AO DE LA PROMOCIN DE LA INDUSTRIA

RESPONSABLE
Y DEL COMPROMISO CLIMTICO
UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA
PROEDUNP SULLANA

FACULTAD
INGENIERA INDUSTRIAL
ESCUELA
AGROINDUSTRIAS E INDUSTRIAS
PROFESOR

ALIMENTARIAS

MCBLGO. CESAR TORRES DIAZ

CURSO
BIOTECNOLOGIA
ALUMNA
RIVERA RIVERA DANITZA LISBETH
CICLO
VII

Sullana Per
2014

INTRODUCCION
La biotecnologa se ha convertido en una verdadera alternativa para la obtencin de
productos para el beneficio humano ya que se puede obtener grandes cantidades en
pequeas reas mediante tcnicas sencillas, a bajo costo, en cortos periodos de tiempo y
empleando substrato enriquecidos para su cultivo, en esta oportunidad el cultivo in vitro de
un tubrculo conocido de Per como es el olluco puede representar un claro ejemplo de
cmo la biotecnologa es una alternativa real para la obtencin de alimentos, u otros
productos benficos para los seres vivos.

El cultivo in vitro, es una tcnica de reproduccin en condiciones totalmente aspticas, en

la que a partir de un pequeo segmento inicial de la muestra que se trabajara es posible
regenerar en poco tiempo miles o millones de plantas genticamente iguales a la planta
madre, cuando a este tejido le es aplicado un estmulo por medio de variables fsicas y
qumicas controladas en un medio de cultivo.

A diferencia de las tcnicas tradicionales de cultivo, esta poderosa herramienta permite la

propagacin de grandes volmenes de plantas en menor tiempo; as como el manejo de las
mismas en espacios reducidos. Es de gran utilidad en la obtencin de plantas libres de
patgenos; plantas homocigotas, en la produccin de plantas en peligro de extincin, en
estudios de ingeniera gentica, etc.

Se puede desarrollar un proyecto de produccin de plantas utilizando la tcnica antes

mencionada con el propsito de aprovechar sus bondades, adecundola a la problemtica
econmica de algunas ciudades; la regeneracin de plantas por cultivo in vitro se logra
utilizando secciones de la germinacin del tuberculo sobre un medio nutritivo
complementado con fitorreguladores de crecimiento; una vez enraizadas las plantulitas,
deben pasar por un periodo de aclimatacin y terminar su ciclo.

CULTIVO IN VITRO DE OLLUCO

CULTIVO IN VITRO
El cultivo in vitro de tejidos vegetales consiste en incubar un trozo de tejido, una clula o
una planta en condiciones estriles dentro de un contenedor con un medio nutritivo en
forma de gel y que contiene azcares, nutrientes minerales, vitaminas y hormonas
vegetales.
El proceso comienza con el establecimiento del cultivo, para lo cual debe esterilizarse el ex
plante o trozo de tejido a cultivar. Cuando se ha logrado que el tejido crezca y prolifere, es
importante contar con la combinacin y concentracin de hormonas adecuadas para lograr
la propagacin de brotes. Cada brote deber ser luego sometido a un proceso de
enraizamiento, induciendo la produccin de races en la base del tallo. Una vez que
contamos con una planta completa, con raz, tallo y hojas, debemos aclimatarla
paulatinamente a las condiciones de campo o de invernadero, donde normalmente hay una
mayor radiacin lumnica, menor humedad relativa del aire, un ambiente lleno de
microorganismos y temperaturas ms bajas que en el laboratorio. En suma, la planta deber
comenzar a funcionar por s misma y a autoabastecerse con el proceso de fotosntesis.
La produccin de plantas mediante micro propagacin tiene un amplio uso comercial
debido a que posee varias ventajas. Como se realiza en un laboratorio, bajo condiciones
controladas, no depende de las condiciones climticas o de las estaciones. Utiliza un
espacio reducido con el potencial de generar miles de plantas en un corto tiempo. Puesto
que se trata de un tipo de propagacin vegetativa, las caractersticas genticas de las plantas
resultantes se mantienen y todas las plantas sern genticamente iguales. Por ltimo, al
realizarse en condiciones aspticas, la sanidad (o ausencia de patgenos en los tejidos de la
planta) es controlada adecuadamente.
Adems del micro propagacin, las tcnicas in vitro permiten estudiar una serie de
fenmenos o procesos con posibles aplicaciones en el mejoramiento gentico de plantas.
Uno de ellos es la embriognesis somtica, en la cual se forma un embrin (que en
condiciones naturales slo se desarrolla en la semilla) pero a partir de una clula somtica o
del cuerpo de la planta madre, por lo que la planta que se origine a partir del embrin
somtico ser genticamente igual.
Otro proceso que se ha explorado en muchas especies de plantas es la induccin de
poliploida, es decir el aumento en el nmero de cromosomas de las clulas. Ello puede
lograrse con sustancias qumicas que causan la duplicacin del nmero de cromosomas
normal en las clulas. En los ltimos aos tambin se ha logrado en algunas especies el
cultivo del tejido llamado endosperma, que se encuentra en la semilla. Este tejido es
triploide, es decir contiene una vez y media el nmero normal de cromosomas de la
especie, y las plantas que eventualmente puedan obtenerse de este tejido tendrn
caractersticas especiales.

MEDIOS DE CULTIVO PARA LA PROPAGACIN IN VITRO

Constituyen un elemento fundamental para el cultivo in vitro de clulas, tejidos y rganos
para lograr el desarrollo de los mismos in vitro. Los medios de cultivo tienen una serie de
componentes generales y especficos cuya presencia y concentracin estar en dependencia
del objetivo que se persiga en su utilizacin. Los medios de cultivo estn constituidos por
sustancias minerales, vitaminas, aminocidos, azcares, reguladores del crecimiento y otros
elementos.
El cultivo de clulas, tejidos y rganos de la plantas in vitro se realiza en medios de cultivos
artificiales, lo cuales proporcionan los nutrientes necesario que la planta toma de la tierra en
su habitad natural y precisamente el xito de este tipo de cultivo est influenciado
grandemente por la naturaleza del medio de cultivo utilizado y otros factores ambientales.

COMPONENTES INORGNICOS DEL MEDIO DE CULTIVO

Los medios de cultivo estn constituidos por componentes inorgnicos, los cuales son
suministrados en cantidades relativamente grandes (macronutrientes) y otros aadidos en
menor cantidad (micronutrientes).
El nitrgeno se adiciona al medio de cultivo en forma de nitrato o iones amonio, o la
combinacin de ambos iones, el sulfato de magnesio (Mg SO4 7H2O) satisface tanto el
requerimiento de magnesio como el de azufre, el fsforo puede adicionarse en cualquiera
de las formas NaH2PO4.H2O KH2PO4, el potasio es un catin que se agrega en forma de
KCl, KNO3, KH2PO4, el calcio se adiciona con Ca Cl2.2H2O, Ca(NO3)2.4H2O o la forma
anhidra de cualquier sal y el cloro se presenta en forma de KCl CaCl 2.
Los micronutrientes, que son aadidos a los medios de cultivo son hierro (Fe), nquel (Ni),
cloro (Cl), manganeso (Mn), cinc (Zn), boro (B), cobre (Cu), y molbdeno (Mo). Estos
elementos junto con el carbono (el C), oxgeno (O) e hidrgeno (H) constituyen los 17
elementos esenciales.
Estos micronutrientes aunque son requeridos en menor cantidad son necesarios para una
adecuada actividad metablica de las clulas vegetales. El Fe y el Mn son esenciales para la
sntesis de clorofila y la funcin de los cloroplastos. El Fe es requerido para la formacin de
precursores de la clorofila y es un componente de los citocromos, ferredoxina y
legohemoglobina, esta ltima es esencial en la fijacin de nitrgeno por las plantas
leguminosas. El Mn es necesario para el mantenimiento de la ultraestructura y el proceso
fotosinttico. Los elementos Cu y Zn son requeridos para la oxidacin e hidroxilacin de
compuestos fenlicos. El Zn est relacionado con la sntesis de triptfano, precursor del
cido indolactico (AIA) y ejerce control sobre las ribonucleasas lo que permite mantener
la sntesis proteica en caso de estrs ambiental (medio de cultivo). El Cu, adems es un
componente de la Plastocianina que es esencial en el funcionamiento del transporte
electrnico de la fotosntesis y es activador de otras enzimas como la oxidasa del cido
ascrbico (Vitamina C), tirosinasa, lacasa, fenolasa y citocromoxidasa, esta ltima forma
parte de la cadena de transporte electrnico del proceso respiratorio.

El Mo forma parte de las nitratorreductasas de las plantas y nitrogenasas en leguminosas y

bacterias fijadoras de nitrgeno. El boro (B) es necesario para el mantenimiento de la
actividad meristemtica, est involucrado en la sntesis de bases nitrogenadas, en particular
uracilo y adenina y por ello aumenta los niveles de citocininas y cidos nucleicos. Lugo el
Fe es aadido en forma de quelato cuyas molculas son capaces de retener un in de un
metal con varias uniones qumicas form ando un anillo complejo (un quelato) como el
EDTA (cido etilendinitrotetraactico), que utilizado en bajas concentraciones estimula el
crecimiento al hacer disponible en bajas cantidades este elemento.

El medio de cultivo ms utilizado es la formulacin de las sales Murashige y Skoog (1962)

el cual fue desarrollado inicialmente para el crecimiento de callos de tabaco y en la
actualidad se emplea como medio de cultivo basal para un grupo importantes de plantas de
inters para la alimentacin y con fines ornamentales. Sales minerales del medio de cultivo
de Murashige y Skoog (1962).

Ingredientes
NH4NO3
K NO3
Mg SO4.7H2O
KH2 PO4
Fe SO4.7H2O
Na2 EDTA.2H2O
CaCl2.2H2O
H3BO3
Mn SO4.H2O
Zn SO4.7H2O
Na2 MoO4.2 H2O
Cu SO4.5H2O
Co Cl2.6H2O
KI

Cantidad en mg L-1)
66 000
76 000
14 800
6 800
1390
1865
15172
6200
16900
8600
240
25
25
83

COMPONENTES ORGNICOS DEL MEDIO DE CULTIVO

Dentro de los componentes orgnicos del medio de cultivo se encuentran carbohidratos,
vitaminas, aminocidos, extractos naturales y reguladores del crecimiento vegetal.

CARBOHIDRATOS
La nutricin que es desarrollada en las condiciones in vitro a partir en los diferentes
rganos y tejidos son ampliamente hetertrofos con respecto al carbono debido a la
ausencia o insuficiencia de asimilacin cloroflica, por lo cual resulta indispensable aadir

azcares a los medios de cultivo como fuente de energa y reguladores osmticos. La

sacarosa es el azcar empleado universalmente. Le siguen en importancia glucosa, maltosa,
rafinosa, fructosa y galactosa entre otros.

VITAMINAS
Son necesarias para llevar a cabo una serie de reacciones catalticas en el metabolismo y
son requeridas en pequeas cantidades. Las vitaminas ms empleadas son:

Tiamina (vitamina B1): se aade como hidrocloruro de tiamina y constituye una

vitamina esencial para el crecimiento de clulas vegetales. Es un coenzima de la
descarboxilacin de los cetocidos piruvato y -cetoglutarato y es esencial para el
crecimiento radical pues interviene en la sntesis de citocininas.

cido Nicotnico: forma parte de las coenzimas NAD y NADP que intervienen en la
transferencia de hidrgeno, adems de ser precursor el triptfano y por tanto tiene
un efecto sinrgico con el AIA en la produccin de races y ejerce accin inhibitoria
en el desarrollo de yemas axilares.

Piridoxina (Vitamina B6): Es aadida como hidrocloruro de Piridoxina (PiridoxinaHCl). Participa como coenzima en el metabolismo de los aminocidos, entre ellos el
triptfano, precursor de AIA y cido nicotnico, adems de favorecer la formacin
de races.

Myo-inositol: No es propiamente una vitamina, sino un azcar-alcohol. Tiene un

efecto sobre la proliferacin de tejidos y sobre la activacin de la organognesis.

cido ascrbico y cido ctrico: Son aadidos a los medios de cultivo en ocasiones
no como vitaminas sino como antioxidantes para evitar el oscurecimiento de
determinados tejidos.

AMINOCIDOS Y EXTRACTOS NATURALES

Los aminocidos favorecen la proliferacin de callos y la organognesis. Los efectos
obtenidos mediante el aporte de aminocidos parecen muy variables segn la especie y el
tipo de morfognesis estudiada. Dentro de ellos se encuentran la glutamina, L-arginina, Lcistena entre otros.
Los extractos naturales estimulantes son numerosos productos de composicin variable y
no bien definida. Dentro de ellos se encuentran extracto de levadura, hidrolizado de
casena, peptona y agua de coco (ms utilizado) entre otros.

AGENTES GELIFICANTES
El agar se ha convertido en el material de soporte ms ampliamente usado, pues provee el
medio de un excelente gel hmedo que sirve como soporte al explante. Tambin es
utilizado el gelrite o fitagel.

AGUA
Es de vital importancia la calidad del agua empleada para realizar los medios de cultivo la
cual debe ser destilada. Siempre que se realicen trabajos con cultivo de tejidos y clulas in
vitro el agua a usar debe tener la mayor calidad posible (desionizada), debiendo estar entre
0.5 a 2 mS/ cms.

REGULADORES DEL CRECIMIENTO VEGETAL

Los reguladores del crecimiento vegetal se agrupan en cinco categoras: auxinas,
citokininas, giberelinas cido abscsico y etileno. Adems de estas sustancias naturales de la
planta existen otros productos que pueden utilizarse como reguladores del crecimiento para
el cultivo in vitro.

Principales reguladores del crecimiento empleados en cultivo de tejidos.

AUXINAS

AIA: Ac. indol 3 actico

ANA: Ac. naftalenactico

AIB: Ac indol 3-butrico

2,4 D: Ac. 2,4 diclorofenoxiactico

Picloram

Dicamba

CITOKININAS

BAP: 6 - bencilaminopurina

KINETINA: 6 - furfurilaminopurina

Z: Zeatina

TDZ: Thidiazuron

GIBERELINAS

GA3: Ac. giberlico

GA1, GA4, GA7: (giberelinas)

ETILENO ACIDO ABSCISICO POLIAMINAS

Putrescina

Espermidina

Espermina

BRASINOESTEROIDES

Anlogos Biobras 6

Biobras 16

OLIGOSACARINAS

Pectimorf: oligogalacturnido DPS (12-14

OLLUCO
Ullucus tuberosus es la nica especie del gnero monotpico Ullucus, perteneciente a la
familia Basellaceae. Es una planta herbcea originaria de la regin andina de Sudamrica.
Se le conoce con los nombres de olluco (del quechua ulluku), melloco,chugua (en
Colombia) y, en la zona sur andina del Ecuador, Per, Bolivia, y Argentina, como papa
lisa o simplemente lisa.

Tambin se consume el olluco seco o deshidratado, que se procesa como la papa seca y se
utiliza en preparaciones diversas como en los picantes. Otra forma de consumo es el olluco
deshidratado por exposicin a heladas, lavado y secado, hasta obtener la harina.
Consumir el olluco fresco, resulta ser una opcin adecuada para platos bajos en caloras ya
que contiene ms de 80% de agua, poco almidn y cantidades insignificantes de grasa por
tanto es bajo en caloras. Sin embargo, al consumirlo en su forma seca o de harina es un
alimento que conserva slo la parte slida sin agua siendo de esta manera un alimento que
enriquece el plato en cuanto a las caloras.

Respecto a las vitaminas y minerales contiene pequeas cantidades de calcio, fsforo y

vitaminas del complejo B, pero destaca en otras como la vitamina C y el hierro.
La dieta saludable requiere de variedad de alimentos y el olluco es un alimento nutritivo
que puede alternar a la papa, que es tambin un tubrculo bondadoso y ampliamente
consumido.

El siguiente cuadro compara la composicin de los alimentos segn tablas peruanas de esto.

Por ser un alimento beneficioso para la salud es por ello que se debe propagar su mayor
consumo y utilizacin en las dietas de las personas, y obtener dicho cultivo en menor
tiempo es una buena opcin que nos brinda la biotecnologa adems ya no solo lo
obtendendriamos en los climas donde este nace sino se hara bajo parmetros controlados
en invernaderos.

MATERIALES Y METODOLOGIA
INSUMOS

Olluco (con brotes)

Papa (tambin germinada)
Micronutrientes
Macronutrientes
Quelatos

Vitaminas
Azucar
Agar
Agua destilada
Sales minerales

MATERIALES
Vaso de precipitado
Tubos de ensayo
Algodn

Pinzas
Jeringa
Matraz

PREPARACION DEL MEDIO DE CULTIVO

Se afora la cantidad necesaria de agua destilada y se mide a un ph entre 5 y 6 siendo
el ms optimo el de 5,6.
Se esteriliza los medios generalmente utilizando la autoclave por 15 minutos.
En un matraz se coloca la solucin de Agar, los macronutrientes, micronutrientes,
quelatos, vitaminas, sales minerales, y otro tipo de hormonas segn se quiera
trabajar y la planta que se est trabajando. Se disuelve con agua destilada.
Se coloca en el agitador magntico para disolver y se adiciona azcar.
Se pesa el agar y se aade a un matraz
Se adiciona la solucin antes descrita al matraz que esta el agar y se deja a
temperatura de 42C.
Se adiciona a los recipientes en los que se llevara a cabo el cultivo in vitro.
Se deja que se solidifique alrededor de 15 minutos.
Este procedimiento es para preparar, esterilizar y estar listo para utilizar el siguiente
paso que es el cultivo in vitro.

PROCEDIMIENTO CULTIVO IN VITRO

Se prepara una solucin de leja con agua al 10% para desinfectar la muestra.
Se introduce el olluco germinado en la solucin de hipoclorito disuleto en agua por
espacio de 1 minuto.
Se saca se deja secar.
Con una pinza se toma la parte germinada que se va ha utilizar y se introduce en el
medio solidificado dejando la mitad dentro del medio de cultivo y la otra mitad
encima.
Se tapa el tubo de ensayo y se deja en un lugar en el que le caiga el sol.

METODOLOGA
Para sembrar un cultivo in vitro se debe seguir las siguientes fases:
Fase I: Establecimiento de los cultivos in vitro
Para la realizacin de los cultivos in vitro de tejidos vegetales se debe contar con el
equipo y materiales bsicos para estos fines. El material biolgico debe tener las
condiciones que se requieren para lograr el cultivo.
Predesinfestacin: los explantes iniciales se obtuvieron de brotes germinado de
olluco y se lavaron con agua para eliminar impurezas.

 Desinfestacin: dentro de una campana de flujo laminar se sumergieron en una

solucin de hipoclorito de sodio al 1% en constante agitacin durante 10 minutos, se
aplicaron tres enjuagues de tres minutos cada uno con agua destilada estril.
Despus se cortaron y se sembraron secciones de tejido de aproximadamente 1 cm
2.

Fase II: Multiplicacin

Debido a que las secciones de tejido se dejan en el medio se debe lograr las
plntulas obtenidas por germinacin asptica. El medio de cultivo utilizado en esta
fase fue el mismo MS (1962)

Fase III: Enraizamiento de plntulas

Para esta fase, se utilizaron las mismas sales MS en el medio de cultivo,
omitindose las citocininas (BA). Complementado con 1.5 gr/l de carbn activado y
20 gr/l de sacarosa. Las condiciones de incubacin fueron las mismas que para las
etapas anteriores.

 SE UTILIZA PARA EL MEDIO DE CULTIVO

STOCK A (100X)

PESAR

KNO3

Nitrato de Potasio

19 g/L

CaCl2 .2 H 2 O

Cloruro de sodio
dihidratado

4,4 g/L

K H 2 PO 4

Fosfato de potasio

1,7 g/L

NH 4 NO 3

Nitrato de amonio

16,5 g/L

Stock A2
Stock A3

10 ml
0,2 ml
COMPLETAR A 1000 ML

STOCK B
Sulfato de magnesio
MgSO4 .7 H 2 O
heptahidratado
COMPLETAR A 100 ml CON AGUA DESTILADA

Stock C

FeSO 4 .7 H 2 O

Na 2 EDTA .2 H 2 O

Sulfato de fierro
hepta hidratado
Sodium EDTA di
hidratado

PESAR
3,7 g

Pesar
0,65 g DISOLVER
SEPARADO EN 20
ML
0,75g DISOLVER
SEPARADO
CALIENTE 20 ML

STOCK

Ioduro de potasio
Acido borico
Sulfato de
manganeso
Sulfato de zinc
heptahidra
NA2 MO4. 2H20
Molibdodato de
sodio dihidratado
COMPLETAR A 100 ML CON AGUA DESTILADA
STOCK A3

KL
H3BO3
MnSO4
ZnSO4.7H20

A2

PESAR

0,083 g
0,02 g
1,68 g
0,86 g

0,025 g

STOCK

A3

PESAR

Sulfato de cobre
1,5 g
penta hidratado
Cloruro de calcio
CaCl2 .6 H 20
1,5 g
heptahidratado
COMPLETAR A 1000 ML CON AGUA DESTILADA
CuSO 4 .5 H 2 O

RESULTADOS

Se obtuvo un cultivo in vitro de olluco.

El brote que sembramos en el medio de cultivo dio una pequea forma circular de
color verde teniendo una apariencia de un brote de hoja.
El medio de cultivo produjo que el ex plante si empiece a crecer para luego poder
seguir continuando las fases que se han mencionado anteriormente.
No se observo proliferacin de microorganismos por lo tanto se ha desarrollado con
la asepsia requerida.

DISCUSION
El cultivo in vitro de tejidos vegetales o micro propagacin es una tcnica de la
biotecnologa que se puede utilizar para diversos fines. Uno de ellos puede ser para
la investigacin cientfica sobre temas bsicos de ciencia bsicos de fisiologa
vegetal y otro de los enfoques que tiene es poder hacer conservacin y mejora de las
especies de vegetales. Adems en condiciones totalmente aspticas, en la que a
partir de un pequeo segmento inicial de la muestra que se trabajara es posible
regenerar en poco tiempo miles o millones de plantas genticamente iguales a la
planta madre, cuando a este tejido le es aplicado un estmulo por medio de variables
fsicas y qumicas controladas en un medio de cultivo. A diferencia de las tcnicas
tradicionales de cultivo, esta poderosa herramienta permite la propagacin de
grandes volmenes de plantas en menor tiempo.

Pude entender lo beneficioso que este tipo de cultivo in vitro puede mejorar las
caractersticas de los productos que queremos trabajar mediante la planta que se va

a obtener ya que esta crecer con las mismas caractersticas genticas que la planta
madre.
Por ello este tema es de mucha importancia en la agroindustria ya que podramos
seleccionar la mejor muestra y sacar un brote y de esta planta madre sacar muchos
cultivos in vitro para mediante las fases ya mencionadas poder obtener una planta
que de buenos frutos y estos frutos al ser de mejor calidad podremos obtener
mejores productos.
Finalmente se puede obtener un nmero bastante grande de plantas con menor
tiempo y menor costo, de optima calidad siguiendo las fases para obtener de
principio a fin un producto asptico.

CONCLUSIONES

Al termino del laboratorio y observar tras una semana que si hubo un cambio en el brote
que se sembr pues se puede concluir que el cultivo in vitro es una opcin muy buena en
realizar este tipo de cultivos a que realizar el cultivo tradicional.

Definitivamente los tiempos y resultados que se obtienen en el cultivo in vitro es mejor

ya que en menos tiempo habr mayor produccin y un menor costo, tema que es
indispensable para invertir en algn proyecto.

Las caractersticas que se obtienen del ex plante que ser nuestra nueva generacin de
cultivo va a presentar altas caractersticas de la planta madre ya que al elegirla se debe
elegir la mejor muestra. Otra opcin para que sea mejor puede manipularse
genticamente.

Los procesos en los que va cultivndose in vitro son manejables no es necesario estar a la
espera de lo que la naturaleza provee sino modificarlas y darle los mejores parmetros
para obtener plantas de buena calidad que darn frutos tambin de alta calidad.

El medio de cultivo adems tambin es manejable pudiendo agregarle o quitarle algn

micronutriente o macronutriente hormona entre otros que perjudique o mejore el
desarrollo de la planta que se esta cultivando y luego seguir su proceso en invernadero.

BIBLIOGRAFIA

Medios de cultivo para la propagacin. Cultiuvo in vitro. Disponible en:

http://www.ecured.cu/index.php/Medios_de_cultivo_para_la_propagaci
%C3%B3n_in_vitro

Ullucus tuberosus. Caracteristicas de olluco. Disponible en:

http://es.wikipedia.org/wiki/Ullucus_tuberosus

Cultivo in vitro. Universidad Nacional de Madrid. Disponible en:

https://www.uam.es/docencia/LAvanFis/CI/CharlaCultinvitro0607.pdf

Video Preparacion de medios de cultivo. Maria Gisbert Domenech. Disponible en:

http://www.youtube.com/watch?v=pdSrwfWfPCw

ANEXOS