UREA

Biochemistry and Physiology

Catabolism of proteins and nucleic acids results in the formation of urea and ammonia, the socalled nonprotein nitrogenous compounds. As ammonia has no role in assessing
kidney function, it is discussed in Chapter 32.
Urea [CO(NH2)2, Mr 60 Da] is the major nitrogen containing metabolic product of protein
catabolism in humans, accounting for more than 75% of the non protein nitrogen eventually
excreted. The biosynthesis of urea from amino nitrogenderived ammonia is carried out
exclusively by hepatic enzymes of the urea cycle. During the process of protein catabolism,
amino acid nitrogen is converted to urea in the liver by the action of so-called urea cycle
enzymes
(Figure 25-4).
More than 90% of urea is excreted through the kidneys, with losses through the gastrointestinal
tract and skin accounting for most of the remaining minor fraction. Consequently, kidney disease
is associated with accumulation of urea in blood. An increase in serum urea concentration
characterizes the uremic (azotemic) state. Urea is neither actively reabsorbed nor secreted by the
tubules but is filtered freely by the glomeruli. In a normal kidney, 40 to 70% of the highly
diffusible urea moves passively out of the renal tubule and into the interstitium, ultimately to reenter plasma. The backdiffusion of urea is also dependent on urine flow rate, with less entering
the interstitium in high-flow states (e.g., pregnancy) and vice versa. Consequently, urea clearance
generally underestimates GFR. In end-stage renal disease, osmotic diuresis in the remaining
functional nephrons limits the back-diffusion of urea, so that urea clearance approaches inulin
clearance. Measurement of blood and serum urea has been used for many years as an indicator of
kidney function.
However, it is generally accepted that creatinine measurement provides better information in this
respect. Serum and urinary urea measurement may still provide useful clinical information in
particular circumstances, and the measurement of urea in dialysis fluids is widely used in
assessing the adequacy of renal replacement therapy (see Chapter 48).
Clinical Significance
Numerous extrarenal factors influence the circulating urea concentration, limiting its value as a
test of kidney function. For example, plasma urea concentration is increased by a high-protein
diet, increased protein catabolism, reabsorption of blood proteins after gastrointestinal
hemorrhage, treatment with cortisol or its synthetic analogs, dehydration, and decreased
perfusion of the kidneys (e.g., heart failure). In the prerenal situations already discussed, the
plasma creatinine concentration may be normal. In obstructive postrenal conditions (e.g.,
malignancy, nephrolithiasis, prostatism), both serum creatinine and urea concentrations will be
increased, although in these situations, the increase in serum urea is greater than in creatinine
because of increased back-diffusion.

These considerations give rise to the principal clinical utility of serum urea, which lies in its
measurement in conjunction with that of serum creatinine and subsequent calculation of the urea
nitrogen-to-creatinine ratio. This can be used as a crude discriminator between prerenal and
postrenal azotemia.
For a normal individual on a normal diet, the reference interval for the ratio is between 12 and 20
mg urea/mg creatinine (49 and 81 mol urea/mol creatinine). Significantly lower ratios usually
denote acute tubular necrosis, low protein intake, starvation, or severe liver disease (decreased
urea synthesis).
Increased serum urea with normal creatinine concentrations giving rise to high ratios may be
seen with any of the prerenal states described previously. High ratios associated with elevated
creatinine concentrations may denote postrenal obstruction or prerenal azotemia superimposed
on kidney
disease. Urea clearance is a poor indicator of GFR, as its production rate is dependent on several
nonrenal factors, including diet and the activity of the urea cycle enzymes. A high-protein diet
causes notable increases in urinary urea excretion. In addition, the variable amount of backdiffusion will influence both serum and urinary urea concentrations.147 Measurement of urinary
urea has little place in clinical diagnosis and management; however, it does provide a crude
index of overall nitrogen balance and may be used as a guide to replacement in patients receiving
parenteral nutrition. On an average protein diet, urinary excretion expressed as urea nitrogen is
12 to 20 g/d.
Although blood urea nitrogen (BUN) continues to be used for ordering the serum urea nitrogen
test, this terminology is incorrect and obsolete, because blood is rarely analyzed for urea. The
long-established habit of reporting and expressing results of a urea assay in units of urea nitrogen
appears to be strongly entrenched in the United States, although the SI system recommends the
use of urea, expressed in mmol/L.
Thus, it behooves students of clinical chemistry to have in mind the conversion factors for urea
to urea nitrogen. Because 60 g (1 g MW) of urea contains 28 g (2 g atomic weight) of nitrogen,
the factor is 0.467 for converting urea mass units to those of urea nitrogen, and 2.14 for
converting urea nitrogen mass units to those of urea. The factor for converting urea nitrogen in
mg/dL to urea in mmol/L is 0.357.
Analytical Methodology
Direct chemical and indirect enzymatic methods are the two principal approaches that have been
used to quantify urea in body fluids. Although once widely used, the chemical methodhas largely
been superseded by enzymatic approaches. For a more detailed description of direct urea
measurement, the reader is referred to Taylor and Vadgama.316
Enzymatic Methods
A vast majority of urea measurements in clinical laboratories are undertaken using enzymatic
methods based on preliminary hydrolysis of urea with urease (urea amidohydrolase; EC 3.5.1.5;

main source jack bean meal) to generate ammonium ion, which then is quantitated. This
approach has been used in equilibrium, rate, conductimetric, and dry chemistry systems.316
Spectrophotometric approaches to ammonium quantitation include the Berthelot reaction and the
enzymatic assay with glutamate dehydrogenase [l-glutamate : NAD(P) oxidoreductase
(deaminating); EC 1.4.1.3].276 This latter approach has been accepted as a reference method277
and adapted to a variety of analytical platforms.
For serum assays, the reaction system is usually formulated with urease, so that the addition of
sample containing urea starts the reaction. A decrease in absorbance resulting from the glutamate
dehydrogenase reaction is monitored at 340 nm. In another example of a coupled-enzyme assay
system for urea, ammonia produced from urea by ureasethen reacts with glutamate and
adenosine triphosphate in the presence of glutamine synthetase (EC 6.3.1.2). Adenosine
diphosphate produced in this second enzymatic reaction is then quantitated in third and fourth
steps using pyruvate kinase (EC 2.7.1.40) and pyruvate oxidase (EC 1.2.3.3), respectively, thus
generating peroxide. In the final step, peroxide reacts with phenol and 4-aminophenazone,
catalyzed
by peroxidase (EC 1.11.1.7), to yield a quinone-monoamine dye that can be quantitated
spectrophotometrically.174
Methods for the measurement of urea using dry chemistry systems using the urease approach and
a variety of detection methods have been described.252,297 It is also possible to measure urea
using a conductimetric method in which sample and a urease-containing reagent are incubated in
a conductivity cell with the rate of change of the conductivity being monitored as the urea is
converted to an ionic species. In a potentiometric approach, an ammonium ion-selective
electrode is employed and the urease is immobilized on a membrane.265 This principle has been
applied in the NOVA 12 (NOVA Biomedical, Waltham, Mass.),100 i-STAT (Abbott Point of
Core, Princeton, NJ),208 and AVL OMNI (Roche Diagnostics Ltd., Lewes, East Sussex, United
Kingdom) analytical systems. A similar approach has been used to enable real-time monitoring
of dialysis efficiency.92 Alternative enzymatic approaches to the measurement of urea have been
described. For example, Morishita and colleagues210 have described a system incorporating
leucine dehydrogenase (EC 1.4.1.9), in addition to urease, which eliminates interference from
endogenous ammonium.
The specificity of all of the methods is good, particularly for the urease-glutamate dehydrogenase
procedure; however, endogenous ammonia interference must be expected when the protocol
employs the sample to initiate the reaction. This may be relevant in aged samples, in some
urines, and in particular metabolic disorders. Typically, within-run CVs of less than 3.0% with
between-day values of less than 4.0% are achievable in the concentration interval of 14 to 20
mg/dL (5 to 7 mmol/L). Given the high intrinsic biological variation of serum urea, this is well
within desired standards of analytical performance.316

Other Methods
An improved IDMS method for serum urea measurement has been listed by JCTLM as a
reference method.150 As discussed previously, laboratory urea measurements using standard
enzymatic techniques are generally of an acceptable quality for most clinical purposes. New
approaches to urea measurement generally are targeted at novel clinical applications, including
point-of-care testing. For example, Eddy and Arnold72 have developed a near-infrared
spectroscopy technique
for measuring urea in hemodialysis fluids. This would facilitate noninvasive monitoring of
dialysis efficacy in real time. A novel enzymatic assay, using luminometric detection,
demonstrates sensitivity that would make the method suitable for in vivo monitoring studies
using microdialysis
techniques.213
Reference Intervals
The reference interval for serum urea nitrogen in healthy adults is 6 to 20 mg/dL (2.1 to 7.1
mmol/L expressed as urea). In adults older than 60 years of age, the reference interval is 8 to 23
mg/dL (2.9 to 8.2 mmol/L). Serum concentrations tend to be slightly lower in children and in
pregnancy and slightly higher in males than in females.

UREA
Biokimia dan Fisiologi
Katabolisme protein dan asam nukleat hasil dalam pembentukan urea dan amonia, yang disebut
nonprotein senyawa nitrogen. Amonia tidak memiliki peran dalam menilai fungsi ginjal, hal itu
dibahas dalam Bab 32.
Urea [CO (NH2) 2, Mr 60 Da] adalah produk metabolik utama katabolisme protein pada
manusia yang mengandung nitrogen, terhitung lebih dari 75% dari nitrogen nonprotein akhirnya
diekskresikan. Biosintesis urea dari amino amonia nitrogen yang diturunkan dilakukan secara
eksklusif oleh enzim hati dari siklus urea. Selama proses katabolisme protein, nitrogen asam
amino diubah menjadi urea di hati oleh aksi yang disebut enzim siklus urea
(Gambar 25-4).
Lebih dari 90% dari urea diekskresikan melalui ginjal, dengan kerugian melalui saluran
pencernaan dan kulit akuntansi untuk sebagian besar fraksi kecil yang tersisa. Akibatnya,
penyakit ginjal berhubungan dengan akumulasi urea dalam darah. Peningkatan konsentrasi
serum urea mencirikan uremik (azotemic) negara. Urea yang tidak aktif diserap atau dikeluarkan
oleh tubulus tapi disaring secara bebas oleh glomeruli. Dalam ginjal normal, 40 sampai 70% dari

urea yang sangat diffusible bergerak pasif keluar dari tubulus ginjal dan ke interstitium, akhirnya
untuk memasukkan kembali plasma. The backdiffusion urea juga tergantung pada laju aliran
urin, dengan kurang memasuki interstitium di negara-negara aliran tinggi (misalnya, kehamilan)
dan sebaliknya. Akibatnya, urea cukai umumnya meremehkan GFR. Pada penyakit ginjal
stadium akhir, diuresis osmotik dalam nefron fungsional yang tersisa membatasi back-difusi
urea, sehingga izin urea pendekatan inulin clearance. Pengukuran darah dan serum urea telah
digunakan selama bertahun-tahun sebagai indikator fungsi ginjal.
Namun, secara umum diterima bahwa pengukuran kreatinin memberikan informasi yang lebih
baik dalam hal ini. Serum dan pengukuran urea urin masih dapat memberikan informasi klinis
yang berguna dalam situasi tertentu, dan pengukuran urea dalam cairan dialisis secara luas
digunakan dalam menilai kecukupan terapi pengganti ginjal (lihat Bab 48).
Signifikansi klinis
Banyak faktor extrarenal mempengaruhi konsentrasi urea yang beredar, membatasi nilai sebagai
tes fungsi ginjal. Misalnya, konsentrasi plasma urea meningkat dengan diet protein tinggi,
peningkatan katabolisme protein, reabsorpsi protein darah setelah perdarahan gastrointestinal,
pengobatan dengan kortisol atau analog sintetis, dehidrasi, dan penurunan perfusi ginjal
(misalnya, gagal jantung). Dalam situasi prerenal sudah dibahas, konsentrasi kreatinin plasma
mungkin normal. Dalam kondisi postrenal obstruktif (misalnya, keganasan, nefrolitiasis,
prostatism), baik kreatinin serum dan konsentrasi urea akan meningkat, meskipun dalam situasi
ini, peningkatan urea serum lebih besar dari kreatinin karena peningkatan kembali-difusi.
Pertimbangan ini menimbulkan utilitas klinis utama serum urea, yang terletak di pengukurannya
bersamaan dengan itu kreatinin serum dan perhitungan berikutnya dari urea rasio nitrogen-tokreatinin. Hal ini dapat digunakan sebagai diskriminator mentah antara azotemia prerenal dan
postrenal.
Untuk individu normal pada diet normal, interval referensi untuk rasio adalah antara 12 dan 20
mg urea / kreatinin mg (49 dan 81 mol urea / mol kreatinin). Secara signifikan rasio yang lebih
rendah biasanya menunjukkan nekrosis akut tubular, asupan protein rendah, kelaparan, atau
penyakit hati yang parah (penurunan sintesis urea).
Peningkatan serum urea dengan konsentrasi kreatinin yang normal sehingga menimbulkan rasio
tinggi dapat dilihat dengan salah satu negara prerenal dijelaskan sebelumnya. rasio tinggi yang
terkait dengan konsentrasi kreatinin tinggi dapat menunjukkan obstruksi postrenal atau azotemia
prerenal ditumpangkan pada ginjal
penyakit. Urea clearance indikator miskin GFR, sebagai tingkat produksinya tergantung pada
beberapa faktor nonrenal, termasuk diet dan aktivitas enzim siklus urea. Diet protein tinggi
menyebabkan peningkatan penting dalam ekskresi urea urin. Selain itu, jumlah variabel backdifusi akan mempengaruhi baik serum dan urin urea concentrations.147 Pengukuran urea kemih
memiliki sedikit tempat di diagnosis klinis dan manajemen; Namun, itu tidak memberikan indeks
mentah keseimbangan nitrogen secara keseluruhan dan dapat digunakan sebagai panduan untuk

pengganti pada pasien yang menerima nutrisi parenteral. Pada diet protein rata-rata, ekskresi urin
dinyatakan sebagai nitrogen urea adalah 12 sampai 20 g / d.
Meskipun nitrogen urea darah (BUN) terus digunakan untuk memesan tes nitrogen serum urea,
terminologi ini tidak benar dan usang, karena darah jarang dianalisis untuk urea. Kebiasaan lama
mapan pelaporan dan mengekspresikan hasil dari uji urea dalam satuan nitrogen urea tampaknya
sangat mengakar kuat di Amerika Serikat, meskipun sistem SI merekomendasikan penggunaan
urea, dinyatakan dalam mmol / L.
Dengan demikian, adalah penting bagi mahasiswa kimia klinis untuk memiliki dalam pikiran
faktor konversi untuk urea nitrogen urea. Karena 60 g (1 g MW) dari urea mengandung 28 g (2 g
berat atom) dari nitrogen, faktornya adalah 0,467 untuk mengkonversi satuan massa urea kepada
mereka nitrogen urea, dan 2.14 untuk mengkonversi satuan massa nitrogen urea kepada mereka
urea. Faktor untuk mengkonversi nitrogen urea dalam mg / dL untuk urea di mmol / L adalah
0,357.
Metodologi analisis
kimia langsung dan metode enzimatik langsung adalah dua pendekatan utama yang telah
digunakan untuk mengukur urea dalam cairan tubuh. Meskipun sekali banyak digunakan, yang
methodhas kimia sebagian besar telah digantikan oleh pendekatan enzimatik. Untuk penjelasan
lebih rinci tentang pengukuran urea langsung, pembaca disebut Taylor dan Vadgama.316
Metode enzimatik
Sebagian besar pengukuran urea di laboratorium klinis yang dilakukan menggunakan metode
enzimatik berdasarkan hidrolisis awal dari urea dengan urease (urea amidohydrolase; EC 3.5.1.5;
utama sumber jack makan kacang) untuk menghasilkan ion amonium, yang kemudian kuantitatif
menilai. Pendekatan ini telah digunakan dalam kesetimbangan, laju, conductimetric, dan kering
kimia systems.316
Spektrofotometri pendekatan untuk amonium kuantisasi termasuk reaksi Berthelot dan uji
enzimatik dengan glutamat dehidrogenase [l-glutamat: NAD (P) oksidoreduktase (deaminating);
EC 1.4.1.3] 0,276 Pendekatan terakhir ini telah diterima sebagai method277 referensi dan
disesuaikan dengan berbagai platform analitis.
Untuk tes serum, sistem reaksi biasanya dirumuskan dengan urease, sehingga penambahan
sampel yang mengandung urea dimulai reaksi. Penurunan absorbansi yang dihasilkan dari reaksi
glutamat dehidrogenase dipantau pada 340 nm. Dalam contoh lain dari sistem assay ditambahenzim untuk urea, amonia yang dihasilkan dari urea oleh ureasethen bereaksi dengan glutamat
dan adenosine triphosphate di hadapan glutamin sintetase (EC 6.3.1.2). adenosin difosfat
dihasilkan dalam reaksi enzimatik kedua ini kemudian kuantitatif menilai dalam langkah ketiga
dan keempat menggunakan piruvat kinase (EC 2.7.1.40) dan piruvat oksidase (EC 1.2.3.3),
masing-masing, sehingga menghasilkan peroksida. Pada tahap akhir, peroksida bereaksi dengan
fenol dan 4-aminophenazone, dikatalisasi

oleh peroksidase (EC 1.11.1.7), untuk menghasilkan pewarna kuinon-monoamine yang dapat
kuantitatif menilai spectrophotometrically.174
Metode untuk pengukuran urea menggunakan sistem kimia kering menggunakan pendekatan
urease dan berbagai metode deteksi telah described.252,297 Hal ini juga memungkinkan untuk
mengukur urea menggunakan metode conductimetric di mana sampel dan reagen urease yang
mengandung diinkubasi di konduktivitas suatu sel dengan laju perubahan konduktivitas yang
dipantau sebagai urea tersebut dikonversi ke spesies ionik. Dalam pendekatan potensiometri,
amonium ion-selektif elektroda digunakan dan urease yang bergerak pada membrane.265 Prinsip
ini telah diterapkan di NOVA 12 (NOVA Biomedis, Waltham, Mass.), 100 i-STAT (Abbott Point
of inti, Princeton, NJ), 208 dan AVL OMNI (Roche Diagnostics Ltd, Lewes, East Sussex, Inggris
Raya) sistem analitis. Pendekatan serupa telah digunakan untuk mengaktifkan real-time
monitoring dialisis efficiency.92 pendekatan enzimatik Alternatif untuk pengukuran urea telah
dijelaskan. Misalnya, Morishita dan colleagues210 telah dijelaskan sistem menggabungkan
leusin dehidrogenase (EC 1.4.1.9), selain urease, yang menghilangkan gangguan dari amonium
endogen.
Kekhasan semua metode yang baik, terutama untuk prosedur dehidrogenase urease-glutamat;
Namun, gangguan amonia endogen harus diharapkan ketika protokol mempekerjakan sampel
untuk memulai reaksi. Ini mungkin relevan dalam sampel berusia, di beberapa urines, dan
gangguan metabolisme tertentu. Biasanya, dalam menjalankan CV kurang dari 3,0% dengan nilai
antara-hari kurang dari 4.0% dapat dicapai dalam interval konsentrasi 14 sampai 20 mg / dL (5-7
mmol / L). Mengingat variasi biologis intrinsik tinggi urea serum, ini adalah baik dalam standar
yang diinginkan performance.316 analitis

Metode lainnya
Sebuah meningkatkan metode IDMS untuk pengukuran urea serum telah terdaftar oleh JCTLM
sebagai method.150 referensi Seperti telah dibahas sebelumnya, urea laboratorium pengukuran
menggunakan teknik enzimatik standar umumnya dari kualitas yang dapat diterima untuk tujuan
klinis yang paling. pendekatan baru untuk pengukuran urea umumnya ditargetkan pada aplikasi
klinis baru, termasuk point-of-perawatan pengujian. Misalnya, Eddy dan Arnold72 telah
mengembangkan teknik spektroskopi inframerah-dekat
untuk mengukur urea dalam cairan hemodialisis. Hal ini akan memudahkan pemantauan
noninvasif efikasi dialisis secara real time. Sebuah uji Novel enzimatik, menggunakan deteksi
luminometric, menunjukkan sensitivitas yang akan membuat metode yang cocok untuk studi
monitoring vivo menggunakan microdialysis
techniques.213
Interval referensi

Interval referensi untuk nitrogen serum urea pada orang dewasa yang sehat adalah 6 sampai 20
mg / dL (2,1-7,1 mmol / L dinyatakan sebagai urea). Pada orang dewasa yang lebih tua dari 60
tahun, interval referensi adalah 8-23 mg / dL (2,9-8,2 mmol / L). konsentrasi serum cenderung
sedikit lebih rendah pada anak-anak dan kehamilan dan sedikit lebih tinggi pada laki-laki
daripada perempuan.