Negativas: Muestras positivas reportadas en los registros como
negativas
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+
Verdadero Negativas: Muestras negativas reportadas en los registros
como negativas
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P.v.
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Neg.
LABORATORIO EVALUADOR(2)
Densidad
parasitaria
(p/ul)(3)
P.f.
P.v.
Mix.
LABORATORIO
EVALUADOR(4)
Neg.
Conc.
Desh.
Desf.
CALIDAD DE LA GOTA
GRUESA(5)
Ubic.
Ident.
Ubic.
Ext.
Fij.
CALIDAD DE
LA TINCIN
(7)
Densidad
parasitaria
(p/ul)(8)
OBSERVACIONES
43
FORM. 2
INSTRUCTIVO DEL FORMULARIO DE CONTROL DE CALIDAD INDIRECTO
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2da Parte. Resultados del Diagnstico Microscpico.
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Positivo de acuerdo a la
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Negativo.
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44
Es muy importante que el personal encargado de la evaluacin desconozca los
resultados de la lectura antes de concluir la revisin. Registrar las columnas 2 y 3
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resultados del laboratorio
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Columna N 4: Marcar con una X en la casilla que corresponda de acuerdo a la infeccin parasitaria
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Observaciones. En esta parte se debe anotar cualquier aspecto que usted considere relevante
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de la evaluacin.
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ANEXO EDITORIAL
PERSONAL TCNICO QUE PARTICIP EN LA VALIDACIN DEL DOCUMENTO
50
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Tec. Mara Maldonado Vila
Responsable de Laboratorio de Malaria
Departamento de Santa Cruz
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Responsable de Laboratorio de Malaria
Departamento de Pando
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Responsable de Laboratorio de Malaria
Departamento de Cochabamba
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Responsable de Laboratorio de Malaria
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Responsable de Laboratorio de Malaria
Gerencia de Salud Yacuiba Tarija
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Laboratorio INLASA
Agradecimientos:
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