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UNIVERSIDAD PARTICULAR DE CHICLAYO

METODOS DE BANDEO
CROMOSOMICO

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FACULTAD DE MEDICINA

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CONTENIDO

I.

INTRODUCCIN............................................................................................. 3

II.

OBJETIVOS:................................................................................................... 4

III.

MARCO TRICO:........................................................................................ 5

1) EL BANDEO CROMOSMICO:.....................................................................5
2) El bandeo fluorescente multicolor y la tcnica de la hibridacin in situ
fluorescente (FISH):......................................................................................... 7
3) FISH EN METAFASE:.................................................................................... 9
Algunos sndromes de microdelecin diagnosticables mediante FISH..........9
4) ELECTROFORESIS EN GELES:...................................................................10
5) TECNICAS DE BLOTTING:.........................................................................11
6) SOUTHERN BLOTTING:............................................................................. 11
7) PCR (Reaccin en cadena de la polimerasa):...........................................13
IV.

CONCLUSIONES:...................................................................................... 19

V.

BIBLIOGRAFIA:............................................................................................. 20

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I.

INTRODUCCIN

Los cromosomas son las estructuras en que se organiza la cromatina nuclear y que tienen
una expresin dinmica en las distintas fases del ciclo celular. En la mitosis estas
estructuras comienzan un proceso de compactacin que alcanza su mximo nivel en la
metafase. Los cromosomas se tien fcilmente cuando estn condensados y pueden ser
individualizados con el microscopio ptico. Cada cromosoma contiene una molcula de
ADN lineal asociado a distintas protenas y el contenido de genes es variable aunque est
en relacin con su tamao. Por eso, cualquier alteracin en el nmero o la estructura de
los cromosomas puede ser causa de enfermedades. Para la deteccin de estas
alteraciones se desarrollaron numerosas tcnicas y todas ellas requieren de un
observador entrenado que las interprete. La citogentica es la rama de la biologa que se
encarga del estudio de los cromosomas y sus anomalas.
Los humanos tenemos un nmero total de 46 cromosomas y este nmero vara segn las
especies. Los 46 cromosomas estn constituidos por 23 pares de homlogos y cada
miembro del par proviene de un progenitor. El cariotipo es la constitucin cromosmica de
un individuo y es un estudio de rutina en gentica mdica. Los cariotipos se pueden
informar presentando todos los pares cromosmicos ordenados de acuerdo a su tamao,
que en un principio eran recortados de la fotografa de una metafase, y ahora se pueden
hacer con analizadores automticos. De los 23 pares, el par de cromosomas sexuales se
seala por separado para indicar el sexo del individuo. Para citar el cariotipo de un
individuo se indica primero el nmero total de cromosomas y seguidamente los
componentes del par sexual precedido de una coma. As, el cariotipo normal de un varn
se escribe 46, XY y el de una mujer 46, XX. Las anomalas cromosmicas son una causa
ms importante de abortos espontneos, retardo mental y malformaciones.

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II.

OBJETIVOS

Comprender cmo se describen los cromosomas y cmo se preparan e


interpretan los estudios citogenticos.
Comprender las anomalas cromosmicas humanas.
Familiarizarse con los fenotipos de las anomalas cromosmicas ms
frecuentes (en particular, el sndrome de Down y el de Turner).
Conocer los usos y las limitaciones de los estudios citogenticos para el
diagnstico de anomalas genticas.

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III.

MARCO TRICO

Tcnica utilizada para diferenciar pares cromosmicos individuales, generalmente


imposibles de distinguir morfolgicamente, y que consistente en usar tinciones
diferenciales a lo largo de cada cromosoma, de tal manera que se induce la aparicin
de zonas heterocromticas con una distribucin caracterstica en forma de bandas.
Segn la tcnica empleada se denominan bandas Q, bandas G, bandas C, bandas R
o bandas T.
En algunas especies los pares cromosmicos no pueden diferenciarse claramente
considerando slo sus componentes distintivos en sentido longitudinal; en estos casos
se debe recurrir a tcnicas citolgicas especiales para la tincin de los cromosomas,
que evidencian "bandas" transversales (oscuras y claras) a lo largo de los mismos, y
que corresponden a los distintos tipos de cromatina.

1) EL BANDEO CROMOSMICO:
Con la tcnica convencional de tincin con Giemsa los cromosomas se tien
intensamente y en forma homognea y se los puede contar y agrupar por su aspecto
general y eso era lo nico que se poda hacer en los primeros cariotipos. La
identificacin de cada cromosoma vino posteriormente con las tcnicas de bandeo.
Estas tcnicas que generan bandas transversales permiten definir a cada cromosoma
y estudiar su estructura. Cada cromosoma tiene del patrn de bandas caracterstico y
existen varias tcnicas de tincin con fines especficos (Tabla I). El bandeo G es el
ms utilizado en citogentica clnica.
El bandeo G se logra con un tratamiento controlado con tripsina antes de la coloracin
con Giemsa y produce bandas claras y oscuras en los cromosomas. Las bandas
oscuras contienen ADN rico en bases A-T que replica tardamente y son pobres en
genes constitutivos y las bandas claras contienen ADN rico en G-C que replica
tempranamente y tienen muchos genes constitutivos
Cuando un cromosoma est ms elongado puede mostrar un mayor nmero de
bandas y esto se aprovecha para estudiarlo con mayores detalles. Esta metodologa
que permite buscar alteraciones estructurales mnimas se conoce como bandeo de

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alta resolucin y se logra sincronizando el cultivo y con preparaciones hechas en


profase o prometafase, es decir, antes que los cromosomas alcancen su
compactacin mxima. Los cromosomas en la mitad de la metafase muestran un nivel
de resolucin de 400 bandas mientras que los de alta resolucin alcanzan niveles de
resolucin de 550 y hasta de 850 bandas.
Tabla I: Las tcnicas de bandeo ms usadas:
Bandeo G:

Tincin con Giemsa previo tratamiento controlado con tripsina que


degrada las protenas y produce bandas claras y oscuras. A las

Bandeo R:

oscuras se las llama G+


Tincin con Giemsa previo tratamiento con calor. El bandeo R es

Bandeo Q:

el reverso del bandeo G.


Tincin con mostaza de quinacrina o acridina. Se examina con
microscopio de luz fluorescente y se ven bandas brillantes en
distintas intensidades. Las bandas ms brillantes se corresponden

Bandeo C:

con las G+
Tincin con Giemsa o fluorocromos (actinomicina D o
cromomicina) y tratamiento previo con calor o lcalis. Muestra las
regiones cromosmicas que contienen heterocromatina que son
las centromricas de todos los cromosomas y las secciones en
1q, 9q, 16q y distal de Yq.

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2) El bandeo fluorescente multicolor y la tcnica de la


hibridacin in situ fluorescente (FISH):
La tcnica de la microscopa de fluorescencia se ha perfeccionado
considerablemente en los ltimos tiempos por lo que se est empleando ampliamente
en investigaciones biomdicas.
Estas nuevas posibilidades analticas son el resultado de la combinacin tecnolgica
de fluorocromos altamente eficientes, microscopa lser confocal (un sistema por el
cual los objetos microscpicos son explorados por sucesivos planos bidimensionales
mediante un lser, los cuales despus se recomponen en forma computacional
grfica tridimensional) y procesamiento digital de imgenes.
Este conjunto permite observar, al mismo tiempo, diferentes segmentos
cromosmicos en distintos colores. Los nuevos fluorocromos abarcan el espectro
visible desde el azul al rojo, suministrando un brillo de colores nunca logrado
anteriormente empleando filtros apropiados para visualizarlos.
Esto ha representado un avance sustancial para el estudio de las estructuras
cromosmicas ya que permite teir secuencias especficas del cromosoma, por lo

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que la tcnica se denomina "pintado cromosmico" (chromosome painting) lo que


facilita la deteccin de aberraciones cromosmicas, en particular translocaciones.
Hasta el presente se dispone comercialmente de kits para estudios mediante FISH de
clulas humanas y de ratn. Esta tcnica permite visualizar estructuras moleculares
pequeas, como los telmeros, empleando inmunolocalizacin fluorescente e
hibridacin in situ.

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3) FISH EN METAFASE:
La FISH puede usarse sobre clulas en metafase para detectar microdeleciones
especficas ms all de la capacidad de resolucin de la citogentica de rutina, o para
identificar material extra de origen desconocido. Puede tambin ser de ayuda en
casos donde es difcil determinar mediante la citogentica de rutina si un cromosoma
tiene una delecin simple o si est implicado en una reorganizacin sutil o compleja.
Adems, la FISH de metafase puede detectar algunos de los reordenamientos
especficos que se observan en ciertos tipos de cncer.
El nmero de sndromes de microdelecin diagnosticados por FISH est aumentando
con rapidez. La sensibilidad de estos ensayos es en todos los casos mejor que la de
la citogentica de rutina, pero depende del sndrome en concreto. En algunos, la
sonda es especfica para el gen defectuoso, como en el sndrome de Williams, donde
el 96% de los pacientes con diagnstico confirmado poseen una delecin en el gen
de la elastina. En otros sndromes como el de Prader-Willi/Angelman, la etiologa es
heterognea y las microdeleciones slo existen en una parte de los casos (60%).

Algunos sndromes de microdelecin diagnosticables mediante FISH

Sndrome del maullido (cri-du-chat)


Sndrome de Kallman
Sndrome de Miller-Dieker
Sndrome de Williams
Sndrome de Smith-Magenis
Sndrome de Wolf-Hirschhorn
Deficiencia de esteroide-sulfatasa
Sndrome de Prader-Willi/Angelman
Sndrome de DiGeorge, velocardiofacial (VCFS), CATCH 22 o de Shprintzen

4) ELECTROFORESIS EN GELES:
La electroforesis en gel de agarosa es de las ms utilizadas para analizar y
caracterizar cidos nucleicos de distintas procedencias. Los geles se comportan

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como un tamiz molecular y permiten separar molculas cargadas en funcin de su


tamao y forma. As, molculas de DNA de diferente tamao van a emigrar de forma
distinta en una electroforesis en gel de agarosa. Adems, si en dicha electroforesis se
aplican marcadores de peso molecular (fragmentos de DNA de tamao conocido) se
puede calcular el tamao aproximado del DNA en estudio. En esta prctica, se
pretende que el alumno comprenda el fundamento terico de esta tcnica y sus
aplicaciones, llevando a cabo la separacin electrofortica en gel de agarosa de DNA
plasmdico que el mismo alumno va a aislar y purificar a partir de un cultivo
bacteriano. Se han desarrollado un gran nmero de mtodos para la purificacin de
DNA plasmdico de bacterias y todos ellos implican invariablemente tres pasos:
crecimiento de la estirpe bacteriana portadora, recogida y lisis de las bacterias y
purificacin del DNA plasmdico. A continucin, el DNA aislado se puede analizar
mediante electroforesis en gel de agarosa.

5) TECNICAS DE BLOTTING:
La tcnica de transferencia (blotting) se basa en el mismo fundamento que la
autorradiografa, y permite identificar la presencia de una banda concreta en un gel
de electroforesis, bien sea de protenas o de cidos nucleicos:

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Si se trata de protenas, la tcnica se llama Western blot. Se utilizan


anticuerpos marcados con radioactividad para identificar cul es la banda que
presenta la protena que me interesa localizar.
Si se trata de DNA, la tcnica se llama Southern blot. Se utilizan sondas de
DNA (molculas de DNA marcadas con radioactividad y con una secuencia
conocida) para identificar qu bandas del gel contienen secuencias
complementarias a la de la sonda.
Si se trata de RNA, la tcnica se llama Northern blot. Se utilizan sondas de
RNA (molculas de RNA marcadas con radioactividad y con una secuencia
conocida) para identificar qu bandas del gel contienen secuencias
complementarias a la de la sonda.

6) SOUTHERN BLOTTING:
El mtodo tipo Southern o Southern blot fue desarrollado por E. M. Southern para la
deteccin de genes especficos en el ADN celular. El ADN es digerido con una enzima
de restriccin y los fragmentos son separados por tamaos mediante una
electroforesis en un gel. Se realiza tincin con bromuro de etidio para comprobar la
calidad de la electroforesis y del ADN.
A continuacin los fragmentos de ADN de doble cadena son parcialmente
hidrolizados con un cido dbil y desnaturalizados con NaOH para permitir la
transferencia. Posteriormente, el ADN es transferido a un filtro de nitrocelulosa, con lo
que en el filtro queda representada una rplica de la disposicin de los fragmentos de
ADN presentes en el gel. A continuacin el filtro se incuba durante un tiempo con la
sonda marcada (radiactivamente o con un fluorocromo); durante la incubacin la
sonda se va hibridando a las molculas de ADN de cadena sencilla de secuencia
complementaria (o muy parecida).
La sonda unida al fragmento de ADN complementario se puede visualizar en el filtro
de una forma sencilla mediante una exposicin a una pelcula de rayos X para el caso

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de sondas radiactivas o con una pelcula sensible a la luz, para el caso de sondas
con fluorocromo.
Como ejemplo, esta tcnica se utiliza para analizar secuencias de ADNs forneos,
introducidos en el genoma vegetal. El mtodo consta bsicamente de las siguientes
etapas:
- El ADN vegetal es extrado de las clulas y digerido con una ms enzimas de
restriccin.
- Los productos de la digestin del ADN son separados de acuerdo a su tamao,
mediante electroforesis en geles de agarosa.
- El ADN, que ahora se encuentra en el gel, es desnaturalizado, y transferido a una
membrana de nitrocelulosa. Las posiciones relativas de los fragmentos de ADN en el
gel se mantienen cuando el ADN es transferido a la membrana.
- El ADN es fijado a la membrana mediante la exposicin a la luz ultravioleta, o por
medio de altas temperaturas (80C).
- El ADN ligado a la membrana es hibridado con una sonda de ADN ARN, que
posee homologa con la secuencia de inters. La posicin de los fragmentos
homlogos a la sonda puede ser detectada mediante autorradiografa o colorimetra,
dependiendo del tipo de sonda utilizada.

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7) PCR (Reaccin en cadena de la polimerasa):


La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) es una tcnica de laboratorio
que permite amplificar pequeos fragmentos de ADN para identificar grmenes
microscpicos que causan enfermedades.
PCR son las siglas por las que se conoce a la reaccin en cadena de la
polimerasa (en ingls Polymerase Chain Reaction), una tcnica cientfica
avanzada que fue inventada por el bioqumico estadounidense Kary Mullis en
1985. Esta tcnica permite amplificar pequeas regiones especficas del ADN
en laboratorio. Es decir, consigue que un pequeo segmento de ADN que

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pasara desapercibido en un anlisis cualquiera se multiplique millones de


veces y as sea fcil de detectar.
Gracias a esta tcnica se han podido realizar estudios genticos en cualquier
campo de la ciencia. Por ejemplo, se utiliza diariamente para la identificacin
de cadveres o en el estudio de escenas del crimen para buscar rastros del
culpable. Tambin se emplea en la biologa, para identificar cadenas genticas
de plantas, animales o, sobre todo, microorganismos. En la medicina se rene
la experiencia de todos esos campos y se usa principalmente para identificar
grmenes agresores que se encuentran en nuestro organismo.
Cuando se desarroll la prueba de la PCR por primera vez se trataba de una
tcnica cara y algo engorrosa de realizar, pero pronto se generaliz su uso y se
empezaron a desarrollar equipos sencillos y muy baratos que se utilizan
todava hoy en muchos centros diagnsticos.
Adems, se han diseado PCR ms especficas que se pueden elegir segn sea
la muestra a estudio. Los diferentes tipos de PCR, adems de la bsica, son:
PCR anidada: consigue amplificar muestras mnimas de ADN a miles de
millones de fragmentos. Es capaz por lo tanto de detectar trazos
minsculos.
PCR in situ: permite la deteccin de ADN en el mismo lugar de la
muestra, sin tener que procesarla primero con tcnicas de laboratorio.
Se suele utilizar para biopsias o raspados de clulas.
PCR mltiple: con este tipo de PCR se consiguen detectar varios trazos
de ADN a la vez y con una sola muestra.
PCR con transcriptasa inversa: en este caso se utilizan cadenas de ARN
para detectar moldes de ADN. Se utiliza la enzima transcriptasa inversa,
la misma que utiliza el VIH entre otros virus.
PCR en tiempo real o PCR cuantitativa: se aade un componente
fluorescente que permite medir la luz. A ms luz, ms cantidad del ADN
detectado.

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Cundo se hace una PCR:


Se recomienda realizar una PCR en todas las situaciones en las que se quiera
detectar cadenas de ADN y amplificarlo, ya sea para realizar estudios sobre l
o para poder identificar su secuencia exacta. Como por ejemplo, en las
siguientes:
Diagnstico microbiolgico: el mtodo ms fiable para identificar un
germen es aislarlo en un cultivo microbiolgico, pero a veces no es posible
llevarlo a cabo, ya sea porque el mtodo de cultivo es difcil o porque sea
demasiado caro. En esos casos la PCR puede detectar material gentico del
microorganismo que sea necesario detectar. La toma de la muestra puede ser
de cualquier tipo:
Sangre.
Exudado farngeo.
Exudado vaginal.
Exudado rectal o heces.
Exudado uretral u orina.
Biopsia (cutnea, de mdula sea, heptica, etctera).
Esputo.
Deteccin de mutaciones genticas: las enfermedades genticas estn
causadas por una mutacin focal en una regin del ADN concreta. Estudiarlas
directamente es muy difcil, por eso se opta por multiplicar primero todo el
ADN de la muestra y hacer estudios con base ms amplia. As se confirma el
diagnstico de muchas enfermedades como la fibrosis qustica, el corea de
Huntington, la enfermedad de Rendu-Osler-Weber, etctera.
Estudios de medicina legal: su uso est muy extendido en este campo y
tiene multitud de aplicaciones. Las ms frecuentes son la identificacin de
cadveres, el estudio de pruebas de escenas del crimen, investigacin de
casos de abuso sexual, estudios de paternidad, etctera. Todas ellas se basan
en la amplificacin del ADN para estudiar su secuencia con facilidad.
Revisiones de VIH o hepatitis vricas: el VIH y los virus de la hepatitis C y B
se encuentran constantemente en la sangre de las personas infectadas. Se

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deben estudiar sus niveles peridicamente para conocer la gravedad de la


enfermedad y para ello se utiliza la deteccin de ADN con PCR.

Preparacin para una PCR:


Si te van a realizar un estudio con PCR estas son las cuestiones que debes
tener en cuenta para ir bien preparado a la prueba:
Duracin: la recogida de la muestra suele durar muy poco tiempo, lo mismo
que tarda en realizarse una analtica sangunea. Suele tardar segundos o
minutos. Los resultados tardan bastante ms, habitualmente varios das.
Ingreso: nunca requiere ingreso. La recogida de la muestra se realizar en el
momento. Tambin se puede dar el caso de que te realicen la prueba durante
un ingreso para identificar la causa de tu enfermedad, pero en este caso el
motivo del ingreso ser tu estado de salud.
Es necesario ir acompaado?: no, tan slo se recibe un pinchazo cuando la
muestra que se tiene que tomar sea sangre, y no suele ser muy doloroso.
Puedes acudir solo a la clnica, caminando o conduciendo, y volver del mismo
modo.
Medicamentos: no es necesario tomar ningn medicamento previo. Hay que
decirle al mdico todos los medicamentos que se estn tomando en ese
momento. Algunos medicamentes pueden dar falsos negativos de la prueba,
por ejemplo si tomas antibiticos y quieren detectar el germen que produce
infeccin.
Comida: puedes comer con normalidad, no hace falta ir en ayunas. Pero si la
muestra es sangunea es frecuente que aprovechen el pinchazo de la analtica
para medirte otros parmetros en sangre (azcar, colesterol, etctera), por lo
que lo mejor es que te informes o directamente te mantengas en ayunas si la
analtica es temprano.
Ropa: puedes vestir con ropa de calle normal.
Documentos: es recomendable llevar tu tarjeta sanitaria, aunque la mayor
parte de las veces es suficientes que lleves el volante con el que el mdico te
mand la prueba.

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Embarazo y lactancia: se puede realizar esta prueba con normalidad en


cualquiera de las dos situaciones. De hecho, es una prueba que suele
realizarse en los controles peridicos de embarazo establecidos.
Contraindicaciones: no existen contraindicaciones. Tan solo hay que valorar
si realmente merece la pena realizar la prueba, y si los resultados serviran de
algo.

Cmo se hace una PCR:


Cuando llegues a la consulta el mdico te har unas preguntas generales sobre
tu estado de salud: enfermedades importantes, factores de riesgo, estilo de
vida, sntomas de infeccin, etctera. El anlisis de la PCR lo pedir el mdico
cuando lo considere necesario y sea la mejor arma diagnstica para estudiar tu
enfermedad. Despus te realizar una exploracin fsica general, y valorar si
puedes recibir un tratamiento ambulante o prefiere que te quedes ingresado.
Despus de esta primera visita, te tomarn la muestra sobre la que se realizar
la PCR. Segn el lugar de recogida de la toma se recomiendan unas u otras
medidas. Por ejemplo, si es uretral no debes orinar las dos horas previas; si es
un esputo mejor que sea a primera hora de la maana; y si es de sangre mejor
que coincida con un pico de fiebre. Pero esos detalles te los har saber el
mdico antes de realizarte la prueba, as que no debes preocuparte. Si estn
estudiando alguna enfermedad gentica normalmente te realizarn una biopsia
cutnea.
Una vez que te hayan recogido la muestra a estudiar puedes llevar una vida
normal. Mientras esperas los resultados no debes estar nervioso y debes
mantener tu rutina. El estudio de la PCR se realiza en el laboratorio, y t no
sers consciente de ninguno de los pasos de la tcnica. Para que los conozcas,
los resumimos a continuacin:
1. Se extrae de la muestra recogida el ADN que contenga. Esto incluye clulas
de tu propio cuerpo, pero tambin material de cualquier germen que haya.
2. Se calienta la muestra hasta casi los 100C para que las dos cadenas de
ADN se separen.
3. Se aade a la muestra un cebador; esto es una secuencia de ADN
sintetizada en el propio laboratorio que se une a un ADN ya conocido. Por

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ejemplo, si queremos detectar citomegalovirus utilizaremos un cebador


especfico para l.
4. Se enfra la muestra para que el cebador se una al ADN que se estudia. Acto
seguido empieza a funcionar una enzima llamada DNA-polimerasa, que duplica
el ADN a estudio.
5. Se repiten todos los pasos previos; cada vez que termine un ciclo se
obtendr una duplicacin de las cadenas de ADN previas.
6. Con el ADN amplificado ya se pueden realizar estudios genticos de forma
fcil y rpida.
Complicaciones de la PCR
Las complicaciones de la PCR son prcticamente inexistentes. Es una prueba
segura que no entraa riesgos para las personas que se someten a ella. El
nico riesgo es aceptar resultados falsos como positivos o negativos, y tomar
medidas equivocadas al respecto. La toma de la muestra no suele entraar
riesgos, excepto las propias de las biopsias segn el rgano del que se tomen.

Resultados de la PCR:
Los resultados de la PCR pueden tardar varias semanas desde que se recoja la
muestra para estudiarla. Para recogerlos hay que acudir a otra cita, ya que la
documentacin por s sola no puede ser interpretada por el paciente. En la
consulta el mdico podr realizar la interpretacin ms adecuada del resultado.
Si ests ingresado te los comunicarn durante tu estancia en el hospital, o
despus si te han dado el alta mdica antes.
La PCR se expresa en valores numricos, pero no hay unos lmites estndar
para todos los estudios. Cada objetivo tiene unos valores propios, de tal forma
que una PCR de citomegalovirus de 100 no tiene por qu tener el mismo valor
que una PCR de Chlamydia de 100.
Habitualmente el resultado de la PCR se puede resumir en positiva o negativa.
Es decir, se ha encontrado el ADN que esperbamos, o no. Eso es esencial para
poder identificar grmenes concretos y proporcionar un antibitico especfico, o
poder diagnosticar una enfermedad gentica y medir la cantidad de ADN
mutado.
Aunque es una prueba muy eficaz puede proporcionar falsos positivos. Hay que
tener en cuenta que el cebador puede adherirse al ADN que queremos
detectar, pero tambin se une por puro azar a otras cadenas de ADN que se

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encuentren cerca. Los falsos negativos son ms raros, ya que por poco ADN
que haya se suele detectar.

IV.

CONCLUSIONES

Comprendimos cmo se describen los cromosomas y cmo se preparan


e interpretan los estudios citogenticos.
Comprendimos las anomalas cromosmicas humanas.

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Conocimos los usos y las limitaciones de los estudios citogenticos para


el diagnstico de anomalas genticas.

V.

BIBLIOGRAFIA

Drets Mximo E.. Una saga citogentica: El descubrimiento de los mtodos de bandeo
cromosmico. Significado y proyeccin bio-mdica. Rev. Md. Urug. [revista en la
Internet]. 2002 Sep [citado 2016 Abr 17] ; 18(2): 107-121. Disponible en:
http://www.scielo.edu.uy/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S168803902002000200003&lng=es.

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cromosmico. Significado y proyeccin bio-mdica. Rev. Md. Urug. [revista en la
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Rodrguez Martnez Ral, Suescn Otero Gina. Aplicaciones e inconvenientes de la


tcnica Hibridacin in situ Fluorescente (FISH) en la identificacin de microorganismos.
Salud, Barranquilla [Internet]. 2013 May [cited 2016 Apr 17] ; 29( 2 ): 327-340.
Available from: http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S012055522013000200017&lng=en.

Rodrguez Martnez Ral. Empleo de la tcnica hibridacin in situ fluorescente para


visualizar microorganismos. Rev. Univ. Ind. Santander. Salud [Internet]. 2011 Dec [cited
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