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METODOS DE BANDEO
CROMOSOMICO
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FACULTAD DE MEDICINA
CONTENIDO
I.
INTRODUCCIN............................................................................................. 3
II.
OBJETIVOS:................................................................................................... 4
III.
MARCO TRICO:........................................................................................ 5
1) EL BANDEO CROMOSMICO:.....................................................................5
2) El bandeo fluorescente multicolor y la tcnica de la hibridacin in situ
fluorescente (FISH):......................................................................................... 7
3) FISH EN METAFASE:.................................................................................... 9
Algunos sndromes de microdelecin diagnosticables mediante FISH..........9
4) ELECTROFORESIS EN GELES:...................................................................10
5) TECNICAS DE BLOTTING:.........................................................................11
6) SOUTHERN BLOTTING:............................................................................. 11
7) PCR (Reaccin en cadena de la polimerasa):...........................................13
IV.
CONCLUSIONES:...................................................................................... 19
V.
BIBLIOGRAFIA:............................................................................................. 20
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I.
INTRODUCCIN
Los cromosomas son las estructuras en que se organiza la cromatina nuclear y que tienen
una expresin dinmica en las distintas fases del ciclo celular. En la mitosis estas
estructuras comienzan un proceso de compactacin que alcanza su mximo nivel en la
metafase. Los cromosomas se tien fcilmente cuando estn condensados y pueden ser
individualizados con el microscopio ptico. Cada cromosoma contiene una molcula de
ADN lineal asociado a distintas protenas y el contenido de genes es variable aunque est
en relacin con su tamao. Por eso, cualquier alteracin en el nmero o la estructura de
los cromosomas puede ser causa de enfermedades. Para la deteccin de estas
alteraciones se desarrollaron numerosas tcnicas y todas ellas requieren de un
observador entrenado que las interprete. La citogentica es la rama de la biologa que se
encarga del estudio de los cromosomas y sus anomalas.
Los humanos tenemos un nmero total de 46 cromosomas y este nmero vara segn las
especies. Los 46 cromosomas estn constituidos por 23 pares de homlogos y cada
miembro del par proviene de un progenitor. El cariotipo es la constitucin cromosmica de
un individuo y es un estudio de rutina en gentica mdica. Los cariotipos se pueden
informar presentando todos los pares cromosmicos ordenados de acuerdo a su tamao,
que en un principio eran recortados de la fotografa de una metafase, y ahora se pueden
hacer con analizadores automticos. De los 23 pares, el par de cromosomas sexuales se
seala por separado para indicar el sexo del individuo. Para citar el cariotipo de un
individuo se indica primero el nmero total de cromosomas y seguidamente los
componentes del par sexual precedido de una coma. As, el cariotipo normal de un varn
se escribe 46, XY y el de una mujer 46, XX. Las anomalas cromosmicas son una causa
ms importante de abortos espontneos, retardo mental y malformaciones.
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II.
OBJETIVOS
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III.
MARCO TRICO
1) EL BANDEO CROMOSMICO:
Con la tcnica convencional de tincin con Giemsa los cromosomas se tien
intensamente y en forma homognea y se los puede contar y agrupar por su aspecto
general y eso era lo nico que se poda hacer en los primeros cariotipos. La
identificacin de cada cromosoma vino posteriormente con las tcnicas de bandeo.
Estas tcnicas que generan bandas transversales permiten definir a cada cromosoma
y estudiar su estructura. Cada cromosoma tiene del patrn de bandas caracterstico y
existen varias tcnicas de tincin con fines especficos (Tabla I). El bandeo G es el
ms utilizado en citogentica clnica.
El bandeo G se logra con un tratamiento controlado con tripsina antes de la coloracin
con Giemsa y produce bandas claras y oscuras en los cromosomas. Las bandas
oscuras contienen ADN rico en bases A-T que replica tardamente y son pobres en
genes constitutivos y las bandas claras contienen ADN rico en G-C que replica
tempranamente y tienen muchos genes constitutivos
Cuando un cromosoma est ms elongado puede mostrar un mayor nmero de
bandas y esto se aprovecha para estudiarlo con mayores detalles. Esta metodologa
que permite buscar alteraciones estructurales mnimas se conoce como bandeo de
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Bandeo R:
Bandeo Q:
Bandeo C:
con las G+
Tincin con Giemsa o fluorocromos (actinomicina D o
cromomicina) y tratamiento previo con calor o lcalis. Muestra las
regiones cromosmicas que contienen heterocromatina que son
las centromricas de todos los cromosomas y las secciones en
1q, 9q, 16q y distal de Yq.
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3) FISH EN METAFASE:
La FISH puede usarse sobre clulas en metafase para detectar microdeleciones
especficas ms all de la capacidad de resolucin de la citogentica de rutina, o para
identificar material extra de origen desconocido. Puede tambin ser de ayuda en
casos donde es difcil determinar mediante la citogentica de rutina si un cromosoma
tiene una delecin simple o si est implicado en una reorganizacin sutil o compleja.
Adems, la FISH de metafase puede detectar algunos de los reordenamientos
especficos que se observan en ciertos tipos de cncer.
El nmero de sndromes de microdelecin diagnosticados por FISH est aumentando
con rapidez. La sensibilidad de estos ensayos es en todos los casos mejor que la de
la citogentica de rutina, pero depende del sndrome en concreto. En algunos, la
sonda es especfica para el gen defectuoso, como en el sndrome de Williams, donde
el 96% de los pacientes con diagnstico confirmado poseen una delecin en el gen
de la elastina. En otros sndromes como el de Prader-Willi/Angelman, la etiologa es
heterognea y las microdeleciones slo existen en una parte de los casos (60%).
4) ELECTROFORESIS EN GELES:
La electroforesis en gel de agarosa es de las ms utilizadas para analizar y
caracterizar cidos nucleicos de distintas procedencias. Los geles se comportan
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5) TECNICAS DE BLOTTING:
La tcnica de transferencia (blotting) se basa en el mismo fundamento que la
autorradiografa, y permite identificar la presencia de una banda concreta en un gel
de electroforesis, bien sea de protenas o de cidos nucleicos:
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6) SOUTHERN BLOTTING:
El mtodo tipo Southern o Southern blot fue desarrollado por E. M. Southern para la
deteccin de genes especficos en el ADN celular. El ADN es digerido con una enzima
de restriccin y los fragmentos son separados por tamaos mediante una
electroforesis en un gel. Se realiza tincin con bromuro de etidio para comprobar la
calidad de la electroforesis y del ADN.
A continuacin los fragmentos de ADN de doble cadena son parcialmente
hidrolizados con un cido dbil y desnaturalizados con NaOH para permitir la
transferencia. Posteriormente, el ADN es transferido a un filtro de nitrocelulosa, con lo
que en el filtro queda representada una rplica de la disposicin de los fragmentos de
ADN presentes en el gel. A continuacin el filtro se incuba durante un tiempo con la
sonda marcada (radiactivamente o con un fluorocromo); durante la incubacin la
sonda se va hibridando a las molculas de ADN de cadena sencilla de secuencia
complementaria (o muy parecida).
La sonda unida al fragmento de ADN complementario se puede visualizar en el filtro
de una forma sencilla mediante una exposicin a una pelcula de rayos X para el caso
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de sondas radiactivas o con una pelcula sensible a la luz, para el caso de sondas
con fluorocromo.
Como ejemplo, esta tcnica se utiliza para analizar secuencias de ADNs forneos,
introducidos en el genoma vegetal. El mtodo consta bsicamente de las siguientes
etapas:
- El ADN vegetal es extrado de las clulas y digerido con una ms enzimas de
restriccin.
- Los productos de la digestin del ADN son separados de acuerdo a su tamao,
mediante electroforesis en geles de agarosa.
- El ADN, que ahora se encuentra en el gel, es desnaturalizado, y transferido a una
membrana de nitrocelulosa. Las posiciones relativas de los fragmentos de ADN en el
gel se mantienen cuando el ADN es transferido a la membrana.
- El ADN es fijado a la membrana mediante la exposicin a la luz ultravioleta, o por
medio de altas temperaturas (80C).
- El ADN ligado a la membrana es hibridado con una sonda de ADN ARN, que
posee homologa con la secuencia de inters. La posicin de los fragmentos
homlogos a la sonda puede ser detectada mediante autorradiografa o colorimetra,
dependiendo del tipo de sonda utilizada.
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Resultados de la PCR:
Los resultados de la PCR pueden tardar varias semanas desde que se recoja la
muestra para estudiarla. Para recogerlos hay que acudir a otra cita, ya que la
documentacin por s sola no puede ser interpretada por el paciente. En la
consulta el mdico podr realizar la interpretacin ms adecuada del resultado.
Si ests ingresado te los comunicarn durante tu estancia en el hospital, o
despus si te han dado el alta mdica antes.
La PCR se expresa en valores numricos, pero no hay unos lmites estndar
para todos los estudios. Cada objetivo tiene unos valores propios, de tal forma
que una PCR de citomegalovirus de 100 no tiene por qu tener el mismo valor
que una PCR de Chlamydia de 100.
Habitualmente el resultado de la PCR se puede resumir en positiva o negativa.
Es decir, se ha encontrado el ADN que esperbamos, o no. Eso es esencial para
poder identificar grmenes concretos y proporcionar un antibitico especfico, o
poder diagnosticar una enfermedad gentica y medir la cantidad de ADN
mutado.
Aunque es una prueba muy eficaz puede proporcionar falsos positivos. Hay que
tener en cuenta que el cebador puede adherirse al ADN que queremos
detectar, pero tambin se une por puro azar a otras cadenas de ADN que se
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encuentren cerca. Los falsos negativos son ms raros, ya que por poco ADN
que haya se suele detectar.
IV.
CONCLUSIONES
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V.
BIBLIOGRAFIA
Drets Mximo E.. Una saga citogentica: El descubrimiento de los mtodos de bandeo
cromosmico. Significado y proyeccin bio-mdica. Rev. Md. Urug. [revista en la
Internet]. 2002 Sep [citado 2016 Abr 17] ; 18(2): 107-121. Disponible en:
http://www.scielo.edu.uy/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S168803902002000200003&lng=es.
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Drets Mximo E.. Una saga citogentica: El descubrimiento de los mtodos de bandeo
cromosmico. Significado y proyeccin bio-mdica. Rev. Md. Urug. [revista en la
Internet]. 2002 Sep [citado 2016 Abr 17] ; 18(2): 107-121. Disponible en:
http://www.scielo.edu.uy/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S168803902002000200003&lng=es.
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