Analiza hidroclorotiazidei din

comprimate

Angelescu Oana gr.1

Blic Ana Maria gr.2
Bechir Emel gr.2

Cuprins

I.Comprimate3
II.Hidroclorotiazid.6
III,Comprimate cu hidroclorotiazid.11
IV. Analiza cantitativ a hidroclorotiazidei i determinarea sa ntr-un preparat farmaceutic prin
HPLC.............................................................................................................................................14
V.Rezultate i discuii....23
Bibliografie24
Anex I

I.Comprimate

Definiie
Comprimatele sunt forme farmaceutice care conin o singur doz avnd n compozie una
sau mai multe subtane active, obinute prin comprimarea uniform a unui volum de particule.
Comprimatele sunt destinate administrrii orale. Unele dintre ele sunt nghiite ntregi,
altele dupa ce au fost mestecate, unele sunt dizolvate i dispersate n ap, nainte de a fi
administrate i altele sunt meninute n gura unde substana activ este eliberat.
Particulele conin una sau mai multe substane active cu sau fr excipieni precum
diluani, agregani, ageni de dizolvare, lubrefiani, substane capabile s modifice
comportamentul preparatului n tractul digestiv, colorani autorizai de autoriti competente, i
substane aromatizante.
Comprimatele sunt de obicei drepte, cilindrice, circulare, solide, ale cror suprafee sunt
plate sau convexe, cu marginile rotunjite. Ele pot avea linii sau marcaje de rupere i pot prezenta
simboluri sau alte marcaje. Comprimatele pot fi acoperite.
Componentele comprimatelor trebuie s coincid cu cerinele prevzute n Materiale
folosite pentru fabricarea componentelor (sectiunile 3.1. si 3.2.).
Dintre categoriile de comprimate pentru administrare oral menionm :
-comprimate acoperite ;
-comprimate neacoperite ;
-comprimate efervescente ;
-comprimate solubile ;
-comprimate dispersabile ;
-comprimate orodispersabile ;
-comprimate gastrorezistente ;
-comprimate cu cedare modificat

Producerea
Comprimatele sunt de obicei preparate prin comprimarea unui volum uniform de particule,
prepararea fcndu-se prin metode de granulare.
n fabricarea comprimatelor sunt luate msuri care s asigure rezistena mecanic pentru a
evita sfrmarea sau ruperea n timpul manipulrii sau a proceselor.
Acestea pot fi demonstrate prin examinarea Friabilitatea comprimatelor neacoperite si
Rezistenta la sfrmare. Comprimatele masticabile sunt preparate astfel nct s fie uor de
mestecat.
Pentru comprimatele care este necesar divizarea, este nevoie de autoritate competena care
s supun parile subdivizate componente, testului A pentru uniformitatea coninutului a
preparatului unidoz sau uniformitatea masei a preparatului unidoz.
n fabricarea, ambalarea, depozitarea i distribuia comprimatelor sunt luate msuri care s
asigure calitatea microbiologic (recomandrile n acest aspect sunt prevzute n calitatea
microbiologic a preparatelor farmaceutice).
Teste
Uniformitatea coninutului
Este necesar ca comprimatele cu masa de substana activ mai mic de 2 mg sau 2% din
masa total s ndeplineasc testul A pentru uniformitatea coninutului a preparatelor unidoz.
Dac preparatul are un coninut mai mare de substan activ, cerinele se aplic doar
pentru substanele care corespund condiiilor de mai sus.
Este necesar ca comprimatele acoperite cu altceva dect film de acoperire, s ndeplineasca
testul A pentru uniformitatea coninutului pentru preparatele unidoz i respectiv pentru
coninutul de substanta activ.
Uniformitatea masei.
Este necesar ca comprimatele neacoperite i filmate s fie compatibile cu testul pentru
uniformitatea masei al preparatelor unidoz.
Dac testul de uniformitate a coninutului este necesar pentru toate substanele active, testul
de uniformitate a masei nu este cerut.
4

Dizolvarea Dizolvarea este un test potrivit pentru a demonstra eliberarea substanei active,
de exemplu unul din teste descrie testul de dizolvare pentru formele farmaceutice solide divizate.
Comprimatele neacoperite
Definiie
Comprimatele neacoperite includ comprimatele unistratificate dintr-o singur comprimare a
particulelor i comprimatele multistratificate care constau n straturi concentrice sau paralele
obinute prin comprimarea succesiv a particulelor de diferite compoziii.
Excipienii folosii nu sunt special destinai s modifice eliberarea substanei active n
fluidele digestive.
Comprimatele neacoperite coincid definiiei generale a comprimatelor.
O portiune rupta, cand este examinata la microscop, arata uniformitatea texturii
(comprimate unistratificate) sau textura stratificata (comprimate multistratificate), dar nu si
semne de acoperire.
Teste
Dezintegrare .Comprimatele neacoperite trebuie sa fie compatibile cu testul de dezintegrare
al comprimatelor si capsulelor. Folosim apa R ca lichid.
Adaugam un disc in fiecare tub. Lasam aparatul sa lucreze 15 minute, necesar examinarii
starii tabletelor.Daca comprimatele nu sunt compatibile datorita aderarii de disc, repetam testul
pe inca 6 comprimate omitand discurile.Comprimatele sunt compatibile cu testul daca toate 6 sau dezintegrat.Comprimatele masticabile nu trebuie sa fie compatibile cu testul.

II.Hidroclorotiazida

H8ClN3 O3 S2

Mr = 297,7

DEFINITIE
Hidroclorotiazida contine nu mai putin de 98 % si nu mai mult de echivalentul a 102 %
6-clor-3,4dihidro-2H-1,2,4-benzotiadiazin-7-sulfonamida 1,1-dioxid, calcul raportat la substanta
anhidra.
CARACTERISTICI
Pudra cristalina alba sau aproape alba, foarte putin solubila in apa, solubila in acetone,
putin solubila in alcool. Se dizolva in solutii diluate de hidroxid alcalin.
IDENTIFICARE
Prima identificare: B
A doua indentificare: A, C, D.
A. Se dizolva 50 mg in 10 ml solutie de hidroxid de sodiu 0,1 M si se dilueaza la 100 ml
cu apa. Se dilueaza 2 ml din aceasta solutie la 100 ml cu hidroxid de sodiu 0,01 M. Daca se
examineaza intre 250 nm si 350 nm, solutia prezinta absorbtie maxima la 273 nm si la 323 nm.
Rata de absorbtie maxima masurata de la 273 nm pana la 323 nm este de 5 A pana la 5,7 A.
B. Prin examinare spectrofotometrica a absorbtiei in infrarosu comparata cu spectrul
obtinut pentru hidroclorotiazida CRS.
C. Examinare prin cromatografie in strat subtire, folosind ca faza stationara silicagel cu
un indicator fluorescent avand intensitatea optima la 254 nm.
Testul solutiei. Se dizolva 50 mg in acetona R si se dilueaza la 10 ml cu acelasi solvent.

Solutia de referinta (a). Se dizolva 50 mg hidroclorotiazida CRS in acetone R si se dilueaza la

10 ml cu acelasi solvent.
Solutia de referinta (b). Se dizolva 25 mg clorotiazida R in solutia de referinta (a) si se dilueaza
la 5 ml cu aceeasi solutie de referinta.
Se aplica separat pe placa cromatografica 2 microL din fiecare solutie. Developarea se face
folosind ca solvent acetat de etil in strat de 1 cm. Se usuca placa cromatografica in current de aer
si se examineaza in lumina ultraviolet la 254 nm. Spotul principal din cromatograma obtinut cu
solutia testata este similar ca pozitie si marime cu spotul principal din cromatograma obtinut cu
solutia de referinta. Testul este invalid daca cromatograma obtinuta cu solutia de referinta (b) nu
arata doua spoturi clare, separate.
D. Se incalzeste usor 1 mg substanta cu 2 ml solutie proaspat preparata de acid
cromotropic 0,5 g/L si sare de sodiu R intr-un amestec racit de 35 volume de apa R si 65 volume
de acid sulfuric R. Se developeaza o culoare violet.
TEST
Aciditate sau alcalinitate: Se agita 0,5 g substanta de examinat pudra cu 25 ml apa R
pentru 2 minute si se filtreaza. La 10 ml din filtrate se adauga 0,2 ml hidroxid de sodiu 0,01 M si
0,15 ml solutie de rosu de metil R. Solutia se coloreaza in galben. Nu mai mult de 0,4 ml de acid
clorhidric 0,01 M este necesar pentru a schimba culoarea indicatorului in rosu.
Substante asemanatoare: Examinare prin cromatografie lichida.
Solutie solvent: Se dilueaza 50 ml dintr-un amestec de acetonitril R si metanol R in volume egale
la 200 ml cu solutie de tampon fosfat pH 3,2 R1.
Test solutie: Se dizolva 30 mg substanta de analizat in 5 ml amestec acetonitril R si metanol R in
volume egale, folosind sonicare daca este necesar, si se dilueaza la 20 ml cu solutie de tampon
fosfat pH 3,2 R1.
Solutia de referinta (a): Se dizolva 15 mg hidroclorotiazida CRS in 25 ml de amestec in volume
egale de acetonitril R si metanol R, folosing sonicare daca este necesar, si se dilueaza la 100 ml
cu solutie de tampon fosfat pH 3,2 R1. Se dilueaza 5 ml la 100 ml cu solutia solvent.
Solutia de referinta (b): Se dilueaza 1 ml din solutia de testat la 50 ml cu solutia solvent. Se
dilueaza 5 ml din aceasta solutie la 20 ml cu solutia solvent.
Procedura cromatografica se poate desfasura folosind:

-o coloana din otel inoxidabil de 0,1 m lungime si 4,6 mm in diametru care contine octadecilsilil
silica gel pentru cromatografie R (3 m),
-faza mobila cu o rata de curgere de 0,8 ml/min:
Faza mobila A: La 940 ml solutie de tampon fosfat pH 3,2 R1 se adauga 60 ml metanol R si 10
ml tetrahidrofuran R si se amesteca.
Faza mobile B: La un amestec de 500 ml metanol R si 500 ml solutie de tampon fosfat pH 3,2
R1 se adauga 50 ml tetrahidrofuran R si se amesteca.
Timp(min)
0 - 17
17 - 30
30 35
35 50
50 = 0

Faza mobila A

Faza mobila B

Comentarii

(V/V % )
100 55
55
55 100
100
100

(V/V % )
0 45
45
45 0
0
0

gradient linear
izocratic
gradient linear
izocratic
Intoarcere

la

compozitia eluentului
initial
- ca si detector un spectrofotometru setat la 224 nm.
Se echilibreaza coloana pentru cel putin 20 de minute cu faza mobila A. Se ajusteaza
sensibilitatea sistemului astfel incat inaltimea punctului principal de pe cromatograma obtinut cu
10 L din solutia de referinta (b) sa fie macar 50 %din intreaga scara inregistrata.
Se injecteaza 10 L din solutia de referinta (a). Cand cromatogramul inregistreaza conditiile
prescrise, timpul de retentie este: pentru clorotiazida aproximativ 7 minute iar pentru
hidroclorotiazida aproximativ 8 minute. Testul nu este valid daca rezolutia dintre inaltimile care
corespund clorotiazidei si hidrocorotiazidei nu este macar 2,5. Daca este necesar se ajusteaza
incet compozitia fazei mobile sau timpul pentru gradientul linear.
Se injecteaza separat 10 L solutie de solvent martor, 10 L din solutia testata si 10 L din
solutia de referinta (b). In cromatograma obtinuta cu solutia de testat: suprafata fiecarui varf,
exceptand varful principal, nu este mai mare decat suprafata varfului principal din cromatograma
obtinuta cu solutia de referinta (b) (0,5 %); suma suprafetelor tuturor varfurilor, exceptand
varfurile principale , nu este mai mare decat de doua ori suprafata varfului principal din
cromatograma obtinuta cu substanta de referinta (b) (1 %). Se exclude fiecare varf datorat

solutiei solvent si orice varf cu o suprafata mai mica de 0,1 ori decat suprafata varfului principal
din cromatograma obtinuta cu solutia de referinta (b).
Clor: Se dizolva 1 g in 25 ml acetona R si se dilueaza la 30 ml cu apa R. 15 ml corespunde cu
limita testului pentru clor (100 ppm). Se prepara solutia standard folosind 5 ml acetona R care
contine 15% V/V apa R si 10 ml solutie standard de clor (5 ppm Cl) R.
Pierderi la uscare. Nu mai mult de 0,5 %, determinat pe 1000g prin uscare la etuva la 100-105
0

C.

Sulfura de carbune. Nu mai mult de 0,1 %, determinat pe 1g.

DOZARE
Se dizolva 0,120 g in 50 ml dimetil sulfoxid R. Se titreaza cu hidroxid de tetrabutilamoniu 0,1M
in 2-propanol, determinand finalul reactiei potentiometric la al doilea punct de echivalenta. Se
face o titrare martor. 1 ml hidroxid de tetrabutilamoniu 0,1 M in 2-propanol este echivalent cu
14,88 C7H8CIN3O4S2
IMPURITATI
A. clorotiazida,

B. 4-amino-6-clorobenzen-1,3-disulfonamida (salamida),

C. 6-cloro-N-[(6-cloro-7-sulfamoil-2,3-dihidro-4H-1,2,4-benzotiadiazin-4-il 1,1-dioxid)metil]3,4-dihidro-2H-1, 2,4-benzotiadiazina-7-sulfonamida 1,1-dioxid.

III.Comprimatele de Hidroclorotiazid

Aciuni i ntrebuinri
Tiazid diuretic.
DEFINIIE
10

Comprimatele de hidroclorotiazid conin Hidroclorotiazid.

Tabletele sunt n conformitate cu cerinele prevzute la Tablete i cu urmtoarele cerine.
Coninutul hidroclorotiazidei ,C7H8CIN3O4S2
92,5 la 107,5 % din cantitatea indicat.
IDENTIFICARE
Aplicarea metodei de cromatografie n strat subire , Anexa III A , folosind silicagel
GF254 ca substan de acoperire i acetat de etil ca faz mobil . Se aplic separat pe plac 5 l a
fiecrei dintre urmtoarele soluii. Pentru soluia (1) se tritureaz o cantitate de comprimate sub
form de pulbere coninnd 10 mg de hidroclorotiazid cu 10 ml de aceton i se filtreaz.
Soluia (2) conine 0.1 % g / v hidroclorotiazid EPCRS n aceton . Dup ndeprtarea plcii ,se
usuc ntr- un curent de aer , se examineaz la lumin ultraviolet i apoi se trateaz placa
conform metodei i se examineaz din nou. Prin fiecare metod de vizualizare spotul principal
din cromatograma obinut cu soluia (1) corespunde

la culoare i intensitate cu cea din

cromatograma obinut cu soluia ( 2 ).

TESTE
Substane nrudite
Se efectueaz metoda cromatografiei lichide , Anexa III D , folosind urmtoarele
soluii . Pentru soluia (1) se agit o cantitate de comprimate sub form de pulbere con innd 50
mg hidroclorotiazid cu 25 ml dintr-un amestec de volume egale de acetonitril i metanol i se
dilueaz pn la 100 ml cu soluie tampon fosfat pH 3.2 R1. Se filtreaz printr-un filtru cu fibr
de sticl ( Whatman 0,45 GD / X este potrivit ). Pentru solu ia (2) se dilueaz 1 volum din
soluia (1) la 100 volume cu un amestec coninnd 1 volum de metanol , 1 volum de acetonitril i
2 volume de soluie tampon fosfat pH 3.2 R1. Pentru soluia ( 3 ) se dizolv , cu ajutorul
ultrasunetelor , 15 mg fiecare de hidroclorotiazid EPCRS i clorotiazid EPCRS n 25 ml
amestec de volume egale de acetonitril i metanol i se dilueaz pn la 100 ml cu soluie
tampon fosfat pH 3.2 R1. Se dilueaz 5 volume din aceast soluie cu 100 volume din acela i
amestec de solveni.
Procedura cromatografic poate fi realizat utiliznd ( a) o coloan de oel inoxidabil
( 10 cm x 4.6 mm ) umplut cu octadecilsilil silicagel pentru cromatografie ( 3m) ( Phenosphere
11

ODS 3 sau Microsorb ODS 3 este adecvat ) , (b) ca faz mobil cu un debit de 0,8 ml pe
minut proporiile de schimbare ale fazei mobile i a fazei mobile B este descris mai jos i (c)
o lungime de und de detecie de 224 nm.
Faza mobil A. Un amestec de 10 volume de tetrahidrofuran , 60 volume de metanol i 940
volume de soluie tampon fosfat pH 3.2 R1.
Faza mobil B Un amestec de 50 volume de tetrahidrofuran , 500 volume de metanol i 500
volume de soluie tampon fosfat pH 3.2 R1.
Se echilibreaz coloana timp de cel puin 20 de minute cu faz mobil A. Se injecteaz 20 l .La
un gradient de eluie linear , folosind urmtorul program de gradient .
Timp (min)

Faza mobil A

Faza mobil B Comentarii

0-17

(la sut V/V)

1005

(la sut V/V)

045

Gradient liniar

17-30
30-35

5
55
5510

45
450

Izocratic
Gradient liniar

35-50
50=0

0
100
100

0
0

Izocratic
Revenire

la

compoziia iniiala
de eluent

Testul nu este valabil dect n cromatograma obinut cu soluia (3) , factorul de rezoluie ntre
vrfurile corespunztoare clorotiazid i hidroclorotiazid este cel puin 2.5. Dac este necesar ,
reglai compoziia fazei mobile sau a programului de timp al gradientului liniar.
n cromatograma obinut cu soluia ( 1 ) aria oricrei vrf secundar nu este mai mare
dect aria vrfului principal din cromatograma obinut cu soluia ( 2 ) ( 1 % ) , iar suma
suprafeelor din oricare din vrfurile secundare nu este mai mare de 2,5 ori aria vrfului principal
din cromatograma obinut cu soluie ( 2 ) ( 2,5 % ). Nu se ia n considerare vrfurile cu o
suprafa mai mic de 0,1 ori fa de aria vrfului principal din cromatograma obinut cu solu ia
( 2 ) ( 0,1 % ).
DOZARE
12

Cntrii si triturai 20 de comprimate. La o cantitate de pulbere care conine 30 mg de

hidroclorotiazid se adaug 50 ml de hidroxid de sodiu 0,1 M , se agit timp de 20 minute i se
dilueaz la 100 ml cu 0,1 M de hidroxid de sodiu .Se amestec , se filtreaz , se dilueaz 5 ml de
filtrat la 100 ml cu ap i se msoar absorbana soluiei rezultate la maximum, la 273 nm ,
Anexa II B. Se calculeaz coninutul de hidroclorotiazid lund 520 ca valoarea lui A ( 1 % , 1
cm ) la maximum, la 273 nm.

IV. Analiza cantitativ a hidroclorotiazidei i determinarea sa ntrun preparat farmaceutic prin HPLC

Articol original aplicat pe 30 Iunie 2014.

Analiza cromatografic a hidroclorotiazidei (HCT) a fost realizat printr-o procedur
simpl de nalta performan, cromatografia lichida (HPLC), care a fost dezvoltat pentru
13

determinarea HCT din comprimatele farmaceutice folosind diferite faze mobile n anumite
proportii. Studiile cromatografice ale variaiei semnalului de detectare HPLC dependent de faza
mobil, rata de curgere, lungimea de und i temperatura coloanei au fost analizate pentru a gsi
condiiile optime experimentale pentru determinarea HTC. Tehnica dezvoltat HPLC a fost
aplicat cu success n cadrul analizei cantitative a HCT din comprimatele comerciale cu o medie
de refacere de 94,96+/-1,004%
1. INTRODUCERE
Hidroclorotiazida, prin abreviere HCT, HCTZ sau HZT, aparine clasei tiazidelor
droguri care actioneaza prin inhibarea abilitii rinichilor de a reine apa. Acest fapt conduce la
scderea volumului sangvin rezultnd scderea aportul de snge ctre inima i scderea debitului
cardiac i, prin alte mecanisme, se crede c scade tensiunea vasculara periferic. HCT este
folosit n principal pentru tratamentul hipertensiunii arteriale, insuficiena cardiac, edem
simptomatic, diabet insipid, acidoz tubular renal i pentru a preveni formarea de calculi
renali.
Din punct de vedere chimic, hidroclorotiazida este 6-cloro-3,4-dihidro-2H-1,2,4benzotiadiazina-7-sulfonamida-1,1-dioxid. Formula chimica a HCT esteC7H8CIN3O4S2 i
structura sa se poate vedea n Schema 1.
Multe articole publicate au fost dedicate determinrii HCT n diferite fluide biologice i
formulri farmaceutice, folosind numeroase tehnici de analiz instrumental incluznd
spectofotometria , cromatografia, cromatografia lichida cu detectare UV, HPLC i metode
electrochimice. Cu toate acestea, niciun articol special nu a fost dedicat analizei HCT prin HPLC
folosind o faz mobil care conine metanol : apa (50 : 50 v/v %), alt faz mobil i studiul
condiiilor asa cum sunt comunicate n literatur. n plus,aceast munc a fost depus pentru a
analiza substana HCT astfel nct s se poate dezvolta o metoda HPLC precis , reproductibil,
eficace i sensibil pentru determinarea HCT din comprimatele farmaceutice.
2. PARTEA EXPERIMENTALA
2.1 Aparatul
Determinarile cromatografice au fost facute folosind sitemul HPLC (cu detector UV-Vis
si prelevare automata) UltiMate 3000 (Thermo Scientific Dionex, Statele Unite) cu sistem
manual de injectare de 20 L si coloana C18 (5 m), conectat la un computer Dell Optiplex 3010
14

(China). Cromatogramele au fost printate cu un HP laser jet Pro 200 color M251n, HewletPackard development company, l.p. (China). Pentru injectarea volumelor de ordinul micro-litrilor
de solutie standard si a prelevarilor de substanta HCT comerciala studiata s-a folosit micropipeta
ajustabila Oxford (Irlanda).

15

2.2 Materiale si reactivi

In general, toti solventii pentru HPLC erau de grad de puritate HPLC si substantele
chimice erau folosite fara alte purificari suplimentare. Hidroclorotiazida a fost preparata ca
solutie stoc potrivita pentru studiile HPLC. Metanol HPLC filtrat la gradul 0,2(Fisher
Scientific, produs Trinidad, New Jersey) a fost folosit ca faza mobile. Ca solvent pentru solutia
standard de hidroclorotiazida, comprimate de hidroclorotiazida ,s-a folosit apa, iar apa din faza
mobila a fost mereu distilata pentru a indeplini conditiile studiului cromatografic.
2.3 Conditii HPLC
Faza mobila a reprezentat initial un amestec de metanol, apa si acetonitril. Rezultatele au aratat
ca H2O : MeOH (50 : 50 v/v %) a fost cea mai potrivita faza mobila pentru determinarea
cromatografica a HCT. Conditiile de lucru au fost dupa cum urmeaza: rata de curgere
1mL/minut, temperatura coloanei 30 0C, lungimea de unda a detectorului 254 nm,

volumul de injectie 20 L, coloana HPLC C-18 (5 m). Volume egale (10 L) din solutia
preparata si prelevari au fost injectate in coloana. Timpul initial de curgere al HPLC a fost de 5
min. Ca rezultat, 2,83 minute a fost ales ca timp optim pentru operarea tuturor determinarilor
cromatografice pentru substanta hidroclorotiazida.
2.4 Prepararea solutiei stoc
Hidroclorotiazida ( Qassim Pharmaceutical Plant Buraydah, Spamico Addwaeih,
Buraydah, Arabia Saudita) solutie stoc de concentratie 1 x 0,001 mol/L a fost preparata prin
dizolvarea volumului potrivit de HCT in apa distilata intr-un flacon de 50 mL. Aceasta solutie a
fost tinuta la intuneric. Concentratiile mici de solutii standard de substanta HCT au fost preparate
prin diluarea solutiei stoc folosind apa distilata printr-un proces de analiza.
2.5 Prepararea comprimatului simplu
16

Continutul din comprimatele de HCT disponibile comercial (Monizide 25 care contine 25

mg HCT, Jordanian Pharmaceutical Manufacturing Co., Jordan) au fost procurate din farmaciile
locale din Arabia Saudita. 10 tablete cu un continut de 250 mg HCT fiecare au fost alese si
dizolvate in apa distilata, apoti transferate intr-un flacon de 50 de mL. Solutia a fost tinuta pana
cand s-a prods dizolvarea complete a HCT apoi a fost filtrata pentru a indeplini cerintele

studiului HPLC. Toate prepararile si masuratorile cromatografice s-au facut la temperatura

camerei (250 C).

17

Fig.1.Vrful HPLC pentru 6x 10-4 M HCT la 2.83 min timpul de retentive i MeOH : H2O (50:50
v/v%) faza mobil ;(maximum Abs=1158mAU)

Fig.2.Curba de calibrare a HCT

n 50:50 v/v % faza mobil
pentru 2.83 min timpul de
retentive i 254 nm lungime de
und n intervalul 2x 10-4 la
1x10-3mol/L

Concentraia HTC (mol/L)

3.REZULTATE
3.1.Parametrii cromatografici
3.1.1.Efectul raportului de faz mobil . Un studiu al raportului de faz mobil este
un parametru foarte important pentru determinarea cromatografica HCT n droguri . Aici,
6x 10- 4 M de HCT a fost analizat prin HPLC n proporii diferite de ap , metanol i acetonitril n
faza mobil pentru 254 nm detector de lungime de und aa cum se arat n Tabelul 1 .
3.1.2.Efectul de debit . Debitul este considerat , de asemenea, un parametru foarte
important pentru studiul cromatografic a medicamentelor analizate . Cote pri de 6x 10 - 4 M
HCT au fost monitorizate prin tehnica HPLC n intervalul de debite de la 0.5 la 3.5 ml / min
( vezi Tabelul 2).
3.1.3.Efectul de detectare a lungimii de und . O lungime de und este adugat ca un
parametru important pentru obinerea unui semnal cromatografic al medicamentului studiat . Prin
utilizarea metodei HPLC ,alicote de 6x 10- 4 M HCT au fost analizate n intervalul
200 la 254 nm ( vezi Tabelul 3 ) . Instrumentul HPLC angajat nu a putut nregistra semnale n
afara acestui interval.
3.1.4.Efectul temperaturii de coloan . Temperatura de coloan cromatografic este
de asemenea considerat un important operator pentru determinarea HPLC sensibil al HCT

18

.Semnalul cromatografic din 6x 10- 4 M HCT a fost evaluat peste intervalul 25 la 40 C, aa

cum se arat n Tabelul 4
3.2.Optimizarea condiiilor HPLC
Conform studiului preliminar al condiiilor experimentale ,o faz mobil coninnd
metanol : ap ( 50 : 50v / v % ) la 254 nm lungime de und de UV detector i 1 ml / min debit de
2,83 min timp de retenie, au fost adoptate ca condiii optime pentru continuarea studiilor
cromatografice. Aceast investigaie de analiz a medicamentelor HCT a indicat c a fost separat
n mod eficient prin HPLC la aceti parametri i a dat un vrf cromatografic bine - definit pentru
6 x10- 4 M HCT
prezentat n Fig . 1 .
Astfel , experimentele au fost realizate prin modificarea raportului de faz mobil ,
debite , detectare de lungime de und , i coloana de temperatur.Nu a fost produs nici un efect
evident asupra semnalului HPLC i timpului de retenie prin schimbarea lungimii de und ,n
timp ce modificrile raportului fazei mobile , debitului i coloanei de temperatur a afectat
semnalele cromatografice .Ca rezultat,H2O : MeOH (50 : 50 v/v %) faza mobil a dat ce mai
nalt absorban la 254 nm,i a fost selectat ca valoarea optim pentru studii cromatografice
suplimentare .
.

Tabel 5. Rezultatele HPLC studiului de precizie pentru compusul HCT ( reproductibilitate )

19

4. Discutii
4.1. Validarea metodei HPLC
4.1.1. Liniaritatea si curba de calibrare

Conform conditiilor optime experimentale, o buna relatie de liniaritate s-a obtinut intre
semnalul cromatografic al HCT si concentratia ei de 2*10 -4 -1*10-3mol/L. Paramentrii HCT
concentratie-absorbanta s-au calculat folosind metoda celor mai mici patrate. Ecuatia de regresie
a curbei de calibrare este urmatoarea :
Abs=1.7*106 C[M]+137.75 (r2=0.9998 ; n=5) ;
Unde : abs : absorbanta analitului [mAU] ;
c : concentratia molara a HCT ;
r2 : coeficient de corelatie ;
n : numarul de masuratori cromatografice.
4.1.2. Limite de detectii
Limita de detectie (LOD), definita de 3 timpi ai undei (S/N=3), atinsa sub conditii
experimentale optime, pentru monitorizarea peak-ului HCT a fost 3.2*10-7mol/L.
4.1.3. Precizia (reproductibilitatea)
Precizia dezvoltarii metodei, evaluata prin determinarea reproductibilitatii a 10 determinari,
a fost de 6*10-4mol/L HCT in conditii optime. Deviatia standard (RSD) de 0.181% a fost
calculata indicand reproductibilitatea separatii si monitorizand analiza medicamentului HCT.
4.1.4. Stabilitatea solutiei de HCT
Semnalul cromatografic de 6*10-4mo/L al HCT a fost urmarit prin monitorizarea
masuratorilor HCT repetate la fiecare 30 de minute. Masurarea raspunsului cromatografic pare sa
fie fixa de-a lungul perioadei studiate (24ore). Studiul demonstreaza stabilitatea medicamentului
analizat sub conditii experimentale optime.

20

5. Aplicatia analitica HPLC

Metoda HPLC propusa a fost aplicata pentru determinarea HCT in comprimatele
farmaceutice. Continutul de HCT, disponibil in comprimate, a fost analizat direct prin HPLC
dupa pasii de dizolvare si filtrare. Cinci mostre de comprimate cu concentratia de HCT de 5 *10-4
mol/L au fost preparate, diluate in apa (solvent) si filtrate pentru a fii analizate HPLC.
Rezultatele sunt mentionate in tabelul 6.

Tabelul 6. Determinarea HPLC a HCT in comprimatele comerciale;

Continutul
afisat

Gsit (mg)

Recuperat

23.5

%
94

24

96

23.5

94

23.7

94.8

al 24
comprimatelor

Media S.D

Timpul

de Debit

retenie

94,96%1,004 2,837min

1ml/min

96

de 25mg HCT

6. Concluzii

Validarea metodei HPLC poate fi folosita pentru determinarea HCT din comprimatele comerciale
folosind noi operatori precum faza mobila; debitul si conditiile optime. Folosind metoda
cromatografica a fost dezvoltata analitic in conditii de liniaritate, limita de detectie, precizie si
stabilitate. HPLC poate fi de asemenea folosita cu succes in controlul analitic de calitate pentru

21

dizolvarea comprimatelor ce contin HCT si in aplicatii pentru analiza medicamentului in

formularea farmaceutica

V. Rezultate i discuii

Tema avut a fost hidroclorotiazida ca substan activ, gsit n forma farmaceutic de

comprimate n concentraie de 25 mg, s-au descris monografiile din Farmacopeea European
respectiv monografia de form farmaceutic (comprimate, comprimate neacoperite), monografia
de

substan

activ(hidroclorotiazida)

monografia

produsului

(comprimate

de

hidroclorotiazid).
S-a urmrit corespondena dintre un articol n care a fost descrisa o metoda de dozare a
hidroclorotiazidei respectiv prin metoda HPLC (High Performance Liquid Chromatography
,Cromatografie lichid de nalt performan) i metoda de dozare din Farmacopeea European.
Avantajele folosirii metodei HPLC au fost precizia i stabilitarea, dezvoltate analitic n
condiii de liniaritate, precum i existena posibilitii controlului analitic de calitate dar i
analiza medicamentului n formularea farmaceutic.
n

concluzie

validarea

metodei

HPLC

poate

fi

folosit pentru

determinarea

hidroclorotiazidei din comprimatele comerciale, acest lucru fiind in conformitate cu cele descrise
n cadrul Farmacopeei Europene.
22

Bibliografie
1. Consiliul European,Tablets,Farmacopeea European 5.0: Vol-1. Editia 5,Consiliul
european, 2004. Pag. 626
2. Consiliul European,Coated Tablets,Farmacopeea European 5.0: Vol-1. Editia 5,Consiliul
european, 2004. Pag. 627
3. Consiliul European,Hydrochlorothiazide,Farmacopeea European 5.0: Vol-2. Editia
5,Consiliul european, 2004. Pag. 1756
4. Ali F.Alghamdi, Quantitative analysis of hydrochlorothiazide and its determination in a
pharmaceutical preparation by HPLC ,www.bibliotecaumf.ro-articol din Pharmaceutical
Chemistry Journal,vol.48,nr.12,Martie ,2015,pag 845-848

23