A fase estacionria de uma coluna de troca inica H + constituda por uma
resina de estireno divinilbenzeno em forma de gel e relativamente rgida devido s ligaes cruzadas existentes. Esta coluna possui 8% de ligaes cruzadas sendo que, quanto menor o nmero destas, mais aberta ser a estrutura da resina e, portanto, mais permevel para substncias de maior massa molecular. Na verdade a coluna consiste basicamente de excluso inica e partio por fase reversa. A fora cida do eluente (H2SO4 0,05 M) pode ser ajustada para melhorar a resoluo do analito ou excluir interferentes. Desta forma, cidos orgnicos, em geral, podem ser eludos em ordem crescente de pKa. A resoluo da coluna tambm pode ser controlada usando-se temperatura (mximo de 65 C). A adio de modificadores orgnicos como acetonitrila, que reduzem as interaes hidrofbicas e mantm a solubilidade do analito orgnico tambm possvel. Isto ocorre porque um analito que no possui carga interage bastante com a parte interna da fase estacionria que apolar. Diminuindo-se a polaridade da fase mvel pela adio de uma substncia orgnica estes compostos eluem mais rapidamente da coluna, podendo-se inclusive utilizar gradiente de fase mvel. A separao no ocorre por mecanismo de troca inica uma vez que o pH da fase mvel (aproximadamente 1,3) aliado ao pH dos stios SO3 H+ (trocadores de ctions) da coluna produzem um pH de quase zero dentro da fase estacionria10, no permitindo, portanto, que o cido ascrbico esteja na forma ionizada. Interferentes que se ionizam neste pH so separados pelo mecanismo de excluso inica.